CN108464505A - 一种臭氧化油在食品、保健品和药物中的新用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及臭氧化油在食品、保健品和药物中的应用，通过所述的口服、腹腔注射、灌肠、灌胃、静脉注射、皮下注射、肌肉注射、外敷和栓剂的方式给予能够有效地用于制备改善肠道菌群、促进消化、保护辐射损伤、辅助降血压、增加骨密度、保护化学性肝损伤、降血脂、促进泌乳、排铅、清咽、促进生长发育、改善视疲劳、通便和保护胃粘膜损伤的食品、保健品和药物。

Description

一种臭氧化油在食品、保健品和药物中的新用途
技术领域
本发明属于食品、保健品和医药技术领域，具体涉及臭氧化油用于制备改善肠道菌群、促进消化、保护辐射损伤、辅助降血压、增加骨密度、保护化学性肝损伤、降血脂、促进泌乳、排铅、清咽、促进生长发育、改善视疲劳、通便和保护胃粘膜损伤的食品、保健品和药物。
背景技术
Velio Bocci在《臭氧治疗学》一书中概述了使用低剂量的臭氧气体能够发挥许多有益功能，且无副作用，即臭氧疗法(见Velio Bocci撰写的《Oxygen-Ozone Therapy》，北京大学医学出版社，2004)。臭氧疗法可以通过多种给药途径来实现，并针对不同疾病产生不同的功效。臭氧化油外用作为抗菌剂、除臭剂用于褥疮和溃疡等皮肤病的治疗药物。因此，现已知臭氧具有氧化和抗菌作用。将臭氧化油直接灌胃用于幽门螺旋杆菌引起的胃炎的治疗。肌肉或皮下注射臭氧气体来治疗慢性病毒肝炎和血管性疾病。阴道直接通入臭氧气体能够治愈炎症和细菌感染。将臭氧气体直接与一定体积的血液在体外混合，再回输给患者被称为自体血疗法，能够调理人体内环境，降低机体的敏感性和增强机体免疫力。直肠直接吹臭氧气体能够改善帕金森病的症状(见Lamberto Re,Mohamed N.Mawsouf,SilviaMenendez,Olga S. Leon,Gregorio M.Sanchez,and Frank Hernandez撰写的《OzoneTherapy:Clinical and Basic Evidence of Its Therapeutic Potential》，Archives ofMedical Research，2008,39:17-26)。腹腔给臭氧气体能够保护心脏免受急性心肌梗塞的损伤(Clara Di Filippo,Margherita Luongo, Raffaele Marfella,FrancaFerraraccio,Biagio Lettieri,Annalisa Capuano,Francesco Rossi,Michele D'Amico撰写的《Oxygen/ozone protects the heart from acute myocardial infarctionthrough local increase of eNOS activity and endothelial progenitor cellsrecruitment》，Naunyn-Schmied Arch Pharmacol，2010,382:287–291)。从结构上看，尽管臭氧化油和臭氧气体(:O-O-O)并不是同一物质，但臭氧化油是通过对油的加成臭氧得到，故在其分子中具有臭氧化物结构，与臭氧气体的功能相似。以上各种给药途径均表明臭氧能够以气体的方式直接被机体吸收并发挥功能。臭氧气体的功能可能通过以下三个途径来实现：(1)、臭氧在体内通过生物化学反应，生成类似活性氧的物质(羟基自由基OH-、超氧阴离子O2 -等)，广泛影响着机体氧化还原系统；(2)、臭氧能够引起内皮祖细胞聚集和促进一氧化氮(NO)的生成，起到舒张血管的作用；(3)、臭氧能够诱导骨髓干细胞到血管损伤部位，促进损伤血管修复重建，但具体机制尚不明确。
上述给药途径存在诸多缺陷：沿途与太多物质接触，难以保证气体进入机体的有效浓度。若给予过量极易诱发机体产生不适反应，且操作过程繁琐，再加上疗程较长，患者难以接受。尤其是自体血疗法，每周2～3次，连续10周为一疗程。本发明以油与臭氧加成的方式，得到臭氧化油，再将此油以肠溶胶囊包裹，能够克服直接使用臭氧气体的诸多缺点。既保证臭氧化油不与外界任何物质接触，在常态下亦可长期稳定保存；还能定量控制臭氧化油进入机体，从而避免通过其它给药方式给药，人为造成药量不当。臭氧化油肠溶胶囊的给药途径为直接口服，对机体伤害最小，操作简单易行，方便携带，为其推广奠定了良好的基础。
在臭氧化油产品中，臭氧化橄榄油、葵花油、大豆油作为抗菌剂、除臭剂用于溃疡等皮肤病的治疗的外用药品已经上市。但将臭氧化油制成肠溶胶囊的形式通过直接口服的方式进入机体而产生功效，目前尚无报道。在本发明中，通过直接口服臭氧化油肠溶胶囊，腹腔注射、灌肠、灌胃、静脉注射、皮下注射、肌肉注射、外敷和栓剂的方式，能够生产食品、保健品和药物。
发明内容
本发明的目的是利用臭氧化油制剂和给药途径来用于制备改善肠道菌群、促进消化、保护辐射损伤、辅助降血压、增加骨密度、保护化学性肝损伤、降血脂、促进泌乳、排铅、清咽、促进生长发育、改善视疲劳、通便和保护胃粘膜损伤的保健品和药物，制备简便、成本低廉。经临床应用验证，本发明具有疗效显著，无毒副作用，有效率高等优点。
在本发明中，之所以选择权利要求1、2所述的各种油中的一种、两种和两种以上，是因为这些油不饱和脂肪酸含量较高，其中核桃油的不饱和脂肪酸高达92％以上，在不饱和脂肪酸结构中至少有一个烯烃类双键。若将权利要求1、2中的一种、两种和两种以上含不饱和脂肪酸高的油与权利要求3～7中的一种、两种和两种以上的表面活性剂混合，亦能与臭氧发生加成反应。可见只要加成物的结构中存在烯烃不饱和键即可与臭氧发生加成反应，不饱和键数目越多，反应越容易发生，且与臭氧加成的量越多，加成物能够携带臭氧分子的数目也越多。
为达到上述目的，本发明采用的技术方案将结合下面的制作流程和实施方式进行简单的说明。
1、制备臭氧气体。
2、制备臭氧化油。
3、制备臭氧化橄榄油肠溶胶囊。
4、制备含表面活性剂的臭氧化油。
5、制备含表面活性剂的臭氧化油肠溶胶囊。
6、臭氧化橄榄油对改善肠道菌群的功能实验。
7、臭氧化橄榄油促进消化的功能实验。
8、臭氧化橄榄油保护辐射损伤的功能实验。
9、臭氧化橄榄油辅助降血压的功能实验。
10、臭氧化橄榄油增加骨密度的功能实验。
11、臭氧化橄榄油保护化学性肝损伤的功能实验。
12、臭氧化橄榄油降血脂的功能实验。
13、臭氧化橄榄油促进泌乳的功能实验。
14、臭氧化橄榄油排铅的功能实验。
15、臭氧化橄榄油清咽的功能实验。
16、臭氧化橄榄油促进生长发育的功能实验。
17、臭氧化橄榄油改善视疲劳的功能实验。
18、臭氧化橄榄油通便的功能实验。
19、臭氧化橄榄油保护胃粘膜损伤的功能实验。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明的具体实施方式作详细说明。
实施例1臭氧化橄榄油制备
1、制备臭氧气体。本发明采用医用氧气通过臭氧发生器来制备臭氧气体。
选自西安德润生物技术有限责任公司设计生产的DRO3-A型臭氧机(功率≦55W)。
2、制备臭氧化油和臭氧化油肠溶胶囊整个过程须要在20～25℃进行，确保臭氧化油不会发生热解反应。
3、橄榄油3kg置入反应釜中；臭氧以150m3/h流速加入，总反应时间为20小时。反应结束后，余气灭活。
4、得到臭氧化橄榄油浓度为40mg/L，25℃可稳定保存十个月。
实施例2臭氧化橄榄油肠溶胶囊制备
制备臭氧化橄榄油肠溶胶囊。
(1)、囊材的制备:按重量比3：3：1：1的比例称取水、明胶、甘油和糯米粉或淀粉倒入胶罐中，溶胶时温度先设置成75℃，在温度到达60℃的时候开始加水，加水10分钟，用手触有微烫的感觉，开始加入甘油，搅拌2分钟，从胶罐底部取2次，倒回胶罐中，迅速加明胶，搅拌时间为2小时，搅拌后温度设定为60℃，静置脱气泡8小时。
(2)、采用压制法制备臭氧化橄榄油肠溶胶囊，容量0.25mL。
室温22℃制胶囊，胶皮厚度为0.7mm，容量为0.25mL，制得的软胶囊在转笼里冷却8小时，出笼，干燥即得臭氧化橄榄油肠溶胶囊，于4℃避光冷藏备用。
实施例3臭氧化橄榄油、大豆油和花生油混合油的肠溶胶囊制备
1、制备臭氧气体。本发明采用医用氧气通过臭氧发生器来制备臭氧气体。
选自西安德润生物技术有限责任公司设计生产的DRO3-A型臭氧机(功率≦55W)。
2、制备臭氧化油和臭氧化油肠溶胶囊整个过程须要在20～25℃进行，确保臭氧化油不会发生热解反应。
3、橄榄油1kg，大豆油1kg和花生油1kg置入反应釜中；臭氧以150m3/h流速加入，总反应时间为20小时。反应结束后，余气灭活。
4、得到臭氧化混合油浓度为40mg/L，25℃可稳定保存十个月。
5、制备臭氧化混合油肠溶胶囊。
(1)、囊材的制备:按重量比3：3：1：1的比例称取水、明胶、甘油和糯米粉或淀粉倒入胶罐中，溶胶时温度先设置成75℃，在温度到达60℃的时候开始加水，加水10分钟，用手触有微烫的感觉，开始加入甘油，搅拌2分钟，从胶罐底部取2次，倒回胶罐中，迅速加明胶，搅拌时间为2小时，搅拌后温度设定为60℃，静置脱气泡8小时。
(2)、采用压制法制备臭氧化混合油肠溶胶囊，容量0.25mL。
室温22℃制胶囊，胶皮厚度为0.7mm，容量为0.25mL，制得的软胶囊在转笼里冷却8小时，出笼，干燥即得臭氧化混合油肠溶胶囊，于4℃避光冷藏备用。
实施例4含表面活性剂的臭氧化橄榄油肠溶胶囊制备
1、制备臭氧气体。本发明采用医用氧气通过臭氧发生器来制备臭氧气体。
选自西安德润生物技术有限责任公司设计生产的DRO3-A型臭氧机(功率≦55W)。
2、制备臭氧化油和臭氧化油肠溶胶囊整个过程须要在20～25℃进行，确保臭氧化油不会发生热解反应。
3、橄榄油3kg置入反应釜中，缓慢加入失水山梨醇单油酸酯聚氧乙烯醚(吐温80)20mL，混匀，臭氧以150m3/h流速加入，总反应时间为20小时。反应结束后，余气灭活。
4、得到臭氧化橄榄油浓度为40mg/L，25℃可稳定保存十个月。
5、制备含表面活性剂的臭氧化橄榄油肠溶胶囊。
(1)囊材的制备：按重量比3：3：1：1的比例称取水、明胶、甘油和糯米粉或淀粉倒入胶罐中，溶胶时温度先设置成75℃，在温度到达60℃的时候开始加水，加水10分钟，用手触有微烫的感觉，开始加入甘油，搅拌2分钟，从胶罐底部取2次，倒回胶罐中，迅速加明胶，搅拌时间为2小时，搅拌后温度设定为60℃，静置脱气泡8小时。
(2)、采用压制法制备臭氧化橄榄油肠溶胶囊，容量0.25mL。
室温22℃制胶囊，胶皮厚度为0.7mm，容量为0.25mL，制得的软胶囊在转笼里冷却8小时，出笼，干燥即得含表面活性剂的臭氧化橄榄油肠溶胶囊，于4℃避光冷藏备用。
实施例5含表面活性剂和助表面活性剂的臭氧化橄榄油肠溶胶囊制备
1、制备臭氧气体。本发明采用医用氧气通过臭氧发生器来制备臭氧气体。
选自西安德润生物技术有限责任公司设计生产的DRO3-A型臭氧机(功率≦55W)。
2、制备臭氧化油和臭氧化油肠溶胶囊整个过程须要在20～25℃进行，确保臭氧化油不会发生热解反应。
3、橄榄油3kg置入反应釜中，缓慢加入失水山梨醇单油酸酯聚氧乙烯醚(吐温80)20mL和纯乙醇20mL，混匀，臭氧以150m3/h流速加入，总反应时间为20小时。反应结束后，余气灭活。
4、得到臭氧化橄榄油浓度为40mg/L，25℃可稳定保存十个月。
5、制备含表面活性剂和助表面活性剂的臭氧化橄榄油肠溶胶囊。
(1)、囊材的制备:按重量比3：3：1：1的比例称取水、明胶、甘油和糯米粉或淀粉倒入胶罐中，溶胶时温度先设置成75℃，在温度到达60℃的时候开始加水，加水10分钟，用手触有微烫的感觉，开始加入甘油，搅拌2分钟，从胶罐底部取2次，倒回胶罐中，迅速加明胶，搅拌时间为2小时，搅拌后温度设定为60℃，静置脱气泡8小时。
(2)、采用压制法制备臭氧化橄榄油肠溶胶囊，容量0.25mL。
室温22℃制胶囊，胶皮厚度为0.7mm，容量为0.25mL，制得的软胶囊在转笼里冷却8小时，出笼，干燥即得含表面活性剂和助表面活性剂的臭氧化橄榄油肠溶胶囊，于4℃避光冷藏备用。
实施例6臭氧化橄榄油胶囊在制备治疗或预防由肠道菌群紊乱导致的疾病的药物、保健品及食品中的用途
1、受试人群和实验方法
受试人群选择近半个月内未患过胃肠疾病，未服用抗生素、年龄30-55岁的志愿者100名。将志愿者随机分成实验组和对照组，每组50人，男女各半。实验组服用实施例2所制得臭氧化橄榄油胶囊，对照组为正常饮食。实验组服用方法均为每日1次，早晨空腹1粒胶囊，连续服用30天。由专人负责发样品并监督服用，试验期间不改变原来的饮食习惯，正常饮食。实验验组以及各对照组在实验前以及实验验组连续服用受试物30天后，分别无菌采集粪便进行10倍系列稀释，选择合适的稀释度，分别接种在各种培养基上，按要求进行培养，然后对培养物进行菌落(肠杆菌科细菌(肠杆菌)、肠球菌、双歧杆菌、乳杆菌、拟杆菌及产气夹膜杆菌)计数。
2、实验结果与分析
表1臭氧化橄榄油胶囊对人体肠道菌群的影响(cfu/g)
注：#表示p<0.05，试吃前后比较。
由表1可知，与对照组相比，实验组人群在食用实施例2所制得的具调节肠道菌群功能的臭氧化橄榄油胶囊后，双歧杆菌和乳杆菌的数量显著增加，肠杆菌、肠球菌、拟杆菌和产气荚膜梭菌数量均有所降低。人体试验结果表明：本发明的臭氧化橄榄油胶囊具有调节肠道菌群平衡的作用。
实施例7臭氧化橄榄油胶囊促进消化功能试验
1、受试者纳入标准；选择功能性消化不良，伴有长期胃肠不适，主诉食欲不振，早饱、气多，胃肠胀满等25至60岁的自愿受试者。
受试者排除标准：未按要求服用受试样品，无法判断试食结果者。
2、试验方法：采用自身和组间两种对照设计。按受试者的消化症状轻重随机分为试食组和对照组，每组受试者有效例数不少于50例。
受试样品的剂量和使用方法：每次空腹服用1粒，每日1次，于早餐前服用30天，阴性对照组同时服用安慰剂(橄榄油)。试验期间不改变受试者原来的饮食习惯，正常饮食。共有100人参加试验，其中样品试食组50人，年龄28-58岁(平均年龄42.0)，阴性对照组 50人，年龄25-60岁(平均年龄44.1)
3、临床症状结果判定:以食欲差、腹痛、腹胀、嗳气、泛酸、烧心、失眠疲乏等症状按照轻(1分)、中(2分)、重(3分)分级；如果试食后自身总分值比试食前有降低，而且与安慰剂对照组比也有降低，组间的计数资料用F检验，以P<0.05判断差异有统计学意义；判定样品对人体具有促进消化功能的作用。
4、结果
结论：经观察，服用本发明2周后可改善消化功能状况。本发明臭氧化橄榄油胶囊在30天后能够显著改善消化功能。
实施例8臭氧化橄榄油对辐射损伤的防护效果
1.1实验动物：SPF级昆明小鼠，雄性，每组10只，共5组。
1.2剂量及分组:
实验设辐射模型对照组，有机硒对照组(剂量为15μg/kg)，本发明实施例1制得的臭氧化橄榄油低中高3个剂量组0.025、0.05、0.075ml/10g体重。
1.3实验步骤:
于照射前14天开始灌胃给予受试样品，每日一次，空腹灌喂，照射后继续给予受试物。各给药组及对照组均以60C0r剂量为7.5Gy照射剂量Y射线全身照射一次。照射后观察动物死亡情况，记录死亡时间，直至照射后30天。
1.4数据处理:
统计各组的存活率及平均存活时间，得出药物剂量对辐射的防护效果。
1.5实验结果:
由表1可见，随着给药剂量的增大，存活动物数及保护指数均有增大，且臭氧化橄榄油给药效果要优于单纯给予硒。保护指数最高的1个组为最高臭氧化橄榄油剂量0.075ml/10g体重。上述剂量的筛选是以《保健食品功能学评价程序和检验方法规范》(卫生部2003.2)中规定应以人体推荐量的10倍为一个剂量组。
表1臭氧化橄榄油对辐射的防护结果
受试物对Y射线照射小鼠造血系统的保护作用
2.1仪器和试剂:血球计数板、显微镜、注射器、手术器械、Hank's液等。
2.2实验动物:SPF级昆明小鼠，雄性，每组10只。
2.3剂量分组及受试样品给予时间
实验设2个给药组和一个辐射模型对照组及阴性对照组，给药组分别为有机硒组和本发明实施例1制得的臭氧化橄榄油组，对照组灌胃给予橄榄油。受试样品于照射前30天给予，照射后仍然给予受试物。
2.4实验步骤
受试样品组于照射前后经口连续给予受试样品，给药组与辐射模型对照组均以同一剂量Y 射线全身照射一次，照射剂量为4Gy，阴性对照组不照射。于照射后第3天，颈椎脱臼杀死小白鼠，剥离出股骨，用1mL注射器(6.5号针头)吸取一定体积的白细胞稀释液，冲出股骨中的全部骨髓细胞；最后，让细胞悬液通过4号针头的注射器，使细胞在悬液中充分分散。镜下计数每ml骨髓细胞悬液中的有核细胞数。
取胸骨或股骨，用止血钳挤出骨髓液与玻片一端的小牛血清混匀，常规涂片。或用小牛血清冲洗股骨骨髓腔制成细胞悬液涂片，涂片自然干燥后，放入甲醇中固定5-10min，放入Giemsa应用液中，染色10-15min，立即用磷酸盐缓冲液或蒸馏水冲洗，晾干。镜检，每只动物计数1000个嗜多染红细胞中微核细胞数，微核率以千分率表示。
2.5实验结果
表1骨髓有核细胞数及骨髓细胞微核实验结果(X±S)
注:与辐射对照组比较，*p<0.05,**p<0.01
照射后3天，辐射对照组动物骨髓有核细胞数及较阴性对照组显著降低(P<0.01)，辐射对照组动物骨髓细胞微核率较阴性对照组显著升高(P<0.01)，判定辐射损伤模型成立。有机硒组与辐射对照组比较，骨髓有核细胞数均无显著性差异(P>0.05)，骨髓细胞微核率较阴性对照组显著升高(P<0.01)；而臭氧化橄榄油组骨髓有核细胞数较辐射对照组升高(P＝0.027)，动物骨髓细胞微核率较辐射对照组显著降低(P＝0.037)，提示臭氧化橄榄油具有对辐射损伤的显著保护作用。
受试物对Y射线照射小鼠抗氧化系统的保护作用
3.1仪器与试剂：721分光光度计、离心机、恒温水浴、匀浆器、超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)检测试剂盒。
3.2实验动物：SPF级昆明小鼠，雄性，每组10只。
3.3实验设计
实验设1个给药组、有机硒组和一个辐射模型对照组及一个阴性对照组，给药组为本发明实施例1制得的臭氧化橄榄油组(0.075ml/10g体重)，有机硒组，对照组灌胃给予橄榄油。受试样品于照射前给予30天，照射后仍然给予受试物。
3.4实验步骤
受试样品组于照射前后经口空腹给予受试样品，一天一次。受试组与辐射模型对照组均以同一剂量Y射线全身照射一次，照射剂量为6Gy，阴性对照组不照射。于照射后第7天，解剖动物取血及肝脏，血/组织经处理后取样，用超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)检测试剂盒检测血/组织中SOD活性，GSH-PX活性。
3.5实验结果
照射后第7天，辐射对照组动物血清超氧化物歧化酶(SOD)及肝匀浆谷胱甘肽过氧化物酶 (GPx)活性较阴性对照组显著降低(P＝0.025,P＝0.036)，因此判定辐射损伤模型成立。与辐射对照组比较，有机硒组血清SOD和肝匀浆GPX活性都无统计学差异(P>0.05)。臭氧化橄榄油组血清SOD和肝匀浆GPX活性显著高于较辐射对照组(P＝0.04)，提示臭氧化橄榄油具有对辐射损伤的显著保护作用。结果见表3。
表3抗氧化指标(SOD,GPX)实验结果(x±S)
注:与辐射对照组比较，*p<0.05,**p<0.01。
实施例9臭氧化橄榄油胶囊辅助降血压功能人体试食
1材料和方法
1.1样品:受试样品：实施例2制备的臭氧化橄榄油胶囊。
1.2受试对象纳入标准
原发性高血压患者，无论服用降压药物与否，收缩压≥140mmHg，舒张压≥90mmHg，满足两者任一项即可纳入。
1.3排除者标准
年龄在18岁以下或75岁以上、妊娠或哺乳妇女、对受试样品过敏者。合并有肝、肾和造血系统等严重全身性疾病患者。短期内服用与受试功能有关的物品，影响到对结果的判断着。未按照规定服用受试样品，无法判断功效或因资料不全等影响功效判断者。
1.4试验设计及分组要求
采用自身和组间两种对照设计。按受试者的血压水平随机分为试食组和对照组，尽可能考虑影响结果的主要因素如病程、病情、服药种类、年龄、性别等，进行均衡性检验，以保证组间的可比性。每组受试者不少于50例。
1.5受试样品的剂量和使用方法
受试者在实施观察期间不改变原有抗高血压药物治疗方案，采用β受体阻滞剂，钙通道阻滞剂，血管紧张素转化酶抑制剂，抗高血压的复方制剂，联合用药。试食组每天服用本发明实施例4臭氧化橄榄油胶囊1粒，连续服用90天，空腹服用，对照组采用空白对照。
2观察指标
各项指标于试验开始及结束时各测定一次，其中血压每周测量一次。
2.1安全性指标
2.1.1一般状况包括精神、睡眠、饮食、大小便等
2.1.2血、尿、便常规检查
2.1.3肝、肾功能检查
2.1.4胸透、心电图、腹部B超检查(各项指标在实验前测定一次)
2.2功效性指标
2.2.1一般情况
详细学问病史，了解受试者饮食情况、活动量。观察主要症状:头痛、眩晕、心悸、耳鸣、失眠、烦躁、腰膝酸软等。
2.2.2血压、心率测量:每周定时定人测量血压、心率一次，测量前后受试者休息15-20 分钟。
3数据处理和结果判定
功效判定:
有效:达到以下任何一项者。
舒张压下降≥10mmHg或降至正常。
收缩压下降≥20mmHg或降至正常。
无效:未达到以上标准者。
按症状轻重(重症3分、中症2分、轻症1分)统计试食前后积分值和计算改善率(症状改善1分及1分以上为有效)。
血压测定数据为计量资料，可用t检验进行分析。凡自身对照资料可以采用配对t检验，两者均数比较采用成组t检验，后者需进行方差齐性检验，对非正态分布或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态方差齐后，用转换的数据进行t检验；若转换数据仍不能满足正态方差齐要求，改用t’检验或秩和检验；但变异系数太大(如CV>50)的资料应用秩和检验。在试验前组间比较差异无显著性的前提下，可进行试验后组间比较。
改善率为计数资料，用X2检验。四格表总例数小于40，或总例数等于或大于40但出现理论数等于或小于1时，应改用确切率法。
结果判定:
试食前后试食组自身比较，舒张压或收缩压测定值明显下降，差异有显著性，且舒张压下降≥10mmHg或收缩压≥20mmHg，试食后试食组与对照组组间比较，舒张压或收缩压测定值或其下降百分率差异有显著性，可判定该受试样品具有辅助降血压功能的作用。
4试验结果:
4.1一般状况:
共观察100例，试食组男性26例，女性24例，年龄最小47岁，年龄最大73岁，平均58.6岁；对照组男性22例，女性28例，年龄最小48岁，年龄最大75岁，平均年龄59.5岁；试食者试食前后精神、睡眠、饮食、大小便无明显变化，心率基本在正常范围。
两者观察前一般情况比较
表1一般情况比较(X±SD)
由表1可见，两组试食前后各项指标无明显差异，具有可比性。
4.2试食前后两组血压变化情况:
表2收缩压变化比较(mmHg,X±SD)
表3舒张压变化比较(mmHg,X±SD)
项目 试食前 试食后 差值 下降百分率(％)
试食组 93.47±8.67 81.1±6.24**# 12.37±6.48 13.23
对照组 94.58±6.74 93.5±8.56 1.08±4.86 1.14
自身对照**P<0.0l，#P<0.01组间对照。
4.3功效评定:
表4降压功效比较
分组 例数 有效 无效 总有效率(％)
试食组 50 45 5 90.00#
对照组 50 4 46 8.00
#P<0.01组间对照
由表4可见，试食组50例受试者中有效45例，总有效率达到90％，对照组50例受试者中有效4例，总有效率只达到8％，两组对比差异有显著性。
5结论：
100例高血压受试者，试食组按要求连续服用本发明臭氧化橄榄油胶囊90天，收缩压和舒张压下降，并恢复正常，说明本发明臭氧化橄榄油胶囊对高血压试食者有辅助降血压的作用。
本发明臭氧化橄榄油胶囊对高血压试食者眩晕、头痛、心悸、烦躁等症状有改善作用。两组试食者心电图，腹部B超，X光胸透在正常范围内。试食者血红蛋白、红细胞、白细胞、尿常规、便常规、血清总蛋白、白蛋白、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、肌酐、尿素等在正常范围，说明本发明产品对试食者健康无不良影响。根据卫生部颁布的《保健食品检验与评价技术规范》中的评定标准，认为本发明臭氧化橄榄油胶囊对高血压试食者有辅助降血压的作用。
实施例10臭氧化橄榄油胶囊增加骨密度动物实验
一、材料和方法
1.样品：本发明样品实施例2制得的臭氧化橄榄油胶囊，样品为胶囊剂，人体推荐剂量为每日1粒。
2.实验动物：选用4周左右的断乳Wistar雄性大鼠，体重65-90克。实验环境温度25±2℃，相对湿度60％±10。适应期一周后，禁食12小时，称体重，根据体重随机分为碳酸钙对照组、阴性对照组、本发明低、中、高剂量组，每组10只大鼠。
3.剂量设置与受试物给予方式：本发明按相当于人体推荐量的10倍、20倍、30倍确定大鼠的低、中、高剂量，即各组大鼠每日食用量分别为0.04ml/只，0.08ml/只，0.12ml/只，空腹一天一次。各组均喂低钙基础饲料，饮用去离子水。经口每日一次灌胃给予大鼠受试物，灌胃体积按10mL/kg.bw计；碳酸钙对照组的每日碳酸钙(其中钙含量为40)食用量确定为 275mg/kg.bw，灌胃碳酸钙溶液浓度为11mg/mL。连续给予3个月后测试增加骨密度功能的各项指标。
4.主要仪器与试剂:美国NORLAND公司产XR-600型双能X线骨密度测量仪、动物解剖器械、动物天平、105℃烘箱、碳酸钙标准溶液、氢氧化钾、EDTA溶液。
5.实验方法
体重测定：禁食12小时后，测定体重。每周测定动物体重一次。
骨钙含量测定：取大鼠右侧股骨在105℃烘箱中烘干至恒重，称量骨干重，然后粉碎、研磨、消化。用EDTA滴定法测定股骨样品中钙含量。
股骨骨密度测定:用美国NORLAND公司产XR-600型双能X线骨密度测量仪测量左侧股骨中点及股骨远心端的骨密度。
6.实验数据统计：采用SPSS11.0统计软件进行各实验组与对照组的单因素方差分析和组间比较。
二、结果
1.对大鼠体重的影响
表1实验大鼠的初始体重(X±S)
由表1可见，各组动物体重差异无统计学意义(P>0.05)。
表2实验大鼠的终末体重(X±S)
组别 动物数(只) 体重(g) P值
碳酸钙对照组 10 418.35±37.22 P>0.05
阴性对照组 10 416.47±36.14 P>0.05
低剂量组 10 417.94±37.68 P>0.05
中剂量组 10 420.52±41.24 P>0.05
高剂量组 10 419.15±38.51 P>0.05
由表2可见，与低钙对照组比较，各组动物体重差异无统计学意义(P>0.05)。
2.骨钙含量
表3各组动物股骨钙含量(X±S)
组别 动物数(只) 骨钙含量(mg/g)
碳酸钙对照组 10 235.44±7.57
阴性对照组 10 226.42±6.64
低剂量组 10 247.59±11.16*#
中剂量组 10 248.78±11.52*#
高剂量组 10 250.63±18.34*#
注*P<0.05，与阴性对照组比较，#P<0.05，与碳酸钙组比较
由表3可见，与碳酸钙组和阴性对照组相比，低剂量组、中剂量组、高剂量组股骨钙含量显著升高，并且差异有统计学意义(P<0.05)。说明各剂量组中本发明低剂量组、中剂量、高剂量组可以增加股骨钙含量。
3.股骨骨密度
表4各组动物股骨中点骨密度(X±S)
组别 动物数(只) 中点骨密度(g/cm2)
碳酸钙对照组 10 0.1087±0.0075
阴性对照组 10 0.1026±0.0066
低剂量组 10 0.1233±0.006*#
中剂量组 10 0.1248±0.0052*#
高剂量组 10 0.1250±0.0054*#
注*P<0.05，与阴性对照组比较，#P<0.05，与碳酸钙组比较
由表4可见，与碳酸钙组和阴性对照组相比，低剂量组、中剂量组、高剂量组股骨中点骨密度显著升高，并且差异均有统计学意义(P<0.05)。说明各剂量组中本发明低剂量组、中剂量、高剂量组可以增加股骨中点骨密度。
表5各组动物股骨远心端骨密度(X±S)
组别 动物数(只) 远心端骨密度(g/cm2)
碳酸钙对照组 10 0.1713±0.0175
阴性对照组 10 0.1625±0.0161
低剂量组 10 0.1834±0.0168*#
中剂量组 10 0.2278±0.0159*#
高剂量组 10 0.2271±0.0184*#
注*P<0.05，与阴性对照组比较，#P<0.05，与碳酸钙组比较
由表5可见，与碳酸钙组和阴性对照组相比，低剂量组、中剂量组、高剂量组股骨远心端骨密度显著升高，并且差异均有统计学意义(P<0.05)。说明各剂量组中本发明低剂量组、中剂量、高剂量组可以增加股骨远心端骨密度。
三、小结
本实验表明，经口给予大鼠不同剂量的本发明臭氧化橄榄油，低剂量组、中剂量组、高剂量均能升高大鼠的骨钙含量、股骨中点骨密度和股骨远心端骨密度，并且各项指标显著优于碳酸钙对照组。依据《保健食品检验与评价技术规范(2003年版)》判定标准认为，本发明具有显著的增加骨密度功能。
实施例11臭氧化橄榄油胶囊治疗化学性肝损伤实验
1.实验对象
化学性肝损伤诊断标准参照《中医诊断学》中的诊断标准实施。常见的症状多表现为疲乏、食欲不振、右季胁痛、恶心、腹胀等肝功能障碍症状；还可有超重/内脏性肥胖、空腹血糖增高、血脂紊乱、高血压等代谢综合征。血清转氨酶水平可由轻至中度增高(小于5倍正常值上限)，通常以丙氨酸氨基转移酶(即过去俗称的“GPT")升高为主，肝脏影像学表现符合弥漫性肝损伤的影像学诊断标准：肝活检组织学改变符合脂肪性肝病的病理学诊断标准。根据《中医诊断学研究》中所述的脂肪含量，可将肝损伤分为轻型(含脂肪5％-10％)，中型(含脂肪10％-25％)、重型(含脂肪25％-50％或>30％)三型。选取符合上述标准的200例，男性120例，年龄35岁-70岁；女性80例，年龄45岁-72岁，病程6个月—4年。
2.治疗方案
治疗组：使用实施例2的臭氧化橄榄油胶囊。每天服用1次，空腹服用1粒，90天1个疗程。
疗效标准：
肝损伤的严重程度按重量占肝总重量的5％—10％时，为轻度肝损伤；达到11％—25％以上时，为中度肝损伤；如果是超过26％—50％，为重度肝损伤。用药一个疗程后进行评判。痊愈：肝功能持续基本正常((ALT：29U/L，TBIL：18.5umol/L)，B型超声显示肝脏形态恢复正常。
显效：食欲不振、腹胀、疲倦乏力、发热、恶心、呕吐、肝区痛等症状明显减轻，上腹部的特殊不适感得到有效缓解。总胆固醇(TC)低于5.20mmol/L，低密度脂蛋白胆固醇(LDL--C)低于3.12mmol/L(120mg/dl)，高密度脂蛋白胆固醇(HDL--C)高于1.04mmo 1/L，甘油三酯(TG)低于1.70mmol/L(150mg/dl)。
有效:服用药物一个疗程以后，疲倦乏力、腹胀、暖气、恶心、呕吐、体重减轻、肝区或右上腹胀满隐痛等症状有明显的好转，甘油三酯、脂肪酸、胆固醇及胆固醇酯在体内的含量基本正常。
3.治疗一个疗程后的结果:
200例患者由化学性肝损伤引起的的病理状态减轻或消失，停药6个月未复发，各项血脂标准基本正常，且在用药过程中未发现任何不良反应，治愈率为96.8％。因此说明本发明的臭氧化橄榄油胶囊对化学性肝损伤具有良好的有效性及安全性。
本发明臭氧化橄榄油对酒精性肝损伤的保护作用
实验采用卫生部《保健食品检验与评价技术规范》2003年版和《对化学性肝损伤有辅助保护功能评价方法(修订稿)》(食药监保化函[2011]423号)的要求，采用急性酒精性肝损伤模型评价实施例2所得臭氧化橄榄油胶囊对化学性肝损伤的保护作用。
1.实验材料
1.1受试物
1.2实验动物
成年大鼠，雄性，220-250克，每组12只，购自西安交通大学实验动物中心。
2.实验方法
2.1剂量和分组
受试物组分别给予本发明实施例2制得的臭氧化橄榄油胶囊0.04ml/只，0.08ml/只，0.12ml/ 只，同时设阴性对照组和模型对照组。用无水乙醇(分析纯)造成肝损伤模型，乙醇浓度为50％ w/w以纯净水稀释)，灌胃量12m1～14m1/kg.BW(乙醇密度0.8g/ml，折合乙醇的剂量为 4800～5600mg/kgBW)。
2.2给予受试样品的途径和时间
经口灌胃给予受试样品臭氧化橄榄油，每天服用1次，空腹服用，连续给予30天。
2.3实验步骤和造模方法
每日经口灌胃给予受试样品，阴性对照组和模型对照组给予橄榄油。将动物每周称重两次。模型对照组和各受试样品组于实验结束时一次灌胃给予50％的乙醇，灌胃量12m1/kgBW，阴性对照组给予纯净水，禁食16h。动物腹腔注射60mg/kg BW的戊巴比妥钠溶液麻醉后腹主动脉采血，并取肝组织，进行各项指标的检测及病理组织学检查。
2.4检测指标
体重、血清中甘油三酯(TG)、血清中极低密度脂蛋白(VLDL)、肝组织病理学检查(肝细胞脂肪变性)。
2.5数据处理
采用方差分析先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值<F0.05，结论：各组均数间差异无显著性；F值>F0.05，用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。
结果判定：
模型对照组与阴性对照组比较脂肪变性程度加重有统计学意义(P<0.05)，表示模型成立。在模型成立的前提下，受试样品任何一个剂量组与模型对照组比较，脂肪变性程度减轻，有统计学意义(P<0.05)，可判断为阳性结果，判定受试样品对急性酒精性肝损伤有辅助保护功能。
2.6急性酒精性肝损伤的结果判断
血清中TG，VLDL两项指标阳性和病理组织学检查结果阳性，模型成立。
3.实验结果
3.1臭氧化橄榄油对急性酒精性肝损伤大鼠血清TG，VLDL的影响
模型组大鼠血清TG，VLDL水平显著高于空白组。给予30天受试样品，受试样品低、中、高剂量组均能显著降低血清TG，VLDL(p<0.05)，且优于绞股蓝单独提取物，结果如表1所示。
表1臭氧化橄榄油对急性酒精性肝损伤大鼠血清TG，VLDL的影响
组别 剂量g/kg TG VLDL
空白组 0 1.10±0.14 7.81±1.14
模型组 0 1.82±0.25 15.54±2.57
低剂量组 0.04ml/只 1.21±0.14* 11.28±1.36*
中剂量组 0.08ml/只 1.25±0.16* 10.32±1.64*
高剂量组 0.12ml/只 1.19±0.17* 9.52±1.77*
绞股蓝单独提取物 5.4 1.52±0.15 11.68±1.85
注：与模型组比较，*p<0.05
3.2臭氧化橄榄油对急性酒精性肝损伤大鼠肝脏脂肪变性的影响
模型组大鼠肝脏脂肪变性严重，其评分显著高于空白组。给予30天受试样品，受试样品低、中、高剂量组大鼠脂肪变性程度均显著降低(p<0.05)，且优于绞股蓝单独提取物，结果如表 2所示。
表2.臭氧化橄榄油对急性酒精性肝损伤大鼠肝脏脂肪变性的影响
组别 剂量g/kg 脂肪变性评分
空白组 0 0.47±0.17
模型组 0 2.62±0.35
低剂量组 0.04ml/只 1.01±0.17*
中剂量组 0.08ml/只 0.75±0.18*
高剂量组 0.12ml/只 0.69±0.15*
绞股蓝单独提取物 5.4 1.57±0.25
注：与模型组比较，*p<0.05
4.实验结论
根据卫生部《保健食品检验与评价技术规范》2003年版和《对化学性肝损伤有辅助保护功能评价方法(修订稿)》(食药监保化函【2011】423号)的判定标准，臭氧化橄榄油对化学性肝损伤有辅助保护作用。
实施例12臭氧化橄榄油的降血脂作用
1.实验动物：由西安交通大学实验动物中心的清洁级SD种雄性大白鼠，体重190-220g：动物室温度22-25℃，相对湿度55-75％。
2.剂量选择和给予方式：样品：实施例1制备的臭氧化橄榄油，本发明样品设0.04ml/ 只，0.08ml/只，0.12ml/只3个剂量组(分别相当于人体推荐用量的10，20，30倍，分别为低剂量组、中剂量组、高剂量组)，再设一个基础饲料对照组(基础对照)、普通对照组、一个高脂模型对照组(高脂对照)，每组10只动物。灌胃量为1.0mL/100gBW：给予基础对照组等体积的纯水和模型对照组给予等体积的橄榄油，每天灌胃一次，空腹，连续30天。
3.主要要仪器与试剂：OLYMPUSAU400型自动生化分析仪、离心机、旋涡混匀器、恒温水浴箱；总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)试剂盒。
4.实验方法：依据《保健食品检验与评价技术规范》(2003年版)中辅助降血脂功能检验方法，采用脂代谢紊乱模型法一预防性给受试样品。大鼠在清洁级动物实验室内喂饲基础饲料观察5天，禁食16h后从大鼠的眼内眶采血测定各项观察指标正常值。根据TC水平，采用随机抽样方法将大鼠分为6组，每组10只。开始实验后，除基础饲料对照组外，其余各组均用高脂饲料喂饲，同时低、中、高剂量组和普通对照组大鼠经口灌胃给予臭氧化橄榄油，基础对照组给予纯水和高脂对照组灌胃给予橄榄油。每周称重一次。实验至第31天采血测定血清TC，TG，HDL-C含量，采血前动物禁食16h。血清TC，TG含量的测定均用酶试剂一终点法。
5.实验数据处理：采用SPSS16.0统计软件进行方差分析统计处理。
结果判定：在血清总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇三项指标中，血清总胆固醇和甘油三酯二项指标阳性，受试样品任何一个剂量组与模型对照组比较，程度减轻，有统计学意义(P<0.05)，可判断为阳性结果，判定受试样品辅助降血脂动物实验阳性。
6.实验结果:
6.1本发明臭氧化橄榄油对血清总胆固醇(TC)含量的影响
结果见表1。实验前后各组大鼠的血清TC含量基本一致，各组间的差异无显著性(P>0.05)。实验至第30天，高脂对照组TC含量高于基础对照组，且差异具有显著性(P<0.05)，表明高脂模型成立。实验至第30天，低剂量组、中剂量和高剂量组、普通对照组大鼠的TC均低于高脂对照组(P<0.05)。表明本发明的样品具有降低高脂饲料喂饲的大鼠的血清总胆固醇含量的作用。
表1各组大鼠实验前及第30天TC含量(均值±标准差)
组别 实验前TC(mmoL/L) 第30天TC(mmoL/L)
基础对照 1.734±0.356 1.924±0.146
高脂对照 1.712±0.328 2.38±0.258
普通对照 1.756±0.213 1.784±0.185*
低剂量组 1.744±0.149 2.034±0.254*
中剂量组 1.729±0.154 1.927±0.244*
高剂量组 1.730±0.171 1.916±0.266*
注：*P<0.05，与高脂对照
6.2本发明臭氧化橄榄油对血清甘油三酯(TG)含量的影响
结果见表2。实验前后各组大鼠的血清TG含量基本一致，各组间的差异无显著性(P>0.05)。实验至第30天，高脂对照组TG含量高于基础对照组，且差异具有显著性(P<0.05)，表明高脂模型成立。实验至第30天，低剂量组、中剂量和高剂量组、普通对照组大鼠的TG均低于高脂对照组(P<0.05)。表明本发明的样品具有降低高脂饲料喂饲的大鼠的血清甘油三酯含量的作用。
表2各组大鼠实验前及第30天TG含量(均值±标准差)
注：*P<0.05，与高脂对照
7.结果判定
分别以0.04ml/只，0.08ml/只，0.12ml/只3个剂量的本发明臭氧化橄榄油给高脂饲料喂饲的大鼠连续灌胃30天，能降低大鼠的血清总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)含量，提示本发明的样品具有辅助降血脂功能。
实验例13臭氧化橄榄油促进泌乳作用
1.实验动物：选用昆明种健康孕鼠(第二胎)，孕期17-18d，适应性喂养3-4d后开始分娩，按照母鼠窝别和所生仔鼠体重，随机分为低、中、高剂量组(剂量分别为0.04ml/只，0.08ml/只， 0.12ml/只，和空白对照组，每组8只母鼠，每只母鼠带养10只仔鼠，每只母鼠及其仔鼠单笼饲养。分别灌胃空腹给药每天1次，连续21天，每日定时观察、测量每只母鼠的泌乳量、仔鼠的出生体重和出生后第7，14，21天的体重。
2.实验方法：泌乳量测定(称重):每日11时将母鼠与仔鼠分别称重后，将母、仔鼠隔离， 16时合笼哺乳1h，称量哺乳前后仔鼠的体重，以两者之差算母鼠的泌乳量。同时，计算母鼠累积泌乳量。
3.结果：结果见表1，由表1可看出，第5日、第10日、第15日，高、中、低三种剂量组与对照组母鼠泌乳量均有显著性差异(p<0.05)，说明受试组泌乳量相对于对照组，均有不同程度的增加，提示本发明臭氧化橄榄油可促进母鼠泌乳。
表1臭氧化橄榄油对母鼠动态泌乳量(g)的影响
组别 第2天 第5天 第10天 第15天
对照组 0.22±0.01 0.52±0.05 0.61±0.05 0.91±0.07
低剂量 0.24±0.02 0.62±0.06 0.78±0.06 0.98±0.08
中剂量 0.25±0.03 0.72±0.05 1.10±0.07 1.15±0.09
高剂量 0.25±0.03 0.78±0.07 1.21±0.09 1.18±0.09
表2臭氧化橄榄油对母鼠累积泌乳量(g)的影响
由表2可看出，2-10日、2-15日，高、中、低剂量组与对照组产仔母鼠累积泌乳量均有显著性差异(p<0.05)。
由表1和表2可看出，臭氧化橄榄油可显著促进母鼠泌乳。
实施例14臭氧化橄榄油的排铅功能
1.实验对象和分组:选择某冶炼厂附近区域内血铅含量在100-199μg/L(诊断为：血铅超标) 的300人，年龄37±8.3岁，性别不限，随机将受试者分为4个试验组，1个对照组，每组均为60人，按照顺序依次将试验组编号1-5，具体试验方案如下：
试验组1、试验组2、试验组3：每组60个受试者于早餐前空腹服用本发明实施例2制得的臭氧化橄榄油胶囊1粒，每天进食1粒。
试验组4：60个受试者于早餐半小时进食燕麦，每次进食30g。
对照组：60个受试者同时于早晚餐半小时前饮用橄榄油，剂量同试验组1。
2.血铅测定方法：采集受试者进食指定食品前及服用15，30天后的静脉血，进行血铅含量的检测，检测方法统一采用国际上公认的检测血铅的标准方法：石墨炉原子吸收光谱法(GFaas)，分别求出每组平均数加以比较，
3.臭氧化橄榄油对血铅含量的影响，具体检测结果见表1。
表1臭氧化橄榄油对血铅含量的影响
由表1可得出，与对照组相比较，臭氧化橄榄油进食后15天及30天后血铅含量均有显著下降，燕麦片排铅作用不明显，可以得出本发明臭氧化橄榄油排铅效果明显，因此，本发明的臭氧化橄榄油能够有效的将血液中的重金属铅排出体外。
实施例15臭氧化橄榄油清咽作用临床试验
1.实验对象：针对120例临床诊断为慢性咽炎的自愿者进行试验，其中男75人，女45人，年龄最大65岁，年龄最小33岁，病程3-10年，其中重度慢性咽炎患者25人，中度慢性咽炎患者68人，轻度慢性咽炎患者27人。
2.考查方法：试验采用自身和对照设计，受试者自愿参加，每日空腹服本发明实施例 2制得的臭氧化橄榄油胶囊1粒，连续应用4周。试验前后分别观察咽部症状，详细记录临床表征的咽痛、咽痒、咽喉灼热、咽喉异物感、咽喉干涩、咳痰不爽、多言加重等，分别按照临床咽炎诊断标准对症状的轻重评分：重度3分、中度2分、轻度1分。
用药前后进行分值对比，症状减轻2分以上或症状消失为显效；症状减轻1分以上为有效；症状加重或无变化以下为无效，对臭氧化橄榄油胶囊的功能进行评估。
3.结果：臭氧化橄榄油胶囊使用后：重度慢性咽炎25人中，显效16例，有效6例，无效3例；中度慢性咽炎患者68人中，显效45例，有效20例，无效3例；轻度慢性咽炎患者中显效15例，有效10例，无效2例，总体显效率为63.3，总体有效率为93.3。臭氧化橄榄油能有效针对慢性咽炎症状，使得咽痛、咽痒、咽喉灼热、咽喉异物感、咽喉干涩、咳痰不爽、多言加重等症状减轻或消失，且在临床试验过程中未发现该保健品有明显的不良反应。由上述表可以看出，根据实施例2的制备得到的臭氧化橄榄油胶囊对咽痛、咽痒、干咳、咽干涩、异物感有明显的改善，且改善效果(尤其是异物感的改善效果)优于对比例1—3。因此，臭氧化橄榄油是一种功能确切而安全的具有清咽功能的良好保健品。
主要症状改善情况(改善率)如下表1所示：
实施例16臭氧化橄榄油的促生长发育作用
实验1臭氧化橄榄油胶囊的人体实验
1.实验设计
观察对象：实验组50例，男性25例，女性25例；对照组50例，男性30例，女性20例，年龄最小者8岁，最大者19岁。以上两组人员均排除疾病、维生素和矿物质缺乏等其他因素的影响。实验组口服本发明实施例2制得的臭氧化橄榄油胶囊，每日1次，每次1粒空腹服用，连续服用3个月；对照组未服用任何其他保健食品，仅按照传统方式饮食。
2.结果：
本发明经人群试验，在医师的指导下，给身高低于1995年国家体委公布的我国儿童、青少年身高中位数的青少年儿童服用本发明产品，并随访部分连续服用3个月的儿童，结果显示服用后身高增长1-5厘米(平均2.6±0.22cm)，骨宽度增长，0.02-0.25厘米(平均0.05±0.01cm)，体重增加1.5-2.5公斤(平均0.9±0.17kg)，与对照组对比身高和骨宽度显著增加，与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：本发明臭氧化橄榄油胶囊，无副作用，保健效果较好，主要用于青少年生长发育，经应用实验证明，能够较大程度地促进青少年生长发育，同时达到增强体质、预防疾病的效果。
实验2臭氧化橄榄油促生长发育的动物实验
实验对象和设计：试验小鼠雌:雄为2:1合笼，每日检查雌鼠，发现阴栓为受孕，取孕鼠36 只，分为4组，每组9只，分为对照组和本发明高、中、低三个剂量组，本发明实施例1制得的臭氧化橄榄油的剂量为0.04ml/只,0.08ml/只和0.12ml/只，以橄榄油配制到所需浓度，灌胃的容积为0.21ml/l0g，对照组单灌橄榄油，孕鼠从孕第1天到幼鼠断奶为止，每天灌胃一次，在给药期间及停药后测试各项指标
试验结果如下:
(1)本发明三个剂量组均能增加小鼠体重和食物利用率；
(2)生理发育指标中，本发明加快门齿的萌出；
(3)神经发育指标中，本发明三个剂量对平面翻正试验、前肢握力试验、悬崖回避试验、嗅觉定向试验、空中翻正试验、游泳发育试验均有促进作用；
(4)本发明三个剂量组小鼠尾长，股骨和胫骨的长度均明显大于对照组。
实验例17臭氧化橄榄油缓解视疲劳的人群试验
1.材料和方法:参照《保健食品检验与评价技术规范》进行。
(1)样品和使用方法：本发明之缓解视疲劳的实施例2制得的臭氧化橄榄油胶囊剂和实施例1制得的臭氧化橄榄油，胶囊剂每粒0.25ml，空腹口服，成人每日1次，每次1粒；臭氧化橄榄油外用抹擦在眼袋处，每日早晚各一次。安慰剂由淀粉、蔗糖制成，不含有有效成分。连续服用60天。
(2)受试者纳入标准：符合试验要求的长期用眼、视力易疲劳的自愿受试者，年龄18 —60岁。
(3)分组：受试者100名，随机分为样品组与安慰剂对照组，每组50人。
(4)观察指标:
安全性指标：一般状况，血常规检查，生化指标检查，尿、便常规检查，胸透，心电图，腹部B超检查；
功效性指标：a)眼科检查：眼胀、眼痛、畏光、视物模糊、眼干涩等症状，并计算症状总积分，判定方法见表1。
表1视疲劳症状判定方法(半定量积分法)
其中，偶感是指1-2次/2天，时有是指1-3次/天，经常是指>3次/天。
b)明视持久度测定：用“品”字图测定法，明视持久度＝(明视时间/注视总时间)X100％。
远视力检查:用对数视力表法。
(5)数据处理:计量资料用t检验，其中自身对照资料采用配对t检验，两组均数比较采用成组t检验，后者先进行方差齐性检验，对方差不齐或非正态分布的实验数据先进行适当的变量转换后，再进行t检验，若转换数据仍不能满足正态方差齐性要求，改用秩和检验：技术资料用X2检验。
(6)功效判定标准
a)症状改善：眼痛、眼胀、畏光、视物模糊、眼干涩任一症状改善1分及1分以上即为改善， 5种症状任一改善且其他症状无恶化即判定症状改善。
b)有效：症状改善且明视持久度前后相差大于等于10％，并经统计比较差异有统计学意义。
视力改善：以试验后较试验前视力提高两行为视力改善。
2.结果:
(1)安全性指标:
a)一般状况：服用后，受试者精神、体力、睡眠、饮食、血压、心率等情况未见异常。
b)血常规检查：服用前后受试者血红蛋白、红细胞计数、白细胞计数和白细胞分类的测定结果均在正常值范围内。
c)生化指标检查：服用前后受试者谷丙转氨酶、谷草转氨酶、总蛋白、白蛋白、尿素氮、肌醉、胆固醇、甘油三酯、血糖的测定结果均在正常值范围内。
d)尿、便常规检查：服用前后受试者尿、便常规检查均未见明显异常。
e)胸透、心电图、腹部B超检查：服用前各受试者的胸透、心电图、腹部B超(肝、胆、脾、胰、双肾)检查均未见明显异常。
f)服用期间，受试者均未见不良反应。
(2)功效性指标:
a)眼科检查：样品组受试者连续服用缓解视疲劳的臭氧化橄榄油胶囊剂和抹擦臭氧化橄榄油 60天后，视物模糊改善0.7分，眼干涩改善0.9分，症状总积分改善1.6分，且与用前比较，差异均有统计学意义(P<0.05)：样品组受试者使用前后的视物模糊、眼干涩、症状总积分改善值与对照组比较，差异均有统计学意义(P<0.05)。
明视持久度：样品组受试者连续使用缓解视疲劳的臭氧化橄榄油胶囊剂和抹擦臭氧化橄榄油60天后，样品组的明视持久度与对照组比较，差异有统计学意义(P<0.05)；样品组的明视持久度提高了13.5，与服用前比较，差异有统计学意义(P<0.05)；样品组的提高率与对照组比较，差异有统计学意义(P<0.05)。
总有效率的观察：样品组受试者连续服用缓解视疲劳的臭氧化橄榄油胶囊剂和抹擦臭氧化橄榄油60天后，样品组的总有效率为42，与对照组比较，差异有统计学意义 (P<0.05)，如表1所示：
表1：臭氧化橄榄油的总有效率
组别 人数 有效人数 总有效率〔％) P值
对照组 50 4 8
样品组 50 21 42 0.03*
*样品组与对照组比较，P<0.05
对视力改善率的影响：样品组受试者连续使用缓解视疲劳的臭氧化橄榄油胶囊剂和抹擦臭氧化橄榄油60天后，样品组的左、右眼视力改善率与对照组比较，差异无统计学意义(P>0.05)。
小结：受试者连续服用缓解视疲劳的臭氧化橄榄油胶囊剂和抹擦臭氧化橄榄油60天后，样品组的视物模糊改善0.7分，眼干涩改善0.9分，症状总积分改善1.6分，明视持久度提高13.5，与服用前比较，差异有统计学意义(P<0.05)；与对照组比较，差异有统计学意义(P<0.05)，且总有效率有明显改善，差异有统计学意义(P<0.05)。服用和抹擦前后受试者的各项临床症状、指标均未见异常，说明该缓解视疲劳的药物组合物具有缓解视疲劳功能作用，且对机体健康无不良影响。
综上所述，本发明的臭氧化橄榄油通过舒张血管，清除视网膜内自由基，促进视网膜紫红素生成，从而发挥缓解视疲劳的功能，此外，臭氧化橄榄油还可用于制备缓解视疲劳的药物。
实施例18臭氧化橄榄油的通便功能
临床效果试验
临床资料:选取临床上有不同程度便秘患者100例，年龄从25岁到65岁，按照统计学原理将患者分为5组，各组患者无明显统计学差异。
治疗方法:第1～第4组患者服用实施例2制备得到的臭氧化橄榄油胶囊，每日空腹口服1粒，日服1粒。第5组患者服用多聚果糖，10g/人/天，连续服用15天。
疗效判定标准:
痊愈:大便正常，或恢复至病前水平，其他症状全部消失。
显效:便秘明显改善，间隔时间及便质接近正常；或大便稍干而排便时间在72小时以内，其他症状大部分消失。
有效:排便间隔时间缩短1天，或便质干结改善，其他症状均有好转。
无效:便秘及其他症状均无改善。
试验结果:具体见表1和表2
表1臭氧化橄榄油胶囊不同时间通便效果
表2臭氧化橄榄油胶囊通便总效果
痊愈 有效 显效 无效 总有效率％
第1组 15 4 0 1 95％
第2组 18 2 0 0 100％
第3组 17 2 1 0 100％
第4组 17 1 1 1 95％
第5组 10 3 2 5 75％
由表1和表2中可以看出，实施例1-4组臭氧化橄榄油胶囊具有优异的通便功能，对临床常见的各种便秘具有很好的治疗效果，其总有效率达98％。与单一的具有润肠排便功能的多聚果糖相比，其疗效更为显著。且另据受试人群反应，本发明的产品对胃病和人的精神也有较好的治疗效果，易被普遍人群接受。综上所述，本发明臭氧化橄榄油胶囊对便秘具有明显的改善效果，具有很好的通便功能。
实验例19臭氧化橄榄油对胃粘膜损伤的保护作用
1.实验方法:
取体重为200-250g并且禁食不禁水48h的大鼠40只，随机分为空白对照组、本发明组试验组，试验组灌胃臭氧化橄榄油，分低、中、高3个剂量，0.04m1/只，0.08m1/只，0.12m1/ 只，一天1次，空腹。按lml//kg体重灌胃，对照组灌胃等体积橄榄油，连续30天。等最后 1次灌胃40min后，每只大鼠灌胃1.5m1盐酸一乙醇混合液，再过40min后脱颈椎处死大鼠，开腹取胃，用夹子夹紧喷门，由幽门注入1％甲醛溶液5mL，夹紧幽门，将全胃置于10％甲醛溶液中固定20min。沿胃大弯剪开，将胃外翻，用清水轻轻洗去胃内容物。将胃平铺于玻璃板上，用游标卡尺测量胃粘膜损伤长度(充血和弥漫性出血条带的长和宽(精确到0.01m m))，计算每鼠的充血和弥漫性出血条带的总面积。用SPSS软件进行方差分析，再用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较法(Dunnett检验法)进行统计分析进行统计学处理，并计算损伤度。
2.结果
臭氧化橄榄油对无水乙醇引起的大鼠胃粘膜损伤的影响，结果见表1。
表1臭氧化橄榄油对无水乙醇引起的大鼠胃粘膜损伤的影响
组别 动物数(只) 胃粘膜出血带面积mm2 p值
对照组 10 141.52±24.62
0.04m1/只 10 57.83±12.34 <0.01
0.08m1/只 10 43.67±9.57 <0.01
0.12m1/只 10 38.91±7.48 <0.01
由表1可见，给予臭氧化橄榄油30天后，低、中、高剂量组的胃粘膜损伤面积显著小于对照组(p<0.01)，说明臭氧化橄榄油对无水乙醇引起的大鼠胃粘膜损伤有一定的保护作用。
3结论
实验结果证明，以0.04m1/只，0.08m1/只，0.12m1/只的臭氧化橄榄油给予大鼠灌胃30天，低、中、高剂量组的胃粘膜损伤面积显著小于对照组(p<0.01)。显示本发明臭氧化橄榄油对无水乙醇引起的大鼠胃粘膜损伤有一定的辅助保护作用。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明作其它形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或改型为等同变化的等效实施例。但是凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (8)

1.一种臭氧化油的新用途，其特征在于，油至少选自橄榄油、豆油、葵花籽油、亚麻籽油、菜籽油、粟米油、玉米油、玉米胚芽油、芝麻油、棉籽油、蓖麻油、花生油、茶籽油、紫苏油、红花籽油、杏仁油、榛子油、核桃油、松子油、文冠果油、食用调和油、鱼肝油和鱼油中的一种，通过对油的亲电加成臭氧，得到的臭氧化油制成容量为0.1～0.75mL的糯米或淀粉材质肠溶胶囊、用2～100mL玻璃瓶盛装, 以0.1~100mL的剂量，经口服途径给药和采用腹腔注射、灌肠、灌胃、静脉注射、皮下注射、肌肉注射、外敷和栓剂的方式给予，能够用于制备改善肠道菌群、促进消化、保护辐射损伤、辅助降血压、增加骨密度、保护化学性肝损伤、降血脂、促进泌乳、排铅、清咽、促进生长发育、改善视疲劳、通便和保护胃粘膜损伤的食品、保健品和药物。
2.根据权利要求1所述的油，其特征在于，对权利要求1所述的油进行两两的混合和两种以上油的混合，通过亲电加成臭氧，得到的臭氧化油制成容量为0.1～0.75mL的糯米或淀粉材质肠溶胶囊、用2～100mL玻璃瓶盛装, 以0.1~100mL的剂量，经口服途径给药和采用腹腔注射、灌肠、灌胃、静脉注射、皮下注射、肌肉注射和栓剂的方式给予，能够用于制备改善肠道菌群、促进消化、保护辐射损伤、辅助降血压、增加骨密度、保护化学性肝损伤、降血脂、促进泌乳、排铅、清咽、促进生长发育、改善视疲劳、通便和保护胃粘膜损伤的食品、保健品和药物。
3.根据权利要求1～2所述的油，其特征在于，通过选择非离子表面活性剂、阴离子表面活性剂和阳离子表面活性剂中的一种、两种和两种以上的混合，与权利要求1～2所述的油中的任何一种混合，通过亲电加成臭氧，得到含表面活性剂的臭氧化油制成容量为0.1～0.75mL的糯米或淀粉材质肠溶胶囊、用2～100mL玻璃瓶盛装, 以0.1~100mL的剂量，经口服途径给药和采用腹腔注射、灌肠、灌胃、静脉注射、皮下注射、肌肉注射和栓剂的方式给予，能够用于制备改善肠道菌群、促进消化、保护辐射损伤、辅助降血压、增加骨密度、保护化学性肝损伤、降血脂、促进泌乳、排铅、清咽、促进生长发育、改善视疲劳、通便和保护胃粘膜损伤的食品、保健品和药物。
4.根据权利要求3所述的表面活性剂，其特征在于，选自甘油不饱和脂肪酸酯、聚甘油不饱和脂肪酸酯、丙二醇不饱和脂肪酸酯、山梨糖醇酐不饱和脂肪酸酯、聚氧乙烯山梨糖醇酐不饱和脂肪酸酯、聚氧乙烯不饱和脂肪酸酯、甘露糖醇不饱和脂肪酸酯、季戊四醇不饱和脂肪酸酯、蔗糖不饱和脂肪酸酯、聚乙二醇不饱和烷基醚和聚丙二醇不饱和烷基醚中的非离子表面活性剂中的一种、两种和两种以上。
5.根据权利要求3所述的表面活性剂，其特征在于，选自不饱和脂肪酸盐、不饱和脂肪醇硫酸酯盐、α-磺基不饱和脂肪酸酯、烯烃硫酸盐和烯烃磺酸盐中的阴离子表面活性剂的一种、两种和两种以上。
6.根据权利要求3所述的表面活性剂，其特征在于，选自不饱和脂肪烃基单取代三甲基铵盐、不饱和脂肪烃基二取代二甲基铵盐、不饱和脂肪烃基单取代二甲基苄基铵盐、不饱和脂肪烃基单取代胺有机酸盐、不饱和脂肪烃基二取代胺有机酸盐和N-甲基二羟乙基胺不饱和脂肪酸酯盐酸盐中的阳离子表面活性剂的一种、两种和两种以上。
7.根据权利要求3所述的表面活性剂，其特征在于，选自食品级石油醚、聚乙二醇不饱和烷基醚、失水山梨醇单酯聚氧乙烯醚表面活性剂的一种和两种。
8.根据权利要求1～7所述的任意一种臭氧化油，其特征在于，通过选择乙醇、丙二醇、丙三醇、己二醇、丁二醇、戊二醇、丁三醇、己三醇中的一种、两种和两种以上混合，通过亲电加成臭氧得到含助表面活性剂和表面活性剂的臭氧化油，制成容量为0.1～0.75mL的糯米或淀粉材质肠溶胶囊、用2～100mL玻璃瓶盛装, 以0.1~100mL的剂量，经口服途径给药和采用腹腔注射、灌肠、灌胃、静脉注射、皮下注射、肌肉注射和栓剂的方式给予，能够用于制备改善肠道菌群、促进消化、保护辐射损伤、辅助降血压、增加骨密度、保护化学性肝损伤、降血脂、促进泌乳、排铅、清咽、促进生长发育、改善视疲劳、通便和保护胃粘膜损伤的食品、保健品和药物。
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