CN104138600A - Aβ靶向的重组脂蛋白纳米药物载体及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了Aβ靶向的重组脂蛋白纳米药物载体及其制备方法和应用。Aβ靶向的重组脂蛋白纳米药物载体由脂质、载脂蛋白和药物组成，所述药物是针对阿尔茨海默病的治疗或诊断药物，包括小分子化学治疗药物，大分子多肽、蛋白、基因治疗药物及诊断药物中的一种或者多种。本发明药物载体的构建解决了天然脂蛋白来源稀缺、制备繁琐、质量可控性不强等缺点，其应用为阿尔茨海默病诊疗药物递送提供新的更为有效和安全的解决方案，具有重要的研究价值和临床应用前景。

Description

Aβ靶向的重组脂蛋白纳米药物载体及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及化学制药领域，尤其涉及Aβ靶向的重组脂蛋白纳米药物载体及其制备方法和应用。

背景技术

阿尔茨海默病(Alzheimer's Disease,AD)是最常见神经退行性疾病，其发病率随年龄增高，65岁以上人群发病率为7～10%，85岁以上人群高达47%。AD已成为继心脑血管疾病、恶性肿瘤之后威胁老年人健康的第三大疾病。随着人口老龄化进程的加剧，该类疾病的发病率日益上升。据统计，目前全球有AD患者3560万，我国600万，随着人口的老龄化，预计到21世纪中叶全球AD患者将达1.15亿。AD已成为人类健康和生存质量的严重威胁，是日益严重的公共卫生问题。

AD的主要病理特征为细胞外β淀粉样蛋白（β-Amyloid peptide,Aβ）大量沉积形成的老年斑（Senile plaques,SP）及细胞内神经纤维缠结（Neurofibrillarytangles,NFT）的形成。当前的研究明确Aβ是AD的核心致病物质，其中Aβ寡聚体的神经毒性最强。Aβ在脑内过度产生和沉积，引起其周边神经元突触功能障碍、Tau蛋白过度磷酸化、氧化应激和继发炎性反应，导致神经元变性死亡，最终产生痴呆。这就是目前最受公认的AD病因假说——Aβ级联假说（amyloidβcascade hypothesis）。因此，Aβ已成为AD药物干预的重要分子靶点。

目前AD药物干预仍面临重大瓶颈：①血脑屏障（Blood brain barrier,BBB）的存在使得98%以上具有潜在治疗作用的化合物因难以进入中枢而遭到淘汰，因此如何克服BBB的屏障作用，成功将药物递送入脑是实施AD治疗的首要条件；②AD作为一种进行性神经退行性疾病，有效干预需长期重复给药，而鉴于脑功能的复杂性和神经元对损伤的敏感性，干预药物及其载体的安全性和靶向性至关重要。由于Aβ聚集体特别是寡聚体介导的级联反应是AD的核心病因，将药物特异地递送到脑内Aβ聚集部位是提高疗效、减少中枢副作用的关键。针对上述难点问题，一些研究者设计了具有Aβ靶向特性的纳米药物载体，代表性载体有Aβ_1-42抗体修饰脂质体【The binding affinity of anti-Abeta1-42MAb-decorated nanoliposomes to Abeta1-42peptides in vitro and to amyloiddeposits in post-mortem tissue[J].Biomaterials,2011,32(23):5489-5497.】、Aβ_1-42修饰的超顺磁氧化铁颗粒【Detection of amyloid plaques targeted byUSPIO-Abeta1-42in Alzheimer's disease transgenic mice using magnetic resonancemicroimaging[J].Neuroimage,2011,55(4):1600-1609.】和姜黄素修饰的脂质体【Curcumin-decorated nanoliposomes with very high affinity for amyloid-beta1-42peptide[J].Biomaterials,2011,32(6):1635-1645.】等。然而，这些载体都无法通过BBB，须脑室内注射或借助颈动脉灌注甘露醇等侵入性手段入脑；而最具代表性的可跨越BBB的纳米药物载体如转铁蛋白受体单克隆抗体OX26连接的空间稳定脂质体【Brain drug delivery of small molecules using immunoliposomes.Proc Natl Acad Sci U S A.1996,93(24):14164-14169.】、纳米粒、囊泡【Preparationand brain delivery property of biodegradable polymersomes conjugated with OX26.J Control Release.2008,128(2):120-127.】等均不具备Aβ靶向特性。因此，发展能够实现脑内Aβ靶向的智能化纳米药物载体对AD的有效药物干预具有至关重要的作用。

脂蛋白是一种天然纳米载体（粒径从5–1000nm），其根据密度、结构和功能分为乳糜微粒、极低密度脂蛋白、中间密度脂蛋白、低密度脂蛋白和高密度脂蛋白，在体内起转运脂类物质的作用。基于仿生学原理设计的重组脂蛋白纳米载药系统在克服天然脂蛋白来源稀缺、制备繁琐、质量可控性不强等缺点的同时，较其他纳米载体具有明显的优势：模拟内源性纳米颗粒，可避免单核巨噬系统的识别和清除，具有较长的体内循环时间；生物相容好，可完全被机体代谢利用且无免疫原性；含疏水内核、亲水外壳，结构可调，可实现亲/疏水性和两亲性药物多模式载带；更为重要的是，通过调整脂质成分、载脂蛋白的种类、比例和载带药物等因素，所构建载体的理化特性如粒径、形状、载药量、释药行为，乃至体内靶向递药特性可根据治疗需要进行主观调控，具有很强的灵活性。以ApoA I及其模拟肽为载脂蛋白成分的重组脂蛋白已被用于肝脏【中国发明专利，申请号201210204166.6】、肿瘤【中国发明专利，申请号201210110187.1】、动脉粥样硬化【中国发明专利，申请号201110102877.8】等部位的靶向药物递送。但尚未见将重组脂蛋白纳米药物传递系统用于靶向脑内Aβ的药物递送研究。

发明内容

本发明所要解决的第一个技术问题是，提供一种Aβ靶向的重组脂蛋白纳米药物载体。

本发明所要解决的第二个技术问题时，提供Aβ靶向的重组脂蛋白纳米药物载体的制备方法。

本发明所要解决的第三个技术问题时，提供Aβ靶向的重组脂蛋白纳米药物载体的应用。

为了解决上述第一个技术问题，本发明提供了一种Aβ靶向的重组脂蛋白纳米药物载体，其特征在于，所述Aβ靶向的重组脂蛋白纳米药物载体由脂质、载脂蛋白和药物组成，所述药物是针对阿尔茨海默病的治疗或诊断药物，包括小分子化学治疗药物，大分子多肽、蛋白、基因治疗药物及诊断药物中的一种或者多种。

作为一个优选方案，所述载脂蛋白包括ApoE及其模拟肽、ApoA-I及其模拟肽、ApoA-II及其模拟肽、ApoC及其模拟肽中的一种或多种。所述载脂蛋白优选ApoE及其模拟肽中的一种或多种。

作为一个优选方案，所述Aβ靶向的重组脂蛋白纳米药物载体的粒径范围为1-500nm，优选为5-200nm。

作为一个优选方案，所述Aβ靶向的重组脂蛋白纳米药物载体采用注射途径给药或者鼻腔途径给药。

作为一个优选方案，所述Aβ靶向的重组脂蛋白纳米药物载体分散在药剂学上可以接受的缓冲溶液环境中，所述缓冲溶液包括HEPES缓冲液、生理盐水、Tris缓冲液和磷酸盐缓冲液。

为了解决本发明的第二个技术问题，本发明提供Aβ靶向的重组脂蛋白纳米药物载体的制备方法，其特征在于，当药物是疏水性药物和/或两亲性药物时，脂质和疏水性药物和/或两亲性药物通过常规方法制备脂质体，得到的脂质体与载脂蛋白共同孵育，通过自组装形成重组脂蛋白纳米药物载体；当药物是亲水性药物时，脂质通过常规方法制备脂质体，亲水性药物可以在自组装前、中或后加入。

作为一个优选方案，药物质量占处方含量0.001-50%，脂质质量占处方含量的20-95%，载脂蛋白质量占处方含量的5-80%。

为了解决本发明的第三个技术问题，本发明提供了Aβ靶向的重组脂蛋白纳米药物载体在制备Aβ靶向药物中的应用。

本发明所述的脂质可以是天然磷脂（蛋磷脂、豆磷脂）、合成磷脂（磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇、磷脂酸、心磷脂、溶血磷脂）、鞘脂（鞘氨醇、神经酰胺、鞘磷脂、脑苷脂、神经节苷脂）、胆固醇、胆固醇酯、甘油酯及其衍生物中的一种或多种。

所述的脂质体的制备方法采用薄膜水化法、注入法、复乳法、熔融法、冷冻干燥法、逆向蒸发法、高压乳匀法或超声法及Ca²⁺融合法。

本发明的特点是模拟天然脂蛋白，构建重组脂蛋白纳米药物传递系统，借助载脂蛋白与脑毛细血管上的清道夫B I受体、低密度脂蛋白受体（LDLr）和低密度脂蛋白受体相关蛋白-1（LRP1）等结合，通过受体介导途径转运入脑，并通过载脂蛋白对Aβ的特异识别和结合，实现脑内Aβ靶向药物递送。

本发明的优点在于，①可通过受体介导的胞吞转运途径入脑；②可特异识别和结合Aβ，将药物靶向递送至脑内Aβ聚集部位；③结构和粒径的高度可调性，可载带不同药物；④高度仿生，安全性好。本发明药物载体的构建解决了天然脂蛋白来源稀缺、制备繁琐、质量可控性不强等缺点，其应用为AD诊疗药物递送提供新的更为有效和安全的解决方案，具有重要的研究价值和临床应用前景。

附图说明

图1为ApoE蛋白对脑毛细血管内皮细胞bEnd.3细胞和前列腺内皮细胞YPEN细胞摄取重组脂蛋白的影响，ApoE抑制组先加入ApoE抑制1h后，各组均加入等浓度重组脂蛋白孵育3h，***p<0.001表明与未加ApoE的bEnd.3细胞组存在显著性差异。

图2为(A)¹²⁵I-重组脂蛋白静脉注射10,30min,1,2,4,8,12,24h后不同脑区的放射活性强度；(B)¹²⁵I-重组脂蛋白静脉注射1,2,4,24h后脑实质、脑血管的放射活性强度百分比。

图3为透射电镜观察重组脂蛋白与Aβ寡聚体的相互作用，(A)重组脂蛋白；(B)Aβ寡聚体；(C)Aβ寡聚体(0.2μM)与重组脂蛋白(含磷脂酰胆碱DMPC20μg/ml)室温孵育24h，2%（w/v）磷钨酸负染，透射电镜观察。箭头：Aβ寡聚体特异结合在重组脂蛋白两侧，标尺:20nm

图4为表面等离子共振（SPR）检测重组脂蛋白与(A)Aβ单体、(B)Aβ寡聚体的相互作用。

图5为载α-倒捻子素的重组脂蛋白(A)促进AD模型动物SAMP8小鼠的脑内Aβ清除，(B)减少小胶质细胞激活（CD-45阳性染色）。

具体实施方式

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册（New York:Cold SpringHarbor Laboratory Press，1989）中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。

实施例1重组脂蛋白的表征和脑血管内皮细胞摄取

(1)制备

脂质（磷脂酰胆碱DMPC/DOPC/DPPC+/-神经节苷脂GM1+/-胆固醇+/-胆固醇油酸酯）（2-10mg）、药物α-倒捻子素（0.1-2mg）溶于一定比例氯仿-甲醇混合溶剂中，减压旋转蒸发除去有机溶剂，脂膜加1ml Tris缓冲液（含10mMTris，0.1M KCl，1mM EDTA，pH8.0脱气）水化，50°C水浴超声1.5h。加不同pH和盐组成的缓冲液稀释至8ml，40°C水浴超声。ApoE3（0.5-5mg）保存于含6M盐酸胍和5μl/(mg蛋白)β-巯基乙醇的100mM碳酸氢铵溶液中（pH8.0）。用前以合适的蛋白组装缓冲液透析。10min内加入，继续超声50min。产品冷却至室温，4°C过夜。0.22μm膜滤过，超滤浓缩（截留分子量10KDa）。Superdex200凝胶柱纯化。4°C保存备用。

(2)表征

重组脂蛋白磷钨酸负染，透射电镜观察形态。激光粒度仪测定其粒径和表面电位。重组脂蛋白成分分析：荧光分光光度计测定包载荧光探针量；HPLC测定包载药量；磷脂试剂盒（Phospholipids C assay kit）测定磷脂含量；Bradford法测定蛋白含量，计算ApoE3组装效率。

(3)脑血管内皮细胞模型bEnd.3细胞结合和摄取重组脂蛋白情况

高内涵分析定量检测重组脂蛋白的细胞结合:bEnd.3细胞密度5000/孔接种于96孔板，培养24h。吸弃原有培液，加入100μl载荧光探针的重组脂蛋白溶液，37°C孵育。吸弃培液，加100μl预热至37°C的3.7%甲醛溶液室温固定10min。加100μl PBS洗3次，50μl Hoechest33432室温避光孵育10min染细胞核；200μl PBS洗3次。置KineticScan全自动高内涵药物筛选分析系统下检测。蓝色荧光通道检测细胞核，进行细胞计数；绿色或红色荧光通道检测重组脂蛋白。每组3复孔，每孔检测至少1000个细胞。

结果如图1所示，在低密度脂蛋白受体家族高表达的脑毛细血管内皮细胞系bEnd.3，重组脂蛋白的细胞摄取显著高于不加载脂蛋白的对照脂质体LNC。在ApoE共同孵育情况下，重组脂蛋白的细胞摄取急剧下降，提示bEnd.3通过ApoE介导的机制摄取重组脂蛋白。而在低密度脂蛋白受体家族低表达的内皮细胞YPEN，重组脂蛋白的细胞摄取明显降低而不受ApoE影响，表明低密度脂蛋白受体家族参与介导重组脂蛋白的细胞摄取。

实施例2重组脂蛋白的脑内递送特性

(1)制备

称取豆磷脂、蛋磷脂(2-10mg)、神经节苷脂GM1(0.1-5mg)放入500ml圆底烧瓶中，加入2ml氯仿溶解，置于旋转蒸发仪20℃，避光真空1h。在圆底烧瓶中加入2ml PBS溶液，37℃震摇至瓶内壁脂质膜全部水化脱落，放入40℃水浴超声1h，加入ApoE或ApoA-I(0.1-10mg)，37℃孵育36h，4℃保存。

(2)放射标记定量测定重组脂蛋白静注后在体内各组织和不同脑区的分布情况

¹²⁵I标记重组脂蛋白。昆明种小鼠24只，随机分8组，静脉注射给予¹²⁵I-重组脂蛋白，分别于给药后10,30min,1,2,4,8,12,24h后处死动物，取全血、脑（左侧半脑，分出皮层、海马、纹状体等不同脑区）、心、肝、脾、肺、肾，组织称重、放射性计数测定；加3倍量水匀浆，加同体积10%三氯乙酸沉淀蛋白，取沉淀测定放射性计数，计算¹²⁵I-重组脂蛋白入脑的%ID/g。取右侧脑组织，加等渗HEPES缓冲液，置玻璃匀浆器匀浆10次，加右旋糖酐溶液（26%,70kD）调节比重，匀浆3次，5400g，4℃离心15min，分离脑血管和脑实质，分别测定放射性计数，计算¹²⁵I-重组脂蛋白进入脑实质的百分比。结果显示，给药1h后，各脑区均有约0.21%Dose/g的ApoE-重组脂蛋白入脑（图2），该入脑量优于公认具有良好脑部递药特性的转铁蛋白受体单克隆抗体OX26修饰的免疫脂质体(0.03%Dose/g)和乳铁蛋白(0.016%Dose/g)；另一侧脑组织用于脑毛细血管扣除实验，结果显示80%以上¹²⁵I-重组脂蛋白放射性强度进入脑实质，而且随着给药时间延长，测得脑实质中¹²⁵I-重组脂蛋白放射性强度百分比升高（图2），提示¹²⁵I-重组脂蛋白被有效递送入脑。

实施例3重组脂蛋白与Aβ_1-40寡聚体的结合位点

(1)制备

称取磷脂酰胆碱、磷脂酸(2-10mg)放入500ml圆底烧瓶中，加入2ml氯仿溶解，置于旋转蒸发仪20℃，避光真空1h。在圆底烧瓶中加入2ml PBS溶液，37℃震摇至瓶内壁脂质膜全部水化脱落，放入40℃水浴超声1h，加入ApoE或ApoA-I(0.1-10mg)，37℃孵育36h，4℃保存。

(2)透射电镜观察重组脂蛋白与Aβ_1-40寡聚体的结合位点

20μg/ml重组脂蛋白与200nM Aβ_1-40寡聚体在37℃恒温箱孵育24h，离心浓缩至800μg/ml重组脂蛋白，同时分别以等浓度重组脂蛋白、Aβ_1-40寡聚体为对照，2%磷钨酸染色，透射电镜观察。如图3结果所示，Aβ_1-40寡聚体与碟形重组脂蛋白共同孵育24h后，Aβ_1-40寡聚体结合于重组脂蛋白侧边的载脂蛋白区域，表明重组脂蛋白上的载脂蛋白是Aβ_1-40寡聚体特异结合的部位。

实施例4重组脂蛋白的Aβ靶向结合亲和力

(1)制备

称取2mg DMPC放入500ml圆底烧瓶中，加2ml乙醚挥干，再加入2ml乙醚挥干，以除去磷脂中的水分，加入2ml氯仿，加入20μl1mg/ml DiI氯仿溶液，混匀，置于旋转蒸发仪20℃，避光真空1h。在圆底烧瓶中加入2ml PBS溶液，37℃震摇至瓶内壁脂质膜全部水化脱落，放入40℃水浴超声1h，探头超声减小粒径。加入适量0.2mg/ml ApoE/ApoA I蛋白PBS溶液，37℃50rpm孵育36h，4℃保存。

(2)表面等离子共振(Surface Plasmon Resonance,SPR)实验验证重组脂蛋白的Aβ靶向结合特性

CM5芯片采用氨基偶联的方式将Aβ单体或者寡聚体固定：在用0.2MEDC和0.05M NHS对芯片表面进行活化后，将Aβ单体或者寡聚体稀释于pH4.0醋酸钠缓冲溶液中，使Aβ浓度为23μM，以30μl/min的速度注入420s，再用pH8.5的乙醇胺进行封闭。参比通道活化后直接用乙醇胺封闭。亲和力测试采用双通道模式检测：重组脂蛋白稀释于pH7.410mM PBS中，以30μl/min的速度注入到参比通道以及固定了Aβ的通道。接触时间为100s或300s，解离时间为400s。结果用Biacore T200Evaluation Softeware程序进行分析，运用1:1结合模型计算亲和力值。结果显示，重组脂蛋白与Aβ单体（monomer）、寡聚体（oligomer）均呈高亲和力结合（图4），动态法计算其与Aβ单体、寡聚体的亲和力常数KD值，分别为3.65nM和2.65nM（与抗原、抗体亲和力同一数量级），与天然HDL与Aβ的亲和力（5.7nM）相似，表明重组脂蛋白可望具有良好的Aβ靶向特性。

实施例5载小分子药物重组脂蛋白对AD模型动物的疾病修饰作用

(1)制备

脂质（DMPC/DMPE+/-GM1+/-胆固醇+/-胆固醇油酸酯）（2-10mg）、药物α-倒捻子素（α-M）（0.1-2mg）+/-姜黄素（0.1-2mg）溶于一定比例氯仿-甲醇混合溶剂中，减压旋转蒸发除去有机溶剂，脂膜加1ml Tris缓冲液（含10mMTris，0.1M KCl，1mM EDTA，pH8.0脱气）水化，50°C水浴超声1.5h。取1ml ApoE3（0.5-5mg/ml）10min内加入，继续超声50min。产品冷却至室温，4°C过夜。

(2)载药重组脂蛋白对AD模型动物的疾病修饰作用

将10月龄AD模型小鼠SAMP8小鼠分为生理盐水组，空白重组脂蛋白组，载α-M重组脂蛋白制剂组（0.5mg/kg；2mg/kg），α-M溶液组（0.5mg/kg；2mg/kg），共六组。SAMR小鼠作为正常对照，给予生理盐水。尾静脉注射给药，连续给药2周。给药结束后，小鼠水合氯醛麻醉，生理盐水、4%多聚甲醛依次心脏灌流。断头，取出完整大脑，4%多聚甲醛溶液继续固定，浸蜡，包埋，切片，厚度4μm，避光保存。石蜡切片免疫组化染色，脑内Aβ聚集体免疫组化（一抗6E10），小胶质细胞激活（一抗anti-CD45）。DAB染色，苏木素复染，中性树胶封片观察并计数不同处理组动物大脑皮层、海马的Aβ沉积和小胶质细胞激活情况。

结果如图5所示，10月龄SAMP8小鼠连续15天尾静脉给予α-M-重组脂蛋白（0.5mg/ml和2mg/ml），脑内Aβ沉积和小胶质细胞激活情况明显少于生理盐水组，也明显少于2mg/kgα-M溶液组，空白重组脂蛋白的脑内Aβ沉积和小胶质细胞激活情况也有所改善。结果表明，重组脂蛋白本身具有一定的AD疾病修饰作用，同时能有效提多酚类药物对AD的疾病修饰作用。

实施例6载siRNA/MicroRNA的重组脂蛋白鼻腔给药对AD模型动物的疾病修饰作用

(1)制备

脂质（DOTAP/DOPE）（2-10mg）溶于一定比例氯仿溶液中，减压旋转蒸发除去有机溶剂，脂膜加含siRNA/MicroRNA(1-500μg)的Tris缓冲液水化，均质减小粒径。取1ml ApoE3/ApoA I模拟肽（0.5-5mg/ml）10min内加入，超声50min，继续孵育24h，4°C保存。

(2)载siRNA/MicroRNA的重组脂蛋白鼻腔给药对AD模型动物的疾病修饰作用

将7月龄AD模型小鼠APP/PS1转基因小鼠分为生理盐水组，空白重组脂蛋白组，载BACE-siRNA/MicroRNA制剂组，BACE-siRNA/MicroRNA溶液剂组。野生型B6小鼠作为正常对照，给予生理盐水。鼻腔给药4周。给药结束后，小鼠水合氯醛麻醉，生理盐水、4%多聚甲醛依次心脏灌流。断头，取出完整大脑，4%多聚甲醛溶液继续固定，浸蜡，包埋，切片，厚度4μm，避光保存。石蜡切片免疫组化染色，脑内Aβ聚集体免疫组化（一抗6E10），小胶质细胞激活（一抗anti-CD45）。DAB染色，苏木素复染，中性树胶封片观察并计数不同处理组动物大脑皮层、海马的Aβ沉积和小胶质细胞激活情况。结果显示，7月龄APP/PS1转基因小鼠连续4周鼻腔给予载siRNA/MicroRNA的重组脂蛋白，脑内Aβ沉积和小胶质细胞激活情况明显少于生理盐水组，也明显少于siRNA/MicroRNA溶液组。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种Aβ靶向的重组脂蛋白纳米药物载体，其特征在于，所述Aβ靶向的重组脂蛋白纳米药物载体由脂质、载脂蛋白和药物组成，所述药物是针对阿尔茨海默病的治疗或诊断药物，包括小分子化学治疗药物，大分子多肽、蛋白、基因治疗药物及诊断药物中的一种或者多种。

2.根据权利要求1所述的一种Aβ靶向的重组脂蛋白纳米药物载体，其特征在于，所述载脂蛋白包括ApoE及其模拟肽、ApoA-I及其模拟肽、ApoA-II及其模拟肽、ApoC及其模拟肽中的一种或多种。

3.根据权利要求2所述的一种Aβ靶向的重组脂蛋白纳米药物载体，其特征在于，所述载脂蛋白是ApoE及其模拟肽中的一种或多种。

4.根据权利要求1所述的一种Aβ靶向的重组脂蛋白纳米药物载体，其特征在于，所述Aβ靶向的重组脂蛋白纳米药物载体的粒径范围为1-500nm。

5.根据权利要求4所述的一种Aβ靶向的重组脂蛋白纳米药物载体，其特征在于，所述Aβ靶向的重组脂蛋白纳米药物载体的粒径范围为5-200nm。

6.根据权利要求1所述的一种Aβ靶向的重组脂蛋白纳米药物载体，其特征在于，所述Aβ靶向的重组脂蛋白纳米药物载体采用注射途径给药或者鼻腔途径给药。

7.根据权利要求1所述的一种Aβ靶向的重组脂蛋白纳米药物载体，其特征在于，所述Aβ靶向的重组脂蛋白纳米药物载体分散在药剂学上可以接受的缓冲溶液环境中，所述缓冲溶液包括HEPES缓冲液、生理盐水、Tris缓冲液和磷酸盐缓冲液。

8.权利要求1—7任一所述的Aβ靶向的重组脂蛋白纳米药物载体的制备方法，其特征在于，当药物是疏水性药物和/或两亲性药物时，脂质和疏水性药物和/或两亲性药物通过常规方法制备脂质体，得到的脂质体与载脂蛋白共同孵育，通过自组装形成重组脂蛋白纳米药物载体；当药物是亲水性药物时，脂质通过常规方法制备脂质体，亲水性药物可以在自组装前、中或后加入。

9.权利要求8所述的Aβ靶向的重组脂蛋白纳米药物载体的制备方法，其特征在于，药物质量占处方含量0.001-50%，脂质质量占处方含量的20-95%，载脂蛋白质量占处方含量的5-80%。

10.权利要求1—7任一所述的Aβ靶向的重组脂蛋白纳米药物载体在制备Aβ靶向药物中的应用。