CN109010172A - 一种人参活力素护肤品的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种人参活力素护肤品的制备方法，包括如下步骤：按比例将硬脂酸，C18醇，棕榈酸异丙酯，橄榄油，乳化剂E1800，尼泊金甲酯，尼泊金丙酯，蒸馏水混合搅拌溶解至均匀，得油相A；按比例将氮酮、三乙醇胺、甘油、蒸馏水混合均匀，得B相；按质量比称取3％的采用70％乙醇回流提取所得的人参精华粉溶于B相中，并加热至80℃，缓慢搅拌均匀，得C相；将C相和乳化剂E1802缓慢加入到A相中，高速搅拌均匀；降温至65～75℃，缓慢搅拌消泡；继续降温至40～50℃，缓慢搅拌，待冷却至室温，停止搅拌，将混合物研磨为糊状混合物，送入高速搅拌机进行高速强力搅拌为乳状半成品，真空脱气工艺处理，灌装，即可。

Description

一种人参活力素护肤品的制备方法

技术领域

本发明涉及护肤品领域，具体涉及一种人参活力素护肤品的制备方法。

背景技术

化妆品与人们的日常生活密切相关，许多人都使用化妆品，化妆品的消费量与日俱增。化妆的主要目的是为了使裸露的皮肤免受大自然的威胁，如温度变化、光线等。当然，在历史上，化妆品也曾经有被宗教利用的一面：比如焚香，从宗教的信仰来说，可以祛秽防灾，将身体涂上颜色也可以防灾避难等，但随着科学的进步、社会的发展，以上宗教的目的已经不存在了，而是按照人们自己的愿望进行美容，充分表现出自己美的魅力并使自己心情舒畅，而且能够保护皮肤和头发免受紫外线和气候干燥的影响，达到增白、抗氧化、抗过敏、消炎、减皱、赋活等效果，努力防止皮肤的老化，延长美丽的年华，使大家享受快乐的生活等已经成为现代化妆品的主要目的。

皮肤覆盖在全身的外表层，在外界的各种刺激、损伤、环境的干燥等情况中，起着保护身体的作用。成人的皮肤表面积约有1cm2。皮肤的厚度随年龄、性别和部位有所不同，一般来说男性的皮肤比女性的要厚一些，眼睑的皮肤最薄，足底的皮肤最厚。皮肤由表及里大致可分三层，即表皮、真皮和皮下组织。皮肤还存在着毛、指甲和皮肤腺体等附属器官。真皮的弹性纤维和真皮下的皮下组织有缓冲作用，使外界的机械外力不能直接作用到身体内部。皮肤的表面保持一定的弱酸性，因此具有一定的碱性中和能力。皮肤中的不饱和脂肪酸有杀菌作用，表皮的黑色素可吸收紫外线从而减轻紫外线对身体内部的损伤，皮肤还有其它作用，如吸收、调节体温、对外界环境变化的感觉、传达感情，在皮肤中还可以合成维生素D等。

人类的皮肤是很容易老化的，这种变化的程度也因人而异，因部位有所差别。皱纹一般在30岁左右即开始明显。随着年龄的增长，皱纹逐渐增加，且深度加深，范围扩大。40岁左右皮肤开始表现松弛，皮肤的光泽、光润、光滑度及弹性均降低，纹理变粗，色素斑增多，皮肤色调变黄。皮肤的各种老化过程是长期微细变化蓄积和结果。所以有必要从日常生活中注意防止皮肤受到各种损害。目前，市场上的化妆品种类繁多，还有防止皱纹、美白、防脱发、生发等功能化妆品的存在。但这些化妆品多为合成品，铅等重金属含量较高，长期使用会损害皮肤。因此，研究开发天然化妆品势在必行。

化妆品与人们的日常生活密切相关，目前，市场上的化妆品种类繁多，还有防止皱纹、美白、防脱发、生发等功能化妆品的存在。但这些化妆品多为合成品，铅等重金属含量较高，长期使用会损害皮肤。国内虽已有人参系列化妆品，但大都因其中人参成分处理不当，护肤美容效果不甚理想而难以在市场上立足。几年来，我们充分利用中药材学院在人参成分、加工、活性物质筛选等方面的科研成果及优势，用长白山人参精制成系列化妆品，并从理论及实验上对其护肤机理进行阐明，以达到最佳美容效果。在其中加入了特有成分AFG及其它多种中药，此物质具有扩张血管、促进微循环作用，可改善皮肤的微循环，达到细腻肌肤、延缓皮肤老化之功效。制成了人参系列化妆品，并从理论及实验上对其护肤机理进行阐明，以达到最佳美容效果。

从人参中分离得到精氨酸糖甙——精氨酸双糖甙(AFG)和精氨酸单糖甙(AF)具有促进末梢血管血液循环作用。精氨酸衍生物包括精氨酸双糖甙(AFG)和精氨酸单糖甙(AF)，是新近从人参中分离得到的新化合物，是在人参加工过程中，由鲜人参中的麦芽糖或葡萄糖与精氨酸经梅拉德(Maillard)反应生成的，具有扩张血管，改善末梢循环的作用。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供了一种人参活力素护肤品的制备方法。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：

一种人参活力素护肤品的制备方法，包括如下步骤：

S1、将人参根粉碎过40目筛，用70％乙醇回流提取三次，合并滤液，减压回收乙醇，浓缩液冷冻干燥，得人参精华粉；

S2、按质量比称取：硬脂酸5％，C18醇2％，棕榈酸异丙酯6％，橄榄油0.5％，乳化剂E1800，0.3％，尼泊金甲酯0.15％，尼泊金丙酯0.05％，蒸馏水40％，混合搅拌溶解至均匀，得油相A，保温备用；

S3、按质量比称取：氮酮1％、三乙醇胺0.3％，甘油8％，蒸馏水29.5％，混合均匀，得B相，备用；

S4、按质量比称取3％的人参精华粉溶于B相中，并加热至80℃，缓慢搅拌，混合均匀，得C相；

S5、按质量比称取1.5％的乳化剂E1802，将其与所得的C相缓慢加入到A相中，高速搅拌3～5min，混合均匀；降温至65～75℃，缓慢搅拌，进行消泡；继续降温至40～50℃，继续缓慢搅拌，待冷却至室温，停止搅拌，得混合物；

S6、将混合物研磨为糊状混合物，颗粒细度小于5μm后，送入高速搅拌机进行高速强力搅拌为乳状半成品，真空脱气工艺处理，灌装，即可。

本发明具有以下有益效果：

将人参精氨酸双糖甙(AFG)和精氨酸单糖甙(AF)作为主要活性成分添加化妆品中，所得的化妆品活性较强，可扩张血管，改善皮肤的微循环，达到细腻肌肤、延缓皮肤老化之功效。

附图说明

图1为本发明实施例中人参精华粉的制备流程图。

图2为本发明实施例中人参活力素护肤品的制备方法的流程图。

图3为DPPH抑制率。

图4为ABTS抑制率。

图5为酪氨酸酶活性抑制率。

图6为小白鼠皮肤中含有的酪氨酸酶随时间变化趋势。

图7为小白鼠皮肤中含有的SOD随时间变化趋势。

图8为小白鼠皮肤中含有的MDA随时间变化趋势。

具体实施方式

为了使本发明的目的及优点更加清楚明白，以下结合实施例对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

如图1-图2所示，本发明的一种人参活力素护肤品的制备方法，包括如下步骤：

S1、将人参根粉碎过40目筛，用70％乙醇回流提取三次，合并滤液，减压回收乙醇，浓缩液冷冻干燥，得人参精华粉；

S2、按质量比称取：硬脂酸5％，C18醇2％，棕榈酸异丙酯6％，橄榄油0.5％，乳化剂E1800，0.3％，尼泊金甲酯0.15％，尼泊金丙酯0.05％，蒸馏水40％，混合搅拌溶解至均匀，得油相A，保温备用；

S3、按质量比称取：氮酮1％、三乙醇胺0.3％，甘油8％，蒸馏水29.5％，混合均匀，得B相，备用；

S4、按质量比称取3％的人参精华粉溶于B相中，并加热至80℃，缓慢搅拌，混合均匀，得C相；

S5、按质量比称取1.5％的乳化剂E1802，将其与所得的C相缓慢加入到A相中，高速搅拌3～5min，混合均匀；降温至65～75℃，缓慢搅拌，进行消泡；继续降温至40～50℃，继续缓慢搅拌，待冷却至室温，停止搅拌，得混合物；

S6、将混合物研磨为糊状混合物，颗粒细度小于5μm后，送入高速搅拌机进行高速强力搅拌为乳状半成品，真空脱气工艺处理，灌装，即可。

活性检测

抗氧化活性测定：

DPPH自由基清除能力的测定：使用96孔板快速测定吸光度值。将DPPH(128mg)溶于50mL容量瓶中的无水乙醇中。取上述溶液的10mL等分试样并稀释至50mL以产生1.3×10-4M的终浓度。将样品(80μL)或BHT溶液与DPPH溶液(80μL)混合并保持在37℃在黑暗中30分钟。使用无水乙醇作为空白在517nm处测定样品吸光度(Asample)。使用混合有70％乙醇(80μL)的样品或BHT溶液(80μL)的吸光度(A1)作为背景吸光度。记录DPPH·溶液(80μL)与70％乙醇(A0)的混合物的吸光度作为总DPPH·吸光度。所有测量一式三份进行。

ABTS自由基清除能力的测定：通过混合86μL过硫酸钾溶液(2.45mM)与5mL ABTS溶液(7mM)制备ABTS储备溶液，并允许在环境温度下将混合物在黑暗中放置12-16小时。ABTS工作溶液通过用70％乙醇稀释储备溶液至734nm处的最终吸光度0.7±0.02来获得。将50μL样品或BHT溶液等分试样与200μLABTS+工作溶液混合，并将734nm处混合物的吸光度记录为Asample。将ABTS+工作溶液(200μL)与70％乙醇(50μL)混合，并将混合物的吸光度记录为A0。样品和ABTS+工作解决方案都是新鲜制备的。所有测量一式三份进行。根据以下等式确定针对ABTS的SC，其中EC 50如前所述计算。

酪氨酸酶抑制率测定方法

本试验选择用酪氨酸酶多巴速率氧化法测定酪氨酸酶抑制率，酪氨酸酶催化L-酪氨酸羟基化转变为L-多巴和氧化L-多巴形成多巴醌，多巴醌经一系列反应后，形成黑色素，酪氨酸酶是是黑色素形成的关键酶，在测定酪氨酸酶的活性时多用L-多巴醌或黑色素的生成速度来表示，在试验中选择用酪氨酸酶催化多巴，并用不含样品含酪氨酸酶的A组做阴性对照，不含样品不含酪氨酸酶B组含样品不含酪氨酸酶D组做空白对照，含样品含酪氨酸酶D组做阳性对照，重复三次，最后利用酶标仪于475nm处测定吸收值，利用公式进行计算算出酪氨酸酶的抑制率。

黄褐斑实验模型制备

挑选昆明种普通的雌性小白鼠50只，体重在18-20g，进行喂养，备用。40只小鼠以0.4％的黄体酮注射液按0.02g/kg的剂量对小鼠进行后肢皮下注射，进行模型的建立，每周6次，连续4周。

动物分组：从之前准备好的50只健康小白鼠中，随机选出10只，作为空白对照组。造模结束后，在其余40只老鼠中选取造模成功的小鼠30只。10只为模型组10只为模型对照组，10只为无患子皂苷组。

给药方法：小鼠背部脱毛，于脱毛处涂抹适量(0.8g左右)的面霜，每日1次，每周6次，连续涂抹30天。在过程中，需要适时的脱毛，大约5天左右脱一次毛。

多指标含量测定法

匀浆前准备

末次涂抹霜制品1h后，取背部脱毛处的皮肤组织0.2-1g，最少可到2-5mg在冰冷的生理盐水中漂洗，除去血液，滤纸吸干水分，称重，放入10ml的小烧杯内，标记为1号。多次取小鼠背部皮肤组织，多次换用多个烧杯，以保证一定的准确性。

准备好充足的0.86％的冷生理盐水，备用。冷生理盐水的取量体积，是小鼠截取的小鼠皮肤组织重量的九倍，放入2号烧杯中。在之前备好的放有组织块的1号烧杯中，用移液管量取2号烧杯中三分之二的冷生理盐水。快速利用备好的小剪子将1号中的组织块快速剪碎。以此类推，此后按照此方法进行。注意：天热时，由于温度较高，影响测定结果，操作的时候，需要在冰水浴中进行，只需将盛有组织的小烧杯放入冰水中操作即可。

10％组织匀浆液的制备

将剪碎完全的皮肤组织块倒入干净研钵中，沿同一方向对组织块进行研磨，直至组织块研磨细碎而充分，移入事先准备好的10ml离心管中，再将2号烧杯中剩余的三分之一的冷生理盐水倒入研钵中，冲洗残留在研钵中的细碎组织，同样将其冲洗液移入离心管中，制备成10％的组织匀浆液，备用。

离心：取装有组织匀浆液的离心管，离心器以3000r/min室温下离心10min后，取上清液，备用。

测定吸光度

按照酪氨酶、SOD、MDA试剂盒的说明书，谨遵上面的操作步骤和注意事项，对样品的吸光度进行测定，并记录相关数据。

超氧化物岐化酶(SOD)含量测定

1.按照说明书上的表格进行取样。

2.用漩涡混匀器充分混匀，置37℃恒温水浴40min。

3.加入显色剂，室温放置10min，于波长550nm处，1cm光径比色杯，双蒸水凋零，比色，测定吸光度。

丙二醛(MDA)含量测定

由于测定丙二醛所用到的组织是小鼠的皮肤组织，用的方法是微量操作方法。做好的组织匀浆，最好不要离心。操作简化后如下：

1.按操作规范配制试剂盒说明书中用到的MDA 3号试剂。

2.用50％的冰醋酸，以2∶1的比例，将上述配好的MDA 3号试剂进行稀释。一次性配置一次性使用。

3.根据试剂盒里面含有的说明书给的表格，进行试剂的加样，完成相关操作。

4.利用漩涡混匀器，将试剂与测定样品充分混匀，此过程中试管需要保鲜薄膜将其管口密封，把试管口扎紧后，再用针头在保鲜膜上扎一个小孔，在95℃水浴锅中水浴40分钟，取出后利用流水冷却的方法冷却试管，然后在3500-4000r/min的条件下，离心10min后。取出上清液，使用721分光光度计，在532nm，1cm光径下，双蒸水凋零后，测各管吸光度值。

5.计算丙二醛的含量。

酪氨酶含量测定

样本处理及要求：

1.组织标本处理：截取小鼠背部皮肤组织块，称取重量，放入烧杯。加入一定量的PH7.4的PBS，用眼科小剪剪碎组织块，这个过程的操作要快速。手工将烧杯中的组织碎液匀浆充分，转移到离心管中，在2000-3000r/min条件下离心20分钟左右，仔细收集上清液。分装，一份待检测，其余冷冻备用。

2.标本采集后应该马上进行实验，不方便立即实验的，标本需要保存在-20℃条件下，而且要尽量避免反复冻融。

操作步骤：按照酪安酶试剂盒说明书，对样品进行稀释、.加样、温育、配液、洗涤、加酶、显色、终止、450nm波长测定等操作步骤对小鼠皮肤组织中酪氨酶的含量进行测定。

四、测试结果

1抗氧化活性检测

表1 HDDP清除率

由表1和图3显示了人参提取精华、AFG以及人参提取精华+AFG均具有较强的清除自由基的能力，和阳性对照，与BHT相比，人参提取精华+AFG的效果显着(P＜0.01)，EC50分别为1.50±0.37μg/mL和5.05±0.51μg/mL。结果表明，人参提取精华+AFG的供氢能力大于BHT。

表2 HDDP清除率

由表2和图4中显示了人参提取精华+AFG和BHT对AB的清除能力百分比。在0.001mg/mL，0.005mg/mL，0.01mg/mL，0.05mg/mL，0.1mg/mL和0.2mg/mL的浓度下，人参提取精华+AFG和BHT的作用相似；然而，在0.01mg/mL和0.05mg/mL的浓度下，人参提取精华+AFG的效果优于BHT(P＜0.01)。人参提取精华+AFG和BHT的EC50值分别为7.49±1.11μg/mL和12.38±2.63μg/mL，人参提取精华+AFG具有比BHT更高的ABTS自由基清除能力。

不同浓度人参提取精华+AFG对酪氨酸酶抑制率的影响

表3 酪氨酸酶抑制率

由表3和图5可以直观分析，人参精华+AFG具有较强的酪氨酸酶的抑制活性，比熊果酸抑制率强，对酪氨酸酶具有明显的抑制作用，均高于单组份提取物，且人参精华主要含有皂苷类，具有良好的油水分配系数，适合经皮给药，可作为优良的天然美白添加剂。

2.小鼠活性分析

含有人参精华+AFG霜涂抹小鼠后，检测皮肤组织中SOD、MDA和酪氨酶的含量，其含量变化如表4至表6所示，将人参精华+AFG祛斑霜与茯苓祛斑霜与空白对照组和模型对照组进行比较，通过统计分析，来反应各组之间的相关指标的变化差异。

表4 各组的小白鼠皮肤中含有的酪氨酸酶的量

通过对上述数据的比较分析可以得出：实验的空白组小鼠与动物模型组中所含有的酪氨酸酶的量有显著差化；模型对照组小鼠与空白组中所含有的酪氨酸酶的量也有明显的变化；人参精华+AFG组与模型组中所含有的酪氨酸酶的量有极显著变化，人参精华+AFG组中小白鼠皮肤中所含有的酪氨酸酶的量呈现明显降低的变化，接近与空白对照组，因此可以看出，人参精华+AFG能够是皮肤中酪氨酸酶含量降低，对小白鼠皮肤组织中含有的酪氨酸酶具有抑制作用(图6和表4)。

表5 各组的小白鼠皮肤中所含有的SOD活性

通过表5和图7可以看出模型组小鼠皮肤中SOD明显低于空白对照组，模型对照组的活性也相对降低；但是人参精华+AFG组与空白组小鼠基本相同，能够提升SOD值，起到修复黑色素损伤，改变皮肤品质。

表6 各组小白鼠皮肤中所含有的MDA的量

通过对表6和图8的分析得出：在进行了动物建模之后的小鼠的皮肤组织中所含有的MDA量明显呈上升的趋势，而对建模后的小鼠涂抹人参精华+AFG之后，其含有的MDA的含量相比于没有涂抹人参精华+AFG的模型组，其含量有明显的下降趋势。说明人参精华+AFG能够提高机体细胞受自由基攻击的程度。

通过分析，得出了下面的结论：在相同的涂抹时间、涂抹量以及其他变量保持不变的情况下，使用人参精华+AFG祛斑霜对小鼠背部皮肤脱毛处进行涂抹一个月后，其中含有人参精华+AFG化合物的祛斑霜霜祛斑效果是最明显的。而且也证明了人参精华+AFG能够有效的抑制酪氨酸酶活性、提高机体清除氧自由基的能力并增强机体细胞受自由基攻击的程度。

通过研究实验证明：黄褐斑的发病原因与体内黑色素的生成增加有关。黑色素是在酪氨酸酶的作用下细胞生成的一种黑色的色素物质，而且超氧自由基(O^2-)也可以促进该反应的进行。因此黄褐斑的产生与酪氨酸酶(TYR)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)三者之间有很大的联系。

酪氨酸酶是黑色素生成的最主要的一种酶，通过对酪氨酸酶含量的改变可以使黑色素生成受到很大的改变。如果使得酪氨酸酶的含量遭受阻碍时，体内生成的黑色素就会降低，相反就会增加，形成黄褐斑。而本文研究证明：1、模型组中酪氨酸酶的量相对于空白组高，说明当酪氨酸酶的含量升高时，可以更多的产生黑色素，进而生成黄褐斑。2、人参精华+AFG组酪祛斑霜可以使体内的酪氨酸酶的含量降低，并且显著低于模型组。3、外涂人参精华+AFG能够使得黄褐斑小鼠体内的酪氨酸酶受到了抑制，而酪氨酸酶作为黑色素生成的关键酶，使得黑色素的形成减少，因此可以达到祛斑的效果。

自由基是指化合物分子中的共价健在体内代谢过程中发生均裂后形成的外层轨道具有不成对电子的原子或原子团，具有极为活泼的化学性质一般人体内超氧自由基的产生和消除有一种平衡状态，即形成和消除相等。SOD可以很好地消除并防止超氧自由基造成的一系列反应，并保证平衡。而本文研究证明：1、模型组中SOD活性相比于空白组低，说明如果SOD的活性变低，就不能很好地消除超氧自由基，造成其含量增加，并且超氧自由基当做反应的开始过程，能够让其反应快速进行，造成黑色素生成增加进而产生黄褐斑。2、人参精华+AFG祛斑霜能使黄褐斑小鼠体内SOD活性明显增高，与模型组有明显的差异。3、外涂二氢槲皮素祛斑霜能使皮肤中SOD活性升高显著。证明其祛斑霜能升高SOD活性，以此控制超氧自由基的形成，并且去除掉体内不需要的自由基，阻碍黑色素的生成，进而可以很好地治疗黄褐斑。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以作出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (1)

1.一种人参活力素护肤品的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：

S1、将人参根粉碎过40目筛，用70％乙醇回流提取三次，合并滤液，减压回收乙醇，浓缩液冷冻干燥，得人参精华粉；

S2、按质量比称取：硬脂酸5％，C18醇2％，棕榈酸异丙酯6％，橄榄油0.5％，乳化剂E18000.3％，尼泊金甲酯0.15％，尼泊金丙酯0.05％，蒸馏水40％，混合搅拌溶解至均匀，得油相A，保温备用；

S3、按质量比称取：氮酮1％、三乙醇胺0.3％，甘油8％，蒸馏水29.5％，混合均匀，得B相，备用；

S4、按质量比称取3％的人参精华粉溶于B相中，并加热至80℃，缓慢搅拌，混合均匀，得C相；

S5、按质量比称取1.5％的乳化剂E1802，将其与所得的C相缓慢加入到A相中，高速搅拌3～5min，混合均匀；降温至65～75℃，缓慢搅拌，进行消泡；继续降温至40～50℃，继续缓慢搅拌，待冷却至室温，停止搅拌，得混合物；

S6、将混合物研磨为糊状混合物，颗粒细度小于5μm后，送入高速搅拌机进行高速强力搅拌为乳状半成品，真空脱气工艺处理，灌装，即可。