CN108477376A - 一种富硒富锌蛋白肽的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种富硒富锌蛋白肽的制备方法，包括，将筛选后的小麦置于双元素溶液中温水浸泡进行催芽，萌芽后培育，双元素溶液为Na2SeO3和ZnSO4混合溶液；收获麦芽置于温水中杀青后，进行组织匀浆、破壁，加纤维酶水解和碱性蛋白酶水解后，灭酶活，调节pH至中性，制得麦芽提取液；将所述麦芽提取液离心去除杂质，后浓缩、喷雾干燥，得到富硒富锌蛋白肽。本发明利用小麦芽具有聚集二元素的特征，小麦芽将有毒的无机硒和锌转化成无毒的有机硒和锌，提高有机硒和锌的含量，该麦芽经打浆、匀浆、破壁、双酶水解、离心、去杂、浓缩、干燥得富硒富锌蛋白肽，创新性开辟了获取植物营养成分的新方法、新工艺。
Description
技术领域
本发明涉及制品加工技术领域，尤其涉及一种富硒富锌蛋白肽的制备方法。
背景技术
我国有十分丰富的植物蛋白资源，利用优质的植物蛋白原料生产制备系列生理活性功效显著的活性肽类，是我国植物蛋白精深加工高附加值利用的一个极具潜力方向。肽是蛋白质的水解产物，即蛋白质的结构片段。两个氨基酸通过肽键连接成二肽，三个氨基酸通过肽键连接成三肽，而多个氨基酸通过肽键连接成多肽。一般把2-10个氨基酸残基组成的肽，称之为寡肽。因为肽的分子相对蛋白质的分子小得多，但生物活性非常高，少量的肽就能发挥重要的作用，所以被称为活性肽。现代科学研究证明，小肽可被完整有效地吸收，从而降低进入大肠的未消化的蛋白质量，减少大肠后段氨气和有毒胺类的产生，对消化道起积极的保护作用，维持消化道正常的免疫功能，它比蛋白质或游离氨基酸消化更快、吸收更多，生物效价和营养价值更高。近年来，许多具有不同生物功能的活性肽产品被开发、研制出来，
但是现有技术中的蛋白肽的生产工艺中，提取效率低，工艺复杂，且制的的蛋白肽中硒和锌含量少。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术之缺陷，提供了一种富硒富锌蛋白肽的制备方法，利用小麦芽具有聚集二元素的特征，小麦芽将有毒的无机硒和无机锌转化成无毒的有机硒和有机锌，经纤维素酶和碱性蛋白酶的双酶水解、提取分离获得富硒富锌蛋白肽，最后提取所得的蛋白肽含量高，可作为广谱的食品添加剂。
本发明是这样实现的：
本发明提供一种富硒富锌蛋白肽的制备方法，包括如下步骤：
步骤1、获取富硒富锌麦芽：将小麦进行筛选去除残次，置于双元素溶液中18-24度温水浸泡10-15个小时进行催芽，其中，所述双元素溶液为Na2SeO3和ZnSO4混合溶液，所述Na2SeO3的浓度为50-300ppm，所述ZnSO4的浓度为500-3000ppm；当麦种萌芽后，装在培育盘，在光照培养箱中培育，视干湿情况喷洒二元素溶液保持湿度；
步骤2、制备麦芽提取液：待麦芽高度长至4-5cm时收获麦芽，剪短置于70-75℃温水中杀青后，进行组织匀浆、破壁，加纤维酶水解，再加碱性蛋白酶，在55℃-60℃温度中进行双酶水解5-8小时后，加温至80-85℃灭酶的活性，冷却至常温，调节pH至中性，制得麦芽提取液；
步骤3、富硒富锌蛋白肽的提取分离：将所述麦芽提取液离心后,滤液用有机溶剂甲醇或乙醇除去杂质，放置过夜，次日虹吸、离心得上清液，将上清液浓缩后进行喷雾干燥，得到富硒富锌蛋白肽。
本发明具有以下有益效果：
1、本发明提供的一种富硒富锌蛋白肽的制备方法，利用小麦芽具有聚集二元素的特征，小麦芽将有毒的无机硒和无机锌转化成无毒的有机硒和有机锌，从而提高有机硒和有机锌的含量，硒和锌有协同作用，硒可加强锌的生理功能，锌也能增强硒的生理功能，提高人体对有机硒的吸收效率和增强有机硒的保健作用，而且大大减少无机硒的残存含量。
2、本发明提供的一种富硒富锌蛋白肽的制备方法，该麦芽经打浆、组织匀浆机匀浆、破壁、双酶水解、离心、去杂、浓缩、干燥得富硒富锌蛋白肽，创新性开辟了获取植物营养成分的新方法、新工艺。小麦作为富集硒富集锌的材料，扩展了小麦的新用途，满足了全民补硒补锌工程的需求，社会效益和经济效益明显。
附图说明
图1为本发明实施例提供的一种富硒富锌蛋白肽的制备方法的工艺流程图。
具体实施方式
实施例1 富硒富锌蛋白肽的制备
1、准备实验材料
A.用当地种植的楚麦0805作为主要实验材料；
B.外源蛋白酶：纤维素酶，酸性蛋白酶(20万U/g),中性蛋白酶(20万U/g)，碱性蛋白酶(20万U/g)购于偌维信(中国)生物技术有限公司。
2、实验方法
(1)富硒富锌麦芽的培育：用含Na2SeO3为200ppm和ZnSO4为2000ppm的二元素培养液，置于光照培养箱中，温度控制在18℃，保持适当湿度，培养5天。其中，ppm浓度(partspermillion)是用溶质质量占全部溶液质量的百万分比来表示的浓度，也称百万分比浓度。经常用于浓度非常小的场合下。
(2)匀浆破壁：将培育的富硒富锌麦芽洗净、沥干，用打浆机制成浆液，用匀浆机匀浆破壁得匀浆液。
(3)双酶水解：匀浆液平衡30min后调pH4.5-5.5，加纤维素酶，温度保持在45-50℃，水解3小时，再调pH9.0-9.5，加碱性蛋白酶水解6小时后，加温80-85℃灭酶的活性，冷却至40℃，调pH至中性，制得麦芽提取液；
(4)抽提麦芽富硒富锌蛋白肽：将麦芽提取液用4000r/min离心30min,滤液加入有机溶剂甲醇或乙醇除去杂多糖、杂蛋白，放置过夜，次日虹吸、离心得上清液。
(5)减压浓缩：上清液减压浓缩回收有机溶剂，所述的喷雾干燥的操作参数为，进口温度为160～170℃，出口温度为70～90℃。溶液浓缩至60％时，喷雾干燥得富硒富锌蛋白肽。
实施例2双元素溶液中Na2SeO3与ZnSO4的配比的探索
实验组1：用含Na2SeO3为100ppm和ZnSO4为500ppm的二元素培养液；
实验组2：用含Na2SeO3为100ppm和ZnSO4为1000ppm的二元素培养液；
实验组3：用含Na2SeO3为100ppm和ZnSO4为2000ppm的二元素培养液；
实验组4：用含Na2SeO3为100ppm和ZnSO4为3000ppm的二元素培养液；
分别培养4组小麦作对比实验，置于光照培养箱中，温度控制在18℃，保持适当湿度，培养5天，观察测定小麦相对发芽率与有机硒、锌的含量，如表1。由表可知，因此最佳配比为Na2SeO3浓度为100ppm，ZnSO4浓度1000ppm，发芽率达到了90.6，有机硒含量为6.4(ppm)，有机锌含量为12.4(ppm)。即Na2SeO3和ZnSO4的浓度比为1:10时最佳。
表1
实施例3双元素溶液中Na2SeO3与ZnSO4浓度的探索以及验证培育后的麦芽富含有机硒和有机锌
1、富硒富锌麦芽的培育：用含Na2SeO3为50ppm、100ppm、150ppm、200ppm、250ppm、300ppm和与之一一对应的ZnSO4500ppm、1000ppm、1500ppm、2000ppm、2500ppm、3000ppm配置成6种不同浓度的二元素培养液，分别作为实验组1-6，分别培养这6组小麦作对比实验，置于光照培养箱中，温度控制在18℃，保持适当湿度，培养5天，观察测定小麦相对发芽率与有机硒、锌的含量，如下表2。而Na2SeO3浓度大于200ppm和ZnSO4大于2000ppm时，对小麦抑制作用逐渐加强，小麦生理活性降低，有机硒有机锌的含量明显降低，因此Na2SeO3最佳浓度为200ppm，ZnSO4最佳浓度2000ppm，发芽率达到了96.8％，有机硒含量为58.5(ppm)，有机锌含量为63.1(ppm)。
表2
2、以只加Na2SeO3培养液，作为第一阴性对照，且Na2SeO3的浓度分别为50ppm、100ppm、150ppm、200ppm、250ppm、300ppm，分别作为对照组1-6，与上述富硒富锌麦芽的培育做相同的处理，观察测定小麦相对发芽率与有机硒、锌的含量，如表3。
表3
3、以只加ZnSO4培养液，作为第二阴性对照组，且ZnSO4的浓度分别为500ppm、1000ppm、1500ppm、2000ppm、2500ppm、3000ppm，分别作为对照组7-12。与上述富硒富锌麦芽的培育做相同的处理，观察测定小麦相对发芽率与有机硒、锌的含量，如表4。
表4
将表2、表3及表4进行对比可知，单独的浸泡在单元素溶液Na2SeO3或ZnSO4中，其效果远不如二元素溶液，硒和锌有协同作用，硒可加强锌的生理功能，锌也能增强硒的生理功能，提高人体对有机硒的吸收效率和增强有机硒的保健作用。且Na2SeO3最佳浓度为200ppm，ZnSO4最佳浓度2000ppm，发芽率达到了96.8％，有机硒含量为58.5(ppm)，有机锌含量为63.1(ppm)。
实施例4验证双酶水解的效率
对比组1:仅仅使用机械破壁,既不使用纤维素酶也不使用碱性蛋白酶，其他方法与实施例相同。
对比组2:使用机械破壁的基础上,使用纤维素酶，不使用碱性蛋白酶，其他方法与实施例相同。
对比组3:使用机械破壁的基础上,使用碱性蛋白酶，不使用纤维素酶，其他方法与实施例相同。
统计实施例1与对比组1-3的破壁收获率以及最后所得的富硒富锌蛋白肽的肽含量，如下表5。
表5
| 组别 | 纤维素酶 | 碱性蛋白酶 | 收获率(％) | 肽含量(％) |
| 对比组1 | — | — | 0.584 | 10.6 |
| 对比组2 | — | + | 1.083 | 15.1 |
| 对比组3 | + | — | 0.756 | 13.8 |
| 实施例1 | + | + | 2.452 | 70.2 |
上表5表明，在机械破壁基础上进一步用纤维素酶和碱性蛋白酶继续水解破壁，收获率达到了2.452％，水解度79.94％。双酶水解的收获率是单酶水解的2.2倍，是自身酶水解的4.2倍。
机械破壁、双酶水解的新方法、新工艺可广泛运用于蜂花粉、灵芝孢子粉等植物营养成分的抽提应用，深化、完善了农产品精加工的工艺流程。
实施例5不同温度对麦芽富硒富锌蛋白肽水解的作用
实施例1中步骤3中双酶水解的温度分别设为35度、40度、45度、50度、55度、60度，分别制备蛋白肽，其他步骤与实施例1相同，测量不同条件下的酶水解度。
表6
| 温度(℃) | 碱性蛋白酶水解度(％) | 纤维素酶水解度(％) |
| 35 | 8.88 | 6.96 |
| 40 | 9.98 | 7.52 |
| 45 | 11.62 | 10.78 |
| 50 | 31.49 | 19.08 |
| 55 | 59.90 | 15.43 |
| 60 | 53.04 | 13.86 |
由上表6可知，随温度的上升，水解度先上升，在缓慢下降。酶耐热性较好，在55℃时，碱性蛋白酶水解度最高为59.90℃,55℃则是碱蛋白酶最适温度；在50℃时，纤维素酶水解度最高为19.08℃,50℃是纤维素酶最适温度。
实施例6酶解时间对麦芽富硒富锌蛋白肽的水解作用
实施例1中步骤3中双酶水解的时间分别设为2小时、3小时、4小时、5小时、6小时，分别制备蛋白肽，其他步骤与实施例1相同，并测量不同条件下的酶水解度。
表7
| 酶解时间 | 碱性蛋白酶水解度(％) | 纤维素酶水解度(％) |
| 2 | 8.83 | 5.33 |
| 3 | 23.41 | 10.67 |
| 4 | 30.42 | 18.35 |
| 5 | 40.30 | 15.15 |
| 6 | 59.06 | 14.92 |
由上表7可知，随着酶解时间延长水解度不断升高，但不同时间反应趋势不同。在4小时内酸性蛋白酶水解速率最高；6小时内碱性蛋白酶水解速率最高。
实验例7：是否减少无机硒残存的验证试验
取等量所述实施例3中的实验组1-6以及对照组1-6得到的麦芽粉，分别充分溶于10mL水中，静置1天后，分别取用上清液2mL进行检测无机硒，检测后得到的实验数据如表8及表9。
表8
表9
将表8与表9进行对比可知，与对照组相比，本发明的实施例确实能进一步提高有机硒的含量及减少无机硒残存；且实验组4中无机硒的残存含量最低。因此，Na2SeO3最佳浓度为200ppm，ZnSO4最佳浓度2000ppm。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (9)
1.一种富硒富锌蛋白肽的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤1、获取富硒富锌麦芽：将小麦进行筛选去除残次，置于双元素溶液中18-24度温水浸泡10-15个小时进行催芽，其中，所述双元素溶液为Na2SeO3和ZnSO4混合溶液，所述Na2SeO3的浓度为50-300ppm，所述ZnSO4的浓度为500-3000ppm；当麦种萌芽后，装在培育盘，在光照培养箱中培育，视干湿情况喷洒二元素溶液保持湿度；
步骤2、制备麦芽提取液：待麦芽高度长至4-5cm时收获麦芽，剪短置于70-75℃温水中杀青后，进行组织匀浆、破壁，加纤维酶水解，再加碱性蛋白酶，在55℃-60℃温度中进行双酶水解5-8小时后，加温至80-85℃灭酶的活性，冷却至常温，调节pH至中性，制得麦芽提取液；
步骤3、富硒富锌蛋白肽的提取分离：将所述麦芽提取液离心后,滤液用有机溶剂甲醇或乙醇除去杂质，放置过夜，次日虹吸、离心得上清液，将上清液浓缩后进行喷雾干燥，得到富硒富锌蛋白肽。
2.如权利要求1所述的富硒富锌蛋白肽的制备方法，其特征在于，所述Na2SeO3和ZnSO4的浓度比为1:10。
3.如权利要求1所述的富硒富锌蛋白肽的制备方法，其特征在于，所述步骤1中，在光照培养箱中进行培育时，温度为18-30℃，湿度为60-80％，时间为3-8天。
4.如权利要求1所述的富硒富锌蛋白肽的制备方法，其特征在于，所述步骤1中，视干湿情况喷洒二元素溶液保持湿度的具体方法是，每经过6-8小时后用所述二元素溶液喷施一次，直到麦芽长至4-5cm。
5.如权利要求1所述的富硒富锌蛋白肽的制备方法，其特征在于，所述步骤2中，匀浆破壁的具体方式为，将培育的富硒富锌麦芽洗净、沥干，用打浆机制成浆液，用匀浆机匀浆破壁得匀浆液。
6.如权利要求1所述的富硒富锌蛋白肽的制备方法，其特征在于，所述步骤2中，双酶水解的具体方式为，将匀浆液平衡30min后调pH为4.5-5.5，加纤维素酶，温度保持在45-50℃，水解3小时，再调pH为9.0-9.5，加碱性蛋白酶水解6小时后，加温至80-85℃灭酶的活性，冷却至40℃，调pH至中性，制得麦芽提取液。
7.如权利要求1所述的富硒富锌蛋白肽的制备方法，其特征在于，所述步骤3中，将所述麦芽提取液用4000r/min离心30min，滤液加入有机溶剂甲醇或乙醇除去杂多糖和杂蛋白。
8.如权利要求1所述的富硒富锌蛋白肽的制备方法，其特征在于，所述步骤3中，所述上清液采用减压浓缩，使用抽真空的方式降低水的沸腾温度使水蒸发干燥，当溶液浓缩至60％时停止浓缩，制得富硒富锌蛋白肽。
9.如权利要求1所述的富硒富锌蛋白肽的制备方法，其特征在于，所述步骤3中，所述喷雾干燥的操作参数：进口温度为160～170℃，出口温度为70～90℃。
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20180904 |
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