CN108295059B - 一种新天然产物制备促凝血或止血药物中的用途 - Google Patents

一种新天然产物制备促凝血或止血药物中的用途 Download PDF

Info

Publication number
CN108295059B
CN108295059B CN201810136581.XA CN201810136581A CN108295059B CN 108295059 B CN108295059 B CN 108295059B CN 201810136581 A CN201810136581 A CN 201810136581A CN 108295059 B CN108295059 B CN 108295059B
Authority
CN
China
Prior art keywords
formula
preparation
compound shown
factor
compound
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201810136581.XA
Other languages
English (en)
Other versions
CN108295059A (zh
Inventor
孟江
莫毛燕
杨小露
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Guangdong Pharmaceutical University
Original Assignee
Guangdong Pharmaceutical University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Guangdong Pharmaceutical University filed Critical Guangdong Pharmaceutical University
Priority to CN201810136581.XA priority Critical patent/CN108295059B/zh
Publication of CN108295059A publication Critical patent/CN108295059A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN108295059B publication Critical patent/CN108295059B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/21—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates
    • A61K31/215—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids
    • A61K31/216—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids of acids having aromatic rings, e.g. benactizyne, clofibrate
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C67/00—Preparation of carboxylic acid esters
    • C07C67/48—Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C67/00—Preparation of carboxylic acid esters
    • C07C67/48—Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives
    • C07C67/56—Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives by solid-liquid treatment; by chemisorption
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C67/00—Preparation of carboxylic acid esters
    • C07C67/48—Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives
    • C07C67/58—Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives by liquid-liquid treatment
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C69/00—Esters of carboxylic acids; Esters of carbonic or haloformic acids
    • C07C69/66—Esters of carboxylic acids having esterified carboxylic groups bound to acyclic carbon atoms and having any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, acyloxy, groups, groups, or in the acid moiety
    • C07C69/73—Esters of carboxylic acids having esterified carboxylic groups bound to acyclic carbon atoms and having any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, acyloxy, groups, groups, or in the acid moiety of unsaturated acids
    • C07C69/732—Esters of carboxylic acids having esterified carboxylic groups bound to acyclic carbon atoms and having any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, acyloxy, groups, groups, or in the acid moiety of unsaturated acids of unsaturated hydroxy carboxylic acids

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本发明提供了式2所示化合物在制备促凝血或止血药物中的用途。实验结果表明，式2所示化合物能通过影响内源性凝血系统以及促进血浆中凝血因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ、Ⅻ的活性产生止血作用，同时也能促进凝血酶介导的纤维蛋白原的形成，而产生止血作用。

Description

一种新天然产物制备促凝血或止血药物中的用途
技术领域
本发明涉及一种新天然产物在制备促凝血或止血药物中的用途。
背景技术
牡丹皮为毛茛科植物牡丹Paeonia surulicosa Andr.的干燥根皮，始载于《神农本草经》，列为中品，历代本草皆有记载。其性味苦、辛，微寒；归心、肝、肾经，有清热凉血、活血化瘀的功效，用于热入营血、吐血、无汗骨蒸、跌扑伤痛、痈肿疮毒。牡丹皮炭是牡丹皮以武火炒至焦黑色，存性为度的炮制品，具有凉血止血的作用，常用于血热出血，如治吐血、衄血等的十灰散(《十药》)。
未见本发明化合物2止血作用的报道。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明提供了一种新的促凝血或止血药物及其制备方法。
本发明首先提供了式2所示化合物在制备促凝血或止血药物中的用途
Figure BDA0001576460890000011
进一步地，所述式2化合物按照下述方法制备而成：
(1)取牡丹皮炭，乙醇提取，得乙醇浸膏；
(2)将乙醇浸膏用水溶解后，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分别萃取，得乙酸乙酯浸膏；
(3)取乙酸乙酯浸膏，用硅胶柱层析，依次以二氯甲烷：甲醇＝100：0、95：5、90：10、80：20、70：30、1：1、0：100(v/v)为洗脱剂进行梯度洗脱，根据薄层追踪，合并含有相似组分的洗脱液，得A-G七个组分。
(4)取含有式2化合物的组分C，用MCI柱层析，依次用甲醇：水＝40:60、60:40、80:20、100:0(v/v)为洗脱剂进行梯度洗脱，根据薄层追踪，合并含有相似组分的洗脱液，得C1-C4四个组分。
(5)取含有式2化合物的组分C1，用硅胶柱层析，依次用二氯甲烷：甲醇＝100：0、95：5、90：10、80：20、70：30、1：1、0：100(v/v)为洗脱剂进行梯度洗脱，根据薄层追踪，合并含有相似组分的洗脱液，即得C11-C17七个组分。
(6)取含有式2化合物的组分C14，分离纯化后，即得式2化合物。
进一步地，所述药物是促进凝血因子Ⅷ和/或凝血因子Ⅸ和/或凝血因子Ⅺ和/或凝血因子Ⅻ活性的药物。
进一步地，所述药物是促进纤维蛋白形成的药物。
进一步地，所述药物是以式2化合物为活性成分，加上药学上可接受的辅料制备而成的制剂。
本发明还提供了一种促凝血或止血药物，它是以式2化合物为活性成分，加上药学上可接受的辅料制备而成的制剂
进一步地，所述药物是促进凝血因子Ⅷ和/或凝血因子Ⅸ和/或凝血因子Ⅺ和/或凝血因子Ⅻ活性的药物。
进一步地，所述药物是促进纤维蛋白形成的药物。
进一步地，所述制剂为口服制剂或注射制剂。
实验结果表明，式2所示化合物能通过影响内源性凝血系统以及促进血浆中凝血因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ、Ⅻ的活性产生止血作用，同时也能促进凝血酶介导的纤维蛋白原的形成，而产生止血作用。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
具体实施方式
试验例1、化合物2止血作用实验
1主要材料
1)主要试剂与仪器
活化部分凝血活酶时间(APTT)检测试剂盒(批号：557216A)、纤维蛋白原含量(FIB)检测试剂盒(批号：46144)和凝血酶时间(TT)(批号：46582)检测试剂盒，均购自希森美康医用电子有限公司。
CA-1500全自动凝血仪(SYSMEX)；TGL-24MC台式高速冷冻离心机(杭州硕联仪器有限公司)。
2)受试药物
式2化合物可以购自Aurora Fine Chemicals company，San Diego，USA；也可以由以下方法制备。配制为0.0012g/mL的母液，测定是取母液用甲醇稀释至所需浓度，即刻使用。
制备方法：
将牡丹皮炭干燥药材35Kg，投进微型多功能提取罐中，分别倒入8倍量的95％乙醇，真空低温(60℃)回流提取三次，提取时间分别为4h、3h、3h。将得到的总提取液进行减压浓缩并挥干至无醇味，即得到牡丹皮炭95％乙醇提取总浸膏(1Kg)。
接着往95％乙醇提取总浸膏中加入1L蒸馏水并搅拌至均匀，制成总浸膏混悬液。然后依次用石油醚(bq60～90℃)、乙酸乙酯、正丁醇(各2L)对总浸膏混悬液进行3～5次的萃取，合并相同溶剂的萃取液并分别进行减压浓缩，得到石油醚部位浸膏(154g)、乙酸乙酯部位浸膏(270g)、正丁醇部位浸膏(178g)、水溶性部位浸膏(85g)。
将乙酸乙酯部位浸膏用300ml二氯甲烷、甲醇(1：1)混合液进行溶解，然后按照浸膏：硅胶＝1：1.5的比例加入405g硅胶(100-200目)进行拌样，待溶剂挥干后，进行硅胶(200-300目)柱层析，依次用二氯甲烷：甲醇＝100：0、95：5、90：10、80：20、70：30、1：1、0：100(v/v)为洗脱剂进行梯度洗脱，每个梯度2倍柱体积，对各组分利用薄层色谱定性检识，以5％磷钼酸的乙醇溶液与碘蒸气进行显色，合并相同的组分，得A-G七个组分。
取含有目标产物的组分C，用MCI柱层析，依次用甲醇：水＝40:60、60:40、80:20、100:0(v/v)为洗脱剂进行梯度洗脱，每个梯度2倍柱体积，对各组分利用薄层色谱定性检识，以5％磷钼酸的乙醇溶液与碘蒸气进行显色，合并相同的组分，得C1-C4四个组分。
其中含有目标产物的组分C1经硅胶柱色谱，依次用二氯甲烷：甲醇＝100：0、95：5、90：10、80：20、70：30、1：1、0：100(v/v)为洗脱剂进行梯度洗脱，每个梯度2倍柱体积，对各组分利用薄层色谱定性检识，以5％磷钼酸的乙醇溶液与碘蒸气进行显色，合并相同的组分，即得C11-C17七个组分。
其中含有目标产物的组分C14经Sephadex LH-20柱(甲醇洗脱)、重结晶等方法分离纯化。得到含单一成分组分，薄层显深蓝色及黑色点，过夜并挥干溶剂，得浅黄色针状结晶，即得式2化合物(4.5mg)。
3)受试动物
新西兰大耳白兔(南方医科大学实验动物中心，许可证号:SCXK(YUE)2016-0041)
2实验方法
(1)血浆样品的制备
用10.0％的水合氯醛(5g水合氯醛加入到50ml蒸馏水中；腹腔注射，0.3mL/100g)麻醉新西兰大耳白兔，心脏采血，以3.8％枸橼酸钠(血与抗凝剂体积比为9:1)抗凝(取血时要注意防止气泡形成，以免影响血小板功能的测定)，收集于真空采血管中(血凝管)，缓慢颠倒混匀3-4次，然后离心(3500r/min，15min)，吸取上清液。分别加入各浓度的化合物甲醇溶液(0.0012g/mL、0.0006g/mL、0.0003g/mL)，甲醇为阴性对照组，按各指标试剂盒的要求进行凝血指标活化部分凝血活酶时间(APTT)、纤维蛋白原含量(FIB)和凝血酶时间(TT)的测定,每个样品均测量三次，取平均值。
(2)统计学处理
根据化合物的凝血指标APTT、FIB、TT，采用“均数±标准差”(X2±S)表示，用SPSS21.0统计软件处理，各组间进行单因素方差分析(成组比较t检验及方差分析)，取α＝0.05为检验水准，综合评价化合物的凝血作用。
3实验结果
表1 式2化合物对体外凝血活性的影响(均值+标准差)
Figure BDA0001576460890000041
*P<0.05，**P<0.01，与空白组比较
从上表可以看出，不同浓度的化合物对凝血酶原时间PT、活化部分凝血活酶时间APTT、Fbg纤维蛋白原含量、凝血酶原时间TT的影响作用不同。随着式1化合物浓度的增加，APTT延长，Fbg值升高，且均和空白组具有显著性差异(APTT的0.0024高浓度除外)，TT低浓度和中浓度值缩短，高浓度延长，说明TT值和化合物浓度有关。
APTT和TT缩短(高浓度除外)，Fbg升高，说明化合物是通过影响内源性凝血系统凝血因子(Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ、Ⅻ)，促进凝血酶介导的纤维蛋白的形成来发挥止血作用。

Claims (7)

1.式2所示化合物在制备促凝血或止血药物中的用途，其特征在于：所述药物是以式2化合物为活性成分，加上药学上可接受的辅料制备而成的制剂；所述制剂为口服制剂或注射制剂；
Figure FDA0002422133020000011
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述式2化合物按照下述方法制备而成：
(1)取牡丹皮炭，乙醇提取，得乙醇浸膏；
(2)将乙醇浸膏用水溶解后，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分别萃取，得乙酸乙酯浸膏；
(3)取乙酸乙酯浸膏，用硅胶柱层析，依次以二氯甲烷：甲醇＝100：0、95：5、90：10、80：20、70：30、1：1、0：100(v/v)为洗脱剂进行梯度洗脱，根据薄层追踪，合并含有相似组分的洗脱液，得A-G七个组分；
(4)取含有式2化合物的组分C，用MCI柱层析，依次用甲醇：水＝40:60、60:40、80:20、100:0(v/v)为洗脱剂进行梯度洗脱，根据薄层追踪，合并含有相似组分的洗脱液，得C1-C4四个组分；
(5)取含有式2化合物的组分C1，用硅胶柱层析，依次用二氯甲烷：甲醇＝100：0、95：5、90：10、80：20、70：30、1：1、0：100(v/v)为洗脱剂进行梯度洗脱，根据薄层追踪，合并含有相似组分的洗脱液，即得C11-C17七个组分；
(6)取含有式2化合物的组分C14，分离纯化后，即得式2化合物。
3.根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于：所述药物是促进凝血因子Ⅷ和/或凝血因子Ⅸ和/或凝血因子Ⅺ和/或凝血因子Ⅻ活性的药物。
4.根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于：所述药物是促进纤维蛋白形成的药物。
5.一种促凝血或止血药物，其特征在于：它是以式2化合物为活性成分，加上药学上可接受的辅料制备而成的制剂；所述制剂为口服制剂或注射制剂；
Figure FDA0002422133020000021
6.根据权利要求5所述的药物，其特征在于：所述药物是促进凝血因子Ⅷ和/或凝血因子Ⅸ和/或凝血因子Ⅺ和/或凝血因子Ⅻ活性的药物。
7.根据权利要求5所述的药物，其特征在于：所述药物是促进纤维蛋白形成的药物。
CN201810136581.XA 2018-02-09 2018-02-09 一种新天然产物制备促凝血或止血药物中的用途 Active CN108295059B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810136581.XA CN108295059B (zh) 2018-02-09 2018-02-09 一种新天然产物制备促凝血或止血药物中的用途

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810136581.XA CN108295059B (zh) 2018-02-09 2018-02-09 一种新天然产物制备促凝血或止血药物中的用途

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN108295059A CN108295059A (zh) 2018-07-20
CN108295059B true CN108295059B (zh) 2020-07-07

Family

ID=62865074

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810136581.XA Active CN108295059B (zh) 2018-02-09 2018-02-09 一种新天然产物制备促凝血或止血药物中的用途

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN108295059B (zh)

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PL2349300T3 (pl) * 2008-11-10 2020-03-31 Moleac Pte Ltd. Terapia skojarzona do leczenia pacjentów z zaburzeniami neurologicznymi i udarem niedokrwiennym mózgu

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Box-Behnken响应面法优化牡丹皮炭炮制工艺;朱琼花等;《中国实验方剂学杂志》;20150731;第21卷(第14期);12-15 *
牡丹皮炭乙酸乙酯部位化学成分研究;莫毛燕;《中国优秀硕士学位论文全文数据库 医药卫生科技辑》;20170115;摘要,15,37-44,48 *
牡丹皮炭及其止血活性部位对大鼠血小板聚集性及血栓素B2和6-酮-前列腺素F1α的影响;李娴等;《中国实验方剂学杂志》;20091130;第15卷(第11期);41-43 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN108295059A (zh) 2018-07-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Koo et al. Platelet anti-aggregatory and blood anti-coagulant effects of compounds isolated from Paeonia lactiflora and Paeonia suffruticosa
JP5567763B2 (ja) 心臓−脳血管の疾病に対する伝統的中国医学の調合剤およびその製造方法
KR20040074614A (ko) 초본식물, 시스탄체 투부로사(스첸크) 위그트로부터추출되는 페닐에타노이드 글리코시드를 함유하는 의약제제, 그것의 제조방법, 및 그것의 사용
CN111187365B (zh) 月季花多糖、提取方法及其在制备抗凝血药物方面的应用
US2134256A (en) Process of producing and refining organ extracts
CN108295059B (zh) 一种新天然产物制备促凝血或止血药物中的用途
Li et al. Isolation and identification of hemostatic ingredients from Lamiophlomis rotata (Benth.) Kudo
Ding et al. Kinetics of ultrasound-assisted extraction of flavonoids and triterpenes and structure characterization of Chinese northeast black bee propolis
CN107936069B (zh) 一种促凝血苹果花有效成分及其提取分离方法、应用
Ablat et al. Investigating the hemostatic effect of medicinal plant Arnebia euchroma (Royle) IM Johnst extract in a mouse model
CN108299348B (zh) 一种牡丹皮炭天然产物在制备抗凝血药物中的用途
CN107162926B (zh) 三七素的提取方法及其应用及三七氨基酸的提取方法
CN111748024A (zh) 美洲大蠊多肽的制备方法
WO2019113861A1 (zh) 一种银杏提取物药用原料及其制备方法
KR20140000658A (ko) 항-빈맥성 부정맥을 위한 조제용 물질 및 이의 제조방법
CN110934899B (zh) 一种旱莲草凝血止血活性成分的提取方法及应用
CN113121716B (zh) 一种促凝血紫荆花多糖及其提取分离方法和应用
CN1830465A (zh) 香丹注射液及其制备方法
CN102755366A (zh) 一种含有绿原酸化合物的金银花软胶囊
CN108159146B (zh) 一种用于降血脂的中药组合物及制备方法
CN106176873B (zh) 一种荠菜总生物碱提取物及其制备方法和应用
CN112645996B (zh) 一种促凝血桃花有效成分及其提取分离方法和应用
US3832343A (en) Process for obtaining an extract of arnica montana
CN111635352B (zh) 一种中药血盆草中的吲哚类生物碱及其提取纯化方法和应用
CN115745933B (zh) 牛尾蒿倍半萜内酯a-n及其药物组合物和其制备方法与应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant