CN108451833A - 无患子美白护肤品 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种无患子美白护肤品，该美白护肤品中添加有无患子精华粉，所述无患子精华粉通过以下步骤制备所得：将无患子果皮粉碎过40目筛，用70％乙醇回流提取三次，合并滤液，减压回收乙醇；浓缩液进行不同溶媒萃取，进行抑制酪氨酸酶活性实验，对活性强的部分正丁醇部分冷冻干燥，得到无患子精华粉。本发明含有以无患子为主的天然中药成分，具有保湿润肤、抗过敏、改善皮肤质地、延缓皮肤衰老等功效，尤其对色素沉着有明显的防治效果。

Description

无患子美白护肤品

技术领域

本发明涉及护肤品领域，具体涉及一种无患子美白护肤品。

背景技术

化妆品与人们的日常生活密切相关，许多人都使用化妆品，化妆品的消费量与日俱增。化妆的主要目的是为了使裸露的皮肤免受大自然的威胁，如温度变化、光线等。黄褐斑，是一种慢性的、长期的色素沉积而分布不均的皮肤病。临床上的表现，为面部的颜色形成深浅不一，一般呈圆形、条形或蝴蝶型的黄揭色或深咖啡色斑。黄褐斑一般是患病部位是在脸部，另外在额头部分也会生成黄褐斑，还有的分布在颧颊部、或者口鼻部周围。黄褐斑的生成与体内黑色素的生成有着密切的联系，而黑色素之所以产生，主要是因为人体皮肤基底层中具有的黑色素细胞，由其产生黑色素。酪氨酸酶在人体内具有重要的生理功能，它与老年斑、黄褐斑等色素过度沉淀等疾病的发生有关。

酪氨酸酶在生物体内具有重要的生理功能，它与人体雀斑、褐斑等色素过度沉淀等疾病的发生有关。酪氨酸酶抑制剂能抑制酪氨酸酶的活性，从而阻止黑色素的产生，因而酪氨酸酶抑制剂可作为化妆品中的美白添加剂。目前酪氨酸酶抑制剂大致分为三大类：一是化学合成类。如氢醌，它可以完全抑制酪氨酸酶的活性，其药理作用是阻断酪氨酸酶催化酪氨酸转变成二羟基苯丙酸的过程，从而控制黑色素的生物合成，但并不毁损黑色素细胞，也不影响已合成了的黑色素。氢醌的自身氧化作用随其浓度及水、光线、空气、金属离子等的接触机会增而增加出现变色、主药含量下降。且长期使用会引起外源性色素斑等副作用，现已禁止在护肤品中使用。二是生物发酵类。如曲酸。曲酸能抑制酪氨酸酶的合成，因而可以强烈抑制皮肤黑色素的形成，而且安全无毒，不会产生白斑后遗症，因此是一种美白祛斑达标率高、美白祛斑效果迅速的美白祛斑剂。曾一度被认为是当今惟一能兼具美白祛斑效果、安全性及质感好的美白祛斑成分。三是动植物提取类。如果酸、芦荟提取物、维生素C、甘草黄酮、熊果苷、胎盘提取液等等，酪氨酸酶抑制作用机理尚未完全弄清楚，但美白祛斑剂必须能够透过表皮，穿透黑素细胞中的黑素体膜，并保持其生物活性。故而植物来源的美白剂由于迎合人们的安全需求而成为近年来研究、应用的焦点之一。

无患子(Sapindus mukurossi Gaertn.)本草纲目中称为木患子，中国产于长江流域以南。无患子具有很强药用价值，其果皮、种子、种仁、根、皮、叶都可以用作医药原材料，现代药理学研究证明无患子还具有抗菌作用、抗肿瘤、降压和心脏保护作用、保肝作用、免疫调节、抗病毒、镇痛等多种药理作用。无患子总皂苷洗涤液对于汞、锰、福、砷、铅等重金属的洗涤效果明显。无患子总皂苷还是很好的农药乳化剂。对蜗牛、苍蝇、蚊子、棉蚜虫、红蜘蛛等均有较好的杀灭效果。无患子果皮皂苷含量丰富，含量约为5.33％，主要为三萜皂苷类、倍半萜糖苷类，具有较强的表面活性作用。明代李时珍在本草纲目中记载：无患子洗头去风明目，洗面增白祛斑。无患子中含有氨基酸、维生素等多种天然的营养调理物质，使得无患子也可用作天然化妆品的成分。通过测量无患子皂苷抑制酪氨酸酶活性和对小鼠黄褐斑造型，对发生病变组织进行涂抹后，达到淡化黄褐斑的效果，这个过程利用的原理是降低酪氨酶的和MDA的含量，同时提高体内的SOD含量。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供了一种无患子美白护肤品。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：

无患子美白护肤品，该美白护肤品中添加有无患子精华粉，所述无患子精华粉通过以下步骤制备所得：

将无患子果皮粉碎过40目筛，用70％乙醇回流提取三次，合并滤液，减压回收乙醇；浓缩液进行不同溶媒萃取，进行抑制酪氨酸酶活性实验，对活性强的部分正丁醇部分冷冻干燥，得到无患子精华粉。

本发明含有以无患子为主的天然中药成分，具有保湿润肤、抗过敏、改善皮肤质地、延缓皮肤衰老等功效，尤其对色素沉着有明显的防治效果。

附图说明

图1为本发明实施例中无患子精华粉的制备工艺流程图。

图2为不同提取部位无患子皂苷抑制酪氨酸酶活性。

图3为无患子皂苷对小鼠皮肤组织中SOD(ug/100mg.port)含量的影响。

图4为无患子皂苷对小鼠皮肤组织中MDA(nmol/mg.pro)含量的影响。

图5为无患子皂苷对小鼠皮肤组织酪氨酶含量(ug/100mg.pro)的影响。

图6为面霜的制备流程图。

具体实施方式

为了使本发明的目的及优点更加清楚明白，以下结合实施例对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

实施例

面霜制备

(1)按质量比称取：硬脂酸5％，C18醇2％，棕榈酸异丙酯6％，橄榄油0.5％，乳化剂E1800，0.3％，尼泊金甲酯0.15％，尼泊金丙酯0.05％，蒸馏水40％，混合搅拌溶解至均匀，得油相A，保温备用；

(2)按质量比称取：氮酮1％、三乙醇胺0.3％，甘油8％，蒸馏水29.5％，混合均匀，作为B相，备用；

(3)按质量比称取3％的无患子精华粉溶于B相中，并加热至80℃，缓慢搅拌，混合均匀，作为C相；

(4)将所得的C相和乳化剂E1802缓慢加入到A相中，同时进行高速搅拌3～5min，混合均匀；降温至65～75℃，缓慢搅拌，进行消泡；继续降温至40～50℃，继续缓慢搅拌，待冷却至室温，停止搅拌；

(5)将混合物进行研磨为糊状混合物，颗粒细度小于5μm；

(6)将研磨后的糊状混合物，输入高速搅拌机进行高速强力搅拌为乳状半成品；

(7)将步骤(6)所得的乳状半成品进行真空脱气工艺处理，灌装，即可。

黄褐斑实验模型制备

挑选昆明种普通的雌性小白鼠50只，体重在18-20g，进行喂养，备用。40只小鼠以0.4％的黄体酮注射液按0.02g/kg的剂量对小鼠进行后肢皮下注射，进行模型的建立，每周6次，连续4周。

动物分组：从之前准备好的50只健康小白鼠中，随机选出10只，作为空白对照组。造模结束后，在其余40只老鼠中选取造模成功的小鼠30只。10只为模型组10只为模型对照组，10只为无患子皂苷组。

给药方法：小鼠背部脱毛，于脱毛处涂抹适量(0.8g左右)的面霜，每日1次，每周6次，连续涂抹30天。在过程中，需要适时的脱毛，大约5天左右脱一次毛。

多指标含量测定法

匀浆前准备

末次涂抹霜制品1h后，取背部脱毛处的皮肤组织0.2-1g，最少可到2-5mg在冰冷的生理盐水中漂洗，除去血液，滤纸吸干水分，称重，放入10ml的小烧杯内，标记为1号。多次取小鼠背部皮肤组织，多次换用多个烧杯，以保证一定的准确性。

准备好充足的0.86％的冷生理盐水，备用。冷生理盐水的取量体积，是小鼠截取的小鼠皮肤组织重量的九倍，放入2号烧杯中。在之前备好的放有组织块的1号烧杯中，用移液管量取2号烧杯中三分之二的冷生理盐水。快速利用备好的小剪子将1号中的组织块快速剪碎。以此类推，此后按照此方法进行。注意：天热时，由于温度较高，影响测定结果，操作的时候，需要在冰水浴中进行，只需将盛有组织的小烧杯放入冰水中操作即可。

10％组织匀浆液的制备

将剪碎完全的皮肤组织块倒入干净研钵中，沿同一方向对组织块进行研磨，直至组织块研磨细碎而充分，移入事先准备好的10ml离心管中，再将2号烧杯中剩余的三分之一的冷生理盐水倒入研钵中，冲洗残留在研钵中的细碎组织，同样将其冲洗液移入离心管中，制备成10％的组织匀浆液，备用。

离心

取装有组织匀浆液的离心管，离心器以3000r/min室温下离心10min后，取上清液，备用。

1)测定吸光度

按照酪氨酶、SOD、MDA试剂盒的说明书，谨遵上面的操作步骤和注意事项，对样品的吸光度进行测定，并记录相关数据。

2)超氧化物岐化酶(SOD)含量测定

1.按照说明书上的表格进行取样。

2.用漩涡混匀器充分混匀，置37℃恒温水浴40min。

3.加入显色剂，室温放置10min，于波长550nm处，1cm光径比色杯，双蒸水凋零，比色，测定吸光度。

3)丙二醛(MDA)含量测定

由于测定丙二醛所用到的组织是小鼠的皮肤组织，用的方法是微量操作方法。做好的组织匀浆，最好不要离心。操作简化后如下：

按操作规范配制试剂盒说明书中用到的MDA 3号试剂。

用50％的冰醋酸，以2∶1的比例，将上述配好的MDA 3号试剂进行稀释。一次性配置一次性使用。

根据试剂盒里面含有的说明书给的表格，进行试剂的加样，完成相关操作。

利用漩涡混匀器，将试剂与测定样品充分混匀，此过程中试管需要保鲜薄膜将其管口密封，把试管口扎紧后，再用针头在保鲜膜上扎一个小孔，在95℃水浴锅中水浴40分钟，取出后利用流水冷却的方法冷却试管，然后在3500-4000r/min的条件下，离心10min后。取出上清液，使用721分光光度计，在532nm，1cm光径下，双蒸水凋零后，测各管吸光度值。

计算丙二醛的含量。

4)酪氨酶含量测定

样本处理及要求：

1.组织标本处理：截取小鼠背部皮肤组织块，称取重量，放入烧杯。加入一定量的PH7.4的PBS，用眼科小剪剪碎组织块，这个过程的操作要快速。手工将烧杯中的组织碎液匀浆充分，转移到离心管中，在2000-3000r/min条件下离心20分钟左右，仔细收集上清液。分装，一份待检测，其余冷冻备用。

2.标本采集后应该马上进行实验，不方便立即实验的，标本需要保存在-20℃条件下，而且要尽量避免反复冻融。

操作步骤：按照酪安酶试剂盒说明书，对样品进行稀释、.加样、温育、配液、洗涤、加酶、显色、终止、450nm波长测定等操作步骤对小鼠皮肤组织中酪氨酶的含量进行测定。

三、实验结果及分析

1抑制活性分析

表1不同提取部位抑制酪氨酸酶活性

从表1和图2中可以看出，整体上随着含量的增加抑制活性也随着上升，且对照组熊果苷、正丁醇层增幅超过50％，抑制活性相当，也是最高的。水层、乙酸乙酯层、石油醚层抑制活性均低于23％，石油醚层最低，也说明该抑制活性物质的极性与正丁醇相似，成分大多在正丁醇层，如果多萃取几次三者的抑制活性会更低。从数据上看在浓度为0.5mg/ml时，无患子中的抑制活性是熊果苷的近2倍，在浓度为1mg/ml时两者相当，综合考量在作为日化添加剂时添加浓度为0.5mg/ml时，本实验结果可以为无患子作为新的日化添加剂提供依据。

2.小鼠活性分析

无患子皂苷霜涂抹小鼠后，皮肤组织中SOD、MDA和酪氨酶的含量进行测定，其含量变化如表2至表4所示。

表2无患子皂苷对小鼠皮肤组织SOD含量的影响

表2中表示的是小鼠在建模前后和涂抹无患子皂苷霜后，皮肤组织中SOD的含量变化。从表中可以看出，空白组与模型组对比，小鼠皮肤组织中的SOD含量降低，而且是明显的降低。模型组与无患子皂苷组比较，SOD的含量升高，并且趋近于空白组，说明无患子皂苷可以使小鼠皮肤组织中SOD的含量升高。

表3无患子皂苷对小鼠皮肤组织中MDA含量的影响

表3中表示的是小鼠在建模前后和涂抹无患子皂苷霜后，皮肤组织中MDA的含量变化。从表中可以看出，空白组与模型组对比，小鼠皮肤组织中的MDA含量升高，而且变化是明显的。模型组与无患子皂苷组比较，MDA的含量降低了，并且趋近于空白组的，甚至比正常值还要低，说明无患子皂苷可以使小鼠皮肤组织中MDA的含量降低。

表4无患子皂苷对小鼠皮肤组织酪氨酶含量的影响

表4中表示的是小鼠在建模前后和涂抹无患子皂苷霜后，皮肤组织中酪氨酶的含量变化。从表中可以看出，空白组与模型组对比，小鼠皮肤组织中的酪氨酶含量升高，前后差异明显。模型组与无患子皂苷组比较，酪氨酶的含量降低了，并且趋近于空白组，说明无患子皂苷可以使小鼠皮肤组织中酪氨酶的含量降低。

对患有黄褐斑的小鼠使用无患子皂苷面霜后，得到的结果显示出，在相同的涂抹时间、涂抹量以及其他变量保持不变的情况下。模型组和给药对比分析，可以看出，患有黄褐斑的小鼠在涂抹无患子皂苷霜后，前后变化明显：①皮肤组织中的SOD含量有一定的升高，而且上升程度是明显的，而SOD是抗氧化作用的一种物质，这种天然的抗氧化剂能够与氧自由基发生氧化还原反应，使氧自由基被彻底清除，达到抑制黑色素生成的目的。②皮肤组织中酪氨酶含量有所降低，其含量的降低可以抑制络氨酸的分解，从而减少黑色素的生成。③生物体内，自由基作用于脂质发生过氧化反应，氧化的最终产物为丙二醛，会引起蛋白质、核酸等生命大分子的交联聚合，且具有细胞毒性，小鼠皮肤组织中MDA的含量是降低的，从侧面看出小鼠皮肤组中的黑色素生成减少。本系列化妆品系纯天然制品，含有以无患子为主的天然中药成分，有保湿润肤、抗过敏、改善皮肤质地、延缓皮肤衰老等功效，尤其对色素沉着有明显的防治效果。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以作出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (1)

1.无患子美白护肤品，其特征在于，该美白护肤品中添加有无患子精华粉，所述无患子精华粉通过以下步骤制备所得：

将无患子果皮粉碎过40目筛，用70％乙醇回流提取三次，合并滤液，减压回收乙醇；浓缩液进行不同溶媒萃取，进行抑制酪氨酸酶活性实验，对活性强的部分正丁醇部分冷冻干燥，得到无患子精华粉。