CN109381429A - 一种白细胞膜修饰的紫杉醇靶向缓释脂质体及其制备方法 - Google Patents

一种白细胞膜修饰的紫杉醇靶向缓释脂质体及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种白细胞膜修饰的紫杉醇靶向缓释脂质体及其制备方法，属于药物控制释放和生物材料技术领域。所述紫杉醇靶向缓释脂质体包括由紫杉醇、星型胆酸功能化聚乳酸、大豆磷脂、胆固醇所构成的载药缓释脂质体及修饰其表面的白细胞膜。本发明将生物相容性优越的星型胆酸功能化聚乳酸引入到紫杉醇缓释脂质体中，并用白细胞膜进行表面修饰，制得的紫杉醇靶向缓释脂质体克服了当前杉紫醇注射液中的表面活性剂聚氧乙烯蓖麻油所带来的毒副作用，具有缓释效果优越、肿瘤靶向性较好、体内半衰期长、稳定性高、生物相容性好等优点。

Description

一种白细胞膜修饰的紫杉醇靶向缓释脂质体及其制备方法
技术领域
本发明属于药物控制释放和生物材料技术领域，具体涉及一种白细胞膜修饰的紫杉醇靶向缓释脂质体及其制备方法。
背景技术
紫杉醇是从红豆杉科红豆杉属植物中提取得到的二萜类化合物，具有独特的抗肿瘤作用，它与微管蛋白结合后能形成稳定的微管束，抑制癌细胞的复制，从而阻止癌细胞增殖，属于广谱、高效的抗癌药物，主要用于卵巢癌、乳腺癌、黑色素瘤、肺癌、大肠癌、头颈部癌、淋巴瘤、脑瘤等癌症的治疗。
然而，由于紫杉醇特殊的理化性质和药理作用，临床使用中还存在疗效不理想、毒副作用明显的缺点，主要问题体现在：①在水中溶解性差，市售的紫杉醇注射剂加入了表面活性剂聚氧乙烯蓖麻油，聚氧乙烯蓖麻油在体内的降解产物易引起严重的过敏反应、神经毒性、肾毒性等不良反应，为了克服过敏反应，用药前需给予地塞米松作为预防用药；②紫杉醇作为一种细胞周期特异性的药物，体内低剂量持续给药较一次性冲击给药的抑瘤效果更为明显，理应制备成缓释制剂，而目前市售的紫杉醇注射剂均为非缓释制剂，影响疗效的发挥；③靶向制剂可以最大限度将药物分布到靶器官，达到最佳疗效，而对其它正常组织器官无作用，从而达到高效低毒的治疗效果，尤其适用于抗癌药物，而目前市售的紫杉醇注射液均为非靶向制剂，影响了其在临床上的应用。
因此，寻找以提高水溶性、延缓药物释放、增加靶向作用为目的新制型成为紫杉醇药物研究的热点，如将紫杉醇制备成脂质体、纳米粒、乳剂、包合物、前体药物、胶束等新剂型，其中脂质体因其具有优良的生物相容性、简单的制备工艺、可同时载入亲水性和疏水性药物等优点而广泛地被应用于紫杉醇载体，但是这些脂质体依然存在一些缺点和亟需解决的问题：①传统未经修饰的普通脂质体易受血液的各种蛋白和酶的破坏，如高密度脂蛋白是破坏脂质体的主要成分，载脂蛋白易从高密度脂蛋白上脱落并与脂质体中的磷脂结合，易发生与磷脂的互换，导致脂质体膜形成孔洞而泄漏药物；血清白蛋白与脂质体磷脂结合形成的复合物会引起脂质体稳定性的降低；脂质体在血液中会激活补体系统，形成破坏膜的复合体，导致脂质体膜出现亲水性通道，引起药物渗漏，水和电解质大量进入，甚至会导致脂质体的裂解；血液中的磷脂酶可水解脂质体中的磷脂，导致脂质体的破坏(该反应强弱由磷脂结构决定)；②脂质体进入血液循环系统后，未经修饰的脂质体大部分运转至肝脏和脾脏等单核吞噬细胞系统丰富的部位，少量被肺、骨髓及肾摄取，肝细胞膜受体对直接暴露于表面的磷脂负电基进行识别，因而被肝细胞吞噬，导致普通脂质体在体循环中过短的滞留时间；③未经修饰的传统脂质体因磷脂的易被破坏性而导致缓释效果不够理想，临床疗效受到影响；④未经修饰的传统脂质体，靶向性不够理想，毒副作用大，严重影响了其在临床上的应用。
因此，研制一种缓释效果优越、稳定性高、靶向性良好、规避体内各种因子破坏的紫杉醇靶向缓释脂质体具有重要的临床意义。
发明内容
本发明旨在克服上述现有技术中的缺陷，提供一种白细胞膜修饰的紫杉醇靶向缓释脂质体，具有靶向作用并能够在体内缓慢释放药物的优点，从而延长药物半衰期、减少服药次数、提高疗效、降低毒副作用。
本发明所提供的一种白细胞膜修饰的紫杉醇靶向缓释脂质体，包括由紫杉醇、星型胆酸功能化聚乳酸、大豆磷脂、胆固醇所构成的载药缓释脂质体及在其表面修饰的白细胞膜，具体质量百分比为：紫杉醇5-10％、大豆磷脂50-70％、胆固醇15-25％、星型胆酸功能化聚乳酸6-12％、白细胞膜2-6％。
本发明进一步提供一种白细胞膜修饰的紫杉醇靶向缓释脂质体的制备方法，该方法包括以下步骤：
(1)紫杉醇缓释脂质体的制备：称取紫杉醇、大豆磷脂、胆固醇和星型胆酸功能化聚乳酸，溶于氯仿中，于35～40℃下减压旋转蒸发除去溶剂，直至茄形瓶内壁形成一层脂质体薄膜，置真空干燥器中24h，加入磷酸盐缓冲液(pH7.4)，40℃恒温水浴旋转水化1h，冰浴探头超声4～6min，通过微射流高压均质机(均质压力为120MPa，均质温度为37℃，均质次数为5次)处理，过0.22μm微孔滤膜，得到紫杉醇缓释脂质体混悬液；
(2)白细胞膜的制备：①分离白细胞：选取年龄为3～5周的大鼠，通过眼窝收集全血，用等量的EDTA-PBS缓冲液(0.2mol/L,pH7.4)稀释，加入至离心管中，备用；取9％聚蔗糖和15.2％泛影葡胺混合，用蒸馏水配制成比重为1.114g/ml的溶液，用0.3％氯化钠溶液调节渗透压至540mOsm/L，沿管壁加入至上述离心管中,以700×g的离心力离心30min，用移液枪缓慢吸取中间的乳白色云雾状层(白细胞层)，用EDTA-PBS缓冲液清洗2次,离心，收集白细胞；
②白细胞膜的分离与纯化：收集的白细胞用白细胞低渗裂解液(1mM NaCl，1mMMgCl2，5ug/mlRNase，8ug/mDNase)重新悬浮，用手持式杜恩斯匀浆机冰浴均质2min，4℃下低渗裂解24h，以1200×g的离心力离心10min，弃去上清液，收集的白细胞膜分别用30％、45％、50％三个浓度的梯度蔗糖溶液于4℃下以24000×g的离心力离心30min，收集纯化的白细胞膜，置于2～6℃冰箱中备用；
(3)白细胞膜对紫杉醇缓释脂质体的修饰：将制备好的白细胞膜与脂质体振荡混合，孵育融合12h，离心，用PBS缓冲液洗涤两次，用蒸馏水重新混悬，使用超声波仪以35kHz的频率和80W的功率，超声60s，过0.22μm微孔滤膜，高速离心，弃去上清液，冷冻干燥，即得白细胞膜修饰的紫杉醇靶向缓释脂质体。
与现有技术相比，本发明的优点和创新点在于：
(1)紫杉醇为脂溶性药物，在脂质体中被包裹于脂质双分子层之间，加入星型胆酸功能化聚乳酸可以同时起到增加紫杉醇在制剂中的载药量和稳定性，并且可以起到延缓药物释放作用。单纯由卵磷脂和胆固醇构成的传统脂质体稳定性差，脂质体膜易形成孔洞，药物出现渗漏，水和电解质大量进入，甚至导致脂质体的渗透裂解。星型胆酸功能化聚乳酸的引入，因其特殊的三维立体结构，嵌入于脂质双分子层之间，使脂质双分子层更加紧密稳定，阻断孔洞的产生，防止药物的过快释放，达到缓慢、持续低剂量地释放药物，延长药物的半衰期，而紫杉醇作为一种细胞周期特异性的药物，其缓释制剂能够显著提高疗效，降低毒副作用。
(2)通过收集全血，分离白细胞，制备白细胞膜并将其修饰到紫杉醇缓释脂质体表面上，白细胞修饰的脂质体因能识别并聚集于肿瘤细胞，具有主动靶向的功效，可以提高紫杉醇的疗效，因较少地转运到正常组织器官而降低毒副作用。大量的研究结果还显示，白细胞膜修饰的载药系统可以阻止血液中许多不同组分特别是调理素与其结合，从而降低与单核吞噬细胞系统的亲和力，降低网状吞噬系统的呑噬或摄取作用，可在循环系统中稳定存在，显著延长半衰期，增强药物的治疗效果。
(3)首次将薄膜分散法与高压均质工艺相结合制备紫杉醇缓释脂质体，可以得到粒径小(在100nm以内，为纳米制剂，可注射给药)、多分散系数小(粒径均匀)、稳定性好的脂质体制剂。
附图说明
图1为实施例1制备的紫杉醇靶向缓释脂质体的体外累积释药百分率。
图2为实施例2制备的紫杉醇靶向缓释脂质体的体外累积释药百分率。
图3为实施例3制备的紫杉醇靶向缓释脂质体的体外累积释药百分率。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲述的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动和修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
实施例1
1、一种白细胞膜修饰的紫杉醇靶向缓释脂质体的制备方法，该方法包括以下步骤：
(1)紫杉醇缓释脂质体的制备：称取紫杉醇5mg、大豆磷脂65mg、胆固醇16mg和星型胆酸功能化聚乳酸10mg，溶于一定量的氯仿中，于37℃下减压旋转蒸发除去溶剂，直至茄形瓶内壁形成一层脂质体薄膜，置真空干燥器中24h，加入磷酸盐缓冲液(pH7.4)，40℃恒温水浴旋转水化1h，冰浴探头超声4～6min，通过微射流高压均质机(均质压力为120MPa，均质温度为37℃，均质次数为5次)处理，过0.22μm微孔滤膜，得到紫杉醇缓释脂质体混悬液；
(2)白细胞膜的制备：①分离白细胞：选取年龄为3～5周的大鼠，通过眼窝收集全血，用等量的EDTA-PBS缓冲液(0.2mol/L,pH7.4)稀释，加入至离心管中，备用；取9％聚蔗糖和15.2％泛影葡胺混合，用蒸馏水配制成比重为1.114g/ml的溶液，用0.3％氯化钠溶液调节渗透压至540mOsm/L，沿管壁加入至上述离心管中,以700×g的离心力离心30min，用移液枪缓慢吸取中间的乳白色云雾状层(白细胞层)，用EDTA-PBS缓冲液清洗2次,离心，收集白细胞；
②白细胞膜的分离与纯化：收集的白细胞用白细胞低渗裂解液(1mM NaCl，1mMMgCl2，5ug/mlRNase，8ug/mDNase)重新悬浮，用手持式杜恩斯匀浆机冰浴均质2min，4℃下低渗裂解24h，以1200×g的离心力离心10min，弃去上清液，收集的白细胞膜分别用30％、45％、50％三个浓度的梯度蔗糖溶液于4℃下以24000×g的离心力离心30min，收集纯化的白细胞膜，置于2～6℃冰箱中备用。
(3)白细胞膜对紫杉醇缓释脂质体的修饰：将制备好的白细胞膜(4mg)与脂质体振荡混合，孵育融合12h，离心，用PBS缓冲液洗涤两次，用蒸馏水重新混悬，使用FisherScientific FS30D超声波仪，以35kHz的频率和80W的功率，超声60s，过0.22μm微孔滤膜，高速离心，弃去上清液，冷冻干燥，即得白细胞膜修饰的紫杉醇靶向缓释脂质体。
2.紫杉醇靶向缓释脂质体的药剂学表征
(1)、粒径和多分散系数：采用激光散射粒度分布仪测定粒径大小，测定结果：平均粒径为80.1nm；多分散系数为0.171。
(2)、表面形貌：将紫杉醇靶向缓释脂质体分散在蒸馏水中，滴加到敷有Fomva膜的铜网上，待其干燥之后，滴加2％的磷钨酸负染，自然干燥后，在透射电子显微镜(TecnaiG20透射电子显微镜)观察微粒的形状和结构。结果：表面形貌为球形，大小分布较为均一。
(3)、包封率的测定及结果：
取制备的紫杉醇靶向缓释脂质体用甲醇破乳，用HPLC测定紫杉醇的含量，得到体系中包封和未包封的紫杉醇总量，记为ρ总；另取紫杉醇靶向缓释脂质体混悬液高速离心(15000r/min)30min，取上清液，用甲醇破乳，用HPLC测定紫杉醇的含量，得到体系中包封的紫杉醇含量，记为ρ包。其中色谱条件：流动相为甲醇-水(70:30)；色谱柱为依利特C18(250mm×4.6mm，5μm)；检测波长为227nm；流速为1.0ml/min；柱温为25℃；进样量为20μL。按照中国药典2015年版中的相关规定，脂质体包封率＝体系中包封药量/系统中包封与未包封总药量×100％。测定结果：包封率为83.6％。
3.体外累积释药百分率试验
称取6mg紫杉醇靶向缓释脂质体，加入到6mL磷酸盐缓冲液(pH＝7.4)中，超声使之分散，装入透析袋(型号为4000)中，置于30mL离心管中，外液为1％DMSO水溶液，于37℃摇床中振荡，在预定的时间点将外液全部取出，静置6h，采用紫外分光光度计((Perkin-ElmerLambda Bio 40UV/VIS检测器))测定紫杉醇浓度，测定波长227nm，按以下公式计算累积释药百分率：
累积释药百分率(％)＝释放出来的药物量/包载的药物总量x100％
以未添加星型胆酸功能化聚乳酸的紫杉醇靶向脂质体(其它成份和工艺相同)作为对照制剂，按照相同体外累积释药百分率试验方法测定并计算累积释药百分率。
结果详见图1，相比于未添加星型胆酸功能化聚乳酸的紫杉醇靶向脂质体，本实施例制备的紫杉醇靶向缓释脂质体释放药物更为缓慢，1、2、3、6、9、12h累积释药百分率分别为6.4、15.1、22.3、43.9、55.4、63.3，而对应时间点的未添加星型胆酸功能化聚乳酸的紫杉醇靶向脂质体累积释药百分率分别为31.5、45、56.3、68.2、75.4、79.8，说明加入星型胆酸功能化聚乳酸可以起到延缓药物释放作用。单纯由卵磷脂和胆固醇构成的传统脂质体稳定性差，脂质体膜易形成孔洞，药物出现渗漏，水和电解质大量进入，甚至导致脂质体的渗透裂解。星型胆酸功能化聚乳酸的引入，因其特殊的三维立体结构，嵌入于脂质双分子层之间，使脂质双分子层更加紧密稳定，阻断孔洞的产生，防止药物的过快释放，达到缓慢、持续低剂量地释放药物，延长药物的半衰期，较长时间的维持有效药物浓度，而紫杉醇作为一种细胞周期特异性的药物，其缓释制剂能够持续有效地抑制癌细胞生长，显著提高疗效，降低毒副作用，提高患者用药依从性。
4.体内药物动力学及组织分布
4.1建立裸鼠乳腺癌动物模型：将人乳腺癌MCF-7细胞培养至对数生长期，用细胞计数板进行计数，调整细胞浓度至1×107/ml，取0.1ml接种于SPF级BALB/c雌性裸鼠右侧第二对乳腺垫下，无菌饲养至肿瘤体积为100～200mm3。
4.2给药及取样：将荷瘤裸鼠随机分为3组，分别单剂量尾静脉注射泰素(紫杉醇注射液)、未添加星型胆酸功能化聚乳酸的紫杉醇靶向脂质体及紫杉醇靶向缓释脂质体(紫杉醇剂量均为10mg/kg)，分别于注射后15min、30min、1h、3h、6h、9h、12h、18h、24h摘除眼球取血，抗凝处理后离心取血浆，于-80℃保存，将1h、6h、12h、24h时的裸鼠以颈椎脱臼法处死后，取心、肝、脾、肺、肾及肿瘤组织，洗净称重，于-80℃保存，备用。
4.3血药浓度测定及药动学参数：将血浆样品放置至室温，加入无水甲醇充分沉淀蛋白，离心，取上清液，真空旋转蒸发，用流动相溶解残留物，用高效液相色谱法测定紫杉醇含量，其中色谱条件：流动相为甲醇-水(70:30)；色谱柱为依利特C18(250mm×4.6mm，5μm)；检测波长为227nm；流速为1.0ml/min；柱温为25℃；进样量为20μL。将各时间点的血药浓度输入药物动力学3P87程序，以拟合度γ2为指标判定房室模型，输出药动学各参数，结果详见表1。
表1紫杉醇不同剂型的体内药物动力学参数(实施例1)
表中组“1”尾静脉注射泰素(紫杉醇注射液)；组“2”尾静脉注射未添加星型胆酸功能化聚乳酸的紫杉醇靶向脂质体；组“3”尾静脉注射紫杉醇靶向缓释脂质体。
药物动力学参数解析：通过模型嵌合显示，紫杉醇不同剂型的体内过程均呈二室模型，泰素(紫杉醇注射液)的半衰期t1/2、药-时曲线下面积AUC0-∞、平均驻留时间MRT均比其它两组小，而清除率CL最大，说明市售的紫杉醇普通注射液体内消除速度快，体内平均驻留时间短，需要频繁给药，将其制备成脂质体制剂后，半衰期延长，曲线下面积和平均驻留时间增大，是由于脂质体释放药物缓慢，加上脂质体外用白细胞膜修饰后会进一步减慢紫杉醇的释放。另外，大量的研究结果还显示，白细胞膜修饰的载药系统可以阻止血液中许多不同组分特别是调理素与其结合，从而降低与单核吞噬细胞系统的亲和力，降低网状吞噬系统的呑噬或摄取作用，可在循环系统中稳定存在，显著延长半衰期，与表1中的结果相吻合。组“2”与组“3”之间的区别在于组“2”注射的紫杉醇靶向脂质体中未添加星型胆酸功能化聚乳酸，导致其制剂缓释效果明显不如组“3”。因此，本发明公开的紫杉醇靶向缓释脂质体因星型胆酸功能化聚乳酸的引入，起到了明显的缓释效果，同时在其表面覆盖的白细胞膜较好地规避了内皮网状系统的识别和吞噬，两方面的协同作用使紫杉醇靶向缓释脂质体具有更长的半衰期和平均驻留时间，清除率下降，具有较好的长循环效果，可以减少给药次数，增强药物的治疗效果。
4.4组织中药物浓度测定及靶向作用：将各组织样品放置至室温，加入匀浆液Tris-HCl(0.01mol/L)充分匀浆，用乙酸乙酯萃取、离心，收集上层溶液，真空旋转蒸发，用甲醇-水(70:30)溶解残留物，用高效液相色谱法测定紫杉醇含量，其中色谱条件：流动相为甲醇-水(70:30)；色谱柱为依利特C18(250mm×4.6mm，5μm)；检测波长为227nm；流速为1.0ml/min；柱温为25℃；进样量为20μL。将各组织的时间-血药浓度输入药物动力学3P87程序，计算各组织的药-时曲线下面积AUC(表示各组织中紫杉醇累积总量)、组织药物靶向效率Te(＝AUC组织/AUC血)及肿瘤组织相对摄取比AUCtumor/tissue(＝AUC肿瘤/AUC组织)，结果详见表2。
表2紫杉醇不同剂型在荷瘤裸鼠体内分布的靶向效率和肿瘤组织相对摄取比(实施例1)
表中组“1”尾静脉注射泰素(紫杉醇注射液)；组“2”尾静脉注射未添加星型胆酸功能化聚乳酸的紫杉醇靶向脂质体；组“3”尾静脉注射紫杉醇靶向缓释脂质体。
组织分布及靶向效果解析：尾静脉注射不同剂型紫杉醇后，肿瘤组织靶向效率Te差别明显，泰素(紫杉醇注射液)的Te为0.71，明显低于白细胞膜修饰的两种脂质体剂型(Te分别为2.42和2.56)。表中肿瘤组织相对摄取比AUCtumor/tissue结果也显示，两种脂质体剂型经尾静脉注射后，肿瘤组织相对于心、肺、肝、脾、肾的摄取量比泰素(紫杉醇注射液)显著提高(P＜0.05)，提示脂质体经白细胞膜修饰后能显著增强药物的靶向能力，使药物更多地分布于肿瘤组织，而其他正常器官则分布相对较少，增强紫杉醇的抗肿瘤作用，减少毒副作用。组“2”是尾静脉注射未添加星型胆酸功能化聚乳酸的紫杉醇靶向脂质体，组“3”是尾静脉注射本发明公开的紫杉醇靶向缓释脂质体，两者之间的肿瘤组织靶向效率Te和肿瘤组织相对摄取比AUCtumor/tissue均相近，说明脂质体成份中添加星型胆酸功能化聚乳酸对制剂的靶向作用没有影响。但是，从组织分布检测结果显示，未添加星型胆酸功能化聚乳酸的紫杉醇靶向脂质体经荷瘤裸鼠尾静脉注射后，血液和各组织中的紫杉醇含量下降速度均比含有星型胆酸功能化聚乳酸的紫杉醇靶向缓释脂质体快，组“2”6h的紫杉醇浓度与组“3”12h的药物浓度相当，说明本发明公开的添加了星型胆酸功能化聚乳酸的紫杉醇靶向缓释脂质体不仅具有优良的靶向作用，还具有更加优越的体内长循环效果。
实施例2
1、一种白细胞膜修饰的紫杉醇靶向缓释脂质体的制备方法，该方法包括以下步骤：
制备方法同实施例1，其中各成份的投料量为：紫杉醇7.5mg、大豆磷脂60mg、胆固醇20mg、星型胆酸功能化聚乳酸7.5mg、白细胞膜5mg。
2.紫杉醇靶向缓释脂质体的药剂学表征
(1)、粒径和多分散系数：采用激光散射粒度分布仪测定大小，测定结果：平均粒径为87.5nm；多分散系数为0.186。
(2)、表面形貌：测定方法同实施例1，测定结果：表面形貌为球形，大小分布较为均一。
(3)、包封率的测定及结果：测定方法同实施例1，测定结果：包封率为85.7％。
3.体外累积释药百分率试验
测定方法及计算公式同实施例1，同样以未添加星型胆酸功能化聚乳酸的紫杉醇靶向脂质体(其它成份和工艺相同)作为对照制剂，按照相同体外累积释药百分率试验方法测定并计算累积释药百分率。
结果详见图2，相比于未添加星型胆酸功能化聚乳酸的紫杉醇靶向脂质体，本实施例制备的紫杉醇靶向缓释脂质体释放药物更为缓慢，1、2、3、6、9、12h累积释药百分率分别为5.7、14.2、20.4、40.7、52.6、61.4，而对应时间点的未添加星型胆酸功能化聚乳酸的紫杉醇靶向脂质体累积释药百分率分别为32.4、47.5、57.6、69.7、76.3、80.7，说明加入了星型胆酸功能化聚乳酸可以起到延缓药物释放作用。
4.体内药物动力学及组织分布
4.1建立裸鼠乳腺癌动物模型：建立方法及步骤同实施例1。
4.2给药及取样：给药方式及取样时间点同实施例1。
4.3血药浓度测定及药动学参数：血药浓度测定方法及采用的药动学程序同实施例1，结果详见表3。
表3紫杉醇不同剂型的体内药物动力学参数(实施例2)
表中组“1”尾静脉注射泰素(紫杉醇注射液)；组“2”尾静脉注射未添加星型胆酸功能化聚乳酸的紫杉醇靶向脂质体；组“3”尾静脉注射紫杉醇靶向缓释脂质体。
药物动力学参数解析：结果和解析与实施例1一致。
4.4组织中药物浓度测定及靶向作用：组织中药物浓度测定方法及采用的药动学程序和计算公式同实施例1，结果详见表4。
表4紫杉醇不同剂型在荷瘤裸鼠体内分布的靶向效率和肿瘤组织相对摄取比(实施例2)
表中组“1”尾静脉注射泰素(紫杉醇注射液)；组“2”尾静脉注射未添加星型胆酸功能化聚乳酸的紫杉醇靶向脂质体；组“3”尾静脉注射紫杉醇靶向缓释脂质体。
组织分布及靶向效果解析：结果和解析与实施例1一致。
实施例3
1、一种白细胞膜修饰的紫杉醇靶向缓释脂质体的制备方法，该方法包括以下步骤：
制备方法同实施例1，其中各成份的投料量为：紫杉醇10mg、大豆磷脂55mg、胆固醇24mg、星型胆酸功能化聚乳酸8mg、白细胞膜3mg。
2.紫杉醇靶向缓释脂质体的药剂学表征
(1)、粒径和多分散系数：采用激光散射粒度分布仪测定大小。测定结果：平均粒径为84.9nm；多分散系数为0.177；
(2)、表面形貌：测定方法同实施例1，测定结果：表面形貌为球形，大小分布较为均一。
(3)、包封率的测定及结果：测定方法同实施例1，测定结果：包封率为84.6％。
3.体外累积释药百分率试验
测定方法及计算公式同实施例1，同样以未添加星型胆酸功能化聚乳酸的紫杉醇靶向脂质体(其它成份和工艺相同)作为对照制剂，按照相同体外累积释药百分率试验方法测定并计算累积释药百分率。
结果详见图3，相比于未添加星型胆酸功能化聚乳酸的紫杉醇靶向脂质体，本实施例制备的紫杉醇靶向缓释脂质体释放药物更为缓慢，1、2、3、6、9、12h累积释药百分率分别为8.8、1.78、23.5、45.3、58.3、65.8，而对应时间点的未添加星型胆酸功能化聚乳酸的紫杉醇靶向脂质体累积释药百分率分别为37.4、50.6、59.3、70.1、78.9、82.7，说明加入了星型胆酸功能化聚乳酸可以起到延缓药物释放作用。
4.体内药物动力学及组织分布
4.1建立裸鼠乳腺癌动物模型：建立方法及步骤同实施例1。
4.2给药及取样：给药方式及取样时间点同实施例1
4.3血药浓度测定及药动学参数：血药浓度测定方法及采用的药动学程序同实施例1，结果详见表5。
表5紫杉醇不同剂型的体内药物动力学参数(实施例3)
表中组“1”尾静脉注射泰素(紫杉醇注射液)；组“2”尾静脉注射未添加星型胆酸功能化聚乳酸的紫杉醇靶向脂质体；组“3”尾静脉注射紫杉醇靶向缓释脂质体。
药物动力学参数解析：结果和解析与实施例1一致。
4.4组织中药物浓度测定及靶向作用：组织中药物浓度测定方法及采用的药动学程序和计算公式同实施例1，结果详见表6。
表6紫杉醇不同剂型在荷瘤裸鼠体内分布的靶向效率和肿瘤组织相对摄取比(实施例3)
表中组“1”尾静脉注射泰素(紫杉醇注射液)；组“2”尾静脉注射未添加星型胆酸功能化聚乳酸的紫杉醇靶向脂质体；组“3”尾静脉注射紫杉醇靶向缓释脂质体。
组织分布及靶向效果解析：结果和解析与实施例1一致。

Claims (4)

1.一种白细胞膜修饰的紫杉醇靶向缓释脂质体，其特征在于：所述脂质体由紫杉醇、星型胆酸功能化聚乳酸、大豆磷脂、胆固醇所构成的载药缓释脂质体及在其表面修饰的白细胞膜组成。
2.如权利要求1所述的一种白细胞膜修饰的紫杉醇靶向缓释脂质体，其特征在于：所述脂质体中各组分的质量百分比为：紫杉醇5-10％、大豆磷脂50-70％、胆固醇15-25％、星型胆酸功能化聚乳酸6-12%、白细胞膜2-6%。
3.一种白细胞膜修饰的紫杉醇靶向缓释脂质体的制备方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：
（1）紫杉醇缓释脂质体的制备：称取紫杉醇、大豆磷脂、胆固醇和星型胆酸功能化聚乳酸，溶于氯仿中，于35～40 ℃下减压旋转蒸发除去溶剂，直至形成脂质体薄膜，置真空干燥器中24 h，加入磷酸缓冲液于40 ℃恒温水浴旋转水化1 h，冰浴探头超声4～6 min，最后通过微射流高压均质机处理，过微孔滤膜，得到紫杉醇缓释脂质体混悬液；
（2）白细胞膜的制备：①分离白细胞：选取大鼠并通过眼窝收集全血，用等量的 EDTA-PBS缓冲液稀释，加入至离心管中，备用；取9% 聚蔗糖和 15.2% 泛影葡胺混合，用蒸馏水配制成比重为 1.114g/ml 的溶液，用0.3%氯化钠溶液调节渗透压至540 mOsm/L，沿管壁加入至上述离心管中,以700×g的离心力离心30min，用移液枪缓慢吸取中间的乳白色云雾状层，用EDTA- PBS缓冲液清洗, 离心，收集白细胞；
②白细胞膜的分离与纯化：收集的白细胞用白细胞低渗裂解液重新悬浮，用匀浆机冰浴均质2 min，4 ℃下低渗裂解24 h，以1200×g的离心力离心10min，弃去上清液，将收集的白细胞膜分别用30%、45%、50%三个浓度的梯度蔗糖溶液于4 ℃下以24000×g的离心力离心30 min，收集纯化的白细胞膜，置于2～6 ℃冰箱中备用；
（3）白细胞膜对紫杉醇缓释脂质体的修饰：将制备好的白细胞膜与脂质体振荡混合，孵育融合12 h，离心，用PBS缓冲液洗涤，然后用蒸馏水重新混悬，使用超声波仪以35 kHz的频率和80 W的功率，超声60 s，过微孔滤膜，高速离心，弃去上清液，冷冻干燥，即得白细胞膜修饰的紫杉醇靶向缓释脂质体。
4.如权利要求3所述的一种白细胞膜修饰的紫杉醇靶向缓释脂质体的制备方法，其特征在于：步骤（1）微射流高压均质机处理时，均质压力为120 MPa，均质温度为37 ℃，均质次数为5次。
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114224839A (zh) * 2021-12-09 2022-03-25 同济大学 一种细胞膜修饰脂质体的方法
CN114469889A (zh) * 2021-12-17 2022-05-13 浙江大学 特异靶向脉冲电场消融术后炎症区的仿生载药纳米粒及制备方法
CN115282119A (zh) * 2022-08-02 2022-11-04 天津科技大学 一种高载药量脂质体及其制备方法

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105709232A (zh) * 2016-01-26 2016-06-29 湖北大学 一种核壳型缓释纳米球及其制备方法

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105709232A (zh) * 2016-01-26 2016-06-29 湖北大学 一种核壳型缓释纳米球及其制备方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
SHAO-QI ZENG ET AL: ""Lipid–polymer hybrid nanoparticles for synergistic drug delivery to overcome cancer drug resistance"", 《NEW JOURNAL OF CHEMISTRY》 *
杨秀丽: ""紫杉醇纳米脂质体凝胶剂的制备与评价"", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 医药卫生科技辑》 *
高长永: ""天然细胞膜伪装微纳米载体的仿生设计及其生物医学应用"", 《中国博士学位论文全文数据库 医药卫生科技辑》 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114224839A (zh) * 2021-12-09 2022-03-25 同济大学 一种细胞膜修饰脂质体的方法
CN114469889A (zh) * 2021-12-17 2022-05-13 浙江大学 特异靶向脉冲电场消融术后炎症区的仿生载药纳米粒及制备方法
CN115282119A (zh) * 2022-08-02 2022-11-04 天津科技大学 一种高载药量脂质体及其制备方法
CN115282119B (zh) * 2022-08-02 2023-11-21 天津科技大学 一种高载药量脂质体及其制备方法

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