CN103565679A

CN103565679A - 一种鲜人参提取物的制备方法及其在化妆品中的应用

Info

Publication number: CN103565679A
Application number: CN201210250197.5A
Authority: CN
Inventors: 高飞飞; 郑毅男; 李永娟; 胡同童; 高畅; 董岭
Original assignee: ZHENGYINAN
Current assignee: ZHENGYINAN
Priority date: 2012-07-19
Filing date: 2012-07-19
Publication date: 2014-02-12
Anticipated expiration: 2032-07-19
Also published as: CN103565679B

Abstract

本发明涉及一种鲜人参提取物的制备方法及其在化妆品中的应用。其特征是以新鲜人参为原料，用0-99%的乙醇闪式提取装置进行提取，过滤滤液在40℃以下回收乙醇，冷冻干燥，制成浸膏或干粉。鲜人参提取物含有较高的腺苷和L-焦谷氨酸，具有新鲜植物特有的低能量性质。其中护肤有效的皂苷Rg1，Rg2，Rb1以及总氨基酸和腺苷含量明显高于白参。其中含有二氢槲皮素80%的落叶松根提取物，该鲜人参提取物能明显抑制酪氨酸酶的活性，对皮肤具有抗氧化、抗衰老、保湿的作用，可用于制备美白、保湿、抗衰老的化妆品，也可以作为化妆品天然添加物起到营养作用。本发明的提取物组合、提取方法以及提取物溶剂不限制于实验例和实施例中所提到的。

Description

一种鲜人参提取物的制备方法及其在化妆品中的应用

技术领域

本发明涉及一种鲜人参提取物，属于中药技术和化妆品应用领域，同时还涉及鲜人参提取物的制备方法及其在化妆品中的作用。

背景技术

人参苦甘，寒。入肺、胃二经。《纲目拾遗》：人参“清肺，生津，止渴。”“补中带表，大能生胃津，祛暑气，降虚火，利四肢头目”，“有生津润燥，益肺和肝之用；有培补元气”的作用。人参属植物的化学成分研究始于1854年，一百多年以来，中国、日本、韩国、美国等国家的学者对人参属植物的化学成分进行了一系列的研究，发现其中主要含有皂苷类，黄酮类，生物碱，甾醇类，木脂素，人参挥发油，氨基酸，多肽，人参多糖等多种化合物。

腺苷(adenosine)全称腺嘌呤核苷， 1993年张永鹤从人参芦头中分离出腺苷，张伟云从人参花中分离出腺苷，并测定了人参和秘鲁人参各部位的腺苷含量。陈霞萍报道腺苷促进体外培养神经干细胞(NSCs)增殖作用。郝宇华报道腺苷具有改善心肌微循环、抑制中性粒细胞功能、抑制氧自由基产生等作用。除此之外，腺苷具有抗氧化作用，可以清除氧自由基用于抗衰老化妆品中。腺苷具有抗炎作用^[i]可以抑制致炎因子^[ii]。腺苷能够激活体内SOD的活性^[iii]，增加内皮细胞的增长^[iv]应用到化妆品中起到抗皱纹的效果。腺苷具有抑制酪氨酸酶的活性^[v]，说明腺苷具有潜在的美白的作用，可以在美白化妆品中起到作用。

无论是动物或植物都有相同氨基酸构成，只是它们的排列方式不同。因此保持皮肤年轻、富有弹性，氨基酸是根本。同时氨基酸又是天然的保湿因子^[vi]。人参中含有大量的氨基酸和蛋白质。氨基酸可使干燥硬化的表皮恢复亲水性的效果^[vii]，氨基酸在角质层可充分表达它的保湿活性^[viii]。蛋氨酸（Methionine）又名甲硫氨酸，是人体必需氨基酸，蛋氨酸能增强组织的新陈代谢和抗炎症的能力。本发明提供的鲜人参提取物中均含有这些氨基酸，这些氨基酸是鲜人参提取物在化妆品应用中的物质基础。研究还发现L-PCA有保护神经细胞免于缺血缺氧损伤的作用。L-焦谷氨酸的含量在鲜人参中含量高，L-PCA在酶的作用下，最终可转化为谷胱苷肽。谷胱苷肽可以清除自由基，起到细胞膜保护作用。焦谷氨酸具有一定的生物活性^[ix]。

人参皂苷是人参的活性物质之一，含量达2%左右。人参皂苷具有抗皮肤衰老的作用，人参皂苷能延缓神经细胞衰老，人参二醇组皂苷和人参三醇组皂苷能拮抗超氧自由基引起的心肌细胞损伤，保护细胞免受氧化损伤。王红丽等在口服人参皂苷对小鼠皮肤抗衰老的研究中，得出人参皂苷使D-半乳糖所致的衰老模型小鼠皮肤中SOD活力、羟脯氨酸含量、血中过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力明显升高，MDA含量显著降低，说明人参皂苷可增强皮肤对抗自由基的能力，减少脂质过氧化产物的堆积。从红参中分离出的人参皂苷Rg3经人肠道菌转化得到主要代谢物人参皂苷Rh2，研究其抗过敏活性，认为人参皂苷Rh2能抑制IgE诱导RBL-2H3细胞和β-氨基己糖苷酶和小鼠被动皮肤过敏反应，作用强于色甘酸钠。人参皂苷Rg1和Rb1能提高UVB照射诱导的HaCaT细胞的存活率并对细胞紫外损伤有保护作用。人参皂苷具有抗氧化作用，能防止皮肤光老化，抑制细胞凋亡。人参皂苷Rg2具有抗脂质过氧化作用，能增强SOD活性，对生物膜具有保护作用^[x]。研究报道，人参皂苷Rb1和Rg3能防止细胞凋^[xi]。人参皂苷Rb1具有较强的抗氧化活性，能对UVB照射细胞氧化受损的角质细胞进行恢复。人参皂苷Rb1能增加人角质细胞的抗氧化酶如SOD的活性，起到抗氧化的作用，可以用于对抗皮肤光老化，具有抗衰老的作用并能促进细胞增殖。人参皂苷Rb1具有美白的效果^[xii]。人参皂苷Rd能减少老化加速小鼠与年老相关的氧化损伤^[xiii]。主要含有人参皂苷的人参正丁醇提取物具有显著的清除超氧阴离子作用^[xiv]。人参皂苷含量高的提取物,其清除DPPH自由基能力较强，表明人参皂苷具有清除DPPH自由基的活性^[xv]。人参皂苷的清除自由基作用表示人参皂苷具有较好的抗衰老的作用，此外人参提取物具有抑制黑色素合成即美白的功效^[xvi]。韩国专利^[xvii]含有黑参提取物的化妆品具有美白、抗皱、抗衰老的作用。黑参能抑制弹性蛋白酶活性，并且水提取物具有强的抗氧化活性。程俊霖等在观察口服人参茎叶总皂苷对皮肤的抗衰老作用中，发现人参茎叶总皂苷可使衰老小鼠全血中的过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶活力显著升高，皮肤组织匀浆中超氧化物歧化酶活力显著升高，丙二醛含量降低，口服总皂苷对D-半乳糖所诱导的小鼠皮肤衰老具有拮抗作用。韩国人申请的“含有人参花或人参种子提取物的皮肤外用剂组合物”专利应用了人参作为化妆品植物原料（专利号：200980122190.1）具有皮肤保护用途、抗老化、抗皱纹、皮肤弹性改善、美白、皮肤保湿、遗传性过敏症等皮肤干燥疾病的预防和改善、角质除去、皮脂调节、抗炎症、痤疮等皮肤问题的预防或改善、皮肤血色改善、预防脱发、抗头皮屑、头发的光泽和柔软性的改善、脸或身体的体积和弹性的增进、脸或身体的线条的改善。

“来自高丽参的黑色素生物合成抑制剂及含有该抑制剂的化妆品组合物用于皮肤增白的用途”专利一文中披露，一种含有源自植物人参的人参皂苷F1作为活性成分具有增白作用（申请号：200780101086.5）。

人参多糖具有清除自由基的作用。人参多糖能减少氧自由基的生成,并且能增强超氧化物歧化酶SOD、谷胱甘肽过氧化物酶等抗氧化酶的活性,清除氧自由基,抑制脂质过氧化反应^[xviii]。

鲜人参中的糖、蛋白质、多肽等物质为人参中固有的成分，鲜人参提取物保留了人参中最初的各种营养以及活性成分包括已知和未知的。新鲜人参中含量较多的腺苷和L-焦谷氨酸，人参皂苷和氨基酸，它们在化妆品中起着重要的的作用。

鲜人参提取物中的大量抗氧化物质是化妆品应用中的有效物质，对皮肤具有抗衰老作用，能使皮肤保持细嫩，其次鲜人参提取物的营养成分能起到保湿的作用，高含量的腺苷具有较强的酪氨酸酶抑制活性，能够起到美白的作用，鲜人参中氨基酸和多糖等能够为皮肤细胞生长提供完好的营养物质。鲜人参提取物可用于日常的保湿美白皮肤护理和抗衰老的皮肤护理。鲜人参提取物保留的原有人参的营养活性成分，添加二氢槲皮素为主的落叶松提取物具有更强的抗氧化和抑制酪氨酸酶的活性可以很好的应用于化妆品以达到美白抗皱纹抗衰老效果。鲜人参提取物能保护皮肤，尤其对眼部等皮肤细嫩部分能起到很好的保护作用，修复已经受损的皮肤细胞，防止过早老化。本发明鲜人参提取物，完全保留其中有效物质，使其具有保持皮肤光滑细嫩，保水性能强，促进皮肤较好吸收，并且具有美白抗皱纹抗衰老的作用，适合化妆品应用。

本发明在鲜人参提取物中加入一定量的落叶松提取物，使得鲜人参提取物中既含有完全鲜人参的有效成分又有二氢槲皮素的有效成分。鲜人参经过文中提取方法处理之后其有效护肤作用增加，其提取物有抗氧化、保湿、抗酪氨酸酶等作用均得到最大限度保留，应用在化妆品中具有抗衰老、保湿皮肤细嫩、美白的作用。同时该鲜人参提取物具有人参皂苷的天然表面活性剂的作用，起泡性强，可以在泡沫型清洁化妆品的制备中应用。

鲜人参用于化妆品的研究和专利较少，李世昌申请用鲜人参汁的饮料制备的专利。鲜人参饮品及其制造方法，鲜人参冲剂，鲜人参饮料、小菜、果丹皮、口服液等食品。一种用于治疗皮炎的中药及其制备方法（申请号：201010567061.8）其中含有鲜人参。美容健身浴用酒及生产方法（申请号：96115157.9）主要是用鲜人参经冷冻后解冻获取其凝结水，调制成浴用酒。出纳人员专用的杀菌洗手液（申请号：200710030800.8）一种出纳人员专用的杀菌洗手液,其成分主要为：黄瓜油,草珊瑚流浸膏,芦荟原浆,海藻原浆,鲜人参原浆，对皮肤具有一定养护作用。含有人参浆果提取物的皮肤外用组合物申请号（申请号200880018262.3）公开了含有人参浆果提取物的皮肤外用组合物。在人参地上部分的人参浆果提取物,具有抗氧化剂作用和DNA损伤的保护作用从而能够促进皮肤胶原蛋白的产生,具有抑制皮肤老化和减少皱纹的作用。抑制UV辐射引起的黑色素产生和减少色素沉着作用,而具有皮肤增白作用;由于能够通过诱导和保持皮肤角质形成细胞的正常分化而具有抑制皮肤干燥症状和过敏症状的作用;由于能够通过添加皮脂的分泌和消炎作用而具有减轻痤疮和皮肤病的作用，使肤色变红润。然而我国传统用药，人参使用的是人参根，人参根中的营养物质组成和含量均与人参浆果不同，人参根中特有的营养物质在传统中医理论里认为是大补元气，延年轻身的滋补至宝，其作用功效与人参浆果不同。人参根具有更大的皮肤滋补潜能。申请号：CN02802347.1的专利涉及含有山参不定根组织培养物提取物的化妆品组合物。通过用乙醇抽提天然山参制备山参不定根组织培养物的提取物。含有该提取物的化妆品组合物具有良好的美白效果。然而该专利应用的是人参组织培养物而非自然生长的人参。专利COSMETICCOMPOSITIONS CONTAINING GINSENG EXTRACT AND DEEP SEA WATER（KR20080056369A）公开了其中主要用的是深海水，含有多种矿物质，补充营养。起到脂类屏障、抗菌抗炎、使皮肤柔润保湿变白和降低刺激性的作用。其中含有0.0001-75wt.%的人参提取物，0.01-25wt.%的深海水，人参提取物的制备方法用乙醇，水或者它们的混合溶剂提取人参。专利KR20080056371A（COSMETIC COMPOSITIONS CONTAINING GINSENGSTEAM EXTRACTAND DEEP SEAWATER）和专利KR20060129198主要材料是蒸制的鲜人参、白参或者红参，120℃下蒸制1.5到16小时，得到红参，备用。本专利创新之处在于采用闪式提取的方法，真空冻干技术，以及添加二氢槲皮素，增加美白、保湿和抗氧化作用。

发明内容

本发明提供了一种具有护肤作用的鲜人参提取物。该提取物具有显著的抗氧化、抑制酪氨酸酶的作用和保湿作用。它具有能够保护皮肤细嫩，起到保湿、抗衰老、抗黑色素产生的作用。

本发明提供了该鲜人参提取物的提取制备方法，适用于工业化生产。

本发明进一步公开了鲜人参提取物在保湿、美白、抗衰老化妆品中的应用。

本发明可以用在美白、保湿、抗衰老化妆品可接受的载体中。

本发明的鲜人参提取物具有美白作用，其中的二氢槲皮素和腺苷能有效抑制酪氨酸酶活性，为其美白成分。本发明所提供的鲜人参提取物可以在化妆品中应用，该鲜人参提取物中含有的人参皂苷等天然表面活性剂和氨基酸、腺苷等保湿因子和营养成分可以很好的起到保湿作用。鲜人参提取物可以应用在化妆品中，因其中含有鲜人参的全部营养物质，人参皂苷在其中起到表面活性剂的作用和抗氧化作用。氨基酸起到保湿的作用，腺苷起到抑制酪氨酸酶美白的作用，L-焦谷氨酸通过谷胱甘肽起到保护细胞的作用，本发明提供的鲜人参提取物其中含有多种对皮肤有效作用物质，这样的组合适合化妆品应用，也可以用于单一剂型或者专门的保护皮肤配方。

本发明提供的鲜人参提取物能抗衰老，其中重要成分二氢槲皮素在有效含量范围能有效抑制DPPH自由基的清除活性，起到抗氧化的作用，可以在皮肤保护应用中起到抗衰老的作用。

本发明中的鲜人参提取物能够美白、保湿、抗氧化，其中含有鲜人参中的完全的营养和护肤成分，以及含有具有强抗氧化和抑制酪氨酸酶活性即具有抗衰老和美白作用的二氢槲皮素的落叶松提取物。本发明鲜人参提取物中含有40-90%的落叶松提取物，其中含有二氢槲皮素的量为0.001%-10%。

本发明鲜人参提取物具有美白保湿抗衰老的作用，其中含有鲜人参和二氢槲皮素的营养物质，其中鲜人参提取物的含量可以在80-99.99%，二氢槲皮素的含量在0.001-10%。

本发明包括了一种美白保湿抗氧化作用的组合物，其中含有鲜人参提取物和二氢槲皮素，该提取物能够起到美白、保湿、抗氧化的作用。本发明中鲜人参提取物在化妆品中添加的量为化妆品总质量的0.01%-30%。

本发明鲜人参提取物可以应用于化妆品合适的剂型中，不限制溶剂。可以与水剂和各种醇类脂肪酸，聚乙二醇，硅油尿囊素，硬脂醇聚醚-2PEG-5甘油硬脂酸酯，PEG-20甘油硬脂酸酯，PEG-10甘油硬脂酸酯，硅石，植醇，丁二醇十四酸异丙酯，植烷三醇，鲸蜡醇聚，二甲基硅氧烷，环戊硅氧烷，甘油，生育酚，醋酸维他命E，防腐剂苯氧乙醇，等聚山梨醇酯80，聚已内酯，PEG-交联聚合物，聚二甲基硅氧烷醇，异十六烷，氢化卵磷脂，透明质酸，透明质酸钠，棕榈酰低聚肽，D-泛醇，甘油，聚甲基丙烯酸酯，醋酸盐维他命E，辛乙二醇，丙烯酰二甲基牛磺酸铵/VP共聚物，甘油聚甲基丙烯酸酯，维他命C磷酸镁盐，PEG-8聚乙二醇-8，卡波姆，己二醇，乙二胺四乙酸二钠,羟乙基尿素组合配方或者任何其他的化妆品配方。

本发明的鲜人参提取物可以在任何适合于皮肤应用的形式中应用。这些配方包括，凝胶、霜剂、乳液、香皂、化妆水、保湿液体、粉饼、面膜、浴液。化妆液体包括水包油型油包水型以及水在二甲硅油中的乳液等。

本发明的提供的鲜人参提取物，制成化妆品后可以在日常生活中应用，一天一次或者一天多次，可以应用到任何适合应用的需要美白、保湿、抗衰老的部位。可以根据要求达到的效果来决定每日的应用次数。最好是一天两次，早晚各一次。可以根据要求达到的护肤效果和提取物中鲜人参以及二氢槲皮素的量来决定化妆品用量。

详细描述

本发明是基于发现鲜人参提取物其中含有的二氢槲皮素具有强的抗氧化活性能清除DPPH自由基，能够抑制酪氨酸酶活性具有美白、抗衰老的作用，同时该鲜人参提取物具有强的体内、体外保湿活性。如实验例6中所示，鲜人参提取物具有接近阳性对照品维生素C的抗氧化活性，实验例5中，在熊果苷的对照下，鲜人参提取物能够明显抑制酪氨酸酶的活性具有美白的作用，实验例7中，单一腺苷样品也具有保湿的作用。

本发明一方面提供了一种鲜人参提取物，具有美白、保湿、抗衰老的皮肤保护作用。

鲜人参在本发明中是一个特征性的成分，其物质保留原有鲜人参的营养物质，提取的时候按照提取物中腺苷的含量定量，例如，鲜人参提取物中腺苷含量在0.4%以上。L-焦谷氨酸含量在1%，如表3所示。

二氢槲皮素可以从多种植物中提取如落叶松，提取方法可以用很多现有的技术。

本发明中的鲜人参提取物中有效二氢槲皮素含量在0.001%以上。其中二氢槲皮素的含量可以达到0.001%，0.002%，0.005%，0.01%，0.05%，0.08%，0.1%，0.2%，0.3%，0.4%或者0.8%，1%2%，5%，8%，10%。

落叶松提取物，可以从各种植物来源得到，用任何一种提取方法提取得到，并且分离提纯。含有二氢槲皮素的落叶松提取物加入到本发明中的鲜人参提取物中，加入量为0.001%-10%，或者是0.01%到5%，这主要决定于落叶松提取物中二氢槲皮素的含量，比如，落叶松提取物中含有落叶松提取物中二氢槲皮素的量为90%，那么其中加入到鲜人参提取物中的量应该是含45%二氢槲皮素的落叶松提取物的一半的量。

其他专利和文献中已经报道的方法也可以用来提取本发明中提到的鲜人参提取物。

鲜人参提取物可以通过溶剂提取，得到想要的物质，包括脂溶性和水溶性的溶剂，其次溶剂可以挥发或者冻干，得到提取物，提取方法可以用闪式提取物法，得到提取溶剂为0-99%的乙醇。溶剂可以是乙醇水混合，包括水，5%的乙醇，10%乙醇，15%乙醇、20%的乙醇、25%乙醇、30%乙醇、35%乙醇、40%乙醇、45%乙醇、50%乙醇、55%乙醇、60%乙醇、65%乙醇、70%乙醇、80%乙醇、85%乙醇、90%乙醇，95%乙醇。99%乙醇。

本发明提供了该鲜人参提取物的制备方法，其特征在于：

(1)取新鲜人参，清洗去除杂质备用。

(2)切片并粉碎，称取一定质量粉碎的鲜人参。

(3)加入2-8倍量的0%-99%的乙醇，以闪式提取装置进行提取，离心过滤，去除残渣，得滤液。

(4)滤液在40℃以下回收乙醇，余下提取物冷冻干燥，制成浸膏或干粉。加入主要含有二氢槲皮素的落叶松提取物0.01%-10%的比例加入。

(5)分装、包装即得鲜人参提取物。

本发明鲜人参提取物的化妆品作用，其特征在于是以鲜人参中特有的腺苷、焦谷氨酸和皂苷以及落叶松提取物中二氢槲皮素为主要有效成分制成的。大量抗氧化物质是化妆品应用中的有效物质，对皮肤具有抗衰老作用，能使皮肤保持细嫩。该人参提取物中具有鲜人参特有的氨基酸、人参皂苷组分的比例，其中含有腺苷、氨基酸等物质具有保湿活性，并且腺苷具有抑制酪氨酸酶美白的作用。该鲜人参提取物中充分保留了人参中的营养物质，该提取物加入到化妆品中能起到保湿、抗皱纹、美白的作用，可用于日常的皮肤护理和抗衰老的皮肤护理化妆品应用。该鲜人参提取物使皮肤光滑细嫩，保水性能强，促进皮肤较好吸收，适合化妆品应用。

化妆品基质为日用化妆品基质所需要的材料，包括所用到的表面活性剂油性成分。鲜人参提取物可以制备的人参化妆品类型灵活，用于护肤润肤（包括全身的皮肤），化妆品类型不限，包括乳液、润肤膏、化妆水、平衡液、保湿霜、营养液、营养霜、眼霜、日霜、晚霜、按摩霜、洗面奶、精华素、洗发水、润发精华、洗浴精华素等。

本发明的积极效果在于：在鲜人参中加入落叶松提取物，使得提取物中既含有人参的有效成分又具有二氢槲皮素的作用。该鲜人参提取物具有二氢槲皮素的抗氧化的作用可以在化妆品的制备中起到抗衰老的作用。该鲜人参提取物有抗氧化、保湿、抗酪氨酸酶等作用，应用在化妆品中具有抗衰老、抗皱、增加皮肤弹性、保湿皮肤细嫩、光滑、美白等作用。

实验例1鲜人参提取物中人参皂苷含量的比较测定

1材料

鲜人参提取物：以上述鲜人参为原料采用实施例1中方法加工而成。白参提取物以白参为原料采用实施例2中方法加工而成。人参皂苷标准品人参皂苷Re，Rg1，Rb1，Rc，Rb2，Rb3，Rd，购自中国药品生物制品检定所，乙腈（色谱纯），美国Fisher公司；纯水，杭州娃哈哈有限公司；其他化学试剂（分析纯）：北京化工厂。

2．仪器

高效液相色谱仪，岛津2010（SPD-20AUV/VIS检测器），日本岛津公司。

3方法

将各种实施例1中的鲜人参提取物，精密称取1g放入带塞的三角瓶中，加入50ml分析甲醇，室温下40KHz，100%功率超声提取2次每次30min。提取完成后，滤纸过滤，溶剂甲醇减压真空回收并浓缩液体，用色谱甲醇定容于25ml的容量瓶中，经过0.23μm微孔滤膜过滤，供高效液相色谱仪测定。

高效液相色谱采用Agilent 1100高效液相色谱仪配合紫外检测器，采用梯度洗脱方式进行，检测波长为203nm。色谱柱为依利特(4.6mmx150mm，5μm)，进样体积20μl，柱温30℃，流动相为乙腈(A)和水(B)按不同体积比混合溶液，梯度洗脱程序如表1所示，流速为1.0ml·min^-1。

表1白参、西洋参流动相梯度洗脱表

4结果

表2鲜人参提取物和白参提取物中的主要人参皂苷含量

鲜人参提取物中人参皂苷含量为9.56%，其中人参皂苷的含量与白参提取物不同。其中目前研究具有皮肤保护、抗氧化、抗衰老作用的人参皂苷Rg1，Rg2，Rb1的含量多于白参提取物。其中鲜人参提取物中的人参皂苷Rg1含量明显高于白参提取物。

皂苷类物质具有天然起泡作用，可以应用的泡沫类清洁产品如洗面奶、洁面乳中。

实验例2鲜参提取物中腺苷、焦谷氨酸的含量比较测定

腺苷具有抑制酪氨酸酶活性，可以起到美白作用，同时腺苷具有抗氧化抗皱纹的作用。焦谷氨酸在鲜人参化妆品中也起到重要作用。以下是鲜人参提取物中腺苷、焦谷氨酸含量的比较测定。

1样品制备方法

腺苷对照品用90%甲醇溶解定容至10mL量瓶中，焦谷氨酸对照品无水乙醇溶解定容至50ml量瓶中，摇匀，过0.45μm滤膜，即得对照品溶液；

鲜人参提取物、白参提取物按照实施例1制备，精密称定1g。加入15%甲醇30ml，超声(250W，60kHz)提取2次，每次30min，过滤，合并2次滤液，45℃以下减压浓缩至干，残渣用10%甲醇溶解并定容至25ml量瓶中，摇匀，过0.45μm滤膜，即得腺苷样品待测液；

鲜人参提取物、白参提取物按照实施例1制备，精密称定5g。将以上样品置具塞锥形瓶中，加50ml无水乙醇浸泡过夜，超声(250W，60kHz)提取过滤，合并2次滤液，减压浓缩，定容至25ml量瓶中，摇匀，过0.45μm滤膜，即得焦谷氨酸供试品溶液。

2色谱条件

2.1腺苷测定色谱条件采用Hypersil ODS2（4.6mm×250mm，5μm）色谱柱；流动相：甲醇-水（10：90）；流速：0.8mL·min^-1；检测波长：260nm；柱温：40℃；进样量20μl。在上述色谱条件下，将对照品溶液与各供试品溶液分别注入色谱仪，腺苷峰和相邻色谱峰的分离度大于1.5，理论塔板数以腺苷峰计算不低于5000。

2.2焦谷氨酸测定色谱条件色谱柱为COSMOSIL 5C₁₈-PAQ（4.6mm×250mm，5μm）柱；流动相：甲醇-5mmol/L乙酸钠水溶液（8：92）；流速：0.5mL·min^-1；检测波长：210nm；柱温40℃；进样量20μl。在上述色谱条件下，将对照品溶液与各供试品溶液分别注入色谱仪，焦谷氨酸峰和相邻色谱峰的分离度大于1.5，理论塔板数以焦谷氨酸峰计算不低于5000。

3结果

图1图2图3分别为腺苷对照品、鲜人参提取物、白参提取物中腺苷HPLC图。鲜参和白参提取物中腺苷、L-焦谷氨酸的含量比较（%）：鲜参：腺苷0.457，L-焦谷氨,1.057，二者之和为1.513；白参：腺苷0.398，L-焦谷氨,0.315，二者之和为0.713。

鲜参提取物中腺苷含量较高，鲜人参提取物中腺苷含量高于白参提取物，鲜人参提取物中L-焦谷氨酸含量明显高于白参提取物。鲜参中的高含量的腺苷和L-焦谷氨酸在化妆品起着相应的作用。加热过程使得白参中焦谷氨酸含量减少，鲜人参提取物中的L-焦谷氨酸含量高，使鲜人参提取物化妆品作用高于白参提取物。

实验例3鲜人参提取物中氨基酸含量比较测定

鲜人参提取物，白参提取物分别按照实施例1中制备。

通过L-8800氨基酸分析仪，检测其中氨基酸含量。

结果：

表3鲜人参提取物中的氨基酸比较测定结果

说明鲜人参提取物中氨基酸含量多于白参提取物，其中的各种氨基酸不同程度的对化妆品有一定的作用。鲜人参提取物中氨基酸含量较多。鲜人提取物中的氨基酸对皮肤具有营养价值。在保湿过程中也起着作用。

实验例4鲜人参提取物中人参多糖含量测定

人参多糖是一类高分子化合物，具有多种药理活性。参考王丹^[xix]、钟岩^[xx]等人参多糖含量测定方法，对鲜人参提取物中人参多糖含量进行测定。

1方法

鲜人参提取物：以上述鲜人参为原料采用实施例1中方法加工而成。

取上述鲜人参提取物0.5g，精密称定，加入80%乙醇50mL热回流提取2次，每次2h，过滤，滤渣挥干溶剂后，以50mL水热回流提取2次，每次2h，过滤，合并水提液，适度浓缩，加无水乙醇使乙醇浓度至80%，于4℃冰箱中静置24h，过滤，得到粗多糖，将粗多糖溶于水，并定容至100mL容量瓶中，摇匀，再精密移取10mL至50mL容量瓶中，蒸馏水定容至刻度，摇匀，即为供试品溶液。

精密量取供试品溶液1mL，于具塞试管中，以蒸馏水为空白，分别加入5%苯酚溶液1mL、浓硫酸8mL于系列试管中，摇匀，放置5min，沸水浴中加热反应30min，冷至室温，于487nm处测定吸光度。根据葡萄糖标准曲线计算人参多糖含量，鲜人参中多糖含量：41.87%（RSD为2.64%）。

鲜人参提取物中人参多糖含量为41.87%。鲜人参中含有多糖，多糖据报道具有保湿护肤的作用，是鲜人参提取物保湿营养作用的物质基础。

实验例4鲜人参提取物体外保湿效果测定

1人参提取液的制备

取新鲜人参，清洗去除污物备用；切片并粉碎，称取100g的粉碎的鲜人参。加入300ml的水（0%乙醇），以闪式提取装置进行提取，离心过滤，去除残渣，得滤液；滤液冷冻干燥，制成干粉即得水提取鲜人参提取物；另外分别用不同浓度乙醇提取鲜人参得到b,c,d.取各鲜人参提取物，配制成为5个不同浓度的供试液，进行体外保湿效果测定。测定样品如下

a.水提取的鲜人参提取物。

b.30%乙醇提取物的鲜人参提取物。

c.60%乙醇提取的鲜人参提取物。

d.90%乙醇提取的鲜人参提取物。

e.水提取鲜人参提取物加入含有80%二氢槲皮素的落叶松提取物0.01%。

f.水提取鲜人参提取物加入含有80%二氢槲皮素的落叶松提取物0.1%。

g.水提取鲜人参提取物加入含有80%二氢槲皮素的落叶松提取物1%。

h.水提取鲜人参提取物加入含有80%二氢槲皮素的落叶松提取物5%。

i.水提取鲜人参提取物加入含有80%二氢槲皮素的落叶松提取物10%。

j.水提取鲜人参提取物加入含有80%二氢槲皮素的落叶松提取物20%。

k.水提取鲜人参提取物加入含有90%二氢槲皮素的落叶松提取物20%。

l.水提取鲜人参提取物加入含有60%二氢槲皮素的落叶松提取物2%。

m.水提取鲜人参提取物加入含有40%二氢槲皮素的落叶松提取物10%。

n.水提取鲜人参提取物加入含有20%二氢槲皮素的落叶松提取物10%。

o.30%乙醇提取鲜人参提取物加入含有80%二氢槲皮素的落叶松提取物10%。

p.60%乙醇提取鲜人参提取物加入含有80%二氢槲皮素的落叶松提取物10%。

q.90%乙醇提取鲜人参提取物加入含有80%二氢槲皮素的落叶松提取物10%。

r.甘油作为阳性参照物。

s.空白基质作为空白对照。

2体外保湿率的测定^{[xxi,xxii,xxiii]}

参考文献并做改进^[xxiv]测定鲜人参体外保湿作用。在干燥器中放置化学试剂的饱和溶液来控制湿度，硫酸铵和醋酸钾的饱和溶液来控制湿度，其湿度分别为RH81%和RH60%。选用适当大小的玻璃板，取鲜人参提取物组合加入空白化妆品基质中共计5g制成待测样品混合均匀，样品中分别含有不同质量浓度的鲜人参提取物，并且待测样品中含水量一致。取样品用量大约2mg/cm²。将加入混合样品的化妆品基质涂敷玻璃板上，放入到饱和湿度的环境中的干燥器中。

将上述样品及对照品置于称量瓶中，不加盖同时置于（20±1）℃，相对湿度（RH）为30%的恒温恒湿箱中，每隔2h取出称量一次（至8h后，在24h单独取出，再次称量），计算失水率，衡量保湿性。

在（20±1）℃、醋酸钾的饱和溶液RH=60%的情况下，重复上述试验

改变实验条件，在（20±1）℃、饱和硫酸铵溶液RH=81%的情况下，重复上述试验

在室温室内湿度情况下，即湿度40%，温度（20±1）℃的情况下，重复上述试验。

测定各供试液的失水湿率，平行测定3次（n=3），计算平均失水率：

S=(W1-W2)∕(W1-W)

S——样品的失水率%

W1——实验前试样的称量瓶重量g

W2——规定时间间隔后样品和称量瓶重量g

W——称量瓶的重量g

3数据分析方法

用SPSS分析软件,单因素方差分析方法分析种样品在两个湿度环境下放置不同时间的差异的显著性，并根据分析结果将样品进行分组。

4结果

4.1供试液不同时间段的失水率

失水率愈小，表明保湿性愈好，保湿效果最佳。各鲜人参提取物保湿效果结果如表6所示。平行测定3次（n=3），RSD<1.0%。60%的湿度结果显示，甘油的失水率最小即甘油的保湿率最强，鲜人参提取物中失水率均小于空白基质即鲜人参在60%湿度情况下，4小时保湿能增加空白基质的保水力。

各鲜人参提取物霜剂均比比空白化妆品基质失水率低，即保湿作用强，即在湿度相对较小，空气较为干燥的时候，鲜人参提取物可以增加化妆品基质的保湿作用。即加入到化妆品中可以起到保湿作用。可以起到长效保湿的作用。在适度湿度的环境下，鲜人参提取物提取物具有较好的保湿作用。在60%湿度下，鲜人参提取物中在1%质量浓度时比空白基质保湿效果好。如图和表4。

表4鲜人参提取物60%湿度失水率（%）

5腺苷的体外保湿结果

按照2所提到的方法对腺苷进行了体外保湿作用测定，腺苷具有保湿作用。可以减少空白基质的失水率，达到保湿的效果。腺苷保湿作用结果见图4。鲜人参提取物中含有大量的腺苷，可以起到保湿的作用。

体外保湿实验的结果显示，各种鲜人参提取物在化妆品中可以起到在保湿的作用。

实验例5鲜人参提取物人体皮肤保湿作用测定

人体保湿效果评价有以甘油为保湿剂，通过对保湿剂的保湿功效评价的研究，来考察皮肤水分含量^[xxv]。

1材料

乙醇为分析纯，北京化工厂。

雪花秀保湿眼霜（Rejuvenating eye cream）,sulwhasoo，韩国。

超声波提取器，河南金鼐科技有限公司。

BP211D电子天平，德国sartorius公司。

移液器（1-100μL）芬兰BioHit公司

SZ-93自动双重纯水蒸馏器，上海亚荣生化仪器厂。

纯水，实验室自制。

鲜人参、白参透明质酸HA-LQH购自上海惠才医药科技有限公司。雪花秀保湿霜（韩国）。

2方法

2.1样品制备

鲜人参提取物：取新鲜人参，清洗去除污物备用；切片并粉碎，称取100g的粉碎的鲜人参。加入300ml的水（0%乙醇），以闪式提取装置进行提取，离心过滤，去除残渣，得滤液；滤液冷冻干燥，制成干粉即得水提取鲜人参提取物；其组合物按照列表中添加二氢槲皮素。取各鲜人参提取物，进行人体保湿效果测定。测定样品如下

a.水提取的鲜人参提取物。

b.30%乙醇提取物的鲜人参提取物。

c.60%乙醇提取的鲜人参提取物。

d.90%乙醇提取的鲜人参提取物。

r.甘油作为阳性参照物。

s.空白基质作为空白对照。

t.透明质酸(HA)为阳性参照物

u.雪花秀保湿眼霜为阳性参照物

v.白参提取物

白参提取物以白参为原料清洗去除污物备用；切片并粉碎，称取100g的粉碎的鲜人参。加入300ml的水（0%乙醇），以闪式提取装置进行提取，离心过滤，去除残渣，得滤液；滤液冷冻干燥，制成干粉即得。

鲜人参提取物人体保湿实验以甘油和雪花秀保湿眼霜为阳性对照样品。

2.2人体保湿率的测定

测定各供试液的保湿活性^[xxvi,xxvii]，平行测定3次（n=3），计算平均保湿率。

实验对象为30名健康志愿受试者，女性15名，男性15名，年龄为20-30岁，所有受试者无皮肤或系统性疾患史，受试部位(手臂内侧)皮肤无异常，不涂抹任何化妆品和外用药物等外用制剂。测试环境中的温度为(20±1)℃，相对湿度保持在30-60%，测试之前志愿者提前在测试环境中休息30min。

选择受试者左、右手臂内侧距手掌5cm处。在前臂选取面积相同的区域(2cm×2cm)作为测试区；右前臂相同的位置作为空白对照，两边对应区域同时测试。使用皮肤水分测定仪进行各区域进行测量。先测各选定区域的空白值，然后在实验区域用移液器取样品100μL，2.5mg±0.1mg样品/cm²的用量，使用乳胶指套将样品及对照样品均匀涂抹。之后分别在15分钟测一次皮肤含水量，2小时后测最后一次皮肤水分含量。测量5次，取平均值。同一志愿者的测试由同一测量人员完成。

2.3统计分析

将30名受试者涂抹同一样品时测得的数据取平均值，采用t检验进行统计分析。

3结果

3.1人体保湿实验结果

表5不同鲜人参提取物中皮肤60min涂布后含水量测定结果

^*P<0.05为由显著差异，^**P<0.01表示有非常显著差异。与空白测定之前对照。与对照品初始皮肤测定值采用不同t-tes检验，用SPSS 16.0软件分析。(SPSS,INC.,Chicago,IL).，通过Duncan检测mean±SD。鲜人参提取物能明显提高皮肤含水量。

表6鲜人参提取物皮肤120min涂布后含水量测定结果均值

鲜人参三个浓度没有差别（p>0.05）。表7选出每个样品的最佳浓度所测的含水量值，说明本发明提出的鲜人参提取物具有保湿作用。体内保湿法的趋势与体外保湿法测定的结果基本一致，两种方法具有一定的相关性。表8为涂布2小时后的皮肤含水量，说明鲜人参提取物比白参提取物2小时的保湿效果好，本发明提供的鲜人参提取物对人体皮肤具保湿作用。

实验例6鲜人参提取物体外对酪氨酸酶活性的影响

1实验材料

L-多巴（DOPA），熊果苷，酪氨酸酶，磷磷酸氢二钠、磷酸二氢钠，纯水等。全自动酶标仪，电子天平，移液器（1-100μL，100-1000μL）鲜人参、白参。

2方法

2.1样品溶液的制备

取新鲜人参，清洗去除污物备用；切片并粉碎，称取100g的粉碎的鲜人参。加入300ml的水（0%乙醇），以闪式提取装置进行提取，离心过滤，去除残渣，得滤液；滤液冷冻干燥，制成干粉即得水提取鲜人参提取物；另外分别用不同浓度乙醇提取鲜人参得到b，c，d.取各鲜人参提取物，配制成为5个不同浓度的供试液，进行测定。

白参水提取物以白参为原料清洗去除污物备用；切片并粉碎，称取100g的粉碎的鲜人参。加入300ml的水（0%乙醇），以闪式提取装置进行提取，离心过滤，去除残渣，得滤液；滤液冷冻干燥，制成干粉即得。

待测样品包括：

a.水提取的鲜人参提取物。

b.30%乙醇提取物的鲜人参提取物。

c.60%乙醇提取的鲜人参提取物。

d.90%乙醇提取的鲜人参提取物。

r.熊果苷。

s.抗坏血酸（维生素C）。

t.白参水提取物。

2.2磷酸缓冲液的制备

1/15mol/l的磷酸缓冲溶液PH6.81的配制，磷酸二氢钠0.46g，磷酸氢二钠0.5932g.PH6.81甲液5ml乙液5ml

乙液：一水磷酸二氢钠，1/15M溶液含9.2g/L 0.46g

甲液：二水磷酸氢二钠，1/15M溶液含11.864g/L 0.5932g

共计100毫升缓冲液PH6.8

2.3酪氨酸酶溶液的制备

酪氨酸酶用pH6.8的磷酸缓冲液配制成为46U/ml的酪氨酸酶溶液。

精密称取25KU的酪氨酸酶0.0123g，用2.2制备的磷酸缓冲液定容到25ml容量瓶中，溶解摇匀备用。

2.4酪氨酸酶抑制作用的测定

鲜人参提取物酪氨酸酶抑制活性测定参考Toshiya Masuda的文献报道^[xxviii]并稍作修改，利用L-DOPA来测定。应用96孔板可以方便测定多个样品的筛选试验。本实验采用96孔板。总共8孔设计，其中A（三孔），B（1孔），C（三孔）D（1孔）其中含有以下反应混合物：A，120μL的1/15M磷酸缓冲液（pH 6.8）和40μL溶解在相同缓冲液中的酪氨酸酶（46units/ml）；B，160μL的同样的缓冲液；C，80μL的同样的缓冲液，40μL溶解在一样缓冲液的酪氨酸酶溶液（46U/ml），40μL的适量的样品缓冲液其中含有5%的乙醇溶解的样品；D，120μL缓冲液和40μL等量的样品溶液其中含有5%的乙醇。在加入以上物质之前，各个测试孔中都加入40μL的2.5mM的L-DOPA缓冲溶液。待各物质加入后轻轻震荡使溶液混合均匀，然后在23℃下静置10分钟，在475nm之处测定其吸光度。酪氨酸酶抑制率用以下公式计算：测定鲜人参提取物a-l，12个样品的抑制酪氨酸酶活性。每个样品重复测定三次，每个样品设置5个浓度，计算EC50。

酪氨酸酶的抑制率（%）=[（A-B）-（C-D）]/（A-B）×100%

表7反应液的组成

3结果

实验结果显示，鲜人参提取物、维生素C及熊果苷在所测试的浓度下均显示出一定的酪氨酸酶抑制活性，熊果苷的抑制率为0.001mg/ml。熊果苷是酪氨酸酶抑制剂美白化妆品中最常用的天然产物之一，本实验测定不同鲜人参提取物对酪氨酸酶抑制活性，熊果苷作为阳性对照。熊果苷是著名的美白物质能够抑制酪氨酸酶的活性，鲜人参提取物(a)能抑制酪氨酸酶活性半数抑制浓度EC₅₀为54.2mg/ml，添加二氢槲皮素的鲜人参提取物抑制酪氨酸酶活性EC₅₀为1.35mg/ml(f)。二氢槲皮素增加了鲜人参提取物的抑制酪氨酸酶活性的作用，所以，本发明提供的鲜人参提取物可抑制酪氨酸酶活性，可以应用到化妆品中起到美白的作用。

a.水提取的鲜人参提取物，EC50为54.2mg/ml。

b.30%乙醇提取物的鲜人参提取物，EC50为58.2mg/ml。

c.60%乙醇提取的鲜人参提取物，EC50为59.2mg/ml。

d.90%乙醇提取的鲜人参提取物，EC50为68.5mg/ml。

e.水提取鲜人参提取物加入含有80%二氢槲皮素的落叶松提取物0.01%，EC50为16.8mg/ml。

f.水提取鲜人参提取物加入含有80%二氢槲皮素的落叶松提取物0.1%，EC50为1.35mg/ml。

g.水提取鲜人参提取物加入含有80%二氢槲皮素的落叶松提取物1%，EC50为1.56mg/ml。

h.水提取鲜人参提取物加入含有80%二氢槲皮素的落叶松提取物5%，EC50为3.89mg/ml。

i.水提取鲜人参提取物加入含有80%二氢槲皮素的落叶松提取物10%，EC50为1.53mg/ml

j.水提取鲜人参提取物加入含有80%二氢槲皮素的落叶松提取物20%，EC50为0.87mg/ml

k.水提取鲜人参提取物加入含有90%二氢槲皮素的落叶松提取物20%，EC50为0.75mg/ml。

l.水提取鲜人参提取物加入含有60%二氢槲皮素的落叶松提取物2%，EC50为12.45mg/ml。

m.水提取鲜人参提取物加入含有40%二氢槲皮素的落叶松提取物10%，EC50为3.48mg/ml。

n.水提取鲜人参提取物加入含有20%二氢槲皮素的落叶松提取物10%，EC50为6.85mg/ml。

o.30%乙醇提取鲜人参提取物加入含有80%二氢槲皮素的落叶松提取物10%,EC50为2.07mg/ml。

p.60%乙醇提取鲜人参提取物加入含有80%二氢槲皮素的落叶松提取物10%，EC50为3.27mg/ml。

q.90%乙醇提取鲜人参提取物加入含有80%二氢槲皮素的落叶松提取物10%，EC50为4.04mg/ml。

r.熊果苷,EC50为0.001mg/ml。

s.抗坏血酸（维生素C）EC50为10.7mg/ml。

t.白参水提取物，EC50为51.4mg/ml。

说明本发明提供的鲜人参提取物具有抑制酪氨酸酶的作用，在化妆品中应用可以起到美白的作用。根据抑制酪氨酸酶活性的作用根据实验结果EC50，本发明中鲜人参提取物在化妆品中适当的添加的量为化妆品总质量的0.01%-30%。

实验例6鲜人参提取物清除DPPH自由基的作用测定

抗氧化与抗衰老具有直接关系，过剩的自由基和活性氧与机体衰老过程相关。自由基会破坏蛋白质等生物大分子，引起人体衰老。许多天然植物提取物具有DPPH自由基清除作用^[xxix]，自由基清除活性，是抗衰老研究的一部分，通过清除自由基的活性可以评价鲜人参提取物在抗衰老化妆品中的应用潜能。

1材料

乙醇，维生素C（Vitamin C），Purity 99%,sigma DPPH，Sigma Chemical Co.(St.Louis,MO,USA)；磷磷酸氢二钠、磷酸二氢钠，全自动酶标仪PLUS 384美国分子生物。电子天平，纯水。移液器（1-100μL，100-1000μL）。维生素C对照品，鲜人参。

2方法

2.1统计处理

数据以平均值±标准差来表示。用SPSS软件进行统计分析，使用单因素方差分析来分析数据，^*P<0.05判定为统计学上差异显著，^**P<0.01判定为统计学上差异极显著，样品EC₅₀通过参考文献^[xxx]，利用SPSS16.0软件计算。

2.2样品溶液的制备

为了考察鲜人参提取物与落叶松提取物对DPPH自由基的影响，做了以下实验。测定的含有鲜人参提取物和落叶松提取物的混合物如下组合所示，分别溶解在50%的乙醇中，让每个样品重复三次。

鲜人参提取物：取新鲜人参，清洗去除污物备用；切片并粉碎，称取100g的粉碎的鲜人参。加入300ml的水（0%乙醇），以闪式提取装置进行提取，离心过滤，去除残渣，得滤液；滤液冷冻干燥，制成干粉即得水提取鲜人参提取物；另外分别用不同浓度乙醇提取鲜人参得到b,c,d.取各鲜人参提取物，配制成为5个不同浓度的供试液，进行测定。

白参水提取物以白参为原料清洗去除污物备用；切片并粉碎，称取100g的粉碎的鲜人参。加入300ml的水（0%乙醇），以闪式提取装置进行提取，离心过滤，去除残渣，得滤液；滤液冷冻干燥，制成干粉即得。配制成0.05g/ml的溶液；对照品（维生素C）用水配制成浓度为0.001g/ml的溶液。待测样品包括：

a.水提取的鲜人参提取物。

b.30%乙醇提取物的鲜人参提取物。

c.60%乙醇提取的鲜人参提取物。

d.90%乙醇提取的鲜人参提取物。

r.抗坏血酸（维生素C）。

s.白参水提取物。

t.二氢槲皮素。

测定其抗氧化作用，来考察该人参提取物的抗衰老作用。

抑制率按照%计算，抗坏血酸作为对照品。

2.3样品溶液的制备

0.0128g DPPH用无水乙醇溶解并定溶于250ml容量瓶中，即为1.3×10^-4mol/l

2.4DPPH测定方法

DPPH自由基清除测定参考^{[xxxi，xxxii]}并加以改进。

各鲜人参提取物组合a-o，分别依次稀释为不同浓度，取80μl，加入到80μl的DPPH自由基乙醇溶液中（1.49×10^-4mmol/L），37℃下黑暗静置30分钟之后，用95%的乙醇溶液做参比，在525nm处测定吸光度B。测定80μl的DPPH自由基乙醇溶液中（1.49×10^-4mmol/L）与80μl水混合液的吸光度A，不同浓度样品水溶液80μl与80μl无水乙醇混合液的吸光度C。96孔板用来快速测定样品吸光度。

A：80μl DPPH 80μl去离子水（1孔）。

B：80μl DPPH+80μl待测样品溶液30分钟后95%乙醇做参比下测定525nm处吸光度（3孔）。

C：80μl待测样品溶液+80μl无水乙醇吸光度（1孔）。

37℃下黑暗静置30分钟之后，用95%的乙醇溶液做参比，在525nm处测定吸光度

自由基清除活性通过以下公式计算：

DPPH清除率%=[1-(B-C)/A]×100

3.结果

鲜人参提取物对DPPH自由基的清除率

a.水提取的鲜人参提取物，DPPH自由基清除作用EC₅₀为80.2mg/ml

b.30%乙醇提取物的鲜人参提取物，DPPH自由基清除作用EC₅₀为95.2mg/ml

c.60%乙醇提取的鲜人参提取物，DPPH自由基清除作用EC₅₀为106.5mg/ml

d.90%乙醇提取的鲜人参提取物，DPPH自由基清除作用EC₅₀为98.4mg/ml

e.水提取鲜人参提取物加入含有80%二氢槲皮素的落叶松提取物0.01%，DPPH自由基清除作用EC₅₀为40.3mg/ml。

f.水提取鲜人参提取物加入含有80%二氢槲皮素的落叶松提取物0.1%，DPPH自由基清除作用EC₅₀为34mg/ml。

g.水提取鲜人参提取物加入含有80%二氢槲皮素的落叶松提取物1%，DPPH自由基清除作用EC₅₀为4.56mg/ml。

h.水提取鲜人参提取物加入含有80%二氢槲皮素的落叶松提取物5%，DPPH自由基清除作用EC₅₀为0.78mg/ml。

i.水提取鲜人参提取物加入含有80%二氢槲皮素的落叶松提取物10%，DPPH自由基清除作用EC₅₀为0.42mg/ml。

j.水提取鲜人参提取物加入含有80%二氢槲皮素的落叶松提取物20%，DPPH自由基清除作用EC₅₀为0.146mg/ml。

k.水提取鲜人参提取物加入含有90%二氢槲皮素的落叶松提取物20%，DPPH自由基清除作用EC₅₀为0.12mg/ml。

l.水提取鲜人参提取物加入含有60%二氢槲皮素的落叶松提取物2%，DPPH自由基清除作用EC₅₀为2.4mg/ml。

m.水提取鲜人参提取物加入含有40%二氢槲皮素的落叶松提取物10%，DPPH自由基清除作用EC₅₀为0.32mg/ml。

n.水提取鲜人参提取物加入含有20%二氢槲皮素的落叶松提取物10%，DPPH自由基清除作用EC₅₀为1.5mg/ml。

o.30%乙醇提取鲜人参提取物加入含有80%二氢槲皮素的落叶松提取物10%,DPPH自由基清除作用EC₅₀为0.9mg/ml。

p.60%乙醇提取鲜人参提取物加入含有80%二氢槲皮素的落叶松提取物10%，DPPH自由基清除作用EC₅₀为2.7mg/ml。

q.90%乙醇提取鲜人参提取物加入含有80%二氢槲皮素的落叶松提取物10%，DPPH自由基清除作用EC₅₀为1.4mg/ml。

r.抗坏血酸（维生素C）DPPH自由基清除作用EC₅₀为0.018mg/ml。

s.白参水提取物，DPPH自由基清除作用EC₅₀为8.039mg/ml。

t.二氢槲皮素DPPH自由基清除作用EC₅₀为0.024mg/ml。

不同溶剂提取物的鲜人参均有一定的清除自由基作用。可以看出与鲜人参提取物相比，添加含有二氢槲皮素的落叶松提取物比不添加的具有更强的DPPH自由基清除活性。本发明中鲜人参提取物其中含有二氢槲皮素，具有较强的DPPH自由基清除作用，说明本发明中的鲜人参提取物具有强的抗氧化作用，可以应用化妆品中起到抗皱纹、防止皮肤老化的作用。根据抗氧化作用实验结果EC50，本发明中鲜人参提取物在化妆品中适当的添加的量为化妆品总质量的0.01%-10%。

附图说明

图1腺苷对照品HPLC图

图2鲜人参提取物中腺苷HPLC图

图3白参提取物中腺苷HPLC图

图460%湿度下0.1%腺苷的体外保湿作用

具体实施方式

为了便于理解本发明，特例举以下实施例。其作用被理解为是对本发明的阐释而非对本发明的任何形式的限制。

实施例1鲜人参提取物的制备

1)取新鲜人参，清洗去除污物备用；

2)切片并粉碎，称取1Kg的粉碎的鲜人参。

3)加入3L的水（0%乙醇），以闪式提取装置进行提取，离心过滤，去除残渣，得滤液；

4)滤液冷冻干燥，制成干粉；加入含有80%二氢槲皮素的落叶松提取物10%，混合均匀。

5)分装、包装即得鲜人参提取物。

实施例2鲜人参提取物的制备

1）取新鲜人参，清洗去除污物备用；

2）切片并粉碎，称取1Kg的粉碎的鲜人参。

3）加入4L 90%的乙醇水溶液，以闪式提取装置进行提取，离心过滤，去除残渣，得滤液；

4）滤液在30℃下，减压旋转蒸发回收乙醇；

5）余下提取物冷冻干燥，制成浸膏；加入含有80%二氢槲皮素的落叶松提取物0.1%，混合均匀。

6）分装、包装即得鲜人参提取物。

实施例3鲜人参提取物的制备

1）取新鲜人参，清洗去除污物备用；

2）切片并粉碎，称取1Kg的粉碎的鲜人参。

3）加入5L的水（0%乙醇），以闪式提取装置提取，离心过滤，去除残渣，得滤液；

4）滤液冷冻干燥，制成干粉；加入含有70%二氢槲皮素的落叶松提取物2%，混合均匀。

5）分装、包装即得鲜人参提取物。

实施例4鲜人参提取物的制备

1)取新鲜人参，清洗去除污物备用；

2)切片并粉碎，称取1Kg的粉碎的鲜人参；

3)加入3L的30%的乙醇，用闪式提取装置提取，离心过滤，去除残渣，得滤液；

4)提取液在35℃下回收乙醇；

6）余下提取物冷冻干燥，制成浸膏；加入含有60%二氢槲皮素的落叶松提取物1%，混合均匀。

7）分装、包装即得鲜人参提取物。

实施例5鲜人参提取物的制备

1)取新鲜人参，清洗去除污物备用；

2)切片并粉碎，称取1Kg的粉碎的鲜人参；

3)加入7L的30%的乙醇，以闪式提取装置进行提取，离心过滤，去除残渣，得滤液；

4)提取液在40℃以下回收乙醇；

5)余下提取物冷冻干燥，制成浸膏，加入含有50%二氢槲皮素的落叶松提取物1%，混合均匀。

6)分装、包装即得鲜人参提取物。

实施例6鲜人参提取物的制备

1）取新鲜人参，清洗去除污物备用；

2）切片并粉碎，称取1Kg的粉碎的鲜人参；

3）加入3L的50%的乙醇，以闪式提取装置进行提取，离心过滤，去除残渣，得滤液。

4）提取液在35℃回收乙醇；

5）余下提取物冷冻干燥，制成干粉；加入含有50%二氢槲皮素的落叶松提取物3%，混合均匀。

6）分装、包装即得鲜人参提取物。

实施例7鲜人参提取物的制备

1）取新鲜人参，清洗去除污物备用；

2）切片并粉碎，称取1Kg的粉碎的鲜人参；

3）加入4L的60%的乙醇，以闪式提取装置进行提取，离心过滤，去除残渣，得滤液。

4）提取液在35℃下，回收乙醇；

5）余下提取物冷冻干燥，制成干粉，加入含有90%二氢槲皮素的落叶松提取物0.5%，混合均匀。

6）分装、包装即得鲜人参提取物。

实施例8鲜人参提取物霜剂的制备

成分w/%

A相

鲜人参提取物10

水50.00

氯化钠(VEL)1.00

生物糖胶-25.00

生物糖胶-15.00

鲜人参提取物3

B相

月桂醇PEG/PPG-18/十八甲基硅油2.00

环甲基硅油13.00

环甲基硅油(及)二甲基硅油多羟醇5.00

双-羟乙基丙基二甲基硅油4.00

环戊硅油(及)二甲基硅油交联共聚物(及)5.00

二甲基硅油/乙烯基二甲基硅油交联共聚物(及)

聚二甲基硅氧烷端醇C12~C15烷基安息香酸酯3.00

聚季戊四醇四乙基已酸酯2.00

甲基异丁烯酸酯交联共聚物2.00

苯氧乙醇(及)尼泊金甲酯(及)尼泊金乙酯(及)

尼泊金丁酯(及)尼泊金异丁酯(及)尼泊金丙酯适量

香精0.20

C相

聚丙烯/聚苯乙烯/乙烯/VA共聚物2.0

将A相加入到B相中，搅拌下加入C相,继续高速搅拌5min。

本品可恢复皮肤弹性，促进胶原蛋白产生，促进透明质酸生成，使皮肤光滑细腻

实施例9鲜人参提取物乳液的制备

实施例10鲜人参提取物化妆水的制备

丙二醇5

1，3-丁二醇5

柠檬酸0.1

柠檬酸钠0.1

实施例1提供的鲜人参提取物0.01%

水89.5

复方抗菌剂香精适量

本品为人参滋养化妆水，将鲜人参提取物1%适量、香精溶解，其余组分溶于水中，然后将两者混合、搅拌均匀，静置，过滤即可。

实施例11鲜人参提取物眼霜的制备

将组分A、B置于乳化器进行乳化，完成后加入鲜人参提取物、香精，搅拌均匀既得成品。本品对抗皮肤衰老有一定效果。

实施例12鲜人参提取物洗面奶的制备

生产工艺为：将Carbopol 941分散于水中，同时将油相加入水相，混合冷却,加入香精和三乙醇胺调节pH值到6，加入鲜人参提取物5%，均质乳化即得。

实施例13鲜人参提取物香皂的制备

备好模型容器，将氢氧化钠以冷水150g溶解放置一旁，等待溶液冷却至50℃。将蜜蜡、棕榈油250g，橄榄油100g，蓖麻油150g加热至50℃。将加热好油相和氢氧化钠70g溶液混合，加入聚乙二醇-90M3g、椰油醇甘油醚磺酸钠1g、硬脂酸钾0.1g、甘油10g、实施例3中提供的鲜人参提取物10g混合均匀调色调香味，加入搅拌至溶液呈现浓稠状，倒入模具中。将模具静置24小时，直到溶液完全凝固。将香皂脱模、切块，修饰，放置在阴凉通风处40天，包装即可使用。

或者在无水钠皂中加入鲜人参提取物以及各种添加剂,按香皂生产工艺加工而成。皂料→添加剂拌和→研磨/精制→压条→切割→打印→检验→包装→入库。

实施例14鲜人参提取物沐浴液的制备

实施例15鲜人参提取物润肤膏的制备

将组分A、组分B（除了香精）乳化后，加入人参提取液、香精，搅拌均匀既得成品。

实施例16鲜人参提取物洗发水的制备

十二烷基聚氧乙烯（3）硫酸酯32

三乙醇胺盐（40%）

十二烷基聚氧乙烯（3）硫酸钠60.

月桂酸二乙醇酰胺4.0

聚乙二醇（400）1.0

香精色素适量，复方抗菌剂螯合剂适量柠檬酸调节PH到6.5，鲜人参提取物4%，去离子水余量。

以上配方为透明液体香波，具有使用方便、泡沫丰富、易于毛发清洗的特点。所用原料（如配方中的烷基硫酸钠、烷基醇酰胺、醇醚硫酸盐等，浊点较低，成品在低温下仍能保持澄清透明的状态）

实施例17鲜人参提取物凝胶面膜的制备

将乳酸0.1g，L-谷氨酸0.1g，聚乙二醇（300）1.0g，3-丁二醇4.0g，鲜人参提取物7%，加入去离子水共100g，加热到75℃，再加入羧甲基纤维素5.0g、成膜剂聚乙烯醇15.0g，搅拌溶解。将尼泊金类0.1g和表面活性剂POE油醇醚0.5g溶解后，加入水相中，进行增溶，脱气，过滤冷却，即得凝胶状揭离开式面膜。

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Claims

1.一种具有抑制酪氨酸酶活性、保湿、抗氧化作用的鲜人参提取物的制备方法，一种从鲜人参中提取、制备的鲜人参提取物，具体方法：取新鲜人参，清洗去除杂质备用，切片并粉碎，称取一定质量粉碎的鲜人参，加入2-8倍量的0%-99%的乙醇，以闪式提取装置进行提取，离心过滤，去除残渣，得滤液，滤液在40℃以下回收乙醇，余下提取物冷冻干燥，制成浸膏或干粉，加入主要含有二氢槲皮素的落叶松提取物0.001%-10%的比例加入，分装、包装即得鲜人参提取物。

2.根据权利要求1，鲜人参提取物中落叶松提取物中含有二氢槲皮素40%-99%。

3.根据权利要求1，鲜人参提取物富含有腺苷和L-焦谷氨酸，以及与白参不同的氨基酸和人参皂苷含量，鲜人参提取物中氨基酸含量较高，人参皂苷Rg1和腺苷含量明显高于白参提取物，这些营养物质具有强的抑制酪氨酸酶作用、抗氧化、保湿作用，在化妆品中添加或者作为天然原料应用，具有美白、保湿、抗衰老的作用。

4.根据权利要求1所得鲜人参提取物能明显抑制酪氨酸酶的活性，具有美白的作用，可作为保湿美白抗氧化类护肤化妆品的添加物。

5.根据权利要求1所得鲜人参提取物含有抗氧化活性物质，人参皂苷、腺苷、人参多糖等，在化妆品中具有抗衰老的作用。

6. 根据权利要求1，鲜人参提取物具有体内、外保湿的作用，其中的腺苷也具有保湿作用，该鲜人参提取物能应用到保湿化妆品中，起到保湿皮肤保湿的作用。

7.根据权利要求1，鲜人参提取物能够抑制酪氨酸酶活性，其中含有的二氢槲皮素的落叶松提取物能显著抑制酪氨酸酶的活性，同时鲜人参闪式提取冻干后得到的提取物中含有的腺苷和焦谷氨酸、人参皂苷能有效地抑制酪氨酸酶的活性。

8.根据权利要求1，鲜人参提取物具有较强的抗氧化活性，其中含有的二氢槲皮素的落叶松提取物具有较强的抗氧化作用，同时鲜人参提取物中含有腺苷和焦谷氨酸、人参皂苷具有强的抗氧化作用。

9.根据权利要求1，鲜人参提取物可以做成一个化妆品可接受的形式，该鲜人参提取物可用于制备保湿、美白、抗衰老三种综合功效的化妆品，用在化妆品中可以起到美白、保湿、抗衰老的作用，也可以在单独功效使用，根据功效本发明中鲜人参提取物在化妆品中添加的量为化妆品总质量的0.01%-30%。

10.根据权利要求1，鲜人参提取物中的人参皂苷具有表面活性剂的作用，可以起到起泡的作用，在清洁类化妆品中可以应用。