CN108410989A - 一种宫颈癌FAM19A4、Mir124-2基因的引物及检测试剂盒 - Google Patents

一种宫颈癌FAM19A4、Mir124-2基因的引物及检测试剂盒 Download PDF

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Abstract

本发明的提供了一种宫颈癌FAM19A4、Mir124‑2基因的引物：FAM19A4：PCR扩增上游引物:GGGTTAGGTAGGGATAGGAGTAPC；扩增下游引物：biotin‑ACCCATCACCTCTACAACC；Mir124‑2:PCR扩增上游引物:TGTGTTGTAAATGGTATGGAGATAT；PCR扩增下游引物：biotin‑CTCATAAACCCAACTCCTATCTC。有效效果在于：可以快速、准确进行宫颈癌的诊断。

Description

一种宫颈癌FAM19A4、Mir124-2基因的引物及检测试剂盒
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种宫颈癌FAM19A4、Mir124-2基因的引物、检测试剂盒。
背景技术
宫颈癌是全球女性最常见的生殖系统恶性肿瘤，其发病率仅次于乳腺癌。2008年我国宫颈癌新发病例12.19/10万，位于女性新发恶性肿瘤第6位；宫颈癌死亡病例3.90/10万；我国的宫颈癌均呈现与发达国家相反的、明显的上升趋势。由于已有的研究证实了高危型人乳头状瘤病毒(HPV)感染与宫颈癌发病密切相关，因此目前预防宫颈癌的发生一般都是通过检测女性是否感染了高危型的HPV病毒的角度来进行的。
就目前通过检测HPV病毒，甚至通过病理分析子宫颈上皮内瘤变来判断受检者患宫颈癌风险的方法，会导致临床的过度治疗，浪费大量的医疗资源。
因此，临床上急需能够即时、准确，并且费用能为患者所承受的精确宫颈癌早筛的技术出现。
CN201710449257.9号专利揭露了一种宫颈癌相关PAX1、FAM19A4、PHACTR3和DAPK基因甲基化程度的检测引物、探针、试剂盒及其应用，该专利可以发现宫颈组织中PAX1、FAM19A4、PHACTR3、DAPK四个基因的启动子区域的甲基化程度与宫颈癌极显著相关，可以作为辅助诊断宫颈癌的生物标志物，通过同时设计甲基化探针和非甲基化探针避免了非甲基化DNA的影响，结果更可靠。与常规的宫颈癌诊断方法相比，该专利的方法具有快速、灵敏度和特异性高等优点，能够在早期及时对人宫颈癌进行诊断，使得早期准确诊断宫颈癌成为可能，避免了医疗资源的浪费。
本发明另外提供一种宫颈癌FAM19A4、Mir124-2基因的引物及检测试剂盒，用于宫颈癌的快速、准确诊断。
发明内容
本发明目的在于提供一种宫颈癌FAM19A4、Mir124-2基因的引物及检测试剂盒，用于宫颈癌的快速、准确诊断。
为实现上述目的，本发明提供一种宫颈癌FAM19A4、Mir124-2基因的引物，
FAM19A4：
PCR扩增上游引物:GGGTTAGGTAGGGATAGGAGTA；
PCR扩增下游引物:biotin-ACCCATCACCTCTACAACC；
Mir124-2:
PCR扩增上游引物:TGTGTTGTAAATGGTATGGAGATAT；
PCR扩增下游引物:biotin-CTCATAAACCCAACTCCTATCTC。
为实现上述目的，本发明还提供一种乳腺癌基因检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括一对FAM19A4、Mir124-2基因的引物：
FAM19A4：
PCR扩增上游引物:GGGTTAGGTAGGGATAGGAGTA；
PCR扩增下游引物:biotin-ACCCATCACCTCTACAACC；
Mir124-2:
PCR扩增上游引物:TGTGTTGTAAATGGTATGGAGATAT；
PCR扩增下游引物:biotin-CTCATAAACCCAACTCCTATCTC。
相比现有技术，本发明一种宫颈癌FAM19A4、Mir124-2基因的引物及检测试剂盒的有效效果在于：可以快速、准确进行宫颈癌的诊断。
具体实施方式
下面结合具体实施方式进一步阐述本发明的技术方案。
以下实施例旨在说明本发明而不是对本发明的进一步限定。
本发明为一种宫颈癌FAM19A4、Mir124-2基因的引物；FAM19A4、Mir124-2基因的引物分别为：
FAM19A4：
PCR扩增上游引物:GGGTTAGGTAGGGATAGGAGTA；
PCR扩增下游引物:biotin-ACCCATCACCTCTACAACC；
Mir124-2:
PCR扩增上游引物:TGTGTTGTAAATGGTATGGAGATAT；
PCR扩增下游引物:biotin-CTCATAAACCCAACTCCTATCTC。
本发明还提供一种宫颈癌FAM19A4、Mir124-2基因检测试剂盒；其具有FAM19A4、Mir124-2基因，
FAM19A4、Mir124-2基因的引物包括：
FAM19A4：
PCR扩增上游引物:GGGTTAGGTAGGGATAGGAGTA；
PCR扩增下游引物:biotin-ACCCATCACCTCTACAACC；
Mir124-2:
PCR扩增上游引物:TGTGTTGTAAATGGTATGGAGATAT；
PCR扩增下游引物:biotin-CTCATAAACCCAACTCCTATCTC。
dNTP；
Tqq DNA聚合酶；
ATP硫酸化酶；
荧光素酶；
荧光素酶；
三磷酸腺苷双磷酸酶；
氯化镁。
检测实施步骤：
1.提取DNA模板：针对5个宫颈癌患者提供模板，分别通过取全血4ml，2000rpm室温10min，将上清移至新的离心管，在经过12000rpm室温离心5min后，将上清移至新的离心管中，获得血浆，每例血浆分为5份，每份350ul，通过酚-氯仿-异戊醇抽提法提取DNA收集宫颈细胞作为模板。
2.样本基因组DNA经过重亚硫酸盐处理。经过重亚硫酸盐处理后，DNA序列中非甲基化的C会被转变为U，而甲基化的C保持不变；通过后续焦磷酸测序就可以确定是U还是C，是C说明有甲基化，是U说明未被甲基化。
3.配制如下反应体系
提供引物序列：
FAM19A4：
PCR扩增上游引物:GGGTTAGGTAGGGATAGGAGTA
PCR扩增下游引物:biotin-ACCCATCACCTCTACAACC
Mir124-2:
PCR扩增上游引物:TGTGTTGTAAATGGTATGGAGATAT
PCR扩增下游引物:biotin-CTCATAAACCCAACTCCTATCTC
形成PCR反应体系：
成分(浓度) 组成
1×PCR Buffer 5.0μL
FAM19A4PCR扩增上游引物 0.5μM
FAM19A4PCR扩增下游引物 0.5μM
Mir124-2PCR扩增上游引物 0.5μM
Mir124-2PCR扩增下游引物 0.5μM
dNTP 0.5μM
Tqq DNA聚合酶 0.5μM
ATP硫酸化酶 0.5μM
荧光素酶 0.5μM
三磷酸腺苷双磷酸酶 0.5μM
氯化镁 0.5μM
重亚硫酸盐处理处理后的DNA模板 2μL
ddH2O 补足到20μL
4.荧光定量PCR扩增反应：
5.检测结果
经过催化焦磷酸方法检测，确认5例都能检测出宫颈癌患者基因，宫颈癌的快速、准确诊断，可见本发明对宫颈癌者有着很好的参考意义。
上述实例只为说明本发明的技术构思及特点，其目的在于让熟悉此项技术的人是能够了解本发明的内容并据以实施，并不能以此限制本发明的保护范围。凡根据本发明精神实质所做的等效变换或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
序列表
<110> 苏州海苗生物科技有限公司
<120> 一种宫颈癌FAM19A4、Mir124-2基因的引物及检测试剂盒
<160> 4
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 22
<212> DNA
<213> (人工序列）
<400> 1
gggttaggta gggataggag ta 22
<210> 2
<211> 19
<212> DNA
<213> (人工序列）
<400> 2
acccatcacc tctacaacc 19
<210> 3
<211> 25
<212> DNA
<213> (人工序列）
<400> 3
tgtgttgtaa atggtatgga gatat 25
<210> 4
<211> 24
<212> DNA
<213> (人工序列）
<400> 4
catcataaac ccaactccta tctc 24

Claims (2)

1.一种宫颈癌FAM19A4、Mir124-2基因的引物，其特征在于：上述基因的引物为：
FAM19A4：
PCR扩增上游引物:GGGTTAGGTAGGGATAGGAGTA；
PCR扩增下游引物:biotin-ACCCATCACCTCTACAACC；
Mir124-2:
PCR扩增上游引物:TGTGTTGTAAATGGTATGGAGATAT；
PCR扩增下游引物:biotin-CTCATAAACCCAACTCCTATCTC。
2.一种宫颈癌基因检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括一对FAM19A4、Mir124-2基因的引物、dNTP、Tqq DNA聚合酶、ATP硫酸化酶、荧光素酶、荧光素酶、三磷酸腺苷双磷酸酶、氯化镁；其中基因的引物为：
FAM19A4：
PCR扩增上游引物:GGGTTAGGTAGGGATAGGAGTA；
PCR扩增下游引物:biotin-ACCCATCACCTCTACAACC；
Mir124-2:
PCR扩增上游引物:TGTGTTGTAAATGGTATGGAGATAT；
PCR扩增下游引物:biotin-CTCATAAACCCAACTCCTATCTC。
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Title
王先良主编: "《DNA甲基化与环境化学污染物的表观遗传效应》", 31 October 2014, 中国环境出版社 *

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