CN108431044A - 抗age抗体及其使用方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种抗AGE抗体，所述抗体包含蛋白质或肽，所述蛋白质或肽包含至少一个与特定氨基酸序列具有至少90％序列同一性、优选至少95％序列同一性、更优选至少98％序列同一性的氨基酸序列。所述抗AGE抗体结合至显示羧甲基赖氨酸修饰的蛋白质或肽。所述抗AGE抗体可用于杀死衰老细胞、杀死部分功能或无功能的细胞、治疗肌肉减少症、促进组织或器官再生、促进再生过程或克服衰老效应、治疗动脉粥样硬化、预防或延迟白内障的发作、预防或延迟脂肪组织的损失的发作、增加健康寿命、预防或延迟脊椎弯曲的发作、治疗炎症或自身免疫性病症、治疗神经退行性病症或治疗癌症。

Description

抗AGE抗体及其使用方法
背景
肌肉减少症是与衰老相关的肌肉质量、质量和强度的损失。在生命的第三个十年的某一时刻，人开始丧失肌肉质量和功能。肌肉质量的这种损失通常在75岁左右加速。肌肉减少症在身体活跃和身体不活跃的人群中发展。随着平均人寿命持续增长，肌肉减少症正成为重要的健康问题。由肌肉减少症所致的肌肉质量的损失可导致平衡不良、步速减慢和虚弱。患有肌肉减少症的个体更容易受伤和残疾，并且可能因此无法独立生活。肌肉减少症的传播将可能导致医疗保健和辅助生活费用的增加。
肌肉减少症一直被认为是老化和随时间推移身体自然恶化的必然结果。肌肉减少症的主要治疗方法是运动。体育锻炼(特别是阻力训练或力量训练)可降低肌肉减少症的影响。已经研究或正在研究睾酮、合成代谢类固醇、生长素释放肽、维生素D、血管紧张素转化酶抑制剂(ACE抑制剂)、二十碳五烯酸(EPA)、肌肉生长抑制素、选择性雄激素受体调节剂(SARM)、尿皮素II(Ucn2)作为肌肉减少症的潜在治疗。尽管进行这项研究，但目前不存在美国食品与药品管理局(FDA)批准的用于治疗肌肉减少症的药剂。
最近的研究已经鉴定了细胞衰老与年龄相关性病症(如肌肉减少症)之间的因果关系。明尼苏达州罗彻斯特(Rochester,Minnesota)的梅奥诊所(Mayo Clinic)的研究小组证明，可通过消除其脂肪和肌肉组织中的衰老细胞来延迟老化在小鼠中的影响而无明显副作用(Baker,D.J.等人.,“Clearance of p16Ink4a-positive senescent cells delaysageing-associated disorders”,Nature,第479卷,第232-236页,(2011)).显示在转基因小鼠中消除衰老细胞显著延迟肌肉减少症和白内障的发作，并且减少骨骼肌和眼睛中的衰老指示物。所述研究确立转基因小鼠的用于除去衰老细胞的终生治疗和晚期治疗没有不利副作用，并选择性地延迟依赖于细胞的年龄相关性表型(同上，第234页，第2栏，第16行至第235页，第1栏，第2行)。作者推论，除去衰老细胞可代表用于治疗或延迟人的年龄相关性疾病并改善健康人寿命的途径(同上，第235页，第2栏，第38-51行)。
衰老细胞是部分功能或无功能的细胞并且处于不可逆的增殖停滞状态。衰老是细胞的独特状态，并且与生物标志物相关，如生物标志物p16Ink4a的活化和β-半乳糖苷酶的表达。
高级糖化终产物(AGE；也称为AGE修饰的蛋白或糖化终产物)来自老化细胞中糖与蛋白质侧链的非酶促反应(Ando,K.等人,Membrane Proteins of Human ErythrocytesAre Modified by Advanced Glycation End Products during Aging in theCirculation,Biochem Biophys Res Commun.,第258,123,125卷(1999))。此过程以还原糖与氨基之间的可逆反应以形成席夫碱开始，其继续以形成共价键合的阿马多里重排产物。一旦形成，阿马多里产物经历进一步重排以产生AGE。由糖尿病(DM)引起的高血糖和氧化应激促进膜蛋白的这种翻译后修饰(Lindsey JB,等人,“Receptor For Advanced GlycationEnd-Products(RAGE)and soluble RAGE(sRAGE):Cardiovascular Implications,”Diabetes Vascular Disease Research,第6(1)卷,7-14,(2009))。AGE一直与若干病理病状相关，所述病理病状包括糖尿病并发症、炎症、视网膜病变、肾病、动脉粥样硬化、中风、内皮细胞功能障碍以及神经退行性病症(Bierhaus A,“AGEs and their interaction withAGE-receptors in vascular disease and diabetes mellitus.I.The AGE concept,”Cardiovasc Res,第37(3)卷,586-600(1998))。
AGE修饰的蛋白也是衰老细胞的标志物。糖化终产物与衰老之间的这种关联是本领域中众所周知的。参见例如，Gruber,L.(WO 2009/143411，2009年11月26日)；Ando,K.等人(Membrane Proteins of Human Erythrocytes Are Modified by Advanced GlycationEnd Products during Aging in the Circulation,Biochem Biophys Res Commun.,第258卷,123,125(1999))；Ahmed,E.K.等人(“Protein Modification and ReplicativeSenescence of WI-38Human Embryonic Fibroblasts”Aging Cells,第9卷,252,260(2010))；Vlassara,H.等人(Advanced Glycosylation Endproducts on ErythrocyteCell Surface Induce Receptor-Mediated Phagocytosis by Macrophages,J.Exp.Med.,第166卷,539,545(1987))；以及Vlassara等人(“High-affinity-receptor-mediatedUptake and Degradation of Glucose-modified Proteins:A Potential Mechanism forthe Removal of Senescent Macromolecules”Proc.Natl.Acad.Sci.USAI,第82卷,5588,5591(1985))。此外，Ahmed,E.K.等人表明糖化终产物是“对细胞和细胞外蛋白质的自发损伤的主要原因之一”(Ahmed,E.K.等人，参见上文，第353页)。因此，糖化终产物的累积与衰老和功能缺失相关。
除了肌肉减少症和年龄相关性病症之外，细胞衰老和AGE的累积还牵涉于许多疾病和病症中。中枢神经系统中的细胞如神经胶质细胞、星形胶质细胞和小神经胶质细胞的衰老一直与神经退行性病症相关。衰老星形胶质细胞的异常累积一直与阿尔茨海默病(AD)相关(Bhat,R.等人,“Astrocyte Senescence as a Component of Alzheimer’sDisease”,PLOS ONE,第7(9)卷,e45069,第1-10页(2012年9月))。与正常老化相关的小神经胶质细胞衰老因指示AD的淀粉样蛋白斑的存在而加剧(Flanary,B.E.等人,“EvidenceThat Aging And Amyloid Promote Microglial Cell Senescence”,RejuvenationResearch,第10(1)卷,第61-74页(2007年3月))。AD中具有星形胶质细胞和小神经胶质细胞的AGE的存在是衰老细胞存在的进一步证据(Takeda,A.,等人“Advanced glycation endproducts co-localize with astrocyes and microglial cells in Alzheimer’sdisease brain”,Acta Neuropathologica,第95卷,第555-558页(1998))。基于最近报道的发现，Chinta等人提出与帕金森病(PD)相关的环境压力因素可部分通过引发非神经元胶质细胞内的衰老而起作用，从而导致在这种病症中发生的神经元完整性的特征性下降(Chinta,S.J.等人“Environmental stress,ageing and glial cell senescence:anovel mechanistic link to Parkinson’s disease？”,J Intern Med,第273卷,第429-436页(2013))。星形胶质细胞衰老也与PD相关(M.Mori,“The Parkinsonian Brain:Cellular Senescence and Neurodegeneration,SAGE(2015年6月30日)(sage.buckinstitute.org/the-parkinsonian-brain-cellular-senescence-and-neurodegeneration/)。在过量表达突变型超氧化物歧化酶-1(m-SOD1)的家族性肌萎缩性侧索硬化(ALS)的啮齿动物模型中，获得衰老表型的星形胶质细胞的速率加快(Das,M.M.和Svendsen,C.N.,“Astrocytes show reduced support of motor neurons with agingthat is accelerated in a rodent model of ALS”,Neurobiology of Aging,第36卷,第1130-1139页(2015))。即使在多发性硬化(MS)中，小神经胶质细胞和巨噬细胞也转向强烈促炎症表型，使人想起SASP，并且可通过释放促炎细胞因子和分子而加强神经元损伤(Luessi,F.,等人“Neurodegeneration in multiple sclerosis:novel treatmentstrategies”Expert Rev.Neurother.,第9卷,第1061-1077页(2012))。
一些神经退行性病症与中枢神经系统外部的异常细胞衰老相关。存在于ALS患者的肌肉组织中的大多数卫星细胞(也称为肌卫星细胞)表现出异常的衰老样形态，但是它们可能能够在体外增殖(Pradat,P.-F.等人,“Abnormalities of satellite cellsfunction in amyotrophic lateral sclerosis”Amyotrophic Lateral Sclerosis,第12卷,第264-271页(2011))。卫星细胞是在成熟肌肉中发现的小多能细胞，其能够产生额外的卫星细胞，或分化为成肌细胞以及提供额外的肌核。在杜氏肌营养不良症(MD)的动物模型中，观察到成肌细胞的增殖能力降低和过早衰老(Wright,W.E.,“Myoblast Senescence inMuscular Dystrophy”Exp Cell Res,第157卷,第343-354页(1985))。成肌细胞是分化成肌细胞(也称为肌肉细胞)的前体细胞。
神经退行性病症也与异常蛋白质累积相关(King,O.D.,等人,“The tip of theiceberg:RNA-binding proteins with prion-like domains in neurodegenerativedisease”Brain Res.第1462卷,第61–80页(2012))。PD和路易体痴呆的特征是在神经细胞内部形成的路易体的形成。路易体的主要结构组分是呈原纤维形式的α-突触核蛋白。缠结和斑块的存在是AD的特征，其存在用于明确诊断所述病状。由β-淀粉样蛋白(也称为淀粉样蛋白β、Aβ或Abeta)组成的斑块在神经细胞之间累积。由tau蛋白组成的缠结在细胞内形成扭曲的纤维。朊病毒疾病(也称为传染性海绵状脑病(TSE))包括各种人和动物病症，如克罗伊茨费尔特-雅各布病、变异型克罗伊茨费尔特-雅各布病、牛海绵状脑病(“疯牛”病)、瘙痒症(绵羊和山羊中)、慢性消耗性疾病(鹿和麋鹿中)、库鲁病以及致死性家族性失眠症。朊病毒蛋白是错误折叠的蛋白质分子，其可通过传递错误折叠的蛋白质状态而繁殖，从而导致错误折叠蛋白质的累积并引起组织损伤和细胞死亡(Dobson,D.M.,“The structuralbasis of protein folding and its links with human disease”Phil.Trans.R.Soc.Lond.B,第356卷,第133-145页(2001))。在这些疾病中，据信蛋白质是错误折叠或形成异常聚集体的正常蛋白质。在一些患有家族性ALS患者的情况下，突变的超氧化物歧化酶-1(SOD1)形成内含物并累积(Kato,S.,等人“Advanced glycationendproduct-modified superoxide dismutase-1(SOD1)-positive inclusions arecommon to familial amyotrophic lateral sclerosis patients with SOD1genemutations and transgenic mice expressing human SOD1with a G85R mutation”ActaNeuropathol,第100卷,第490-505页(2000))。
衰老细胞还已知促进癌细胞的生长。衰老细胞与参与细胞间信号传导的许多因子(包括促炎因子)的分泌相关；这些因子的分泌被称为衰老相关分泌表型，或SASP。一项研究表明，衰老的间充质干细胞通过分泌IL-6促进乳腺癌细胞的增殖和迁移(Di,G-h.等人IL-6Secreted from Senescent Mesenchymal Stem Cells Promotes Proliferation andmigration of Breast Cancer Cells,PLOS One,第9卷,11,e113572(2014))。另一项研究表明，衰老的人成纤维细胞通过分泌基质金属蛋白酶而增加肿瘤的生长(Liu,D.等人Senescent Human Fibroblasts Increase the Early Growth of Xenograft Tumors viaMatrix Metalloproteinase Secretion,Cancer Res,第67卷,3117-3126(2007))。
概述
在第一方面，本发明是一种抗AGE抗体，所述抗体包含蛋白质或肽，所述蛋白质或肽包含至少一个与选自由以下各项组成的组的氨基酸序列具有至少90％序列同一性、优选至少95％序列同一性、更优选至少98％序列同一性的氨基酸序列：SEQ ID NO:1、SEQ IDNO:3、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:33、SEQ IDNO:35、SEQ ID NO:37以及SEQ ID NO:39。所述抗体结合至显示羧甲基赖氨酸修饰的蛋白质或肽。
在第二方面，本发明是一种抗AGE抗体，所述抗体包含蛋白质或肽，所述蛋白质或肽包含至少一个与选自由以下各项组成的组的氨基酸序列具有至少90％序列同一性、优选至少95％序列同一性、更优选至少98％序列同一性的氨基酸序列：SEQ ID NO:22、SEQ IDNO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27以及SEQ ID NO:28，所述抗体结合至显示羧甲基赖氨酸修饰的蛋白质或肽。
在第三方面，本发明是一种抗AGE抗体，所述抗体包含重链和轻链。所述重链包含与选自由以下各项组成的组的氨基酸序列具有至少90％序列同一性、优选至少95％序列同一性、更优选至少98％序列同一性的氨基酸序列：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:31以及SEQ ID NO:33，或所述轻链包含与选自由以下各项组成的组的氨基酸序列具有至少90％序列同一性、优选至少95％序列同一性、更优选至少98％序列同一性的氨基酸序列：SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:37以及SEQ ID NO:39。所述抗体结合至显示羧甲基赖氨酸修饰的蛋白质或肽。
在第四方面，本发明是一种抗AGE抗体，所述抗体包含重链和轻链。所述重链包含与选自由以下各项组成的组的氨基酸序列具有至少90％序列同一性、优选至少95％序列同一性、更优选至少98％序列同一性的氨基酸序列：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:31以及SEQ ID NO:33，并且所述轻链包含与选自由以下各项组成的组的氨基酸序列具有至少90％序列同一性、优选至少95％序列同一性、更优选至少98％序列同一性的氨基酸序列：SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:37以及SEQ IDNO:39。所述抗体结合至显示羧甲基赖氨酸修饰的蛋白质或肽。
在第五方面，本发明是一种抗AGE抗体，所述抗体包含互补决定区，所述互补决定区包含至少一个与选自由以下各项组成的组的氨基酸序列具有至少90％序列同一性、优选至少95％序列同一性、更优选至少98％序列同一性的氨基酸序列：SEQ ID NO:23、SEQ IDNO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27以及SEQ ID NO:28。所述抗体结合至显示羧甲基赖氨酸修饰的蛋白质或肽。所述抗体对选自由以下各项组成的组的物种基本上无免疫原性：小鼠、大鼠、山羊、绵羊、牛、马、狗以及猫。
在第六方面，本发明是一种抗体缀合物，所述抗体缀合物包含抗AGE抗体片段，所述抗体片段包含蛋白质或肽，所述蛋白质或肽包含至少一个与选自由以下各项组成的组的氨基酸序列具有至少90％序列同一性、优选至少95％序列同一性、更优选至少98％序列同一性的氨基酸序列：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:37以及SEQ ID NO:39，以及引起AGE修饰的细胞破坏的药剂。所述引起AGE修饰的细胞破坏的药剂与所述抗AGE抗体片段缀合。所述抗体结合至显示羧甲基赖氨酸修饰的蛋白质或肽。
定义
术语“肽”是指由2-50个氨基酸组成的分子。
术语“蛋白质”是指由超过50个氨基酸组成的分子。
术语“肌肉减少症”是指以(1)低肌肉质量和(2)低肌肉功能(低肌肉强度或降低的体能)为特征的综合征。肌肉质量可以通过以下各项来测量：身体成像技术，如计算机断层摄影扫描(CT扫描)、磁共振成像(MRI)或双能X-射线吸光测定法(DXA或DEXA)；生物阻抗分析(BIA)；身体钾测量，如体内钾总量(TBK)或体内部分钾量(PBK)；或人体测量学测量，如中上臂围、皮褶厚度或小腿围。优选地，肌肉质量是通过CT扫描、MRI或DXA来测量。肌肉强度可通过握力强度、膝屈曲/伸展或呼气流量峰值来测量。优选地，肌肉强度是通过握力强度来测量。体能可通过简易体能状况量表、步速测量、起立－行走计时测(TGUG)或楼梯爬升功率测试来测量。优选地，体能是通过步速测量来测量。如果(1)受试者至少25岁并且(2)他或她的测量的肌肉质量和测量的肌肉功能低于相同性别的健康25岁的平均值两个标准偏差或更多并且尚未鉴定替代病理学来说明肌肉质量减少和肌肉功能下降的原因，则可将受试者鉴定为患有肌肉减少症或需要治疗。优选地，正针对肌肉减少症进行治疗的受试者是至少40岁。更优选地，正针对肌肉减少症进行治疗的受试者是至少50岁。最优选地，正针对肌肉减少症进行治疗的受试者是至少60岁。或者，如果(1)他或她的步速在4m路程中小于1.0m/s，并且(2)他或她具有客观测量的低肌肉质量，例如像相对于高度的平方对于男性受试者小于或等于7.23kg/m2或对于女性受试者小于或等于5.67kg/m2的附肢质量，则可将受试者鉴定为患有肌肉减少症或需要治疗(Fielding,R.A.,等人.,“Sarcopenia:an undiagnosedcondition in older adults.Current consensus definition:prevalence,etiology,and consequences”,Journal of the American Medical Directors Association,第12(4)卷,第249-256页(2011年5月)。
术语“神经退行性病症”是指导致在包括脑的中枢神经系统中神经元丧失功能和/或死亡的病症。此类病症包括中枢神经系统神经退行性病症，如AD、PD、路易体痴呆、MS、朊病毒疾病(也称为传染性海绵状脑病(TSE)，包括克罗伊茨费尔特-雅各布病(Creutzfeldt-Jakob disease)、变异型克罗伊茨费尔特-雅各布病、牛海绵状脑病(“疯牛”病)、瘙痒症(绵羊和山羊中)、慢性消耗性疾病(鹿和麋鹿中)、库鲁病和致死性家族性失眠症)以及ALS。
“神经变性蛋白质”是在患有神经退行性病症的患者中累积并与神经退行性病症相关的蛋白质。实例包括β-淀粉样蛋白斑块(与AD相关)、tau蛋白缠结(与AD相关)、突变的超氧化物歧化酶-1(与ALS相关)、朊病毒蛋白质聚集体(与TSE相关)以及α-突触核蛋白原纤维(与PD和路易体痴呆相关)。“神经变性蛋白质”是在神经退行性病症期间累积的蛋白质形式，通常是突变或错误折叠形式。
术语“高级糖化终产物”、“AGE”、“AGE修饰的蛋白或肽”、“糖化终产物”以及“AGE抗原”是指作为糖与进一步重排并形成不可逆的交联的蛋白质侧链的反应的结果而形成的修饰的蛋白质或肽。此过程以还原糖与氨基之间的可逆反应以形成席夫碱开始，其继续以形成共价键合的阿马多里重排产物。一旦形成，阿马多里产物经历进一步重排以产生AGE。AGE修饰的蛋白和针对AGE修饰的蛋白的抗体在Bucala(“Bucala”)的U.S.5,702,704和Al-Abed等人(“Al-Abed”)的U.S.6,380,165中进行了描述。未经历必需重排以形成AGE的糖化蛋白质或肽(如在糖化白蛋白上发现的N-脱氧果糖基赖氨酸)不是AGE。AGE可通过AGE修饰(也称为AGE表位或AGE部分)，如2-(2-呋喃甲酰基)-4(5)-(2-呋喃基)-1H-咪唑(“FFI”)；5-羟甲基-1-烷基吡咯-2-甲醛(“吡咯素(Pyrraline)”)；1-烷基-2-甲酰基-3,4-二糖基吡咯(“AFGP”)(一种非荧光模型AGE)；羧甲基赖氨酸；以及戊糖素的存在来鉴定。ALI(另一种AGE)在Al-Abed中进行了描述。
“与细胞上的AGE修饰的蛋白结合的抗体”、“抗AGE抗体”或“AGE抗体”是指与AGE修饰的蛋白或肽结合的抗体、抗体片段或其他蛋白质或肽，所述AGE修饰的蛋白或肽优选包含抗体的恒定区，其中已被AGE修饰的蛋白或肽是通常发现的结合在细胞表面上的蛋白质或肽，所述细胞优选哺乳动物细胞，更优选人、猫、狗、马、骆驼科动物(例如骆驼或羊驼)、牛、绵羊或山羊细胞。“与细胞上的AGE修饰的蛋白质结合的抗体”、“抗AGE抗体”或“AGE抗体”不包括以相同的特异性和选择性结合至AGE修饰的蛋白质或肽的抗体或其他蛋白质，以及相同的未经AGE修饰的蛋白质或肽(即，AGE修饰的存在不会增加结合)。AGE修饰的白蛋白不是细胞上的AGE修饰的蛋白，因为白蛋白不是通常发现的结合在细胞表面上的蛋白质。“与细胞上的AGE修饰的蛋白结合的抗体”、“抗AGE抗体”或“AGE抗体”仅包括导致细胞除去、破坏或死亡的那些抗体。还包括例如与毒素、药物或其他化学品或颗粒缀合的抗体。优选地，所述抗体是单克隆抗体，但多克隆抗体也是可能的。
术语“衰老细胞”是指处于不可逆的增殖停滞状态并表达一种或多种衰老生物标志物如p16Ink4a的活化或衰老相关β-半乳糖苷酶表达的细胞。还包括表达一种或多种衰老生物标志物、不会在体内增殖、但可在某些条件下在体外增殖的细胞，如在ALS患者的肌肉中发现的一些卫星细胞。
术语“增加健康寿命”是指减少年龄相关性表型。年龄相关性表型包括例如肌肉减少症、白内障、脂肪组织的损失以及脊椎弯曲。
术语“变体”是指与具体鉴定的序列不同的核苷酸、蛋白质或氨基酸序列，其中一个或多个核苷酸、蛋白质或氨基酸残基被缺失、取代或添加。变体可以是天然存在的等位基因变体或非天然存在的变体。所鉴定序列的变体可保留所鉴定序列的一些或全部功能特征。
术语“序列同一性百分比(％)”被定义为在比对序列并且必要时引入空位以实现最大序列同一性百分比，并且不考虑任何保守性取代作为序列同一性的一部分之后，候选序列中与参照多肽序列中的氨基酸残基相同的氨基酸残基的百分比。用于测定氨基酸序列同一性百分比的目的的比对可使用可公开获得的计算机软件，诸如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)软件以各种方式来实现。优选地，使用序列比较计算机程序ALIGN-2来产生序列同一性％值。ALIGN-2序列比较计算机程序可从Genentech,Inc.(South SanFrancisco,CA)公开获得，或者可从源代码编译，所述源代码已经在美国版权局的用户文档中提交并且在美国版权登记号TXU510087下登记。ALIGN-2程序应被编译以在UNIX操作系统(包括数字UNIX V4.0D)上使用。所有序列比较参数都由ALIGN-2程序设置且不改变。
在采用ALIGN-2用于氨基酸序列比较的情况下，给定氨基酸序列A与(to、with或against)给定氨基酸序列B的序列同一性％(可以可替代地被表述为给定氨基酸序列A具有或包括与(to、with或against)给定氨基酸序列B的某一％的氨基酸序列同一性)如下计算：100×分数X/Y，其中X是通过序列比对程序ALIGN-2在A与B的所述程序比对中被计分为相同匹配的氨基酸残基的数目，并且其中Y是B中的氨基酸残基的总数目。在氨基酸序列A的长度不等于氨基酸序列B的长度的情况下，A与B的氨基酸序列同一性％将不等于B与A的氨基酸序列同一性％。除非另外具体地说明，否则在本文中使用的所有氨基酸序列同一性％值是使用ALIGN-2计算机程序获得。
附图简述
图1是抗体结合实验中反应对时间的图。
详述
细胞衰老与肌肉减少症之间的联系的鉴定允许新的治疗可能性。例如，如果将抗AGE抗体施用至受试者，则所述抗体将特异性地且选择性地靶向衰老细胞，并杀死表达AGE修饰的蛋白或肽的此类细胞或诱导此类细胞中的细胞凋亡。
本发明利用以下发现：表达AGE修饰的蛋白或肽的细胞(AGE修饰的细胞)的清除增强有益于治疗或改善肌肉减少症。这可通过向受试者施用抗AGE抗体来完成。
向受试者施用抗AGE抗体也可用于增加健康寿命。健康寿命可通过减少年龄相关性表型而增加。例如，施用抗AGE抗体可用于例如预防或延迟白内障、脊椎弯曲或脂肪组织的损失的发作。
与细胞衰老相关的其他疾病或病症也可用抗AGE抗体治疗或改善。例如，抗AGE抗体可治疗性地用于治疗神经退行性病症或癌症。
与细胞上的AGE修饰的蛋白结合的抗体(“抗AGE抗体”或“AGE抗体”)是本领域中已知的。实例包括U.S.5,702,704(Bucala)和U.S.6,380,165(Al-Abed等人)中所描述的那些。实例包括结合至一种或多种具有AGE修饰的AGE修饰的蛋白的抗体，所述AGE修饰如FFI、吡咯素、AFGP、ALI、羧甲基赖氨酸、羧乙基赖氨酸和戊糖素；以及此类抗体的混合物。优选地，所述抗体结合羧甲基赖氨酸修饰的蛋白质。优选地，所述抗体对将使用其的动物无免疫原性，如对人无免疫原性；伴侣动物，包括猫、狗和马；以及商业上重要的动物，如骆驼(或羊驼)、牛(牛)、绵羊和山羊。更优选地，所述抗体具有与动物的抗体相同的物种恒定区，以降低针对所述抗体的免疫应答，所述抗体如被人源化(针对人)、猫源化(针对猫)、犬源化(针对狗)、马源化(针对马)、骆驼源化(针对骆驼或羊驼)、牛源化(针对牛)、绵羊化(针对绵羊)或山羊化(针对山羊)。最优选地，所述抗体与将使用其的动物的抗体，如人抗体、猫抗体、狗抗体、马抗体、骆驼抗体、牛抗体、绵羊抗体或山羊抗体相同(除了可变区)。下文描述这些动物的抗体的恒定区和其他部分的细节。优选地，所述抗体是单克隆抗体。
特别优选的抗AGE抗体是结合至显示羧甲基赖氨酸修饰的蛋白质或肽的抗体。羧甲基赖氨酸(也称为CML、N(ε)-(羧甲基)赖氨酸、N(6)-羧甲基赖氨酸或2-氨基-6-(羧甲基氨基)己酸)是作为氧化应激和化学糖化的结果在蛋白质或肽和脂质上发现的，并且一直与衰老相关。CML修饰的蛋白质或肽由在各种细胞上表达的受体RAGE识别。CML已被充分研究并且CML相关产品是可商购的。例如，Cell Biolabs公司销售CML-BSA抗原、CML多克隆抗体、CML免疫印迹试剂盒和CML竞争性ELISA试剂盒(www.cellbiolabs.com/cml-assays)。特别优选的抗体包括可商购的小鼠抗糖化终产物抗体的可变区，所述小鼠抗糖化终产物抗体针对与钥孔虫戚血蓝蛋白缀合的羧甲基赖氨酸产生，所述羧甲基赖氨酸MAb(克隆318003)可从R&D Systems,Inc.(Minneapolis,MN；目录号MAB3247)获得；被修饰成具有人恒定区(或将其施用于其中的动物的恒定区)。可商购的抗体，如来自R&D Systems,Inc.的对应于目录号MAB3247的羧甲基赖氨酸抗体可意图用于诊断目的，并且可含有不适合用于动物或人的材料。优选地，可商购的抗体在用于动物或人之前被纯化和/或分离以除去毒素或其他潜在有害物质。
所述抗AGE抗体具有从抗体-抗原复合物的低解离速率或kd(也称为k反向或解离速率)，优选至多9×10-3、8×10-3、7×10-3或6×10-3(sec-1)。所述抗AGE抗体对细胞的AGE修饰的蛋白具有高亲和力，其可表示为至多9×10-6、8×10-6、7×10-6、6×10-6、5×10-6、4×10-6或3×10-6(M)的低解离常数KD。优选地，所述抗AGE抗体的结合性质与图1中所示的可从R&DSystems,Inc.(Minneapolis,MN；目录号MAB3247)获得的羧甲基赖氨酸MAb(克隆318003)相似、相同或优于其。
所述抗AGE抗体可通过抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)破坏AGE修饰的细胞。ADCC是细胞介导的免疫防御机制，其中免疫系统的效应细胞主动溶解膜表面抗原已被特异性抗体结合的靶细胞。ADCC可由天然杀伤(NK)细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞或嗜酸性粒细胞介导。效应细胞结合至结合的抗体的Fc部分。
所述抗AGE抗体可与引起AGE修饰的细胞的破坏的药剂缀合。此类药剂可以是毒素、细胞毒性剂、磁性纳米颗粒以及磁性自旋-涡旋盘。
与抗AGE抗体缀合的毒素，如成孔毒素(PFT)(Aroian R.等人,“Pore-FormingToxins and Cellular Non-Immune Defenses(CNIDs),”Current Opinion inMicrobiology,10:57-61(2007))可被注射到患者体内以选择性地靶向并除去AGE修饰的细胞。所述抗AGE抗体识别并结合至AGE修饰的细胞。然后，毒素在细胞表面引起孔形成，且随后通过渗透性溶解除去细胞。
与抗AGE抗体缀合的磁性纳米颗粒可被注射到患者体内以靶向并除去AGE修饰的细胞。磁性纳米颗粒可通过施加磁场来加热以便选择性地除去AGE修饰的细胞。
作为替代方案，仅在施加磁场时磁化以避免可堵塞血管的自聚集的磁性自旋-涡旋盘在施加磁场时开始自旋，从而引起靶细胞的膜破坏。与抗AGE抗体缀合的磁性自旋-涡旋盘特异性地靶向AGE修饰的细胞类型，而不除去其他细胞。
抗体通常包含多肽的连接以形成“Y”形分子的两条重链和两条轻链。恒定区决定用于靶向抗原的机制。“Y”的末端中的氨基酸序列(可变区)在不同的抗体之间变化。这种变化给予抗体其对结合抗原的特异性。包括轻链和重链末端的可变区被进一步细分为高变区(HV-有时也称为互补决定区或CDR)和框架区(FR)。当重组制备抗体时，还有可能具有单一抗体，所述单一抗体具有结合至两种不同抗原的可变区(或互补决定区)，其中“Y”的每个末端对每种抗原都具有特异性；这些被称为双特异性抗体。
根据本发明的人源化抗AGE抗体可具有SEQ ID NO:22中所示的氨基酸的人恒定区序列。人源化抗AGE抗体的重链互补决定区可具有SEQ ID NO:23(CDR1H)、SEQ ID NO:24(CDR2H)和SEQ ID NO:25(CDR3H)中所示的蛋白质序列中的一个或多个。人源化抗AGE抗体的轻链互补决定区可具有SEQ ID NO:26(CDR1L)、SEQ ID NO:27(CDR2L)和SEQ ID NO:28(CDR3L)中所示的蛋白质序列中的一个或多个。
人(智人)抗体免疫球蛋白G1的重链可具有或可包含SEQ ID NO:1的蛋白质序列。重链的可变结构域可具有或可包含SEQ ID NO:2的蛋白质序列。重链的可变结构域(SEQ IDNO:2)的互补决定区在SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:42和SEQ ID NO:43中示出。人(智人)抗体免疫球蛋白G1的κ轻链可具有或可包含SEQ ID NO:3的蛋白质序列。κ轻链的可变结构域可具有或可包含SEQ ID NO:4的蛋白质序列。任选地，SEQ ID NO:4的位置128处的精氨酸(Arg或R)残基可被省略。轻链的可变结构域(SEQ ID NO:4)的互补决定区在SEQ ID NO:44、SEQID NO:45和SEQ ID NO:46中示出。可变区可以是密码子优化的、合成的并克隆到含有人免疫球蛋白G1恒定区的表达载体中。此外，可变区可用于非人抗体的人源化。
抗体重链可由SEQ ID NO:12的DNA序列(鼠抗AGE免疫球蛋白G2b重链)编码。由SEQID NO:12编码的鼠抗AGE免疫球蛋白G2b重链的蛋白质序列在SEQ ID NO:16中示出。鼠抗体的可变区在SEQ ID NO:20中示出，其对应于SEQ ID NO:16的位置25-142。抗体重链可以可替代地由SEQ ID NO:13的DNA序列(嵌合抗AGE人免疫球蛋白G1重链)编码。由SEQ ID NO:13编码的嵌合抗AGE人免疫球蛋白G1重链的蛋白质序列在SEQ ID NO:17中示出。嵌合抗AGE人免疫球蛋白包含位置25-142中SEQ ID NO:20的鼠可变区。抗体轻链可由SEQ ID NO:14的DNA序列(鼠抗AGEκ轻链)编码。由SEQ ID NO:14编码的鼠抗AGEκ轻链的蛋白质序列在SEQID NO:18中示出。鼠抗体的可变区在SEQ ID NO:21中示出，其对应于SEQ ID NO:18的位置21-132。抗体轻链可以可替代地由SEQ ID NO:15的DNA序列(嵌合抗AGE人κ轻链)编码。由SEQ ID NO:15编码的嵌合抗AGE人κ轻链的蛋白质序列在SEQ ID NO:19中示出。嵌合抗AGE人免疫球蛋白包含位置21-132中SEQ ID NO:21的鼠可变区。
根据本发明的人源化抗AGE抗体可具有或可包含一个或多个人源化重链或人源化轻链。人源化重链可由SEQ ID NO:30、32或34的DNA序列编码。由SEQ ID NO:30、32和34编码的人源化重链的蛋白质序列在SEQ ID NO:29、31和33中示出。人源化轻链可由SEQ ID NO:36、38或40的DNA序列编码。由SEQ ID NO:36、38和40编码的人源化轻链的蛋白质序列在SEQID NO:35、37和39中示出。优选地，人源化抗AGE抗体使人序列的量最大化，同时保留原始抗体特异性。可构建完整的人源化抗体，所述人源化抗体含有重链，所述重链具有选自SEQ IDNO:29、31和33的蛋白质序列；以及轻链，所述轻链具有选自SEQ ID NO:35、37和39的蛋白质序列。
来自非人物种的抗体的蛋白质序列可被修饰为包含具有SEQ ID NO:2中所示的序列的重链的可变结构域或具有SEQ ID NO:4中所示的序列的κ轻链。非人物种可以是伴侣动物，如家猫或家狗；或家畜，如牛、马或骆驼。优选地，非人物种不是小鼠。马(家马)抗体免疫球蛋白γ4的重链可具有或可包含SEQ ID NO:5(EMBL/GenBank登录号AY445518)的蛋白质序列。马(家马)抗体免疫球蛋白δ的重链可具有或可包含SEQ ID NO:6(EMBL/GenBank登录号AY631942)的蛋白质序列。狗(家犬)抗体免疫球蛋白A的重链可具有或可包含SEQ ID NO:7(GenBank登录号L36871)的蛋白质序列。狗(家犬)抗体免疫球蛋白E的重链可具有或可包含SEQ ID NO:8(GenBank登录号L36872)的蛋白质序列。猫(家猫)抗体免疫球蛋白G2的重链可具有或可包含SEQ ID NO:9(DDBJ/EMBL/GenBank登录号KF811175)的蛋白质序列。
骆驼科的动物，如骆驼(单峰驼和双峰驼)、美洲驼(大羊驼、羊驼(Lama pacos)和小羊驼)、羊驼(alpacas)(羊驼(Vicugna pacos))以及原驼(guanacos)(原驼(Lamaguanicoe))具有未在其他哺乳动物中发现的独特抗体。除了由重链和轻链四聚体组成的常规免疫球蛋白G抗体外，骆驼科动物还具有不含轻链并以重链二聚体形式存在的重链免疫球蛋白G抗体。这些抗体被称为重链抗体、HCAb、单结构域抗体或sdAb，并且骆驼科动物重链抗体的可变结构域被称为VHH。骆驼科动物重链抗体缺乏重链CH1结构域并具有未在其他物种中发现的铰链区。阿拉伯骆驼(单峰驼)单结构域抗体的可变区可具有或可包含SEQ IDNO:10(GenBank登录号AJ245148)的蛋白质序列。阿拉伯骆驼(双峰驼)四聚体免疫球蛋白的重链的可变区可具有或可包含SEQ ID NO:11(GenBank登录号AJ245184)的蛋白质序列。
除了骆驼科动物外，重链抗体也在软骨鱼类中发现，如鲨鱼、鳐鱼和魟鱼。这种类型的抗体被称为免疫球蛋白新抗原受体或IgNAR，并且IgNAR的可变结构域被称为VNAR。IgNAR作为两种相同的重链二聚体存在，所述重链二聚体各自由一个可变结构域和五个恒定结构域组成。像骆驼科动物一样，不存在轻链。
另外的非人物种的蛋白质序列可在在线数据库中容易地找到，如国际免疫遗传学信息系统(www.imgt.org)、欧洲生物信息学研究所(www.ebi.ac.uk)、日本的DNA数据库(ddbj.nig.ac.jp/arsa)或国家生物技术信息中心(www.ncbi.nlm.nih.gov)。
抗AGE抗体或其变体可包含与SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:20的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的重链可变区，包括其翻译后修饰。具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的可变区可相对于参考序列含有取代(例如保守取代)插入或缺失，但包含所述序列的抗AGE抗体保留与AGE结合的能力。取代、插入或缺失可发生在可变区域之外的区域。
抗AGE抗体或其变体可包含与SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:21的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的轻链可变区，包括其翻译后修饰。具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的可变区可相对于参考序列含有取代(例如保守取代)插入或缺失，但包含所述序列的抗AGE抗体保留与AGE结合的能力。取代、插入或缺失可发生在可变区域之外的区域。
或者，所述抗体可具有针对与钥孔虫戚血蓝蛋白缀合的羧甲基赖氨酸(CML-KLH)产生的可商购的小鼠抗糖化终产物抗体的互补决定区，所述羧甲基赖氨酸MAb(克隆318003)可从R&D Systems,Inc.(Minneapolis,MN；目录号MAB3247)获得。
所述抗体可具有或可包含允许受试者的免疫系统破坏靶细胞的恒定区。
也可以使用与AGE修饰的蛋白的多于一种类型AGE结合的抗体的混合物。
也可使用双特异性抗体，其是针对两种不同表位的抗AGE抗体。此类抗体将具有来自一种抗AGE抗体的那些的可变区(或互补决定区)和来自不同抗体的可变区(或互补决定区)。
可使用抗体片段来代替完整抗体。例如，免疫球蛋白G可通过用酶消化分解成更小的片段。木瓜蛋白酶消化裂解重链间二硫桥键的N末端侧以产生Fab片段。Fab片段包含轻链和重链的两个N末端结构域中的一个(也称为Fd片段)。胃蛋白酶消化裂解重链间二硫桥键的C末端侧以产生F(ab')2片段。F(ab')2片段包含轻链和通过二硫桥键连接的两个N末端结构域。胃蛋白酶消化也可形成Fv片段(可变片段)和Fc片段(可结晶片段)。Fv片段含有两个N末端可变结构域。Fc片段含有与细胞上的免疫球蛋白受体和补体级联的初始元件相互作用的结构域。胃蛋白酶还可裂解在重链的第三恒定结构域(CH3)之前的免疫球蛋白G以产生大片段F(abc)和小片段pFc'。抗体片段可以可替代地重组产生。
如果需要额外的抗体，则可使用众所周知的方法来产生它们。例如，可通过一次或多次注射免疫原并且如果需要佐剂来在哺乳动物宿主中产生多克隆抗体(pAb)。通常，免疫原(和佐剂)通过皮下或腹膜内注射注射在哺乳动物中。所述免疫原可以是细胞的AGE修饰的蛋白，如AGE-抗凝血酶III、AGE-钙调蛋白、AGE-胰岛素、AGE-血浆铜蓝蛋白、AGE-胶原、AGE-组织蛋白酶B、AGE-白蛋白、AGE-晶状体蛋白、AGE-纤维酶原激活物、AGE-内皮质膜蛋白、AGE-醛还原酶、AGE-转铁蛋白、AGE-纤维蛋白、AGE-铜/锌SOD、AGE-apo B、AGE-纤连蛋白、AGE-胰核糖、AGE-apo A-I和II、AGE-血红蛋白、AGE-Na+/K+-ATP酶、AGE-纤溶酶原、AGE-髓磷脂、AGE-溶菌酶、AGE-免疫球蛋白、AGE-红细胞Glu转运蛋白、AGE-β-N-乙酰己糖激酶、AGE-apo E、AGE-红细胞膜蛋白、AGE-醛糖还原酶、AGE-铁蛋白、AGE-红细胞血影蛋白、AGE-醇脱氢酶、AGE-触珠蛋白、AGE-微管蛋白、AGE-甲状腺激素、AGE-纤维蛋白原、AGE-β2-微球蛋白、AGE-山梨醇脱氢酶、AGE-α1-抗胰蛋白酶、AGE-碳酸脱水酶、AGE-RNA酶、AGE-低密度脂蛋白、AGE-己糖激酶、AGE-apo C-I、AGE-RNA酶、AGE-血红蛋白如AGE-人血红蛋白、AGE-白蛋白如AGE-牛血清白蛋白(AGE-BSA)和AGE-人血清白蛋白、AGE-低密度脂蛋白(AGE-LDL)以及AGE-胶原蛋白IV。AGE修饰的细胞，如AGE修饰的红细胞(完整的、溶解的或部分消化的)也可用作AGE抗原。佐剂的实例包括弗氏完全佐剂、单磷酰脂质A、合成海藻糖二霉菌酸酯、氢氧化铝(明矾)、热休克蛋白HSP 70或HSP96、含单磷酰脂质A的角鲨烯乳剂、α2-巨球蛋白和表面活性物质，包括油乳剂、复合多元醇、聚阴离子以及二硝基苯酚。为了改善免疫应答，可将免疫原缀合至宿主中具有免疫原性的多肽，如钥孔虫戚血蓝蛋白(KLH)、血清白蛋白、牛甲状腺球蛋白、霍乱毒素、不稳定肠毒素、二氧化硅颗粒或大豆胰蛋白酶抑制剂。或者，可在鸡中制备pAb，从而产生IgY分子。
单克隆抗体(mAb)也可通过对宿主或来自宿主的淋巴细胞免疫、收获分泌(或可能分泌)mAb的淋巴细胞、将那些淋巴细胞融合至永生化细胞(例如骨髓瘤细胞)并且选择那些分泌所需mAb的细胞来制备。可使用其他技术，如EBV-杂交瘤技术。通过将编码抗体的可变结构域的基因与人(或其他动物)免疫球蛋白的恒定结构域的基因拼接而产生嵌合抗体的技术产生在氨基酸水平下基本上为人(人源化)或基本上“源化”为另一种动物(如猫、狗、马、骆驼或羊驼、牛、绵羊或山羊)的“嵌合抗体”。如果需要，可通过常规程序如蛋白A-琼脂糖凝胶、羟基磷灰石色谱法、凝胶电泳、渗析、硫酸铵沉淀或亲和色谱法来从培养基或腹水中纯化mAb。另外，可通过对含有第三拷贝IgG人转基因座和沉默的内源小鼠Ig基因座的转基因小鼠免疫或使用人转基因小鼠来产生人单克隆抗体。人源化单克隆抗体及其片段的产生也可通过噬菌体展示技术产生。
“药学上可接受的载体”包括可与药物施用相容的任何及所有溶剂、分散介质、包衣、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等。此类载体或稀释剂的优选实例包括水、盐水、林格氏溶液和葡萄糖溶液。补充活性化合物也可并入组合物中。用于肠胃外施用的溶液或悬浮液可包括无菌稀释剂，如注射用水、盐水溶液、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它合成溶剂；抗菌剂，如苄醇或对羟基苯甲酸甲酯；抗氧化剂，如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；缓冲剂，如乙酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐；以及用于调节张力的试剂，如氯化钠或葡萄糖。可用酸或碱，如盐酸或氢氧化钠调节pH。胃肠外制剂可封闭在安瓿、一次性注射器或由玻璃或塑料制成的多剂量小瓶中。
适合注射的药物组合物包括用于临时制备无菌注射溶液或分散体的无菌水性溶液或分散体。各种赋形剂可包含在适于注射的抗体的药物组合物中。对于静脉内施用，合适的载体包括生理盐水、抑菌水、CREMOPHOR (BASF；Parsippany,NJ)或磷酸盐缓冲盐水(PBS)。在所有情况下，所述组合物必须为无菌的且应为流体，以便使用注射器施用。此类组合物应在制造和储存期间稳定并且必须将其保藏以免受诸如细菌和真菌的微生物污染。例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、抗坏血酸和硫柳汞的各种抗菌剂和抗真菌剂可含有微生物污染。诸如糖的等渗剂，诸如甘露醇、山梨糖醇的多元醇和氯化钠可包含于所述组合物中。可延迟吸收的组合物包含诸如单硬脂酸铝和明胶的试剂。无菌可注射溶液可通过将抗体和任选的其他治疗性组分以需要的量与根据需要的一种成分或多种成分的组合并入适当的溶剂中、随后进行灭菌来制备。用于制备无菌注射溶液的无菌固体的制备方法包括真空干燥和冷冻干燥，以产生固体。
对于通过吸入施用，抗体可作为来自喷雾器或含有合适推进剂(例如气体如二氧化碳)的加压容器的气溶胶喷雾剂递送。抗体也可经由吸入作为干粉递送，例如使用iSPERSETM吸入药物递送平台(PULMATRIX,Lexington,Mass.)。当通过吸入施用时，为鸡抗体(IgY)的抗AGE抗体的使用在各种动物(包括人)中可以是非免疫原性的。
每种类型的抗体的适当剂量水平通常将是每kg患者体重约0.01至500mg。优选地，所述剂量水平将是约0.1至约250mg/kg；更优选约0.5至约100mg/kg。合适的剂量水平可以是约0.01至250mg/kg、约0.05至100mg/kg或约0.1至50mg/kg。在此范围内，剂量可以是0.05至0.5、0.5至5或5至50mg/kg。尽管每种类型的抗体可按每天1至4次的方案施用，如每天一次或两次，但抗体通常具有较长的体内半衰期。因此，每种类型的抗体可每天一次、每周一次、每两周或三周一次、每月一次或每60至90天一次施用。
通过测量肌肉质量随时间推移的变化，可对接受抗AGE抗体施用的受试者进行测试以确定其是否有效治疗肌肉减少症。例如，可测量受试者的基线肌肉质量，随后施用抗AGE抗体。治疗的有效性可通过定期测量受试者的肌肉质量并将后续测量值与基线测量值进行比较来确定。如果受试者在后续测量之间或随时间推移未显示肌肉质量损失，则可认为受试者具有肌肉减少症的有效治疗。或者，也可监测脂肪或肌肉组织中衰老细胞的浓度和/或数量。可重复施用抗体和随后的测试，直到实现所需的治疗结果。
可创建单位剂型以促进施用和剂量均匀性。单位剂型是指适合作为用于待治疗受试者的单一剂量的物理离散单位，其含有治疗有效量的一种或多种类型的抗体以及所需的药物载体。优选地，单位剂型是在密封容器中并且是无菌的。
可发展与细胞衰老相关的肌肉减少症或其他疾病或病症的任何哺乳动物可通过本文所述的方法治疗。人是用于治疗的优选哺乳动物。可治疗的其他哺乳动物包括小鼠、大鼠、山羊、绵羊、牛、马和伴侣动物，如狗或猫。需要治疗的受试者可通过诊断已知引起AGE水平升高的疾病或病症(例如像糖尿病(1型和2型)或与AGE相关的病理病状(例如动脉粥样硬化、炎症、视网膜病变、肾病、中风、内皮细胞功能障碍、神经退行性病症或癌症)的存在来鉴定。此外，受试者可被鉴定以基于其年龄进行治疗。例如，75岁以上的人可针对肌肉减少症而被治疗，而30岁以下的人可能不会被鉴定为需要针对肌肉减少症的治疗。或者，可将以上鉴定的任何哺乳动物或受试者从需要针对肌肉减少症的治疗的患者群体中排除。
如果(1)受试者至少25岁并且(2)他或她的测量的肌肉质量和测量的肌肉功能低于相同性别的健康25岁的平均值两个标准偏差或更多并且尚未鉴定替代病理学来说明肌肉质量减少和肌肉功能下降的原因，则可将受试者鉴定为患有肌肉减少症或需要治疗。优选地，正针对肌肉减少症进行治疗的受试者是至少40岁。更优选地，正针对肌肉减少症进行治疗的受试者是至少50岁。最优选地，正针对肌肉减少症进行治疗的受试者是至少60岁。或者，如果(1)他或她的步速在4m路程中小于1.0m/s，并且(2)他或她具有客观测量的低肌肉质量，例如像相对于高度的平方对于男性受试者小于或等于7.23kg/m2或对于女性受试者小于或等于5.67kg/m2的附肢质量，则可将受试者鉴定为患有肌肉减少症或需要治疗。
在中枢神经系统神经退行性病症的情况下，可能优选将含有抗AGE抗体的组合物直接施用至中枢神经系统。这种施用的实例包括鞘内施用；例如通过导管或永久分流器或可在脑室造瘘术期间放置的其他施用装置施用至脑的脑室系统(脑室内施用)(参见例如，Takami,
A.等人“Treatment of primary central nervous system lymphoma withinduction of complement-dependent cytotoxicity by intraventricularadministration of autologous-serum-supplemented rituximab”,Cancer Sci.第97卷,第80-83页(2006年1月))；以及通过对流增强的递送(CED)而施用(参见例如，Chen,K.S.,等人“MONOCLONAL ANTIBODY THERAPY FOR MALIGNANT GLIOMA”Glioma:ImmunotherapeuticApproaches的第10章,第132-141页(R.Yamanaka编辑；Landes Bioscience and SpringerScience+Business Media,2012))。所有这种中枢神经系统施用可任选地还包括施用血清补充物(如自体血清)以增强AGE抗体的细胞杀伤性质；血清补充物的施用可在施用AGE抗体之前、同时或之后进行。任选地，本文所述的含有AGE抗体的任何组合物还可含有血清补充物(如自体血清补充物)。代替血清补充物或除血清补充物外，也可使用纯化的免疫系统细胞(自体免疫系统细胞或来自供体的免疫系统细胞)；此类细胞的实例包括天然杀伤细胞。除了患者或供体的天然杀伤细胞之外或代替患者或供体的天然杀伤细胞，人工天然杀伤细胞(如的那些)被工程化为直接结合至抗体，或工程化为直接结合至AGE抗原(如羧甲基赖氨酸)(参见www.nantkwest.com)。
在癌症的情况下，可发展转移性癌症的哺乳动物可通过本文所述的方法治疗。人是用于治疗的优选哺乳动物。可治疗的其他哺乳动物包括小鼠、大鼠、山羊、绵羊、牛、马和伴侣动物，如狗或猫。需要治疗的受试者可通过癌症的诊断来鉴定。特别易于转移的癌症包括肺癌、黑色素瘤、结肠癌、肾细胞癌、前列腺癌、宫颈癌、膀胱癌、直肠癌、食道癌、肝癌、口腔和喉癌、多发性骨髓瘤、卵巢癌以及胃癌。治疗可以是经历转移性癌症的患者。治疗也可被施用至患有癌症的患者，但在任何鉴定的转移之前以便防止转移。接受抗AGE抗体施用的受试者可通过检查患者癌症向身体的不同部位，特别是在淋巴结中的扩散来测试所述抗AGE抗体是否有效治疗癌症。可重复施用抗体和随后的测试，直到实现所需的治疗结果。
所述抗AGE抗体可用于细胞纯化过程，如免疫淘选和免疫吸附。纯化过程适用于从组织培养物、细胞培养物或血液中分离合乎需要或不想要的细胞。细胞纯化可用于移植，如骨髓移植；或输血(transfusions)，如输血(blood transfusion)。细胞纯化尤其适用于化疗期间的自体干细胞移植以除去恶性细胞并浓缩有益干细胞，如表达CD34蛋白的造血细胞(CD34+细胞)。使用抗AGE抗体的免疫淘选或免疫吸附可从组织培养物、细胞培养物或血液样品中分离部分功能或无功能的细胞，如衰老细胞。例如，免疫淘选过程可涉及将抗AGE抗体固定在表面，如细胞培养板上。然后可将组织培养物或细胞培养物施加至所述表面上。存在于组织培养物或细胞培养物中的任何衰老细胞都将与抗AGE抗体结合，从而留下不含衰老细胞的纯化的组织培养物或细胞培养物。类似地，免疫吸附过程可涉及将抗AGE抗体结合至细胞培养物中的衰老细胞。然后可使所述细胞通过填充有珠粒的柱，所述珠粒涂覆有结合至抗AGE标记的衰老细胞的蛋白质。通过柱的没有结合的细胞将是不表达AGE的细胞，如完全功能性细胞。免疫吸附过程可用CEPRATE SC干细胞浓缩系统(CellPro,Inc.,Bothell,WA)或类似设备进行。
以下显示对应于SEQ ID NO:1的单字母氨基酸序列：
以上氨基酸序列的位置16-133对应于SEQ ID NO:2。以上氨基酸序列的位置46-50对应于SEQ ID NO:41。以上氨基酸序列的位置65-81对应于SEQ ID NO:42。以上氨基酸序列的位置114-122对应于SEQ ID NO:43。
以下显示对应于SEQ ID NO:3的单字母氨基酸序列：
以上氨基酸序列的位置16-128对应于SEQ ID NO：4。任选地，SEQ ID NO：4的位置128处的精氨酸(Arg或R)残基可被省略。以上氨基酸序列的位置39-54对应于SEQ ID NO：44。以上氨基酸序列的位置70-76对应于SEQ ID NO：45。以上氨基酸序列的位置109-117对应于SEQ ID NO：46。
以下显示对应于SEQ ID NO：12的DNA序列：
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对应于SEQ ID NO:32的DNA序列是ATGGACCCCAAGGGCAGCCTGAGCTGGAGAATCCTGCTGTTCCTGAGCCTGGCCTTCGAGCTGAGCTACGGCCAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGCGCCGAAGTGAAGAAACCTGGCGCCTCCGTGAGGTGTCCTGCAAGGCTTCCGGCTACCTGTTCACCACCTACTGGATGCACTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAGGGCCTGGAATGGATGGGCGAGATCTCCCCTACCAACGGCAGAGCCTACTACAACCAAAATTCCAGGGCAGAGTGACCATGACCGTGGACAAGTCCACCAACACCGCTTACATGGAACTGTCCTCCCTGCGGAGCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCTAGAGCCTACGGCAACTACGATTCGCCTACTGGGGCCAGGGCACCCTCGTGACAGTGTCCTCTGCTAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCTCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGAACCGCCGCCCTGGGCTGCCTGGGAAGGACTACTTCCCCGAGCCCGTGACCGTGTCCTGGAACAGCGGCGCTCTGACCAGCGGAGTGCACACCTTCCCTGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACTCCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAACCACAAGCCCTCCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCTAAGAGCTGCGACAAGACCCACACCTGCCCTCCCTGCCCCGCCCCGAGCTGCTGGGCGGACCCAGCGTGTTCCTGTTCCCTCCCAAGCCCAAGGACACCCTGATGATCAGCCGCACCCCCGAGGTGACCTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAGGACCCCGAGGTGAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCTCGGGAGGAGCAGTACAACTCCACCTACCGCGTGGTGAGCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAGGAGTACAAGTGCAAGGTGAGCAACAAGGCCCTGCCCGCTCCCATCGAGAAGACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCCGGGAGCCTCAGGTGTACACCCTGCCCCCCAGCCGCGACGAGCTGACAAGAACCAGGTGAGCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCTCCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCTGAGAACAACTACAAGACCACCCCTCCCGTGCTGGACAGCGACGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGTCCCGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCAGCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAACCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGAGCCCGGATAGTAA。
对应于SEQ ID NO:33的单字母氨基酸序列是MDPKGSLSWRILLFLSLAFELSYGQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYLFTTYWMHWVRQAPGQGLEWMGEISPTNGRAYYNAKFQGRVTMTVDKSINTAYMELSRLRSDDTAVYYCARAYGNYFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG。
对应于SEQ ID NO:34的DNA序列是ATGGACCCCAAGGGCAGCCTGAGCTGGAGAATCCTGCTGTTCCTGAGCCTGGCCTTCGAGCTGAGCTACGGCCAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGCGCCGAAGTGAAGAAACCTGGCGCCTCCGTGAGGTGTCCTGCAAGGCTTCCGGCTACCTGTTCACCACCTACTGGATGCACTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAGGGCCTGGAATGGATGGGCGAGATCTCCCCTACCAACGGCAGAGCCTACTACAACCAAAATTCCAGGGCAGAGTGACCATGACCGTGGACAAGTCCATCAACACCGCTTACATGGAACTGTCCAGACTGCGGAGCGATGACACCGCCGTGTACTACTGCGCTAGAGCCTACGGCAACTACGATTCGCCTACTGGGGCCAGGGCACCCTCGTGACAGTGTCCTCTGCTAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCTCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGAACCGCCGCCCTGGGCTGCCTGGGAAGGACTACTTCCCCGAGCCCGTGACCGTGTCCTGGAACAGCGGCGCTCTGACCAGCGGAGTGCACACCTTCCCTGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACTCCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAACCACAAGCCCTCCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCTAAGAGCTGCGACAAGACCCACACCTGCCCTCCCTGCCCCGCCCCGAGCTGCTGGGCGGACCCAGCGTGTTCCTGTTCCCTCCCAAGCCCAAGGACACCCTGATGATCAGCCGCACCCCCGAGGTGACCTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAGGACCCCGAGGTGAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCTCGGGAGGAGCAGTACAACTCCACCTACCGCGTGGTGAGCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAGGAGTACAAGTGCAAGGTGAGCAACAAGGCCCTGCCCGCTCCCATCGAGAAGACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCCGGGAGCCTCAGGTGTACACCCTGCCCCCCAGCCGCGACGAGCTGACAAGAACCAGGTGAGCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCTCCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCTGAGAACAACTACAAGACCACCCCTCCCGTGCTGGACAGCGACGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGTCCCGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCAGCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAACCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGAGCCCGGATAGTAA。
对应于SEQ ID NO:35的单字母氨基酸序列是METDTLLLWVLLLWVPGSTGDVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSLVNSNGNTFLQWYQQRPGQSPRLLIYKVSLRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCSQSTHVPPTFGGGTVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC。
对应于SEQ ID NO:36的DNA序列是ATGGAGACCGACACCCTGCTGCTCTGGGTGCTGCTGCTCTGGGTGCCCGGCTCCACCGGAGACGTCGTGATGACCCAGTCCCCTCTGTCCCTGCCTGTGACCCTGGGACAGCCTGCCTCCATCTCCTCAGATCCTCCCAGTCCCTCGTGAACTCCAACGGCAACACCTTCCTGCAGTGGTATCAGCAGCGGCCTGGCCAGAGCCCCAGACTGCTGATCTACAAGGTGTCCCTGCGGTTCTCCGGCGTGCCCGACGATTTTCCGGCTCTGGCTCTGGCACCGACTTCACCCTGAAGATCTCCCGGGTGGAAGCCGAGGACGTGGGCGTGTACTACTGCTCCCAGAGCACCCACGTGCCCCCTACATTTGGCGGAGGCACCAAGTGGAAATCAAGCGGACCGTGGCCGCCCCCAGCGTGTTCATCTTCCCTCCCAGCGACGAGCAGCTGAAGTCTGGCACCGCCAGCGTGGTGTGCCTGCTGAACAACTTCTACCCCCGCGAGGCCAAGGGCAGTGGAAGGTGGACAACGCCCTGCAGAGCGGCAACAGCCAGGAGAGCGTGACCGAGCAGGACTCCAAGGACAGCACCTACAGCCTGAGCAGCACCCTGACCCTGAGCAAGGCCGACTACGAGAAGACAAGGTGTACGCCTGCGAGGTGACCCACCAGGGACTGTCTAGCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACCGGGGCGAGTGCTAA。
对应于SEQ ID NO:37的单字母氨基酸序列是METDTLLLWVLLLWVPGSTGDVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSRQSLVNSNGNTFLQWYQQRPGQSPRLLIYKVSLRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCSQSTHVPPTFGGGTVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC。
对应于SEQ ID NO:38的DNA序列是ATGGAGACCGACACCCTGCTGCTCTGGGTGCTGCTGCTCTGGGTGCCCGGCTCCACCGGAGACGTCGTGATGACCCAGTCCCCTCTGTCCCTGCCTGTGACCCTGGGACAGCCTGCCTCCATCTCCTCAGATCCAGGCAGTCCCTCGTGAACTCCAACGGCAACACCTTCCTGCAGTGGTATCAGCAGCGGCCTGGCCAGAGCCCCAGACTGCTGATCTACAAGGTGTCCCTGCGGTTCTCCGGCGTGCCCGACGATTTTCCGGCTCTGGCTCTGGCACCGACTTCACCCTGAAGATCTCCCGGGTGGAAGCCGAGGACGTGGGCGTGTACTACTGCTCCCAGAGCACCCACGTGCCCCCTACATTTGGCGGAGGCACCAAGTGGAAATCAAGCGGACCGTGGCCGCCCCCAGCGTGTTCATCTTCCCTCCCAGCGACGAGCAGCTGAAGTCTGGCACCGCCAGCGTGGTGTGCCTGCTGAACAACTTCTACCCCCGCGAGGCCAAGGGCAGTGGAAGGTGGACAACGCCCTGCAGAGCGGCAACAGCCAGGAGAGCGTGACCGAGCAGGACTCCAAGGACAGCACCTACAGCCTGAGCAGCACCCTGACCCTGAGCAAGGCCGACTACGAGAAGACAAGGTGTACGCCTGCGAGGTGACCCACCAGGGACTGTCTAGCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACCGGGGCGAGTGCTAA。
对应于SEQ ID NO:39的单字母氨基酸序列是METDTLLLWVLLLWVPGSTGDVVMTQSPLSSPVTLGQPASISCRSSQSLVNSNGNTFLQWYHQRPGQPPRLLIYKVSLRFSGVPDRFSGSGAGKDFTLKISRVEAEDVGVYYCSQSTHVPPTFGQGTLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC。
对应于SEQ ID NO:40的DNA序列是ATGGAGACCGACACCCTGCTGCTCTGGGTGCTGCTGCTCTGGGTGCCCGGCTCCACCGGAGACGTCGTGATGACCCAGTCCCCTCTGTCCAGTCCTGTGACCCTGGGACAGCCTGCCTCCATCTCCTCAGATCCTCCCAGTCCCTCGTGAACTCCAACGGCAACACCTTCCTGCAGTGGTATCACCAGCGGCCTGGCCAGCCTCCCAGACTGCTGATCTACAAGGTGTCCCTGCGGTTCTCCGGCGTGCCCGACGATTTTCCGGCTCTGGCGCTGGCAAGGACTTCACCCTGAAGATCTCCCGGGTGGAAGCCGAGGACGTGGGCGTGTACTACTGCTCCCAGAGCACCCACGTGCCCCCTACATTTGGCCAGGGCACCAACTGGAAATCAAGCGGACCGTGGCCGCCCCCAGCGTGTTCATCTTCCCTCCCAGCGACGAGCAGCTGAAGTCTGGCACCGCCAGCGTGGTGTGCCTGCTGAACAACTTCTACCCCCGCGAGGCCAAGGGCAGTGGAAGGTGGACAACGCCCTGCAGAGCGGCAACAGCCAGGAGAGCGTGACCGAGCAGGACTCCAAGGACAGCACCTACAGCCTGAGCAGCACCCTGACCCTGAGCAAGGCCGACTACGAGAAGACAAGGTGTACGCCTGCGAGGTGACCCACCAGGGACTGTCTAGCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACCGGGGCGAGTGCTAA。
实施例
实施例1：抗糖化终产物抗体的施用的体内研究
为了检查抗糖化终产物抗体的作用，将所述抗体每日两次通过静脉内注射施用于老年CD1(ICR)小鼠(查尔斯河实验室)，每周一次持续三周(第1天、第8天和第15团)，然后是10周无处理期。测试抗体是针对与钥孔虫戚血蓝蛋白缀合的羧甲基赖氨酸产生的可商购的小鼠抗糖化终产物抗体，所述羧甲基赖氨酸MAb(克隆318003)可从R&D Systems,Inc.(Minneapolis,MN；目录号MAB3247)获得。生理盐水的对照参考用于对照动物中。
被称为“幼龄”的小鼠是8周龄，而被称为“老龄”的小鼠是88周(±2天)龄。从施用抗体未观察到不良事件。表1中示出研究中使用的不同动物组。
表1：研究中使用的不同动物组
-＝不适用，Pre＝在处理开始之前安乐死以收集脂肪组织的动物的子集。
通过实时-qPCR在所述组的脂肪组织中定量P16INK4a mRNA(衰老细胞的标志物)。结果在表2中示出。在所述表中，ΔΔCt＝对照组(2)ΔCt平均值–实验组(1或3或5)ΔCt平均值；倍数表达＝2–ΔΔCt。
表2：在脂肪组织中定量的P16INK4a mRNA
以上表指示，与未处理的幼龄小鼠(对照组1)相比，未处理的老龄小鼠(对照组2)表达多2.55倍的p16Ink4a mRNA，如所预期。当将在恢复第85天结束时安乐死的第2组未处理的老龄小鼠与在第22天治疗结束时安乐死的第1组未处理的幼龄小鼠比较时，观察到了这种情况。当将来自第2组未处理的老龄小鼠的结果与来自第85天安乐死的第3组处理的老龄小鼠进行比较时，观察到p16Ink4a mRNA在第2组中比在第3组中高1.23倍。因此，当用2.5μg/克/BID/周的抗体处理老龄小鼠时，p16Ink4a mRNA表达的水平较低。
当将来自第2组(对照)未处理的老龄小鼠的结果与来自第22天安乐死的第5组(5μg/克)处理的老龄小鼠进行比较时，观察到p16Ink4a mRNA在第2组(对照)中比在第5组(5μg/克)中高3.03倍。此比较表明，当以5.0μg/克/BID/周处理第5组动物时，它们具有较低的p16Ink4a mRNA表达水平，从而提供与幼龄未处理的小鼠(即第1组)相当的p16Ink4a mRNA表达水平。与在恢复第85天结束时被安乐死的第3组(2.5μg/克)小鼠不同，第5组小鼠在处理第22天结束时被安乐死。
这些结果表明所述抗体施用导致衰老细胞的杀死。
还测量了腓肠肌的质量，以确定抗体施用对肌肉减少症的作用。结果提供在表3中。结果表明，与对照相比，施用所述抗体增加肌肉质量，但仅在5.0μg/gm/BID/周的较高剂量下。
表3：抗体施用对腓肠肌质量的影响
实施例2：测试抗体的亲和力和动力学
使用Nα,Nα-双(羧甲基)-L-赖氨酸三氟乙酸盐(Sigma-Aldrich,St.Louis,MO)作为细胞的AGE修饰的蛋白的模型底物对实施例1中使用的测试抗体的亲和力和动力学进行分析。使用系列S传感器芯片CM5(GE Healthcare,Pittsburgh,PA)在BIACORETM T200(GEHealthcare,Pittsburgh,PA)上进行无标记的相互作用分析，其中Fc1设定为空白，并且Fc2用测试抗体(分子量为150,000Da)固定。运行缓冲液是25℃温度下的HBS-EP缓冲液(10mMHEPES，150mM NaCl，3mM EDTA和0.05％P-20，pH 7.4)。软件是BIACORETM T200评估软件，版本2.0。在分析中使用双参考(Fc2-1和仅缓冲液注射)，并将数据拟合至Langmuir 1:1结合模型。
表4：亲和力和动力学分析的实验设置
反应对时间的图在图1中示出。从所述分析中确定以下值：ka(1/Ms)＝1.857×103；kd(1/s)＝6.781×10-3；KD(M)＝3.651×10-6；Rmax(RU)＝19.52；并且Chi2＝0.114.由于拟合的Chi2值小于Rmax的10％，所以所述拟合是可靠的。
实施例3：鼠抗AGE IgG2b抗体和嵌合抗AGE IgG1抗体的构建和产生
制备了鼠和嵌合人抗AGE抗体。鼠抗AGE抗体IgG2b重链的DNA序列在SEQ ID NO:12中示出。嵌合人抗AGE抗体IgG1重链的DNA序列在SEQ ID NO:13中示出。鼠抗AGE抗体κ轻链的DNA序列在SEQ ID NO:14中示出。嵌合人抗AGE抗体κ轻链的DNA序列在SEQ ID NO:15中示出。合成了所述基因序列并将其克隆到高表达哺乳动物载体中。对所述序列进行了密码子优化。在进行转染之前，对完成的构建体进行序列确认。
在转染前一天将HEK293细胞接种在摇瓶中，并使用无血清的化学成分确定的培养基生长。将DNA表达构建体瞬时转染到0.03升悬浮HEK293细胞中。在20小时后，对细胞取样以获得存活力和活细胞计数，并测量滴度(Octet QKe,ForteBio)。在整个瞬时转染产生运行中取得另外的读数。在第5天收获培养物，并测量各自的另外样品的细胞密度、存活力和滴度。
收获鼠和嵌合抗AGE抗体的条件培养基，并通过离心和过滤从瞬时转染产生运行中澄清。将上清液在蛋白A柱上运行并用低pH缓冲液洗脱。在等分前进行使用0.2μm膜过滤器的过滤。在纯化和过滤后，根据OD280和消光系数计算蛋白质浓度。表5中示出产量和等分部分的总结：
表5：产量和等分部分
使用GXII,(PerkinElmer)通过毛细管电泳十二烷基硫酸钠(CE-SDS)分析来评估抗体纯度。
实施例4：鼠(亲本)和嵌合抗AGE抗体的结合
通过直接结合ELISA对实施例3中描述的鼠(亲本)和嵌合抗AGE抗体的结合进行了研究。使用抗羧甲基赖氨酸(CML)抗体(R&D Systems,MAB3247)作为对照。将CML与KLH(CML-KLH)缀合，并将CML和CML-KLH两者过夜涂覆到ELISA板上。使用HRP-山羊抗小鼠Fc来检测对照和鼠(亲本)抗AGE抗体。使用HRP-山羊抗人Fc来检测嵌合抗AGE抗体。
在pH 6.5的1x磷酸盐缓冲液中将抗原稀释至1μg/mL。将96孔微量滴定ELISA板用100μL/孔的稀释抗原涂覆，并使其在4℃下静置过夜。用1x PBS、2.5％BSA封闭板，并在室温下在第二天早上放置1-2小时。用1x PBS、1％BSA以50μg/mL的起始浓度连续稀释来制备抗体样品。将第二抗体以1:5,000稀释。将100μL抗体稀释液施加至每个孔。将板在微板振荡器上在室温下孵育0.5-1小时。将所述板用1x PBS洗涤3次。将100μL/孔稀释的HRP缀合的山羊抗人Fc第二抗体施加至孔中。将板在微板振荡器上孵育1小时。然后将板用1x PBS洗涤3次。向每个孔中加入100μL HRP底物TMB以使板显影。在3-5分钟过后，通过加入100μL的1N HCl终止反应。仅用CML涂覆进行第二直接结合ELISA。使用酶标仪读取OD450处的吸光度。
CML和CML-KLH ELISA的OD450吸光度原始数据在以下板图中示出。使用孔板中的96个孔中的48个。板图中的空白孔表示未使用的孔。
CML和CML-KLH ELISA的板图：
以下板图中示出仅CML ELISA的OD450吸光度原始数据。使用孔板中的96个孔中的24个。板图中的空白孔表示未使用的孔。
仅CML ELISA的板图：
对照和嵌合抗AGE抗体显示与CML和CML-KLH两者的结合。鼠(亲本)抗AGE抗体显示与CML或CML-KLH的非常弱的结合至无结合。来自重复ELISA的数据证实了对照和嵌合抗AGE与CML的结合。所有缓冲液对照均显示负信号。
实施例5：人源化抗体
通过产生将亲本(小鼠)抗体序列的选择部分与人框架序列融合的多个杂交序列来设计人源化抗体。基于整个框架中的总体序列同一性、匹配界面位置、类似分类的CDR规范位置以及必须除去的N-糖基化位点的存在来鉴定受体框架。基于两种不同的重链和轻链人受体框架设计了三条人源化轻链和三条人源化重链。重链的氨基酸序列在SEQ ID NO:29、31和33中示出，它们分别由SEQ ID NO:30、32和34中所示的DNA序列编码。轻链的氨基酸序列在SEQ ID NO:35、37和39中示出，它们分别由SEQ ID NO:36、38和40中所示的DNA序列编码。通过眼睛和计算机建模对人源化序列进行系统地分析，以分离最有可能保留抗原结合的序列。目标是使最终人源化抗体中人序列的量最大化，同时保留原始抗体特异性。轻和重人源化链可组合以产生九种变体完全人源化抗体。
对三条重链和三条轻链进行了分析以确定它们的人性。根据Gao,S.H.,等人,“Monoclonal antibody humanness score and its applications”,BMC Biotechnology,13:55(2013年7月5日)中所描述的方法来计算抗体人性得分。人性得分表示人样抗体可变区序列的样子。对于重链，79或更高的得分表示看起来人样；对于轻链，86或更高的得分表示看起来人样。以下表6中示出三条重链、三条轻链、亲本(小鼠)重链和亲本(小鼠)轻链的人性：
表6：抗体人性
抗体 人性(框架+CDR)
亲本(小鼠)重链 63.60
重链1(SEQ ID NO:29) 82.20
重链2(SEQ ID NO:31) 80.76
重链3(SEQ ID NO:33) 81.10
亲本(小鼠)轻链 77.87
轻链1(SEQ ID NO:35) 86.74
轻链2(SEQ ID NO:37) 86.04
轻链3(SEQ IN NO:39) 83.57
通过首先合成可变区序列构建了全长抗体基因。对所述序列进行优化以用于在哺乳动物细胞中表达。然后将这些可变区序列克隆到已含有人Fc结构域的表达载体中；对于重链，使用IgG1。
通过在不存在血清的情况下使用化学成分确定的培养基将重链和轻链的质粒转染到悬浮HEK293细胞中来进行人源化抗体的小批量生产。使用MabSelect SuRe蛋白A培养基(GE Healthcare)纯化条件培养基中的完整抗体。
从具有SEQ ID NO:29、31和33中所示的氨基酸序列的三条重链和具有SEQ ID NO:35、37和39中所示的氨基酸序列的三条轻链的每种组合产生了九种人源化抗体。还制备了比较嵌合亲本抗体。以下表7中示出所述抗体和它们各自的滴度：
表7：抗体滴度
抗体 滴度(mg/L)
嵌合亲本 23.00
SEQ ID NO:29+SEQ ID NO:35 24.67
SEQ ID NO:29+SEQ ID NO:37 41.67
SEQ ID NO:29+SEQ ID NO:39 29.67
SEQ ID NO:31+SEQ ID NO:35 26.00
SEQ ID NO:31+SEQ ID NO:37 27.33
SEQ ID NO:31+SEQ ID NO:39 35.33
SEQ ID NO:33+SEQ ID NO:35 44.00
SEQ ID NO:33+SEQ ID NO:37 30.33
SEQ ID NO:33+SEQ ID NO:39 37.33
例如，可通过剂量依赖性结合ELISA或基于细胞的结合测定来评估所述人源化抗体的结合。
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序列表
<110> Lewis S. Gruber
<120> 抗AGE抗体及其使用方法
<130> SIW01-007-CIP-WO
<160> 46
<210> 1
<211> 463
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 修饰的智人免疫球蛋白G1重链
<400> 1
Met Asn Leu Leu Leu Ile Leu Thr Phe Val Ala Ala Ala Val Ala Gln
1 5 10 15
Val Gln Leu Leu Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser
20 25 30
Val Lys Leu Ala Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Leu Phe Thr Thr Tyr Trp
35 40 45
Met His Trp Leu Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly
50 55 60
Glu Ile Ser Pro Thr Asn Gly Arg Ala Tyr Tyr Asn Ala Arg Phe Lys
65 70 75 80
Ser Glu Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Asn Thr Ala Tyr Met
85 90 95
Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Ala Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
100 105 110
Arg Ala Tyr Gly Asn Tyr Glu Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
115 120 125
Val Thr Val Ser Val Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
130 135 140
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys
145 150 155 160
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
165 170 175
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
180 185 190
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
195 200 205
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
210 215 220
Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
225 230 235 240
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
245 250 255
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
260 265 270
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
275 280 285
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
290 295 300
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
305 310 315 320
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
325 330 335
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
340 345 350
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
355 360 365
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
370 375 380
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
385 390 395 400
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
405 410 415
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
420 425 430
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
435 440 445
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455 460
<210> 2
<211> 118
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 2
Gln Val Gln Leu Leu Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ala Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Leu Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Leu Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Ser Pro Thr Asn Gly Arg Ala Tyr Tyr Asn Ala Arg Phe
50 55 60
Lys Ser Glu Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Ala Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ala Tyr Gly Asn Tyr Glu Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Val
115
<210> 3
<211> 234
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 修饰的智人免疫球蛋白G1κ轻链
<400> 3
Met Asn Leu Leu Leu Ile Leu Thr Phe Val Ala Ala Ala Val Ala Asp
1 5 10 15
Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly Asp
20 25 30
Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Arg Gln Ser Leu Val Asn Ser Asn
35 40 45
Gly Asn Thr Phe Leu Gln Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro
50 55 60
Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Leu Arg Phe Ser Gly Val Pro Asp
65 70 75 80
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser
85 90 95
Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Leu Tyr Phe Cys Ser Gln Ser Thr
100 105 110
His Val Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
115 120 125
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
130 135 140
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
145 150 155 160
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
165 170 175
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
180 185 190
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
195 200 205
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
210 215 220
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225 230
<210> 4
<211> 113
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 4
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Arg Gln Ser Leu Val Asn Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Phe Leu Gln Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Leu Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Leu Tyr Phe Cys Ser Gln Ser
85 90 95
Thr His Val Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Arg
<210> 5
<211> 327
<212> PRT
<213> 家马
<400> 5
Ala Ser Thr Thr Ala Pro Lys Val Phe Pro Leu Ala Ser His Ser Ala
1 5 10 15
Ala Thr Ser Gly Ser Thr Val Ala Leu Gly Cys Leu Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ser Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Met Val Thr Val Pro Ala Ser Ser Leu Lys Ser Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Ile Val Ile Lys Glu Cys Asn Gly Gly Cys Pro Ala Glu Cys Leu
100 105 110
Gln Val Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val
115 120 125
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Thr Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
130 135 140
Gly His Asp Phe Pro Asp Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
145 150 155 160
Glu Thr His Thr Ala Thr Thr Glu Pro Lys Gln Glu Gln Phe Asn Ser
165 170 175
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gln His Lys Asp Trp Leu
180 185 190
Ser Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys Ala Leu Pro Ala
195 200 205
Pro Val Glu Arg Thr Ile Ser Lys Pro Thr Gly Gln Pro Arg Glu Pro
210 215 220
Gln Val Tyr Val Leu Ala Pro His Arg Asp Glu Leu Ser Lys Asn Lys
225 230 235 240
Val Ser Val Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Tyr Pro Thr Asp Ile Asp
245 250 255
Ile Glu Trp Lys Ser Asn Gly Gln Pro Glu Pro Glu Thr Lys Tyr Ser
260 265 270
Thr Thr Pro Ala Gln Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Lys Leu Thr Val Glu Thr Asn Arg Trp Gln Gln Gly Thr Thr Phe Thr
290 295 300
Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Glu Lys Ser
305 310 315 320
Val Ser Lys Ser Pro Gly Lys
325
<210> 6
<211> 415
<212> PRT
<213> 家马
<400> 6
Ser Leu Glu Asp Thr Ala Val Ile Pro Leu Phe Ser Glu Cys Lys Ala
1 5 10 15
Pro Lys Glu Asp Asp Val Val Ser Leu Ala Cys Leu Val Lys Gly Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Gln Val Thr Trp Glu Pro Glu Met Gln Asn Gln
35 40 45
Lys Pro Trp Thr Phe Pro Ala Met Lys Lys Gly Gln Glu Tyr Ile His
50 55 60
Val Phe Ser Leu Thr Thr Trp Trp Lys Pro Gly Ser His Ser Cys Thr
65 70 75 80
Val His His Lys Ala Ser Ser Phe Arg Lys Lys Met Thr Phe Gln Glu
85 90 95
Pro Ala Ser Trp Ala Pro Gln Arg Thr Ser Ala Leu Pro Val Thr Ser
100 105 110
Lys Glu Pro Thr Pro Ala Pro Thr Thr Leu Arg Lys Ser Glu Pro Ser
115 120 125
Thr Arg His Thr Gln Pro Glu Thr Gln Lys Pro Arg Ile Pro Val Asp
130 135 140
Thr Pro Leu Lys Glu Cys Gln Ser His Thr His Pro Pro Ser Ile Tyr
145 150 155 160
Leu Leu His Pro Pro Leu Gln Gly Leu Trp Leu Lys Gly Glu Ala Thr
165 170 175
Phe Thr Cys Leu Val Val Gly Asp Asp Leu Lys Asp Ala His Leu Ser
180 185 190
Trp Glu Leu Ser Glu Arg Ser Asn Gly Met Phe Val Glu Ser Gly Pro
195 200 205
Leu Glu Lys His Thr Asn Gly Ser Gln Ser Arg Ser Ser Arg Leu Ala
210 215 220
Leu Pro Arg Ser Ser Trp Ala Met Gly Thr Ser Val Thr Cys Lys Leu
225 230 235 240
Ser Tyr Pro Asn Leu Leu Ser Ser Met Glu Val Val Gly Leu Lys Glu
245 250 255
His Ala Ala Ser Ala Pro Arg Ser Leu Thr Val His Ala Leu Thr Thr
260 265 270
Pro Gly Leu Asn Ala Ser Pro Gly Ala Thr Ser Trp Leu Gln Cys Lys
275 280 285
Val Ser Gly Phe Ser Pro Pro Glu Ile Val Leu Thr Trp Leu Glu Gly
290 295 300
Gln Arg Glu Val Asp Pro Ser Trp Phe Ala Thr Ala Arg Pro Thr Ala
305 310 315 320
Gln Pro Gly Asn Thr Thr Phe Gln Thr Trp Ser Ile Leu Leu Val Pro
325 330 335
Thr Ile Pro Gly Pro Pro Thr Ala Thr Tyr Thr Cys Val Val Gly His
340 345 350
Glu Ala Ser Arg Gln Leu Leu Asn Thr Ser Trp Ser Leu Asp Thr Gly
355 360 365
Gly Leu Ala Met Thr Pro Glu Ser Lys Asp Glu Asn Ser Asp Asp Tyr
370 375 380
Ala Asp Leu Asp Asp Ala Gly Ser Leu Trp Leu Thr Phe Met Ala Leu
385 390 395 400
Phe Leu Ile Thr Leu Leu Tyr Ser Gly Phe Val Thr Phe Ile Lys
405 410 415
<210> 7
<211> 334
<212> PRT
<213> 家犬
<400> 7
Ser Lys Thr Ser Pro Ser Val Phe Pro Leu Ser Leu Cys His Gln Glu
1 5 10 15
Ser Glu Gly Tyr Val Val Ile Gly Cys Leu Val Gln Gly Phe Phe Pro
20 25 30
Pro Glu Pro Val Asn Val Thr Trp Asn Ala Gly Lys Asp Ser Thr Ser
35 40 45
Val Lys Asn Phe Pro Pro Met Lys Ala Ala Thr Gly Ser Leu Tyr Thr
50 55 60
Met Ser Ser Gln Leu Thr Leu Pro Ala Ala Gln Cys Pro Asp Asp Ser
65 70 75 80
Ser Val Lys Cys Gln Val Gln His Ala Ser Ser Pro Ser Lys Ala Val
85 90 95
Ser Val Pro Cys Lys Asp Asn Ser His Pro Cys His Pro Cys Pro Ser
100 105 110
Cys Asn Glu Pro Arg Leu Ser Leu Gln Lys Pro Ala Leu Glu Asp Leu
115 120 125
Leu Leu Gly Ser Asn Ala Ser Leu Thr Cys Thr Leu Ser Gly Leu Lys
130 135 140
Asp Pro Lys Gly Ala Thr Phe Thr Trp Asn Pro Ser Lys Gly Lys Glu
145 150 155 160
Pro Ile Gln Lys Asn Pro Glu Arg Asp Ser Cys Gly Cys Tyr Ser Val
165 170 175
Ser Ser Val Leu Pro Gly Cys Ala Asp Pro Trp Asn His Gly Asp Thr
180 185 190
Phe Ser Cys Thr Ala Thr His Pro Glu Ser Lys Ser Pro Ile Thr Val
195 200 205
Ser Ile Thr Lys Thr Thr Glu His Ile Pro Pro Gln Val His Leu Leu
210 215 220
Pro Pro Pro Ser Glu Glu Leu Ala Leu Asn Glu Leu Val Thr Leu Thr
225 230 235 240
Cys Leu Val Arg Gly Phe Lys Pro Lys Asp Val Leu Val Arg Trp Leu
245 250 255
Gln Gly Thr Gln Glu Leu Pro Gln Glu Lys Tyr Leu Thr Trp Glu Pro
260 265 270
Leu Lys Glu Pro Asp Gln Thr Asn Met Phe Ala Val Thr Ser Met Leu
275 280 285
Arg Val Thr Ala Glu Asp Trp Lys Gln Gly Glu Lys Phe Ser Cys Met
290 295 300
Val Gly His Glu Ala Leu Pro Met Ser Phe Thr Gln Lys Thr Ile Asp
305 310 315 320
Arg Leu Ala Gly Lys Pro Thr His Val Asn Val Ser Val Val
325 330
<210> 8
<211> 426
<212> PRT
<213> 家犬
<400> 8
Thr Ser Gln Asp Leu Ser Val Phe Pro Leu Ala Ser Cys Cys Lys Asp
1 5 10 15
Asn Ile Ala Ser Thr Ser Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Thr Gly Tyr
20 25 30
Leu Pro Met Ser Thr Thr Val Thr Trp Asp Thr Gly Ser Leu Asn Lys
35 40 45
Asn Val Thr Thr Phe Pro Thr Thr Phe His Glu Thr Tyr Gly Leu His
50 55 60
Ser Ile Val Ser Gln Val Thr Ala Ser Gly Lys Trp Ala Lys Gln Arg
65 70 75 80
Phe Thr Cys Ser Val Ala His Ala Glu Ser Thr Ala Ile Asn Lys Thr
85 90 95
Phe Ser Ala Cys Ala Leu Asn Phe Ile Pro Pro Thr Val Lys Leu Phe
100 105 110
His Ser Ser Cys Asn Pro Val Gly Asp Thr His Thr Thr Ile Gln Leu
115 120 125
Leu Cys Leu Ile Ser Gly Tyr Val Pro Gly Asp Met Glu Val Ile Trp
130 135 140
Leu Val Asp Gly Gln Lys Ala Thr Asn Ile Phe Pro Tyr Thr Ala Pro
145 150 155 160
Gly Thr Lys Glu Gly Asn Val Thr Ser Thr His Ser Glu Leu Asn Ile
165 170 175
Thr Gln Gly Glu Trp Val Ser Gln Lys Thr Tyr Thr Cys Gln Val Thr
180 185 190
Tyr Gln Gly Phe Thr Phe Lys Asp Glu Ala Arg Lys Cys Ser Glu Ser
195 200 205
Asp Pro Arg Gly Val Thr Ser Tyr Leu Ser Pro Pro Ser Pro Leu Asp
210 215 220
Leu Tyr Val His Lys Ala Pro Lys Ile Thr Cys Leu Val Val Asp Leu
225 230 235 240
Ala Thr Met Glu Gly Met Asn Leu Thr Trp Tyr Arg Glu Ser Lys Glu
245 250 255
Pro Val Asn Pro Gly Pro Leu Asn Lys Lys Asp His Phe Asn Gly Thr
260 265 270
Ile Thr Val Thr Ser Thr Leu Pro Val Asn Thr Asn Asp Trp Ile Glu
275 280 285
Gly Glu Thr Tyr Tyr Cys Arg Val Thr His Pro His Leu Pro Lys Asp
290 295 300
Ile Val Arg Ser Ile Ala Lys Ala Pro Gly Lys Arg Ala Pro Pro Asp
305 310 315 320
Val Tyr Leu Phe Leu Pro Pro Glu Glu Glu Gln Gly Thr Lys Asp Arg
325 330 335
Val Thr Leu Thr Cys Leu Ile Gln Asn Phe Phe Pro Ala Asp Ile Ser
340 345 350
Val Gln Trp Leu Arg Asn Asp Ser Pro Ile Gln Thr Asp Gln Tyr Thr
355 360 365
Thr Thr Gly Pro His Lys Val Ser Gly Ser Arg Pro Ala Phe Phe Ile
370 375 380
Phe Ser Arg Leu Glu Val Ser Arg Val Asp Trp Glu Gln Lys Asn Lys
385 390 395 400
Phe Thr Cys Gln Val Val His Glu Ala Leu Ser Gly Ser Arg Ile Leu
405 410 415
Gln Lys Trp Val Ser Lys Thr Pro Gly Lys
420 425
<210> 9
<211> 335
<212> PRT
<213> 家猫
<400> 9
Ala Ser Thr Thr Ala Ser Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Cys Gly
1 5 10 15
Thr Thr Ser Gly Ala Thr Val Ala Leu Ala Cys Leu Val Leu Gly Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ser Val Leu Gln Ala Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Met Val Thr Val Pro Ser Ser Arg Trp Leu Ser Asp Thr
65 70 75 80
Phe Thr Cys Asn Val Ala His Arg Pro Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Pro Lys Thr Ala Ser Thr Ile Glu Ser Lys Thr Gly Glu Gly
100 105 110
Pro Lys Cys Pro Val Pro Glu Ile Pro Gly Ala Pro Ser Val Phe Ile
115 120 125
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Ser Ile Ser Arg Thr Pro Glu
130 135 140
Val Thr Cys Leu Val Val Asp Leu Gly Pro Asp Asp Ser Asn Val Gln
145 150 155 160
Ile Thr Trp Phe Val Asp Asn Thr Glu Met His Thr Ala Lys Thr Arg
165 170 175
Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
180 185 190
Pro Ile Leu His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys
195 200 205
Val Asn Ser Lys Ser Leu Pro Ser Ala Met Glu Arg Thr Ile Ser Lys
210 215 220
Ala Lys Gly Gln Pro His Glu Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Thr
225 230 235 240
Gln Glu Glu Leu Ser Glu Asn Lys Val Ser Val Thr Cys Leu Ile Lys
245 250 255
Gly Phe His Pro Pro Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ile Thr Gly Gln
260 265 270
Pro Glu Pro Glu Asn Asn Tyr Gln Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Ser
275 280 285
Asp Gly Thr Tyr Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Ser Val Asp Arg Ser His
290 295 300
Trp Gln Arg Gly Asn Thr Tyr Thr Cys Ser Val Ser His Glu Ala Leu
305 310 315 320
His Ser His His Thr Gln Lys Ser Leu Thr Gln Ser Pro Gly Lys
325 330 335
<210> 10
<211> 96
<212> PRT
<213> 单峰驼
<400> 10
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Arg Glu Arg Glu Gly Val
35 40 45
Ala Ala Ile Asn Ser Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Gln Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
<210> 11
<211> 96
<212> PRT
<213> 单峰驼
<400> 11
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Thr Ile Asn Ser Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Met Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
<210> 12
<211> 1434
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 鼠抗AGE IgG2b重链
<400> 12
atggacccca agggcagcct gagctggaga atcctgctgt tcctgagcct ggccttcgag 60
ctgagctacg gccaggtgca gctgctgcag ccaggtgccg agctcgtgaa acctggcgcc 120
tctgtgaagc tggcctgcaa ggcttccggc tacctgttca ccacctactg gatgcactgg 180
ctgaagcaga ggccaggcca gggcctggaa tggatcggcg agatctcccc caccaacggc 240
agagcctact acaacgcccg gttcaagtcc gaggccaccc tgaccgtgga caagtcctcc 300
aacaccgcct acatgcagct gtcctccctg acctctgagg cctccgccgt gtactactgc 360
gccagagctt acggcaacta cgagttcgcc tactggggcc agggcaccct cgtgacagtg 420
tctgtggcta agaccacccc tccctccgtg taccctctgg ctcctggctg tggcgacacc 480
accggatcct ctgtgaccct gggctgcctc gtgaagggct acttccctga gtccgtgacc 540
gtgacctgga actccggctc cctgtcctcc tccgtgcaca cctttccagc cctgctgcag 600
tccggcctgt acaccatgtc ctccagcgtg acagtgccct cctccacctg gccttcccag 660
accgtgacat gctctgtggc ccaccctgcc tcttccacca ccgtggacaa gaagctggaa 720
ccctccggcc ccatctccac catcaaccct tgccctccct gcaaagaatg ccacaagtgc 780
cctgccccca acctggaagg cggcccttcc gtgttcatct tcccacccaa catcaaggac 840
gtgctgatga tctccctgac ccccaaagtg acctgcgtgg tggtggacgt gtccgaggac 900
gaccctgacg tgcagatcag ttggttcgtg aacaacgtgg aagtgcacac cgcccagacc 960
cagacacaca gagaggacta caacagcacc atcagagtgg tgtctaccct gcccatccag 1020
caccaggact ggatgtccgg caaagaattc aagtgcaaag tgaacaacaa ggacctgccc 1080
agccccatcg agcggaccat ctccaagatc aagggcctcg tgcgggctcc ccaggtgtac 1140
attctgcctc caccagccga gcagctgtcc cggaaggatg tgtctctgac atgtctggtc 1200
gtgggcttca accccggcga catctccgtg gaatggacct ccaacggcca caccgaggaa 1260
aactacaagg acaccgcccc tgtgctggac tccgacggct cctacttcat ctactccaag 1320
ctgaacatga agacctccaa gtgggaaaag accgactcct tctcctgcaa cgtgcggcac 1380
gagggcctga agaactacta cctgaagaaa accatctccc ggtcccccgg ctag 1434
<210> 13
<211> 1416
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 嵌合抗AGE人IgG1抗体重链
<400> 13
atggacccca agggcagcct gagctggaga atcctgctgt tcctgagcct ggccttcgag 60
ctgagctacg gccaggtgca gctgctgcag ccaggtgccg agctcgtgaa acctggcgcc 120
tctgtgaagc tggcctgcaa ggcttccggc tacctgttca ccacctactg gatgcactgg 180
ctgaagcaga ggccaggcca gggcctggaa tggatcggcg agatctcccc caccaacggc 240
agagcctact acaacgcccg gttcaagtcc gaggccaccc tgaccgtgga caagtcctcc 300
aacaccgcct acatgcagct gtcctccctg acctctgagg cctccgccgt gtactactgc 360
gccagagctt acggcaacta cgagttcgcc tactggggcc agggcaccct cgtgacagtg 420
tctgtggcta gcaccaaggg ccccagcgtg ttccctctgg cccccagcag caagagcacc 480
agcggcggaa ccgccgccct gggctgcctg gtgaaggact acttccccga gcccgtgacc 540
gtgtcctgga acagcggcgc tctgaccagc ggagtgcaca ccttccctgc cgtgctgcag 600
agcagcggcc tgtactccct gagcagcgtg gtgaccgtgc ccagcagcag cctgggcacc 660
cagacctaca tctgcaacgt gaaccacaag ccctccaaca ccaaggtgga caagaaggtg 720
gagcctaaga gctgcgacaa gacccacacc tgccctccct gccccgcccc cgagctgctg 780
ggcggaccca gcgtgttcct gttccctccc aagcccaagg acaccctgat gatcagccgc 840
acccccgagg tgacctgcgt ggtggtggac gtgagccacg aggaccccga ggtgaagttc 900
aactggtacg tggacggcgt ggaggtgcac aacgccaaga ccaagcctcg ggaggagcag 960
tacaactcca cctaccgcgt ggtgagcgtg ctgaccgtgc tgcaccagga ctggctgaac 1020
ggcaaggagt acaagtgcaa ggtgagcaac aaggccctgc ccgctcccat cgagaagacc 1080
atcagcaagg ccaagggcca gccccgggag cctcaggtgt acaccctgcc ccccagccgc 1140
gacgagctga ccaagaacca ggtgagcctg acctgcctgg tgaagggctt ctacccctcc 1200
gacatcgccg tggagtggga gagcaacggc cagcctgaga acaactacaa gaccacccct 1260
cccgtgctgg acagcgacgg cagcttcttc ctgtacagca agctgaccgt ggacaagtcc 1320
cggtggcagc agggcaacgt gttcagctgc agcgtgatgc acgaggccct gcacaaccac 1380
tacacccaga agagcctgag cctgagcccc ggatag 1416
<210> 14
<211> 720
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 鼠抗AGEκ轻链
<400> 14
atggagaccg acaccctgct gctctgggtg ctgctgctct gggtgcccgg ctccaccgga 60
gacgtcgtga tgacccagac ccctctgtcc ctgcctgtgt ctctgggcga ccaggcctcc 120
atctcctgcc ggtctagaca gtccctcgtg aactccaacg gcaacacctt cctgcagtgg 180
tatctgcaga agcccggcca gtcccccaag ctgctgatct acaaggtgtc cctgcggttc 240
tccggcgtgc ccgacagatt ttccggctct ggctctggca ccgacttcac cctgaagatc 300
tcccgggtgg aagccgagga cctgggcctg tacttctgca gccagtccac ccacgtgccc 360
cctacatttg gcggaggcac caagctggaa atcaaacggg cagatgctgc accaactgta 420
tccatcttcc caccatccag tgagcagtta acatctggag gtgcctcagt cgtgtgcttc 480
ttgaacaact tctaccccaa agacatcaat gtcaagtgga agattgatgg cagtgaacga 540
caaaatggcg tcctgaacag ttggactgat caggacagca aagacagcac ctacagcatg 600
agcagcaccc tcacgttgac caaggacgag tatgaacgac ataacagcta tacctgtgag 660
gccactcaca agacatcaac ttcacccatt gtcaagagct tcaacaggaa tgagtgttga 720
<210> 15
<211> 720
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 嵌合抗AGE人κ轻链
<400> 15
atggagaccg acaccctgct gctctgggtg ctgctgctct gggtgcccgg ctccaccgga 60
gacgtcgtga tgacccagac ccctctgtcc ctgcctgtgt ctctgggcga ccaggcctcc 120
atctcctgcc ggtctagaca gtccctcgtg aactccaacg gcaacacctt cctgcagtgg 180
tatctgcaga agcccggcca gtcccccaag ctgctgatct acaaggtgtc cctgcggttc 240
tccggcgtgc ccgacagatt ttccggctct ggctctggca ccgacttcac cctgaagatc 300
tcccgggtgg aagccgagga cctgggcctg tacttctgca gccagtccac ccacgtgccc 360
cctacatttg gcggaggcac caagctggaa atcaagcgga ccgtggccgc ccccagcgtg 420
ttcatcttcc ctcccagcga cgagcagctg aagtctggca ccgccagcgt ggtgtgcctg 480
ctgaacaact tctacccccg cgaggccaag gtgcagtgga aggtggacaa cgccctgcag 540
agcggcaaca gccaggagag cgtgaccgag caggactcca aggacagcac ctacagcctg 600
agcagcaccc tgaccctgag caaggccgac tacgagaagc acaaggtgta cgcctgcgag 660
gtgacccacc agggactgtc tagccccgtg accaagagct tcaaccgggg cgagtgctaa 720
<210> 16
<211> 477
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 鼠抗AGE IgG2b重链
<400> 16
Met Asp Pro Lys Gly Ser Leu Ser Trp Arg Ile Leu Leu Phe Leu Ser
1 5 10 15
Leu Ala Phe Glu Leu Ser Tyr Gly Gln Val Gln Leu Leu Gln Pro Gly
20 25 30
Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Leu Ala Cys Lys Ala
35 40 45
Ser Gly Tyr Leu Phe Thr Thr Tyr Trp Met His Trp Leu Lys Gln Arg
50 55 60
Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Glu Ile Ser Pro Thr Asn Gly
65 70 75 80
Arg Ala Tyr Tyr Asn Ala Arg Phe Lys Ser Glu Ala Thr Leu Thr Val
85 90 95
Asp Lys Ser Ser Asn Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser
100 105 110
Glu Ala Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ala Tyr Gly Asn Tyr Glu
115 120 125
Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Val Ala Lys
130 135 140
Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Cys Gly Asp Thr
145 150 155 160
Thr Gly Ser Ser Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro
165 170 175
Glu Ser Val Thr Val Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Ser Val
180 185 190
His Thr Phe Pro Ala Leu Leu Gln Ser Gly Leu Tyr Thr Met Ser Ser
195 200 205
Ser Val Thr Val Pro Ser Ser Thr Trp Pro Ser Gln Thr Val Thr Cys
210 215 220
Ser Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Thr Val Asp Lys Lys Leu Glu
225 230 235 240
Pro Ser Gly Pro Ile Ser Thr Ile Asn Pro Cys Pro Pro Cys Lys Glu
245 250 255
Cys His Lys Cys Pro Ala Pro Asn Leu Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe
260 265 270
Ile Phe Pro Pro Asn Ile Lys Asp Val Leu Met Ile Ser Leu Thr Pro
275 280 285
Lys Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp Val
290 295 300
Gln Ile Ser Trp Phe Val Asn Asn Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr
305 310 315 320
Gln Thr His Arg Glu Asp Tyr Asn Ser Thr Ile Arg Val Val Ser Thr
325 330 335
Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Met Ser Gly Lys Glu Phe Lys Cys
340 345 350
Lys Val Asn Asn Lys Asp Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser
355 360 365
Lys Ile Lys Gly Leu Val Arg Ala Pro Gln Val Tyr Ile Leu Pro Pro
370 375 380
Pro Ala Glu Gln Leu Ser Arg Lys Asp Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
385 390 395 400
Val Gly Phe Asn Pro Gly Asp Ile Ser Val Glu Trp Thr Ser Asn Gly
405 410 415
His Thr Glu Glu Asn Tyr Lys Asp Thr Ala Pro Val Leu Asp Ser Asp
420 425 430
Gly Ser Tyr Phe Ile Tyr Ser Lys Leu Asn Met Lys Thr Ser Lys Trp
435 440 445
Glu Lys Thr Asp Ser Phe Ser Cys Asn Val Arg His Glu Gly Leu Lys
450 455 460
Asn Tyr Tyr Leu Lys Lys Thr Ile Ser Arg Ser Pro Gly
465 470 475
<210> 17
<211> 471
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 嵌合抗AGE人IgG1重链
<400> 17
Met Asp Pro Lys Gly Ser Leu Ser Trp Arg Ile Leu Leu Phe Leu Ser
1 5 10 15
Leu Ala Phe Glu Leu Ser Tyr Gly Gln Val Gln Leu Leu Gln Pro Gly
20 25 30
Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Leu Ala Cys Lys Ala
35 40 45
Ser Gly Tyr Leu Phe Thr Thr Tyr Trp Met His Trp Leu Lys Gln Arg
50 55 60
Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Glu Ile Ser Pro Thr Asn Gly
65 70 75 80
Arg Ala Tyr Tyr Asn Ala Arg Phe Lys Ser Glu Ala Thr Leu Thr Val
85 90 95
Asp Lys Ser Ser Asn Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser
100 105 110
Glu Ala Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ala Tyr Gly Asn Tyr Glu
115 120 125
Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Val Ala Ser
130 135 140
Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr
145 150 155 160
Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro
165 170 175
Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val
180 185 190
His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser
195 200 205
Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile
210 215 220
Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val
225 230 235 240
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
245 250 255
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
260 265 270
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
275 280 285
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
290 295 300
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
305 310 315 320
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
325 330 335
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
340 345 350
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
355 360 365
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr
370 375 380
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
385 390 395 400
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
405 410 415
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
420 425 430
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
435 440 445
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
450 455 460
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
465 470
<210> 18
<211> 239
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 鼠抗AGEκ轻链
<400> 18
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro
20 25 30
Val Ser Leu Gly Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Arg Gln Ser
35 40 45
Leu Val Asn Ser Asn Gly Asn Thr Phe Leu Gln Trp Tyr Leu Gln Lys
50 55 60
Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Leu Arg Phe
65 70 75 80
Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
85 90 95
Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Leu Tyr Phe
100 105 110
Cys Ser Gln Ser Thr His Val Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys
115 120 125
Leu Glu Ile Lys Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro
130 135 140
Pro Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe
145 150 155 160
Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp
165 170 175
Gly Ser Glu Arg Gln Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp
180 185 190
Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys
195 200 205
Asp Glu Tyr Glu Arg His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys
210 215 220
Thr Ser Thr Ser Pro Ile Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys
225 230 235
<210> 19
<211> 239
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 嵌合抗AGE人κ轻链
<400> 19
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro
20 25 30
Val Ser Leu Gly Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Arg Gln Ser
35 40 45
Leu Val Asn Ser Asn Gly Asn Thr Phe Leu Gln Trp Tyr Leu Gln Lys
50 55 60
Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Leu Arg Phe
65 70 75 80
Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
85 90 95
Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Leu Tyr Phe
100 105 110
Cys Ser Gln Ser Thr His Val Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys
115 120 125
Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro
130 135 140
Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu
145 150 155 160
Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp
165 170 175
Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp
180 185 190
Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys
195 200 205
Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln
210 215 220
Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225 230 235
<210> 20
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 鼠抗AGE IgG2b重链(可变区)
<400> 20
Gln Val Gln Leu Leu Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ala Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Leu Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Leu Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Ser Pro Thr Asn Gly Arg Ala Tyr Tyr Asn Ala Arg Phe
50 55 60
Lys Ser Glu Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Ala Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ala Tyr Gly Asn Tyr Glu Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Val
115
<210> 21
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 鼠抗AGEκ轻链(可变区)
<400> 21
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Arg Gln Ser Leu Val Asn Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Phe Leu Gln Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Leu Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Leu Tyr Phe Cys Ser Gln Ser
85 90 95
Thr His Val Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 22
<211> 326
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人恒定区
<400> 22
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
115 120 125
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
130 135 140
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
145 150 155 160
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn
165 170 175
Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp
180 185 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro
195 200 205
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu
210 215 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
225 230 235 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
245 250 255
Ser Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
260 265 270
Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
275 280 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
290 295 300
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 23
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR1H (重链)
<400> 23
Ser Tyr Thr Met Gly Val Ser
1 5
<210> 24
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR2H (重链)
<400> 24
Thr Ile Ser Ser Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 25
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR3H (重链)
<220>
<221> misc_特征
<222> (10)..(10)
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<400> 25
Gln Gly Gly Trp Leu Pro Pro Phe Ala Xaa
1 5 10
<210> 26
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR1L (轻链)
<400> 26
Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser Ser Arg Gly Tyr Ser Tyr Met
1 5 10 15
His
<210> 27
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR2L (轻链)
<400> 27
Leu Val Ser Asn Leu Glu Ser
1 5
<210> 28
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR3L (轻链)
<400> 28
Gln His Ile Arg Glu Leu Thr Arg Ser
1 5
<210> 29
<211> 468
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化重链
<400> 29
Met Asp Pro Lys Gly Ser Leu Ser Trp Arg Ile Leu Leu Phe Leu Ser
1 5 10 15
Leu Ala Phe Glu Leu Ser Tyr Gly Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly
20 25 30
Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala
35 40 45
Ser Gly Tyr Leu Phe Thr Thr Tyr Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala
50 55 60
Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly Glu Ile Ser Pro Thr Asn Gly
65 70 75 80
Arg Ala Tyr Tyr Asn Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Val
85 90 95
Asp Lys Ser Thr Asn Thr Val Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser
100 105 110
Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ala Tyr Gly Asn Tyr Phe
115 120 125
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr
130 135 140
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser
145 150 155 160
Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
165 170 175
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
180 185 190
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
195 200 205
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys
210 215 220
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu
225 230 235 240
Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Pro Glu
245 250 255
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
260 265 270
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
275 280 285
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
290 295 300
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
305 310 315 320
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
325 330 335
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
340 345 350
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
355 360 365
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Lys Asn Gln
370 375 380
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
385 390 395 400
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
405 410 415
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
420 425 430
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
435 440 445
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
450 455 460
Leu Ser Pro Gly
465
<210> 30
<211> 1408
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化重链
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gagcctacta caacagaaat tccagggcag agtgaccatg accgtggaca agtccaccaa 300
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tagagcctac ggcaactacg attcgcctac tggggccagg gcaccctcgt gacagtgtcc 420
tctgctagca ccaagggccc cagcgtgttc cctctggccc ccagcagcaa gagcaccagc 480
ggcggaaccg ccgccctggg ctgcctggga aggactactt ccccgagccc gtgaccgtgt 540
cctggaacag cggcgctctg accagcggag tgcacacctt ccctgccgtg ctgcagagca 600
gcggcctgta ctccctgagc agcgtggtga ccgtgccagc agcagcctgg gcacccagac 660
ctacatctgc aacgtgaacc acaagccctc caacaccaag gtggacaaga aggtggagcc 720
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cccagcgtgt tcctgttccc tcccaagccc aaggacaccc tgatgatcag ccgcaccccc 840
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化重链
<400> 31
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1 5 10 15
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Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
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Leu Ser Pro Gly
465
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<211> 1408
<212> DNA
<213> 人工序列
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275 280 285
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Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
355 360 365
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Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
385 390 395 400
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Leu Ser Pro Gly
465
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Pro Gly Gln Pro Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Leu Arg Phe
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Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ala Gly Lys Asp Phe
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145 150 155 160
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165 170 175
Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser
180 185 190
Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala
195 200 205
Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly
210 215 220
Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225 230 235
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<213> 小家鼠
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1 5 10 15
Ser
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<213> 小家鼠
<400> 43
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1 5
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<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 45
Lys Val Ser Leu Arg Phe Ser
1 5
<210> 46
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 46
Ser Gln Ser Thr His Val Pro Pro Thr
1 5

Claims (32)

1.一种抗AGE抗体，所述抗体包含蛋白质或肽，所述蛋白质或肽包含至少一个与选自由以下各项组成的组的氨基酸序列具有至少90％序列同一性、优选至少95％序列同一性、更优选至少98％序列同一性的氨基酸序列：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:17、SEQID NO:19、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:37以及SEQ ID NO:39，
其中所述抗体结合至显示羧甲基赖氨酸修饰的蛋白质或肽。
2.一种抗AGE抗体，所述抗体包含蛋白质或肽，所述蛋白质或肽包含至少一个与选自由以下各项组成的组的氨基酸序列具有至少90％序列同一性、优选至少95％序列同一性、更优选至少98％序列同一性的氨基酸序列：SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27以及SEQ ID NO:28，
其中所述抗体结合至显示羧甲基赖氨酸修饰的蛋白质或肽。
3.一种抗AGE抗体，所述抗体包含
重链，以及
轻链，
其中所述重链包含与选自由以下各项组成的组的氨基酸序列具有至少90％序列同一性、优选至少95％序列同一性、更优选至少98％序列同一性的氨基酸序列：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:31以及SEQ ID NO:33，或
所述轻链包含与选自由以下各项组成的组的氨基酸序列具有至少90％序列同一性、优选至少95％序列同一性、更优选至少98％序列同一性的氨基酸序列：SEQ ID NO:3、SEQ IDNO:19、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:37以及SEQ ID NO:39；并且
所述抗体结合至显示羧甲基赖氨酸修饰的蛋白质或肽。
4.一种抗AGE抗体，所述抗体包含
重链，以及
轻链，
其中所述重链包含与选自由以下各项组成的组的氨基酸序列具有至少90％序列同一性、优选至少95％序列同一性、更优选至少98％序列同一性的氨基酸序列：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:31以及SEQ ID NO:33，并且
所述轻链包含与选自由以下各项组成的组的氨基酸序列具有至少90％序列同一性、优选至少95％序列同一性、更优选至少98％序列同一性的氨基酸序列：SEQ ID NO:3、SEQ IDNO:19、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:37以及SEQ ID NO:39；并且
所述抗体结合至显示羧甲基赖氨酸修饰的蛋白质或肽。
5.一种抗AGE抗体，所述抗体包含互补决定区，所述互补决定区包含至少一个与选自由以下各项组成的组的氨基酸序列具有至少90％序列同一性、优选至少95％序列同一性、更优选至少98％序列同一性的氨基酸序列：SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQID NO:26、SEQ ID NO:27以及SEQ ID NO:28，
其中所述抗体结合至显示羧甲基赖氨酸修饰的蛋白质或肽，并且
所述抗体对选自由以下各项组成的组的物种基本上无免疫原性：小鼠、大鼠、山羊、绵羊、牛、马、狗以及猫。
6.一种抗体缀合物，所述抗体缀合物包含：
抗AGE抗体片段，所述抗AGE抗体片段包含蛋白质或肽，所述蛋白质或肽包含至少一个与选自由以下各项组成的组的氨基酸序列具有至少90％序列同一性、优选至少95％序列同一性、更优选至少98％序列同一性的氨基酸序列：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:35、SEQ IDNO:37以及SEQ ID NO:39，以及
与所述抗AGE抗体片段缀合的药剂，所述药剂引起AGE修饰的细胞的破坏，
其中所述抗AGE抗体片段结合至显示羧甲基赖氨酸修饰的蛋白质或肽。
7.如前述权利要求中任一项所述的抗AGE抗体，其用于杀死衰老细胞。
8.如前述权利要求中任一项所述的抗AGE抗体，其用于杀死部分功能或无功能的细胞。
9.如前述权利要求中任一项所述的抗AGE抗体，其用于通过杀死部分功能或无功能的细胞来治疗受试者的肌肉减少症。
10.如前述权利要求中任一项所述的抗AGE抗体，其用于通过杀死部分功能或无功能的细胞来促进受试者的组织或器官再生。
11.如前述权利要求中任一项所述的抗AGE抗体，其用于通过杀死部分功能或无功能的细胞来在受试者中促进再生过程或克服老化效应。
12.如前述权利要求中任一项所述的抗AGE抗体，其用于通过杀死部分功能或无功能的细胞来治疗受试者的动脉粥样硬化。
13.如前述权利要求中任一项所述的抗AGE抗体，其用于预防或延迟受试者的白内障的发作。
14.如前述权利要求中任一项所述的抗AGE抗体，其用于预防或延迟受试者的脂肪组织的损失的发作。
15.如前述权利要求中任一项所述的抗AGE抗体，其用于预防或延迟受试者的脊椎弯曲的发作。
16.如前述权利要求中任一项所述的抗AGE抗体，其用于治疗受试者的炎症或自身免疫性病症。
17.如前述权利要求中任一项所述的抗AGE抗体，其用于治疗受试者的神经退行性病症。
18.如前述权利要求中任一项所述的抗AGE抗体，其用于治疗受试者的癌症。
19.一种如前述权利要求中任一项所述的抗AGE抗体的用途，所述抗体用于制造用于杀死衰老细胞的药物。
20.一种如前述权利要求中任一项所述的抗AGE抗体的用途，所述抗体用于制造用于治疗肌肉减少症的药物。
21.如前述权利要求中任一项所述的抗AGE抗体，其中所述受试者患有选自由以下各项组成的组的神经退行性病症：AD、PD、路易体痴呆、MS、朊病毒病以及ALS。
22.如前述权利要求中任一项所述的抗AGE抗体，其中所述治疗包括向所述受试者的中枢神经系统施用所述抗AGE抗体。
23.如前述权利要求中任一项所述的抗AGE抗体，其中所述受试者患有ALS或MD，并且
所述治疗包括向所述受试者的肌肉施用所述抗AGE抗体。
24.如前述权利要求中任一项所述的抗AGE抗体，其中所述抗体对选自由以下各项组成的组的物种基本上无免疫原性：人、小鼠、大鼠、山羊、绵羊、牛、马、狗以及猫。
25.如前述权利要求中任一项所述的抗AGE抗体，其中所述抗体是人源化抗体。
26.如前述权利要求中任一项所述的抗AGE抗体，其中所述抗体是单克隆抗体。
27.如前述权利要求中任一项所述的抗AGE抗体，其中所述抗体对人基本上无免疫原性。
28.如前述权利要求中任一项所述的抗AGE抗体，其中所述抗体具有至多9×10-3sec-1的解离速率(kd)。
29.如前述权利要求中任一项所述的抗AGE抗体，其中所述抗体与引起AGE修饰的细胞破坏的药剂缀合。
30.如前述权利要求中任一项所述的抗AGE抗体，其中所述药剂是选自由以下各项组成的组：毒素、细胞毒性剂、磁性纳米颗粒以及磁性自旋涡旋盘。
31.如前述权利要求中任一项所述的抗AGE抗体，其中所述抗体包含恒定区，所述恒定区允许受试者的免疫系统破坏靶细胞。
32.如前述权利要求中任一项所述的抗AGE抗体，其中所述抗体是双特异性抗体。
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