CN109553666B

CN109553666B - 一种来自烟草的钾转运蛋白kup9及其编码基因与应用

Info

Publication number: CN109553666B
Application number: CN201811340520.1A
Authority: CN
Inventors: 曾吉凡; 任学良; 鲁黎明; 李立芹; 王仁刚; 张洁; 王自力; 郭玉双
Original assignee: Guizhou Institute of Tobacco Science
Current assignee: Guizhou Institute of Tobacco Science
Priority date: 2018-11-12
Filing date: 2018-11-12
Publication date: 2021-08-31
Anticipated expiration: 2038-11-12
Also published as: CN109553666A

Abstract

本发明涉及基因工程领域，具体公开了一种来自烟草的钾转运蛋白KUP9及其编码基因与应用。本发明首次提供了分离自烟草的KUP9基因，所述KUP9基因全长2370bp，经功能验证，本发明提供的KUP9基因转入钾吸收缺陷型酵母突变株R5421后，表达所述KUP9基因的重组酵母重新具有了钾离子吸收和转运的功能。因此，本发明提供的KUP9基因具有促进钾离子吸收和转运的功能。

Description

一种来自烟草的钾转运蛋白KUP9及其编码基因与应用

技术领域

本发明涉及基因工程领域，具体地说，涉及一种来自烟草的钾转运蛋白KUP9及其编码基因与应用。

背景技术

钾转运体是能在外界钾离子浓度极低时将钾离子转运至细胞内的载体蛋白。钾转运体通常是一些跨膜蛋白，通过构象变化完成钾离子的跨膜转运，是一种需要ATP提供能量的主动运输过程，通常是K⁺/H⁺或K⁺/Na⁺协同运输。

现有技术对于钾转运体基因的研究在模式植物拟南芥中比较广泛，例如，研究表明拟南芥突变体kup6较野生型植株在干旱胁迫下的存活率降低，而35S::KUP6过表达转基因植株的耐旱能力却得到了明显的增强(Shabala et al.,2007)；而KUP7基因的突变体幼苗在低钾胁迫下表现出叶片黄化的低钾敏感表型，其根部的钾离子含量显著下降，KUP7基因功能的缺失使拟南芥幼苗在低钾条件下对钾的吸收能力降低、木质部汁液中钾离子浓度降低(Min et al.,2016)。

烟草是一种耗钾量很大的作物，烟叶钾含量是衡量烟叶品质的的重要指标，目前，对于烟草中钾转运体基因的研究较少，烟草KUP的功能未知。

发明内容

为了解决现有技术中存在的问题，本发明的目的是提供一种来自烟草的钾转运蛋白KUP9及其编码基因与应用。

为了实现本发明目的，本发明的技术方案如下：

本发明首先提供一种钾转运蛋白，获自烟草，命名为KUP9蛋白，是如下(a)或(b)

(a)其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；

(b)SEQ ID NO.1所示序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与植物钾离子吸收和转运调控相关的由(a)衍生的蛋白质。

上述(b)中的KUP9蛋白可人工合成，也可先合成其编码基因，再进行生物表达得到。上述(b)中的KUP9蛋白的编码基因可通过将SEQ ID NO.2所示的DNA序列中缺失一个或几个氨基酸残基的密码子，和/或进行一个或几个碱基对的错义突变而得到。

编码所述KUP9蛋白的基因(KUP9基因)也属于本发明的保护范围。

所述基因具体可为如下1)或2)或3)的DNA分子：

1)编码区如SEQ ID NO.2所示的DNA分子；

2)在严格条件下与1)限定的DNA序列杂交且编码与植物钾离子吸收和转运调控相关蛋白的DNA分子；

3)与1)或2)限定的DNA序列具有90％以上同源性且编码与植物钾离子吸收和转运调控相关蛋白的DNA分子。

上述严格条件可为用0.1×SSPE(或0.1×SSC)，0.1％SDS的溶液，在DNA或者RNA杂交实验中65℃下杂交并洗膜。

经研究发现，所述KUP9基因在促进钾离子吸收和转运方面发挥明显作用。

进一步地，本发明所述KUP9基因由以下步骤制备得到：

(1)设计PCR扩增引物，所述PCR扩增引物包括正向引物和反向引物：

正向引物：5’-ATGACTTCAGGAATGGAAAT-3’，

反向引物：5’-TTACACATAAAAGATCTGTC-3’；

(2)提取烟草细胞总RNA，合成烟草细胞cDNA，以烟草细胞cDNA为模板进行KUP9基因的PCR扩增，得到目的片段，测序。

在本发明的一个实施例中，所述的PCR扩增的体系为20μL体系，包括Premix ExTaq10μL，10μM的正向引物0.5μL，10μM的反向引物0.5μL，烟草细胞cDNA 1μL，ddH₂O 8μL。

优选的，所述的PCR扩增的反应程序为：95℃预变性5min；95℃变性30s；55℃退火30s；72℃延伸2min；35个循环。

优选的，所述的目的片段在测序之前还包括，将所述目的片段导入大肠杆菌DH5α感受态细胞中进行菌落PCR验证，验证为阳性克隆后进行测序。

优选的，所述菌落PCR验证使用的正向引物核苷酸序列为：5’-ATGACTTCAGGAATGGAAAT-3’，菌落PCR验证使用的反向引物核苷酸序列为：5’-TTACACATAAAAGATCTGTC-3’。

优选的，所述菌落PCR验证的体系为10μL，包括Premix ExTaq5μL，10μM的正向引物0.5μL，10μM的反向引物0.5μL，ddH₂O 4μL。

进一步地，含有所述KUP9基因的重组表达载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌等生物材料均属于本发明的保护范围。

所述重组表达载体可用现有的植物表达载体进行构建。所述重组表达载体例如可以是双元农杆菌载体和可用于植物微弹轰击的载体等。使用KUP9基因构建重组表达载体时，可在其转录起始核苷酸前加上任何一种增强型、组成型、组织特异型或诱导型启动子，它们可单独使用或与其它的植物启动子结合使用；此外，使用KUP9基因构建重组表达载体时，还可使用增强子，包括翻译增强子或转录增强子，这些增强子区域可以是ATG起始密码子或邻接区域起始密码子等，但必需与编码序列的阅读框相同，以保证整个序列的正确翻译。所述翻译控制信号和起始密码子的来源是广泛的，可以是天然的，也可以是合成的。翻译起始区域可以来自转录起始区域或结构基因。

携带有所述KUP9基因的重组表达载体可通过Ti质粒、Ri质粒、植物病毒载体、直接DNA转化、显微注射、电导、农杆菌介导等常规生物学方法转化到植物细胞或组织中。

进一步地，本发明还保护所述KUP9蛋白、所述KUP9基因和含有该基因的所述生物材料在促进植物或微生物钾离子吸收和转运中的应用。

所述植物包括烟草、拟南芥，所述微生物包括酵母菌。

例如，在本发明的具体实施方式中，将所述KUP9基因转入钾吸收缺陷型酵母突变株R5421后，表达所述KUP9基因的重组酵母重新具有了钾离子吸收和转运的功能；将烟草植株中所述KUP9基因进行超量表达后，可显著提高烟草植株的烟叶中钾离子的含量。

所述应用可选为，将前述烟草KUP9基因转入到烟草植株中，使KUP9基因超量表达以提高烟草植株的烟叶中钾离子的含量。

进一步地，本发明还保护所述KUP9蛋白、所述KUP9基因和含有该基因的所述生物材料在制备转基因植物中的应用。

进一步地，本发明还保护所述KUP9蛋白、所述KUP9基因和含有该基因的所述生物材料在植物育种中的应用。

所述育种的目的为促进植物钾离子吸收和转运，优选为提高烟草植株的烟叶中钾离子的含量。

所述植物为单子叶植物或双子叶植物。例如烟草或拟南芥KUP9突变株。

本发明的有益效果在于：

本发明首次提供了分离自烟草的KUP9基因，所述KUP9基因全长2370bp，经功能验证，本发明提供的KUP9基因转入钾吸收缺陷型酵母突变株R5421后，表达所述KUP9基因的重组酵母重新具有了钾离子吸收和转运的功能。因此，本发明提供的KUP9基因具有促进钾离子吸收和转运的功能。

附图说明

图1为本发明实施例2中酵母功能互补实验结果。其中，A为钾离子浓度为20uM的培养基上的生长情况，B为钾离子浓度为2mM的培养基上的生长情况；图中，1为阴性对照(转入空载体)，2为转入KUP9基因的重组酵母，3为阳性对照转入拟南芥KUP基因的酵母；从左到右依次为原液、10倍稀释液、100倍稀释液、1000倍稀释液在培养基上的生长结果。

具体实施方式

下面将结合实施例对本发明的优选实施方式进行详细说明。需要理解的是以下实施例的给出仅是为了起到说明的目的，并不是用于对本发明的范围进行限制。本领域的技术人员在不背离本发明的宗旨和精神的情况下，可以对本发明进行各种修改和替换。

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

本发明的钾吸收缺陷型酵母突变株R5421记载于Maathuis F J M and Sanders D1996Mechanisms of potassium absorption by higher plantroots.Physiol.Plant.96,158–168。P416酵母游离型穿梭表达载体,TEF组成型启动子,CYC1终止子,CEN6 ARSH4复制起点,酵母中筛选标记为URA3,大肠杆菌中筛选标记为Amp。记载于Functional Expression of aω-3Fatty Acid Desaturase Gene from Glycine maxin Saccharomyces cerevisiae。

实施例1KUP9基因的获得

取0.5g烟草新鲜叶片，采用Trizol法提取烟草细胞的总RNA，然后采用TaKaRa公司的cDNA合成试剂盒合成cDNA，进一步采用Primer5.0软件设计并经过人工优化得到引物，所述引物包括正向引物和反向引物，所述的正向引物核苷酸序列为：5’-ATGACTTCAGGAATGGAAAT-3’；所述反向引物的核苷酸序列为5’-TTACACATAAAAGATCTGTC-3’，以合成的cDNA为模板，进行PCR扩增。

PCR扩增体系为20μL体系，包括：Premix ExTaq 10μL，10μM的正向引物0.5μL，10μM的反向引物0.5μL，烟草细胞cDNA 1μL，ddH₂O8μL。

PCR扩增反应程序为：95℃预变性5min；95℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸2min，35个循环。

PCR扩增完成后，使用DNA纯化试剂盒进行目的片段的纯化，将纯化后的目的片段与pMD19-T载体16℃连接12h得到连接产物，将所述得到的连接产物转化大肠杆菌DH5α感受态细胞得到转化后的大肠杆菌DH5α，将所述的转化后的大肠杆菌DH5α接种于涂有氨苄青霉素的LB平板上进行筛选培养得到阳性克隆。在得到阳性克隆后，采用菌落PCR的方法来验证阳性克隆，所述菌落PCR的正向引物为：5’-atgacttcaggaatggaaat-3’，反向引物为：5’-ttacacataaaagatctgtc-3’；所述菌落PCR的体系为10μL，包括Premix ExTaq 5μL，10μM的正向引物0.5μL，10μM的反向引物0.5μL，ddH₂O 4μL。然后从已验证的阳性克隆中随机选取3个独立的阳性克隆送到生物技术公司进行测序，本发明在测序后得到所述的KUP9基因的序列，如SEQ ID NO.2所示。

实施例2 KUP9基因在促进钾离子吸收和转运方面的作用

将连接有实施例1中所述的KUP9基因的T-载体与表达载体P416分别进行双酶切(酶切位点为：Sma Ⅰ和Xho Ⅰ)，回收目的基因和表达载体P416，然后用连接酶连接，将连接后的重组酵母表达载体转入大肠杆菌DH5α的感受态细胞，对转化后的大肠杆菌单菌落进行PCR扩增、酶切来验证是否构建成功，将构建成功的重组酵母表达载体转入到R5421中。

具体步骤如下：用接菌环取保存的R5421酵母菌划线于固体培养基YPDA上，28℃培养12h；挑取R5421酵母单菌落于Ep管中，加1mL YPDA培养液涡旋；将上述菌液全部转入装有YPDA培养液的三角瓶中，于30℃，250rpm摇菌至OD600＝1.2；按1:10转接，摇至OD600＝1.0～1.2；于28℃，1000rpm离心5min集菌，用1/2体积的灭菌超纯水重悬；于28℃，1000rpm离心5min集菌，吸干上清；依次加入下列成分(每5mL原始菌液)：

涡旋1min，使转化体系完全混匀；放于30℃的水浴中温育30min；再放入42℃的水浴中热击28min，冰上冷却10min；7000rpm离心15s，弃上清；用1mL的无菌水轻轻重悬沉淀；取200μL转化混合物铺于营养缺陷型平板上；30℃培养3天。提取酵母质粒并鉴定结果。

挑取鉴定过的酵母单菌落在营养缺陷平板上划线，30℃培养3天；用牙签在营养缺陷平板上蘸取少量菌体于2mL营养缺陷液中培养12h；8000rpm离心1min收集菌体；弃上清，用1mL双蒸水悬浮菌体，8000rpm离心1min；

弃上清，用1mL双蒸水重悬浮，调OD₆₀₀为0.8；将未稀释菌液及分别稀释10倍、100倍、1000倍后的菌液，分别取5uL在钾离子浓度为20uM，2mM的培养基上，30℃培养3天观察结果。

实验结果如图1所示，在钾离子浓度为20uM、2mM培养基(AP培养基(1L)：磷酸546μL，L-精氨酸1.742g，1000×维生素溶液1mL，1000×微量元素溶液1mL，尿嘧啶0.77g，100×Ura 10mL，葡萄糖20g，琼脂粉15g)上，阴性对照组酵母菌(转入P416空载体)几乎不生长，转入烟草KUP9基因的重组酵母和阳性对照组(转入拟南芥KUP基因)的重组酵母菌均可以生长。随着稀释倍数的增加，转入烟草KUP11基因的重组酵母和阳性对照组的重组酵母菌仍然可以生长。以上结果证明，本发明的烟草KUP9基因具有钾吸收和转运功能。

虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

序列表

<110> 贵州省烟草科学研究院

<120> 一种来自烟草的钾转运蛋白KUP9及其编码基因与应用

<130> KHP171117851.2

<160> 4

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 789

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

Met Thr Ser Gly Met Glu Ile Asp Glu Glu Asn Asn Asn Asn Glu Ser

1 5 10 15

Lys Gly Gly Met Trp Asp Leu Glu Gln Lys Leu Asp Gln Pro Met Asp

20 25 30

Glu Glu Ala Gly Arg Leu Arg Asn Met Tyr Arg Glu Lys Lys Phe Ser

35 40 45

Thr Leu Leu Leu Leu Arg Leu Ala Tyr Gln Ser Leu Gly Val Val Tyr

50 55 60

Gly Asp Leu Gly Thr Ser Pro Leu Tyr Val Tyr Asn Asn Thr Phe Pro

65 70 75 80

His Gly Ile Asp Asp Pro Glu Asp Val Ile Gly Ala Leu Ser Leu Ile

85 90 95

Ile Tyr Ser Leu Thr Leu Ile Pro Leu Leu Lys Tyr Val Phe Ile Val

100 105 110

Cys Arg Ala Asn Asp Asn Gly Gln Gly Gly Thr Phe Ala Leu Tyr Ser

115 120 125

Leu Leu Cys Arg His Ala Lys Ile Asn Thr Ile Pro Asn Gln His Arg

130 135 140

Thr Asp Glu Glu Leu Thr Thr Tyr Ser Arg Ser Thr Phe His Glu His

145 150 155 160

Ser Phe Ala Ala Lys Thr Lys Arg Trp Leu Glu Ala Tyr Pro Phe Arg

165 170 175

Lys Asn Ala Leu Leu Ile Leu Val Val Val Gly Thr Cys Met Val Ile

180 185 190

Gly Asp Gly Ile Leu Thr Pro Ala Ile Ser Val Leu Ser Ala Ser Gly

195 200 205

Gly Ile Lys Val Asp His Pro Lys Met Ser Asn Asp Val Val Val Val

210 215 220

Val Ala Val Ile Ile Leu Val Gly Leu Phe Ser Leu Gln His Tyr Gly

225 230 235 240

Thr Asp Arg Val Gly Trp Leu Phe Ala Pro Val Val Leu Leu Trp Phe

245 250 255

Leu Leu Val Gly Gly Ile Gly Ile Tyr Asn Ile Trp Lys Tyr Asp Ser

260 265 270

Ser Val Leu Arg Ala Phe Ser Pro Val Tyr Ile Tyr Arg Tyr Phe Arg

275 280 285

Arg Glu Lys Arg Glu Gly Trp Thr Ser Leu Gly Gly Ile Met Leu Ser

290 295 300

Ile Thr Gly Thr Glu Ala Leu Phe Ala Asp Leu Ala His Phe Pro Leu

305 310 315 320

Ser Ala Ile Gln Leu Ala Phe Thr Val Val Cys Phe Pro Cys Leu Leu

325 330 335

Leu Ala Tyr Ser Gly Gln Ala Ala Tyr Leu Met Gln Asn Thr Asp His

340 345 350

Val Val Asp Ala Phe Tyr Arg Ser Ile Pro Glu Ser Ile Tyr Trp Pro

355 360 365

Val Phe Val Ile Ala Thr Leu Ala Ala Ile Val Ala Ser Gln Ala Thr

370 375 380

Ile Ser Ala Thr Phe Ser Ile Ile Lys Gln Ala Leu Ala Leu Gly Cys

385 390 395 400

Phe Pro Arg Val Lys Val Val His Thr Ser Lys Lys Phe Leu Gly Gln

405 410 415

Ile Tyr Ile Pro Asp Ile Asn Trp Ile Leu Met Val Leu Cys Ile Ala

420 425 430

Val Thr Ala Gly Phe Lys Asn Gln Ser Gln Ile Gly Asn Ala Tyr Gly

435 440 445

Thr Ala Val Val Ile Val Met Leu Val Thr Thr Leu Leu Met Thr Leu

450 455 460

Ile Met Leu Leu Val Trp His Cys His Trp Ala Val Val Leu Ile Phe

465 470 475 480

Thr Val Leu Ser Leu Val Val Glu Cys Thr Tyr Phe Ser Ala Val Leu

485 490 495

Phe Lys Leu Asp Gln Gly Gly Trp Val Pro Leu Val Ile Ala Ala Ala

500 505 510

Phe Leu Leu Ile Met Tyr Val Trp His Tyr Gly Thr Val Lys Arg Tyr

515 520 525

Glu Phe Glu Met His Ser Lys Val Ser Met Ala Trp Ile Leu Gly Leu

530 535 540

Gly Pro Ser Leu Gly Leu Val Arg Val Pro Gly Ile Gly Leu Val Tyr

545 550 555 560

Thr Glu Leu Ala Ser Gly Val Pro His Ile Phe Ser His Phe Ile Thr

565 570 575

Asn Leu Pro Ala Ile His Ser Val Met Val Phe Val Cys Val Lys Tyr

580 585 590

Leu Pro Val Tyr Thr Val Pro Glu Asp Glu Arg Phe Leu Val Lys Arg

595 600 605

Ile Gly Pro Lys Asn Phe His Met Phe Arg Cys Val Ala Arg Tyr Gly

610 615 620

Tyr Lys Asp Leu His Lys Lys Asp Asp Asp Phe Glu Lys Lys Leu Phe

625 630 635 640

Asp Asn Leu Phe Met Phe Val Arg Leu Glu Ser Met Met Asp Gly Cys

645 650 655

Ser Asp Ser Asp Glu Tyr Ser Leu Tyr Gly Gln Gln Thr Gln His Ser

660 665 670

Arg Asp Asn Gly Ser Ser Ser Thr Ala Asn Ile Glu Leu Ser Tyr Ser

675 680 685

Ser Met Asp Ser Ile Ala Pro Val Lys Ser His Pro His Arg Asn Asn

690 695 700

Thr Ile Thr Ser Ser Gly His Glu Ser Gly Gln Thr Glu Val Asp Glu

705 710 715 720

Met Glu Phe Leu Asn Ser Cys Arg Asp Thr Gly Val Val His Ile Leu

725 730 735

Gly Asn Thr Val Ile Arg Ala Arg Arg Glu Ser Arg Phe Tyr Lys Lys

740 745 750

Leu Ala Ile Asp Tyr Ile Tyr Ala Phe Leu Arg Lys Ile Cys Arg Glu

755 760 765

Asn Ser Val Ile Phe Asn Ile Pro His Glu Ser Leu Leu Asn Val Gly

770 775 780

Gln Ile Phe Tyr Val

785

<210> 2

<211> 2370

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

atgacttcag gaatggaaat tgatgaagag aataataata atgaaagtaa aggagggatg 60

tgggatttag agcaaaagct tgatcagcct atggatgagg aagctggaag gctaaggaat 120

atgtatagag aaaagaaatt ctcgacattg ttgttattgc ggcttgctta tcagagtctt 180

ggagtggtgt atggggacct tgggacatct cccttgtatg tctacaacaa tacatttccc 240

catggaattg atgatccaga ggatgtcatt ggagcacttt cattaattat atactctctt 300

acacttatcc ctctcctcaa gtatgttttc attgtatgta gagcaaacga caatggccaa 360

ggtgggactt ttgctcttta ttcgttactc tgtcgacatg ctaagataaa cacaattcca 420

aaccaacacc gaactgatga ggagttgaca acttacagcc gtagcacatt ccatgagcat 480

tcatttgctg caaaaacaaa aagatggttg gaggcatatc cgttcaggaa gaatgcactt 540

cttattcttg tagttgttgg cacttgcatg gtaatcggcg atggaattct gactcctgcc 600

atttcagttc tttcagcttc tggtgggatc aaggtggacc atccgaagat gagtaacgac 660

gtagttgtgg tagttgctgt cattatatta gttggtttgt ttagcttaca acattatggc 720

acagacagag tgggttggtt gtttgctcca gttgtgctgc tttggtttct cttagtagga 780

ggtattggca tctataatat ctggaaatat gatagctctg ttttgcgggc tttttctccg 840

gtttacattt atcggtattt tagaagggaa aaaagagagg gttggacatc actgggaggg 900

atcatgctca gcattacagg aacagaggca ctttttgctg atcttgctca ttttccactg 960

tcagcaatac agcttgcttt cactgtcgtt tgtttccctt gccttcttct agcttattct 1020

ggacaagcag catacctcat gcaaaataca gatcatgttg ttgatgcatt ctatcgatct 1080

attccagaaa gcatatactg gccagttttt gtgattgcaa ctctagctgc tattgttgca 1140

agtcaagcta ccatatctgc aacgttttcc ataatcaagc aagctctagc acttggctgt 1200

tttccgagag tcaaggttgt acatacatca aagaagttct tagggcagat atatattcct 1260

gatataaatt ggatccttat ggttctttgc attgccgtta ctgctggatt taaaaatcaa 1320

agccaaatag gcaatgctta cggaacagcg gtcgtgatag tcatgctggt gacgacactc 1380

ctcatgactt tgataatgtt actagtttgg cactgccatt gggctgttgt tcttatcttc 1440

actgtcttat ctctggtggt tgaatgtacc tacttctctg cagtattgtt taagcttgac 1500

cagggtggtt gggttcctct tgtgattgct gcagcttttc ttctcatcat gtatgtatgg 1560

cattatggaa cggtgaaacg ttacgaattt gagatgcaca gcaaggtatc aatggcatgg 1620

attcttggac ttggccccag tttaggattg gtacgtgtgc caggaatcgg acttgtgtac 1680

accgaactag ctagtggagt gccacacatc ttttctcact tcattaccaa cctacctgct 1740

atacactcag ttatggtatt tgtctgtgta aagtatcttc ctgtttacac agttccagaa 1800

gatgagagat tccttgtgaa acggatagga ccaaagaatt ttcacatgtt tcgctgtgtt 1860

gcaagatatg gttacaaaga cctccataag aaggatgacg actttgagaa aaagctcttc 1920

gataacctct ttatgtttgt ccgactggaa tccatgatgg atggctgctc cgactctgat 1980

gaatacagct tatacggaca gcaaacacaa cattctagag ataacgggag ctcttctact 2040

gcaaatattg agctcagtta ttcatcaatg gactcaatag cccctgtcaa atctcatcct 2100

cacagaaaca acacaatcac atcctccgga catgagagcg gacagacaga agttgatgaa 2160

atggaattct taaatagttg tagagatacg ggggttgtac acatacttgg gaatactgta 2220

ataagagcaa gaagggaatc caggttttat aagaaactag ctatagacta tatatatgca 2280

tttcttagga aaatatgcag ggaaaatagt gtcatcttca atatacctca tgagagcctc 2340

ttgaatgttg gacagatctt ttatgtgtaa 2370

<210> 3

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

atgacttcag gaatggaaat 20

<210> 4

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

ttacacataa aagatctgtc 20

Claims

1.一种来自烟草的蛋白质KUP9在促进酵母菌钾离子吸收和转运中的应用，所述KUP9蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一种编码来自烟草的KUP9蛋白质的基因在促进酵母菌钾离子吸收和转运中的应用，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

3.含有编码来自烟草的KUP9蛋白质的基因的生物材料在促进酵母菌钾离子吸收和转运中的应用，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述生物材料为重组表达载体、表达盒或重组菌。