CN108375679A - 一种量子点荧光免疫印迹法及所用的过敏原检测试剂盒 - Google Patents

一种量子点荧光免疫印迹法及所用的过敏原检测试剂盒 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种量子点荧光免疫印迹法及所用的过敏原检测试剂盒，检测试剂盒包括温育槽1，膜条2，缓冲液和荧光结合物；量子点荧光免疫印迹法包括预处理：将膜条置于温育槽中加入缓冲液，室温温育5分钟吸去温育槽中的液体；血清温育：温育槽中加入未稀释样本，室温温育60分钟；清洗：吸去温育槽内液体，用缓冲液清洗膜条3次；二次孵育：温育槽中加入荧光结合物室温温育30分钟；二次清洗：吸去温育槽内液体，用缓冲液清洗膜条3次；结果判断：检测膜条放入检测仪器，结果判读。本发明量子点荧光免疫印迹法所用的试剂盒可同时快速自动化检测20类过敏原，灵敏度高并且量子点荧光免疫印迹法检测的特异性强、准确度高、反应时间短。

Description

一种量子点荧光免疫印迹法及所用的过敏原检测试剂盒
技术领域
本发明涉及免疫印迹法检测过敏原的技术领域，具体为一种量子点荧光免疫印迹法及所用的过敏原检测试剂盒。
背景技术
据统计全世界约有30％～40％的人患有或患过各种各样的过敏疾病，且发病率和死亡率呈逐年上升趋势，过敏疾病被世界卫生组织(World Health Organization)认定为当今世界性的重大卫生问题之一。随着我国工业化水平的不断提高和环境污染的加剧，过敏性疾病的发生率正处在不断上升的时期，对过敏性疾病的快速和准确诊断的需求也在不断上升。
过敏反应是一种人体对异物的超敏反应，过敏性疾病严重影响患者的生活质量。这些异物通常无害，但在过敏反应患者中，则产生强烈的反应。除了遗传易感性，其他非遗传因素，像过敏原接触，营养状况，慢性疾病或病毒急性感染也在过敏反应具有一定的作用。最常见的过敏反应为Ⅰ型过敏反应，其特征是形成特异性IgE抗体。一旦跟过敏原接触很快就会产生诸如发红，水肿以及瘙痒等症状，临床上常表现为支气管哮喘、过敏性鼻炎、过敏性胃肠炎和过敏性皮肤病等，严重时可引起威胁生命的过敏性休克。在工业化国家，超过15%的人患有立即过敏性反应。
目前，引起过敏反应的过敏原种类很多，主要包括吸入性过敏原和食物性过敏原两大类。吸入性过敏原主要有花粉颗粒、尘螨或其排泄物、真菌或其孢子、昆虫或其毒液、动物皮屑、羽毛等。食物性过敏原主要有牛奶、鸡蛋、黄豆、花生、坚果、小麦、鱼和有壳的海鲜类。此外，某些药物如青霉素等也可通过口服、注射或吸入等途径进入体内，引起局部或全身过敏反应。
过敏原的检测方法可分为激发试验，体内试验和体外试验。激发试验主要有支气管激发试验、食物激发试验，体内试验主要有皮肤敏感实验，体外试验主要是IgE的测定（特异性IgE）。
目前，市场上常规的体外实验主要采用的是酶联免疫印迹法，酶联免疫印迹法是在酶联免疫吸附技术（ELISA）方法基础上发展起来的，目前商业产品中过敏原蛋白的检测常采用ELISA试剂盒，酶联免疫印迹法需要将检测的抗原固定于膜上，再用抗体检测，酶联免疫印迹法可同时检测多种过敏原，即将多个过敏原以划线的方式固定于膜上，加入待检血清反应后，再与酶标抗体结合，最后通过底物液显色程度判断结果，但是酶联免疫印迹法的操作步骤复杂，反应时间长，检测时间长，结果精确度存在误差，而且采用大型的仪器设备进行检验，加剧患者的医疗负担。
随着贸易全球化的发展，不同地域间食物的相互流通以及深加工技术的广泛应用，使得吸入性及食物性过敏原的种类日益增多，因此开发一种灵敏度高，设备简单可快速自动化检测检测过敏原的试剂盒以及特异性强、准确度高、反应时间短的技术方法，成为我们当前要解决的问题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种量子点荧光免疫印迹法及所用的过敏原检测试剂盒，量子点荧光免疫印迹法所用的过敏原检测试剂盒可同时快速自动化检测20类过敏原，灵敏度高并且量子点荧光免疫印迹法检测的特异性强、准确度高、反应时间短；本发明研发的过敏原特异性IgE抗体检测试剂盒将会很大程度上取代进口产品，为患者解决病痛的同时，促进国内在过敏原检测水平的进一步提升，可以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种量子点荧光免疫印迹法所用的过敏原检测试剂盒，包括温育槽，膜条，装有荧光结合物的试剂瓶以及装有通用缓冲液的试剂瓶；所述的膜条上设有膜片，将经过纯化、生化性质明确的20类不同的吸入性和食物性过敏原包被在膜片上，所述的膜片上设有指示带，指示带的位置处包被抗鼠抗体，所述的膜片平行固定在膜条上。
一种量子点荧光免疫印迹法包括如下检测步骤：
1）预处理：将检测所需的膜条朝上放置于温育槽中；分别加入1.0ml通用缓冲液，于室温温育5分钟后吸去温育槽中的液体；
2）血清温育：在温育槽中分别加入1.0ml未稀释的患者样本，在摇摆摇床上室温温育60分钟；
3）清洗：吸去每个温育槽内液体，在摇摆摇床上用1.0ml通用缓冲液清洗膜条3次，每次5分钟；
4）二次孵育：在每个温育槽中加入1.0ml荧光结合物，于摇摆摇床上室温温育30分钟；
5）二次清洗：吸去每个温育槽内液体，在摇摆摇床上用1.0ml通用缓冲液清洗膜条3次，每次5分钟；
6）结果判断：将检测膜条放入检测仪器，结果判读。
优选的，根据上述技术方案，所述20类不同的吸入性和食物性过敏原包括树组合（柳树/杨树/榆树）、普通豚草、艾蒿、尘螨组合（屋尘螨/粉尘螨）、屋尘、猫毛、狗上皮、蟑螂、霉菌组合（点青霉/分枝孢霉/烟曲霉/交链孢霉）、葎草、鸡蛋白、牛奶、花生、黄豆、牛肉、羊肉、海鱼组合（鳕鱼/龙虾/扇贝）、虾、蟹和杏仁。
优选的，所述温育槽的规格为8个槽。
优选的，所述荧光结合物为量子点标记的抗人IgE。
优选的，所述通用缓冲液为10倍浓缩的通用缓冲液。
本发明量子点荧光免疫印迹法所用的过敏原检测试剂盒可同时快速自动化检测20类过敏原，可以同时检测8个人的样本；灵敏度高并且量子点荧光免疫印迹法检测的特异性强、准确度高、反应时间短，促进国内在过敏原检测水平的进一步提升；本发明中试剂盒将会很大程度上取代进口试剂盒，为患者解决病痛的同时节省成本。
附图说明
图1是本发明中量子点荧光免疫印迹法的操作流程图；
图2是本发明中一种量子点荧光免疫印迹法所用的过敏原检测试剂盒主视示意图；
图3是本发明中膜条的主视示意图。
图4是本发明中膜条的过敏原显示示意图。
其中：1-温育槽，2-膜条，3-膜片。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例
一种量子点荧光免疫印迹法所用的过敏原检测试剂盒，包括温育槽1，膜条2，装有荧光结合物的试剂瓶以及装有通用缓冲液的试剂瓶；所述的膜条2上设有膜片3，将经过纯化、生化性质明确所的20类不同的吸入性和食物性过敏原包被在膜片3上，所述的膜片3上有指示带，指示带的位置处包被抗鼠抗体，所述的膜片3平行固定在膜条2上。
一种量子点荧光免疫印迹法包括如下检测步骤：
1）预处理：将检测所需的膜条2朝上放置于温育槽1中；所述温育槽1的规格为8个槽，在分别加入1.0ml通用缓冲液，于室温温育5分钟后吸去温育槽1中的液体；
2）血清温育：在温育槽1中分别加入1.0ml未稀释的患者样本，在摇摆摇床上室温温育60分钟；
3）清洗：吸去每个温育槽1内液体，摇摆摇床上用1.0ml通用缓冲液清洗膜条3次，每次5分钟，所述通用缓冲液为10倍浓缩的通用缓冲液；
1）二次孵育：在每个温育槽1中加入1.0ml荧光结合物，于摇摆摇床上室温温育30分钟，所述荧光结合物为量子点标记的抗人IgE；
5）二次清洗：吸去每个温育槽1内液体，在摇摆摇床上用1.0ml通用缓冲液清洗膜条3次，每次5分钟；
6）结果判断：将检测膜条2放入检测仪器，结果判读。
根据上述技术方案，所述20类不同的吸入性和食物性过敏原包括树组合（柳树/杨树/榆树）、普通豚草、艾蒿、尘螨组合（屋尘螨/粉尘螨）、屋尘、猫毛、狗上皮、蟑螂、霉菌组合（点青霉/分枝孢霉/烟曲霉/交链孢霉）、葎草、鸡蛋白、牛奶、花生、黄豆、牛肉、羊肉、海鱼组合（鳕鱼/龙虾/扇贝）、虾、蟹和杏仁。
工作原理：在检测膜条的下端有一条指示带，指示带上包被的是抗鼠抗体，与量子点标记的抗人IgE发生反应，紫外下显色，如果这条指示带出现清晰可见的颜色反应，表明实验各步操作正确；如果指示带没有出现颜色反应，则表明实验操作不当，应重新检测。
若样本阳性，已稀释血清中的特异性抗体将与膜片上的抗原结合；结合的抗体与量子点标记的抗人抗体反应后，直接紫外灯下观察结果；如果血清标本中存在特异性抗体，紫外光下，相应抗原线将呈现一条深色的阳性带。
本发明量子点荧光免疫印迹法所用的过敏原检测试剂盒可同时快速自动化检测20类过敏原，可以同时检测8个人的样本；灵敏度高并且量子点荧光免疫印迹法检测的特异性强、准确度高、反应时间短，促进国内在过敏原检测水平的进一步提升；本发明中试剂盒将会很大程度上取代进口试剂盒，为患者解决病痛的同时节省成本。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。

Claims (6)

1.一种量子点荧光免疫印迹法所用的过敏原检测试剂盒，包括温育槽（1），膜条（2），装有荧光结合物的试剂瓶以及装有通用缓冲液的试剂瓶；其特征在于，所述的膜条上设有膜片（3），将经过纯化、生化性质明确的20类不同的吸入性和食物性过敏原包被在膜片（3）上，所述的膜片（3）上设有指示带，指示带的位置处包被抗鼠抗体，所述的膜片（3）平行固定在膜条（2）上。
2.一种量子点荧光免疫印迹法，其特征在于，包括如下检测步骤：
1）预处理：将检测所需的膜条（2）朝上放置于温育槽（1）中；分别加入1.0ml通用缓冲液，于室温温育5分钟后吸去温育槽（1）中的液体；
2）血清温育：在温育槽（1）中分别加入1.0ml未稀释的患者样本，在摇摆摇床上室温温育60分钟；
3）清洗：吸去每个温育槽（1）内液体，在摇摆摇床上用1.0ml通用缓冲液清洗膜条（2）3次，每次5分钟；
4）二次孵育：在每个温育槽（1）中加入1.0ml荧光结合物，于摇摆摇床上室温温育30分钟；
5）二次清洗：吸去每个温育槽（1）内液体，在摇摆摇床上用1.0ml通用缓冲液清洗膜条（2）3次，每次5分钟；
6）结果判断：将检测膜条（2）放入检测仪器，结果判读。
3.根据权利要求1所述的一种量子点荧光免疫印迹法所用的过敏原检测试剂盒，其特征在于，所述20类不同的吸入性和食物性过敏原包括树组合（柳树/杨树/榆树）、普通豚草、艾蒿、尘螨组合（屋尘螨/粉尘螨）、屋尘、猫毛、狗上皮、蟑螂、霉菌组合（点青霉/分枝孢霉/烟曲霉/交链孢霉）、葎草、鸡蛋白、牛奶、花生、黄豆、牛肉、羊肉、海鱼组合（鳕鱼/龙虾/扇贝）、虾、蟹和杏仁。
4.根据权利要求1中所述的一种量子点荧光免疫印迹法所用的过敏原检测试剂盒，其特征在于，所述温育槽（1）的规格为8个槽。
5.根据权利要求1所述的一种量子点荧光免疫印迹法所用的过敏原检测试剂盒，其特征在于，所述荧光结合物为量子点标记的抗人IgE。
6.根据权利要求1所述的一种量子点荧光免疫印迹法，其特征在于，所述通用缓冲液为10倍浓缩的通用缓冲液。
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