CN108210935A - 抗体药物偶联物、制备方法、中间体、药物组合物及应用 - Google Patents

抗体药物偶联物、制备方法、中间体、药物组合物及应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种抗体药物偶联物、制备方法、中间体、药物组合物及应用。本发明的抗体药物偶联物如式IB所示。本发明的抗体药物偶联物细胞毒性高，抗癌效果好，具有良好的市场应用前景。

Description

抗体药物偶联物、制备方法、中间体、药物组合物及应用
技术领域
本发明涉及一种抗体药物偶联物、其制备方法、中间体、药物组合物及应用。
背景技术
典型的抗体药物偶联物(ADC)包含能够与癌细胞表面特异性抗原相结合的单克隆抗体(mAbs)，并通过一个可裂解的连接单元将这些特异性抗体与强毒性药物进行连接。ADC的作用机理是通过抗体识别并与特异性抗原结合，引发一系列反应，进而通过细胞 内吞进入细胞质内，溶酶体酶将强毒性药物释放杀死癌细胞。相比传统化疗对正常组织 的无差别损伤，ADC通过靶向给药，可以使药物直接作用于癌细胞，减少了其对正常细 胞的损害。
ADC中的单克隆抗体包括免疫系统B细胞和T细胞表面的一些蛋白，比如CD20、CD22以及人表皮生长因子受体2(Her2)和前列腺特异性膜抗原(PSMA)等。
目前大部分抗体药物偶联物使用Seattle Genetics的auristatins、ImmunoGen的美登素 类，Spirogen公司的PBD dimer类，或蒽环类抗生素作为有效毒素。蒽环类抗生素为表 现细胞毒素活性的抗生素化合物，包括阿霉素(doxorubicin)、表柔比星(epirubicin)、伊 达比星(idarubicin)和伊达比星(daunorubicin)等。研究表明蒽环类抗生素可通过多种 不同机制杀死细胞，包括：1)将药物分子嵌入细胞的DNA中，抑制DNA依赖性核酸合 成；2)通过自由基药物的产生并与细胞大分子反应引起细胞的损伤；3)药物分子与细胞 膜的相互作用。由于蒽环类抗生素的细胞毒性潜力，它们已经用于治疗包括白血病、乳 腺癌、肺癌、卵巢癌等多种癌症。
近几年来，人们合成了一些结构新颖的高细胞毒性的蒽环类抗生素，奈莫柔比星具 有强烈的抗肿瘤活性，目前正在进行肝癌治疗的临床实验，具有较高的开发前景(J.W.Lown,Bioactive Molecules,1988,6,55；C.Sessa,O.Valota,C.Geroni,CardiovascularToxicology,2007,7,75)。M.Caruso等也报道了来自肝微体的奈莫柔比星代谢产物PNU-159682等一系列高抗癌活性的三环吗啉取代蒽环类衍生物(WO 98/02446)。PNU-159682 在具有比奈莫柔比星更强的体外和体内肿瘤模型细胞毒性(Beulz-Riche,et.al.Fundamental&Clinical Pharmacology,2001,15,373,；Quintieri,L.,Geroni,C.,et.al.Clinical. Cancer.Research.,2005,11,1608；EP 0889898；WO 2004/082689；WO2004/082579)。
这类高活性蒽环类抗生素表现出的毒性与其给药剂量密切相关，这大大限制了其治 疗效果。通过将其与抗体或其他不同的载体进行连接，可以改善它们的治疗效果(Tolcher., et al.,J.Clin.Oncology.,1999,17,478,；Ajani et.al.,Cancer.Jour.,2000,6,78,；Saleh et al.,J. Clin.Oncology.,2000,18,2282,；Nagy.,et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.,2000,97,829,；Dubowchik et al.,Bioorg.&Med.Chem.Lett.；2002,12,1529,；King.,et al.,J.Med.Chem.,2002,45,4336,； Torgov.,et al.,Bioconj.Chem.,2005,16,717,；Jeffrey.,et al.,Bioorganic&Med.Chem.Lett.； 2006,16,358,；Kratz.,et al.,Current.Med.Chem.,2006,13,477,；Bristol Mayers,EP0328147； Farmitalia Carlo Erba,WO 9202255；Pharmacia&Upjohn,US5776458Genentech, WO2009/099741；WO2010/009124；CN 102159248(2011)；US8389697；US8470984；Shang- Fan Yu et.al.；Clin.Cancer.Res.；2015,21,3298；WO2015/089344；WO2015/095223；WO 2016/040825)。在癌症治疗中，使用抗体药物偶联物将能够杀伤或者一直肿瘤细胞的毒素 药物靶向输送到肿瘤，在寻求药物最大功效的通式可以显著提高选择性，降低抗肿瘤药 物的毒副作用(Xie et al.,Expert.Opin.Biol.Ther.,2006,6,281.；Kovtun et al.,Cancer.Res., 2006,66,3214.；Law et al,Cancer.Res.,2006,66,2328.；Wu et al,Nature.Biotech.2005,23, 1137.；Lamber J.et al.Current.Opin.inPharmacol.2005,5,543.；Hamann P.et al.,Expert.Opin. Ther.Patents.,2005,15,1087.；Payne,G.,Cancer.Cell.2003,3,207.；Trail et al,Cancer.Immunol.Immunother.,2003,52,328.)。
典型的抗体药物偶联物中，抗体和药物的选择取决于特定的疾病，其对抗体药物偶 联物的安全性和有效性具有重要影响。决定抗体药物偶联物疗效的因素包括连接单元的 稳定性及其断裂敏感性，细胞表面激发内化、转运和细胞毒素的释放。例如T-DM1，其 细胞毒性远低于部分蒽环类抗生素，且容易在抗原结合蛋白(Abu)内吞之前过早降解并 释放毒素，引起副作用，同时其与抗体偶联得到的药物/抗体比例较低而且分布变化比较 大，药效和安全性精确控制的难度较大(如专利申请WO2012/061590A1或 WO201139721)。
因此，寻找稳定性高，水溶性好的连接体，进而得到细胞毒素的释放效率高、特异性 好、细胞毒性高、抗癌效果好的抗体药物偶联物是目前亟需解决的技术问题。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是为了克服现有技术中缺乏细胞毒素的释放效率高、细 胞毒性高、抗癌效果好的抗体药物偶联物，而提供了一种抗体药物偶联物、制备方法、中间体、药物组合物及应用。本发明的抗体药物偶联物细胞毒性高，抗癌效果好，具有良好 的市场应用前景。
本发明提供了一种如式IB所示的抗体药物偶联物，其互变异构体、光学异构体、水合物、溶剂化物、多晶型物、同位素化合物、其药学上可接受的盐或其前药，
其中，mAb为单克隆抗体片段(所述的单克隆抗体包括但不限于赫赛汀、抗TPBG(胚胎滋养层糖蛋白)抗体、抗CD70抗体或抗EGFRVIII(表皮生长因子受体)抗 体；所述的单克隆抗体可为本领域常规的单克隆抗体，只要能与如式IB所示的抗体药 物偶联物中除mAb外的片段形成抗体药物偶联物即可。)
0<k≤8(优选地，0<k≤6，例如0.3、0.73、3.21、3.76、2.65、3.96、3.31、2.98、1.80、2.23、2.57、1.89、1.63、2.63、3.05、1.53、1.68、3.10、1.47、3.20、1.56、1、2、3、4、5或6)；
R1为氢、羟基、C1-6烷氧基(例如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基或叔丁氧基)、C1-6烷基(例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基 或叔丁基)、-NRaRb或-C(O)NRcRd；Ra、Rb、Rc和Rd各自独立地为氢、C1-6烷基(例如甲 基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基或叔丁基)或C6-10芳基(例如苯基)；
R2和R3各自独立地为C1-6烷基(例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基 或叔丁基)、C1-6烷氧基(例如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧 基或叔丁氧基)或C1-6烷硫基(例如甲硫基、乙硫基、正丙硫基、异丙硫基、正丁硫基、 异丁硫基或叔丁硫基)；
X为或
Y为或(优选为或)；R4a和R4b各自独立地为氢、C1～4烷基(例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基或叔丁基)、 C3～6环烷基取代的C1～4烷基(所述的C1～4烷基例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、 异丁基或叔丁基；所述的C3～6环烷基例如环丙基；所述的C3～6环烷基取代的C1～4烷基优选 环丙基甲基)、C3～6环烷基(例如环丙基)、C2-8杂烷基(所述的C2-8杂烷基中的杂原子可为 O、S和N中的一种或多种，杂原子的个数可为1、2、3或4；优选地，所述的C2-8杂烷基为 CH3OCH2-)、或-(OCH2CH2)j1OH；j1为1、2、3、4、5、6、7或8；
Z为或4-6元亚杂芳基(所述的4-6元亚杂芳基中 的杂原子优选N、O和S中的一种或多种；杂原子个数优选1个、2个或3个；所述的4-6元亚 杂芳基可为4元、5或元6元亚杂芳基；所述的5元亚杂芳基优选或)；R5a和R5b各自独立地为氢或C1～4烷基(例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基或 叔丁基)；
或者，为(优选地，当所述的X为时，为)；
R6为氢、C1～4烷基(例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基或叔丁基)、C2-8杂烷基(所述的C2-8杂烷基中的杂原子可为O、S和N中的一种或多种，杂原子的个数 可为1、2、3或4；优选地，所述的C2-8杂烷基为CH3OCH2-)、或-(OCH2CH2)j2OH；j2为1、 2、3、4、5、6、7或8；
p为0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；且当Z为时，p不为0；
m为0或1；
E为或；R7a和R7b各自独立地为氢、C1～4烷基(例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基或叔丁基)、C3～6环烷基取代的C1～4烷 基(所述的C1～4烷基例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基或叔丁基；所 述的C3～6环烷基例如环丙基；所述的C3～6环烷基取代的C1～4烷基优选环丙基甲基)、C3～6环烷基(例如环丙基)、C2-8杂烷基(所述的C2-8杂烷基中的杂原子可为O、S和N中的 一种或多种，杂原子个数可为1、2、3、4、5或6，所述的C2-8杂烷基例如CH3OCH2-)、 或-(OCH2CH2)j3OH；j3为1、2、3、4、5、6、7或8；
n为0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；当有多个E时(即当n大于等于2时)，E可 以相同或不同(例如可为 或)，
u为0或1；
R8为氢、C1～4烷基(例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基或叔丁基)、C3～6环烷基取代的C1～4烷基(所述的C1～4烷基例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁 基、异丁基或叔丁基；所述的C3～6环烷基例如环丙基；所述的C3～6环烷基取代的C1～4烷 基优选环丙基甲基)、C3～6环烷基(例如环丙基)、C2-8杂烷基(所述的C2-8杂烷基中的杂 原子可为O、S和N中的一种或多种，杂原子个数可为1、2、3、4、5或6，所述的C2-8杂烷基例如CH3OCH2-)、或-(OCH2CH2)j4OH；j4为1、2、3、4、5、6、7或8；
q为0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；当含有多个-C(R8)-时(即当q大于等于2时)，-C(R8)-可以相同或不同(例如可为)；
y为0～24的整数(例如0、1、2、3、4、5或6)；
G为
s为0或1；
Q为或t1、t3和t4各自独立地为0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
本发明中，k表示药物分子与mAb的摩尔比(又称DAR，即药物抗体偶联比率)，优 选地理解为是：单个单克隆抗体分子与药物偶联后得到的抗体偶联药物中的药物分子与 单克隆抗体分子的摩尔比的平均值，一般可以采用疏水层析(Hydrophobic-InteractionChromatography，HIC)，聚丙烯酰胺-SDS凝胶电泳(SDS-PAGE，electrophoresis)，液相 质谱(liquid chromatograph-mass spectrometer，LC-MS)等方式测定得到。
在本发明一优选实施方案中，k可为0.43、0.49、2.56、5.64、2.26、2.17或2.83。
在本发明一优选实施方案中，E为 或
E中，e1、e2、e3、e4、e5和e6各自独立地为0、1、2、3、4、5、6、7或8；R7a、R7b、 R7c、R7d、R7e、R7f和R7h各自独立地为氢、C1～4烷基、C3～6环烷基取代的C1～4烷基、C3～6环 烷基、C2-8杂烷基、-(OCH2CH2)j3OH或j3为1、2、3、4、5、6、7或 8；
中：r1、r2、r3和r4独立地为0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或 10；R6e为氢、C1～4烷基、C2-8杂烷基或-(OCH2CH2)j2aOH；j2a为1、2、3、4、5、6、7或8； R8e为氢、C1～4烷基、C3～6环烷基取代的C1～4烷基、C3～6环烷基、C2-8杂烷基或-(OCH2CH2)j4aOH； j4a为1、2、3、4、5、6、7或8；Re为糖基(例如葡萄糖基或麦芽糖基)、 Fmoc()或-(OCH2CH2)enOH，en为0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、 11或12。优选下列结构： 或
所述的如式IB所示的抗体药物偶联物中：优选或
优选地，R1中，所述的-NRaRb为甲胺基或二甲胺基。
优选地，当Z为时，p不为0。
优选地，当所述的Z为时，p优选为0，m优选为1。
优选地，当Y为时(优选地为当X为，Y为时)，Z优选为p优选为1；m优选为0；n优选为1；E优选为；u优选为0或1；q优选为2；y优选为 2；s优选为0或1(当u为1时，S优选为0)；G优选Q优选为或(且当G为时，Q优选为)。
优选地，当Y为时(优选为当X为，Y为时)，Z优选为 或
优选地，当Y为，Z时，p不为0。
优选地，为以下任一结构：
其中，R4a、R4b、R5a和R5b的定义同上所述。
更优选地，所述的为以下任一结构：
优选地，所述的为以下任一结构：
其中，R4a、R4b、R5a、R5b和R6的定义同上所述。
更优选地，所述的为以下任一结构：
最优选地，所述的为以下任一结构：
在本发明一优选实施方案中，所述的为以下结构：
本发明所述的如式IB所示的抗体药物偶联物中的药物分子片段中涉及的取代基种类和手性中心的构型可参照本领域该类药物分子(即蒽环类抗生素，如阿霉素、表柔比星、伊达比星、伊达比星、奈莫柔比星、PNU-159682等)的常规进行选择，例如，优选最优选
如式IB所示的抗体药物偶联物优选为式IB-1所示的化合物：
其中，R1、R2、R3、X、Y、Z、R6、p、m、E、n、u、R8、q、y、G、s和Q的定义同 上所述。
优选地，所述的如式IB所示的抗体药物偶联物选自以下任一化合物，下述化合物中 的mAb为赫赛汀、抗TPBG抗体、抗CD70抗体或抗EGFRVIII抗体：
在本发明一优选实施方案中，所述的如式IB所示的抗体药物偶联物为下列化合物：
所述的如式IB所示的抗体药物偶联物中，所述的单克隆抗体通过氨基酸残基中的巯 基或氨基进行反应从而与所述的相连生成了这一结构，当Q为或 时，其中的S原子来自所述单克隆抗体中的巯基；当Q为 时，其中的NH来自所述单克隆抗体的氨基。
本发明还提供了一种所述的如式IB所示的抗体药物偶联物的制备方法，其包括以下 步骤：有机溶剂中，在pH值为6-8的条件下，将IA化合物与单克隆抗体进行如下所示 的偶联反应，得到所述的如式IB所示的抗体药物偶联物，即可；
其中，k、R1、R2、R3、X、Y、Z、R6、p、m、E、n、u、R8、q、y、G、s、Q和mAb 定义同上所述；
Q1为或；t1、 t3和t4的定义同上所述。
所述的如式IB所示的抗体药物偶联物的制备方法，可参照本领域中该类偶联反应的 常规方法和条件，具体可参照文献Gail D.Lewis Phillips,et al.,Cancer.Res.,2008,68,9280 和Teemu T.Junttila,et al.,Breast.Cancer.Res.Treat.,2011,128,34，本发明特别优选如下方 法：
所述的有机溶剂优选酰胺类溶剂、亚砜类溶剂和醚类溶剂中的一种或多种。所述的 酰胺类溶剂优选N,N二甲基甲酰胺(DMF)和/或二甲基乙酰胺(DMA)；所述的亚砜类溶 剂优选二甲亚砜(DMSO)。所述的醚类溶剂优选四氢呋喃。
所述的IA化合物与所述的有机溶剂的质量体积比优选0.1mg/mL-100mg/mL。
所述的IA化合物与所述的单克隆抗体的摩尔比值优选1-10(例如6)，优选1-5。
所述的pH值优选7.5。所述的pH值为6-8的条件可通过在反应溶液中添加缓冲溶液实 现；所述的缓冲溶液一般为低盐缓冲液，优选磷酸盐缓冲溶液(例如磷酸钾与磷酸二氢钾形成的缓冲溶液)或硼酸缓冲溶液(例如硼酸和硼酸钠形成的缓冲溶液)。
所述的偶联反应的温度优选4℃～37℃，更优选10～35℃。
所述的单克隆抗体优选透析后的单克隆抗体。所述的透析的方法可为本领域单克隆 抗体透析常规的方法。
所述的偶联反应优选在气体保护下进行；当所述的偶联反应在气体保护下进行时， 所述的气体优选氮气。
所述的如式IB所示的抗体药物偶联物的制备方法中，优选包括以下步骤：在pH值为 6-8的缓冲溶液中，将透析后的单克隆抗体与所述的IA化合物和所述的有机溶剂混合，进 行所述的偶联反应，即可。所述的“将透析后的单克隆抗体与所述的IA化合物和所述的有机溶剂混合”的混合顺序没有特殊的限定，一般为将所述的IA化合物和所述的有机溶 剂加入到所述的透析后的单克隆抗体中即可。
所述的式IB抗体药物偶联物的制备方法中，所述的偶联反应的进程可以采用本领域 中的常规测试方法(如TLC、HPLC或NMR)进行监控，一般以IA化合物消失时为反应的 终点。
所述的IA化合物，本领域技术人员根据本发明具体实施方式公开的内容，结合本领 域常规实验技术手段均可以制备得到。
本发明还提供了一种IA化合物，
其中，R1、R2、R3、X、Y、Z、R6、p、m、E、n、u、R8、q、y、G、s和Q1的定义 同上所述。
所述的IA化合物中的药物分子片段的定义同上所述。
所述的IA化合物优选为IA-1所示的化合物：
其中，R1、R2、R3、X、Y、Z、R6、p、m、E、n、u、R8、q、y、G、s和Q1的定义 同上所述。
优选地，所述的IA化合物选自以下任一化合物：
在本发明一优选实施方案中，所述的IA化合物为下列化合物：
本发明还提供了一种IC-1、IC-2或IC-3化合物：
其中，R1、R2、R3、X、Y、Z、R6、p、m、E、n、u、R8、q和y的定义同上所述，R9为
所述的IC-1、IC-2和IC-3化合物中的药物分子片段的定义同上 所述。
所述的IC-1化合物优选IC-1-1化合物：
所述的IC-1化合物更优选以下任一化合物：
在本发明一优选实施方案中，所述的IC-1化合物优选以下任一化合物：
所述的IC-2化合物优选为IC-2-1化合物：
更优选以下化合物：
所述的IC-3化合物优选为IC-3-1化合物：
所述的IC-3化合物更优选为以下任一化合物：
所述的IC-1化合物、IC-2化合物和IC-3化合物，本领域技术人员根据本发明具体实施 方式公开的内容，结合本领域常规实验技术手段均可以制备得到。
本发明还提供了所述的如式IB所示的抗体药物偶联物、其互变异构体、光学异构体、 水合物、溶剂化物、多晶型物、同位素化合物、其药学上可接受的盐或其前药在制备用于 治疗和/或预防癌症的药物中的应用。
本发明还提供了所述的IA化合物、其互变异构体、光学异构体、水合物、溶剂化物、多晶型物、其药学上可接受的盐或其前药在制备用于治疗和/或预防癌症的药物中的应用。
本发明还提供了所述的IC-1、IC-2或IC-3化合物、其互变异构体、光学异构体、水合 物、溶剂化物、多晶型物、同位素化合物、其药学上可接受的盐或其前药在制备用于治疗和/或预防癌症的药物中的应用。
本发明所述的癌症可以为本领域中常规的癌症，包括但不限于乳腺癌、淋巴癌、肺癌、肝癌、结肠癌、头颈癌、膀胱癌、肾癌、食道癌、胆囊癌、卵巢癌、胰腺癌、胃癌、 宫颈癌、甲状腺癌、前列腺癌、皮肤癌包括鳞状细胞癌；白细胞过多症、急性淋巴细胞性 白血病、急性成淋巴细胞性白血病、B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍 奇金淋巴瘤、毛细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、急性和慢性髓细胞性白血病、骨髓增生异常 综合征、前髓细胞白血病、纤维肉瘤、横纹肌肉瘤、星形细胞瘤、神经目细胞瘤、胶质瘤、 神经鞘瘤、黑色素瘤、精原细胞瘤、畸胎癌、骨肉瘤、着色性干皮病、角质黄色瘤、甲状 腺滤泡癌和卡波西肉瘤。所述的癌症的肿瘤细胞包括但不限于Her2阳性的人BT474乳腺 肿瘤细胞、Her2低表达的人MCF-7乳腺肿瘤细胞、或在MCF-7外转Her2的人乳腺肿瘤 MCF7-Her2稳转细胞株。
本发明还提供了一种药物组合物，其包含所述的如式IB所示的抗体药物偶联物，其 互变异构体、光学异构体、水合物、溶剂化物、多晶型物、同位素化合物、其药学上可接受的盐或其前药，以及一种或多种药学上可接受的辅料。
本发明还提供了一种药物组合物，其包含所述的IA化合物，其互变异构体、光学异构体、水合物、溶剂化物、多晶型物、同位素化合物、其药学上可接受的盐或其前药，以 及一种或多种药学上可接受的辅料。
本发明还提供了一种药物组合物，其包含所述的IC-1、IC-2或IC-3化合物，其互变异 构体、光学异构体、水合物、溶剂化物、多晶型物、同位素化合物、其药学上可接受的盐或其前药，以及一种或多种药学上可接受的辅料。
本发明中，所述的药学上可接受的辅料是指药学领域常规的药用辅料，是为解决制 剂的成型性、有效性、稳定性、安全性加入的除本发明的抗体药物偶联物以外的一切常规药用物料，如稀释剂(如羧甲淀粉钠等)、粘合剂(如聚维酮等)、崩解剂(如微晶纤维 素等)、润滑剂(如硬脂酸镁、微粉硅胶等)、以及其它辅助剂。根据需要，可选择上述辅 料，按本领域常规方法，将本发明的抗体药物偶联物制成药物制剂；所述的药物制剂为 本领域各种常规剂型，如片剂、散剂、丸剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液、干混悬剂或滴丸 剂等。
本文所用术语“同位素化合物”是指本发明的抗体药物偶联物、所述的IA化合物、所述的IC-1、IC-2或IC-3化合物、其互变异构体、光学异构体、水合物、溶剂化物、多晶 型物、同位素化合物、其药学上可接受的盐或其前药中含有一个或多个天然或非天然丰 度的原子同位素。非天然丰度的原子同位素包括但不限于氘(2H或D)、氚(3H或T)、碘- 125(125I)、磷-32(32P)、碳-13(13C)或碳-14(14C)。前述同位素化合物还可用作治疗或诊断剂 (即，体内显影剂)，或研究工具。本发明的化合物的所有同位素变体，无论是否具有放射 性，都包括在本发明的范围内。
本发明中，所述的术语“卤素”表示氟、氯、溴、碘或砹。
本发明中，所述的术语“氰基”表示-CN。
本发明中，杂烷基(C2-8杂烷基)一般指烷基(包括支链或直链烷基)中的一个或多个CH2结构被杂原子(例如O、S或NH)替代，且以碳原子与其他基团进行连接，例如 CH2OCH2-、CH3CH2OCH2-或CH2OCH(CH3)-等等。
本发明涉及含有两个连接位点的基团(如G或Q等)，其连接方式一般理解为按照该基团的所示结构的左右顺序方式连接到相应的化合物或结构中，例如当G为时，在式IB化合物中其连接方式如下所示：
又如，当Q为，时，在式IB化合物中其连接方式一般如下所示：
本发明所述的室温指环境温度，为10℃～35℃。
在不违背本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。
本发明所用试剂和原料均市售可得。
本发明的积极进步效果在于：
本发明使用高细胞毒性的蒽环类化合物抗生素为毒素，设计合成了一系列结构新颖、 对酸和肽酶组织蛋白酶稳定的抗体药物偶联物，优选地使用水溶性好的糖基进行取代并 使用稳定性好的醚键进行连接，明显提高了水溶性和稳定性，体外活性测试表明其具有更高的细胞毒性，有良好的市场应用前景。
相对于以美登醇，Auristatin等传统药物为毒素的抗体药物偶联物，本发明的抗体药 物偶联物表现出更高癌细胞杀伤活性。
具体实施方式
下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施 例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。
IA-1和IA-2的合成路线：
C-L-081为：
C-L-004为：
实施例1IA-1的合成
(1)化合物2的合成
取原料1(224mg,0.35mmol)溶于40mL甲醇和30mL水中，加入高碘酸钠(90mg,0.42mmol)溶于5mL水后的溶液。反应液室温搅拌1.5小时，LCMS检测原料已经完全 转化为产物，减压移除甲醇，剩余物冷冻干燥得粗产品，加入100mL二氯甲烷溶解产物， 过滤，滤液浓缩得粗产品210mg，直接用于下一步反应。LCMS(ESI)m/z＝628.7(M+H)+。
(2)化合物3的合成
上一步制得的化合物2(188mg,0.3mol)溶于20mL干燥二氯甲烷中，加入HATU(228mg,0.6mmol)和DIPEA(0.25mL，1.5mmol)，再加入胺2a(156mg,0.45mmol)，反 应液室温搅拌2小时。减压移除溶剂，剩余物硅胶柱层析(二氯甲烷/丙酮＝5:1)纯化得 产品120mg，为红色固体，产率44％，LCMS(ESI)m/z＝920.7(M+H)+。
(3)化合物4的合成
将化合物3(28mg,0.03mmol)溶于2mL乙腈中，冰水浴冷却至0℃，加入二乙胺1 mL升至室温搅拌1.5小时，常温减压移除乙腈和二乙胺，并用二氯甲烷带二乙胺两遍， 得到30mg粗产品化合物4(红色固体)，直接用于下一步反应。LCMS(ESI)m/z＝698.7 (M+H)+。
(4)化合物IA-1的合成
将上一步制得的反应粗产物4(21mg,0.03mmol)溶于2mL干燥二氯甲烷中，加入 C-L-081(28mg,0.06mol)和三乙胺(6μL,0.045mmol)。反应液室温搅拌2小时，减压移 除溶剂，剩余物制备TLC(二氯甲烷/乙酸乙酯/甲醇＝50:50:1)纯化得13mg产品IA-1， 红色固体，产率41％。LCMS(ESI)m/z＝1072.3(M+H)+。
1HNMR(400MHz,d-CDCl3)δppm 1.34-1.25(m,6H),1.38(d,J＝6.4Hz,3H),1.55-1.60 (m,2H),1.73-1.79(m,1H),1.91-2.00(m,1H),2.18(t,J＝7.2Hz,2H),2.35-2.42(m,1H), 2.62(t,J＝7.2Hz,2H),2.69-2.82(m,2H),2.94-3.08(m,4H),3.37-3.62(m,20H),4.72-4.94 (m,4H),4.05(d,J＝5.6Hz,2H),4.09(s,3H),4.47(s,1H),4.71(s,1H),5.32-5.37(m,1H),5.54 (t,J＝6.0Hz,1H),6.68(s,2H),7.40(d,J＝8.4Hz,1H),8.81(t,J＝8.4Hz,1H),8.04(d,J＝8.0Hz, 1H),13.36(s,1H),13.95(s,1H)。
实施例2IA-2的合成
上一步反应粗产物4(21mg,0.03mmol)溶于2mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入C-L-004(44mg,0.06mol)和三乙胺(6μL,0.045mmol)。反应液室温搅拌2小时，减压移除溶 剂，剩余物制备TLC(二氯甲烷/丙酮/甲醇＝50:50:1)纯化得6mg产品IA-2，为红色固 体，产率15％。LCMS(ESI)m/z＝1296.7(M+H)+。
化合物IA-3，037和039的合成路线：
其中，C-L-066为：
SMCC为：
McOSu：
实施例3IA-3的合成
(1)化合物2-1的合成
N-甲基乙醇胺(2g,26.7mmol)溶于50mL二氯甲烷中，加入Boc2O(5.9g,27.2mmol)。反应液室温搅拌2小时，浓缩，剩余物硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝1:1)纯化 得产品4.5g，为无色油状物，产率96％。
(2)化合物3-1的合成
上一步反应产物2-1(1.4g,8mmol)溶于50mL四氢呋喃中，冰水浴冷却至0℃， 分批缓慢加入氢化钠(384mg,60％悬浮于矿物油，9.6mmol)，0℃搅拌20分钟，加入炔 丙基溴(1.4mL,16mmol)，逐步升至室温搅拌2小时，冰水浴冷却至0℃，逐滴缓慢加 入10mL饱和氯化铵溶液淬灭反应，乙酸乙酯萃取3次(40mL×3)，合并有机相，无水 硫酸钠干燥，浓缩，剩余物硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝10:1至5:1)纯化得1.5g产 品3-1，为浅黄色油状物，产率79％。LCMS(ESI)m/z＝236.7(M+H)+。
(3)化合物4-1的合成
上一步反应产物3-1(640mg,3mmol)溶于5mL二氯甲烷中，冰水浴冷却至0℃， 加入盐酸气的1,4-二氧六环溶液(10mL,4N,40mmol)，反应液室温搅拌2小时，减压 浓缩，得700mg粗产品4-1，为浅黄色油状物，直接用于下一步反应。LCMS(ESI)m/z＝114.7 (M+H)+。
(4)化合物5-1的合成
上一步反应产物4-1(1.13g,10mmol)溶于50mL二氯甲烷中，加入三乙胺(2.8mL,20mmol)，冰水浴冷却至0℃，分批加入Fmoc-Cl(3.1g,12mmol)。反应液升温至室温 搅拌2小时，减压浓缩，往剩余物中加入50mL乙酸乙酯，饱和食盐水洗3次(30mL×3)， 无水硫酸钠干燥，浓缩，粗产品经硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝5:1to 2:1)得1.5 g产品5-1，为浅黄色油状物，产率50％。LCMS(ESI)m/z＝336.1(M+H)+。
(5)化合物7-1的合成
化合物6-1(2g,3.5mmol)溶解在120mL的甲醇和1,4-二氧六环(1:2)混合溶剂 中，加入原甲酸酯(2mL,18.3mmol)，混合物常温搅拌30分钟。然后逐滴加入液溴的 氯仿溶液(w/v＝1:9,6.8mL,4.3mmol)，反应液在30℃下搅拌40分钟，待反应完全后 直接倒入2L的无水乙醚中，过滤，得到的粗产物用丙酮和乙醚(1:1,25mL)重结晶， 得到1.8g的化合物7-1，其为红色固体，收率78％。LCMS(ESI)m/z＝606.4(M+H)+。
(6)化合物8-1的合成
化合物7-1(1.5g,3mmol)溶解在50mL的四氢呋喃中，加入叠氮化钠(390mg,6mmol)，上述混合物常温搅拌过夜。浓缩，得到的粗产物用100mL甲醇溶解后加入硅胶 (20g,100-200目)，旋干后经过快速分离柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇＝10:1)，得到750 mg产物8-1，其为红色固体，产率53％。LCMS(ESI)m/z＝569.2(M+H)+。
(7)化合物9-1的合成
参考专利(GB296495、WO1998/002446、WO2012/073217,WO2014/177441，如WO1998/002446第7页实施例1)合成PNU-159682的方法，制备得到化合物9-1，其为 红色固体，产率23％。LCMS(ESI)m/z＝667.2(M+H)+。
(8)化合物10-1的合成
称取上一步反应产物9-1(40mg,0.12mmol)和化合物5-1(40mg,0.06mmol)于茄 型瓶中，加入2mL叔丁醇和2mL甲醇，依次加入抗坏血酸钠(Sodium Ascorbate)(6 mg,0.03mmol)和硫酸铜(10mg,0.06mmol)，反应液室温搅拌过夜。加入5mL水，乙 酸乙酯萃取3次(20mL×3)，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗产品经硅胶柱层析(二氯甲烷/乙酸乙酯＝1:4)纯化得34mg产品10-1，为红色固体，产率57％。LCMS(ESI)m/z＝1002.7 (M+H)+。
(9)化合物11-1的合成
上一步反应产物10-1(15mg,0.015mol)溶于1mL乙腈中，冰水浴冷却至0℃，加 入二乙胺0.5mL，升至室温搅拌1.5小时，常温减压移除乙腈和二乙胺，并用二氯甲烷 带二乙胺两遍，得到15mg粗产品11-1，为红色固体，直接用于下一步反应。LCMS(ESI) m/z＝780.3(M+H)+。
(10)化合物IA-3的合成
化合物11-1(23mg,0.03mmol)溶解在10mL的二氯甲烷中，氮气条件下，加入化合物C-L-066(23mg,0.06mmol)，然后加入9μL的三乙胺，反应混合物在室温氮气条件下 搅拌2小时。浓缩除掉有机溶剂，粗品通过PREP-TLC(二氯甲烷/乙酸乙酯/甲醇＝35:10:5) 分离纯化，得到7mg的化合物IA-3，收率22％，其为红色固体。LCMS(ESI)m/z＝1071.1(M +Na)+。
实施例4化合物IA-4的合成
(1)化合物12-1的合成
化合物11-1(30mg,0.038mmol)溶解在10mL的二氯甲烷中，氮气条件下，加入化 合物11a(26mg,0.076mmol)，然后加入10μL的三乙胺，反应混合物在氮气条件下室温 搅拌2小时。浓缩除掉有机溶剂，粗品通过PREP-TLC(DCM/EA/MeOH＝35:10:5)分离纯 化，得到15mg的化合物12-1，收率39％，其为红色固体。LCMS(ESI)m/z＝1002.3(M+ Na)+。
(2)化合物13-1的合成
上一步反应产物12-1(15mg,0.015mmol)溶解在乙酸乙酯和甲醇(1:1)的混合溶剂(2 mL)中，在氮气体系下，加入pH＝7.5的磷酸钾缓冲溶液(PBS buffer)1mL和DTT(二 硫苏糖醇12mg,0.075mmol)，反应混合物室温搅拌16小时后，加入pH＝6.0的磷酸钾缓 冲溶液5mL淬灭反应。乙酸乙酯萃取(10mL×3)，有机相无水硫酸钠干燥，过滤、浓缩， 粗品直接用于下一步。LCMS(ESI)m/z＝956.3(M+H)+。
(3)化合物IA-4的合成
化合物13-1(12mg,0.012mmol)溶于2mL四氢呋喃中，加入pH＝6的磷酸钾缓冲溶液0.05mL和SMCC(21mg,0.063mmol)，氮气保护下室温搅拌过夜。浓缩，直接由Prep-TLC (展开剂为甲醇/二氯甲烷＝1:10)纯化得4.6mg产品IA-4，为红色固体，产率28％。LCMS (ESI)m/z＝1290.5(M+H)+。
实施例5IA-5的合成
化合物11-1(23mg,0.03mmol)溶解在10mL的二氯甲烷中，氮气条件下，加入化合物McOSu(19mg,0.06mmol)，然后加入9μL的三乙胺，反应混合物在室温氮气条件下 搅拌2小时。浓缩除掉有机溶剂，粗品通过PREP-TLC(二氯甲烷/乙酸乙酯/甲醇＝35:10:5) 分离纯化，得到7.6mg的化合物IA-5，收率26％，其为红色固体。LCMS(ESI)m/z＝995.7(M +Na)+。1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm 1.44(d,J＝5.6Hz,3H),1.56-1.78(m,8H),2.10- 2.14(m,1H),2.28-2.36(m,2H),2.60(d,J＝11.2Hz,1H),2.73-2.84(m,2H),2.89&3.04(s,3H), 3.32-3.42(m,2H),3.46(s,3H),3.48-3.52(m,2H),3.57-3.61(m,3H),3.64-3.69(m,2H),3.92(t,J＝7.6Hz,,1H),4.05-4.07(m,1H),4.09(s,3H),4.11(d,J＝6.0Hz,1H),4.47(d,J＝4.0Hz,1H), 4.68(d,J＝9.2Hz,2H),4.71-4.72(m,1H),5.16(s,1H),5.37(s,1H),5.52(t,J＝4.0Hz,1H), 5.72(t,J＝14.0Hz,1H),5.87&5.83(d,J＝4.2Hz,1H),6.67(s,2H),7.58(d,J＝9.2Hz,1H),7.73 (t,J＝6.0Hz,1H),7.97(d,J＝6.0Hz,1H),13.21(s,1H),13.84(s,1H)。
化合物IA-6，IA-7，IA-8的合成路线：
实施例6IA-6的合成
化合物1(100mg,0.16mmol)溶解在10mL的二氯甲烷中，依次加入甲醇(10mL)， 三乙酰氧基硼氢化钠(50mg,0.23mmol)，上述混合物在氮气室温条件下搅拌1.5小时， 然后加入另外50mg的三乙酰氧基硼氢化钠，氮气条件下室温搅拌1小时。减压除去溶 剂后，残余物通过快速分离柱色谱分离纯化(二氯甲烷/甲醇＝10:1)，得到70mg的化合物 IA-6，收率70％，其为红色固体。LCMS(ESI)m/z＝644.2(M+H)+。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm 1.42(t,J＝5.2Hz,3H),1.63-1.79(m,6H),1.92-1.96(m, 2H),2.60-2.88(m,6H),3.21-3.69(m,8H),3.89-3.93(m,3H),4.01-4.08(m,5H),4.48(s,1H), 4.70-4.72(m,2H),5.30(s,1H),5.49(q,J1＝4.8Hz,J2＝4.4Hz,1H),7.38(d,J＝8.0Hz,1H), 7.77(t,J＝8.8Hz,1H),8.02(d,J＝7.6Hz,1H),13.32(d,J＝8.0Hz,1H),13.88(d,J＝4.4Hz,1H)。
实施例7IA-7的合成
(1)化合物2-2的合成
021(50mg,0.078mmol)溶解在20mL的二氯甲烷中，加入戴斯-马丁氧化剂(Dess-Matin,50mg,0.117mmol)，上述混合物在氮气室温条件下搅拌2小时，上述混合物用 10％的Na2S2O3溶液(10mL)和饱和碳酸氢钠溶液(10mL)淬灭，用二氯甲烷(50mL×5)萃 取，有机相无水硫酸钠干燥，过滤和浓缩，得到40mg的粗品化合物2-2，其为红色固 体，粗品直接用于下一步。LCMS(ESI)m/z＝642.1(M+H)+。
(2)化合物IA-7的合成
化合物2-2(40mg,0.062mmol)溶解在10mL的二氯甲烷中，加入化合物(25mg，0.075mmol)，上述混合物在氮气室温条件下搅拌2小时，减压除去溶剂后，残 余物通过快速分离柱色谱分离纯化(二氯甲烷/乙酸乙酯/甲醇＝35:10:5)，得到15mg的化 合物IA-7，收率35％，其为红色固体。LCMS(ESI)m/z＝698.1(M+H)+。
实施例8IA-8的合成
(1)化合物3-2的合成
在0℃氩气保护条件下，化合物035(12mg,0.017mmoL)用5mL的0.1N的氢氧 化钠溶液处理，反应混合物在同一条件下搅拌2小时，然后加入5mL水，调节pH＝2， 二氯甲烷萃取(20mL×5),有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到5mg的粗品，粗 品直接用于下一步。LCMS(ESI)m/z＝684.2(M+H)+。
(2)化合物5-2的合成
上一步反应产物3-2(10mg,0.015mmol)溶解在5mL二氯甲烷中，氮气条件下，依 次加入化合物2a(15mg,0.043mmol)，HATU(25mg,0.066mmol),然后加入DIPEA(18 μL,0.1mmol)，反应混合物在氮气条件下室温搅拌2小时。浓缩除掉溶剂，粗品通过快速 分离柱(二氯甲烷/乙酸乙酯/甲醇＝30:10:5)分离纯化，得到5mg的化合物5-2，收率36％， 其为红色固体。LCMS(ESI)m/z＝976.2(M+H)+。
(3)化合物6-2的合成
上一步反应产物5-2(5mg,0.007mmol)溶解在2mL的乙腈中，冰水浴冷却至0℃， 加入1mL的二乙胺，搅拌1小时。浓缩移除有机溶剂，得到4mg的粗品化合物6-2，其 为红色固体。粗品直接用于下一步。LCMS(ESI)m/z＝754.1(M+H)+。
(4)化合物IA-8的合成
化合物6-2(4mg,0.003mmol)溶解在2mL的二氯甲烷中，氮气条件下，加入化合物McOSu(4mg,0.013mmol)，然后加入2μL三乙胺，反应混合物在氮气条件下室温搅拌 2小时。浓缩，粗品通过PREP-TLC(二氯甲烷/乙酸乙酯/甲醇＝10:5:1)分离纯化，得到1.2 mg的化合物IA-8，收率24％，其为红色固体。LCMS(ESI)m/z＝947.3(M+H)+。
化合物IA-9,IA-10,IA-11,IA-12的合成路线：
其中，C-L-055为：
实施例9IA-9的合成
化合物8-1(60mg,0.09mmol)溶解在5mL的THF中，依次加入化合物1a-3(61mg,0.18mmol)，三苯基膦(47mg)和饱和碳酸氢钠(0.1mL)，上述反应混合物在常温搅拌过 夜。浓缩，得到的粗产物通过快速分离柱层析纯化(二氯甲烷/丙酮＝5:1)，得到30mg化 合物IA-9，为红色固体，产率39％。LCMS(ESI)m/z＝863.2(M+H)+。1HNMR(400MHz, CDCl3)δppm1.40-1.48(m,6H),1.61(d,J＝7.2Hz,1H),1.82-1.89(m,1H),2.07-2.21(m,2H), 2.43(s,3H),2.86(s,1H),2.91-2.95(m,2H),3.04(d,J＝19.2Hz,1H),3.17(d,J＝8.4Hz,1H),3.25-3.32(m,1H),3.45(s,3H),3.54-3.63(m,2H),3.69-3.82(m,8H),3.99(d,J＝6.4Hz,1H), 4.09(s,3H),4.21(d,J＝6.8Hz,1H),4.51-4.63(m,1H),4.67(s,1H),4.81(s,1H),5.34(s,1H), 5.57(t,J＝4.8Hz,1H),7.39(d,J＝8.0Hz,1H),7.60(t,J＝5.6Hz,1H),7.78(t,J＝7.6Hz,1H), 8.03(d,J＝7.6Hz,1H),13.26(s,1H),13.90(s,1H)。
实施例10IA-10的合成
(1)化合物2-3的合成
上一步反应产物IA-9(30mg,0.035mmol)溶解在乙酸乙酯和甲醇(1:1)的混合溶剂(3 mL)中，在氮气体系下，加入PH＝7.5的磷酸钾缓冲溶液1.5mL和DTT(27mg,0.175mmol)，反应混合物室温搅拌16小时后，加入PH＝6.0的磷酸钾缓冲溶液5ml淬灭反应。乙酸乙酯 萃取(10mL×3)，有机相无水硫酸钠干燥，过滤、浓缩，粗品直接用于下一步。LCMS(ESI) m/z＝817.2(M+H)+。
(2)化合物IA-10的合成
化合物2-3(25mg,0.03mmol)溶于3mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入PH＝6的磷酸钾缓 冲溶液0.1mL和SMCC(50mg,0.15mmol)，氮气保护下室温搅拌过夜。反应液过滤，直 接由制备HPLC纯化得12mg产品IA-10，为红色固体，产率30％。
LCMS(ESI)m/z＝1150.3(M+H)+。1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm 1.06(q,J＝11.6Hz,2H),1.25(s,3H),1.43(s,3H),1.52(q,J＝10.8Hz,2H),1.71-1.80(m,4H),2.00-2.24(m,4H), 2.46-2.59(m,2H),2.81(s,4H),2.90-3.06(m,2H),3.12-3.28(m,4H),3.38(d,J＝6.8Hz,3H), 3.45(s,3H),3.60-4.03(m,12H),4.09(s,3H),4.22(d,J＝6.8Hz,1H),4.45-4.60(m,2H),4.67 (s,1H),4.81(s,1H),5.33(s,1H),5.56(t,J＝5.6Hz,1H),7.39(d,J＝8.8Hz,1H),7.53(d,J＝5.6 Hz,1H),7.78(t,J＝7.6Hz,1H),8.03(d,J＝7.6Hz,1H),13.28(s,1H),13.89(s,1H)。
实施例11IA-11的合成
(1)化合物3-3的合成
化合物8-1(60mg,0.09mmol)溶解在5mL四氢呋喃中，依次加入化合物1b-3(105mg,0.18mmol)，三苯基膦(47mg,0.18mmol)和饱和碳酸氢钠(0.1mL)，上述反应混合 物在室温搅拌过夜。浓缩，得到的粗产物通过快速分离柱层析纯化(二氯甲烷/丙酮＝5:1)， 得到20mg化合物3-3，为红色固体，产率20％。LCMS(ESI)m/z 1110.2(M+H)+。
(2)化合物4-3的合成
上一步反应产物3-3(20mg,0.018mol)溶于2mL乙腈中，冰水浴冷却至0℃，加入 二乙胺1mL，搅拌1.5小时，常温减压移除乙腈和二乙胺，并用二氯甲烷带二乙胺两遍， 得到15mg粗产品4-3，为红色固体，直接用于下一步反应。LCMS(ESI)m/z＝888.3(M+ H)+。
(3)化合物IA-11的合成
化合物4-3(15mg,0.017mmol)溶解在2mL的二氯甲烷中，氮气条件下，加入化合 物C-L-055(10mg,0.034mmol)，反应混合物在氮气条件下室温搅拌2小时。浓缩，粗品 通过PREP-TLC(二氯甲烷/乙酸乙酯/甲醇＝35:10:5)分离纯化，得到1.0mg的化合物IA- 11，收率5.7％，其为红色固体。LCMS(ESI)m/z＝1039.4(M+Na)+。
实施例12IA-12的合成
(1)化合物6-3的合成
化合物8-1(60mg,0.09mmol)溶解在5mL四氢呋喃中，依次加入化合物1c-3(81 mg,0.18mmol)，三苯基膦(47mg,0.18mmol)和饱和碳酸氢钠(0.1mL)，上述混合物在 室温搅拌过夜。浓缩，得到的粗产物通过快速分离柱层析纯化(二氯甲烷/丙酮＝5:1)，得 到30mg化合物6-3，为红色固体，产率34％。LCMS(ESI)m/z 978.2(M+H)+。
(2)化合物7-3的合成
上一步反应产物6-3(30mg,0.03mol)溶于2mL乙腈中，冰水浴冷却至0℃，加入二乙胺1mL，搅拌1.5小时，常温减压移除乙腈和二乙胺，并用二氯甲烷带二乙胺两遍， 得到22mg粗产品7-3，为红色固体，直接用于下一步反应。LCMS(ESI)m/z＝756.3(M+ H)+。
(3)化合物IA-12的合成
化合物7-3(22mg,0.029mmol)溶解在2mL的二氯甲烷中，氮气条件下，加入化合物C-L-066(15mg,0.058mmol)，反应混合物在氮气条件下室温搅拌2小时。浓缩除掉有机 溶剂，粗品通过PREP-TLC(二氯甲烷/乙酸乙酯/甲醇＝35:10:5)分离纯化，得到5.0mg的 化合物IA-12，收率16.7％，其为红色固体。LCMS(ESI)m/z＝1025.4(M+Na)+。1HNMR (400MHz,CDCl3)δppm 0.81(d,J＝6.0Hz,3H),1.35(d,J＝5.2Hz,3H),1.95-2.11(m,2H),2.15 (d,J＝11.2Hz,1H),2.44(d,J＝11.2Hz,1H),2.50(t,J＝4.4Hz,1H),2.66(s,3H),2.68-2.76(m,2H),2.97(d,J＝14.8Hz,1H),3.19(d,J＝14.8Hz,1H),3.30-3.35(m,1H),3.36(d,J＝4.0Hz, 2H),3.39(s,3H),3.41-3.61(m,8H),3.66(t,J＝4.4Hz,2H),3.70(t,J＝4.0Hz,2H),3.82-4.07 (m,3H),3.94(s,2H),4.03(s,3H),4.39-4.54(m,2H),4.62-4.71(m,2H),5.28(t,J＝4.0Hz,2H), 5.44(t,J＝4.0Hz,1H),6.64(s,2H),6.99(t,J＝4.8Hz,1H),7.26(t,J＝4.8Hz,1H),7.33(d,J＝6.8 Hz,1H),7.72(t,J＝6.4Hz,1H),7.97(d,J＝6.4Hz,1H),13.22(s,1H),13.85(s,1H)。
化合物IA-13，IA-14，IA-15，IA-16的合成路线：
实施例13IA-13的合成
化合物1(64mg,0.1mmol)溶解在10mL二氯甲烷中，加入三乙胺(70μL,0.5mmol) 和对甲苯磺酰氯(57mg,0.3mmol)。反应液室温搅拌过夜。减压移除溶剂，剩余物硅胶柱 层析纯化(二氯甲烷/甲醇＝20:1)得22mg目标化合物2-4，为红色固体，产率47％，LCMS (ESI)m/z＝796.2(M+H)+
化合物2-4(80mg,0.1mmol)和乙醇酸乙酯(28μL,0.3nnol)溶解在10mL的N,N-二甲基甲酰胺中，冰水浴冷却至0℃，氮气条件下，加入NaH(12mg,0.3mmoL)，反应混 合物在室温搅拌2小时，饱和NH4Cl淬灭反应，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并有机相， 水洗(20mL×3)，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩除掉溶剂，残余物通过快速分离柱(二 氯甲烷/丙酮＝5:1)分离纯化，得到18mg的化合物IA-13，为红色固体，产率26％。LCMS (ESI)m/z＝700.2(M+H)+。1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm 1.33(t,J＝8.8Hz,3H),1.39(d, J＝6.0Hz,3H),1.70-1.77(m,1H),1.98-2.04(m,2H),2.08&2.12(dd,J1＝14.8Hz,J2＝3.6Hz, 1H),2.22(t,J＝7.6Hz,1H),2.50(d,J＝14.8Hz,1H),2.71-2.83(m,2H),3.04(d,J＝18.8Hz,1H), 3.21-3.28(m,1H),3.36-3.40(m,1H),3.46(s,3H),3.56-3.60(m,1H),3.89-3.94(m,1H),3.99-4.04(m,1H),4.07-4.09(m,1H),4.09(s,3H),4.22-4.26(m,2H),4.47(s,1H),4.71(s,1H),4.76-4.97(m,3H),5.34(t,J＝4.8Hz,1H),5.48(t,J＝5.2Hz,1H),7.40(d,J＝8.4Hz,1H),7.78 (t,J＝8.0Hz,1H),8.03(d,J＝7.6Hz,1H),13.27(s,1H),13.89(s,1H)。
实施例14IA-14的合成
(1)化合物3-4的合成
化合物IA-13(95mg,0.13mmol)溶解在12mL的四氢呋喃中，依次加入乙醇(12mL)，水(5mL)，碳酸钾(218mg)，反应混合物在室温条件下搅拌1小时，加入10mL水，浓 缩除掉四氢呋喃和乙醇，水相用2N稀盐酸调pH＝5，用二氯甲烷(30mL×5)萃取，有机 相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到95mg的粗品化合物3-4，其为红色固体，粗品直 接用于下一步。LCMS(ESI)m/z＝700.2(M+H)+。
(2)化合物4-4的合成
化合物2-4(65mg,0.093mmol)溶解在50mL的二氯甲烷中，氮气条件下，加入化合物2a(48mg,0.14mmol)，HATU(71mg,0.19mmol)，然后加入DIPEA(77μL,0.47mmol)， 反应混合物在室温氮气条件下搅拌12小时。浓缩除掉溶剂，粗品通过快速分离柱(二 氯甲烷/乙酸乙酯/甲醇＝10:2:1)分离纯化，得到56mg的化合物4-4，收率61％，其为红 色固体。LCMS(ESI)m/z＝992.3(M+H)+。
(3)化合物5-4的合成
化合物3-4(56mg,0.057mmol)溶解在5mL的乙腈中，在冰浴条件下，加入2.5mL 的二乙胺，并搅拌1小时。浓缩除掉有机溶剂，得到50mg的粗品化合物5-4，其为红色 固体，粗品直接用到下一步。LCMS(ESI)m/z＝770.3(M+H)+。
(4)化合物IA-14的合成
化合物5-4(20mg,0.026mmol)溶解在10mL的二氯甲烷中，氮气条件下，加入化合物McOSu(20mg,0.065mmol)，然后加入10μL的DIPEA，反应混合物在室温氮气条件 下搅拌3小时。浓缩除掉溶剂，粗品通过快速分离柱(二氯甲烷/乙酸乙酯/甲醇＝10:2:1) 分离纯化，得到15mg的化合物IA-14，收率60％，其为红色固体。LCMS(ESI)m/z＝963.3(M +H)+。1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm 1.25-1.52(m,10H),1.64-2.01(m,2H),2.10-2.13(m, 1H),2.20-2.36(m,3H),2.51(d,J＝14.4Hz,1H),2.75-2.82(m,2H),2.90-3.07(m,6H),3.15-3.17(m,1H),3.38-3.59(m,10H),3.61-3.80(m,1H),3.91(t,J＝9.2Hz,1H),4.01-4.12(m,4H), 4.21-4.39(m,2H),4.46(s,1H),4.70(s,1H),4.82-4.91(m,2H),5.32-5.36(m,2H),5.47-5.51 (m,1H),6.68(s,2H),7.34-7.36(m,1H),7.69-7.72(m,1H),8.02(s,1H),13.23(brs,1H),13.90 (s,1H)。
实施例15IA-15的合成
化合物5-4(25mg,0.033mmol)溶解在5mL的N,N-二甲基甲酰胺中，氮气条件下， 加入化合物C-L-004(20mg,0.026mmol)，然后加入5.4μL的三乙胺，反应混合物在室温 氮气条件下搅拌2小时。用10mL的饱和食盐水淬灭反应，乙酸乙酯(20mL×3)萃取， 有机相用饱和食盐水(20mL×5)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。粗品通过 快速分离柱(二氯甲烷/乙酸乙酯/甲醇＝30:15:5,然后二氯甲烷/甲醇＝10:1)分离纯化，得到 12mg的化合物IA-15，收率27％，其为红色固体。LCMS(ESI)m/z＝1368.6(M+H)+。
实施例15IA-16的合成
化合物5-4(25mg,0.033mmol)溶解在10mL的二氯甲烷中，氮气条件下，加入化合物C-L-066(25mg,0.065mmol)，然后加入9μL的TEA，反应混合物在室温氮气条件下 搅拌2小时。浓缩除掉有机溶剂，粗品通过PREP-TLC(二氯甲烷/乙酸乙酯/甲醇＝35:10:5) 分离纯化，得到13mg的化合物IA-16，收率38％，其为红色固体。LCMS(ESI) m/z＝1039.2(M+H)+。1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm 1.39(d,J＝6.4Hz,3H),1.97-2.11(m, 4H),2.22(t,J＝7.6Hz,1H),2.49(d,J＝14Hz,1H),2.72-2.99(m,5H),3.00-3.08(m,7H),3.24 (d,J＝19.2Hz,1H),3.38-3.45(m,1H),3.49(s,3H),3.54-3.73(m,13H),3.88-3.93(m,1H), 4.03-4.06(m,1H),4.09(s,3H),4.18(s,1H),4.21-4.28(m,3H),4.46(s,1H),4.70(s,1H),4.08- 4.91(m,3H),5.34(t,J＝5.2Hz,1H),5.48(t,J＝5.2Hz,1H),6.70(s,2H),7.39(d,J＝8.8Hz,1H), 7.78(t,J＝8.0Hz,1H),8.03(d,J＝7.2Hz,1H),13.29(s,1H),13.91(s,1H)。
化合物IA-17,IA-18合成路线：
实施例16IA-17的合成
化合物5-4(20mg,0.026mmol)溶解在5mL的二氯甲烷中，依次加入化合物1a-5(10mg，0.039mmoL),HATU(20mg,0.052mmoL),DIPEA(22μL,0.13mmoL),上述混合物在 室温氮气条件下搅拌3小时。浓缩除掉有机溶剂，残余物通过快速分离柱(二氯甲烷/乙 酸乙酯/甲醇＝1:1:0.1)分离纯化，得到18mg的化合物IA-17，收率69％，其为红色固体。 LCMS(ESI)m/z＝992.3(M+H)+。
实施例16IA-18的合成
(1)化合物2-5的合成
化合物IA-17(18mg,0.018mmol)溶解在5mL的甲醇中，依次加入5mL的乙酸乙 酯，5mL的PH＝7.5的磷酸钾缓冲溶液，和38mg的DTT，反应混合物在室温条件下搅 拌1小时。加入10mL的PH＝6.0磷酸钾缓冲液淬灭反应，室温条件下搅拌10分钟，用 乙酸乙酯(50mL×2)萃取,有机相通过无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到粗品。粗品 通过快速分离柱(二氯甲烷/甲醇＝10:1)分离纯化,得到10mg的化合物2-5，收率59％，其 为红色固体。LCMS(ESI)m/z＝946.3(M+H)+。
(2)化合物IA-18的合成
化合物2-5(8mg,0.008mmol)溶解在5mL的N,N-二甲基甲酰胺中，氮气条件下， 加入20mg的化合物SMCC，然后加入10μL的TEA，反应混合物在室温氮气条件下搅 拌12小时。用10mL的饱和食盐水淬灭反应，乙酸乙酯(20mL×3)萃取，有机相用饱 和食盐水(20mL×5)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。粗品通过快速分离柱(二氯甲 烷/乙腈＝3:1,然后二氯甲烷/甲醇＝10:1)分离纯化,得到2.5mg的化合物IA-18，收率23％， 其为红色固体。LCMS(ESI)m/z＝1280.3(M+H)+。
化合物IA-19，IA-20，IA-21的合成路线：
实施例17IA-19的合成
(1)化合物2-6的合成
化合物3-4(30mg,0.043mmol)溶解在10mL的二氯甲烷中，氮气条件下，加入化合物1a-6(26mg,0.064mmol)，HATU(33mg,0.086mmol),然后加入DIPEA(35μL,0.22 mmol)，反应混合物在氮气条件下室温搅拌12小时。减压移除溶剂，粗品通过快速分离 柱(二氯甲烷/乙酸乙酯/甲醇＝35:10:5)分离纯化，得到30mg的化合物2-6，收率67％， 其为红色固体。LCMS(ESI)m/z＝1052.3(M+H)+。
(2)化合物3-6的合成
化合物2-6(30mg,0.028mmol)溶解在6mL的乙腈中，冰水浴冷却至0℃，加入3 mL的二乙胺，并搅拌1小时。浓缩除掉有机溶剂，得到23mg的粗品化合物3-6，其为 红色固体，粗品直接用到下一步。LCMS(ESI)m/z＝852.2(M+H)+。
(3)化合物IA-19的合成
化合物3-6(23mg,0.028mmol)溶解在10mL的二氯甲烷中，氮气条件下，加入化合物C-L-066(22mg,0.056mmol)，然后加入7.7μL的三乙胺，反应混合物在氮气条件下室 温搅拌2小时。浓缩除掉有机溶剂，粗品通过PREP-TLC(二氯甲烷/乙酸乙酯/甲醇 ＝100:35:10)分离纯化，得到3.5mg的化合物IA-19，收率12％，其为红色固体。LCMS (ESI)m/z＝1099.3(M+H)+。
实施例18IA-20的合成
(1)化合物4-6的合成
化合物3-4(30mg,0.043mmol)溶解在10mL的二氯甲烷中，氮气条件下，加入化合物1b-6(21mg,0.064mmol)，HATU(33mg,0.086mmol),然后加入DIPEA(35μL,0.22 mmol)，反应混合物在室温氮气条件下搅拌12小时。减压移除溶剂，粗品通过快速分离 柱(二氯甲烷/乙酸乙酯/甲醇＝40:4:10)分离纯化，得到27mg的化合物4-6，收率66％， 其为红色固体。LCMS(ESI)m/z＝964.2(M+H)+。
(2)化合物5-6的合成
化合物4-6(27mg,0.028mmol)溶解在6mL的乙腈中，在冰水浴条件下，加入3mL 的二乙胺，并搅拌1小时。浓缩除掉有机溶剂，得到20mg的粗品化合物5-6，其为红色 固体，粗品直接用到下一步。LCMS(ESI)m/z＝742.2(M+H)+。
(3)化合物IA-20的合成
化合物5-6(20mg,0.027mmol)溶解在10mL的二氯甲烷中，氮气条件下，加入化合物C-L-066(21mg,0.054mmol)，然后加入7.5μL的三乙胺，反应混合物在室温氮气条件 下搅拌2小时。浓缩除掉有机溶剂，粗品通过PREP-TLC(二氯甲烷/乙酸乙酯/甲醇＝10:3:1) 分离纯化，得到7mg的化合物IA-20，收率26％，其为红色固体。LCMS(ESI)m/z＝1011.2(M +H)+。1HNMR(400MHz,d-CDCl3)δppm 1.39(d,J＝5.6Hz,3H),2.00-2.02(m,2H),2.08- 2.12(m,1H),2.48-2.51(m,1H),2.73-2.80(m,3H),3.02(d,J＝15.2Hz,1H),3.25(d,J＝14Hz, 1H),3.37-3.49(m,5H),3.57-3.65(m,12H),3.73(t,J＝4.8Hz,2H),3.89-4.09(m,11H),4.47(s,1H),4.70(s,1H),4.80(s,2H),4.89(s,1H),5.30-5.34(m,1H),5.49(t,J＝4.4Hz,1H),6.71(s, 2H),7.40(d,J＝6.4Hz,1H),7.49(brs,2H),7.79(t,J＝6.8Hz,1H),8.04(d,J＝5.2Hz,1H),13.29 (s,1H),13.90(s,1H)。
实施例19IA-21的合成
(1)化合物6-6的合成
化合物3-4(80mg,0.114mmol)溶解在50mL的二氯甲烷中，氮气条件下，加入化合物1c-6(56mg,0.17mmol)，HATU(87mg,0.228mmol),然后加入DIPEA(94μL,0.57 mmol)，反应混合物在室温氮气条件下搅拌12小时。浓缩除掉溶剂，粗品通过快速分离 柱(二氯甲烷/乙酸乙酯/甲醇＝10:2:1)分离纯化，得到60mg的化合物6-6，收率52％， 其为红色固体。LCMS(ESI)m/z＝1008.3(M+H)+。
(2)化合物7-6的合成
化合物6-6(60mg,0.060mmol)溶解在5mL的乙腈中，在冰水浴条件下，加入2.5 mL的二乙胺，并搅拌1小时。浓缩除掉有机溶剂，得到50mg的粗品化合物7-6，其为 红色固体，粗品直接用到下一步。LCMS(ESI)m/z＝786.8(M+H)+。
(3)化合物IA-21的合成
化合物7-6(50mg,0.064mmol)溶解在10mL的二氯甲烷中，氮气条件下，加入化合物C-L-066(37mg,0.096mmol)，反应混合物在氮气条件下室温搅拌3小时。减压移除 溶剂，粗品通过PREP-TLC(二氯甲烷/乙酸乙酯/甲醇＝35:10:5)分离纯化，得到25mg的 化合物IA-21，收率48％，其为红色固体。LCMS(ESI)m/z＝1055.4(M+H)+。 1HNMR(400MHz,d-CDCl3)δppm 1.39(d,J＝5.6Hz,3H),1.97-2.05(m,2H),2.08&2.10(m, 1H),2.22(t,J＝6.0Hz,1H),2.48-2.51(m,1H),2.72-2.77(m,1H),2.81&2.83(2×t,J＝2.0Hz, 1H),3.00&3.04(2×s,1H),3.22&3.26(2×s,1H),3.39(q,J＝4.8Hz,1H),3.48-3.54(m,5H), 3.57-3.68(m,14H),3.73(t,J＝4.8Hz,2H),3.89-4.03(m,2H),4.00(s,3H),4.10-4.12(m,6H), 4.47(s,1H),4.70(s,1H),4.82(s,2H),4.88(s,1H),5.32(br,1H),5.34(t,J＝4.0Hz,1H),5.47 (t,J＝4.8Hz,1H),6.71(s,2H),7.35(t,J＝4.0Hz,1H),7.40(d,J＝6.4Hz,1H),7.79(t,J＝6.4Hz,1H),8.04(d,J＝5.6Hz,1H),13.28(s,1H),13.90(s,1H)。
化合物IA-22的合成路线：
实施例20IA-22的合成
(1)化合物2-7的合成
化合物3-4(60mg,0.086mmol)溶解在30mL二氯甲烷中，氮气条件下，加入化合物1a-7(21mg,0.13mmol)，HATU(65mg,0.172mmol),然后加入DIPEA(71μL,0.43mmol)， 反应混合物在氮气条件下室温搅拌12小时。浓缩除掉溶剂，粗品通过快速分离柱(二 氯甲烷/乙酸乙酯/甲醇＝10:2:1)分离纯化，得到36mg的化合物2-7，收率51％，其为红 色固体。LCMS(ESI)m/z＝819.2(M+H)+。
(2)化合物3-7的合成
化合物2-7(36mg,0.044mmol)溶解在2mL的甲醇中，依次加入2mL的乙酸乙酯， 2mL的pH＝7.5的磷酸钾缓冲溶液，和14mg的DTT，反应混合物在室温条件下搅拌1 小时。加入5mL的PH＝6.0磷酸钾缓冲液淬灭反应，室温条件下搅拌10分钟，用乙酸乙 酯(20mL×2)萃取,有机相通过无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到30mg的粗品化合 物3-7，其为红色固体，粗品直接用到下一步。LCMS(ESI)m/z＝773.2(M+H)+。
(3)化合物IA-22的合成
化合物3-7(30mg,0.039mmol)溶解在5mL的四氢呋喃中，氮气条件下，加入26mg 的化合物SMCC，然后加入2mL的pH＝6.0的磷酸钾缓冲溶液，反应混合物在氮气条件 下室温搅拌12小时。反应液直接冷冻干燥。粗品通过PREP-TLC(二氯甲烷/乙酸乙酯/甲 醇＝35:10:5)分离纯化，得到11.9mg的化合物IA-22，收率28％，其为红色固体。LCMS (ESI)m/z＝1093.3(M+H)+。1HNMR(400MHz,d-CDCl3)δppm 0.81(t,J＝5.6Hz,3H),1.01(d, J＝9.2Hz,2H),1.07(d,J＝4.8Hz,2H),1.33(d,J＝5.2Hz,3H),1.63-1.74(m,2H),1.92-1.97(m, 2H),1.99-2.04(m,1H),2.09(d,J＝11.2Hz,2H),2.15(t,J＝6.4Hz,1H),2.41-2.53(m,2H),2.66- 2.83(m,3H),2.92-2.98(m,1H),3.07-3.19(m,3H),3.33(d,J＝5.6Hz,3H),3.39(s,3H),3.50- 3.70(m,3H),3.81-3.87(m,2H),3.93(q,J＝5.6Hz,1H),3.99-4.07(m,2H),4.03(s,3H),4.40 (d,J＝1.6Hz,1H),4.63(d,J＝1.6Hz,1H),4.76(d,J＝6.0Hz,2H),4.82(s,1H),5.25(br,1H), 5.27(t,J＝4.0Hz,1H),5.41(t,J＝4.4Hz,1H),7.33(d,J＝6.8Hz,1H),7.40(q,J＝4.8Hz,1H), 7.72(t,J＝6.4Hz,1H),7.98(d,J＝5.6Hz,1H),13.23(s,1H),13.83(s,1H)。
化合物IA-23，IA-24的合成路线：
实施例21IA-23的合成
(1)化合物2-8的合成
化合物1-8(600mg,3.75mmol)溶解在20mL的饱和碳酸氢钠溶液中，冰水浴冷却，然后加入化合物1a-8(793mg,4.69mmoL)，反应混合物在0℃条件下搅拌30分钟，然 后室温下搅拌1小时。反应混合物用二氯甲烷萃取(50mL×3)，合并有机相，无水硫酸钠 干燥，过滤、浓缩。粗品通过快速分离柱分离纯化(石油醚/乙酸乙酯＝1:1)，得到525mg 的化合物2-8，其为白色固体，收率58％。LCMS(ESI)m/z＝185.1(M+H)+。1HNMR(400MHz, d-CDCl3)δppm1.40(s,9H),3.31-3.35(m,2H),3.66(t,J＝4.4Hz,2H),4.65-4.77(m,1H),6.70 (s,2H)。
(2)化合物3-8的合成
化合物2-8(500mg,2.08mmol)溶解在10mL的二氯甲烷中，冰水浴冷却至0℃，然 后加入10mL的氯化氢的1,4-二氧六环溶液，反应混合物0℃下搅拌1小时，常温减压 浓缩移除溶剂，粗品悬浮在10mL的二氯甲烷中，过滤，滤饼用10mL的二氯甲烷洗涤， 收集固体，真空干燥，得到240mg的化合物3-8。LCMS(ESI)m/z＝141.1(M+H)+。 1HNMR(400MHz,d-DMSO)δppm2.93-2.97(m,2H),3.67(t,J＝5.2Hz,2H),7.06(s,2H),8.22 (brs,3H)。
(3)化合物IA-23的合成
化合物3-4(20mg,0.029mmol)溶解在5mL的二氯甲烷中，氮气条件下，加入化合 物3-8(8mg,0.043mmol)，HATU(22mg,0.057mmol),然后加入DIPEA(23μL,0.14mmol)， 反应混合物在氮气条件下室温搅拌2小时。减压浓缩溶剂，粗品通过PREP-TLC(二氯 甲烷/甲醇＝10:1)分离纯化，得到10mg的化合物IA-23，收率43％，其为红色固体。 LCMS(ESI)m/z＝822.2(M+H)+。1HNMR(400MHz,d-CDCl3)δppm 1.39(d,J＝5.2Hz,3H), 1.70-1.76(m,1H),1.99-2.04(m,1H),2.07-2.11(m,1H),2.51(d,J＝12Hz,1H),2.71-2.82(m, 1H),3.02(d,J＝15.2Hz,1H),3.28(d,J＝15.6Hz,1H),3.36-3.40(m,1H),3.46(s,3H),3.50- 3.59(m,4H),3.71-3.73(m,2H),3.89-3.93(m,1H),3.99-4.04(m,4H),4.09(s,3H),4.46(d, J＝1.2Hz,1H),4.70(d,J＝1.6Hz,1H),4.81(d,J＝9.2Hz,2H),4.86(s,1H),5.31-5.32(m,1H),5.48(t,J＝4.4Hz,1H),6.73(s,2H),7.40(d,J＝6.8Hz,1H),7.48(t,J＝4.8Hz,1H),7.79(t,J＝6.8 Hz,1H),8.03(d,J＝6.4Hz,1H),13.30(s,1H),13.90(s,1H)。
实施例22IA-24的合成
(1)化合物5-8的合成
化合物4-8(296mg,2mmol)溶解在5mL二氯甲烷中，冰水浴冷却到0℃，Boc2O(196mg,0.9mmoL)溶解在5mL的二氯甲烷，然后慢慢滴加入上述溶液中，混合物升到室温 并搅拌过夜。加入20mL水淬灭反应，用二氯甲烷萃取(50mL×3),合并有机相，无水硫 酸钠干燥，过滤、浓缩。粗品通过快速分离柱分离纯化(二氯甲烷/甲醇/氨水＝10:1:0.1)， 得到143mg化合物5-8，收率29％。LCMS(ESI)m/z＝249.1(M+H)+。
(2)化合物6-8的合成
化合物5-8(248mg,1mmol)溶解在10mL的饱和碳酸氢钠溶液中，冰水浴冷却，然 后加入化合物1b-8(229mg,1.25mmoL)，混合物在0℃条件下搅拌30分钟，然后室温 下搅拌1小时。反应混合物用二氯甲烷萃取(50mL×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥， 然后过滤、浓缩。粗品通过快速分离柱分离纯化(石油醚/乙酸乙酯＝1:1),得到152mg 的化合物6-8，收率46％。LCMS(ESI)m/z＝351.1(M+H)+。
(3)化合物7-8的合成
化合物6-8(150mg,0.46mmol)溶解在2mL的二氯甲烷中，冰水浴冷却，然后加入6mL的氯化氢的1,4-二氧六环溶液，混合物0℃下搅拌2小时，浓缩除掉溶剂，粗品真 空干燥1小时，得到120mg的化合物7-8(粗品)。LCMS(ESI)m/z＝229.1(M+H)+。
(4)化合物IA-24的合成
化合物3-4(35mg,0.050mmol)溶解在10mL的二氯甲烷中，氮气条件下，加入化合物7-8(20mg,0.075mmol)，HATU(38mg,0.100mmol),然后加入DIPEA(42μL,0.25 mmol)，反应混合物在氮气条件下室温搅拌2小时。浓缩除掉溶剂，粗品通过PREP-TLC (二氯甲烷/乙酸乙酯/甲醇＝10:3.5:1)分离纯化，得到20mg的化合物IA-24，收率43％， 其为红色固体。LCMS(ESI)m/z＝910.1(M+H)+。1HNMR(400MHz,d-CDCl3)δppm 1.39 (d,J＝5.2Hz,3H),1.70-1.74(m,1H),1.99-2.11(m,3H),2.49(d,J＝11.6Hz,1H),2.74-2.76(m, 1H),2.81-2.83(m,1H),3.02(d,J＝15.2Hz,1H),3.24(d,J＝15.2Hz,1H),3.38-3.40(m,1H), 3.46(s,3H),3.49-3.66(m,10H),3.73(t,J＝4.4Hz,2H),3.89-3.94(m,1H),4.00-4.02(m,1H), 4.06-4.09(m,6H),4.47(d,J＝1.2Hz,1H),4.70(d,J＝1.2Hz,1H),4.82(d,J＝2Hz,2H),4.86(s,1H),5.32-5.34(m,1H),5.48(t,J＝4.4Hz,1H),6.71(s,2H),7.31-7.33(m,1H),7.40(d,J＝6.8 Hz,1H),7.79(t,J＝6.4Hz,1H),8.04(d,J＝6.0Hz,1H),13.28(s,1H),13.89(s,1H)。
化合物IA-25、IA-26的合成路线：
实施例23IA-25的合成
(1)化合物2-9的合成
原料1-9(10g,25.25mmol)溶于250mL乙腈中，依次加入4-羟基-3-硝基苯甲醛(7.1g,42.58mmol)和氧化银(26.1g,113.63mmol)，氮气保护下避光搅拌4小时，硅藻土过滤， 滤液减压移除乙腈，剩余物溶于400mL乙酸乙酯中，饱和碳酸氢钠洗涤3次(200mL×3)， 水洗(200mL)，饱和食盐水洗(200mL)，无水硫酸钠干燥，浓缩，得12g粗产品2-9， 为黄色固体，直接用于下一步反应。LCMS(ESI)m/z＝506.0(M+Na)+。
(2)化合物3-9的合成
上一步反应产物2-9(12g,24.8mmol)溶于50mL异丙醇和250mL氯仿的混合溶剂中，加入5g硅胶，冰水浴冷却至0℃，分批缓慢加入硼氢化钠(1.4g,37.2mmol)，搅拌2 小时，反应液倒入300mL冰水中，分出有机相，饱和食盐水洗(100mL)，无水硫酸钠 干燥，浓缩，剩余物乙醚洗涤，过滤，得10g产品3-9，为白色固体，收率83％。LCMS (ESI)m/z＝508.0(M+Na)+。
(3)化合物4-9的合成
上一步反应产物3-9(2g,4.1mmol)溶于300mL乙酸乙酯中，加入0.3g二氧化铂， 置换氢气3次，氢气氛下室温搅拌过夜。过滤，滤液浓缩，剩余物硅胶柱层析(石油醚/乙 酸乙酯＝1:3)纯化得1.7g产品4-9，为白色固体，收率91％。LCMS(ESI)m/z＝456.1(M+ H)+。
(4)化合物5-9的合成
上一步反应产物4-9(1.7g,3.74mmol)和Fmoc保护的β-氨基丙酸(1.74g,5.6mmol)溶于30mL二氯甲烷和15mL甲醇的混合溶剂中，加入EEDQ(1.85g,7.48mmol)，室温 搅拌过夜。减压移除溶剂，剩余物硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝1:3)纯化得1.8g产品5- 9，为白色固体，收率65％。LCMS(ESI)m/z＝749.0(M+H)+。
(5)化合物6-9的合成
上一步反应产物5-9(374mg,0.5mmol)和PNP-CO-PNP(二(对硝基苯)碳酸酯，304mg,1mmol)溶于10mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入DIPEA(170μL,1mmol)，室温搅 拌过夜。加入30mL水，乙酸乙酯萃取3次(30mL×3)，合并有机相，水洗(30mL×3)，饱 和食盐水洗(30mL×3)，无水硫酸钠干燥，浓缩，剩余物硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝1:1) 纯化得450mg产品6-9，为浅黄色油状物，收率98％。LCMS(ESI)m/z＝914.7(M+H)+。
(6)化合物8-9的合成
化合物5-4(40mg,0.052mmol)溶解在5mL的N,N-二甲基甲酰胺中，依次加入化 合物6-9(50mg,0.052mmoL)，三乙胺(15μL,0.104mmoL)，混合物在氮气条件下，室温 搅拌2小时，然后用10mL饱和食盐水淬灭反应。乙酸乙酯萃取(50mL×3)，合并有机相， 并用饱和食盐水洗涤(50mL×3)，无水硫酸钠干燥，过滤、浓缩，得到粗品。粗品通过快 速分离柱色谱(二氯甲烷/甲醇＝20:1)分离纯化，得到31mg化合物8-9，收率39％。 LCMS(ESI)m/z＝773.4(1/2M+H)+。
(7)化合物9-9的合成
化合物8-9(30mg,0.019mmol)溶解在5mL的甲醇中，冰水浴冷却到0℃，然后加 入10mL的氢氧化钠溶液(0.1N)，混合物在0℃搅拌2小时，然后用1N的盐酸调节pH 值到7。将上述溶液冷冻干燥，粗品悬浮在二氯甲烷和甲醇的混合溶剂(10:1)中，过滤、 滤液浓缩，得到粗品化合物9-9。粗品直接用于下一步。LCMS(ESI)m/z＝1426.3(M+H)+。
(8)化合物10-9的合成
化合物9-9(30mg,0.021mmol)溶解在2mL的N,N-二甲基甲酰胺中，冰水浴冷却到 0℃，然后加入1mL的二乙胺，混合物0℃下搅拌1小时，冷冻干燥除掉溶剂，得到粗 品化合物10-9。粗品直接用于下一步。LCMS(ESI)m/z＝1183.4(M+H)+。
(9)化合物IA-25的合成
化合物10-9(20mg,0.017mmol)溶解在2mL的N,N-二甲基甲酰胺中，氮气条件下，加入McOSu(11mg,0.034mmol)，然后加入4.7μL的TEA，反应混合物在氮气条件下室 温搅拌1小时。冷冻干燥除掉DMF，粗品通过PREP-TLC(二氯甲烷/甲醇＝8:1)分离纯 化，得到2.6mg的化合物IA-25，收率11％，其为红色固体。LCMS(ESI)m/z＝1375.3(M +H)+。
(10)化合物IA-26的合成
化合物10-9(20mg,0.017mmol)溶解在2mL的N,N-二甲基甲酰胺中，氮气条件下，加入C-L-066(13mg,0.034mmol)，然后加入4.7μL的TEA，反应混合物在氮气条件下 室温搅拌1小时。冷冻干燥除掉DMF，粗品通过PREP-TLC(二氯甲烷/甲醇＝8:1)分离 纯化，得到3.5mg的化合物IA-26，收率14％，其为红色固体。LCMS(ESI)m/z＝1451.3 (M+H)+。
化合物IA-27的合成路线：
实施例34化合物IA-27的合成
化合物1(46mg,0.072mmoL)溶解在5mL的溴丙炔中，依次加入硫酸钙(460mg)， 氧化银(35mg,0.14mmoL),上述混合物在40℃氮气条件下搅拌3天。反应液通过硅藻土 过滤，滤饼用5mL的甲醇洗涤，然后滤液浓缩，得到粗品。粗品通过快速分离柱色谱分 离纯化(二氯甲烷/甲醇＝10:1～4:1),得到28mg化合物IA-27，产率57％,其为红色固体。 LCMS(ESI)m/z 680.0(M)+。
化合物IA-28的合成路线
实施例35:化合物IA-28的合成
化合物2-11的合成
化合物1-11(2.82g，10mmoL)溶解在200mL二氯甲烷中，加入DMAP(244mg， 2mmoL)，三乙胺(13.9mL，100mmoL)，反应混合物冰水浴冷却到0℃，分批缓慢加入 对甲苯磺酰氯(7.6g，40mmoL)，加完后，反应液室温搅拌过夜。加入100mL的饱和 碳酸氢钠，淬灭反应，然后用二氯甲烷(100mL×2)萃取，合并有机相，用饱和碳酸氢 钠(100mL×2)洗涤，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤、浓缩，得到粗品。粗品通 过快速分离柱色谱分离纯化(石油醚/乙酸乙酯＝1:2)，得到5g的化合物2-11，为棕色油 状物，收率85％。LCMS(ESI)m/z＝591.2(M+H)+.
化合物3-11的合成
化合物2-11(2g，3.39mmoL)溶解在20mL DMF中，加入叠氮化钠(1.3g，20.34mmoL)，升温至50℃搅拌过夜。反应混合物冷却至室温，加入50mL水，淬灭反应，乙 酸乙酯(80mL×2)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(100mL×5)洗涤，有机相用无水 硫酸钠干燥、过滤、浓缩，得到1.12g粗品化合物3-11，粗品未经纯化，直接用于下一 步反应。LCMS(ESI)m/z＝355.2(M+23)+.
化合物4-11的合成
化合物3-11(1.12g,3.37mmoL)溶解在10mL的稀盐酸(5％)中，然后将PPh3(883mg,3.37mmoL)溶解在7mL THF中慢慢加入。加完后，反应混合物室温搅拌过夜。加 入20mL水，用二氯甲烷(50mL×3)萃取，去除有机相，水相用2N的氢氧化钠水溶液 调节pH到12。然后用二氯甲烷(50mL×3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥、过滤、 浓缩，得到580mg的粗品化合物4-11，为浅黄色油状物，粗品未经纯化，直接用于下一 步反应。LCMS(ESI)m/z＝307.0(M+H)+.
化合物5-11的合成
化合物4-11(580mg,1.89mmoL)溶解在16mL的碳酸钠溶液(2M)中，然后将 BOC2O(536mg,2.48mmoL)溶解在16mL的1,4-二氧六环中缓慢滴加，加完后，反应 液室温搅拌过夜。向反应液中加入20mL水，乙酸乙酯(100mL×2)萃取，合并有机相， 用水(100mL×2)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥、过滤、浓缩，得到750mg粗品化合 物5-11，为浅黄色油状物。粗品未经纯化，直接用于下一步反应。LCMS(ESI)m/z＝407.3 (M+H)+.
化合物6-11的合成
化合物5-11(750mg，1.85mmoL)溶解在60mL乙醇中，加入10％的Pd/C 100mg， 混合物置换氢气三次，并在氢气条件下室温搅拌过夜。反应混合物硅藻土过滤，乙醇(50 mL)洗涤，滤液浓缩，得到620mg粗品化合物6-11，粗品未经纯化，直接用于下一步反 应。LCMS(ESI)m/z＝381.0(M+H)+.
化合物7-11的合成
化合物6-11(620mg，1.63mmoL)溶解在20mL的饱和碳酸氢钠溶液中，冰水浴冷 却至0℃，加入化合物ethyl 2,5-dioxo-2H-pyrrole-1(5H)-carboxylate(340mg,2.04mmoL)。反应液在0℃条件下搅拌30分钟，然后升到室温，搅拌1小时，加入20mL水淬灭反 应，二氯甲烷(80mL×2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥、过滤、浓缩，得到粗品， 粗品通过快速分离柱层析分离纯化(PE/EA＝1:1)，得到240mg的化合物7-11为浅黄色 油状物，收率32％。LCMS(ESI)m/z＝483.3(M+H)+.
化合物8-11的合成
化合物7-11(60mg，0.13mmoL)溶解在2mL二氯甲烷中，加入1mL的TFA，混 合物室温搅拌2小时，减压移除溶剂，得到粗产物化合物8-11。粗产物未经纯化，直接 用于下一步反应。LCMS(ESI)m/z＝361.3(M+H)+.
IA-28的合成
化合物3-4(50mg，0.072mmoL)溶解在20mL的二氯甲烷中，依次加入HATU(55 mg，0.14mmoL)，DIPEA(59μL，0.36mmoL)，在氮气条件下室温搅拌20分钟，然后 加入化合物8-11(39mg，0.11mmoL)，反应液在氮气条件下室温搅拌1.5小时，浓缩， 粗品通过PREP-TLC(DCM/EA/MeOH＝100:35:10)分离纯化，得到40mg的化合物IA- 28，为红色固体，收率54％。LCMS(ESI)m/z＝1041.6(M+H)+.
化合物IA-29的合成路线
实施例36化合物IA-29的合成
化合物3的合成
化合物3-4(150mg，0.215mmol)溶解在30mL的二氯甲烷中，氮气条件下，加入化 合物2-12(132mg，0.325mmol)，HATU(164mg,0.432mmol),然后加入DIPEA(178μL, 1.07mmol)，反应混合物在氮气条件下室温搅拌12小时。减压移除溶剂，粗品通过快速 分离硅胶柱层析(DCM/EA/MeOH＝35:10:5)分离纯化，得到158mg的化合物3-12，为 红色固体，收率70％。LCMS(ESI)m/z＝1052.2(M+H)+.
化合物4-12的合成
化合物3-12(38mg，0.036mmol)溶解在6mL的乙腈中，冰水浴冷却至0℃，加入3 mL的二乙胺，搅拌1小时。减压浓缩，得到30mg的化合物4-12粗品，为红色固体， 粗品直接用到下一步反应。LCMS(ESI)m/z＝830.0(M+H)+.
化合物IA-29的合成
化合物4-12(25mg，0.030mmol)溶解在10mL DCM中，氮气条件下，加入化合物 5-12(59mg，0.076mmol)，然后再加入8.4μL的TEA，反应混合物在室温氮气条件下搅 拌2小时。浓缩除掉有机溶剂，粗品通过PREP-TLC(DCM/EA/MeOH＝100:25:12)分离 纯化，得到4.9mg的化合物IA-29，为红色固体，收率11％。LCMS(ESI)m/z＝746.7(M/2 +H)+.
化合物IA-30的合成路线
实施例37:化合物IA-30的合成
化合物2-13的合成
化合物1(190mg，0.30mmoL)溶解在10mL DCM中，依次加入化合物1-13(330 mg，0.089mmoL)，DMAP(181mg，1.48mmoL)，4A MS(200mg)，反应混合物在氮 气条件下，室温搅拌1周。反应混合物过滤、浓缩，得到粗产品，粗产品通过快速分离 柱层析分离纯化(二氯甲烷/丙酮/甲醇＝5:1:0.1)，得到110mg的化合物2-13，为红色固 体，收率38％。LCMS(ESI)m/z＝978.0(M+H)+.
化合物3-13的合成
化合物2-13(50mg，0.051mmol)溶解在6mL乙腈中，在冰水浴条件下，加入3mL 的二乙胺，并搅拌1小时。减压浓缩，得到39mg的粗品化合物3-13，为红色固体，粗 产品直接用到下一步反应。LCMS(ESI)m/z＝756.2(M+H)+.
化合物5-13的合成
化合物3-13(40mg，0.052mmol)溶解在5mL的DMF中，依次加入化合物6-9(50 mg，0.052mmoL)，TEA(15μL，0.106mmoL)，反应混合物在氮气条件下，室温搅拌2 小时。然后用10mL饱和食盐水淬灭反应，乙酸乙酯萃取(50mL×3)，合并有机相，饱 和食盐水洗涤(50mL×3)，无水硫酸钠干燥，过滤、浓缩，得到粗品。粗品通过快速分 离柱色谱分离纯化(DCM/MeOH＝20:1)，得到40mg化合物5-13，收率49％。LCMS (ESI)m/z＝1530.2(M+H)+.
化合物6-13的合成
化合物5-13(40mg，0.026mmol)溶解在5mL甲醇中，冰水浴冷却到0℃，然后加 入15mL的氢氧化钠溶液(0.1N)，反应混合物于0℃搅拌2小时。然后用1N的盐酸调 节pH值到7。将上述溶液冷冻干燥，粗品悬浮在二氯甲烷和甲醇的混合溶剂(10:1)中， 过滤，滤液浓缩，得到粗品化合物6-13，粗品直接用于下一步反应。LCMS(ESI) m/z＝1390.1(M+H)+.
化合物7-13的合成
化合物6-13(35mg，0.025mmol)溶解在4mL DMF中，冰水浴冷却到0℃，然后加 入2mL二乙胺，反应混合物0℃下搅拌1小时，冷冻干燥移除溶剂，得到粗品化合物7- 13，粗品直接用于下一步反应。LCMS(ESI)m/z＝1168.2(M+H)+.
化合物IA-30的合成
化合物7-13(30mg，0.026mmol)溶解在5mL DMF中，氮气条件下，加入化合物8- 13(20mg，0.065mmol)，然后加入7.2μL的TEA，反应混合物在氮气条件下室温搅拌 1小时。冷冻干燥移除DMF，粗品通过PREP-TLC(DCM/MeOH＝4:1)分离纯化，得到 3.1mg的化合物IA-30，为红色固体，收率8.9％。LCMS(ESI)m/z＝1361.1(M+H)+.
化合物IA-31的合成路线
实施例38:化合物IA-31的合成
化合物3-14的合成
化合物3-4(50mg，0.072mmoL)溶解在10mL的THF，加入10mL的DCM， HATU(41mg，0.11mmoL)，DIPEA(35μL，0.22mmoL)，化合物2-14(38mg，0.29 mmoL)，上述混合物在氮气条件下，室温搅拌过夜。浓缩得到粗品。粗品通过快速硅胶 柱层析分离纯化(DCM/MeOH＝10:1)，得到41mg的化合物3-14，为红色固体，收率71％。 LCMS(ESI)m/z＝814.0(M+H)+.
化合物IA-31的合成
化合物3-14(20mg，0.025mmol)溶解在10mL的DCM中，氮气条件下，加入化合 物C-L-066(19mg，0.049mmol)，然后加入6.8μL的TEA，反应混合物在氮气条件下室 温搅拌2小时。浓缩，粗品通过PREP-TLC(DCM/EA/MeOH＝100:35:10)分离纯化，得到 10mg的化合物IA-31，其为红色固体，收率37％。LCMS(ESI)m/z＝1083.1(M+H)+.
化合物IA-32的合成路线
实施例39:化合物IA-32的合成
化合物3-4(20mg，0.029mmoL)溶解在5mL的DCM中，依次加入HATU(22 mg，0.057mmoL)，DIPEA(30μL，0.17mmoL)，化合物2-15(18mg，0.081mmoL)， 上述混合物在氮气条件下，室温搅拌过夜。浓缩，得到粗品。粗品通过PREP-HPLC，得 到5mg的化合物IA-32，为红色固体，收率19％。LCMS(ESI)m/z＝905.0(M+H)+.
化合物IA-33的合成路线
实施例40:化合物IA-33的合成
化合物3-16的合成
化合物3-4(100mg，0.14mmol)溶解在20mL DCM中，氮气条件下，加入化合物2- 16(65mg，0.17mmol)，HATU(109mg,0.29mmol),然后加入DIPEA(118μL,0.72mmol)， 反应混合物在氮气条件下室温搅拌2小时。浓缩，粗品通过快速分离硅胶柱层析 (DCM/MeOH＝20:1)分离纯化，得到130mg的化合物3-16，为红色固体，收率89％。 LCMS(ESI)m/z＝1022.0(M+H)+.
化合物4-16的合成
化合物3-16(120mg,0.12mmol)溶解在5mL的THF中，依次加入甲醇(5mL),水(2.5mL)，碳酸钾(82mg,0.59mmoL)，反应混合物在室温条件下搅拌1小时，加入20mL 水，减压移除THF和甲醇，水相用2N稀盐酸调pH＝7，上述混合物冷冻干燥过夜，得到 粗品化合物4-16，粗品直接用于下一步反应。LCMS(ESI)m/z＝1008.2(M+H)+.
化合物IA-33的合成
化合物4-16(50mg，0.050mmoL)溶解在5mL的DMF中，依次加入HATU(38 mg，0.099mmoL)，DIPEA(41μL，0.25mmoL)，化合物5-16(33mg，0.15mmoL)， 上述混合物在氮气条件下，室温搅拌2小时。冷冻干燥得到粗品。粗品通过PREP-TLC 分离纯化(DCM/MeOH＝10:1)，得到15mg的化合物IA-33，为红色固体，收率25％。 LCMS(ESI)m/z＝1213.2(M+H)+.
化合物IA-34的合成路线
实施例41:化合物IA-34的合成
化合物3-17的合成
化合物1-17(6g，37.5mmoL)溶解在50mL甲醇中，加入化合物2-17(2.7mL，30mmoL)，上述混合物在室温条件下搅拌过夜。浓缩除掉有机溶剂，得到粗品，粗品通 过快速硅胶柱层析分离纯化(DCM/MeOH＝10:1)，得到6.1g化合物3-17，为无色油状 物，收率83％。LCMS(ESI)m/z＝247.1(M+H)+.
化合物5-17的合成
化合物4-17(2.53g，8.13mmol)溶解在100mL DCM中，氮气条件下，加入化合物 3-17(2g，8.13mmol)，HATU(6.18g,16.26mmol),然后加入DIPEA(6.7mL,40.65mmol)， 反应混合物在氮气条件下室温搅拌12小时。浓缩，粗品通过快速分离柱(PE/EA＝1:1) 分离纯化，得到4.3g的化合物5-17，为浅黄色油状物，收率98％。LCMS(ESI) m/z＝540.0(M+H)+.
化合物6-17的合成
化合物5-17(4.38g，8.13mmoL)溶解在30mL THF和30mL甲醇中，冰水浴冷 却至0℃，将氢氧化钠(1.62g，40.65mmoL)溶于30mL水中缓慢加入，上述混合物室 温搅拌过夜。减压移除THF和甲醇，水相用2N的盐酸调节pH值到7，上述混合物(含 化合物6-17)没有进一步处理，直接用于下一步反应。LCMS(ESI)m/z＝304.1(M+H)+.
化合物7-17的合成
上一步含有化合物6-17(2.46g，8.13mmoL)的溶液用50mL的水稀释，然后依次 加入THF(50mL)、碳酸氢钠(1.36g，16.26mmoL)、Fmoc-Cl(2.52g，9.76mmoL)， 上述混合物室温搅拌2小时，减压除掉THF，水相用2N盐酸调节pH到7，用乙酸乙 酯(100mL×3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥、过滤、浓缩，得到粗品，粗品通 过快速分离柱层析分离纯化(DCM/MeOH＝10:1)，得到2.47g的化合物7-17，为白色固 体，收率58％。LCMS(ESI)m/z＝548.0(M+H)+.
化合物9-17的合成
化合物7-17(470mg，0.90mmol)溶解在100mL DCM中，氮气条件下，加入化合物 8-17(299mg，1.34mmol)，HATU(680mg,1.79mmol),然后加入DIPEA(738μL,4.48 mmol)，反应混合物在氮气条件下室温搅拌12小时。浓缩，粗品通过快速分离柱层析 (DCM/MeOH＝5:1)分离纯化，得到280mg的化合物9-17，为浅黄色固体，收率43％。 LCMS(ESI)m/z＝731.1(M+H)+.
化合物10-17的合成
化合物9-17(150mg，0.21mmoL)溶解在5mL DCM中，加入氯化氢的乙酸乙酯 溶液(3M，20mL)，上述混合物室温搅拌1小时，减压浓缩，得到粗品化合物10-17， 粗品未经进一步纯化，直接用于下一步反应。LCMS(ESI)m/z＝631.1(M+H)+.
化合物12-17的合成
化合物3-4(130mg，0.19mmol)溶解在5mL DMF中，氮气条件下，加入化合物10- 17(120mg，0.19mmol)，HATU(145mg,0.38mmol)和DIPEA(157μL,0.95mmol)，反 应混合物在氮气条件下室温搅拌2小时。冷冻干燥，粗品通过PREP-TLC (DCM/MeOH＝8:1)分离纯化，得到82mg的化合物12-17，收率33％，其为红色固体。 LCMS(ESI)m/z＝1311.9(M+H)+.
化合物13-17的合成
化合物12-17(82mg，0.062mmol)溶解在5mL DCM中，在冰水浴条件下，加入5 mL的二乙胺，并搅拌1小时。浓缩，得到68mg的粗品化合物13-17，为红色固体，粗 品未经进一步纯化，直接用到下一步反应。LCMS(ESI)m/z＝1089.9(M+H)+.
化合物IA-34的合成
化合物13-17(60mg，0.055mmol)溶解在6mL DCM中，氮气条件下，加入2mL DMF，化合物14-17(35mg，0.11mmol)，然后加入15.3μL的TEA，反应混合物在氮气 条件下室温搅拌3小时。冷冻干燥，粗品通过PREP-TLC(DCM/MeOH＝8:1)分离纯化， 得到10.1mg的化合物IA-34，为红色固体，收率14％。LCMS(ESI)m/z＝1305.4(M+Na)+.
实施例42带连接体毒素与抗体偶联步骤如下：
将抗体蛋白(例如赫赛汀，抗TPBG抗体，抗CD70抗体或抗EGFRVIII抗体)使用 透析缓冲液(25mM Sodium Borate，硼酸钠)，25mM NaCl,and 1mM DTPA,final pH 7.4.) 于4℃透析过夜。透析缓冲液的体积是抗体蛋白体积的500倍以上。第二天将抗体取出 后，使用0.22μm的滤膜过滤后，使用A280(即A280(nm)紫外光吸收法测定蛋白浓度) 测定浓度。使用新鲜配制的TCEP(tris(2-carboxyethyl)phosphine hydrochloride)溶液，以 设定的比例加入到抗体中还原，以抗体物质的量的2至5倍为宜。在25℃还原反应2小 时后，使用脱盐柱将抗体转换入耦联缓冲液(20mM succinate150mM NaCl,2mM EDTA, about 75mM Tris.)中。以此同时，使用DMSO将需要耦联的化合物溶解成10mM的浓 度。在换盐后的抗体溶液中，缓慢加入终浓度10-30％的DMSO，立刻混匀；再将已溶解 的化合物以一定比例加入抗体溶液中。以抗体物质的量5至15倍间加入为宜。于25℃反 应2小时后，使用孔径为10kDa的透析膜进行透析并换液一次，4℃透析过夜。透析缓冲 液的体积需是抗体-化合物的体积的500倍以上。第三天将抗体-化合物取出后，使用0.22μm的绿膜过滤并测定浓度后。分别进行：疏水层析Hydrophobic-Interaction Chromatography(HIC)，聚丙烯酰胺-SDS凝胶电泳(SDS-PAGE，electrophoresis)，液相 质谱liquid chromatograph-mass spectrometer(LC-MS)确定耦联的化合物-抗体比例(即 DAR)和效率；分子排阻层析Size-ExclusionChromatography(SEC)，确定抗体-化合物 的分子纯度。具体化合物结构见表1，DAR表示药物与单克隆抗体的摩尔比(即k)。
效果实施例1生物活性测试
使用Her2阳性的人BT474乳腺肿瘤细胞(简称BT474)，Her2低表达的人MCF-7 乳腺肿瘤细胞(简称MCF-7)，以及在MCF-7外转Her2的人乳腺肿瘤MCF7-Her2稳转 细胞株(简称MCF-7-Her2)(参照文献：Teemu T.Junttila,et al.,Breast.Cancer.Res.Treat., 2011,128,347和Jeffrey J.Wallin et al.,Clin.Cancer.Res.,2012,18,3901公开的制备重组细胞方法进行制备，本发明在此引用该文献全文)。评价了得到的抗体药物偶联物对肿 瘤细胞的生长抑制。BT474，MCF7-Her2和MCF-7用0.25％(体积/体积)的胰蛋白酶消 化，使细胞剥离，然后悬浮于100μL完全培养基，2,000个细胞接种于96孔板进行培养。 37℃过夜贴壁生长，然后加入100μL含有不同浓度梯度的抗体药物偶联物以及完全培养 基。120小时后加入50μL萤光细胞活性检测试剂( Luminescent，Promega)进行相对细胞增殖分析。活性数据见表1。
表1
*表1中，mAb表示单克隆抗体赫赛汀
由表1可知，本发明的抗体偶联物对MCF-Her2细胞具有很好的抑制活性，其抑制活性基本高于对照药T-DM1。小分子毒素PNU-159682对BT474、阴性MCF-7细胞、阳 性MCF-7-Her2细胞活性相当，基本没有选择性。相对于PNU-159682，本发明的抗体药 物偶联物对阴性MCF-7细胞活性大大降低，对MCF-7-Her2阳性细胞活性基本相当或略 有下降，其选择性显著提高，其对MCF-7和MCF-Her2的选择性基本与T-DM1相近， 减小了潜在的细胞毒性。
效果实施例2生物活性测试
使用TPBG阳性的人MBA-MB-468乳腺癌细胞(简称MBA-MB-468)，TPBG低表 达的人NCI-H1975非小细胞肺癌细胞(简称NCI-H1975)。评价本发明的抗体药物偶联物 对肿瘤细胞的生长抑制。MBA-MB-468和NCI-H1975用0.25％(体积/体积)的胰蛋白酶 消化，使细胞剥离，然后悬浮于100μL完全培养基，2,000个细胞接种于96孔板进行 培养。37℃过夜贴壁生长，然后加入100μL含有不同浓度梯度的抗体药物偶联物以及完 全培养基。120小时后加入50μL萤光细胞活性检测试剂( Luminescent，Promega)进行相对细胞增殖分析。活性数据见表2。
表2
*表2中，mAb表示单克隆抗体TPBG
由表2可知，与使用DM1，MMAF为毒素的抗体药物偶联物相比，本发明的抗体药 物偶联物对TPBG阳性的人MBA-MB-468乳腺癌细胞(简称MBA-MB-468)和TPBG高 表达的人H1568非小细胞肺癌细胞具有更高的抑制活性。特别是在对TPBG低表达的人 NCI-H1975非小细胞肺癌细胞(简称NCI-H1975)本发明的抗体药物偶联物细胞杀伤活 性远远高于相应的以DM1和MMAF为毒素的对照物。
效果实施例3生物活性测试
使用CD70重组细胞系CHOK-hCD70(制备方法与MCF7-Her2一致)(简称CHOK-hCD70)和不表达CD70的阴性细胞CHOk1，评价本发明的抗体药物偶联物对肿瘤细胞 的生长抑制。同时也使用CD70阳性的人肾癌细胞786-O(简称786-O)，CD70低表达的 人肾癌细胞Caki-1(简称Caki-1)和Caki-2(简称Caki-2)，评价本发明的抗体药物偶联 物对肿瘤细胞的生长抑制。CHOK-hCD70、CHOK1、786-O、Caki-1和Caki-2用0.25％ (体积/体积)的胰蛋白酶消化，使细胞剥离，然后悬浮于100μL完全培养基，2,000个 细胞接种于96孔板进行培养。37℃过夜贴壁生长，然后加入100μL含有不同浓度梯度 的抗体药物偶联物以及完全培养基。120小时后加入50μL萤光细胞活性 检测试剂(Luminescent，Promega)进行相对细胞增殖分析。活性数据见 表3。
表3
*表3中，mAb表示单克隆抗体CD70.
由表3可知，与使用DM1为毒素的抗体药物偶联物相比，本发明的抗体药物偶联物对CD70阳性的重组细胞系CHOK-hCD70(简称CHOK-hCD70，制备方法与MCF7-Her2 一致)和人肾癌细胞786-O(简称786-O)具有接近或者更高的抑制活性。对CD70低表 达的人肾癌细胞Caki-1(简称Caki-1)和Caki-2(简称Caki-2)，本发明的抗体药物偶联 物具有接近甚至更高的细胞杀伤力。
效果实施例4生物活性测试
使用表达人EGFR蛋白的重组细胞系CHOK1-EGFR(简称CHOK1-EGFR)、E表达 人GFRvIII蛋白的重组细胞系CHOK1-EGFRvIII(简称CHOK1-EGFRvIII)为阳性细胞 和不表达EGFR的阴性细胞CHOk1，评价本发明的抗体药物偶联物对肿瘤细胞的生长抑 制。CHOK1-EGFR、CHOK1-EGFRvIII、CHOk1用0.25％(体积/体积)的胰蛋白酶消化， 使细胞剥离，然后悬浮于100μL完全培养基，2,000个细胞接种于96孔板进行培养。37℃ 过夜贴壁生长，然后加入100μL含有不同浓度梯度的抗体药物偶联物以及完全培养基。 120小时后加入50μL萤光细胞活性检测试剂(Luminescent， Promega)进行相对细胞增殖分析。活性数据见表4。
表4
*表4中，mAb表示单克隆抗体EGFRVIII.
由表4可知，与使用MMAF为毒素的抗体药物偶联物相比，本发明的抗体药物偶联物对EGFR阳性的重组细胞系CHOK1-EGFR(简称CHOK1-EGFR，制备方法与MCF7- Her2一致)和EGFRvIII阳性的重组细胞系CHOK1-EGFRvIII(简称CHOK1-EGFRvIII， 制备方法与MCF7-Her2一致)具有接近或者更高的细胞杀伤活性。

Claims (31)

1.一种如式IB所示的抗体药物偶联物，其互变异构体、光学异构体、水合物、溶剂化物、多晶型物、同位素化合物、其药学上可接受的盐或其前药，
其中，mAb为单克隆抗体片段；
0<k≤8；
R1为氢、羟基、C1-6烷氧基、C1-6烷基、-NRaRb或-C(O)NRcRd；Ra、Rb、Rc和Rd各自独立地为氢、C1-6烷基或C6-10芳基；
R2和R3各自独立地为C1-6烷基、C1-6烷氧基或C1-6烷硫基；
X为
Y为R4a和R4b各自独立地为氢、C1～4烷基、C3～6环烷基取代的C1～4烷基、C3～6环烷基、C2-8杂烷基、或-(OCH2CH2)j1OH；j1为1、2、3、4、5、6、7或8；
Z为或4-6元亚杂芳基；R5a和R5b各自独立地为氢或C1～4烷基；
或者，为
R6为氢、C1～4烷基、C2-8杂烷基、或-(OCH2CH2)j2OH；j2为1、2、3、4、5、6、7或8；
p为0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；且当Z为时，p不为0；
m为0或1；
E为
E中，e1、e2、e3、e4、e5和e6各自独立地为0、1、2、3、4、5、6、7或8；R7a、R7b、R7c、R7d、R7e、R7f和R7h各自独立地为氢、C1～4烷基、C3～6环烷基取代的C1～4烷基、C3～6环烷基、C2-8杂烷基、-(OCH2CH2)j3OH或j3为1、2、3、4、5、6、7或8；n为0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；
u为0或1；
R8为氢、C1～4烷基、C3～6环烷基取代的C1～4烷基、C3～6环烷基、C2-8杂烷基、或-(OCH2CH2)j4OH；j4为1、2、3、4、5、6、7或8；
q为0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；当含有多个-C(R8)-时，-C(R8)-相同或不同；
y为0～24的整数；
G为
s为0或1；
Q为t1、t3和t4各自独立地为0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；
中，r1、r2、r3和r4独立地为0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；R6e为氢、C1～4烷基、C2-8杂烷基或-(OCH2CH2)j2aOH；j2a为1、2、3、4、5、6、7或8；R8e为氢、C1～4烷基、C3～6环烷基取代的C1～4烷基、C3～6环烷基、C2-8杂烷基或-(OCH2CH2)j4aOH；j4a为1、2、3、4、5、6、7或8；Re为糖基、Fmoc或-(OCH2CH2)enOH，en为0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12。
2.如权利要求1所述的抗体药物偶联物，其互变异构体、光学异构体、水合物、溶剂化物、多晶型物、同位素化合物、其药学上可接受的盐或其前药，其特征在于，
所述的单克隆抗体为赫赛汀、抗TPBG抗体、抗CD70抗体或抗EGFRVIII抗体；
和/或，0<k≤6；
和/或，所述的为
和/或，当所述的R1、R2或R3为C1-6烷氧基时，所述的C1-6烷氧基为甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基或叔丁氧基；
和/或，当所述的R1、R2或R3为C1-6烷基时，所述的C1-6烷基为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基或叔丁基；
和/或，当R2或R3为C1-6烷硫基时，所述的C1-6烷硫基为甲硫基、乙硫基、正丙硫基、异丙硫基、正丁硫基、异丁硫基或叔丁硫基；
和/或，当Ra、Rb、Rc或Rd为C1-6烷基时，所述的C1-6烷基为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基或叔丁基；
和/或，当Ra、Rb、Rc或Rd为C6-10芳基时，所述的C6-10芳基为苯基；
和/或，当R4a、R4b、R5a、R5b、R6、R6e、R7a、R7b、R7c、R7d、R7e、R7f、R7h、R8或R8e为C1～4烷基时，所述的C1～4烷基为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基或叔丁基；
和/或，当R4a、R4b、R7a、R7b、R7c、R7d、R7e、R7f、R7h、R8或R8e为C3～6环烷基取代的C1～4烷基时，所述的C1～4烷基为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基或叔丁基；
和/或，当R4a、R4b、R7a、R7b、R7c、R7d、R7e、R7f、R7h、R8或R8e为C3～6环烷基取代的C1～4烷基时，所述的C3～6环烷基为环丙基；
和/或，当R4a、R4b、R7a、R7b、R7c、R7d、R7e、R7f、R7h、R8或R8e为C3～6环烷基时，所述的C3～6环烷基为环丙基；
和/或，当R4a、R4b、R6、R6e、R7a、R7b、R7c、R7d、R7e、R7f、R7h、R8或R8e为C2-8杂烷基时，所述的C2-8杂烷基中的杂原子为O、S和N中的一种或多种，杂原子的个数为1、2、3或4；
和/或，当Z为4-6元亚杂芳基时，所述的4-6元亚杂芳基中的杂原子为N、O和S中的一种或多种；杂原子个数为1个、2个或3个，所述的4-6元亚杂芳基为4元、5或元6元亚杂芳基；
和/或，y为0、1、2、3、4、5或6；
和/或，当Z为时，p不为0；
和/或，当所述的Z为时，p为0，m为1。
3.如权利要求2所述的抗体药物偶联物，其互变异构体、光学异构体、水合物、溶剂化物、多晶型物、同位素化合物、其药学上可接受的盐或其前药，其特征在于，
和/或，所述的为优选
和/或，当R4a、R4b、R7a、R7b、R7c、R7d、R7e、R7f、R7h、R8或R8e为C3～6环烷基取代的C1～4烷基时，所述的C3～6环烷基取代的C1～4烷基为环丙甲基；
和/或，当R4a、R4b、R6、R6e、R7a、R7b、R7c、R7d、R7e、R7f、R7h、R8或R8e为C2-8杂烷基时，所述的C2-8杂烷基为CH3OCH2-；
和/或，当Z为5元亚杂芳基时，所述的5元亚杂芳基为
和/或，为
和/或，为
4.如权利要求1所述的抗体药物偶联物，其互变异构体、光学异构体、水合物、溶剂化物、多晶型物、同位素化合物、其药学上可接受的盐或其前药，其特征在于，
当Y为所述的时，Z为所述的
和/或，当Y为所述的时，p为1；
和/或，当Y为所述的时，m为0；
和/或，当Y为所述的时，n为1；
和/或，当Y为所述的时，E为所述的
和/或，当Y为所述的时，u为0或1；
和/或，当Y为所述的时，q为2；
和/或，当Y为所述的时，y为2；
和/或，当Y为所述的时，s为0或1；
和/或，当Y为所述的时，G为
和/或，当Y为所述的时，Q为
和/或，当Y为所述的Z时，p不为0。
5.如权利要求1-4任一项所述的抗体药物偶联物，其互变异构体、光学异构体、水合物、溶剂化物、多晶型物、同位素化合物、其药学上可接受的盐或其前药，其特征在于，所述的IB化合物中，为以下任一结构：
其中，R4a、R4b、R5a和R5b的定义如权利要求1～4任一项所述。
6.如权利要求5所述的抗体药物偶联物，其互变异构体、光学异构体、水合物、溶剂化物、多晶型物、同位素化合物、其药学上可接受的盐或其前药，其特征在于，所述的为以下任一结构：
7.如权利要求5所述的抗体药物偶联物，其互变异构体、光学异构体、水合物、溶剂化物、多晶型物、同位素化合物、其药学上可接受的盐或其前药，其特征在于，所述的为以下任一结构：
其中，R4a、R4b、R5a、R5b和R6的定义如权利要求1～4任一项所述。
8.如权利要求7所述的抗体药物偶联物，其互变异构体、光学异构体、水合物、溶剂化物、多晶型物、其药学上可接受的盐或其前药，其特征在于，所述的为以下任一结构：
9.如权利要求1所述的抗体药物偶联物，其互变异构体、光学异构体、水合物、溶剂化物、多晶型物、同位素化合物、其药学上可接受的盐或其前药，其特征在于，所述的为以下任一结构：
10.如权利要求1所述的抗体药物偶联物，其互变异构体、光学异构体、水合物、溶剂化物、多晶型物、同位素化合物、其药学上可接受的盐或其前药，其特征在于，所述的抗体药物偶联物为以下任一化合物，其中，所述的mAb为赫赛汀、抗TPBG抗体、抗CD70抗体或抗EGFRVIII抗体；
11.一种如权利要求1～10任一项所述的抗体药物偶联物的制备方法，其特征在于，其包括以下步骤：有机溶剂中，在pH值为6-8的条件下，将IA化合物与单克隆抗体进行如下所示的偶联反应，得到所述的抗体药物偶联物，即可；
其中，k、R1、R2、R3、X、Y、Z、R6、p、m、E、n、u、R8、q、y、G、s、Q和mAb的定义如权利要求1～10任一项所述；
Q1为t1、t3和t4的定义如权利要求1所述。
12.一种IA化合物，
其中，R1、R2、R3、X、Y、Z、R6、p、m、E、n、u、R8、q、y、G和s的定义如权利要求1～10任一项所述；Q1的定义如权利要求11所述。
13.如权利要求12所述的IA化合物，其特征在于，其选自以下任一化合物：
14.一种IC-1、IC-2或IC-3化合物，
其中，R1、R2、R3、X、Y、Z、R6、p、m、E、n、u、R8、q和y的定义如权利要求1～10任一项所述，R9为
15.如权利要求14所述的IC-1、IC-2或IC-3化合物，其特征在于，
所述的IC-1化合物为以下任一结构：
和/或，所述的IC-2化合物为以下结构：
和/或，所述的IC-3化合物为以下任一结构：
16.一种如权利要求1～10任一项所述的抗体药物偶联物、如权利要求12或13所述的IA化合物、或如权利要求14或15所述的IC-1、IC-2或IC-3化合物，其互变异构体、光学异构体、水合物、溶剂化物、多晶型物、同位素化合物、其药学上可接受的盐或其前药在制备用于治疗和/或预防癌症的药物中的应用；所述的癌症优选乳腺癌、淋巴癌、肺癌、肝癌、结肠癌、头颈癌、膀胱癌、肾癌、食道癌、胆囊癌、卵巢癌、胰腺癌、胃癌、宫颈癌、甲状腺癌、前列腺癌、皮肤癌包括鳞状细胞癌；白细胞过多症、急性淋巴细胞性白血病、急性成淋巴细胞性白血病、B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、毛细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、急性和慢性髓细胞性白血病、骨髓增生异常综合征、前髓细胞白血病、纤维肉瘤、横纹肌肉瘤、星形细胞瘤、神经目细胞瘤、胶质瘤、神经鞘瘤、黑色素瘤、精原细胞瘤、畸胎癌、骨肉瘤、着色性干皮病、角质黄色瘤、甲状腺滤泡癌和卡波西肉瘤；所述的癌症的肿瘤细胞优选Her2阳性的人BT474乳腺肿瘤细胞、Her2低表达的人MCF-7乳腺肿瘤细胞、或在MCF-7外转Her2的人乳腺肿瘤MCF7-Her2稳转细胞株。
17.一种药物组合物，其特征在于，包含如权利要求1～10任一项所述的抗体药物偶联物、如权利要求12或13所述的IA化合物、或如权利要求14或15所述的IC-1、IC-2或IC-3化合物，其互变异构体、光学异构体、水合物、溶剂化物、多晶型物、同位素化合物、其药学上可接受的盐或其前药，以及一种或多种药学上可接受的辅料。
18.一种如式IB所示的抗体药物偶联物，其互变异构体、光学异构体、水合物、溶剂化物、多晶型物、其药学上可接受的盐或其前药，
其中，mAb为单克隆抗体片段；
0<k≤8；
R1为氢、羟基、C1-6烷氧基、C1-6烷基、-NRaRb或-C(O)NRcRd；Ra、Rb、Rc和Rd各自独立地为氢、C1-6烷基或C6-10芳基；
R2和R3各自独立地为C1-6烷基、C1-6烷氧基或C1-6烷硫基；
X为或
Y为R4a和R4b各自独立地为氢、C1～4烷基、C3～6环烷基取代的C1～4烷基、C3～6环烷基、C2-8杂烷基、或-(OCH2CH2)j1OH；j1为1、2、3、4、5、6、7或8；
Z为或4-6元亚杂芳基；R5a和R5b各自独立地为氢或C1～4烷基；
或者，为
R6为氢、C1～4烷基、C2-8杂烷基、或-(OCH2CH2)j2OH；j2为1、2、3、4、5、6、7或8；
p为0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；且当Z为时，p不为0；
m为0或1；
E为R7a和R7b各自独立地为氢、C1～4烷基、C3～6环烷基取代的C1～4烷基、C3～6环烷基、C2-8杂烷基、或-(OCH2CH2)j3OH；j3为1、2、3、4、5、6、7或8；
n为0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；当有多个E时，E相同或不同；
u为0或1；
R8为氢、C1～4烷基、C3～6环烷基取代的C1～4烷基、C3～6环烷基、C2-8杂烷基、或-(OCH2CH2)j4OH；j4为1、2、3、4、5、6、7或8；
q为0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；当含有多个-C(R8)-时，-C(R8)-相同或不同；
y为0～24的整数；
G为
s为0或1；
Q为 t1、t2、t3和t4各自独立地为0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
19.如权利要求18所述的抗体药物偶联物，其互变异构体、光学异构体、水合物、溶剂化物、多晶型物、其药学上可接受的盐或其前药，其特征在于，
所述的单克隆抗体为赫赛汀、抗TPBG抗体、抗CD70抗体或抗EGFRVIII抗体；
和/或，0<k≤6；
和/或，所述的为
和/或，当所述的R1、R2或R3为C1-6烷氧基时，所述的C1-6烷氧基为甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基或叔丁氧基；
和/或，当所述的R1、R2或R3为C1-6烷基时，所述的C1-6烷基为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基或叔丁基；
和/或，当R2或R3为C1-6烷硫基时，所述的C1-6烷硫基为甲硫基、乙硫基、正丙硫基、异丙硫基、正丁硫基、异丁硫基或叔丁硫基；
和/或，当Ra、Rb、Rc或Rd为C1-6烷基时，所述的C1-6烷基为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基或叔丁基；
和/或，当Ra、Rb、Rc或Rd为C6-10芳基时，所述的C6-10芳基为苯基；
和/或，当R4a、R4b、R5a、R5b、R6、R7a、R7b或R8为C1～4烷基时，所述的C1～4烷基为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基或叔丁基；
和/或，当R4a、R4b、R7a、R7b或R8为C3～6环烷基取代的C1～4烷基时，所述的C1～4烷基为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基或叔丁基；
和/或，当R4a、R4b、R7a、R7b或R8为C3～6环烷基取代的C1～4烷基时，所述的C3～6环烷基为环丙基；
和/或，当R4a、R4b、R7a、R7b或R8为C3～6环烷基时，所述的C3～6环烷基为环丙基；
和/或，当R4a、R4b、R6、R7a、R7b或R8为C2-8杂烷基时，所述的C2-8杂烷基中的杂原子为O、S或N中的一种或多种，杂原子的个数为1、2、3或4；
和/或，当Z为4-6元亚杂芳基时，所述的4-6元亚杂芳基中的杂原子为N、O和S中的一种或多种；杂原子个数为1个、2个或3个，所述的4-6元亚杂芳基为4元、5或元6元亚杂芳基；
和/或，y为0、1、2、3、4、5或6；
和/或，当Z为时，p不为0；
和/或，当所述的Z为时，p为0，m为1。
20.如权利要求19所述的抗体偶联物，其互变异构体、光学异构体、水合物、溶剂化物、多晶型物、其药学上可接受的盐或其前药，其特征在于，
和/或，所述的为
和/或，当R4a、R4b、R7a、R7b或R8为C3～6环烷基取代的C1～4烷基时，所述的C3～6环烷基取代的C1～4烷基为环丙甲基；
和/或，当R4a、R4b、R6、R7a、R7b或R8为C2-8杂烷基时，所述的C2-8杂烷基为CH3OCH2-；
和/或，当Z为5元亚杂芳基时，所述的5元亚杂芳基为
和/或，为
和/或，为
21.如权利要求18所述的抗体药物偶联物，其互变异构体、光学异构体、水合物、溶剂化物、多晶型物、其药学上可接受的盐或其前药，其特征在于，
当Y为所述的时，Z为所述的
和/或，当Y为所述的时，p为1；
和/或，当Y为所述的时，m为0；
和/或，当Y为所述的时，n为1；
和/或，当Y为所述的时，E为所述的
和/或，当Y为所述的时，u为0或1；
和/或，当Y为所述的时，q为2；
和/或，当Y为所述的时，y为2；
和/或，当Y为所述的时，s为0或1；
和/或，当Y为所述的时，G优选
和/或，当Y为所述的时，Q优选为
和/或，当Y为所述的Z时，p不为0。
22.如权利要求18-21任一项所述的抗体药物偶联物，其互变异构体、光学异构体、水合物、溶剂化物、多晶型物、其药学上可接受的盐或其前药，其特征在于，所述的IB化合物中，为以下任一结构：
其中，R4a、R4b、R5a和R5b的定义如权利要求1～4任一项所述。
23.如权利要求22所述的抗体药物偶联物，其互变异构体、光学异构体、水合物、溶剂化物、多晶型物、其药学上可接受的盐或其前药，其特征在于，所述的为以下任一结构：
24.如权利要求22所述的抗体药物偶联物，其互变异构体、光学异构体、水合物、溶剂化物、多晶型物、其药学上可接受的盐或其前药，其特征在于，所述的IB化合物中，所述的为以下任一结构：
其中，R4a、R4b、R5a、R5b和R6的定义如权利要求1～4任一项所述。
25.如权利要求24所述的抗体药物偶联物，其互变异构体、光学异构体、水合物、溶剂化物、多晶型物、其药学上可接受的盐或其前药，其特征在于，所述的为以下任一结构：
26.如权利要求18所述的抗体药物偶联物，其互变异构体、光学异构体、水合物、溶剂化物、多晶型物、其药学上可接受的盐或其前药，其特征在于，所述的为以下任一结构：
27.一种如权利要求18～26任一项所述的抗体药物偶联物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：有机溶剂中，pH为6-8条件下，将IA化合物与所述的单克隆抗体进行如下所示的偶联反应，得到所述的式IB抗体药物偶联物，即可；
其中，k、R1、R2、R3、X、Y、Z、R6、p、m、E、n、u、R8、q、y、G、s、Q和mAb的定义如权利要求18～26任一项所述；
Q1为 t1、t2、t3和t4的定义如权利要求18所述。
28.一种式IA化合物，
其中，R1、R2、R3、X、Y、Z、R6、p、m、E、n、u、R8、q、y、G和s的定义如权利要求18～26任一项所述；Q1的定义如权利要求27所述。
29.一种如式IC-1、IC-2或IC-3所示的化合物，
其中，R1、R2、R3、X、Y、Z、R6、p、m、E、n、u、R8、q和y的定义如权利要求18～26任一项所述，R9为
30.一种如权利要求18～26任一项所述的式IB抗体药物偶联物或如权利要求28所述的式IA化合物、其互变异构体、光学异构体、水合物、溶剂化物、多晶型物、其药学上可接受的盐或其前药在制备用于治疗和/或预防癌症的药物中的应用；所述的癌症优选乳腺癌、淋巴癌、肺癌、肝癌、结肠癌、头颈癌、膀胱癌、肾癌、食道癌、胆囊癌、卵巢癌、胰腺癌、胃癌、宫颈癌、甲状腺癌、前列腺癌、皮肤癌包括鳞状细胞癌；白细胞过多症、急性淋巴细胞性白血病、急性成淋巴细胞性白血病、B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、毛细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、急性和慢性髓细胞性白血病、骨髓增生异常综合征、前髓细胞白血病、纤维肉瘤、横纹肌肉瘤、星形细胞瘤、神经目细胞瘤、胶质瘤、神经鞘瘤、黑色素瘤、精原细胞瘤、畸胎癌、骨肉瘤、着色性干皮病、角质黄色瘤、甲状腺滤泡癌和卡波西肉瘤；所述的癌症的肿瘤细胞优选Her2阳性的人BT474乳腺肿瘤细胞、Her2低表达的人MCF-7乳腺肿瘤细胞、或在MCF-7外转Her2的人乳腺肿瘤MCF7-Her2稳转细胞株。
31.一种药物组合物，其特征在于，包含如权利要求18～26任一项所述的式IB抗体药物偶联物、或如权利要求28所述的式IA化合物、其互变异构体、光学异构体、水合物、溶剂化物、多晶型物、其药学上可接受的盐或其前药，以及一种或多种药学上可接受的辅料。
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