CN111423499B

CN111423499B - 调控植物抗氧化能力和耐盐性的盐芥转录因子EsbZip60及其编码基因和应用

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Publication number: CN111423499B
Application number: CN202010193833.XA
Authority: CN
Inventors: 张荃; 李传顺; 亓玉婷; 王兴军; 李长生; 邹涵慧; 赵传志
Original assignee: Shandong Normal University
Current assignee: Shandong Normal University
Priority date: 2020-03-19
Filing date: 2020-03-19
Publication date: 2022-02-25
Anticipated expiration: 2040-03-19
Also published as: CN111423499A

Abstract

本发明属于农业生物技术领域，具体涉及调控植物抗氧化能力和耐盐性的盐芥转录因子EsbZip60及其编码基因和应用，其氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。本发明以对盐芥为实验材料，得到EsbZip60蛋白及其编码基因，并将该编码基因导入烟草，显著提升了植物的抗盐和抗氧化的能力。本发明的EsbZip60蛋白及其编码基因对改良、增强转基因植株包括小麦、土豆、黄瓜和番茄等经济作物的耐盐能力，并加速植物抗逆性改良的分子育种进程具有十分重要的理论和实践意义。

Description

调控植物抗氧化能力和耐盐性的盐芥转录因子EsbZip60及其编码基因和应用

技术领域

本发明属于农业生物技术领域，具体涉及调控植物抗氧化能力和耐盐性的盐芥转录因子EsbZip60及其编码基因和应用。

背景技术

bZIP转录因子是植物中最大的转录因子调控家族之一，其包含高度保守的DNA碱性结合结构域，以及多样性的亮氨酸拉链，bZIP蛋白以同源或异源二聚体的形式存在，其通过与顺式作用元件G-box、C-box、ABRE、LTRE和BoxII的结合，调控下游相关基因如ERF5、KIN1、COR15a、COR78、CYP707A1、CYP707A3、ADS和CYP71AV1的表达，进而在植物生物、非生物胁迫应答以及发育等生理过程中发挥重要作用。

植物中bZIPs家族的蛋白具有功能多样性。水稻OsHBP1b基因降低了转基因烟草中过氧化氢的含量，并增强了超氧化物歧化酶的活性，进而提高转基因植株细胞液泡膜的稳定性和K⁺/Na⁺比，表明OsHBP1b具有较强的抗氧化损伤功能。稻OsbZIP71被干旱胁迫强烈诱导，其过量表达时可显著提高转基因水稻的抗旱性。Oshox22过量表达则提高水稻植株的ABA含量，表明Oshox22调控ABA的生物合成，并可能通过ABA介导的信号传导途径，调控植株对干旱和盐胁迫的应答。玉米HD-Zip I家族Zmhdz10在水稻和拟南芥中的异源表达，增强了转基因植株的耐旱性和耐盐性。在低温处理后，胡萝卜(Daucus carota)根中bZIP类蛋白Lip的表达上调，进而增强了植株的抗寒性。有些植物的bZIP蛋白通过水杨酸、茉莉酸及ABA信号转导通路，参与植株对虫害、病原体感染等生物胁迫的应答调控。目前，盐芥EsbZip60转录因子在调控植物耐逆性中的作用尚无研究报导。

发明内容

本发明的目的在于提供一种调控植物抗氧化能力和耐盐性的盐芥转录因子EsbZip60。

本发明的再一目的在于提供上述盐芥转录因子EsbZip60的编码基因。

本发明的再一目的在于提供含有上述编码基因的重组表达载体。

本发明的再一目的在于提供含有上述编码基因的重组菌株。

本发明的再一目的在于提供上述盐芥转录因子EsbZip60的应用。

本发明的再一目的在于提供上述盐芥转录因子EsbZip60的编码基因的应用。

根据本发明具体实施方式的盐芥转录因子EsbZip60，其氨基酸序列如SEQ IDNo.1所示：

本发明的EsbZip60蛋白由314个氨基酸残基组成，该蛋白包含2个保守的结构域(位于第153-219氨基酸)，即靠近C末端的亮氨酸拉链结构域和紧靠亮氨酸拉链N末端的大约20个氨基酸残基组成的碱性结构域。亮氨酸拉链结构域一般可通过疏水作用形成α-螺旋二聚体；碱性结构域可起核定位信号作用，其通过保守的N-x7-R/K区域与特异的DNA结合。另外，EsbZip60转录因子包含富含谷氨酰胺、脯氨酸和一些酸性氨基酸的结构域，其可能与转录激活域相结合从而调控下游基因的表达。

根据本发明具体实施方式的盐芥转录因子EsbZip60基因的基因组序列如SEQ IDNo.2所示：

ATGGCGGAGGAATTTGGTTGCTTTGATATACTTTTAGACGACGATCTCTTCTTCGATTTCGATCCTTCAATCGTAACTGAACCTCCTATTGCGGATGATTTTATTCGCTCTTCACCGGATTCTGCGAATTCGTGGATCGGAGAGATTGAGAGCCAATTGATGAATGATGAGCAGGAGAATTTTCTGGAGTTAGATCAGCAGTCGGTTTCAGAGTTTTTAGCGGATATATTCGTTGATTATCCCACAAGCGAGTCTAGTCCGGTTGAGTTTTCGACCGCTAAAGTTTCAGATGATGTACCAACCGTCGAATCTCCCGCCGCTGGAAAGGAATCAGCAGGATCCGATGATTCCGTGAAGGAGAAAGCAGATTTCTCAATTGAGAAGAAATCGGACGCATCCAATGATTCTGGAAGTGAGAATCAGGATGAAGCTAAGGTGGAAAGCGAGATTGATGGAAACGATGATGCTATGGCCAAGAAAAGAAGAAGGTATATCTAATTTTGTCTCTTTTTAAAGTAATTGAAATTTAGGGTTTGTGCATATTTGGGAAAAGAACATGGTCTGTAATTTGTAAAAGGCGTTATGCTTTAAAAACAACCTTGAGAGCATTATCTTGAAGTAGTTTAGCAGGTGTGTGATTTTGAAATTTTATATTGAGAACAATATGGATTTGTATTTTGGTTGCCTTTTAGATTGTTGAAAGTGTGTTATGCTATATCTCATTGGTTATGTTGTTTAAACATACTTCAAACCAACTTTTACTCTTGTAATTTGTTACTGGTATCTTGTTGAAGTGGTTTGAAGAGTTGATAATGGGTGATTGTGATTGATTTGTTCAGGAGAGTAAGAAACAGAGATGCTGCG GTAAGATCGAGGGAGAGGAAGAAGGAATATGTGACTGATCTAGAGAAGAAGAGTAAGTATCTCGAAAGAGAATGCATGAGACTGGGACGGATGCTCGAGTGTTTCGTTGCGGAAAACCATTCTCTTCGTCTCTGTTTGCAAAAGGGTAGTGGCAATGCTTCCATGATGACAAAGCAGGAGTCTGCTGTGCTCTTGTTGGAATCCCTGCTGTTGGGTTCCCTGCTTTGGTATCTGGGAGACATCATTTGCCAATTCCCTCACCAGCCCCAAACAAAGAGTTGCTTCCAGTCAGTGGAAGCCGGAGAACCAGAAAAGCTGGTTCGAAGCGGGCGAGAGAGTAGTAAAATATCTAATAATAATACCGGGAAGAGTCGGAGATGTAAGGGTTCAAGGCCGCGGATGAAACACCAAGTCTTTACACTTGTGGCGTGA

根据本发明具体实施方式的盐芥转录因子EsbZip60的编码基因，其cDNA核苷酸序列如SEQ ID No.3所示：

根据本发明具体实施方式的重组表达载体，其包括双元农杆菌载体和可用于植物微弹轰击的载体等。所述植物表达载体还可包含外源基因的3’端非翻译区域，即包含聚腺苷酸信号和任何其它参与mRNA加工或基因表达的DNA片段。所述聚腺苷酸信号可引导聚腺苷酸加入到mRNA前体的3’端，如农杆菌冠瘿瘤诱导(Ti)质粒基因(如胭脂合成酶Nos基因)、植物基因3’端转录的非翻译区均具有类似功能。

使用EsbZip60构建重组植物表达载体时，在其转录起始核苷酸前可加上任何一种增强型启动子、组成型启动子或组织特异性启动子，如花椰菜花叶病毒(CaMV)35S启动子、玉米的泛素启动子(Ubiquitin)等，它们可单独使用或与其它植物启动子结合使用；此外，使用本发明的基因构建植物表达载体时，还可使用增强子，包括翻译增强子或转录增强子，这些增强子区域可以是ATG起始密码子或邻接区域起始密码子等，但必需与编码序列的阅读框相同，以保证整个序列的正确翻译。所述翻译控制信号和起始密码子的来源是广泛的，可以是天然的，也可以是合成的。翻译起始区域可以来自转录起始区域或结构基因。

为了便于对转基因植物细胞或植物进行鉴定及筛选，可对所用植物表达载体进行加工，如加入可在植物中表达的编码可产生颜色变化的酶或发光化合物的基因(GUS基因、萤光素酶基因等)、具有抗性的抗生素标记物(庆大霉素标记物、卡那霉素标记物等)或是抗化学试剂标记基因(如抗除莠剂基因)等。从转基因植物的安全性考虑，可不加任何选择性标记基因，直接以逆境筛选转化植株。

利用任何一种可以引导外源基因在植物中表达的载体，将本发明所提供的EsbZip60基因导入植物细胞，可获得提高植物抗逆能力的转基因细胞系及转基因植株。携带有编码基因的表达载体可通过使用Ti质粒、Ri质粒、植物病毒载体、直接DNA转化、显微注射、电导、农杆菌介导等常规生物学方法转化植物细胞或组织，并将转化的植物组织培育成植株。被转化的植物宿主既可以是单子叶植物，也可以是双子叶植物，如：拟南芥、小麦、玉米、黄瓜、番茄、土豆、苜宿等。

本发明还提供上述盐芥转录因子EsbZip60及其编码基因的应用，尤其是在提高植物对盐胁迫的耐逆能力方面的应用。

本发明还提供一种显著提高植物盐胁迫耐受性和抗氧化能力的培育方法，该方法中包括将上述任一种含有EsbZip60基因的重组表达载体导入植物细胞中，即得到对盐胁迫的耐受能力以及抗氧化能力显著提高的植物。

本发明以对盐芥为实验材料，得到EsbZip60蛋白及其编码基因，并将该编码基因导入烟草，显著提升了植物的抗盐和抗氧化的能力。本发明的EsbZip60蛋白及其编码基因对改良、增强转基因植株包括小麦、土豆、黄瓜和番茄等经济作物的耐盐能力，并加速植物抗逆性改良的分子育种进程具有十分重要的理论和实践意义。

附图说明

图1显示EsbZip60转基因烟草的分子检测结果，其中，M：DNAmarker DL2000；1-6：不同转基因烟草株系；N：阴性对照；WT：野生型；P：阳性对照；

图2显示EsbZip60转基因烟草和野生型在含0、50、100、150和200mMNaCl的MS培养基中的生长比较；

图3显示EsbZip60转基因烟草和野生型在0、50、100、150、200mM NaCl处理后的主根长度比较，每组数据20个重复，***表示P<0.001，****表示P<0.0001；

图4显示NaCl处理后EsbZip60转基因烟草和野生型叶和根组织POD酶活性的比较，WT-L：野生型烟草叶组织，T-L：转基因烟草叶组织；WT-R：野生型烟草根组织，T-R：转基因烟草根组织；每组数据3个重复，*表示P<0.05，**表示P<0.01，***表示P<0.001，****表示P<0.0001；

图5显示NaCl处理后EsbZip60转基因烟草和野生型叶组织耐逆相关酶活性的比较，WT-L：野生型烟草叶组织，T-L：转基因烟草叶组织；每组数据3个重复，*表示P<0.05，**表示P<0.01，****表示P<0.0001。

具体实施方式

供试材料为盐芥(Eutrema salsugineum)，烟草。收集盐芥、EsbZip60异源表达植株和相应野生型植株的叶和根等用于耐逆相关酶活的定量分析。在所有情况下，叶和根等样品立即于液氮中冷冻并置于-80℃待用，用于提取DNA、RNA或酶液等。

以下实施例中未作具体说明的分子生物学实验方法，均参照《分子克隆实验指南》(第三版)J.萨姆布鲁克一书中所列的具体方法进行，或者按照试剂盒和产品说明书进行。

实施例1盐芥转录因子EsbZip60基因的cDNA克隆

对生长20天左右的盐芥幼苗，用Trizol提取盐芥总RNA。用Superscript II(Invitrogen)反转录酶反转录得到cDNA。根据EsbZip60基因的5’UTR和3’UTR序列设计引物P1和P2。通过反转录得到cDNA为模板，以引物P1和P2进行PCR扩增，引物的序列如下：

P1：5'TTAGATAAAGTCCGATCAGTAG 3'

P2：5'GATTAGAGTAGAAGGCGTGG 3'

对PCR产物进行1％琼脂糖凝胶电泳检测，得到分子量为1056bp的条带，该片段包括EsbZip60的编码区(945bp)和111bp的UTR区域(87bp的5’UTR和24bp的3’-UTR)，大小与预期结果相符。

回收该片段，将该回收片段与pMD18-T(Takara)连接，然后转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，根据pMD18-T载体上的氨卞青霉素抗性标记筛选阳性克隆，得到含有回收片段的重组质粒。

以该重组质粒载体上的M13F(-47)和M13R(-48)序列为通用引物对其进行核苷酸序列测定，测序结果表明扩增到的EsbZip60基因的开放阅读框(ORF)为SEQ ID No.3的自5’末端第1至945位脱氧核糖核苷酸，编码氨基酸序列是SEQ ID No.1的蛋白质。将含序列SEQID No.3所示EsbZip60基因的重组载体命名为pMD18-T-EsbZip60。

EsbZip60基因进一步用引物P1和P2在盐芥因组中进行扩增，结果显示该基因的基因组序列为1634bp，由两个外显子和一个内含子(351bp)组成。两个外显子长度分别为488bp和457bp。CDS序列为945bp。

实施例2用EsbZip60基因提高植株的抗盐和抗氧化能力

2.1重组表达载体的构建

以盐芥的总RNA反转录得到的cDNA为模板，用含有SmaI和HindIII接头序列的特异引物进行PCR扩增；然后SmaI和HindIII双酶切PCR产物回收，将酶切产物正向插入载体pCAMBIA3301H的35S启动子之后的SmaI和HindIII酶切位点之间，得到重组载体pCAMBIA3301H-35S:EsbZip60。引物序列如下：

35S-EsbZip60[SmaI]：5'TCCCCCGGGTTAGATAAAGTCCGATCAGTAG 3'

35S-EsbZip60[HindIII]：5'CCCAAGCTTGATTAGAGTAGAAGGCGTGG 3'

2.2用EsbZip60基因增强植物的抗盐能力

1)获得转基因烟草材料

将上述构建的重组表达载体pCAMBIA3301H-35S:EsbZip60转化到根癌农杆菌GV3101中，转化烟草，用含6mg/L Basta的MS培养基进行筛选，得到20棵阳性转基因烟草植株。

将筛选得到的阳性转基因植株用PCR做进一步鉴定筛选，PCR所用的一对引物为P1和P2。对35S:EsbZip60转基因烟草进行PCR鉴定，如图1所示，阳性转基因植株经PCR扩增可获得1056bp左右条带，扩增片段中包括945bp的编码区、87bp 5’UTR和24bp 3’-UTR区段，扩增片段大小与预期结果相符，共获得转35S::EsZip60烟草18株。

2)EsbZip60转基因烟草耐盐性及耐逆相关生理指标的测定

野生型和EsbZip60转基因的烟草种子灭菌后，于MS培养基中生长10天，选取生长状况一致的幼苗分别移栽到含0、50、100、150和200mM NaCl的MS培养基上，在光照16h/黑暗8h条件下25℃培养10天；观察表型并进行拍照，同时以每组20株幼苗进行主根长度的测量和统计。

如图2所示，在50、100、150、200mM的NaCl处理10天后，转基因烟草较之于野生型烟草的生长状况更好、主根更长；但在正常条件下(对照)转基因烟草与野生型烟草的生长状况基本一致。

如图3所示，转基因烟草植株在50、100、150、200mM的NaCl浓度下根长平均值均显著大于野生型烟草植株，说明转基因烟草较之于野生型烟草具有更强的耐盐性，表明EsbZip60基因可提高转基因烟草植株的耐盐性。

野生型和EsbZip60转基因烟草生长4周后，选取生长状况一致的幼苗，分别用含0、150和200mM NaCl溶液处理24小时后，采集烟草植株的叶和根，进行其过氧化物酶(POD)活性的测定；每种样品共12棵单株，每4棵为一个重复。结果如图4中的A和图4中的B所示。较之于野生型烟草叶组织，转基因烟草叶分别在150mM、200mM NaCl处理24小时后的POD活性均表现为上调，特别是在150mM NaCl处理后转基因烟草POD酶的活性上调尤为显著，尽管在正常生长条件下，转基因烟草叶组织POD活性低于野生型，如图4中A图所示。较之于野生型烟草根组织，转基因烟草根在正常条件(对照)、150mM、200mM NaCl分别处理24小时后的POD活性均表现为显著上调，如图4中B图所示。

野生型和EsbZip60转基因烟草生长4周后，选取生长状况一致的幼苗，分别用含0、150和200mM NaCl溶液处理48小时后，采集烟草植株的叶和根，进行其过氧化物酶(POD)活性的测定；每种样品共12棵单株，每4棵为一个重复。结果如图4中C图和图4中D图所示。较之于野生型烟草叶组织，转基因烟草叶分别在150mM和200mM NaCl处理48小时后的POD活性均表现为上调，特别是在150mM NaCl处理后转基因烟草POD酶的活性上调尤为显著，但在正常生长条件下，转基因烟草叶组织POD活性低于野生型，如图4中C图所示。较之于野生型烟草根组织，转基因烟草根在正常条件(对照)、150mM和200mM NaCl分别处理48小时后的POD活性均表现为显著上调，如图4中D图所示。

野生型和EsbZip60转基因烟草生长4周后，选取生长状况一致的幼苗，在对照和150mM NaCl处理24小时后采集植株的叶片，进行其超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)和谷胱甘肽还原酶(GR)活性的测定，结果分别如图5中的A、B、C和D图所示。每种样品共12棵单株，每4棵为一个重复。

如图5所示。较之于野生型烟草叶组织，转基因烟草叶在正常条件(对照)的SOD活性表现为上调，在150mM NaCl处理后转基因烟草SOD酶活性表现为显著上调，如图5中A图所示。较之于野生型烟草叶组织，转基因烟草叶在150mM NaCl处理24小时后的CAT活性表现为显著上调，但在正常生长条件下转基因烟草叶组织CAT活性低于野生型，如图5中B图所示。较之于野生型烟草叶组织，转基因烟草叶在150mMNaCl处理24小时后的GPx活性表现为显著上调，但在正常生长条件下转基因烟草叶组织GPx活性低于野生型，如图5中C图所示。较之于野生型烟草叶组织，转基因烟草叶在150mM NaCl处理24小时后的GR活性表现为显著上调，尽管在正常生长条件下转基因烟草叶组织GR活性略低于野生型，如图5中D图所示。

POD和CAT均可清除细胞应激反应中产生的活性氧，在维持氧代谢平衡和减轻活性氧对细胞器的毒害中担任重要作用。而SOD可清除氧自由基(O₂ ^-)对植物细胞的毒害。通常情况下，植物可通过增强体内POD、SOD和CAT的活性以提高植物的抗氧化能力和耐逆性。谷胱甘肽过氧化物酶GSH-Px(GPx)不仅是一种重要的过氧化物分解酶类，也是细胞内抗脂质过氧化酶保护系统的主要成分，其可催化GSH转变为GSSG，并促进H₂O₂的分解，因而该酶活性可保护细胞膜结构及其功能。谷胱甘肽还原酶(GR)不仅是抗坏血酸-谷胱甘肽循环途径中的重要组分，而且它也是重要的抗氧化酶类，参与植物体内活性氧的清除。鉴于盐芥EsbZip60基因提高了盐胁迫下转基因烟草叶和根中POD酶活性，并提升了盐胁迫下转基因烟草叶中抗氧化酶类SOD、CAT、GPx和GR的酶活性，说明EsbZip60基因提高了转基因烟草植株的抗氧化能力和耐盐性。因而，EsbZip60基因在作物的耐逆基因工程育种中具有一定的应用价值。

序列表

<110> 山东师范大学

<120> 调控植物抗氧化能力和耐盐性的盐芥转录因子EsbZip60及其编码基因和应用

<160> 3

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 314

<212> PRT

<213> 盐芥(Eutrema Salsugineum)

<400> 1

Met Ala Glu Glu Phe Gly Cys Phe Asp Ile Leu Leu Asp Asp Asp Leu

1 5 10 15

Phe Phe Asp Phe Asp Pro Ser Ile Val Thr Glu Pro Pro Ile Ala Asp

20 25 30

Asp Phe Ile Arg Ser Ser Pro Asp Ser Ala Asn Ser Trp Ile Gly Glu

35 40 45

Ile Glu Ser Gln Leu Met Asn Asp Glu Gln Glu Asn Phe Leu Glu Leu

50 55 60

Asp Gln Gln Ser Val Ser Glu Phe Leu Ala Asp Ile Phe Val Asp Tyr

65 70 75 80

Pro Thr Ser Glu Ser Ser Pro Val Glu Phe Ser Thr Ala Lys Val Ser

85 90 95

Asp Asp Val Pro Thr Val Glu Ser Pro Ala Ala Gly Lys Glu Ser Ala

100 105 110

Gly Ser Asp Asp Ser Val Lys Glu Lys Ala Asp Phe Ser Ile Glu Lys

115 120 125

Lys Ser Asp Ala Ser Asn Asp Ser Gly Ser Glu Asn Gln Asp Glu Ala

130 135 140

Lys Val Glu Ser Glu Ile Asp Gly Asn Asp Asp Ala Met Ala Lys Lys

145 150 155 160

Arg Arg Arg Arg Val Arg Asn Arg Asp Ala Ala Val Arg Ser Arg Glu

165 170 175

Arg Lys Lys Glu Tyr Val Thr Asp Leu Glu Lys Lys Ser Lys Tyr Leu

180 185 190

Glu Arg Glu Cys Met Arg Leu Gly Arg Met Leu Glu Cys Phe Val Ala

195 200 205

Glu Asn His Ser Leu Arg Leu Cys Leu Gln Lys Gly Ser Gly Asn Ala

210 215 220

Ser Met Met Thr Lys Gln Glu Ser Ala Val Leu Leu Leu Glu Ser Leu

225 230 235 240

Leu Leu Gly Ser Leu Leu Trp Tyr Leu Gly Asp Ile Ile Cys Gln Phe

245 250 255

Pro His Gln Pro Gln Thr Lys Ser Cys Phe Gln Ser Val Glu Ala Gly

260 265 270

Glu Pro Glu Lys Leu Val Arg Ser Gly Arg Glu Ser Ser Lys Ile Ser

275 280 285

Asn Asn Asn Thr Gly Lys Ser Arg Arg Cys Lys Gly Ser Arg Pro Arg

290 295 300

Met Lys His Gln Val Phe Thr Leu Val Ala

305 310

<210> 2

<211> 2204

<212> DNA

<213> 盐芥(Eutrema Salsugineum)

<400> 2

aggcggagga agggcgaaac agacgacgac cccgacgacc caacgaacga accccagcgg 60

agaacgccca ccggacgcga acgggacgga gagagagagc caagagaaga gagcaggaga 120

acggagagac agcagcggca gagagcggaa acggaaccca caagcgagca gccgggagcg 180

accgcaaagc agagagacca accgcgaacc ccgccgcgga aaggaacagc aggaccgaga 240

ccggaaggag aaagcagacc aagagaagaa acggacgcac caagacggaa ggagaacagg 300

agaagcaagg ggaaagcgag agaggaaacg agagcaggcc aagaaaagaa gaaggaacaa 360

gccaaagaag aaaagggggc aagggaaaag aacaggcgaa gaaaaggcga gcaaaaacaa 420

ccgagagcaa cgaagagagc agggggagaa aaagagaaca aaggagaggg ccagaggaaa 480

gggagcaacc aggaggaaac aaccaaacca acaccgaaga cggacggaag gggaagagga 540

aaggggagga gagcaggaga gaagaaacag agagcgcgga agacgaggga gaggaagaag 600

gaaaggacga cagagaagaa gagaagaccg aaagagaagc agagacggga cggagccgag 660

gcggcggaaa accacccgcc ggcaaaaggg agggcaagcc cagagacaaa gcaggagcgc 720

ggccgggaac ccgcggggcc cgcggacggg agacacagcc aaccccacca gccccaaaca 780

aagaggccca gcagggaagc cggagaacca gaaaagcggc gaagcgggcg agagagagaa 840

aaacaaaaaa accgggaaga gcggagagaa gggcaaggcc gcggagaaac accaagcaca 900

cgggcggaat ggcggaggaa tttggttgct ttgatatact tttagacgac gatctcttct 960

tcgatttcga tccttcaatc gtaactgaac ctcctattgc ggatgatttt attcgctctt 1020

caccggattc tgcgaattcg tggatcggag agattgagag ccaattgatg aatgatgagc 1080

aggagaattt tctggagtta gatcagcagt cggtttcaga gtttttagcg gatatattcg 1140

ttgattatcc cacaagcgag tctagtccgg ttgagttttc gaccgctaaa gtttcagatg 1200

atgtaccaac cgtcgaatct cccgccgctg gaaaggaatc agcaggatcc gatgattccg 1260

tgaaggagaa agcagatttc tcaattgaga agaaatcgga cgcatccaat gattctggaa 1320

gtgagaatca ggatgaagct aaggtggaaa gcgagattga tggaaacgat gatgctatgg 1380

ccaagaaaag aagaaggtat atctaatttt gtctcttttt aaagtaattg aaatttaggg 1440

tttgtgcata tttgggaaaa gaacatggtc tgtaatttgt aaaaggcgtt atgctttaaa 1500

aacaaccttg agagcattat cttgaagtag tttagcaggt gtgtgatttt gaaattttat 1560

attgagaaca atatggattt gtattttggt tgccttttag attgttgaaa gtgtgttatg 1620

ctatatctca ttggttatgt tgtttaaaca tacttcaaac caacttttac tcttgtaatt 1680

tgttactggt atcttgttga agtggtttga agagttgata atgggtgatt gtgattgatt 1740

tgttcaggag agtaagaaac agagatgctg cggtaagatc gagggagagg aagaaggaat 1800

atgtgactga tctagagaag aagagtaagt atctcgaaag agaatgcatg agactgggac 1860

ggatgctcga gtgtttcgtt gcggaaaacc attctcttcg tctctgtttg caaaagggta 1920

gtggcaatgc ttccatgatg acaaagcagg agtctgctgt gctcttgttg gaatccctgc 1980

tgttgggttc cctgctttgg tatctgggag acatcatttg ccaattccct caccagcccc 2040

aaacaaagag ttgcttccag tcagtggaag ccggagaacc agaaaagctg gttcgaagcg 2100

ggcgagagag tagtaaaata tctaataata ataccgggaa gagtcggaga tgtaagggtt 2160

caaggccgcg gatgaaacac caagtcttta cacttgtggc gtga 2204

<210> 3

<211> 945

<212> DNA

<213> 盐芥(Eutrema Salsugineum)

<400> 3

atggcggagg aatttggttg ctttgatata cttttagacg acgatctctt cttcgatttc 60

gatccttcaa tcgtaactga acctcctatt gcggatgatt ttattcgctc ttcaccggat 120

tctgcgaatt cgtggatcgg agagattgag agccaattga tgaatgatga gcaggagaat 180

tttctggagt tagatcagca gtcggtttca gagtttttag cggatatatt cgttgattat 240

cccacaagcg agtctagtcc ggttgagttt tcgaccgcta aagtttcaga tgatgtacca 300

accgtcgaat ctcccgccgc tggaaaggaa tcagcaggat ccgatgattc cgtgaaggag 360

aaagcagatt tctcaattga gaagaaatcg gacgcatcca atgattctgg aagtgagaat 420

caggatgaag ctaaggtgga aagcgagatt gatggaaacg atgatgctat ggccaagaaa 480

agaagaagga gagtaagaaa cagagatgct gcggtaagat cgagggagag gaagaaggaa 540

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Claims

1.一种提高植物的抗氧化能力和耐盐性的方法，其特征在于，所述方法包括在植物中表达盐芥转录因子EsbZip60编码基因的步骤，其中所述盐芥转录因子EsbZip60的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，所述植物为盐芥或烟草。