CN108350420A - 培养细胞的方法 - Google Patents

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Abstract

描述了培养自体细胞的方法以及治疗哺乳动物患者的方法。细胞培养在基质材料上，该基质材料具有用脂肪酸酯处理的表面以便具有强疏水表面，并且从患者的血液样品中获得的自体血浆用作生长培养基来培养细胞。基质材料也用作用于将培养的细胞转移至患者的转移敷料，以及用作伤口覆盖敷料。本发明还描述了使用该培养方法来培养自体细胞的试剂盒以及系统。

Description

培养细胞的方法
技术领域
本发明涉及培养细胞的方法，且特别涉及培养用于制备培养的上皮自体移植物(epithelial autograft)(CEA)的自体细胞的方法，以及通过移植由本发明方法培养的自体细胞来治疗哺乳动物患者的方法，且特别用于治疗烧伤受害者。
背景技术
第一种培养的上皮自体移植物(CEA)由Rheinwald和Green实现(Serialcultivation of strains of human epidermal keratinocytes:the formation ofkeratinizing colonies from single cells,Cell.1975,6:331-344)。自此来自培养的细胞的皮肤移植物被频繁地使用于治疗皮肤缺陷，诸如烧伤。
然而，还存在一些没有完全解决的相关缺点，诸如例如，易碎的表皮片和在将移植物从培养环境转移到患者期间可能持续的结构损伤、“移植物成活率(graft take)”差和微生物污染等。
市售的培养的上皮自体移植物(CEA)产品诸如EPICEL已充分用于治疗严重的烧伤受害者。市售产品潜在的问题是它们使用的动物产品可能并不总是与人类患者能免疫相容。如EPICEL的产品已经克服了那些相容性问题中的一些，但以巨大的代价使得该产品过于昂贵，特别是在像非洲和其他第三世界国家的地区，在那里患者难以负担基本的保健治疗。
在市售产品不易获得的地方，可能需要在当地培养皮肤。考虑到在运输此类移植细胞期间无菌性和结构完整性的实际担忧，合适的实验室与医院的距离使得这并不总是可行的选择。
Barlow(美国专利No 6,039,972)描述了一种适形的伤口敷料，其通过生产锚定于合成聚合物膜表面的培养的上皮细胞的亚汇合层来制备，该合成聚合物膜是疏水的、对细胞生长无抑制性并且无细胞毒性。该膜需要在细胞培养之前或之后通过穿孔形成的孔。细胞的生长发生在通常使用的含有胎牛血清的生长培养基中。
Rennekampf等人(Wound closure with human keratinocytes cultured on apolyurethane dressing overlaid on a cultured human dermal replacement,Surgery,1996,120:16-22)描述了在聚氨酯片上将人角质细胞(HK)片培养成单层，其是合成的亲水敷料。HK是从人类尸体供体皮肤获得的，且只有61％的受试动物实现了阳性移植物成活率。
Van Dorp等人(A modified culture system for epidermal cells forgrafting purposes:an in vitro and in vivo study,Wound Repair Regen.1999,7(4):214-225)在聚酯填料基质上培养了人类和猪的表皮角质细胞。然而，他们发现，成功的上皮再生只在细胞片通过使用分散酶(Dispase)酶处理而随之从基质脱附时才可能。已知使用分散酶酶促脱附能损坏可用于伤口愈合过程的某些细胞。
Hernon等人(Clinical experience using cultured epithelial autograftsleads to an alternative methodology for transferring skin cells from thelaboratory to the patient,Regenerative Med.2006,1(6):809-821)描述了将化学限定的表面用于角质细胞的培养，其随后可以转移到伤口床，而不需要将细胞从表面酶促脱附。然而，该方法需要相当复杂的等离子体聚合的额外步骤，其中含有酸基的材料沉积在商业医疗级聚合物上。该材料以气相引入，并通过在低真空场上施加电压产生等离子体能量场。
Atiyeh和Costagliola(Cultured Epithelial autograft(CEA)in burntreatment:Three decades later,Burns,2007,33:405-413)描述了使用新递送系统，通过在可移植膜(诸如合成聚合物)上生长细胞来转移角质细胞，该可移植膜可以直接转移到伤口床。然而，这些聚合物对培养的细胞的质量的影响尚未得到充分评估。
Chua等人(In vitro evaluation of fibrin mat and TegadermTMwounddressing for the delivery of keratinocytes-Implications of their use to treatburns,Burns,2008,34:175-180)描述了使用TegadermTM(一种基于聚氨酯的伤口敷料)作为细胞生长的基质。细胞生长在含有10％胎牛血清的生长培养基中辐照的3T3-J2细胞的饲养层上，并且发现相比于在纤维蛋白垫上生长的细胞，在TegadermTM上生长的细胞显示出一些细胞较弱的表达，这通常为细胞提供了更好的环境。
De Corte等人(Feeder layer-and animal product-free culture of neonatalforeskin keratinocytes:improved performance,usability,quality and safety,CellTissue Bank,2012,13:175-189)提及硅酮膜递送技术作为递送亚汇合细胞的方式，同时还提供伤口覆盖物。
Dahlquist(美国专利No.8,658,851)和Iwamoto等人(EP1637145)描述了在包括疏水聚合物的柔性支撑物上生长的细胞，并使用源自需被治疗的受试者的细胞来避免不利的免疫反应。
Falk和Ivarsson(Effect of a DACC dressing on the growth properties andproliferation rate of cultured fibroblasts,Journal of Wound Care,2012,21(7):327-332)研究了使用实验性体外伤口模型的人类真皮成纤维细胞的形态和增殖。然而，他们仅使用市售的成纤维细胞而没有使用其他皮肤细胞成分，如在活皮肤移植中所需的表皮细胞和真皮细胞。他们还使用了含有10％胎牛血清的生长培养基。
Smith(US 2013/0072565)也使用了疏水基质，诸如二烷基氨基甲酰氯(DACC)或烷基烯酮二聚体(优选与载体相关联的)来增加细胞增殖，以用于使用市售的补充有10％小牛血清的生长培养基来生长市售的人真皮成纤维细胞。
De Moraes等人(Use of autologous fibrin glue in dermatologic surgery:application of skin graft and second intention healing,Rev Paul Med,1998,116(4):1747-1752)描述了使用自体血液样品生产纤维蛋白胶(作为皮肤移植物中的组织粘合剂)。
Mishra(美国专利申请No.2007/0122906)描述了在细胞培养基中使用血液成分诸如富血小板血浆(PRP)来生长和增殖细胞。然而，所述细胞的唯一支撑(用来将细胞保持在一起并指导成熟组织发育)是胶原，其通常提取自动物幼崽的组织，且可能由此导致患者的免疫相容性问题。
Scuderi等人(Clinical application of autologous three-cellularcultured skin substitutes(CSS),in vivo,2009,23:991-1004)描述了透明质酸生物材料支架的使用，人成纤维细胞在其上生长，并且其中的培养基，除其他之外，富含10％的患者自身血清。由于该支架源自生物来源，因此也存在相容性问题的风险。
本发明背景技术的前述讨论仅旨在促进对本发明的理解。应该被了解的是，该讨论不是确认或承认所涉及的任一材料是截止至本申请的优先权日的本领域公知常识的一部分。
发明内容
依照本发明的第一方面，提供了一种培养用于治疗哺乳动物患者的自体细胞的方法，步骤包括：
a.提供具有用脂肪酸酯处理的表面以便具有强疏水表面的基质材料；
b.将从患者获得的细胞置于基质材料的疏水表面上，以便在其上培养自体细胞；以及
c.将从患者的血液样品中获得的自体血浆作为生长培养基施用于细胞来培养细胞。
另一些特征规定基质材料用作将培养的细胞转移至患者的转移敷料；以及规定基质材料用作伤口覆盖敷料；规定基质材料包含醋酸纤维素、棉纱布或无纺布；规定脂肪酸是二烷基氨基甲酰氯(DACC)和/或烷基烯酮二聚体(AKD)，二烷基氨基甲酰氯诸如双十六烷基氨基甲酰氯或双十八烷基氨基甲酰氯；规定基质材料是CUTIMED 系列产品中的一种。
另一些特征规定细胞是皮肤细胞或上皮细胞，规定细胞包括成纤维细胞和黑素细胞。
而另一些特征规定自体血浆从患者的离心分离的血液样品中获得且是富血小板血浆(PRP)；以及规定定期施用该血浆，优选每天。
还有另一些特征规定细胞用水凝胶润湿，优选每2至4天，且最优选每3天。
该方法的进一步特征为可在于在生长自体培养细胞的过程中不使用非自体动物产品，且培养在疏水表面上的细胞对非无菌条件相对不敏感。
根据本发明的第二方面，提供了一种通过移植体外培养的自体细胞来治疗哺乳动物患者的方法，包括以下步骤：
a.从患者的活组织检查中获得细胞；
b.提供具有用脂肪酸酯处理的表面以具有强疏水表面的基质材料；
c.将细胞置于基质材料上并在其上培养自体细胞，使用从患者的血液样品中获得的自体血浆作为生长培养基来培养细胞；
d.将自体培养的细胞移植至患者上，使用基质材料作为转移敷料和伤口覆盖敷料。
另一些特征规定自体细胞是皮肤细胞，优选上皮细胞，规定该细胞包括成纤维细胞和黑素细胞。
而另一些特征规定自体血浆从患者的离心分离的血液样品中获得且是富血小板血浆(PRP)；规定定期施用该血浆，优选每天。
还有另一些特征规定细胞用水凝胶润湿，优选每2至4天，且最优选每3天。
根据本发明的第三方面，提供了一种用于培养用于治疗哺乳动物患者的自体细胞的试剂盒，该试剂盒包括：
a.用于分离从患者获得的活组织检查中的表皮细胞和真皮细胞的胰蛋白酶溶液或溶液前体
b.具有用脂肪酸酯处理的表面以具有强疏水表面的基质材料，并将细胞置于该表面上以便在其上培养自体细胞；以及
c.用于容纳从患者的血液样品中获得的血浆的多个管。
另一些特征规定试剂盒含有用于从患者获得的血液样品中提取血浆的多个注射器；多个无菌针和15/0刀片(手术室库存)。
而另一些特征规定试剂盒是有多个区的分区容器的形式；规定第一区含有胰蛋白酶溶液或溶液前体，规定第二区含有基质材料和可选地用于将基质材料保持在扁平状态的支撑框架，规定第三区含有管，优选柠檬酸-柠檬酸盐-葡萄糖(ACD)管，以及规定第四区含有注射器、无菌针和刀片以及一管水凝胶；规定每个区由剥离膜覆盖物(peel away filmcover)单独密封。
该试剂盒可还包括含有使用试剂盒来培养自体细胞的说明的药品说明书，例如，由溶液前体制备胰蛋白酶溶液的说明，将PRP施用于置于基质材料上的细胞并使用水凝胶润湿其上细胞以及将在其上含有细胞层的疏水基质施用在患者伤口的用法说明。
根据本发明的第四方面，提供了一种用于培养用于治疗哺乳动物患者的自体细胞的系统，该系统包括：
a.有多个基质区的培养箱，每个区与患者相关联，并配置为接收将从相关联的患者获得的细胞置于其上的基质材料，以便在其上培养自体细胞；
b.用于识别与基质区相关联的患者的识别部件；以及
c.涂抹单元，其用于将作为用于培养细胞的生长培养基的从患者的血液样品中获得的自体血浆可操作地施用于基质材料上的细胞，该基质材料包含在与患者相关联的基质区中。
另一特征规定涂抹单元包括可操作来选择与患者相关联的剂量单元的机械臂，该剂量单元包含从患者的血液样品中获得的自体血浆，以及规定涂抹单元施用包含在选择的剂量单元中的自体血浆。
另一些特征规定系统包括剂量单元库，该剂量单元库包括多个剂量单元区，每个剂量单元区被配置为保持剂量单元，每个剂量单元区与一名患者相关联，规定可操作识别部件识别与患者相关联的剂量单元区，且规定可操作机械臂从识别的剂量单元区中选择并提取剂量单元。
另一特征规定系统包括多个剂量单元，每个剂量单元包括出口和活塞，且规定可操作机械臂将出口定位在邻近于与患者相关联的基质区，并向出口推动活塞来将包含在其中的自体血浆可操作地施用于包含在基质区的基质材料上的细胞。该剂量单元可以是柠檬酸-柠檬酸盐-葡萄糖(ACD)剂量单元。
另一个特征规定识别部件维护查找表(查询表/查阅表，look-up table)，其中每个基质区与坐标和一名患者相关联，并规定识别部件包括追踪部件以相对于每个基质区的坐标来追踪涂抹单元的位置，并规定识别部件识别与基质区相关联的患者，该识别是通过将涂抹单元的位置与储存在查找表中基质区的坐标相比较以便识别与涂抹单元邻近的基质区并由此识别与基质区相关联的患者。
另一特征规定识别部件维护查找表，其中每个剂量单元区与坐标和一名患者相关联，并规定追踪部件以相对于每个剂量单元区的坐标来追踪涂抹单元的位置，并规定识别部件识别与患者相关联的剂量单元区，该识别是通过将涂抹单元的位置与储存在查找表中剂量单元区的坐标相比较以便识别与涂抹单元邻近的剂量单元区并由此识别与患者相关联的剂量单元区。
另一个特征规定了培养箱是温控的，并且规定维持选自30摄氏度至38摄氏度范围的温度，优选37摄氏度。
现在，本发明的方面将仅通过实施例的方式，参考附图进行描述。
附图说明
在附图中：
图1是用于培养用于治疗哺乳动物患者的自体细胞的试剂盒的一种实施方式的示图；以及
图2是例示用于培养用于治疗哺乳动物患者的自体细胞的示例性系统的示意图。
具体实施方式
描述了培养自体细胞的方法以及治疗哺乳动物患者的方法。在具有用脂肪酸酯处理的表面以便具有强疏水表面的基质材料上培养细胞，且从患者的血液样品中获得的自体血浆用作生长培养基来培养细胞。基质材料还用作用于将培养的细胞转移至患者的转移敷料和伤口覆盖敷料。还描述了使用该培养方法来培养自体细胞的试剂盒和系统。
细胞生长在低成本疏水基质材料上，在该实施方式中，疏水敷料被称为CUTIMED其充当上皮细胞的生长模板以及转移介质和伤口覆盖敷料。
动物产品(诸如通常用作培养细胞的生长培养基的牛血浆)不会用在本发明的培养过程中。取而代之，提取自患者血液样品中患者的自体血浆用作生长培养基每天饲养细胞。也显示出细胞在无菌条件和非无菌条件下同样良好增殖。
本发明的方面现在将参考以下非限定性实施例更详细的描述。
实施例
材料
仪器：
-两个培养箱、一个离心机、富血小板血浆的柠檬酸-柠檬酸盐-葡萄糖(ACD)管、来自烧伤手术室的无菌仪器包、无菌手套、20ml注射器、18G和16G针、CUTIMED 敷料垫和纱布条、无菌绿布、面罩、无菌手术服、鞋套和头罩、15/0刀片(手术室库存)、光学显微镜、载玻片、固定剂和放大镜(3.5×放大45cm焦距)。
生物学要求：
-自体(患者自己的)皮肤活组织检查：7×3cm左腹股沟，富血小板血浆(PRP)的自体血液(6ml ACD管中36ml血液产生22-25ml的PRP)和胰蛋白酶(来自牛胰腺用于从真皮成分中分离上皮细胞的酶，来自解剖实验室)。
方法
用氯己定溶液和酒精溶液以及有无菌水的无菌纱布清洗培养箱，并设定温热至36.8摄氏度。目标温度为37摄氏度。
皮肤活组织检查在无菌样本(specimen)容器中从手术室运至实验室，随后立刻进行移出皮肤的操作。开启放大镜并使用具有数字15/0刀片的手术刀，将表皮和真皮切掉并分离。表皮的小片段被切割得更小。在不使用放大镜的条件下刮掉一些角质细胞。
用沸水给用于在无菌水中混合胰蛋白酶粉末的两个样本瓶灭菌。然后将上皮皮肤的小片段置于有胰蛋白酶溶液的无菌样本瓶中来进一步分离表皮和真皮成分。
RECELL试剂盒也用沸水灭菌并用于辅助细胞制备。试剂盒中的小筛(sift)用于洗掉胰蛋白酶，并随后用镊子捡起细小的上皮细胞并将它们置于六个疏水CUTIMED垫上的垫中心区域中。其他细胞置于两个无菌样本瓶中。
然后将每管6ml的六管血液以3500转/分钟(rpm)离心8分钟。此后，移除管的顶部并用20ml无菌注射器和18号针抽取血浆。小心翼翼地避免抽取可能含有促炎性的致热细胞因子(如白细胞介素-1、白细胞介素-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α))的任何血红细胞。
将血浆喷射在CUTIMED 垫上的细胞上和含有细胞的样本瓶中。CUTIMED 纱布条铺设在垫之间以形成细胞生长的边界，并避免细胞生长超过垫的边缘。
细胞每天用新鲜的PRP滋养。通过每天在培养箱外部的进水口加入无菌水来维持培养箱的湿度。每三天用无菌手套将清得佳凝胶(Intrasite Gel)施用在培养的上皮自体移植物(CEA)上以防止细胞过度干燥。
在CEA生长的第14天，到达了细胞移植的目标日，恰好在患者入院后108天。
有培养的细胞的培养箱被带到手术室，并将细胞保持在37摄氏度。麻醉开始之后，从患者的A-线(动脉管路/动脉导管/动脉线，A-line)采集36ml的血液用于PRP。患者用氯己定肥皂清洗并披上无菌服。伤口清创通过用金属尺的钝边/尖端轻柔刮擦原始区域完成。在先前移植的异种移植区域以及左小腿内侧的供体部位完成。用浸润在肾上腺素溶液(1升林格乳酸盐(Ringers Lactate)和1安瓿肾上腺素和800mg利诺卡因(Lignocaine))中的棉签获得止血作用。随后有CEA的CUTIMED 垫直接移植到背部、左臂、左大腿和膝盖的伤口上，并同时施用PRP。在患者的右臂、右大腿和右腿上CUTIMED 垫与喷湿的CEA和新鲜的PRP一起使用。骶骨褥疮也用来自生长在两个无菌样本瓶中的细胞的喷湿的CEA和在CUTIMED 垫上的自体PRP治疗。背部敷料是用IOBAN(含碘膜敷料)固定的。其余敷料用粘性/起绉绷带包扎。
结果：
实现78.16％的移植物成活率。CEA包括生长于更深皮肤层的细胞(不仅像经典技术中的上皮细胞，还包括成纤维细胞和黑素细胞)。
血浆稀释研究
*未控制的＝在无菌水和胰蛋白酶悬浮液中的原始样品细胞被保存在桌子上的塑料培养皿中，并在无温度或湿度调控下用无菌绿布覆盖。每日将少量血浆加入细胞中。在室温下(大约24摄氏度)和非无菌条件下，细胞在此“未控制的”次优区域生长。
血浆稀释研究结果
1.细胞似乎很健壮并易于在自体血浆中生长。
2.安全实现具有良好效果的血浆稀释可高达0.5:1(无菌水:血浆)的比例，但最佳结果是通过每日饲养细胞未稀释血浆来获得。实际上每隔一天都可以跳过，且细胞仍然可以在悬浮液中存活。
3.优选的敷料是绝对疏水的而不亲水的。任何添加水凝胶至此类敷料的背面都不利于细胞生长。
4.作为生长培养基和抗菌剂的双重功能使得Sorbact成为最佳选择。
细胞类型
比较敷料研究
干燥敷料：CEA后3-4个月±3-4天的饲养
1.清得佳(Intrasite)适形
皮肤可以生长，但变成交织/附着于纤维上，看起来难以形成皮肤细胞的切向层。敷料的纤维非常粗糙。
2.生物膜(Biobrane)
敷料的有组织的纤维和图案。未看见明显的大量上皮细胞。
3.Cutimed Sorbact棉签
在敷料的较深色纤维之间可见丰富的细胞生长。
4.Cutimed Sorbact敷料垫
倒置：纱布在底部：在底部表面看不到细胞。4×放大。
下一个较老的细胞：细胞的顶侧：在4×放大下，Sorbact纤维之间可见多个细胞。
用2周龄的CEA的较年轻的敷料：在4×放大下，可见丰富更多的密度增加的细胞。看到的细胞生长在Sorbact纤维上以及它们之间。
5.Sorbact棉签：两周龄。
尽管注意到血浆渗透敷料垫
Sorbact纱布细胞。更丰富的生长，一些细胞呈现褐色，另一些呈现灰色。
6.水凝胶垫
细胞迁移不好，有血浆积聚。
7.Cutimed Sorbact水凝胶
血浆的积聚不利于细胞的横向生长。
发现：
1.纱布类敷料不利于生长单层细胞，因为细胞卡在纤维结构中，并且生长是随意的。
2.尽管细胞可以生长在如生物膜的尼龙网上，但未检测到用本发明的方法的生长。
3.用Sorbact敷料可看到丰富的细胞生长。
4.用于细胞培养的表现最差的Sorbact是存在水凝胶垫的地方，这导致血浆积聚，并因此导致较少的横向生长，以及导致更多的垂直生长刺激。
5.与亲水性敷料相比，疏水性质似乎非常有助于加速细胞生长：水凝胶垫不允许血浆渗透并引起积聚，该积聚对横向细胞生长是不利的。
6.上述使用Sorbact敷料垫的方法(由于细胞收缩而更坚硬、不易发生变形)可能是最好的，但Sorbact纱布不太硬，且更容易被细胞变形。
7.人们可以在许多表面上生长细胞，但是没有一种表面已知如Sorbact一样能够提供抗菌和生长加速的双重性质，并具有用正确的湿度控制量，用于有效细胞培养。
8.测试了除清得佳凝胶以外的其他水凝胶(诸如Cutimed凝胶BSN)，但发现其含水量太大。清得佳凝胶似乎具有适合的厚度以作为细胞的额外保湿剂。
本发明的其他方面延伸至用于培养用于治疗哺乳动物患者的自体细胞的便携式试剂盒(1)，如图1所示在一种实施方式中所说明的。该试剂盒(1)是有多个区的无菌、分区容器(2)的形式，多个区包括：
-第一区(3)，该第一区含有胰蛋白酶溶液或溶液前体(以胰蛋白酶粉末和无菌水的形式，其可混合制备胰蛋白酶溶液)，
-第二区(5)，该第二区含有疏水基质材料和用于将基质材料保持在扁平状态的支撑框架，
-含有ACD管的第三区(4)以及
-第四区(6)，该第四区含有用于从患者获得的血液样品中提取血浆的多个注射器；多个无菌针、15/0刀片(手术室库存)、一管水凝胶和试剂盒的使用说明。
分区容器(2)的每个区都用剥离膜覆盖物单独密封。
根据第四区(6)中含有的一组说明，第一区(3)的胰蛋白酶溶液用于分离从患者获得的活组织检查的表皮细胞和真皮细胞。可以将细胞与溶液直接在第一区混合，并将用于培养的细胞从区域(3)中挑拣出并置于第二区(4)中的疏水基质材料上。
一旦来自患者的血液样品被离心分离并使用来自第四区(6)的注射器提取PRP，则将血浆置于ACD管中，并然后每天作为生长培养基施用于细胞上。血浆的施用可根据包括在第四区(6)中的一组说明来进行。
说明还包括用水凝胶润湿在基质材料上生长的细胞，以及将其上含有细胞层的疏水基质施加至患者伤口上的步骤。
本发明的其他方面延伸至用于培养用于治疗哺乳动物患者的自体细胞的系统(100)，其一种示例性的实施方式如图2所示。该系统(100)包括有处理器(102)和存储器(104)的控制器(101)以及涂抹单元(106)。处理器(102)可执行的编码可储存在存储器(104)或其他非暂时性计算机可读介质中以确保系统(100)完成各种识别、控制和涂敷器功能等。
该系统(100)包括有多个基质区(112)的培养箱(110)。各区(112)被配置为接收有置于其上的从患者获得的细胞的基质材料(114)。将患者的细胞置于基质材料(114)上能够使自体细胞在其上培养。培养箱(110)是温控的，以便维持选自30摄氏度至38摄氏度范围的，且优选37摄氏度的温度。
该系统(100)还包括剂量单元库(120)，剂量单元库包括多个剂量单元区(122)。各剂量单元区(122)被配置为拥有与患者相关联的剂量单元(124)。各剂量单元(124)包括在其第一终端有出口且在其第二终端有活塞的管状主体。腔室被限定在活塞和出口之间，并含有与该剂量单元(124)相关联的患者的自体血浆。在一些实施方式中，剂量单元可以是柠檬酸-柠檬酸盐-葡萄糖(ACD)剂量单元。
该系统(100)包括维护查找表的识别部件(130)，在查找表中，各基质区(112)与坐标(例如x-坐标、y-坐标和z-坐标)和患者(例如患者标识符，如患者姓名或患者编号)在逻辑上相关联。以此种方式，各基质区(112)与患者相关联。
可操作识别部件(130)来识别与基质区(112)相关联的患者，或识别与患者相关联的基质区(112)。在这种实施方式中，识别部件(130)包括追踪部件(132)来追踪涂抹单元(106)相对于储存的各基质区(112)的坐标的位置。识别部件(130)识别与基质区(112)相关联的患者，通过将涂抹单元(106)的位置与储存在查找表中基质区的坐标比较来识别接近涂抹单元(106)的基质区并由此识别与基质区(112)相关联的患者。
识别部件(130)进一步维护查找表，其中各剂量单元区(122)与坐标(例如x-坐标、y-坐标和z-坐标)和患者在逻辑上相关联。以此种方式，各剂量单元区(122)与患者相关联。
可操作识别部件(130)来识别与患者相关联的剂量单元区(122)。可操作追踪部件(132)来追踪涂抹单元(106)相对于各剂量单元区(122)的坐标的位置。可操作识别部件(130)识别与患者相关联的剂量单元区(122)，通过将涂抹单元(106)的位置与储存在查找表中剂量单元区(122)的坐标比较来识别与涂抹单元(106)接近的剂量单元区(122)并由此识别与患者相关联的剂量单元区(122)。
涂抹单元(106)包括有末端执行器(109)的机械臂(108)，可操作该末端执行器从其所定位的剂量单元区(122)中选择和提取与具体患者相关联的剂量单元(124)，并将包含在其中的患者的自体血浆施用于包含在与患者相关联的基质区(112)中的基质材料(114)上的细胞。
使用中，可识别具体患者。机械臂(108)识别与患者相关联的剂量单元区(122)。末端执行器(109)将剂量单元(124)从识别的剂量单元区(122)中移除。然后与患者相关联的基质区(112)被识别，并将剂量单元(124)置于邻近基质材料(114)的位置，该基质材料定位于基质区(112)内并具有置于其上的从患者获得的细胞。末端执行器(109)向出口推动剂量单元(124)的活塞来将包含在其中的自体血浆施用于置于基质材料(114)上的细胞。当施用于基质材料上的细胞时，自体血浆充当为了培养细胞的生长培养基。
该系统(100)被配置为自动操作，以便大量患者的细胞可以大范围并以最少的人为干预培养。例如，涂抹单元可以自动运行来将多个患者的自体血浆施用于包含在培养箱内其相应的一种或多种基质材料，以便大规模且持续规模的培养细胞，例如在患者处于治疗设施期间。
应该理解，上文所述系统的实施方式是示例性的，且可对其进行各种改变或修改。例如，在另一实施方式中，各基质区和剂量单元区可以有布置于其上的计算机和/或人可读取的标识符或标记(例如标签和/或条形码)。该标识符可由识别部件使用来识别与每个基质区和每个剂量单元区相关联的患者。
本发明中用于细胞移植的疏水敷料(具有由DACC制成的疏水涂层的CUTIMED)能够降低剪切应力、代谢应激和组织感染的影响。DACC吸引疏水细菌并使其成惰性。申请人假定并发现CUTIMED 的疏水作用将允许以PRP形式的血浆被施用于基质，而细胞可以在血浆液滴内生长。此类型敷料在美国专利No.4,617,326和美国专利申请no.2006/012980中进一步描述，其通过引用并入本文。
申请人设想本发明的方法和材料特别有利于避免感染，其归因于疏水CUTIMED敷料和使用自体血浆的联合抗感染效果。申请人假定自体血浆的使用允许任一抗生素治疗的抗感染作用，针对患者细菌特征特别调整，以便在体外培养过程期间持续。
除非内容另有要求，否则整篇说明书和权利要求书中，词语“包括(comprise)”或诸如“包括(comprises)”或“包括(comprising)”的变体将被理解为暗示包含所述整数或整数组，但不排除任一其他整数或整数组。

Claims (18)

1.一种培养用于治疗哺乳动物患者的自体细胞的方法，步骤包括：
a.提供具有用脂肪酸酯处理的表面以具有强疏水表面的基质材料；
b.将从患者获得的细胞置于所述基质材料的所述疏水表面上，以便在其上培养自体细胞；以及
c.将从所述患者的血液样品中获得的自体血浆作为生长培养基施用于所述细胞来培养所述细胞。
2.如权利要求1所述的方法，其中，所述基质材料用作将培养的细胞转移至所述患者的转移敷料。
3.如权利要求1或权利要求2所述的方法，其中，所述基质材料还用作伤口覆盖敷料。
4.如前述权利要求任一项所述的方法，其中，所述基质材料包括醋酸纤维素、棉纱布或无纺布并且脂肪酸选自二烷基氨基甲酰氯(DACC)和烷基烯酮二聚体(AKD)。
5.如权利要求4所述的方法，其中，所述DACC是双十六烷基氨基甲酰氯或双十八烷基氨基甲酰氯。
6.如前述权利要求任一项所述的方法，其中，所述细胞选自包括成纤维细胞和黑素细胞的皮肤细胞或上皮细胞。
7.如前述权利要求任一项所述的方法，其中，所述血浆是富血小板血浆(PRP)。
8.如前述权利要求任一项所述的方法，所述方法包括至少每2至4天，用水凝胶润湿所述细胞的另一步骤。
9.一种通过移植体外培养的自体细胞治疗哺乳动物患者的方法，包括以下步骤：
a.从所述患者的活组织检查中获得细胞；
b.提供具有用脂肪酸酯处理的表面以便具有强疏水表面的基质材料；
c.将所述细胞置于所述基质材料上并在其上培养自体细胞，使用从所述患者的血液样品中获得的自体血浆作为生长培养基来培养所述细胞；
d.将自体培养的细胞移植到所述患者上，使用所述基质材料作为转移敷料和伤口覆盖敷料。
10.一种用于培养用于治疗哺乳动物患者的自体细胞的试剂盒，所述试剂盒包括：
a.用于分离从患者获得的活组织检查的表皮细胞和真皮细胞的胰蛋白酶溶液或溶液前体
b.具有用脂肪酸酯处理的表面以具有强疏水表面的基质材料，并且在所述表面上可以放置细胞以便在其上培养自体细胞；以及
c.用于容纳从所述患者的血液样品中获得的血浆的多个管。
11.如权利要求10所述的试剂盒，还包括用于从所述患者获得的血液样品中提取血浆的多个注射器；多个无菌针和15/0刀片(手术室库存)和一管水凝胶。
12.如权利要求11所述的试剂盒，为具有多个区的分区容器的形式；包括：第一区，所述第一区含有所述胰蛋白酶溶液或溶液前体；第二区，所述第二区含有所述基质材料和可选地用于将所述基质材料保持在扁平状态的支撑框架；第三区，所述第三区含有所述管；以及第四区，所述第四区含有所述注射器、无菌针和刀片和水凝胶；且其中每个区由剥离膜覆盖物单独密封。
13.如权利要求10至12中任一项所述的试剂盒，所述试剂盒还包括含有使用用于培养自体细胞的所述试剂盒的说明的药品说明书。
14.一种用于培养用于治疗哺乳动物患者的自体细胞的系统，所述系统包括：
a.有多个基质区的培养箱，每个区与患者相关联，并配置为接收将从相关联患者获得的细胞置于其上的基质材料，以便在其上培养自体细胞；
b.用于识别与所述基质区相关联的所述患者的识别部件；以及
c.涂抹单元，所述涂抹单元用于将作为用于培养细胞的生长培养基的从所述患者的血液样品中获得的自体血浆可操作地施用于基质材料上的细胞，所述基质材料包含在与所述患者相关联的所述基质区中。
15.如权利要求14所述的系统，其中，所述涂抹单元包括可操作来选择与所述患者相关联的剂量单元的机械臂，所述剂量单元含有从所述患者的血液样品中获得的所述自体血浆，且其中，所述涂抹单元施用包含在选择的剂量单元中的所述自体血浆。
16.如权利要求15所述的系统，其中，所述系统包括剂量单元库，所述剂量单元库包括多个剂量单元区，每个剂量单元区配置为保持剂量单元，每个剂量单元区与一名患者相关联，其中可操作所述识别部件识别与所述患者相关联的剂量单元区，且其中，可操作机械臂从识别的剂量单元区中选择并提取剂量单元。
17.如权利要求16所述的系统，其中，所述系统包括多个剂量单元，每个所述剂量单元包括出口和活塞，且其中，可操作所述机械臂将所述出口定位在邻近于与所述患者相关联的所述基质区，并向所述出口推动所述活塞来将包含在其中的自体血浆可操作地施用于包含在所述基质区的基质材料上的细胞。
18.如权利要求14至17中任一项所述的系统，其中，所述培养箱是温控的，且其中，维持选自30摄氏度至38摄氏度范围的温度。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP7286749B1 (ja) 2021-12-23 2023-06-05 財團法人工業技術研究院 細胞及び組織シート形成パッケージ並びに細胞注入装置

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TWI662125B (zh) * 2018-02-05 2019-06-11 中原大學 細胞貼附裝置以及該細胞貼附裝置之製造方法
CN110205243A (zh) * 2018-02-28 2019-09-06 中原大学 细胞贴附装置以及该细胞贴附装置的制造方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101657222A (zh) * 2007-01-18 2010-02-24 亚必戈医药有限公司 带有细菌吸附组合物和持水系统的伤口敷料
US20130072565A1 (en) * 2011-09-21 2013-03-21 Jan G. Smith Method of increasing cell proliferation by advanced wound dressings
US20130195958A1 (en) * 2010-05-21 2013-08-01 Rodrigo Focion Soto Pareja Process for the production of patches or derssings of autologous skin through cultivation of autologous keratinocytes and fibroblasts with autologous serum for the generation of skin
CN104173252A (zh) * 2014-07-29 2014-12-03 蔡贤芬 一种含自体基质细胞的生物美容制剂

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SE460017B (sv) 1984-03-14 1989-09-04 Landstingens Inkopscentral Bakterieadsorberande komposition i vattenoloeslig form
US5712137A (en) 1990-03-05 1998-01-27 Smith & Nephew Plc Laminate of a culture substrate on a carrier for producing an apertured wound dressing
TW200505394A (en) 2003-06-06 2005-02-16 Asahi Medical Co Material promoting wound healing
WO2005065419A2 (en) 2003-12-29 2005-07-21 Am Biosolutions Method of culturing cells
US7810945B2 (en) 2004-07-13 2010-10-12 Mize Randy J Adjustable light connection
EP2082030A2 (en) * 2006-10-20 2009-07-29 Keracure, Inc. Devices with cells cultured on flexible supports

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101657222A (zh) * 2007-01-18 2010-02-24 亚必戈医药有限公司 带有细菌吸附组合物和持水系统的伤口敷料
US20130195958A1 (en) * 2010-05-21 2013-08-01 Rodrigo Focion Soto Pareja Process for the production of patches or derssings of autologous skin through cultivation of autologous keratinocytes and fibroblasts with autologous serum for the generation of skin
US20130072565A1 (en) * 2011-09-21 2013-03-21 Jan G. Smith Method of increasing cell proliferation by advanced wound dressings
CN104173252A (zh) * 2014-07-29 2014-12-03 蔡贤芬 一种含自体基质细胞的生物美容制剂

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
薛巍等: "《生物医用水凝胶》", 31 December 2012, 暨南大学出版社 *
顾其胜: "《海藻酸盐基生物医用材料与临床医学》", 30 April 2015, 上海科学技术出版社 *
齐向东等: "《微创美容外科学》", 28 February 2013, 浙江科学技术出版社 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP7286749B1 (ja) 2021-12-23 2023-06-05 財團法人工業技術研究院 細胞及び組織シート形成パッケージ並びに細胞注入装置
JP2023094119A (ja) * 2021-12-23 2023-07-05 財團法人工業技術研究院 細胞及び組織シート形成パッケージ並びに細胞注入装置

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