CN108367036B - 制备具有提高的脂溶性多酚含量的草本组合物的方法、由此制备的草本组合物及其用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及制备具有提高的脂溶性多酚的草本组合物的方法，由所述方法制备的草本组合物，以及所述组合物的用途。与比较例的草本组合物相比，本发明的具有提高的脂溶性多酚的草本组合物具有显著提高的包含紫花前胡素的脂溶性多酚含量，还展现了显著的抗氧化活性、免疫细胞活化效果和癌细胞生长抑制效果。此外，该草本组合物显著降低由抗癌试剂顺铂诱导的肾脏毒性和肝脏毒性回到几乎正常状态，以及具有与比较例的草本组合物相比的对由照射引起的肠隐窝损失的显著更高的抑制效果。因而，本发明的具有提高的脂溶性多酚的草本组合物可以有效地用作癌症治疗组合物、抗癌佐剂、免疫增强组合物、用于保护活体的组合物、以及用于预防抗癌治疗的副作用的组合物。

Description

制备具有提高的脂溶性多酚含量的草本组合物的方法、由此 制备的草本组合物及其用途
技术领域
本发明涉及制备具有提高的脂溶性多酚的草本组合物的方法，由所述方法制备的草本组合物，以及所述组合物的用途。
背景技术
治疗癌症的方法可以分为直接杀死癌细胞的方法，例如手术、施用抗癌试剂和放射；以及活化体内的免疫功能来除去癌细胞的方法，例如免疫治疗。通常，直接杀死的方法是主要使用的，但是近年来在治疗癌症方面它已经与免疫治疗组合使用。
由于近来公开的免疫应答机制，已经进行了许多尝试通过使用免疫调节物来治疗癌症。免疫调节物非特异性地刺激体内的免疫细胞来增强免疫功能，从而提高身体针对疾病因子的防御。这样的非特异性免疫调节物例如灭活的细菌体、化学合成的物质(合成的核酸衍生物或糖苷)以及生物试剂(细胞因子或激素)，等。正在进行研究通过施用上述材料提高体内免疫功能来获得抗癌效果。然而，这些非特异性免疫调节物的大部分由于毒性或副作用在临床使用中是受限的。特别是，由于鉴定了免疫应答中涉及的各种细胞因子，因此通过遗传工程方法大量生产这些细胞因子并将它们应用于癌症治疗的研究正在积极进行。然而，由于由此导致的严重毒性，研究是受限的。
在使用抗癌症试剂或放射治疗的癌症治疗过程中，可能伴随着严重的副作用，例如造血功能障碍和自我更新组织损伤。这些副作用的原因是抗癌试剂或辐射引起的氧化性组织损伤。
根据对可以保护活体免受辐射的物质的研究，1949年作出的报告称含有硫醇基团的半胱氨酸展现了辐射保护作用。从那时起，已经密集地研究了氨基巯基衍生物(特别是WR系列)。然而，由于氨基巯基衍生物的毒性，实际应用是受限的。此后，研究了化学合成物例如双嘧达莫、单磷酸腺苷和脱氧精胍菌素的保护作用，但是由于毒性它们还是在实际应用中受到限制。已经进行了其他尝试，通过使用多糖例如葡聚糖和脱毒的细菌体例如OK-432来刺激造血和免疫系统获得保护作用，这些已经作为抗癌免疫调节物进行了研究。然而，由于副作用它们还是在实际使用中受限。近来尝试通过使用涉及免疫应答和造血功能的细胞因子来获得辐射保护效果，包括白细胞介素-1、肿瘤坏死因子(TNF)、粒细胞集落刺激因子(GM-CSF)、激素。然而，这些试剂也由于毒性而应用有限。
因而，迫切需要开发安全的材料，其可以提高抗癌效果、免疫功能和造血功能，同时可以保护活体免于放射引起的副作用。近期的研究集中于没有副作用的天然生物活性物质。特别是，由于由有害的反应性氧种类或自由基、以及辐射或化学物质引起的氧化损伤已经被揭示是各种疾病如衰老相关疾病和癌症的原因，使用抗氧化剂来预防和治疗这些疾病的研究正在进行。已经从天然物质中主动筛选了在身体调节和保护方面有效的生物活性物质，它们中的一些现在作为保健食品或治疗试剂被商品化。
韩国专利No.10-0506384描述了用于癌症抑制、免疫系统恢复和保护身体免于氧化损伤的草本植物混合物的草本组合物以及其制备方法，其中由包含当归(AngelicaRadix)、川芎(Cnidium Rhizoma)和芍药(Paeonia Radix)的草本植物混合物制备的草本组合物被确认展现了抗癌效果、免疫功能改善效果、造血功能改善效果和辐射保护效果。然而，仅通过热水提取方法制备了该草本组合物。因而，该组合物中脂溶性多酚的含量是低的，表明该组合物对于抑制癌细胞生长和防止由抗癌试剂和辐射引起的副作用没有足够高的医药效果。
本发明人尝试通过提高脂溶性多酚的含量开发一种具有比比较例(韩国专利No.10-0506384)的草本组合物更显著的医药效果的草本组合物。在我们的研究过程中，与基于热水提取开发的比较例的草本组合物不同的是，发明人相信，基于通过适当的乙醇浓度制备的水性乙醇提取物的组合物，将具有显著提高的脂溶性多酚，同时维持相似水平的水溶性多酚含量。根据该思想，本发明人制备了能够同时展现各种活性的草本组合物并证明了它们的极好的活性，完成了本发明。简而言之，发明人混合当归、川芎和芍药，得到了草本植物混合物的制品。提取并保存了草本植物混合物水性乙醇提取物的一部分。将草本植物混合物水性乙醇提取物的其余部分与热水提取物混合，随后进行乙醇沉淀。沉淀的多糖与水性乙醇提取物的保存的部分混合，制备草本组合物。(这将在实施例中详细描述)。包含上述多糖和水性乙醇提取物的所述草本组合物含有显著更高含量的脂溶性多酚(包括紫花前胡素(decursin))，显示了更显著的抗氧化活性和免疫细胞活化效果，抑制癌细胞生长，将抗癌试剂顺铂引起的肾脏毒性和肝脏毒性显著降低至几乎回到正常水平，对放射引起的肠隐窝损失具有显著的抑制效果，通过确认这些，本发明人完成了本发明。
发明内容
技术问题
本发明的目标是提供一种制备具有提高的脂溶性多酚的草本组合物的方法，通过所述方法制备的草本组合物，以及其用途。
技术方案
为了实现上述目标，本发明提供了一种制备具有提高的脂溶性多酚的草本组合物(herbal composition)的方法，其包括以下步骤：
1)从由当归、川芎(Cnidium Rhizoma)和芍药(Paeonia Radix)组成的草本植物混合物(herb mixture)制备水性乙醇提取物；
2)从上述步骤1)的由当归、川芎和芍药组成的草本植物混合物制备热水提取物；
3)获取步骤1)的所述水性乙醇提取物的一部分用于之后步骤4)的混合物的制备，并将上述水性乙醇提取物的其余部分与步骤2)的所述热水提取物混合，随后进行乙醇沉淀获得多糖；和
4)将取出的步骤1)的水性乙醇提取物的所述部分与步骤3)的多糖混合。
本发明还提供了通过本发明的方法制备的具有提高的脂溶性多酚的草本组合物。
本发明还提供了用于预防和治疗癌症的药物组合物，其包含本发明的草本组合物作为活性成分(active ingredient)。
本发明还提供了用于预防癌症和改善身体防御的保健功能食品，其包含本发明的草本组合物作为活性成分。
本发明还提供了包含本发明的草本组合物作为活性成分的抗癌佐剂。
本发明还提供了用于预防抗癌治疗的副作用的药物组合物，其包含本发明的草本组合物作为活性成分。
本发明还提供了用于预防抗癌治疗的副作用的保健功能食品，其包含本发明的草本组合物作为活性成分。
本发明还提供了用于增强免疫功能的药物组合物，其包含本发明的草本组合物作为活性成分。
本发明还提供了用于增强免疫功能的保健功能食品，其包含本发明的草本组合物作为活性成分。
本发明还提供了用于保护活体免于氧化损伤的药物组合物，其包含本发明的草本组合物作为活性成分。
本发明还提供了用于保护活体免于氧化损伤的保健功能食品，其包含本发明的草本组合物作为活性成分。
本发明还提供了预防或治疗癌症的方法，其包括向受试者施用上文所述草本组合物的步骤。
本发明还提供了抑制抗癌治疗伴随的副作用的方法，其包括向受试者施用上文所述草本组合物的步骤。
本发明还提供了提高癌症治疗的效果的方法，其包括向受试者施用本发明的草本组合物的步骤。
本发明还提供了本发明的草本组合物作为用于预防或治疗癌症的组合物的用途。
本发明还提供了本发明的草本组合物作为用于预防癌症和改善身体防御的保健功能食品的用途。
本发明还提供了本发明的草本组合物作为抗癌佐剂的用途。
本发明还提供了本发明的草本组合物作为用于预防抗癌治疗伴随的副作用的药物组合物的用途。
另外，本发明还提供了本发明的草本组合物作为用于预防抗癌治疗伴随的副作用的保健功能食品的用途。
有益效果
本发明的具有提高的脂溶性多酚的草本组合物的特征在于与比较例的草本组合物相比显著提高的包括紫花前胡素的脂溶性多酚含量；展现了更显著的抗氧化活性、免疫细胞活化效果和癌细胞生长抑制效果；显著降低由抗癌试剂顺铂引起的肾脏毒性和肝脏毒性；并展现了对放射引起的肠隐窝损失的更显著的抑制效果。因而，本发明的具有提高的脂溶性多酚的草本组合物可以有效地用作用于治疗癌症的组合物、抗癌佐剂、用于预防抗癌治疗伴随的副作用的组合物、用于增强免疫功能的组合物、以及用于保护活体的组合物。
附图说明
参考附图更好地理解本发明的优选实施方式的应用，其中：
图1是说明根据实施例的具有提高的脂溶性多酚的草本组合物的制备过程的图。
图2是说明比较例的草本组合物的制备过程的图。
图3是说明具有提高的脂溶性多酚的草本组合物与比较例的草本组合物之间的组分(components)差异的一组图：
比较例1：比较例的草本组合物；和
实施例1：具有提高的脂溶性多酚的草本组合物。
图4是说明具有提高的脂溶性多酚的草本组合物、比较例的草本组合物以及每种组合物的多酚部分的抗氧化活性的一组图：
比较例1：比较例的草本组合物；和
实施例1：具有提高的脂溶性多酚的草本组合物。
图5是说明具有提高的脂溶性多酚的草本组合物和比较例的草本组合物的免疫细胞活化效果的图：
比较例1：比较例的草本组合物；和
实施例1：具有提高的脂溶性多酚的草本组合物。
图6是说明具有提高的脂溶性多酚的草本组合物和比较例的草本组合物的小鼠癌细胞生长抑制效果的体外研究结果的一组图：
比较例1：比较例的草本组合物；和
实施例1：具有提高的脂溶性多酚的草本组合物。
图7是说明具有提高的脂溶性多酚的草本组合物、比较例的草本组合物以及每种组合物的多酚部分的人类癌细胞生长抑制效果的体外研究结果的图：
比较例1：用比较例的草本组合物以及其多酚部分处理的组；和
实施例1：用具有提高的脂溶性多酚的草本组合物以及其多酚部分处理的组。
图8是说明具有提高的脂溶性多酚的草本组合物、比较例的草本组合物以及每种组合物的多酚部分对人类正常细胞生长的作用的体外研究结果的一组图：
比较例1：用比较例的草本组合物以及其多酚部分处理的组；和
实施例1：用具有提高的脂溶性多酚的草本组合物以及其多酚部分处理的组。
图9是说明具有提高的脂溶性多酚的草本组合物和比较例的草本组合物对小鼠模型中确定的癌细胞生长的抑制效果的一组图：
对照组：未治疗的组；
水：水治疗的组；
比较例1：比较例的草本组合物治疗的组；和
实施例1：具有提高的脂溶性多酚的草本组合物治疗的组。
图10是说明具有提高的脂溶性多酚的草本组合物的肾脏毒性降低效果的一组照片和图：
对照组：水治疗的组；
实施例1：具有提高的脂溶性多酚的草本组合物治疗的组；
BUN：血脲氮；和
CRE：肌酸酐。
图11是说明具有提高的脂溶性多酚的草本组合物的肝脏毒性降低效果的一组照片和图：
对照组：水治疗的组；
实施例1：具有提高的脂溶性多酚的草本组合物治疗的组；
AST：天冬氨酸转氨酶；和
ALT：丙氨酸转氨酶。
图12是说明具有提高的脂溶性多酚的草本组合物和比较例的草本组合物在小鼠模型中对抗辐射的自我更新组织(肠隐窝)保护效果的一组照片和图：
对照组：未治疗的组；
辐射+水：用与放射组合的水治疗的组；
辐射+比较例1：用与放射组合的比较例的草本组合物治疗的组；
辐射+实施例1：用与放射组合的具有提高的脂溶性多酚的草本组合物治疗的组；
水：水治疗的组；
比较例1：比较例的草本组合物治疗的组；和
实施例1：具有提高的脂溶性多酚的草本组合物治疗的组。
具体实施方式
以下详细描述本发明。
本发明提供了制备具有提高的脂溶性多酚的草本组合物的方法，其包括以下步骤：
1)从由当归、川芎和芍药组成的草本植物混合物制备水性乙醇提取物(aqueousethanol extract)；
2)从上述步骤1)的由当归、川芎和芍药组成的草本植物混合物制备热水提取物；
3)获取步骤1)的所述水性乙醇提取物的一部分(certain portion)用于之后步骤4)的混合物的制备，并将上述水性乙醇提取物的其余部分与步骤2)的所述热水提取物混合，随后进行乙醇沉淀获得多糖；和
4)将取出的步骤1)的水性乙醇提取物的所述部分与步骤3)的多糖混合。
本发明还提供了通过本发明的方法制备的具有提高的脂溶性多酚的草本组合物。
在步骤1)和步骤2)中，当归、川芎和芍药可以是购买的或栽培的，更优选的是朝鲜当归(Angelica gigas Radix)、日本川芎(Cnidium officinale Rhizoma)和白芍(Paeonialactiflora Radix)，但并不总限于此。可以使用当归、川芎和芍药的任何部分，例如，叶、茎、根和花。
步骤1)和步骤2)的草本混合物的特征在于通过混合当归、川芎和芍药来制备。此时，混合比例是1：0.5～1.5：0.5～1.5，优选的1：0.8～1.2：0.8～1.2，更优选的1：1：1。
步骤1的水性乙醇提取物优选地用10～50％乙醇，更优选地用20～35％乙醇制备。添加到由当归、川芎和芍药组成的草本植物混合物的乙醇的量是所述混合物重量的5～20倍，优选的10～15倍，更优选的所述混合物重量的10倍。通过加热所述混合物进行乙醇提取。此时，提取时间优选地是1～5小时，更优选的1～3小时，最优选的2小时。如果所述提取时间小于1小时，预计不会完全提取。如果所述提取时间超过5小时，尽管可以完全进行提取，由于持续的加热，提取物可能变性。通过用20～35％的水性乙醇溶液(aqueous ethanolsolution)作为溶剂进行提取，提取物不仅包括水溶性的多酚，还包括更高含量的脂溶性多酚，以及某些多糖。
为了制备步骤2的热水提取物，以2～20倍所述混合物重量，优选的5～15倍，更优选的5～10倍所述混合物重量的量向由当归、川芎和芍药组成的草本植物混合物添加水。通过煮沸所述混合物进行提取。此时，提取时间优选地是1～7小时，更优选的1～5小时，最优选的2～4小时。如果所述提取时间小于1小时，预计不会完全提取。如果所述提取时间长于7小时，尽管可以完全进行提取，由于持续的加热，提取物可能变性。上述热水提取物特征性地不仅包括水溶性的多酚，还包括大量多糖。
步骤3)的多糖可以通过以下过程获得：将所述水性乙醇提取物的其余部分与所述热水提取物混合，然后向其添加100％乙醇来得到80％的水性乙醇溶液，最后所述混合物静置一段时间来沉淀多糖。对于沉淀，根据本发明的优选的实施方式，优选地以包含所述水性乙醇提取物和所述热水提取物的混合物体积的1～7倍的体积添加乙醇，更优选的2-5倍，最优选的所述混合物体积的4倍。如果乙醇的体积小于所述混合物体积的1倍，该数量不足以沉淀多糖。如果乙醇的体积超过所述混合物体积的7倍，由于该数量超出了足够的，这将是一种浪费。沉淀优选地在室温下进行18～48小时，更优选的24～36小时，最优选的24小时。
根据本发明的优选的实施方式，在步骤4的混合过程中，所述多糖被包括以达到所产生的混合物中10～50重量％的比例，更优选的20～40重量％的比例，最优选的30～35重量％的比例。如果本发明的最终的具有提高的脂溶性多酚的草本组合物中所述多糖的含量低于10重量％，所述多糖诱导的活性将不会被完全诱导。另一方面，如果所述含量高于50重量％，可使所述草本组合物具有各种活性的脂溶性或水溶性多酚的重量％将被降低，表明所述组合物诱导的活性将不会被完全诱导。因此，优选的是所述具有提高的脂溶性多酚的草本组合物含有30～35重量％的比例的所述多糖，则不仅通过所述多糖、还通过所述脂溶性多酚和水溶性多酚诱导的活性将是显著的。
所述脂溶性多酚优选地选自由紫花前胡苷(nodakenin)和紫花前胡素构成的组，但不总是限于此。
在本发明的优选的实施方式中，本发明人以1：1：1的比例混合当归、川芎和芍药来制得草本植物混合物。所述混合物中添加30％水性乙醇溶液，然后加热来制备水性乙醇提取物。回收提取物，向残余物添加水并煮沸来制备热水提取物。所述水性乙醇提取物的一部分进行分量(aliquoted)，保存用于之后最终混合物的制备。将水性乙醇提取物的其余部分与所述热水提取物混合在一起，随后浓缩。将100％乙醇添加到所述混合的提取物中来获得80％水性乙醇溶液，将其在室温静置。结果，获得沉淀的多糖。然后，上述保存的水性乙醇提取物的部分与所述多糖混合，结果制成所述具有提高的脂溶性多酚的草本组合物。分析所述组合物的成分。结果，与比较例的其他组合物相比，脂溶性多酚如紫花前胡苷和紫花前胡素在所述组合物中显著增加(参见图3和表1)。
本发明还提供了用于预防和治疗癌症的药物组合物，其包含本发明的草本组合物作为活性成分。
本发明还提供了预防或治疗癌症的方法，其包括向受试者施用上文所述草本组合物的步骤。
本发明还提供了本发明的草本组合物作为用于预防或治疗癌症的组合物的用途。
上文所述草本组合物优选地提取自由1：1：1比例的当归、川芎和芍药组成的草本植物混合物，特征在于含有提高的脂溶性多酚。为了提高所述草本组合物中脂溶性多酚的比例，30％水性乙醇提取物的一部分与通过乙醇沉淀从30％水性乙醇提取物的其余部分与所述热水提取物的混合物获得的多糖混合。此时，最终的草本组合物中多糖的优选的比例是30～35重量％。
结果，通过将大量含有水溶性多酚和脂溶性多酚的水性乙醇提取物与多糖混合制备了本发明的草本组合物，从而所述组合物含有所有的水溶性多酚、脂溶性多酚以及适当比例的多糖。因此，所述组合物以显著水平展现了由上述组分诱导的各种活性。与此同时，基于热水提取物制备了比较例的组合物，从而它主要含有水溶性多酚和多糖，其不同于本发明的组合物。
本文的癌症优选地选自由结肠直肠癌、胃癌、前列腺癌、乳腺癌、黑素瘤、肾癌、肝癌、脑肿瘤、肺癌、子宫癌、结肠癌、膀胱癌和胰腺癌构成的组，但不总是限于此。
在本发明的优选的实施方式中，本发明人用本发明的方法制备的具有提高的脂溶性多酚的草本组合物处理B16小鼠黑素瘤细胞、A54人类肺癌细胞和CMD-MB-231人类乳腺癌细胞，然后研究其效果。结果，与比较例的草本组合物相比，本发明的具有提高的脂溶性多酚的组合物展现了更显著的癌细胞生长抑制效果(参见图6和7)。因此，确认的是本发明的具有提高的脂溶性多酚的草本组合物可以有效地用作用于治疗癌症的组合物。
除了上述的组分之外，本发明的具有提高的脂溶性多酚的草本组合物可以包括具有与所述组分相同或相似功能的一种或更多种有效成分。
本发明的组合物可以另外包括药学上可接受的添加物，例如淀粉、糊化淀粉、微晶纤维素、乳糖、聚维酮、胶体二氧化硅、磷酸氢钙、乳糖、甘露醇、乳脂糖(taffy)、阿拉伯胶、预胶化淀粉、玉米淀粉、纤维素粉、羟基丙基纤维素、欧巴代(Opadry)、羧基甲基淀粉钠、巴西棕榈蜡、合成硅酸铝、硬脂酸、硬脂酸镁、硬脂酸铝、硬脂酸钙、白糖、葡萄糖、山梨醇、滑石粉，等。本文的药学上可接受的添加物优选地以所述组合物的0.1～90重量份添加，但不总是限于此。
也就是说，通过与一般使用的稀释剂或赋形剂例如填料、扩张剂、结合剂、润湿剂、崩解剂和表面活性剂混合，本发明的组合物可以被制备用于口服或胃肠外施用。用于口服施用的固体制剂有片剂、丸剂、粉剂、颗粒剂和胶囊剂。通过将本发明的组合物与一种或更多种适合的赋形剂，例如淀粉、碳酸钙、蔗糖、乳糖和明胶等混合，制备这些固体制剂。除了简单的赋形剂之外，可以使用润滑剂，例如硬脂酸镁、滑石粉等。用于口服施用的液体制剂有混悬液、溶液、乳剂和糖浆，除了一般使用的简单稀释剂如水和液体石蜡之外，上述制剂可以含有各种赋形剂，例如润湿剂、甜味剂、芳香剂、和防腐剂。用于胃肠外施用的制剂是灭菌的水性溶液、水不溶性赋形剂、混悬液、乳剂、冻干的制品和栓剂。除了活性化合物或化合物之外，水不溶性赋形剂和混悬液可以含有丙烯甘醇、聚乙二醇、植物油如橄榄油、可注射的酯如乙醇酸酯，等。除了活性化合物或化合物之外，栓剂可以含有合成脂肪酸酯(witepsol)、聚乙二醇、吐温61、可可脂、月桂酸甘油酯、黄油和甘油明胶，等。
本发明的组合物可以按照期望的方法口服地或胃肠外地施用，胃肠外施用包括皮肤外应用、腹膜内注射、直肠内注射、皮下注射、静脉内注射、肌内注射和胸内注射。组合物的有效剂量可以根据体重、年龄、性别、健康状况、膳食、施用持续时间、施用方法、排出和疾病严重度来确定。
本发明的组合物以药学有效剂量施用。本文的术语“药学有效剂量”表示以可应用的、合理的或有风险的浓度足以治疗疾病的数量。所述剂量可以通过考虑许多因素来决定，例如，炎症性疾病的类型、疾病的严重度、药物的活性、对药物的敏感性、施用频率和途径、排出、治疗期、共治疗药物、以及在医学领域被认为相关的其他因素。本发明的组合物可以作为单独的治疗试剂施用，或与其他治疗试剂组合施用，与常规的治疗试剂连续地或同时地施用，并且可以单次地或多次地施用。重要的是考虑所有上述因素，并施用一定数量，其中可以以没有副作用的最小数量获得最大效果，这可以由本领域技术人员容易地确定。
特别地，本发明的组合物的有效剂量可以根据患者的年龄、性别和体重来确定。一般地，有效剂量优选地是1mg～200mg/kg，更优选的10mg～200mg/kg，其可以每天或每隔一天、或一天1～3次地施用。然而，所述有效剂量可以根据施用途径、疾病的严重度、患者的性别、体重和年龄等提高或降低，从而上述有效剂量不能在任何方面限制本发明。
本发明还提供了用于预防癌症和改善身体防御的保健功能食品，其包含本发明的草本组合物作为活性成分。
本发明还提供了本发明的草本组合物作为用于预防癌症和改善身体防御的保健功能食品的用途。
上文所述草本组合物优选地提取自由1：1：1比例的当归、川芎和芍药组成的草本植物混合物，特征在于含有提高的脂溶性多酚。为了提高所述草本组合物中脂溶性多酚的浓度，30％水性乙醇提取物的一部分与通过乙醇沉淀从30％水性乙醇提取物的其余部分与所述热水提取物的混合物获得的多糖混合。此时，最终的草本组合物中多糖的优选的比例是30～35重量％。
通过将大量含有水溶性多酚和脂溶性多酚的水性乙醇提取物与多糖混合制备了本发明的草本组合物，从而所述组合物含有所有的水溶性多酚、脂溶性多酚以及适当比例的多糖。因此，所述组合物以显著水平展现了由上述组分诱导的各种活性。
本文的癌症优选地选自由结肠直肠癌、胃癌、前列腺癌、乳腺癌、黑素瘤、肾癌、肝癌、脑肿瘤、肺癌、子宫癌、结肠癌、膀胱癌和胰腺癌构成的组，但不总是限于此。
在本发明的优选的实施方式中，本发明人用本发明的方法制备的具有提高的脂溶性多酚的草本组合物处理B16小鼠黑素瘤细胞、A54人类肺癌细胞和CMD-MB-231人类乳腺癌细胞，然后研究其效果。结果，与比较例的草本组合物相比，本发明的具有提高的脂溶性多酚的组合物展现了更显著的癌细胞生长抑制效果(参见图6和7)。因而，确认了本发明的具有提高的脂溶性多酚的草本组合物可以有效地用作保健功能食品用于预防癌症和改善身体防御。
本发明的具有提高的脂溶性多酚的草本组合物可以用作食品添加剂。在这种情况下，所述具有提高的脂溶性多酚的草本组合物可以按照原样添加，或根据常规方法与其他食品组分混合。
本文的食品没有限制。例如，本发明的具有提高的脂溶性多酚的草本组合物可以添加到肉、香肠、面包、巧克力、糖果、小吃、饼干、比萨饼、泡面(ramyuns)、面制品、口香糖(gums)、乳制品包括冰淇淋、汤、饮品、茶、饮料、酒精饮料和复合维生素等中，在广义上，可以包括保健食品生产中可应用的几乎每一种食品。
本发明的健康饮品的组合物可以另外包括各种调味剂或天然碳水化合物等，如其他饮品一样。上文的天然碳水化合物可以是单糖之一，例如葡萄糖和果糖，二糖，例如麦芽糖和蔗糖，多糖，例如糊精和环糊精，以及葡萄糖醇类，例如木糖醇、山梨醇和赤藓醇。此外，可以包括天然甜味剂如奇甜蛋白(thaumatin)和甜菊糖提取物，以及合成甜味剂如糖精和阿斯巴甜作为甜味剂。天然碳水化合物的含量优选地是100g所述组合物中0.01～0.04g，更优选的0.02～0.03g。
除了上述成分之外，本发明的健康食品可以包括各种营养物、维生素、矿物质、调味剂、着色剂、果胶酸及其盐、海藻酸及其盐、有机酸、保护性胶体增粘剂、pH值调节剂、稳定剂、防腐剂、甘油、醇类、用于添加到苏打的碳酸化剂，等。本发明的健康食品还可以包括可添加到天然果汁、水果饮品和蔬菜饮品的果肉。所有提及的成分可以单独添加或一起添加。这些成分的混合比例实际上无关紧要，但是一般地，可以按每100重量份的本发明的组合物0.01～0.1重量份添加每一种。
本发明还提供了包含本发明的草本组合物作为活性成分的抗癌佐剂。
本发明还提供了提高癌症治疗的效果的方法，其包括向受试者施用上文所述草本组合物的步骤。
本发明还提供了本发明的草本组合物作为抗癌佐剂的用途。
在本发明的优选的实施方式，本发明人确认了当通过本发明的方法制备的具有提高的脂溶性多酚的草本组合物与抗癌试剂顺铂一起治疗用黑素瘤细胞移植的小鼠模型时，与用比较例的组合物治疗时相比，癌症组织生长被更有效地抑制(参见图9)。本发明人还确认，当具有提高的脂溶性多酚的草本组合物治疗小鼠模型时，可以降低由抗癌试剂引起的肾脏毒性和肝脏毒性(参见图10和11)。因而，确认了具有提高的脂溶性多酚的草本组合物可以有效地用作抗癌佐剂。
本发明的草本组合物可以在施用抗癌试剂之前或之后独立地施用，或可以作为佐剂与抗癌试剂同时地共同治疗。当本发明的草本组合物作为抗癌佐剂与抗癌试剂共同治疗时，与所述抗癌试剂的比例可以根据患者状况、基于铂的抗癌试剂的剂量、以及抗癌试剂的施用期等来调整。例如，所述组合物可以以抗癌试剂的总重量的0.01～10倍的比例施用。
本发明还提供了用于预防抗癌治疗的副作用的药物组合物，其包含本发明的草本组合物作为活性成分。
本发明还提供了用于预防抗癌治疗的副作用的保健功能食品，其包含本发明的草本组合物作为活性成分。
本发明还提供了抑制抗癌治疗伴随的副作用的方法，其包括向受试者施用上文所述草本组合物的步骤。
本发明还提供了本发明的草本组合物作为用于预防抗癌治疗伴随的副作用的药物组合物的用途。
另外，本发明还提供了本发明的草本组合物作为用于预防抗癌治疗伴随的副作用的保健功能食品的用途。
抗癌治疗伴随的副作用可以包括抗癌试剂介导的副作用以及放疗介导的副作用。所述抗癌试剂介导的副作用是指抗癌试剂诱导的毒性，其中所述抗癌试剂包括已知引起肾脏毒性和肝脏毒性的所有抗癌试剂。本文中引起毒性的抗癌试剂优选地是基于铂的抗癌试剂。所述基于铂的抗癌试剂可以选自由顺铂、卡铂(carboplatin)、奥沙利铂(oxaliplatin)、奈达铂(nedaplatin)和其混合物构成的组。本文的副作用包括施用抗癌试剂诱导的细胞或组织中的毒性所引起的全部疾病。在本发明的优选的实施方式中，所述毒性优选地是肾脏毒性或肝脏毒性。放疗伴随的副作用可以包括细胞或组织损伤。在本发明的优选的实施方式中，所述副作用优选地是肠隐窝损失。
在本发明的优选的实施方式中，当本发明的方法制备的具有提高的脂溶性多酚的草本组合物被施用给小鼠模型时，由施用抗癌试剂引起的肾脏毒性和肝脏毒性被降低(参见图10和11)。因此，确认的是，本发明的具有提高的脂溶性多酚的草本组合物可以用作用于预防抗癌治疗伴随的副作用的组合物。
还确认的是，所述具有提高的脂溶性多酚的草本组合物可以比比较例的草本组合物更显著地抑制肠隐窝损失(参见图12和表2)。因此，确认的是，上文所述具有提高的脂溶性多酚的草本组合物可以用作用于预防放疗引起的副作用的组合物。
本发明还提供了用于增强免疫功能的药物组合物，其包含本发明的草本组合物作为活性成分。
本发明还提供了用于增强免疫功能的保健功能食品，其包含本发明的草本组合物作为活性成分。
在本发明的优选的实施方式中，本发明人确认，通过本发明的方法制备的具有提高的脂溶性多酚的草本组合物可以比比较例的草本组合物更显著地活化淋巴细胞、免疫细胞(参见图5)。因此，确认的是，上文所述具有提高的脂溶性多酚的草本组合物可以用作用于增强免疫功能的组合物。
本发明还提供了用于保护活体免于氧化损伤的药物组合物，其包含本发明的草本组合物作为活性成分。
本发明还提供了用于保护活体免于氧化损伤的保健功能食品，其包含本发明的草本组合物作为活性成分。
在本发明的优选的实施方式中，本发明人比较了通过本发明的方法制备的具有提高的脂溶性多酚的草本组合物和比较例的草本组合物。结果，确认的是，与比较例的组合物相比，本发明的具有提高的脂溶性多酚的草本组合物具有更显著的羟基自由基和过氧化物阴离子清除活性，羟基自由基和过氧化物阴离子可能直接导致氧化损伤，表明本发明的具有提高的脂溶性多酚的草本组合物可以用作用于保护活体免于氧化损伤的组合物。
发明的方式
本发明的实际的和当前优选的实施方式如以下实施例中显示的进行说明。
然而，本领域技术人员要理解的是，考虑这些公开内容，可以在本发明的精神和范围内进行修饰和改善。
实施例1：通过使用30％水性乙醇提取物制备的具有提高的脂溶性多酚的草本组合物的制备
韩国食品标准典中作为食物原料列出的三种草本植物，当归(朝鲜当归，Angelicagigas Nakai)、川芎(日本川芎，Cnidium officinale Makino)和芍药(白芍，Paeonialactiflora Pallas)进行阴干，切成碎片，以相同的重量比混合在一起。30％水性乙醇溶液以10倍所述草本植物混合物重量的量添加到所述草本植物混合物中，随后在70℃煮沸2小时来回收水性乙醇提取物。然后，添加蒸馏水来将剩余物质保持在草本植物混合物重量10倍的量，煮沸2-6小时，提取以回收热水提取物。将一部分水性乙醇提取物进行分量并保存，将其余水性乙醇提取物和热水提取物混合。浓缩混合物，以混合物体积的4倍体积添加100％乙醇。将混合物在室温静置24小时，回收沉淀物制备多糖部分。将30％水性乙醇提取物的保存的部分与多糖部分混合来制备草本组合物，其中脂溶性多酚组分提高，包括了30～35重量％的多糖(下文称为具有提高的脂溶性多酚的草本组合物)。在本发明的这种制备过程中，优选的是确定水性乙醇提取物部分的数量以使得最终混合物中多糖的比例是30～35重量％。
具有提高的脂溶性多酚的草本组合物的制备过程在图1中显示(图1)。
比较例1：通过热水提取制备草本组合物
韩国食品标准典中作为食物原料列出的三种草本植物，当归(朝鲜当归，Angelicagigas Nakai)、川芎(日本川芎，Cnidium officinale Makino)和芍药(白芍，Paeonialactiflora Pallas)进行阴干，切成碎片，然后以相同的重量比混合在一起。以所述草本植物混合物的重量的10倍的量向所述草本植物混合物添加蒸馏水，煮沸8-10小时，进行提取以制备热水提取物。保存1/4～2/3的热水提取物，向其余1/3～3/4的热水提取物添加乙醇，产生80％水性乙醇溶液。将混合物在室温(5～15℃)静置过夜，然后回收沉淀物制备多糖部分。将多糖部分添加到所述保存的热水提取物，其中多糖的比例优选地调整到30～40重量％。结果，通过热水提取制备草本组合物(下文称为比较例的草本组合物)。
比较例的草本组合物的制备过程在图2中显示(图2)。
实施例2：具有提高的脂溶性多酚的草本组合物与比较例的草本组合物之间的组分比较
为了比较根据提取和制备方法、实施例1的方法与比较例1的方法制备的每种草本组合物的组分，进行HPLC指纹分析。
具体地，将100％乙醇以样品重量4倍的量添加到每种样品中，每个混合物在4℃静置12小时。在4000×g进行离心10分钟，获得上清的多酚部分层。从每个样品获得的多酚部分在减压下浓缩，产生50mg/ml的每种样品。用这些样品进行HPLC指纹分析。首先，将浓缩的样品过滤(0.45μm，PTFE滤器)，以10μl的体积加载到HPLC上。LC-20A HPLC(Shimadzu,Japan)用于分析，成分的分离通过使用C18-PAQ(Cosmosil,Japan)的移动相梯度(0.1％甲酸水溶液和100％MeCN(乙腈；CH3CN))来进行。使用230nm检测器检测每种组分的峰。结果，获得了指纹图谱。为了定量每一种索引组分，将没食子酸、绿原酸、白花素(albiflorin)、芍药甙、苯甲酸、紫花前胡苷和紫花前胡素分别以4.5～900mg/mL的浓度溶于50％甲醇水溶液中，基于此制得标准曲线。计算指纹图谱上每种组分的峰面积来定量其含量。
结果，如图3和表1所示，与比较例的草本组合物相比，本发明的具有提高的脂溶性多酚的草本组合物中脂溶性多酚的含量显著提高。特别地，紫花前胡素的含量显著提高，表明依据提取溶剂和提取方法，从由当归、川芎和芍药组成的草本植物混合物制备的草本组合物中的组分含量存在差异。特别地，紫花前胡素的含量提高约9倍，紫花前胡苷的含量提高1.2倍。另外，图中箭头指明的至少七种或更多种组分显著提高(表1和图3)。
也就是说，当将水性乙醇提取物用于实施例1的草本组合物制备中时，与使用热水提取时相比，脂溶性多酚的含量显著提高。
表1
Figure GDA0001678901310000201
实验例1：具有提高的脂溶性多酚的草本组合物的抗氧化剂活性
为了对比实施例1的方法制备的具有提高的脂溶性多酚的草本组合物与比较例1的草本组合物之间的抗氧化剂活性，首先通过以下试验研究了针对羟基自由基和过氧化物阴离子(它们是引起生物大分子如DNA、蛋白质和脂质的直接损伤的反应性分子)的清除活性。
具体地，为了测量羟基自由基清除活性，0.1ml的0.2mM FeCl3、0.1ml的0.1mMEDTA、0.1ml的10mM 2-脱氧核糖，和0.1ml的0.1mM抗坏血酸在试管中混合。0.05ml的具有提高的脂溶性多酚的草本组合物、比较例的草本组合物、或每种草本组合物的多酚部分与0.45ml的0.1M磷酸盐缓冲液(pH7.4)和0.2ml的10mM H2O2混合，随后在37℃水浴中反应1小时。添加0.5ml的5％TCA(三氯乙酸)溶液以终止反应，然后添加0.5ml的1％TBA(2-硫代巴比妥酸)溶液。反应混合物在100℃的水浴中沸腾10分钟，然后冷却。然后通过使用UV-分光光度计(Shimadzu UV-1201,Japan)测量OD532。根据以下的数学公式1，使用样品组和对照组之间吸光度的差计算羟基自由基清除活性。结果表示为％。
[数学公式1]
羟基自由基清除活性(％)＝{1-(AS-AO)/(AC-AO)×100
AO：没有用样品和H2O2处理的阴性对照组的吸光度；
AC：不用样品处理、但用H2O2处理的对照组的吸光度；和
AS：用样品和H2O2处理的实验组的吸光度。
结果，如图4A所示，与显示的比较例的草本组合物相比，具有提高的脂溶性多酚的草本组合物展现了更高的约1.4倍～1.9倍的羟基自由基清除活性(图4A)。同时，还研究了每种组合物的多酚部分的活性。结果，与比较例的草本组合物的多酚部分相比，从本发明的具有提高的脂溶性多酚的草本组合物获得的多酚部分展现了更高的至少2.5倍的羟基自由基清除活性。因此，证明了脂溶性多酚的提高是自由基清除活性提高的主要原因。当水分子被辐射裂解时，羟基自由基大规模产生。因此，通过显著地清除羟基自由基，本发明的具有提高的脂溶性多酚的草本组合物被确认具有辐射损伤保护活性。
为了测量过氧化物阴离子清除活性，5μl的具有提高的脂溶性多酚的草本组合物、比较例的草本组合物、或每种草本组合物的多酚部分作为样品添加到含有10mU/ml的黄嘌呤氧化酶和5μl CCK-8(Dojindo Molecular Technologies,Rockville,ML,USA)的50μl的100mM磷酸钠(pH 7.4)中，随后在室温下稳定1分钟。然后添加40μl的2.5mM黄嘌呤溶液，随后反应。在开始反应之后立即地，以及在开始反应后20分钟，测量OD450来计算吸光度改变。根据以下的数学公式2，使用样品组和对照组之间吸光度的差计算过氧化物阴离子清除活性。结果表示为％。
[数学公式2]
过氧化物阴离子清除活性(％)＝{1-(AS-AO)/(AC-AO)×100
AO：没有用样品和黄嘌呤处理的阴性对照组的吸光度；
AC：不用样品处理、但用黄嘌呤处理的对照组的吸光度；和
AS：用样品和黄嘌呤处理的实验组的吸光度。
结果，如图4B所示，与比较例的草本组合物相比，具有提高的脂溶性多酚的草本组合物展现了至少相似的或更高的过氧化物阴离子清除活性，表明具有提高的脂溶性多酚的草本组合物具有足够的抗氧化剂活性(图4B)。同时，还研究了每种组合物的多酚部分的活性。结果，与比较例的草本组合物相比，具有提高的脂溶性多酚的草本组合物展现了更高的约1.6倍的过氧化物阴离子清除活性，表明脂溶性多酚的提高是过氧化物阴离子清除活性提高的主要原因。
实验例2：具有提高的脂溶性多酚的草本组合物对免疫细胞活化的作用
为了研究实施例1的方法制备的具有提高的脂溶性多酚的草本组合物与比较例的草本组合物对免疫细胞活化的作用，每种样品处理分离自脾脏的免疫细胞(淋巴细胞)，然后观察免疫细胞活化。一旦免疫细胞被活化，细胞代谢提高并且细胞增殖。因而，通过使用CCK-8试剂(Dojindo Molecular Technologies,Rockville,ML,USA)研究吸光度来测量免疫细胞的增殖。
具体地，从小鼠无菌提取脾脏，分离脾细胞。在使用Tris-NH4Cl溶液除去红细胞之后，用HBSS洗涤细胞两次来制备脾脏淋巴细胞。脾脏淋巴细胞以2×105个细胞/0.2ml每反应孔的密度接种到96孔培养平板中。以不同的浓度添加具有提高的脂溶性多酚的草本组合物或比较例的草本组合物，随后培养3天。在完成培养时，CCK-8试剂处理每个反应孔(10μl/孔)，随后进一步培养4小时。然后测量OD450(ref.650nm)，随后评估每种样品诱导的脾脏淋巴细胞的增殖能力。
结果，如图5所示，与比较例的草本组合物相比，具有提高的脂溶性多酚的草本组合物展现了显著更高的免疫细胞活化效果。
实验例3：具有提高的脂溶性多酚的草本组合物对体外癌细胞生长的抑制效果
<3-1>确认具有提高的脂溶性多酚的草本组合物对细胞培养模型中癌细胞生长的抑制效果
为了研究实施例1的方法制备的具有提高的脂溶性多酚的草本组合物与比较例的草本组合物在各种癌症中的癌细胞生长抑制效果，如下在B16小鼠黑素瘤细胞、A549人类肺癌细胞和MDA-MB-231人类乳腺癌细胞中测量癌细胞生长抑制效果。
具体地，B16小鼠黑素瘤细胞以5×104个细胞/孔的密度接种在96孔平板中，其中在200μl的总培养体积中，以50、100、200和500μg/ml的不同浓度用具有提高的脂溶性多酚的草本组合物和比较例的草本组合物处理。细胞在细胞培养温育箱中培养。温育四十八小时后，向每个孔添加10μl的CCK-8溶液，随后进一步培养4小时。然后测量OD450来研究细胞生长。
A549人类肺癌细胞和MDA-MB-231人类乳腺癌细胞接种在96孔平板中，其中在200μl的总培养体积中，以125、250和500μg/ml的不同浓度用具有提高的脂溶性多酚的草本组合物和比较例的草本组合物处理，随后在细胞培养温育箱中培养。考虑到每种细胞系的不同增殖率，在样品处理后2个周期的细胞分裂之后测量细胞存活率。为此，将20μl的MTT(Sigma-Aldrich Co.,St.Louis,MO,USA)溶液(5mg/ml)在样品处理之后48小时添加到A549细胞，在样品处理后72小时添加到MDA-MB-231细胞，随后进一步培养2小时。在除去细胞培养基之后，向每个反应孔添加200μl的DMSO(二甲亚砜)，随后搅动。然后测量OD565来研究细胞生长。
结果，如图6所示，与比较例的草本组合物相比，具有提高的脂溶性多酚的草本组合物在B16小鼠黑素瘤细胞中展现了更高的癌细胞生长抑制效果。特别地，与比较例的草本组合物相比，具有提高的脂溶性多酚的草本组合物展现在200μg/ml的浓度下更高的1.5倍癌细胞生长抑制活性，在500μg/ml的浓度下更高的1.7倍的活性(图6)。
如图7所示，与比较例的草本组合物相比，在A549人类肺癌细胞和MDA-MB-231乳腺癌细胞中具有提高的脂溶性多酚的草本组合物显示了更高的癌细胞生长抑制活性。具体地，与比较例的草本组合物相比，具有提高的脂溶性多酚的草本组合物展现了在A549肺癌细胞中在125μg/ml浓度下更高的1.7倍癌细胞生长抑制活性、和在250μg/ml浓度下更高的1.5倍活性，同时，在MDA-MB-231乳腺癌细胞中在125μg/ml浓度下更高的3.0倍、以及250μg/ml浓度下更高的1.4倍活性(图7)。同时，测量了每种草本组合物的多酚部分的活性。结果，与比较例的草本组合物的多酚部分相比，具有提高的脂溶性多酚的草本组合物的多酚部分展现了在A549肺癌细胞中在250μg/ml浓度下更高的3.5倍癌细胞生长抑制活性，在MDA-MB-231乳腺癌细胞中在250μg/ml浓度下更高的1.7倍活性(图7)。因此，确认了脂溶性多酚的提高是所述具有提高的脂溶性多酚的草本组合物的癌细胞生长抑制活性提高的主要原因。
上述结果还确认了，与比较例的组合物相比，具有提高的脂溶性多酚的草本组合物在小鼠和人类癌细胞中具有更高的癌细胞生长抑制活性。
<3-2>确认具有提高的脂溶性多酚的草本组合物对细胞培养模型中正常细胞生长的作用
为了研究实施例1的方法制备的具有提高的脂溶性多酚的草本组合物和比较例的草本组合物对正常细胞生长的作用，随后测量了它们对IMR-90人类肺成纤维细胞生长的影响。
具体地，将IMR-90人类肺成纤维细胞接种在96孔平板中，其中在200μl的总培养体积下，以125、250和500μg/ml的不同浓度，用具有提高的脂溶性多酚的草本组合物、比较例的草本组合物以及每种组合物的多酚部分进行处理，随后在细胞培养温育箱中培养。在约两个周期的细胞分裂之后，测量细胞存活率。为此，在样品处理之后48小时，向每个孔添加20μl的MTT(Sigma-Aldrich Co.,St.Louis,MO,USA)溶液(5mg/ml)，随后进一步培养2小时。在除去细胞培养基之后，向每个孔添加200μl的DMSO(二甲亚砜)，随后搅动。然后测量OD565来研究细胞生长。
结果，如图8所示，具有提高的脂溶性多酚的草本组合物、比较例的草本组合物以及每种组合物的多酚部分对IMR-90人类肺成纤维细胞的生长没有大的影响，在组合物和部分之间也都没有显著差异。
如上所述，根据癌细胞生长抑制效果的研究结果(图6和7)以及上述的组合物对正常细胞生长的作用(图8)确认了，具有提高的脂溶性多酚的草本组合物显示了相对于正常细胞的更高的癌细胞特异性抑制效果。
实验例4：在动物模型中具有提高的脂溶性多酚的草本组合物对癌症组织生长的抑制效果
为了研究实施例1的方法制备的具有提高的脂溶性多酚的草本组合物与比较例的草本组合物在体内的癌细胞生长抑制效果，将B16F10黑素瘤细胞移植到小鼠中。然后，如下确认所述组合物对移植的癌症组织生长的抑制效果。
具体地，5×105个B16F10黑素瘤细胞皮下地移植到7周龄C57BL/6小鼠的左侧股骨处。从移植的下一天直到处死动物时，每天以100mg/kg的剂量口服施用具有提高的脂溶性多酚的草本组合物或比较例的草本组合物。从移植黑素瘤细胞的第3天、第10天和第17天，以4mg/kg的剂量腹膜内注射一种广泛使用的抗癌试剂顺铂，即小鼠用顺铂和草本组合物共同治疗。在移植黑素瘤细胞的第20天，处死小鼠，取出肿瘤并称重。
结果，如图9所示，与单独用顺铂治疗的组相比，当具有提高的脂溶性多酚的草本组合物与顺铂共同治疗时，肿瘤生长被抑制35.2％。当比较例的草本组合物与顺铂共同治疗时，肿瘤生长被抑制25.3％。这些结果表明，具有提高的脂溶性多酚的草本组合物具有对癌症组织生长的显著抑制效果，它是比比较例的草本组合物更高的约1.39倍(图9)。
实验例5：在施用抗癌试剂的小鼠模型中具有提高的脂溶性多酚的草本组合物的肾脏和肝脏毒性降低效果
为了研究施用抗癌试剂的小鼠模型中实施例1的方法制备的具有提高的脂溶性多酚的草本组合物的肾脏和肝脏毒性降低效果，如下进行组织学分析和血清生化分析。
具体地，7周龄ICR小鼠以100mg/kg的剂量口服施用具有提高的脂溶性多酚的草本组合物持续20天。顺铂，一种抗癌试剂，以3mg/kg的剂量在施用草本组合物的第3、4、9、10、15和16天进行腹膜内注射。最后一次施用草本组合物之后24小时，处死小鼠，随后进行组织学分析和血清生化分析。对于组织学分析，从小鼠取出肾脏和肝脏，随后在10％中性甲醛溶液中固定。固定的组织根据常规方法包埋在石蜡中。制备切片，用苏木色素和曙红染色用于显微镜检查。对于血清学评估，从小鼠的眼窝静脉采集血液。从采集的血液分离血清，保存在-70℃等待分析。然后，使用AU400自动分析仪(Olympus,Japan)进行血清生化分析。BUN(血脲氮)和CRE(肌酸酐)用作肾脏毒性指数，AST(天冬氨酸转氨酶)和ALT(丙氨酸转氨酶)用作肝脏毒性指数。
结果，如图10所示，确认了由施用顺铂引起的肾脏组织损伤(肾小球)以及肾脏毒性的血清生化指数BUN(血脲氮)和CRE(肌酸酐)的提高，通过施用具有提高的脂溶性多酚的草本组合物降低到正常水平(图10)。
如图11所示，确认了由施用顺铂引起的肝脏毒性的血清生化指数AST(天冬氨酸转氨酶)和ALT(丙氨酸转氨酶)的提高，通过施用具有提高的脂溶性多酚的草本组合物降低到正常水平(图11)。
根据上述结果，确认了具有提高的脂溶性多酚的草本组合物可以有效地用作用于预防抗癌治疗的副作用的组合物，因为所述组合物可以降低由顺铂引起的肾脏毒性和肝脏毒性。
实验例6：在小鼠动物模型中具有提高的脂溶性多酚的草本组合物的辐射保护效果
为了确认实施例1的方法制备的具有提高的脂溶性多酚的草本组合物或比较例的草本组合物在小鼠模型中显示辐射保护效果，通过以下方法研究在中度剂量照射的小鼠中的肠隐窝损失。
具体地，以100mg/kg的剂量在放射之前3天直到放射后三天，ICR小鼠每天口服施用具有提高的脂溶性多酚的草本组合物和比较例的草本组合物。以12Gy剂量的gamma射线进行全身照射。照射之后3.5天，处死小鼠，取出小肠。从每只小鼠制备8～12个小肠切片，随后根据常规方法包埋在石蜡中。制备的石蜡切片用苏木精和曙红染色。每只小鼠8个样本的每个小肠切片圆周的肠隐窝数量在光学显微镜下计数，计算每个实验组的平均数和偏差。
结果，如表2和图12所示，与用比较例的草本组合物治疗的组相比，在用具有提高的脂溶性多酚的草本组合物治疗的组中，照射的小鼠模型中肠隐窝的数量为更高的大约1.3倍(P<0.001)。上述结果直接确认了，与比较例的草本组合物相比，具有提高的脂溶性多酚的草本组合物具有更显著的辐射保护效果(表2和图12)。
[表2]
Figure GDA0001678901310000281
1)每个实验组8只ICR小鼠(n＝8)。
**显示了与比较例的草本组合物治疗的组相比显著的提高，p<0.001。

Claims (20)

1.一种制备具有提高的脂溶性多酚的草本组合物的方法，其包括以下步骤：
1)用10～50％的乙醇提取由当归、川芎和芍药以1:0.5～1.5:0.5～1.5的重量比组成的草本植物混合物来形成水性乙醇提取物，并回收所述水性乙醇提取物来形成残余物；
2)由来自上述步骤1)的残余物制备热水提取物；
3)将步骤1)的水性乙醇提取物的一部分与步骤2)的热水提取物混合来形成混合物，然后在66～83％乙醇中沉淀所述混合物以获得多糖；和
4)将步骤1)的水性乙醇提取物的剩余的其它部分与步骤3)的多糖混合，从而制备所述具有提高的脂溶性多酚的草本组合物。
2.根据权利要求1所述的制备具有提高的脂溶性多酚的草本组合物的方法，其中所述多糖在步骤4)中以10～50重量％的比例混合。
3.根据权利要求1所述的制备具有提高的脂溶性多酚的草本组合物的方法，其中所述脂溶性多酚选自由紫花前胡苷、紫花前胡素和其他多酚构成的组。
4.一种具有提高的脂溶性多酚的草本组合物，其通过根据权利要求1至3任一项所述的方法制备。
5.一种用于治疗癌症的药物组合物，其包含根据权利要求4所述的草本组合物作为活性成分。
6.一种抗癌佐剂，其包含根据权利要求4所述的草本组合物作为活性成分。
7.一种用于预防抗癌治疗伴随的副作用的药物组合物，其包含根据权利要求4所述的草本组合物作为活性成分。
8.一种用于预防抗癌治疗伴随的副作用的保健功能食品，其包含根据权利要求4所述的草本组合物作为活性成分。
9.一种用于增强免疫功能的药物组合物，其包含根据权利要求4所述的草本组合物作为活性成分。
10.一种用于增强免疫功能的保健功能食品，其包含根据权利要求4所述的草本组合物作为活性成分。
11.一种用于保护活体免于氧化损伤的药物组合物，其包含根据权利要求4所述的草本组合物作为活性成分。
12.一种用于保护活体免于氧化损伤的保健功能食品，其包含根据权利要求4所述的草本组合物作为活性成分。
13.根据权利要求4所述的草本组合物在制备用于治疗癌症的药物组合物中的用途。
14.根据权利要求4所述的草本组合物在制备抗癌佐剂中的用途。
15.根据权利要求4所述的草本组合物在制备用于预防抗癌治疗伴随的副作用的药物组合物或保健功能食品中的用途。
16.根据权利要求4所述的草本组合物在制备用于增强免疫功能的药物组合物或保健功能食品中的用途。
17.根据权利要求4所述的草本组合物在制备用于保护活体免于氧化损伤的药物组合物或保健功能食品中的用途。
18.根据权利要求4所述的草本组合物在制备用于抑制抗癌治疗伴随的副作用的药物组合物或保健功能食品中的用途。
19.根据权利要求15或18所述的用途，其中所述抗癌治疗是用抗癌试剂或照射进行的。
20.根据权利要求4所述的草本组合物在制备用于提高抗癌治疗的效果的药物组合物中的用途。
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