CN108414632A - 一种鱼腥草中挥发性成分特征指纹图谱的建立方法及相似度评价方法 - Google Patents

一种鱼腥草中挥发性成分特征指纹图谱的建立方法及相似度评价方法 Download PDF

Info

Publication number
CN108414632A
CN108414632A CN201810142191.3A CN201810142191A CN108414632A CN 108414632 A CN108414632 A CN 108414632A CN 201810142191 A CN201810142191 A CN 201810142191A CN 108414632 A CN108414632 A CN 108414632A
Authority
CN
China
Prior art keywords
peaks
retention time
rsd
relative retention
average relative
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201810142191.3A
Other languages
English (en)
Inventor
卿艳
张思荻
杨超
周娟
赵春艳
李敏
赖月月
何建
敬勇
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Sichuan Provincial Institute Of Food And Drug Administration
Original Assignee
Sichuan Provincial Institute Of Food And Drug Administration
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Sichuan Provincial Institute Of Food And Drug Administration filed Critical Sichuan Provincial Institute Of Food And Drug Administration
Priority to CN201810142191.3A priority Critical patent/CN108414632A/zh
Publication of CN108414632A publication Critical patent/CN108414632A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation

Landscapes

  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
  • Fats And Perfumes (AREA)

Abstract

本发明涉及一种鱼腥草中挥发性成分特征指纹图谱的建立方法及相似度评价方法，包括以下步骤：(1)制备对照品溶液；(2)制备供试品溶液；(3)精密量取所述对照品溶液和所述供试品溶液适量，分别进样，采用GC或GC‑MS进行色谱分离和图谱测定，并记录色谱图；(4)根据所述色谱图中各色谱峰的相对保留时间确定共有指纹峰，以所述共有指纹峰为特征指纹峰建立鲜/干鱼腥草的特征指纹图谱；本方法具有操作简单、精密度高、重现性好等特点，可以建立鲜/干鱼腥草中挥发性成分特征指纹图谱，不仅可以为鱼腥草鉴别和含量差异分析提供方法，还可以评估鲜/干鱼腥草药材的质量优劣。

Description

一种鱼腥草中挥发性成分特征指纹图谱的建立方法及相似度 评价方法
技术领域
本发明涉及中药材安全技术领域，具体涉及一种鱼腥草中挥发性成分特征指纹图谱的建立方法及相似度评价方法。
背景技术
鱼腥草为三白草科蕺菜属植物蕺菜(Houttuynia cordata Thunb.)的新鲜全草或干燥地上部分，是国家卫生部正式批准的“既是食品，又是药品”的大宗中药材之一。作为药用，鱼腥草具有清热解毒、消痈排脓、利尿通淋等功效，用于痰热喘咳、热淋、热痢、痈肿等症。作为食用，鱼腥草可作为菜肴、饮料或食品添加剂等，深受部分地区人们的喜爱。
目前,利用指纹图谱获取全面的中药化学成分特征信息已广泛地应用于中药的质量控制之中，中药色谱指纹图谱是对中药整体性的化学特征的表达和反映。鱼腥草的挥发性成分是其主要药效物质基础之一，具有抗炎、抗病毒、抗过敏、调节免疫能力和抗氧化的作用。
然而，中华人民共和国药典中未对其含量有限度指标，同时，现有技术中，鱼腥草中挥发性成分指纹图谱的方法研究较少，指认特征指纹峰少，难以全面评价鱼腥草药材的质量。
发明内容
本发明的目的在于改善现有技术中所存在的不足，提供一种鱼腥草中挥发性成分特征指纹图谱的建立方法及相似度评价方法，具有操作简单、精密度高、重现性好等特点，可以建立鲜/干鱼腥草中挥发性成分特征指纹图谱，不仅可以为鱼腥草鉴别和含量差异分析提供方法，还可以更加全面地评估鲜/干鱼腥草药材的质量优劣。
本发明所采用的技术方案是：
一种鱼腥草中挥发性成分特征指纹图谱的建立方法，包括步骤(3)和步骤(4)，其中，
步骤(3)，精密量取对照品溶液和供试品溶液适量，分别进样，采用GC或GC-MS进行色谱分离和图谱测定，并记录色谱图；其中，GC或GC-MS的色谱条件包括：采用毛细管色谱柱进行色谱分离，所述毛细管色谱柱的升温程序为：70℃保持3～6min；4～6℃/min升至100～120℃，保持3～6min；1～3℃/min升至130～150℃；1～3℃/min升至150～160℃；2～10℃/min升至240℃，保持5～15min。
步骤(4)，根据所述色谱图中各色谱峰的相对保留时间确定共有指纹峰，以所述共有指纹峰为特征指纹峰建立鲜鱼腥草或干鱼腥草的特征指纹图谱。
进一步地方案中，一种鱼腥草中挥发性成分特征指纹图谱的建立方法，还包括以下步骤
步骤(1)，精密称取甲基正壬酮对照品适量，置量瓶中，加乙酸乙酯定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为对照品溶液；
步骤(2)，选择不同产地的十批或十批以上的鱼腥草作为标准样本，精密称取所述标准样本适量，置圆底烧瓶中，设置鲜鱼腥草的料液比为1:5～1:15或干鱼腥草的料液比为1:10～1:20，利用挥发油提取器，回流提取1h～3h，作为供试品溶液。
在优选地方案中，所述步骤(3)中，采用INNOWAX 19091N-113毛细管色谱柱进行色谱分离，所述毛细管色谱柱的升温程序为：70℃保持5min；5℃/min升至110℃，保持4min；2℃/min升至140℃；1℃/min升至150℃；5℃/min升至240℃，保持10min。
在优选地方案中，所述步骤(2)中，所述鲜鱼腥草的料液比为1:10或干鱼腥草的料液比为1:15，回流提取时间为2h(即2小时)。
优选地，所述步骤(4)中，可以采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A版)”处理所述色谱图，以建立鲜鱼腥草或干鱼腥草中挥发性成分的特征指纹图谱。
优选地，所述步骤(4)中，所述鲜鱼腥草的特征指纹图谱中包括14个所述共有指纹峰，以甲基正壬酮为参照，各共有指纹峰的平均相对保留时间分别为：
1号峰的平均相对保留时间为0.2166，RSD<1％；
2号峰的平均相对保留时间为0.2535，RSD<1％；
3号峰的平均相对保留时间为0.3057，RSD<1％；
4号峰的平均相对保留时间为0.3518，RSD<1％；
5号峰的平均相对保留时间为0.3956，RSD<1％；
6号峰的平均相对保留时间为0.5946，RSD<1％；
7号峰的平均相对保留时间为0.7882，RSD<1％；
8号峰的平均相对保留时间为0.9572，RSD<1％；
9号峰的平均相对保留时间为1.0000，RSD<1％；
10号峰的平均相对保留时间为1.2583，RSD<1％；
11号峰的平均相对保留时间为1.3874，RSD<1％；
12号峰的平均相对保留时间为1.4949，RSD<1％；
13号峰的平均相对保留时间为2.5058，RSD<1％；
14号峰的平均相对保留时间为2.5412，RSD<1％；
其中，RSD为相对标准偏差(relative standard deviation)
优选地，14个所述共有指纹峰中，所述2号峰为α-蒎烯、所述3号峰为正己醛、所述5号峰为桧烯、所述6号峰为壬醛、所述7号峰为癸醛、所述8号峰为乙酸龙脑酯、所述9号峰为甲基正壬酮、所述13号峰为月桂酸。
优选地，所述步骤(4)中，所述干鱼腥草的特征指纹图谱中包括16个所述共有指纹峰，以甲基正壬酮为参照，各共有指纹峰的平均相对保留时间分别为：
1号峰的平均相对保留时间为0.2166，RSD<1％；
2号峰的平均相对保留时间为0.2535，RSD<1％；
3号峰的平均相对保留时间为0.3057，RSD<1％；
4号峰的平均相对保留时间为0.3518，RSD<1％；
5号峰的平均相对保留时间为0.3956，RSD<1％；
6号峰的平均相对保留时间为0.5946，RSD<1％；
7号峰的平均相对保留时间为0.7882，RSD<1％；
8号峰的平均相对保留时间为0.9572，RSD<1％；
9号峰的平均相对保留时间为1.0000，RSD<1％；
10号峰的平均相对保留时间为1.1343，RSD<1％；
11号峰的平均相对保留时间为1.2583，RSD<1％；
12号峰的平均相对保留时间为1.4949，RSD<1％；
13号峰的平均相对保留时间为1.9185，RSD<1％；
14号峰的平均相对保留时间为2.4864，RSD<1％；
15号峰的平均相对保留时间为2.7038，RSD<1％；
16号峰的平均相对保留时间为2.7843，RSD<1％；
优选地，16个所述共有指纹峰中，所述2号峰为α-蒎烯、3号峰为正己醛、5号峰为桧烯、6号峰为壬醛、7号峰为癸醛、8号峰为乙酸龙脑酯、9号峰为甲基正壬酮、13号峰为石竹素、14号峰为月桂酸、16号峰为棕榈酸。
优选地，所述步骤(2)中，所述鱼腥草样本的数量为20批。
优选地，所述步骤(3)中，所述GC或GC-MS的色谱条件包括：采用INNOWAX19091N-113毛细管色谱柱进行色谱分离，所述毛细管色谱柱的升温程序为：70℃保持5min，5℃/min升至110℃，保持4min，2℃/min升至140℃，1℃/min升至150℃，5℃/min升至240℃，保持10min。
进一步地，所述步骤(3)中，所述GC或GC-MS的色谱条件还包括：进样量为1μL，气体流速25cm/sec，分流比1:10。
在一种方案中，所述对照品溶液的制备过程可以为：精密称取甲基正壬酮对照品10mg，置10mL量瓶中，加乙酸乙酯定容至刻度，摇匀，并在4℃低温条件下保存，作为储备液；精密量取储备液200μL，置25mL量瓶中，加乙酸乙酯定容至刻度，摇匀，用0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为对照品溶液。
在一种方案中，所述供试品溶液的制备过程可以为：精密称取鲜鱼腥草50g和/或干鱼腥草30g，分别放入1000mL圆底烧瓶中，鲜鱼腥草加水500mL水，制成料液比为1:10，和/或干鱼腥草加水450mL，制成料液比为1:15；连接挥发油提取器，提取器内加3mL水和3mL乙酸乙酯，连接冷凝管，回流提取2h；放置30min，取乙酸乙酯层，加无水硫酸钠约0.5g，振摇；鲜鱼腥草：取上层溶液至25mL量瓶中，和/或干鱼腥草：取上层溶液至5mL量瓶中；分别用适量乙酸乙酯洗涤无水硫酸钠，洗液并入对应量瓶中，并加乙酸乙酯定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
一种鱼腥草中挥发性成分特征指纹图谱的相似度评价方法，包括以下步骤：
(1)精密称取甲基正壬酮对照品适量，置量瓶中，加乙酸乙酯定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为对照溶液；
(2)精密称取待测鲜鱼腥草或干鱼腥草适量，置圆底烧瓶中，设置鲜鱼腥草的料液比为1:5～1:15或干鱼腥草的料液比为1:10～1:20，利用挥发油提取器，回流提取1～3h，作为待测溶液；
(3)精密量取所述对照溶液和所述待测溶液适量，分别进样，采用GC或GC-MS进行色谱分离和图谱测定，并分别记录指纹谱图；其中，GC或GC-MS的色谱条件与建立鲜鱼腥草或干鱼腥草的特征指纹图谱时的色谱条件相同；
(4)以甲基正壬酮的指纹峰为参考，计算所述指纹谱图中与特征指纹图谱中各特征指纹峰相对应的各峰的相对保留时间，所述相对保留时间的RSD小于5％时，判定相似度好；或利用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A版)”，以特征指纹图谱为参考，计算所述指纹谱图的相似度，所述相似度大于或等于0.85时，判定相似度好。
与现有技术相比，使用本发明提供的一种鱼腥草中挥发性成分特征指纹图谱的建立方法及相似度评价方法，具有以下有益效果：
1、本发明所提供的方法，能够快速、准确、方便的建立鲜/干鱼腥草中挥发性成分的特征指纹图谱，利用此方法，既能有效的提取出鲜/干鱼腥草中挥发性成分的共有指纹峰，为鱼腥草的鉴别提供依据，又便于评估鲜/干鱼腥草药材的质量优劣，有利于全面监控药材的质量。
2、2015年版《中国药典》中未见鱼腥草挥发性成分的质量评价指标；鱼腥草作为大宗中药材，历年来均有广泛的应用，有必要建立其质量评价标准；故本发明不仅有利于弥补标准的缺失，而且以挥发性成分的特征指纹图谱作为鱼腥草鉴别和含量差异分析的方法，且特征指纹图谱所包含的特征峰较多，可以更加全面地反映鱼腥草的优劣，从而使得本发明的特征性强。
3、本发明所提供的方法操作简单，所使用的仪器设备(GC或GC-MS)和材料普及率高，使用成本低廉，从而可以有效地扩大本方法的适用场合及使用范围，尤其适用于鱼腥草药材种植、加工等各个生产环节的质量监控中。
4、本发明所提供的鲜/干鱼腥草中挥发性成分的特征指纹图谱中，已经揭示了部分化学成分，有利于本领域的技术人员完成鱼腥草测定或研究工作，有利于鱼腥草的相识度评价工作。
5、本发明所提供的方法中，对照品和供试品的处理过程简单，使用量小，可以方便、快速地完成对照品溶液及供试品溶液的制备过程。
6、通过大量的实验考察和研究表明，本发明所提供的方法还具有方法稳定、精密度高、重现性好等特点，便于本方法的推广和普及。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
图1为本发明实施例2中所提供的，采用BH-50气相色谱柱时，所获得的色谱图。
图2为本发明实施例2中所提供的，采用Restek13868气相色谱柱时，所获得的色谱图。
图3为本发明实施例2中所提供的，采用INNOWAX(19091N-113)气相色谱柱时，所获得的色谱图。
图4为本发明实施例2中所提供的，采用实验编号1的升温程序时，所获得的色谱图。
图5为本发明实施例2中所提供的，采用实验编号2的升温程序时，所获得的色谱图。
图6为本发明实施例2中所提供的，采用实验编号3的升温程序时，所获得的色谱图。
图7为本发明实施例2中所提供的，采用实验编号4的升温程序时，所获得的色谱图。
图8为利用本发明实施例3中提供一种鱼腥草中挥发性成分特征指纹图谱的建立方法，所获得的各鲜鱼腥草样本的共有指纹峰的图谱。
图9为利用本发明实施例3中提供一种鱼腥草中挥发性成分特征指纹图谱的建立方法，所获得的各干鱼腥草样本的共有指纹峰的图谱。
图10为在图8的基础上，所获得的鲜鱼腥草中挥发性成分的特征指纹图谱。
图11为在图9的基础上，所获得的干鱼腥草中挥发性成分的特征指纹图谱。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。通常在此处附图中描述和示出的本发明实施例的组件可以以各种不同的配置来布置和设计。因此，以下对在附图中提供的本发明的实施例的详细描述并非旨在限制要求保护的本发明的范围，而是仅仅表示本发明的选定实施例。基于本发明的实施例，本领域技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明所涉及的测试材料和测试仪器
(1)本发明所用的鱼腥草材料
于2017年8月在四川江油、眉山、安县、什邡、广汉，广西、贵州、云南、甘肃等地收集鱼腥草鲜药材和干药材各20批，经鉴定均为三白草科植物鱼腥草(Houttynia cordataThunb.)，详细采集地点及采集时间如表1和表2所示。
表1鱼腥草鲜药材样品信息表
表2鱼腥草干药材样品信息表
将上述鲜鱼腥草和干鱼腥草，分别作为标准样本。
(2)本发明所用的药品及试剂样本
甲基正壬酮(中国检定研究院，批号：110834-201603)；
以正己烷为色谱纯，以乙酸乙酯、无水硫酸钠等其他试剂为分析纯。
(3)测试仪器
Aglient7890AGC色谱仪配备Agilent Chemstation色谱工作站(美国安捷伦科技有限公司)；
INNOWAX(19091N-113)毛细管气相色谱柱(美国安捷伦科技有限公司)；
氢火焰离子化检测器(FID，美国安捷伦科技有限公司)；
BP-121s精密电子天平(十万分之一，浙江精密仪器有限公司)；
BS-200S-WEI精密电子天平(千分之一，北京赛多利斯仪器系统有限公司)。
实施例1
鱼腥草鲜/干药材中挥发性成分的提取方法考察
(1)料液比
精密称取鲜鱼腥草50g和干鱼腥草30g，分别放入1000mL圆底烧瓶中，然后精密加入不同体积的水(优选蒸馏水)，制成料液比(鱼腥草的质量与作为浸提液的水的体积之比)如表3中所示的10组样本；将圆底烧瓶连接在挥发油提取器上，提取器内加3mL水，3mL乙酸乙酯，并连接冷凝管，回流提取2h；放置30min，取乙酸乙酯层，加无水硫酸钠约0.5g，振摇，取上层溶液至25mL(干鱼腥草至5mL)容量瓶中，并用适量乙酸乙酯洗涤无水硫酸钠，洗液并入同一量瓶中，加乙酸乙酯定容至刻度，摇匀，即得含有鲜鱼腥草中挥发性成分的待测溶液和含有干鱼腥草中挥发性成分的待测溶液；最后，分别精密量取所述待测溶液，利用Aglient 7890A气相色谱仪，配置INNOWAX(19091N-113)毛细管气相色谱及氢火焰离子化检测器(FID，Flame Ionization Detector)，构成GC-FID(气相色谱仪配合氢火焰离子化检测器)，以测定各待测溶液的色谱图；或利用Aglient 7890A气相色谱仪，配置INNOWAX(19091N-113)毛细管气相色谱及质谱仪，构成GC-MS(Gas Chromatography-MassSpectrometer，气相色谱-质谱联用仪)，以测定各待测溶液的色谱图，最后计算各色谱图中甲基正壬酮所对应的色谱峰的峰面积(优先采用外标法进行计算，并利用前述甲基正壬酮作为对照品)，具体结果如表3所示。
表3鲜鱼腥草和干鱼腥草的料液比的考察结果
结果表明，设置鲜鱼腥草的料液比介于1:5和1:15之间时，对应甲基正壬酮峰面积的较大；干鱼腥草的料液比介于1:10和1:20之间时，对应甲基正壬酮峰面积的较大；故在提取鱼腥草药材中挥发性成分的过程中，可以将鲜鱼腥草的料液比设置为1:5～1:15，或将干鱼腥草的料液比设置为1:10～1:20，此时，提取效果较好。
在进一步地优化方案中，鲜鱼腥草的料液比设置为1:10，或干鱼腥草的料液比设置为1:15时为最优。
(2)提取时间
精密称取鲜鱼腥草50g和干鱼腥草30g，分别放入1000mL圆底烧瓶中，然后精密加入500mL水(干鱼腥草对应450mL水)；将圆底烧瓶连接在挥发油提取器上，提取器内加3mL水，3mL乙酸乙酯，并连接冷凝管，分别回流提取0.5h、1h、2h、3h、4h(小时)；放置30min，取乙酸乙酯层，加无水硫酸钠约0.5g，振摇，取上层溶液至25mL(干鱼腥草至5mL)量瓶中，并用适量乙酸乙酯洗涤无水硫酸钠，洗液并入同一量瓶中，加乙酸乙酯定容至刻度，摇匀，即可分别获得四种含有鲜鱼腥草中挥发性成分的待测溶液和含有干鱼腥草中挥发性成分的待测溶液；最后，分别精密量取所述待测溶液，利用Aglient 7890A气相色谱仪，配置INNOWAX(19091N-113)毛细管气相色谱及氢火焰离子化检测器(FID，Flame IonizationDetector)，构成GC-FID(气相色谱仪配合氢火焰离子化检测器)，以测定各待测溶液的色谱图；或利用Aglient 7890A气相色谱仪，配置INNOWAX(19091N-113)毛细管气相色谱及质谱仪，构成GC-MS(Gas Chromatography-Mass Spectrometer，气相色谱-质谱联用仪)，以测定各待测溶液的色谱图，最后计算各色谱图中甲基正壬酮所对应的色谱峰的峰面积(优先采用外标法进行计算，并利用前述甲基正壬酮作为对照品)，具体结果如表4所示。
表4鲜鱼腥草和干药材提取时间的考察结果
结果表明，设置鲜鱼腥草的提取时间介于1小时和3小时之间时，对应甲基正壬酮峰的面积较大；干鱼腥草的提取时间介于1小时和3小时之间时，对应甲基正壬酮峰的面积也较大；故在提取鱼腥草药材中挥发性成分的过程中，可以将鲜鱼腥草或干鱼腥草的提取时间设置为1h～3h，此时，提取效果较好。
在进一步地优化方案中，鲜鱼腥草或干鱼腥草的提取时间设置为2h时，提取效果最好，效果最优。
实施例2
色谱条件的考察
根据实施例1的考察结果，精密称取鲜鱼腥草50g和干鱼腥草30g，分别放入1000mL圆底烧瓶中，然后精密加入不同体积的水(优选蒸馏水)，使得鲜鱼腥草的料液比为1:10，干鱼腥草的料液比为1:15，将圆底烧瓶连接在挥发油提取器上，提取器内加3mL水，3mL乙酸乙酯，并连接冷凝管，回流提取2h；放置30min，取乙酸乙酯层，加无水硫酸钠约0.5g，振摇，取上层溶液至25mL(干鱼腥草至5mL)容量瓶中，并用适量乙酸乙酯洗涤无水硫酸钠，洗液并入同一量瓶中，加乙酸乙酯定容至刻度，摇匀，即得含有鲜鱼腥草中挥发性成分的待测溶液和含有干鱼腥草中挥发性成分的待测溶液。
(1)色谱柱的选择
采用GC-MS(气相色谱-质谱联用仪)进行检测，其中，气相色谱采用的是Aglient7890A气相色谱仪，分别选用BH-50、Restek13868、INNOWAX(19091N-113)三种型号的气相色谱柱，进样量为1μL，气体流速25cm/sec，分流比1:10，对上述待测溶液中挥发性成分的色谱进行分离，并以质谱作检测器记录色谱图，如图1、图2以及图3所示。
通过对比以上3种气相色谱柱的色谱图发现，采用BH-50气相色谱柱所获得的色谱图(或指纹图谱)，分离度不好，峰形较差，如图1所示；采用Restek13868气相色谱柱和INNOWAX(19091N-113)气相色谱柱所获得的色谱图，各峰分离度好，峰形好，如图2及图3所示，但由于采用Restek13868气相色谱柱所获得的色谱图中，甲基正壬酮和乙酸龙脑酯在色谱图中未分离，不能获得甲基正壬酮和乙酸龙脑酯各自的指纹峰，从而不便于进行相似度的判别；而采用INNOWAX(19091N-113)气相色谱柱所获得的色谱图中，甲基正壬酮和乙酸龙脑酯在色谱图中的分离效果很好(分离度好)，可以为鱼腥草中挥发性成分的指纹图谱评价及品质鉴定提供依据，故在优选地方案中，采用INNOWAX(19091N-113)气相色谱柱对鱼腥草中各挥发性成分的指纹图谱进行分离。
(2)升温程序考察
在进一步地考察中，采用INNOWAX(19091N-113)气相色谱柱对鱼腥草中各挥发性成分的气相升温程序进行考察，其余实验条件不变，如表5所示，并分别记录色谱图；其中，色谱柱的气体流速采用的是25cm/sec，分流比为1:10；结果如图4、图5、图6以及图7所示。
表5 INNOWAX(19091N-113)气相色谱柱升温程序的考察
对上述四个对比实验所获得的色谱图中各色谱峰的分离度和峰形进行比较，发现实验编号4的色谱图，分离度和峰形都较好，如图7所示，故在优选地方案中，气相色谱柱的升温程序为：70℃保持5min；5℃/min升至110℃，保持4min；2℃/min升至140℃；1℃/min升至150℃；5℃/min升至240℃，保持10min最优。
进一步地实验探究表明：在建立鲜鱼腥草或干鱼腥草中挥发性成分的指纹图谱的过程中，气相色谱柱的升温程序可以做适当的调整：70℃保持3～6min，4～6℃/min升至100～120℃，保持3～6min，1～3℃/min升至130～150℃，1～3℃/min升至150～160℃，2～10℃/min升至240℃，保持5～15min；升温程序在这个范围内时，所测定出的色谱图与上述实验编号4具有相同或相近的效果，各色谱峰的分离度和峰形都较好，故也是较优的方案。
实施例3
一种鱼腥草中挥发性成分特征指纹图谱的建立方法，包括以下步骤：
(1)精密称取甲基正壬酮对照品适量，置容量瓶中，加乙酸乙酯定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为对照品溶液；
在优选地方案中，对照品溶液的制备过程可以为：精密称取甲基正壬酮对照品10mg，置10mL量瓶中，加乙酸乙酯定容至刻度，摇匀，并在4℃低温条件下保存，作为储备液；精密量取储备液200μL，置25mL量瓶中，加乙酸乙酯定容至刻度，摇匀，用0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为对照品溶液。
(2)选择不同产地和/或不同采集时间的十批或十批以上的鱼腥草作为标准样本，精密称取所述标准样本适量，置圆底烧瓶中，设置鲜鱼腥草的料液比为1:5～1:15或干鱼腥草的料液比为1:10～1:20，利用挥发油提取器，回流提取1～3h，作为供试品溶液；
优选地方案中，所述鲜鱼腥草的料液比为1:10或干鱼腥草的料液比为1:15，回流提取2h。
在本实施例中，选用的是前述不同采集地点及不同采集时间的40批鱼腥草(其中鲜鱼腥草20批，干鱼腥草20批)作为标准样本，这些标准样本经鉴定均为三白草科植物鱼腥草(Houttuynia cordata Thunb.)。
在优选地方案中，供试品溶液的制备过程可以为：精密称取同一产地且同一采集时间的鲜鱼腥草50g和/或干鱼腥草30g，分别放入1000mL圆底烧瓶中，鲜鱼腥草加水500mL水，制成料液比为1:10，干鱼腥草加水450mL，制成料液比为1:15；连接挥发油提取器，提取器内加3mL水和3mL乙酸乙酯，连接冷凝管，回流提取2h；放置30min，取乙酸乙酯层，加无水硫酸钠约0.5g，振摇；鲜鱼腥草：取上层溶液至25mL量瓶中，干鱼腥草：取上层溶液至5mL量瓶中；分别用适量乙酸乙酯洗涤无水硫酸钠，洗液并入对应量瓶中，并加乙酸乙酯定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
在进一步地优化方案中，为了确保所建立的鲜鱼腥草和干鱼腥草的特征指纹图谱更准确，上述鱼腥草标准样本的批数可以适当增加。
在本实施例中，由于鲜鱼腥草标准样本有20批，干鱼腥草标准样本也有20批，从而可以制备鲜鱼腥草标准样本的供试品溶液20份，干鱼腥草标准样本的供试品溶液20份。
(3)精密量取所述对照品溶液和所述供试品溶液适量，分别进样，采用气相色谱进行测定，并分别记录对照品溶液和供试品溶液的色谱图；其中，色谱条件包括：采用毛细管色谱柱，所述毛细管色谱柱的升温程序为：70℃保持3～6min，4～6℃/min升至100～120℃，保持3～6min，1～3℃/min升至130～150℃，1～3℃/min升至150～160℃，2～10℃/min升至240℃，保持5～15min；气体流速25cm/sec，分流比1:10。
优选地方案中，所述毛细管色谱柱的升温程序为：70℃保持5min，5℃/min升至110℃，保持4min，2℃/min升至140℃，1℃/min升至150℃，5℃/min升至240℃，保持10min；
在更优选地方案中，所述毛细管色谱柱为INNOWAX(19091N-113)气相色谱柱。
在优选地方案中，所述对照品溶液和供试品溶液进样量可以为1μL；进样量的多少，可以根据检测灵敏度要求及仪器具体情况作相应调整。
在优选地方案中，气相色谱可以采用GC或GC-MS，利用GC或GC-MS进行色谱分离和图谱测定，其中，GC为气相色谱仪，对应的检测器有多种，在本实施例中，优先采用氢火焰离子化检测器(FID，Flame Ionization Detector)；GC-MS为气相色谱-质谱联用仪。
(4)以甲基正壬酮的色谱峰为参照峰，计算色谱图中各色谱峰的相对保留时间，根据所述相对保留时间确定共有指纹峰，以所述共有指纹峰为特征指纹峰建立鲜鱼腥草或干鱼腥草的特征指纹图谱。
优选地方案中，采用国家食品药品监督管理局推荐的“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A版)”处理所述色谱图，建立由各所述供试品溶液色谱图中的共有指纹峰所组成的鲜鱼腥草或干鱼腥草的特征指纹图谱。
在本实施例中，将上述步骤(3)中所获得的鲜鱼腥草供试品溶液的20份色谱图以及干鱼腥草供试品溶液的20份色谱图，分别导入“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A版)”中，以甲基正壬酮的指纹峰作为参照峰，可以分别计算出各色谱峰的相对保留时间，根据色谱图中各色谱峰的相对保留时间确定共有指纹峰，从而可以分别建立由各共有指纹峰所组成的鲜鱼腥草或干鱼腥草的特征指纹图谱，如图8及图9所示；利用图8和图9，从而可以分别获得鲜鱼腥草中挥发性成分的特征指纹图谱，如图10所示；干鱼腥草中挥发性成分的特征指纹图谱，如图11所示。
如图8所示，步骤(4)中，所述鲜鱼腥草的特征指纹图谱中包括14个所述共有指纹峰，以甲基正壬酮为参照，各共有指纹峰的平均相对保留时间分别为：
1号峰的平均相对保留时间为0.2166，RSD<1％；
2号峰的平均相对保留时间为0.2535，RSD<1％；
3号峰的平均相对保留时间为0.3057，RSD<1％；
4号峰的平均相对保留时间为0.3518，RSD<1％；
5号峰的平均相对保留时间为0.3956，RSD<1％；
6号峰的平均相对保留时间为0.5946，RSD<1％；
7号峰的平均相对保留时间为0.7882，RSD<1％；
8号峰的平均相对保留时间为0.9572，RSD<1％；
9号峰的平均相对保留时间为1.0000，RSD<1％；
10号峰的平均相对保留时间为1.2583，RSD<1％；
11号峰的平均相对保留时间为1.3874，RSD<1％；
12号峰的平均相对保留时间为1.4949，RSD<1％；
13号峰的平均相对保留时间为2.5058，RSD<1％；
14号峰的平均相对保留时间为2.5412，RSD<1％；
其中，RSD为相对标准偏差(relative standard deviation)；鲜鱼腥草的特征指纹图谱中，选定的共有指纹峰较多，从而使得特征指纹峰较多，有利于更加全面地评价鲜鱼腥草药材的质量。
进一步地试验发现：14个所述共有指纹峰中，所述2号峰为α-蒎烯、所述3号峰为正己醛、所述5号峰为桧烯、所述6号峰为壬醛、所述7号峰为癸醛、所述8号峰为乙酸龙脑酯、所述9号峰为甲基正壬酮、所述13号峰为月桂酸；故在另外的方案中，也可用这个已知成分替代甲基正壬酮作为对照品，并制备对照品溶液。
进一步地，由图8中的色谱峰可知，甲基正壬酮色谱峰分离良好，峰形稳定，为鲜鱼腥草中挥发性成分的主要成分，故将保留时间为21.75min的色谱峰(甲基正壬酮)作为参照峰，标记为S，分别计算20批鲜鱼腥草中14个共有峰的相对保留时间，每批样品共有峰的相对保留时间为RSD％均小于1.0％，符合指纹图谱的要求。
如图9所示，所述步骤(4)中，所述干鱼腥草的特征指纹图谱中包括16个所述共有指纹峰，以甲基正壬酮为参照，各共有指纹峰的平均相对保留时间分别为：
1号峰的平均相对保留时间为0.2166，RSD<1％；
2号峰的平均相对保留时间为0.2535，RSD<1％；
3号峰的平均相对保留时间为0.3057，RSD<1％；
4号峰的平均相对保留时间为0.3518，RSD<1％；
5号峰的平均相对保留时间为0.3956，RSD<1％；
6号峰的平均相对保留时间为0.5946，RSD<1％；
7号峰的平均相对保留时间为0.7882，RSD<1％；
8号峰的平均相对保留时间为0.9572，RSD<1％；
9号峰的平均相对保留时间为1.0000，RSD<1％；
10号峰的平均相对保留时间为1.1343，RSD<1％；
11号峰的平均相对保留时间为1.2583，RSD<1％；
12号峰的平均相对保留时间为1.4949，RSD<1％；
13号峰的平均相对保留时间为1.9185，RSD<1％；
14号峰的平均相对保留时间为2.4864，RSD<1％；
15号峰的平均相对保留时间为2.7038，RSD<1％；
16号峰的平均相对保留时间为2.7843，RSD<1％；
干鱼腥草的特征指纹图谱中，选定的共有指纹峰较多，从而使得特征指纹图谱中的特征指纹峰较多，有利于更加全面地评价鲜鱼腥草药材的质量。
进一步地试验发现：16个所述共有指纹峰中，所述2号峰为α-蒎烯、3号峰为正己醛、5号峰为桧烯、6号峰为壬醛、7号峰为癸醛、8号峰为乙酸龙脑酯、9号峰为甲基正壬酮、13号峰为石竹素、14号峰为月桂酸、16号峰为棕榈酸；故在另外的方案中，也可用这个已知成分替代甲基正壬酮作为对照品，并制备对照品溶液。
进一步地，由图9中的色谱峰可知，甲基正壬酮色谱峰分离良好，峰形稳定，为鱼腥草干药材中挥发性成分的主要成分，故将保留时间为21.75min的色谱峰(甲基正壬酮)作为参照峰，标记为S，分别计算20批鱼腥草干药材中16个共有峰的相对保留时间，每批样品共有峰的相对保留时间为RSD％均小于1.0％，符合指纹图谱的要求。
实施例4
方法学考察
(1)精密度实验
在进行精密度考察时，指纹图谱中各峰保留时间的评定标准为RSD≤1.0％，峰面积的评定标准为RSD≤2.0％。
在本实验中，按实施例3中步骤(1)中对照品溶液的的制备方法制备对照品溶液，分别取上述鲜鱼腥草标准样品六份，按实施例3中步骤(2)中的所述供试品溶液的制备方法分别制备6份供试品溶液，并按上述步骤(3)中的色谱条件进行检测，连续进样6次，获得对照品溶液及供试品溶液的指纹谱图，并以对照品溶液中甲基正壬酮的指纹峰作为参照峰，计算供试品溶液的指纹谱图中各峰的保留时间和峰面积；结果表明，鲜鱼腥草中各峰的相对保留时间的相对标准偏差(RSD,relative standard deviation)的范围介于0.51％～0.98％之间，峰面积的相对标准偏差(RSD)的范围介于0.97％～1.56％之间，完全满足精密度的要求，表明精密度良好。
(2)稳定性实验
在本实验中，同理，取上述鲜鱼腥草标准样品，按实施例3中所述供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，并在室温下分别放置0、2、4、8、12、24h，根据《中国药典》2015版四部的通则9000指导原则，并按实施例3中所述步骤(3)中的色谱条件，对每个时间段的供试品溶液进行检测，记录指纹图谱，并分别计算指纹图谱中各峰的保留时间和峰面积；结果表明，鲜鱼腥草中各峰的相对保留时间的相对标准偏差(RSD)的范围介于0.49％～0.91％之间，峰面积的相对标准偏差(RSD)的范围介于0.51％～1.54％之间，完全满足稳定性要求，表明精密度良好。
(3)重复性实验
重复性实验是指：同一实验室及同一分析人员，用相同的分析法在短时间内对同一样品重复测定结果之间的相对标准偏差。
故在本实验中，取上述鲜鱼腥草标准样品一份，按实施例3中所述供试品溶液的制备方法制备6份供试品溶液，按实施例3中所述色谱条件进行检测，记录指纹图谱，并分别计算指纹图谱中各峰的保留时间和峰面积；结果表明，鲜鱼腥草中各峰的相对保留时间的相对标准偏差(RSD)的范围介于0.41％～0.95％之间，峰面积的相对标准偏差(RSD)的范围介于1.51％～1.92％之间，完全满足重复性要求，表明精密度良好。
实施例5
一种鱼腥草中挥发性成分特征指纹图谱的相似度评价方法，可以按照实施例3中制备对照溶液和制备供试品溶液的方法，分别制备对照溶液和待测溶液，具体包括以下步骤：
(1)精密称取甲基正壬酮对照品适量，置容量瓶中，加乙酸乙酯定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为对照溶液；
(2)精密称取待测鲜鱼腥草或干鱼腥草适量，置圆底烧瓶中，设置鲜鱼腥草的料液比为1:5～1:15或干鱼腥草的料液比为1:10～1:20，利用挥发油提取器，回流提取1～3h，作为待测溶液；
优选地方案中，待测溶液的制备过程与建立鲜鱼腥草或干鱼腥草的特征指纹图谱时供试品溶液的制备过程相同。
(3)精密量取所述对照溶液和所述待测溶液适量，分别进样，采用GC或GC-MS进行色谱分离和图谱测定，并分别记录指纹谱图；
优选地方案中，GC或GC-MS的色谱条件与前述建立鲜鱼腥草或干鱼腥草的特征指纹图谱时的色谱条件相同；
(4)以甲基正壬酮的指纹峰为参照峰，计算所述指纹谱图中与特征指纹图谱中各特征指纹峰相对应的各峰的相对保留时间，并分别与特征指纹图谱中对应特征指纹峰的相对保留时间进行比较，所述相对保留时间的RSD小于5％时，判定相似度好；或利用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A版)”，以特征指纹图谱为参考，计算所述指纹谱图的相似度，所述相似度大于或等于0.85时，判定相似度好。
实施例6
采集不同产地的鲜鱼腥草药材20批，作为待测鲜鱼腥草，利用实施例3中所获得的鲜鱼腥草的特征指纹图谱为参照，采用实施例5中所述的一种鱼腥草中挥发性成分特征指纹图谱的相似度评价方法进行相似度评价，包括以下步骤：
(1)精密称取甲基正壬酮对照品适量，置容量瓶中，加乙酸乙酯定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为对照溶液；
优选地，所述对照溶液的浓度与测定特征指纹图谱时所制备的对照溶液的浓度相同。
(2)精密称取待测鲜鱼腥草适量，置烧瓶中，设置鲜鱼腥草的料液比为1:10，利用挥发油提取器，回流提取2h，作为待测溶液；
优选地，待测溶液的制备过程可以与测定特征指纹图谱时制备供试品溶液的过程相同：精密称取同一批待测鲜鱼腥草50g，分别放入1000mL圆底烧瓶中，鲜鱼腥草加水500mL水，制成料液比为1:10，连接挥发油提取器，提取器内加3mL水和3mL乙酸乙酯，连接冷凝管，回流提取2h；放置30min，取乙酸乙酯层，加无水硫酸钠约0.5g，振摇，取上层溶液至25mL量瓶中，分别用适量乙酸乙酯洗涤无水硫酸钠，洗液并入对应量瓶中，并加乙酸乙酯定容至刻度，摇匀，既得待测溶液(每批待测鲜鱼腥草1份，共20份)。
(3)精密量取所述对照溶液和所述待测溶液适量，分别进样，采用气相色谱进行测定，并分别记录对照溶液和待测溶液的指纹谱图，例如，如图10所示；其中，气相色谱的参数与建立特征指纹图谱时的参数相同。
(4)采用国家食品药品监督管理局推荐的“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A版)”，以鲜鱼腥草的特征指纹图谱(图10)为参考，计算待测溶液的指纹谱图的相似度。
相似度的计算过程为：以甲基正壬酮的指纹峰为参照峰，计算出待测溶液的指纹谱图中其余各指纹峰的相对保留时间，并分别与特征指纹图谱中对应的14个共有指纹峰的相对保留时间进行比较，以判断出被测鲜鱼腥草的指纹谱图的相似度，从而便于鉴别鲜鱼腥草或鉴定鲜鱼腥草的质量，本实施例中，各批待测鲜鱼腥草的相似度如表6所示。
表6 20批鲜鱼腥草药材的相似度
通常，在进行相似度评价时，相似度大于或等于0.85，判定为相似；从表中可以看出，不同产地的鲜鱼腥草药材的指纹图谱与特征指纹图谱的相似度均大于0.85，表明被测的20批鲜鱼腥草药材的相似度较高，质量相对稳定；同时，也表明实施例3中所提供的鱼腥草挥发性成分特征指纹图谱的建立方法及所建立的特征指纹图谱，以及实施例5中所提供的相似度评价方法，可以有效地对鲜鱼腥草药材的相似度进行评价。
实施例7
本实施例与上述实施例6的主要区别在于，在本实施例中，采集不同产地的干鱼腥草药材20批，作为待测干鱼腥草，并按照实施例6的步骤进行测定，进一步地区别在于步骤(2)中；精密称取待测干鱼腥草适量，置烧瓶中，设置鲜鱼腥草的料液比为1:15，利用挥发油提取器，回流提取2h，作为待测溶液；
更加详细的过程为：精密称取同一批待测干鱼腥草30g，分别放入1000mL圆底烧瓶中，干鱼腥草加水450mL，制成料液比为1:15；连接挥发油提取器，提取器内加3mL水和3mL乙酸乙酯，连接冷凝管，回流提取2h；放置30min，取乙酸乙酯层，加无水硫酸钠约0.5g，振摇，取上层溶液至5mL量瓶中；分别用适量乙酸乙酯洗涤无水硫酸钠，洗液并入对应量瓶中，并加乙酸乙酯定容至刻度，摇匀，既得待测溶液(每批待测干鱼腥草1份，共20份)。
在步骤(4)中，以干鱼腥草的特征指纹图谱(图11)为参考，利用特征指纹图谱中的16个共有指纹峰，计算待测溶液的指纹谱图的相似度，结果如表7所示。
表7 20批干鱼腥草药材的相似度
从表中可以看出，仅有一批干鱼腥草的相似度略小于0.85，而其余不同产地的干鱼腥草药材的指纹图谱与特征指纹图谱的相似度均大于0.85，误差率较低；相似度的数值越大，表明相似度较高，质量更好，更加接近标准的干鱼腥草药材；同时，也表明实施例3中所提供的鱼腥草挥发性成分特征指纹图谱的建立方法及所建立的特征指纹图谱，以及实施例5中所提供的相似度评价方法，可以有效地对干鱼腥草药材的相似度进行评价，便于更直观地反应出药材的质量好坏。
以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种鱼腥草中挥发性成分特征指纹图谱的建立方法，其特征在于，包括步骤(3)和步骤(4)，其中，
步骤(3)，精密量取对照品溶液和供试品溶液适量，分别进样，采用GC或GC-MS进行色谱分离和图谱测定，并记录色谱图；其中，GC或GC-MS的色谱条件包括：采用毛细管色谱柱进行色谱分离，所述毛细管色谱柱的升温程序为：70℃保持3～6min；4～6℃/min升至100～120℃，保持3～6min；1～3℃/min升至130～150℃；1～3℃/min升至150～160℃；2～10℃/min升至240℃，保持5～15min。
步骤(4)，根据所述色谱图中各色谱峰的相对保留时间确定共有指纹峰，以所述共有指纹峰为特征指纹峰建立鲜鱼腥草或干鱼腥草的特征指纹图谱。
2.根据权利要求1所述的鱼腥草中挥发性成分特征指纹图谱的建立方法，其特征在于，还包括以下步骤：
步骤(1)，精密称取甲基正壬酮对照品适量，置量瓶中，加乙酸乙酯定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为对照品溶液；
步骤(2)，选择不同产地的十批或十批以上的鱼腥草作为标准样本，精密称取所述标准样本适量，置圆底烧瓶中，设置鲜鱼腥草的料液比为1:5～1:15或干鱼腥草的料液比为1:10～1:20，利用挥发油提取器，回流提取1h～3h，作为供试品溶液。
3.根据权利要求2所述的鱼腥草中挥发性成分特征指纹图谱的建立方法，其特征在于，所述步骤(3)中，采用INNOWAX 19091N-113毛细管色谱柱进行色谱分离，所述毛细管色谱柱的升温程序为：70℃保持5min；5℃/min升至110℃，保持4min；2℃/min升至140℃；1℃/min升至150℃；5℃/min升至240℃，保持10min。
4.根据权利要求3所述的鱼腥草中挥发性成分特征指纹图谱的建立方法，其特征在于，所述步骤(2)中，所述鲜鱼腥草的料液比为1:10或干鱼腥草的料液比为1:15，回流提取时间为2h。
5.根据权利要求4所述的鱼腥草中挥发性成分特征指纹图谱的建立方法，其特征在于，所述步骤(4)中，采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A版)”处理所述色谱图，以建立鲜鱼腥草或干鱼腥草中挥发性成分的特征指纹图谱。
6.根据权利要求5所述的鱼腥草中挥发性成分特征指纹图谱的建立方法，其特征在于，所述步骤(4)中，所述鲜鱼腥草的特征指纹图谱中包括14个所述共有指纹峰，以甲基正壬酮为参照，各共有指纹峰的平均相对保留时间分别为：
1号峰的平均相对保留时间为0.2166，RSD<1％；
2号峰的平均相对保留时间为0.2535，RSD<1％；
3号峰的平均相对保留时间为0.3057，RSD<1％；
4号峰的平均相对保留时间为0.3518，RSD<1％；
5号峰的平均相对保留时间为0.3956，RSD<1％；
6号峰的平均相对保留时间为0.5946，RSD<1％；
7号峰的平均相对保留时间为0.7882，RSD<1％；
8号峰的平均相对保留时间为0.9572，RSD<1％；
9号峰的平均相对保留时间为1.0000，RSD<1％；
10号峰的平均相对保留时间为1.2583，RSD<1％；
11号峰的平均相对保留时间为1.3874，RSD<1％；
12号峰的平均相对保留时间为1.4949，RSD<1％；
13号峰的平均相对保留时间为2.5058，RSD<1％；
14号峰的平均相对保留时间为2.5412，RSD<1％。
7.根据权利要求5所述的鱼腥草中挥发性成分特征指纹图谱的建立方法，其特征在于，所述步骤(4)中，所述干鱼腥草的特征指纹图谱中包括16个所述共有指纹峰，以甲基正壬酮为参照，各共有指纹峰的平均相对保留时间分别为：
1号峰的平均相对保留时间为0.2166，RSD<1％；
2号峰的平均相对保留时间为0.2535，RSD<1％；
3号峰的平均相对保留时间为0.3057，RSD<1％；
4号峰的平均相对保留时间为0.3518，RSD<1％；
5号峰的平均相对保留时间为0.3956，RSD<1％；
6号峰的平均相对保留时间为0.5946，RSD<1％；
7号峰的平均相对保留时间为0.7882，RSD<1％；
8号峰的平均相对保留时间为0.9572，RSD<1％；
9号峰的平均相对保留时间为1.0000，RSD<1％；
10号峰的平均相对保留时间为1.1343，RSD<1％；
11号峰的平均相对保留时间为1.2583，RSD<1％；
12号峰的平均相对保留时间为1.4949，RSD<1％；
13号峰的平均相对保留时间为1.9185，RSD<1％；
14号峰的平均相对保留时间为2.4864，RSD<1％；
15号峰的平均相对保留时间为2.7038，RSD<1％；
16号峰的平均相对保留时间为2.7843，RSD<1％。
8.根据权利要求1-7任一所述的鱼腥草中挥发性成分特征指纹图谱的建立方法，其特征在于，所述对照品溶液的制备过程为：精密称取甲基正壬酮对照品10mg，置10mL量瓶中，加乙酸乙酯定容至刻度，摇匀，并在4℃低温条件下保存，作为储备液；精密量取储备液200μL，置25mL量瓶中，加乙酸乙酯定容至刻度，摇匀，用0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为对照品溶液。
9.根据权利要求8所述的鱼腥草中挥发性成分特征指纹图谱的建立方法，其特征在于，所述供试品溶液的制备过程为：精密称取鲜鱼腥草50g和/或干鱼腥草30g，分别放入1000mL圆底烧瓶中，鲜鱼腥草加水500mL水，制成料液比为1:10，和/或干鱼腥草加水450mL，制成料液比为1:15；连接挥发油提取器，提取器内加3mL水和3mL乙酸乙酯，连接冷凝管，回流提取2h；放置30min，取乙酸乙酯层，加无水硫酸钠约0.5g，振摇；鲜鱼腥草：取上层溶液至25mL量瓶中，和/或干鱼腥草：取上层溶液至5mL量瓶中；分别用适量乙酸乙酯洗涤无水硫酸钠，洗液并入对应量瓶中，并加乙酸乙酯定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
10.一种鱼腥草中挥发性成分特征指纹图谱的相似度评价方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)精密称取甲基正壬酮对照品适量，置量瓶中，加乙酸乙酯定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为对照溶液；
(2)精密称取待测鲜鱼腥草或干鱼腥草适量，置圆底烧瓶中，设置鲜鱼腥草的料液比为1:5～1:15或干鱼腥草的料液比为1:10～1:20，利用挥发油提取器，回流提取1～3h，作为待测溶液；
(3)精密量取所述对照溶液和所述待测溶液适量，分别进样，采用GC或GC-MS进行色谱分离和图谱测定，并分别记录指纹谱图；其中，GC或GC-MS的色谱条件与建立鲜鱼腥草或干鱼腥草的特征指纹图谱时的色谱条件相同；
(4)以甲基正壬酮的指纹峰为参考，计算所述指纹谱图中与特征指纹图谱中各特征指纹峰相对应的各峰的相对保留时间，所述相对保留时间的RSD小于5％时，判定相似度好；或利用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A版)”，以特征指纹图谱为参考，计算所述指纹谱图的相似度，所述相似度大于或等于0.85时，判定相似度好。
CN201810142191.3A 2018-02-11 2018-02-11 一种鱼腥草中挥发性成分特征指纹图谱的建立方法及相似度评价方法 Pending CN108414632A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810142191.3A CN108414632A (zh) 2018-02-11 2018-02-11 一种鱼腥草中挥发性成分特征指纹图谱的建立方法及相似度评价方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810142191.3A CN108414632A (zh) 2018-02-11 2018-02-11 一种鱼腥草中挥发性成分特征指纹图谱的建立方法及相似度评价方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN108414632A true CN108414632A (zh) 2018-08-17

Family

ID=63128530

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810142191.3A Pending CN108414632A (zh) 2018-02-11 2018-02-11 一种鱼腥草中挥发性成分特征指纹图谱的建立方法及相似度评价方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN108414632A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114894917A (zh) * 2022-04-06 2022-08-12 山东步长制药股份有限公司 一种甘松挥发性成分的检测及指纹图谱构建方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102323345A (zh) * 2011-07-25 2012-01-18 湖南正清制药集团股份有限公司 一种鱼腥草注射液的检测方法
CN105158400A (zh) * 2015-08-04 2015-12-16 四川升和药业股份有限公司 一种鱼腥草滴眼液的质量控制方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102323345A (zh) * 2011-07-25 2012-01-18 湖南正清制药集团股份有限公司 一种鱼腥草注射液的检测方法
CN105158400A (zh) * 2015-08-04 2015-12-16 四川升和药业股份有限公司 一种鱼腥草滴眼液的质量控制方法

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
单体江 等: ""鱼腥草次生代谢产物及其抗细菌活性"", 《西南农业学报》 *
吴芳 等: ""GC法同时测定周氏克金岩方挥发油配伍前后变化"", 《中成药》 *
孟江: ""鱼腥草化学成分及其指纹图谱的研究"", 《中国优秀博硕士学位论文全文数据库（博士） 医药卫生科技辑》 *
张建春 等: ""GC法同时测烧伤软膏中甲基正壬酮与冰片"", 《中成药》 *
王鸿 等: ""鲜鱼腥草及其内生菌挥发性成分分析"", 《浙江工业大学学报》 *
陈婧: ""基于鱼腥草抗炎活性的质量评价及其作用机制研究"", 《中国博士学位论文全文数据库 医药卫生科技辑》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114894917A (zh) * 2022-04-06 2022-08-12 山东步长制药股份有限公司 一种甘松挥发性成分的检测及指纹图谱构建方法
CN114894917B (zh) * 2022-04-06 2023-10-20 山东步长制药股份有限公司 一种甘松挥发性成分的检测及指纹图谱构建方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102138985B (zh) 一种白芍制剂的质量检测方法
CN105842353B (zh) 银翘清热片指纹图谱的建立方法及其指纹图谱
CN106483213B (zh) 桃核承气汤组合物指纹图谱的建立方法及指纹图谱
CN105628834B (zh) 蒙药漏芦花指纹图谱建立方法以及质量评价方法
CN107589191B (zh) 金贝口服液hplc指纹图谱建立和检测方法
CN108226313A (zh) 地黄中苷类成分的同时测定及指纹图谱构建方法
CN107356691A (zh) 建曲指纹图谱的检测方法
CN110031570A (zh) 抗感冒颗粒的指纹图谱检测方法
CN102370891A (zh) 一种用hplc指纹图谱鉴别铁皮石斛真伪的方法
CN106404942B (zh) 一种康肾颗粒指纹图谱的构建方法及其标准指纹图谱
CN106442789A (zh) 复方血脂宁提取物指纹图谱的建立及其活性成分定量分析方法
CN101419200B (zh) 一种用于原产地人参保护的hplc指纹图谱鉴别方法
CN109239220B (zh) 一种玉屏风颗粒的质量检测方法
CN110297060A (zh) 一种山苦荬药材指纹图谱检测方法及其指纹图谱
CN111948330B (zh) 仁术健胃颗粒指纹图谱的检测方法
CN108169345A (zh) 蒙药小秦艽花指纹图谱建立方法以及质量评价方法
CN108663440A (zh) 裸花紫珠药材uplc指纹图谱构建方法及标准指纹图谱
CN108414632A (zh) 一种鱼腥草中挥发性成分特征指纹图谱的建立方法及相似度评价方法
CN105699581B (zh) 草木犀药材的uplc指纹图谱的构建方法及其标准指纹图谱
CN110274970A (zh) 融差指纹图谱的建立方法及其在益血生胶囊质控中的应用
CN108982696A (zh) 六神曲指纹图谱的检测方法
CN109596744A (zh) 一种中药制剂的hplc检测方法
CN110308213B (zh) 滋肾育胎丸指纹图谱构建方法及其在质量检测中的应用
CN106526000A (zh) 升麻葛根汤组合物指纹图谱的建立方法及指纹图谱
CN110118841A (zh) 一种肝胆双清口服液的hplc特征图谱的构建方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20180817

RJ01 Rejection of invention patent application after publication