CN108362679A - 一种快速检测中药液中氨基酸总量的共振拉曼检测方法 - Google Patents
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Abstract
一种快速检测中药液中氨基酸总量的共振拉曼检测方法，涉及共振拉曼检测。1)配制茚三酮试液；丙氨酸标准品的衍生化处理；标准曲线的绘制；中药液稀配液的拉曼检测；丙氨酸标准品拉曼光谱标准曲线的验证；将中药液稀配液的衍生液进行紫外可见光谱的测定，通过标准曲线测得其浓度，验证拉曼检测结果的准确性。无需对中药液进行预处理，直接对衍生化溶液进行共振拉曼的测试，即可实现对中药液中的氨基酸总量的定性以及定量分析。与现有技术相比，极大地简化了前处理的操作步骤，便可简单、快速、可靠地实现中药液中氨基酸总量的定性和定量分析。
Description
技术领域
本发明涉及共振拉曼检测，尤其是涉及一种快速检测中药液中氨基酸总量的共振拉曼检测方法。
背景技术
氨基酸是含有氨基和羧基的一类有机化合物的统称，是构成生物体蛋白质并同生命过程有关的最基本的物质，与生物的生命活动有着密切的关系。既是蛋白质的基本组成单位,又是合成核酸的重要氮源并且提供能量([1]林太凤，赵梦柯，王妍鸣等.氨基酸检测技术研究进展[J].安徽农业科学，2015(18):16-19)。同时,氨基酸不仅是人体需要的一种营养成分,而且通过与细胞内各种生物分子的相互作用调控着各种生理病理过程,在一些疾病的发生和发展中扮演着至关重要的角色([2]邢健，李巧玲，耿涛华.氨基酸分析方法的研究进展[J].中国食品添加剂，2012(5):187-191)，并对临床疾病研究有一定的帮助。由于氨基酸在人体内起重要作用，氨基酸分析技术一直是现代临床医学、生物化学及食品饲料等领域必不可少的研究手段([3]刘雨，张英.氨基酸分析技术在纺织品检测中的应用[J].丝绸，2017(54):20-27)作为一类外科常用药，中药液在临床上因其产品富含丙氨酸、亮氨酸和缬氨酸等多种氨基酸被广泛应用于烧伤、烫伤等，使用方便，疗效较好，因此，氨基酸总量是评估产品质量的主要指标之一。很多中药液在对原料进行提取时需对总氨基酸含量进行质量控制，而常常以丙氨酸含量比重最大，故以丙氨酸作为氨基酸总量的评估标准。
目前，氨基酸检测的研究方法有很多种，包括分光光度法、气相色谱法、液相色谱法等。高效液相色谱法应该是目前应用最为广泛的检测方法，但是存在明显的局限性，比如样品前处理要求高、操作繁杂、检测周期长等，这就需要研究一种样品前处理简单，快速方便，结果可靠的检测方法。
和红外光谱一样，拉曼光谱属于分子振动光谱，具有测试时间短、灵敏度高、操作简单、无需预处理等优点，可进行现场快速筛查、检测及鉴别。当激发光的频率接近或等于某电子激发态的激发频率时，某些拉曼线的强度会急剧增大，称为共振拉曼效应。
发明内容
本发明的目的在于针对上述现有技术中存有的不足，提供可解决现有技术前处理繁杂、检测时间长等问题的一种快速检测中药液中氨基酸总量的共振拉曼检测方法。
本发明包括以下步骤：
1)配制茚三酮试液；
在步骤1)中，所述配制茚三酮试液的具体方法可为：将0.1g茚三酮溶于50mL的无水乙醇中，得茚三酮质量浓度为0.2％的茚三酮试液。
2)丙氨酸标准品的衍生化处理；
在步骤2)中，所述丙氨酸标准品的衍生化处理的具体方法可为：取等体积的以下不同浓度的丙氨酸标准品：0.4mg/mL，0.6mg/mL，0.8mg/mL，1.0mg/mL，1.2mg/mL，再依次加入等体积的茚三酮试液，混合摇匀，沸水浴加热15～30min，自然冷却，得到丙氨酸标准品衍生液，待测拉曼，所述茚三酮试液可采用0.2％茚三酮试液。
3)标准曲线的绘制；
在步骤3)中，所述标准曲线的绘制的具体方法可为：以丙氨酸标准品浓度为横坐标，660cm-1的拉曼强度为纵坐标，绘制丙氨酸标准品的拉曼光谱标准曲线。
4)中药液稀配液的拉曼检测；
在步骤4)中，所述中药液稀配液的拉曼检测的具体方法可为：将中药液稀配液的衍生液进行拉曼测试，对照步骤3)中的标准曲线获得中药液稀配液中氨基酸总量，采用紫外光谱进行方法的确证。
5)丙氨酸标准品拉曼光谱标准曲线的验证；
在步骤5)中，所述丙氨酸标准品拉曼光谱标准曲线的验证的具体方法可为：采用步骤2)中的丙氨酸标准品衍生液的进行紫外可见光谱的测定，以丙氨酸浓度为横坐标，570nm处的吸光度为纵坐标，绘制丙氨酸标准品的紫外可见光谱的标准曲线。
6)将步骤4)中的中药液稀配液的衍生液进行紫外可见光谱的测定，通过步骤5)中的标准曲线测得其浓度，验证拉曼检测结果的准确性。
本发明无需对中药液进行预处理，直接对衍生化溶液进行共振拉曼的测试，即可实现对中药液中的氨基酸总量的定性以及定量分析。与现有技术相比，本发明极大地简化了前处理的操作步骤，便可简单、快速、可靠地实现中药液中氨基酸总量的定性和定量分析。
附图说明
图1为中药液衍生液的共振拉曼光谱。
图2为不同浓度丙氨酸标准品衍生液的紫外光谱图。
图3为丙氨酸标准品的紫外光谱标准曲线。
具体实施方式
下面将结合本发明的实施例及附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，实施例仅限于说明或描述本发明，而非对本发明的范围进行限定。如无特别说明，本说明中提及的氨基酸浓度均为以L-丙氨酸计的氨基酸总量。
实施例1中药液的共振拉曼检测
(1)配制溶液
0.2％茚三酮试液：称取0.2g茚三酮，将其溶于100mL的无水乙醇中。
(2)中药液衍生化处理：取等体积的中药液稀配液和0.2％茚三酮试液，混合摇匀，沸水浴加热15-30min，自然冷却，待用。
(3)中药液衍生液的拉曼测试：将中药液衍生液用于拉曼测试，所得拉曼谱图见图1。
所述的拉曼光谱的测试参数如表1所示：
表1拉曼光谱的测试条件
| 积分时间 | 30s |
| 积分次数 | 1次 |
| 狭缝 | 100μm |
| 共焦孔径 | 300μm |
| 激发波长 | 532nm |
| 滤光片 | 100％ |
| 光栅 | 1200gr/mm |
(4)丙氨酸标准品标准曲线的绘制：取不同浓度丙氨酸标准品一定体积:0.4mg/mL，0.6mg/mL，0.8mg/mL，1.0mg/mL，1.2mg/mL，向上述不同浓度的丙氨酸标准品中依次加入等体积的0.2％茚三酮试液，混合摇匀，沸水浴加热15～30min，自然冷却，以步骤(3)中表3拉曼光谱的测试条件进行拉曼测试。以丙氨酸浓度为横坐标，660cm-1的拉曼强度为纵坐标，绘制丙氨酸标准品的拉曼光谱标准曲线。
(5)中药液稀配液的拉曼检测：将等体积的中药液稀配液和0.2％茚三酮试液混合摇匀，沸水浴加热15～30min，自然冷却，以步骤(3)中表3拉曼光谱的测试条件进行拉曼测试，平行测试3次，根据步骤(4)中所得的标准曲线，计算中药液稀配液的氨基酸浓度。
实施例2丙氨酸标准品拉曼光谱标准曲线的验证
(1)配制溶液
0.2％茚三酮试液：称取0.2g茚三酮，将其溶于100mL的无水乙醇中。
(2)丙氨酸标准品衍生化处理：取不同浓度的丙氨酸标准品一定体积：0.4mg/mL，0.6mg/mL，0.8mg/mL，1.0mg/mL，1.2mg/mL，向上述不同浓度的丙氨酸标准品中依次加入等体积的0.2％茚三酮试液，混合摇匀，沸水浴加热15～30min，使用80％乙醇溶液稀释各衍生化溶液，进行紫外可见光谱的测试。
所述的紫外可见光谱的测试参数如表2所示：
表2紫外可见光谱的测试条件
| 波长范围 | 200.00～900.00nm |
| 纵坐标范围 | -4.0000～4.0000Abs |
| 扫描间隔 | 1.00nm |
| 狭缝 | 5.0nm |
| 扫描速度 | 快速 |
(3)丙氨酸标准品紫外光谱标准曲线的绘制：
以丙氨酸标准品中的氨基酸浓度为横坐标，570nm处的吸光度为纵坐标，根据不同浓度中丙氨酸标准品衍生液的紫外光谱图(图2)绘制丙氨酸标准品的紫外可见光谱的标准曲线(如图3所示)，丙氨酸标准品中氨基酸标准曲线的绘制参见表3。
表3丙氨酸标准品中氨基酸标准曲线的绘制
| 编号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| 氨基酸总量(mg) | 0.4 | 0.6 | 0.8 | 1.0 | 1.2 |
| 0.2％茚三酮试液(mL) | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 |
| 稀释倍数 | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 |
(4)中药液稀配液拉曼检测结果的验证：以实施例1步骤(5)中的稀配液衍生液在表2的测试条件下进行紫外可见光谱的测试，对应其紫外可见光谱的标准曲线，计算稀配液的氨基酸浓度，验证拉曼检测数据计算所得的氨基酸浓度的准确性。
实施例3中药液氨基酸总量共振拉曼检测方法应用于康复新液的实施例
以实施例1步骤(5)中的方法对康复新液进行拉曼检测。
表4检测结果
| 编号 | 理论值 | 测算值 | 相对偏差(n＝6) |
| 1 | 0.6 | 0.56 | -6.8％ |
| 2 | 0.8 | 0.72 | -10.6％ |
检测结果参见表4。
Claims (7)
1.一种快速检测中药液中氨基酸总量的共振拉曼检测方法，其特征在于包括以下步骤：
1)配制茚三酮试液；
2)丙氨酸标准品的衍生化处理；
3)标准曲线的绘制；
4)中药液稀配液的拉曼检测；
5)丙氨酸标准品拉曼光谱标准曲线的验证；
6)将步骤4)中的中药液稀配液的衍生液进行紫外可见光谱的测定，通过步骤5)中的标准曲线测得其浓度，验证拉曼检测结果的准确性。
2.如权利要求1所述的一种快速检测中药液中氨基酸总量的共振拉曼检测方法，其特征在于在步骤1)中，所述配制茚三酮试液的具体方法为：将0.1g茚三酮溶于50mL的无水乙醇中，得茚三酮质量浓度为0.2％的茚三酮试液。
3.如权利要求1所述的一种快速检测中药液中氨基酸总量的共振拉曼检测方法，其特征在于在步骤2)中，所述丙氨酸标准品的衍生化处理的具体方法为：取等体积的以下不同浓度的丙氨酸标准品：0.4mg/mL，0.6mg/mL，0.8mg/mL，1.0mg/mL，1.2mg/mL，再依次加入等体积的茚三酮试液，混合摇匀，沸水浴加热15～30min，自然冷却，得到丙氨酸标准品衍生液，待测拉曼。
4.如权利要求3所述的一种快速检测中药液中氨基酸总量的共振拉曼检测方法，其特征在于所述茚三酮试液采用0.2％茚三酮试液。
5.如权利要求1所述的一种快速检测中药液中氨基酸总量的共振拉曼检测方法，其特征在于在步骤3)中，所述标准曲线的绘制的具体方法为：以丙氨酸标准品浓度为横坐标，660cm-1的拉曼强度为纵坐标，绘制丙氨酸标准品的拉曼光谱标准曲线。
6.如权利要求1所述的一种快速检测中药液中氨基酸总量的共振拉曼检测方法，其特征在于在步骤4)中，所述中药液稀配液的拉曼检测的具体方法为：将中药液稀配液的衍生液进行拉曼测试，对照步骤3)中的标准曲线获得中药液稀配液中氨基酸总量，采用紫外光谱进行方法的确证。
7.如权利要求1所述的一种快速检测中药液中氨基酸总量的共振拉曼检测方法，其特征在于在步骤5)中，所述丙氨酸标准品拉曼光谱标准曲线的验证的具体方法为：采用步骤2)中的丙氨酸标准品衍生液的进行紫外可见光谱的测定，以丙氨酸浓度为横坐标，570nm处的吸光度为纵坐标，绘制丙氨酸标准品的紫外可见光谱的标准曲线。
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| CN112198148A (zh) * | 2020-10-10 | 2021-01-08 | 杭州健澄科技有限公司 | 利用拉曼光谱检测烯草酮中间体三酮的方法 |
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