CN108387415A - 一种用于检测尿液23种元素的试剂盒及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于医学检验技术领域，具体涉及一种用于检测尿液23种元素的试剂盒及其制备方法。本发明要解决的技术问题是ICP‑AES及ICP‑MS中无配套试剂导致检测结果差异大。本发明的技术方案是一种用于检测尿液23种元素的试剂盒，包括：尿液保存液、尿液稀释液储备液、仪器调谐液储备液、内标储备液和标准曲线储备液。本发明的公开了成套的试剂盒，可以一次性检测23种尿液元素，该试剂盒配置简单，使用方便，检测灵敏度高。

Description

一种用于检测尿液23种元素的试剂盒及其制备方法
技术领域
本发明属于医学检验技术领域，具体涉及一种用于检测尿液23种元素的试剂盒及其制备方法。
背景技术
目前医学行业对于尿液中元素的检测方法主要包括原子吸收光谱法(AAS)、电感耦合等离子体发射光谱法(ICP-AES)、电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)。
其中AAS市面上有成套商业试剂盒，结果稳定性良好。而ICP-AES及ICP-MS无相应成套试剂盒，各个实验室均为自行配制或者购买非配套试剂，因涉及元素较多，配制过程繁琐，导致很多实验室无法成功配制方法所需所有试剂。检测试剂涉及多种元素，常规实验室因检测项目量较少，无法配制多元素混合标准溶液。各实验室对于尿液中23种元素的检测值范围不尽了解，不能科学有效的配制合适浓度梯度的标准溶液；商业单元素标准物质浓度较大，目标浓度较低，如果一次取样配制会导致浓度误差较大，严重影响检测结果；非配套试剂因方法学差异无法取得预期效果。
发明内容
本发明要解决的技术问题是ICP-AES及ICP-MS中无配套试剂导致检测结果差异大。
本发明的技术方案是用于检测尿液23种元素的试剂盒，包括：尿液保存液、尿液稀释液储备液、仪器调谐液储备液、内标储备液和标准曲线储备液；
所述尿液保存液的配制成分为：体积比例为1∶1的优级纯硝酸和生物防腐剂，所述生物防腐剂为ProClinTM 300；
所述尿液稀释液储备液的配制成分为：优级纯硝酸和曲拉通X-100各10％；
所述仪器调谐液为：使用购自于国家有色金属及电子材料分析测试中心或者具有资质的国家标准液体样品进行配制，将锂(Li7)、钴(Co59)、铱(Y89)、铊(Tl205)、铈(Ce140)标准液配制浓度为10％的调谐储备液，溶剂为去离子水；
所述内标储备液：使用购自于国家有色金属及电子材料分析测试中心或者具有资质的国家标准液体样品进行配制，将钪(Sc45)、锗(Ge72)、铱(Y89)、铑(Rh103)、铟(In115)、铽(Tb159)、铋(Bi209)标准液配制浓度为10％的内标储备液，溶剂为去离子水；
所述标准溶液储备液由中间储备液配制得到，中间储备液参数见表1，标准溶液储备液配制参数见表2；
表1标准溶液参数
表2标准溶液储备液配制参数
本发明还提供了所述试剂盒的制备方法，包括如下步骤：
a、尿液保存液的制备：准备优级纯硝酸、生物防腐剂(ProClinTM 300)按照1:1比例进行配制，使用超声水机进行超声混匀；
b、尿液稀释液的制备：采用去离子水将优级纯硝酸(川东化工)、曲拉通X-100(进口分装)配制成10％体积浓度的稀释储备液，超声均匀；将稀释储备液与去离子水按照1:99体积比例进行稀释，制成尿液稀释应用液；
c、仪器调谐储备液的制备：以去离子水为溶剂，使用购自于国家有色金属及电子材料分析测试中心或者具有资质的国家标准液体样品进行配制，将锂(Li7),钴(Co59),铱(Y89),铊(Tl205),铈(Ce140)标准液配制浓度为10％的调谐储备液；
d、内标储备液的制备：以去离子水为溶剂，使用购自于国家有色金属及电子材料分析测试中心或者具有资质的国家标准液体样品进行配制，将钪(Sc45)、锗(Ge72)、铱(Y89)、铑(Rh103)、铟(In115)、铽(Tb159)、铋(Bi209)标准液配制浓度为10％的内标储备液；
e、所述标准溶液储备液由中间储备液配制得到，中间储备液参数见表1，标准溶液储备液配制参数见表2；
表1标准溶液参数
表2标准溶液储备液配制参数
具体的，所述的步骤b还包括尿液稀释应用液的制备：将尿液稀释液与去离子水按照1:99体积比例进行稀释所得。
具体的，所述的步骤c还包括仪器调谐应用液的制备：将调谐储备液与去离子水按照1:99体积比例进行稀释。
具体的，所述的步骤d还包括内标应用液的制备：将内标储备液与去离子水按照1:99体积比例进行稀释。
具体的，所述的步骤e还包括标准曲线应用液配制：以正常人尿液为溶液，采用标准曲线储备液进行配制，配制参数见表3。
表3标准曲线应用液配制参数
试剂名称 加入试剂/体积 尿液稀释液体积 尿液体积
STD0 储备液系列0/1000μL 900μL 100μL
STD1 储备液系列1/1000μL 900μL 100μL
STD2 储备液系列2/1000μL 900μL 100μL
STD3 储备液系列3/1000μL 900μL 100μL
STD4 储备液系列4/1000μL 900μL 100μL
具体的，所述的试剂盒2-8℃避光保存，有效期1年；配制完成的仪器调谐应用液、内标应用液、标准曲线应用液有效期1个月，标准曲线应用液现配现用。
本发明的有益效果：本发明的公开了成套的试剂盒，可以一次性检测23种尿液元素，且仪器调谐储备液、内标储备液可用于其他项目检测时仪器性能调谐使用；解决了标本无法立即检测的情况下，尿液标本变质、降解等情况。.试剂盒适用于标准加入法和标准曲线法两种定量方法，适合更多种检测方法。该试剂盒配置简单，使用方便，检测灵敏度高。
具体实施方式
实施例1本发明试剂盒的制备
一、试剂制备
1.尿液保存液：准备优级纯硝酸、生物防腐剂(ProClinTM 300)按照1:1比例进行配制，使用超声水机进行超声混匀；
2.尿液稀释液：
2.1尿液稀释液储备液：准备优级纯硝酸、曲拉通X-100(进口分装)配制各10％浓度的稀释储备液。
配制方法：
2.1.1容量瓶中加少量去离子水，加入定量的曲拉通试剂，超声水机超声均匀待用；
2.1.2使用量筒取定量的硝酸于烧杯中，加入适量去离子水制成稀硝酸；
2.1.3将稀硝酸缓慢导入2.1.1的曲拉通水溶液中，边倒边摇匀；
2.1.4使用超声水机超声硝酸曲拉通水溶液，直至完全溶解混匀；
2.1.4使用去离子水定容。
2.2尿液稀释应用液：将稀释储备液与去离子水按照1:99体积比例进行稀释，制成尿液稀释应用液；
3.仪器调谐液：
3.1仪器调谐储备液：使用购自于国家有色金属及电子材料分析测试中心或者具有资质的国家标准液体样品进行配制，将锂(Li7),钴(Co59),铱(Y89),铊(Tl205),铈(Ce140)标准液配制浓度为10％的调谐储备液(溶剂为去离子水)；
3.2仪器调谐应用液：将调谐储备液与去离子水按照1:99体积比例进行稀释，制成ICP-MS仪器调谐应用液；
4.内标液：
4.1内标储备液：使用购自于国家有色金属及电子材料分析测试中心或者具有资质的国家标准液体样品进行配制，将钪(Sc45)、锗(Ge72)、铱(Y89)、铑(Rh103)、铟(In115)、铽(Tb159)、铋(Bi209)标准液配制浓度为10％的内标储备液(溶剂为去离子水)；
4.2内标应用液：将内标储备液与去离子水按照1:99体积比例进行稀释，制成ICP-MS仪器内标应用液；
5.标准曲线溶液：使用购自于国家有色金属及电子材料分析测试中心或者具有资质的国家标准液体样品进行配制，配制方法如下：
5.1中间储备液配制方法，具体参数见表4：
表4配制参数
5.2标准曲线储备液配制5个浓度点，配制方法如表5：
表5配制参数
5.3标准曲线应用液配制方法：
5.3.1取正常人随机尿液备用；
5.3.2取5只硬质塑料管，分别标记STD0-STD4；
5.3.3标准曲线应用液配制方法，具体见表6：
表6配制参数
5.3.4标准曲线应用液配制完成后，需振荡混匀。
二、基本信息及注意事项
1.保存条件及有效期：试剂盒2-8℃避光保存，有效期1年；配制完成的仪器调谐应用液、内标应用液、标准曲线应用液有效期1个月，标准曲线应用液现配现用；
2.适用设备：电感耦合等离子体质谱仪(ICP-MS)，也可用于其他方法学仪器；
3.标准曲线储备液可用于标准曲线法检测尿液中23种元素；
所有涉及加样的设备均需由具有校准资质的机构进行校准后方能使用。
实施例2采用本发明试剂盒进行检测
一、样本采集保存
1.使用尿杯取本底检测合格的尿杯采集不少于10mL的随机尿；
2.将10mL尿液转入到螺旋离心管中，加入尿液保存液20μL，使硝酸和生物防腐剂的浓度分别为0.1％；
3.标本采集完成后尽快检测，如果不能检测，可置于2-8℃环境中2周；
4.如该标本需要运输，可以使用冷链物流进行标本运输。
二、仪器准备
1.设备：美国安捷伦公司(Agilent)生产的7900电感耦合等离子体质谱仪(ICP-MS)，未配置ISIS自动进样器；
2.设置参数：He模式；射频功率1550W，反射功率＜20W，采样深度：7.5mm，载气0.95L/min；蠕动泵0.2rps；雾化室温度2℃；补偿气0.15L/min；氦气流量4.0mL/min；定量方式：标准加入法。
3.仪器调谐：仪器正常开机后，引入调谐应用液，蠕动泵速0.1rps，积分时间0.1s，要求其参数要求如下：
3.1质量轴：Co59:59±0.05amu；Y89:89±0.05amu；Ti205:205±0.05amu
3.2分辨率：10％峰宽范围0.65-0.80
3.3灵敏度：Co59，Y89，Ti205信号值＞10000cps
3.4氧化物：CeO/Ce≤3.0％
3.5双电荷：Ce2+/Ce≤3.0％
3.6双氩78：信号值＜4.0cps
4.内标稳定性：引入内标应用液，检测内标元素cps信号值及相对标准偏差(RSD),要求RSD≤5.0％。
三、标本前处理
1.将待测样品使用振荡器混匀；
2.取硬质塑料试管，使用移液器加入1900μL尿液稀释应用液；
3.使用移液器取混匀尿液标本100μL，加入到1900μL尿液稀释应用液中，即20倍稀释；
4.用手持硬质塑料管，放置于振荡器进行振荡混匀；
5.混匀后待检测样本置于防尘罩中，以免标本污染；
6.前处理样本需在半小时内完成检测。如无法及时检测，可在室温中放置2小时，在检测前，需再次振荡混匀标本；
7.质控品处理方式与标本相同。
四、标本检测
1.将准备好的标准曲线应用液进行检测，制备标准曲线，要求曲线相关系数r≥0.995，r
值达标后方能继续实验，r值结果如表7；
2.将质控品进行检测，要求质控结果在厂家声称范围内，其结果如表8；
3.将样品进行检测，仪器软件自动计算结果。
4.选择一正常人尿液样本进行检测，其结果如表9：
表7 r值
元素 r值 元素 r值 元素 r值 元素 r值
Li7 0.9999 Cr52 1.0000 Zn66 0.9999 Sn118 1.0000
Mg24 0.9999 Mn55 0.9999 Ga71 0.9999 Sb121 1.0000
Al27 0.9996 Fe56 0.9983 As75 0.9999 Ba137 0.9999
Ca44 0.9983 Co59 0.9999 Se78 0.9999 Tl205 1.0000
Ti47 1.0000 Ni60 1.0000 Sr88 0.9999 Pb208 1.0000
V51 0.9999 Cu63 1.0000 Cd111 0.9999
表8质控检测结果
表9检测结果

Claims (10)

1.一种用于检测尿液23种元素的试剂盒，其特征在于：包括独立包装的以下成分：尿液保存液、尿液稀释液储备液、仪器调谐液储备液、内标储备液和标准曲线储备液；
所述尿液保存液的配制成分为：体积比例为1∶1的优级纯硝酸和生物防腐剂，所述生物防腐剂为ProClinTM 300；
所述尿液稀释液储备液的配制成分为：优级纯硝酸和曲拉通X-100，最终体积浓度分别为10％；
所述仪器调谐储备液为：使用购自于国家有色金属及电子材料分析测试中心或者具有资质的国家标准液体样品进行配制，将锂(Li7)、钴(Co59)、铱(Y89)、铊(Tl205)、铈(Ce140)标准液配制体积浓度为10％的调谐储备液，溶剂为去离子水；
所述内标储备液：使用购自于国家有色金属及电子材料分析测试中心或者具有资质的国家标准液体样品进行配制，将钪(Sc45)、锗(Ge72)、铱(Y89)、铑(Rh103)、铟(In115)、铽(Tb159)、铋(Bi209)标准液配制浓度为10％的内标储备液，溶剂为去离子水；
所述标准溶液储备液由中间储备液配制得到，中间储备液参数见表1，标准溶液储备液配制参数见表2。
表1标准溶液参数
表2标准溶液储备液配制参数
2.用于检测尿液23种元素的试剂盒的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：
a、尿液保存液的制备：准备优级纯硝酸、生物防腐剂ProClinTM 300按照1:1比例进行配制，使用超声水机进行超声混匀；
b、尿液稀释液的制备：采用去离子水将优级纯硝酸、曲拉通X-100配制成10％体积浓度的稀释储备液，超声均匀；将稀释储备液与去离子水按照1:99体积比例进行稀释，制成尿液稀释应用液；
c、仪器调谐储备液的制备：以去离子水为溶剂，使用购自于国家有色金属及电子材料分析测试中心或者具有资质的国家标准液体样品进行配制，将锂(Li7)，钴(Co59)，铱(Y89)，铊(Tl205)，铈(Ce140)标准液配制浓度为10％的调谐储备液；
d、内标储备液的制备：以去离子水为溶剂，使用购自于国家有色金属及电子材料分析测试中心或者具有资质的国家标准液体样品进行配制，将钪(Sc45)、锗(Ge72)、铱(Y89)、铑(Rh103)、铟(In115)、铽(Tb159)、铋(Bi209)标准液配制浓度为10％的内标储备液；
e、所述标准溶液储备液由中间储备液配制得到，中间储备液参数见表1，标准溶液储备液配制参数见表2；
表1标准溶液参数
表2标准溶液储备液配制参数
3.如权利要求2所述用于检测尿液23种元素的试剂盒的制备方法，其特征在于：所述的步骤b还包括尿液稀释应用液的制备：将尿液稀释液与去离子水按照1:99体积比例进行稀释所得。
4.如权利要求2所述用于检测尿液23种元素的试剂盒的制备方法，其特征在于：所述的步骤c还包括仪器调谐应用液的制备：将调谐储备液与去离子水按照1:99体积比例进行稀释。
5.如权利要求2或3所述用于检测尿液23种元素的试剂盒的制备方法，其特征在于：所述的步骤d还包括内标应用液的制备：将内标储备液与去离子水按照1:99体积比例进行稀释。
6.如权利要求2或3所述用于检测尿液23种元素的试剂盒的制备方法，其特征在于：所述的步骤e还包括标准曲线应用液配制：以正常人尿液为溶液，采用标准曲线储备液进行配制，配制参数见表3。
表3标准曲线应用液配制参数
7.如权利要求4所述用于检测尿液23种元素的试剂盒的制备方法，其特征在于：所述的步骤e还包括标准曲线应用液配制：以正常人尿液为溶液，采用标准曲线储备液进行配制，配制参数见表3。
表3标准曲线应用液配制参数
试剂名称 加入试剂/体积 尿液稀释液体积 尿液体积 STD0 储备液系列0/1000μL 900μL 100μL STD1 储备液系列1/1000μL 900μL 100μL STD2 储备液系列2/1000μL 900μL 100μL STD3 储备液系列3/1000μL 900μL 100μL STD4 储备液系列4/1000μL 900μL 100μL
8.如权利要求2或3所述用于检测尿液23种元素的试剂盒的制备方法，其特征在于：所述的试剂盒2-8℃避光保存，有效期1年；配制完成的仪器调谐应用液、内标应用液、标准曲线应用液有效期1个月，标准曲线应用液现配现用。
9.如权利要求5所述用于检测尿液23种元素的试剂盒的制备方法，其特征在于：所述的试剂盒2-8℃避光保存，有效期1年；配制完成的仪器调谐应用液、内标应用液、标准曲线应用液有效期1个月，标准曲线应用液现配现用。
10.如权利要求6所述用于检测尿液23种元素的试剂盒的制备方法，其特征在于：所述的试剂盒2-8℃避光保存，有效期1年；配制完成的仪器调谐应用液、内标应用液、标准曲线应用液有效期1个月，标准曲线应用液现配现用。
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