CN108404139A - 低浓度单唾液酸四己糖神经节苷脂修饰的重组脂蛋白的制备方法及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种低浓度单唾液酸四己糖神经节苷脂修饰的重组脂蛋白的制备方法,该制备方法使用占总脂质的摩尔数百分比为0.05~1%的单唾液四己糖神经节苷脂制备修饰重组脂蛋白。该制备方法可有效降低单唾液四己糖神经节苷脂(GM1)在重组脂蛋白制备过程的使用量,大大降低GM1修饰的重组脂蛋白的制备成本。该低浓度单唾液酸四己糖神经节苷脂修饰的重组脂蛋白作为纳米药物载体用于心血管疾病特别是动脉粥样硬化疾病的延缓或治疗,药效明显,具有重要的研究价值和临床应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及心血管药理学和化学制药领域,尤其涉及一种低浓度单唾液酸四己糖神经节苷脂修饰的重组脂蛋白及其制备方法和作为延缓或治疗血管动脉粥样硬化疾病药物的应用。
背景技术
近年来,动脉硬化症(Arteriosclerosis)的患者在我国逐渐增多,其已成为老年人死亡的主要原因之一。动脉粥样硬化(Atherosclerosis)是动脉硬化症中最常见的的一种,其可导致多种疾病或临床症状,其中最为人所知的就是心肌梗塞、冠心病和中风等。因此,找到预防和诊断、延缓或治疗动脉粥样硬化的有效方法和药物或药物载体具有重大意义。随着我国逐渐进入老龄化社会,在未来10-30年间,这种疾病很可能上升为重要的社会问题,因而也是迫切需要及早解决的关键问题。
动脉粥样硬化的形成和发展是一个缓慢、长期的过程,牵涉到多种血清脂蛋白、多种细胞(如血管内皮细胞、巨噬细胞、平滑肌细胞和淋巴细胞等)以及多种分子,其机制异常复杂。细胞(特别是巨噬细胞)内脂质沉淀以及血管内膜动脉粥样硬化斑块的形成是动脉粥样硬化的主要特征。目前,用于延缓或治疗动脉粥样硬化疾病的药物有很多种,其中,他汀类药物(降血脂药物)是市面上用于延缓或治疗心血管疾病特别是动脉粥样硬化疾病的传统药物;然而,在用药实践中,他汀类药物(特别是疏水性他汀类药物,如洛伐他汀和辛伐他汀等)以及其他抗动脉粥样硬化药物还存在诸多问题,例如水不溶性、只能口服、吸收不完全、有一定的毒副作用、留体时间短、无靶向性等。为了解决这些问题,已有多种药物载体得到开发,其中就包括重组脂蛋白(如重组高密度脂蛋白)。
血清脂蛋白是人体及动物体血液中天然存在的一大类脂蛋白,包括乳糜微粒、极低密度脂蛋白、中间密度脂蛋白、低密度脂蛋白和高密度脂蛋白等。除了乳糜微粒,其他种类的血清脂蛋白的尺寸通常为几纳米到几十纳米。这些血清脂蛋白由多种脂质和多种载脂蛋白构成。重组脂蛋白通过模拟血清脂蛋白的结构/成分在体外构建而成,具有优良的生物/组织相容性,其因含有载脂蛋白而具有较好的靶向性。因此,重组脂蛋白药物载体能显著提高药物的水溶性和靶向性等特性并显著提高药效,对重组脂蛋白的特殊修饰还可实现进一步提升重组脂蛋白药物载体的优秀性能。
发明内容
为解决上述的技术问题,提供一种低浓度单唾液酸四己糖神经节苷脂(GM1)修饰的重组脂蛋白的制备方法和其在延缓或治疗心血管疾病,尤其是动脉粥样硬化疾病上的应用;本发明方法可有效降低GM1修饰的重组脂蛋白的研究或应用成本。
本发明通过以下技术方案实现:
一种单唾液酸四己糖神经节苷脂修饰的重组脂蛋白的制备方法,该制备方法使用占总脂质的摩尔数百分比为0.05~1%的单唾液四己糖神经节苷脂修饰制备重组脂蛋白。
优选的,该制备方法使用占总脂质的摩尔数百分比为0.1%的单唾液四己糖神经节苷脂修饰制备重组脂蛋白。
本发明的制备方法具体包括以下步骤:
包裹待载药物的脂质体的制备。定量称取蛋黄卵磷脂、硬脂胺、胆固醇、胆固醇油酸酯、甘油三油酸酯和待载药物,称取物中加入甲醇/氯仿混合溶液(体积比为1:1)进行溶解;溶解后对溶液进行减压旋转蒸发处理,以除去有机溶剂;使用pH 8.0的Tris-盐酸缓冲液对脂质膜进行水化,超声均质处理后使用0.22μm的无菌滤膜过滤上述产物以除菌,即获得包裹待载药物的脂质体。
单唾液酸四己糖神经节苷脂(GM1)修饰的包裹待载药物的脂质体的制备。上述脂质混合物中加入定量GM1,以上述相同方法进行制备,获得GM1修饰的包裹待载药物的脂质体。
单唾液酸四己糖神经节苷脂(GM1)修饰的包裹待载药物的重组脂蛋白的制备。在上述脂质体LT-GM1-NLC溶液中加入载体脂蛋白,溶液摇匀后在摇床上37℃150rpm孵育2d;孵育结束后使用10kDa的透析袋于4℃下在pH 8.0的Tris-盐酸缓冲液中透析脂质体溶液2d,透析完成即得到GM1修饰的包裹待载药物的重组脂蛋白。
本发明的制备方法所制得的低浓度单唾液酸四己糖神经节苷脂修饰的重组脂蛋白在作为纳米药物载体在延缓或治疗心血管疾病上的应用。
优选的,可延缓或治疗的心血管疾病包括动脉粥样硬化类疾病。
本发明的有益效果在于:
(1)使用低浓度单唾液酸四己糖神经节苷脂(GM1)修饰重组脂蛋白可有效降低成本,目前,GM1的提取和纯化的成本很高,价格昂贵;本发明的方法可减少修饰重组脂蛋白的GM1的浓度可,大大降低GM1修饰的重组脂蛋白的制备成本,并且不影响药效。
(2)低浓度单唾液酸四己糖神经节苷脂(GM1)修饰的重组脂蛋白作为纳米药物载体用于心血管疾病特别是动脉粥样硬化疾病的延缓或治疗,药效明显,具有重要的研究价值和临床应用前景。
附图说明
图1为纳米药物载体颗粒的透射电镜图。图中为尺度200nm下的包裹LT(洛伐他汀)的脂质体LT-NLC(左)、包裹LT的重组高密度脂蛋白LT-rHDL(中)和包裹LT且修饰有GM1(单唾液酸四己糖神经节苷脂)的重组高密度脂蛋白LT-GM1-rHDL(右)。
图2为纳米药物载体LT-NLC、LT-rHDL和LT-GM1-rHDL中的洛伐他汀(LT)的体外缓释情况。
图3为荧光倒置显微镜细胞成像结果图,其中,(A)为空白对照(无任何刺激或处理的细胞);(B)为阳性对照(经OxLDL刺激的细胞);(C)为经OxLDL刺激后再用洛伐他汀胶囊(LT-capsule)处理的细胞;(D)为经OxLDL刺激后再用洛伐他汀溶液(LT-solution)处理的细胞;(E)为经OxLDL刺激后再用LT-NLC处理的细胞;(F)为经OxLDL刺激后再用LT-rHDL处理的细胞;(G)为经OxLDL刺激后再用LT-GM1-rHDL处理的细胞;(H)为细胞脂质沉淀的定量分析(细胞内的脂质沉淀面积占细胞面积的百分比,*,p<0.05;**,p<0.01;***,p<0.001)。
图4为动脉粥样硬化模式小鼠在用药后血液中洛伐他汀(LT)的浓度变化情况。
图5为动脉粥样硬化模式小鼠(高脂喂食的ApoE-/-小鼠)在用药后各种组织中洛伐他汀(LT)的浓度变化情况(显著性差异检验:▼,p<0.001将LT-rHDL组与LT-solution组比较(肝脏,0.5和4小时);★,p<0.001将LT-GM1-rHDL组与LT-rHDL组比较(肝脏,0.5和4小时);#,p<0.01将LT-GM1-rHDL组与LT-rHDL组比较(0.5小时);▽,p<0.05将LT-rHDL组与LT-NLC组比较(肝脏,4小时);◆,p<0.001将LT-GM1-rHDL组与LT-NLC组比较(肝脏,4小时);△,p<0.01将LT-GM1-rHDL组与LT-solution组比较(肝脏,4小时);*,p<0.05将LT-rHDL组与LT-NLC组比较(斑块,4小时);&,p<0.001将LT-GM1-rHDL组与其他各组比较(斑块,4小时))。
图6为小鼠胸主动脉的动脉粥样硬化斑块检测结果图,其中,(A-F)为各组样本的展示图;(G)为斑块的定量分析(*,p<0.05;***,p<0.001)。
图7为小鼠主动脉根的动脉粥样硬化斑块检测结果图,其中,(A-F)为各组样本的展示图,从上到下分别为各组的4个连续切片(黑色方框指示连续切片中动脉粥样硬化程度最大的切片,这些切片被选择用来进行定量分析);(G)为斑块的定量分析(*,p<0.05;**,p<0.01;***,p<0.001)。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施方式对本发明进行进一步说明。
实施例1:LT-GM1-rHDL的制备、表征及体外药物缓释测定
本实施例制备的LT-GM1-rHDL为修饰有0.1%(占总脂质的摩尔数百分比)单唾液酸四己糖神经节苷脂(GM1)并装载了抗动脉粥样硬化药物洛伐他汀(LT)的重组高密度脂蛋白。
(1)制备
使用薄膜分散法制备所述LT-GM1-rHDL。定量称取45mg蛋黄卵磷脂、5mg硬脂胺、10mg胆固醇、20mg胆固醇油酸酯、15mg甘油三油酸酯和5mg洛伐他汀(LT),称取物中加入甲醇/氯仿混合溶液(体积比为1:1)进行溶解;溶解后对溶液进行减压旋转蒸发处理,以除去有机溶剂;使用pH 8.0的Tris-盐酸缓冲液对脂质膜进行水化,超声均质处理后使用0.22μm的无菌滤膜过滤上述产物以除菌,即获得包裹洛伐他汀药物的脂质体(LT-NLC)。
若在上述脂质混合物中加入0.3mg GM1,以上述相同方法进行制备,获得GM1修饰的包裹药物的脂质体(LT-GM1-NLC)。
在上述脂质体LT-NLC或LT-GM1-NLC溶液中加入ApoA-1载体脂蛋白,溶液摇匀后在摇床上37℃150rpm孵育2d;孵育结束后使用10kDa的透析袋于4℃下在pH 8.0的Tris-盐酸缓冲液中透析脂质体溶液2d,透析完成即得到包裹洛伐他汀药物的重组高密度脂蛋白(LT-rHDL)和GM1修饰的包裹洛伐他汀药物的重组高密度脂蛋白(即LT-GM1-rHDL)。
(2)表征
使用Zeta电位粒度仪测定上述产物颗粒的粒径和Zeta电位。结果显示,制备的LT-NLC、LT-rHDL和LT-GM1-rHDL的粒径分别为90.4±2.6nm、105.1±1.3nm和117.1±3.6nm;Zeta电位分别为21.67±0.47mV、41.73±1.13mV和41.97±1.57mV。
上述产物经磷钨酸负染后使用透射电镜观察药物颗粒的形貌。结果如图1所示,电镜下所观察到的纳米药物载体颗粒的粒径与Zeta电位粒度仪测量的粒径基本相符。
(3)体外药物缓释测定
使用透析法在体外对上述产物的缓释进行测定。分别取2ml的样本(LT-NLC、LT-rHDL和LT-GM1-rHDL)放入10kDa的透析袋中,再将装有样本的透析袋放入200ml释放缓冲液(含0.05%SDS的磷酸缓冲液,pH7.4)中,于室温100rpm的磁力搅拌下孵育72h;在0.5,1,2,3,4,5,6,8,10,12,24,36,48,60和72小时分别取0.5ml的释放缓冲液(取完之后分别补充0.5ml的新鲜释放缓冲液),并立即使用反相高效液相色谱法检测释放缓冲液中LT药物的浓度。结果如图2所示,结果显示,LT-GM1-rHDL中的LT药物的释放速度明显比LT-NLC和LT-rHDL中的缓慢,说明GM1修饰的重组高密度脂蛋白能延缓药物的释放。
实施例2:不同洛伐他汀药物形式缓解体外巨噬细胞脂质沉淀或泡沫化
本实验将样品分成以下7个组:
(1)空白对照组:未接受刺激或处理的小鼠RAW264.7巨噬细胞;
(2)阳性对照组:经氧化性低密度脂蛋白(OxLDL)刺激的小鼠RAW264.7巨噬细胞;
(3)实验组1:经OxLDL刺激后再经洛伐他汀胶囊(LT-capsule)处理的小鼠RAW264.7巨噬细胞;
(4)实验组2:经OxLDL刺激后再经洛伐他汀溶液(LT-solution)处理的小鼠RAW264.7巨噬细胞;
(5)实验组3:经OxLDL刺激后再经LT-NLC处理的小鼠RAW264.7巨噬细胞;
(6)实验组4:经OxLDL刺激后再经LT-rHDL处理的小鼠RAW264.7巨噬细胞;
(7)实验组5:经OxLDL刺激后再经LT-GM1-rHDL处理的小鼠RAW264.7巨噬细胞。
将体外培养的小鼠RAW264.7巨噬细胞分为7组,分别进行上述处理后,处理后的细胞在CO2培养箱中孵育24h:孵育完成后在室温下用2.5%戊二醛固定细胞10min,固定后磷酸缓冲液清洗两次,用60%的异丙醇处理1-2min;再次使用磷酸缓冲液清洗去除多余的异丙醇后,使用油红O在室温下染色各组细胞20min,之后使用60%的异丙醇处理细胞30s两次;经磷酸缓冲液清洗去除多余的异丙醇后,使用荧光倒置显微镜(Nikon LH-M100CB)对细胞进行成像,成像结果如图3所示。
结果显示,空白对照组的巨噬细胞没有染上红色的油红O染料(图3A),说明细胞未发生脂质沉淀;而经过OxLDL刺激但未经药物处理的阳性对照组的巨噬细胞内被大量着色(图3B),说明OxLDL诱导了巨噬细胞的脂质沉淀或泡沫化;经过各种LT药物处理后,OxLDL诱导的巨噬细胞脂质沉淀的程度均有所缓解(图3C-3G),其中,经LT-GM1-rHDL处理后的脂质沉淀缓解程度最佳(图3G)。对上述细胞内的脂质沉淀面积占细胞面积进行定量分析,结果如图3H所述,GM1修饰的重组高密度脂蛋白对巨噬细胞脂质沉淀或泡沫化缓解效果最佳。
实施例3:不同洛伐他汀药物形式的血液驻留时间、肝脏摄取量及动脉粥样硬化斑靶向性
本实施以高脂喂食后的ApoE-/-(载脂蛋白E基因敲除的纯合子)雄性C57BL/6小鼠作为动脉粥样硬化模式小鼠。本实施根据给药形式的不同将模式小鼠具体分成5个样品组(每组6只小鼠):LT溶液给药组(LT-solution)、LT胶囊给药组(LT-capsule)、LT-NLC给药组、LT-rHDL给药组和LT-GM1-rHDL给药组;其中,除LT胶囊给药组(LT剂量为20mg/kg)为口服用药外,其余样品组均为小鼠尾静脉注射给药(LT剂量均为2mg/kg)。
(1)不同洛伐他汀(LT)药物形式对小鼠的LT血液驻留时间的影响
对所述各组动脉粥样硬化模式小鼠进行单次用药后,在给药5min,15min,30min,1h,2h,4h,8h,12h,24h,36h后,对各组模式小鼠采血获取约1ml血清;各组获得血清先与约24μM的辛伐他汀(作为内参)混合,再与3ml乙酸乙酯混合,3500rpm离心15min,取上面的有机层,在37℃下使用氮气干燥;干燥后产物使用100μl乙腈溶解后以8000rpm离心10min,取上清;各组上清通过反相高效液相色谱法测量LT的浓度,并用DAS3.3.0软件分析其各项药代动力学参数。
上述结果如图4所示,LT胶囊给药组小鼠在给药后血液中的LT在约3h后才达到最高浓度,在约8h后下降到较低水平;其他注射给药样品组,在注射给药后血液中LT的浓度立即达到最高值、随后逐渐下降;其中,LT-溶液给药组小鼠血液LT浓度在12h内即达到最低值,LT-NLC和LT-rHDL给药组小鼠血液LT浓度在约24h内也降到最低值,而LT-GM1-rHDL给药组小鼠血液LT浓度则在36h后才降到较低水平。
表1为各组血清的药代动力学参数分析,结果显示,与LT溶液给药组相比,LT-NLC、LT-rHDL和LT-GM1-rHDL给药组小鼠的LT体内平均驻留时间(MRT0~∞)分别延长了约2.40、3.05和5.38倍。这些数据证明了GM1修饰的重组高密度脂蛋白能够延长洛伐他汀(LT)的血液驻留时间。
表1不同处理后动脉粥样硬化模式小鼠血液中洛伐他汀(LT)的药代动力学参数
其中,“t1/2”为分布半衰期;“t1/2”为消除半衰期;“Vd”为表观分布容积;“AUC0~∞”为血药浓度时间曲线下面积;“MRT0~∞”为药物体内平均驻留时间;“CL”为总清除率。
显著性差异检验下,“*”为p<0.001与LT-capsule组比较;“&”为p<0.001与LT-solution组比较;“#”为p<0.05与LT-capsule或LT-solution组比较;“★”为p<0.001与LT-NLC组比较;“▲”为p<0.001将LT-GM1-rHDL组与其他各组比较。
(2)不同洛伐他汀(LT)药物形式对小鼠的LT肝脏摄取量及动脉粥样硬化斑靶向性的影响
另取模式小鼠,在各组小鼠在分别用药0.5h(A)和4h(B)后,分别获取小鼠的血液、心脏、肝脏、脾脏、肺、肾脏和动脉粥样硬化斑块的组织样本,并称重、切成小块;将0.2g各组织与2μg辛伐他汀(作为内参)混合,在1ml、100mM的磷酸钾溶液(pH7.4)中彻底匀浆;组织匀浆后与3ml乙酸乙酯混合,3500rpm离心15min;获取离心后的有机上层,在37℃下用氮气干燥;干燥后使用100μl的乙腈溶解后,8000rpm离心10min;取上清,通过反相高效液相色谱法测量各组织中LT的浓度。
结果如图5所示,在用药0.5h后,在小鼠肝脏中,LT-rHDL组LT的浓度比LT-solution和LT-NLC组有显著性提高;在LT-rHDL修饰GM1后,即LT-GM1-rHDL实验组,小鼠肝脏中LT浓度显著降低,这种差异同样表现在给药4h后的数据中,说明GM1修饰的重组高密度脂蛋白能够降低LT的肝脏摄取。
另一方面,模式小鼠在用药0.5h和4h后,LT-GM1-rHDL组小鼠动脉粥样硬化斑块中LT的浓度均显著大于其他各组小鼠,说明GM1修饰的重组高密度脂蛋白能够显著提高其动脉粥样硬化斑的靶向性。
实施例4:不同洛伐他汀药物形式的抗动脉粥样硬化疗效
本实施以高脂喂食后的ApoE-/-(载脂蛋白E基因敲除的纯合子)雄性C57BL/6小鼠作为动脉粥样硬化模式小鼠。实验分成6个样品组(每组6只小鼠):未经高脂喂食的正常ApoE-/-小鼠;注射生理盐水的高脂喂食的ApoE-/-小鼠;以及高脂喂食的分别经LT胶囊(LT-capsule)、LT-NLC、LT-rHDL和LT-GM1-rHDL处理的ApoE-/-小鼠。除了LT胶囊组(LT剂量为8mg/kg)为口服用药外,其余样品组均为小鼠尾静脉注射(LT剂量均为0.4mg/kg)。小鼠每周用药3次,在高脂喂食的同时持续用药16周。
(1)血脂检测。
在用药16周后取小鼠血液样本(取样前小鼠禁食8h);3000rpm离心10min获取的血清样本;使用全自动生化分析仪(Beckman Coulter AU480)测量血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)的含量。
结果如表2所示,与未经高脂喂食的正常ApoE-/-小鼠比较,高脂喂食的ApoE-/-小鼠的TC和LDL-C浓度均显著升高,小鼠的动脉粥样硬化模型成功构建;实验小鼠在经LT-capsule、LT-NLC、LT-rHDL和LT-GM1-rHDL用药后,各组小鼠体内TC和LDL-C的浓度逐渐下降(与高脂喂食的ApoE-/-小鼠相比),其中LT-GM1-rHDL组小鼠的下降程度最大;同时,经LT-GM1-rHDL处理后,小鼠血液中的HDL-C的浓度升高甚至有统计上的显著性差异性。该结果间接反映了GM1修饰的重组高密度脂蛋白具有更强的抗动脉粥样硬化疗效。
表2用药16周后动脉粥样硬化小鼠的血脂含量的测定
显著性差异检验下,“*”为p<0.001与未经高脂喂食的正常ApoE-/-小鼠比较;“&”为p<0.001与未经药物处理的动脉粥样硬化小鼠比较;“#”为p<0.05与正常ApoE-/-小鼠或未经药物处理的动脉粥样硬化小鼠比较;“○”为p<0.05与LT-capsule组比较;“●”为p<0.001与LT-capsule组比较;“★”为p<0.001与LT-NLC组比较;“▽”为p<0.05与LT-rHDL组比较;“△”为p<0.01与LT-rHDL组比较;“▲”为p<0.001与LT-rHDL组比较。
(2)胸主动脉的动脉粥样硬化斑块检测。
在用药16周后取小鼠的胸主动脉血管(约2cm长),用4%多聚甲醛固定3h;纵向剖开,小心剔除周边的脂肪组织;随后使用油红O在丙二醇中室温下染色血管1-2h;染色后用60%的丙二醇清洗6-7次;将剖开的动脉血管内侧朝上铺在载玻片上,覆盖上盖玻片使血管充分展开并拍照和分析。
结果如图6所示,未经高脂喂食的正常ApoE-/-小鼠的胸主动脉几乎没有动脉粥样硬化斑,而高脂喂食的ApoE-/-小鼠的胸主动脉上有大量的红色斑块(油红O着色的动脉粥样硬化斑块),小鼠的动脉粥样硬化模型成功构建;经LT-capsule、LT-NLC、LT-rHDL和LT-GM1-rHDL用药后,各组小鼠胸主动脉红色斑块面积均逐渐减小;LT-GM1-rHDL组小鼠甚至只有零星的红色斑点,证明GM1修饰的重组高密度脂蛋白具有更强的抗动脉粥样硬化疗效。
(3)主动脉根的动脉粥样硬化斑块检测。
在用药16周后取小鼠的连接着主动脉弓的心脏;用OCT组织冰冻剂包埋,快速冰冻;使用冷冻切片机(Leica CM1520)切取5μm厚度的连续切片,使用95%乙醇固定15min后,油红O和苏木精按常规方法染色后拍照。
结果如图7所示,未经高脂喂食的正常ApoE-/-小鼠的主动脉根的血管内侧只有非常小的动脉粥样硬化斑块,而高脂喂食的ApoE-/-小鼠的主动脉根的血管内侧有很厚的红色斑块(油红O着色的动脉粥样硬化斑块),小鼠的动脉粥样硬化模型成功构建;经LT-capsule、LT-NLC、LT-rHDL和LT-GM1-rHDL用药后,各组小鼠红色斑块厚度和面积均逐渐减小,LT-GM1-rHDL组小鼠具有最薄的厚度或最小的面积,进一步证明GM1修饰的重组高密度脂蛋白具有更强的抗动脉粥样硬化疗效。
综合实施例1-4,体外、体内的实验结果共同证明,与未修饰GM1装载有洛伐他汀(LT)的重组高密度脂蛋白(LT-rHDL)、未修饰GM1装载有LT的脂质体(LT-NLC)以及LT胶囊(LT-capsule)等相比,低浓度GM1修饰的装载有LT的重组高密度脂蛋白(LT-GM1-rHDL)具有更佳的药物缓释效果、更长的循环系统驻留时间、更低的肝脏摄取、更高的动脉粥样硬化斑块靶向性以及更有效的抗动脉粥样硬化疗效,说明将GM1修饰的重组脂蛋白作为纳米药物载体用于心血管疾病特别是动脉粥样硬化疾病的延缓或治疗方面具有潜在可能性。
以上所述仅表达了本发明的优选实施方式,其描述较为具体和详细,但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是,对于本领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明构思的前提下,还可以做出若干变形、改进及替代,这些都属于本发明的保护范围。因此,本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
Claims (5)
1.一种单唾液酸四己糖神经节苷脂修饰的重组脂蛋白的制备方法,其特征在于,所述制备方法使用占总脂质的摩尔数百分比为0.05~1%的单唾液四己糖神经节苷脂修饰重组脂蛋白。
2.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述制备方法使用占总脂质的摩尔数百分比为0.1%的单唾液四己糖神经节苷脂修饰重组脂蛋白。
3.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,具体包括以下步骤:
(1)包裹待载药物的脂质体的制备;
(2)单唾液酸四己糖神经节苷脂修饰的包裹待载药物的脂质体的制备;
(3)单唾液酸四己糖神经节苷脂修饰的包裹待载药物的重组脂蛋白的制备。
4.根据权利要求1所述的制备方法所制备的低浓度单唾液酸四己糖神经节苷脂修饰的重组脂蛋白,其特征在于,所述重组脂蛋白在作为纳米药物载体在延缓或治疗心血管疾病上的应用。
5.根据权利要求4所述的应用,其特征在于,所述心血管疾病包括动脉粥样硬化类疾病。
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