CN110016025A - 一种免疫调节剂 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种免疫调节剂，具体涉及一类激活STING的化合物及其作为免疫调节剂在制备药物中的用途。本发明公开了式Ⅰ所示的化合物、或其立体异构体、或其药学上可接受的盐、或其溶剂合物、或其前体药物、或其代谢产物在制备激活STING类药物中的用途，为临床上筛选和/或制备与STING活性相关的疾病的药物提供了一种新的选择。

Description

一种免疫调节剂
技术领域
本发明涉及一种免疫调节剂，具体涉及一类激活STING的化合物及其作为免疫调节剂在制备药物中的用途。
背景技术
人体的免疫系统通常可分为“天然免疫”和“适应免疫”系统。天然免疫系统在抵抗感染、抑制肿瘤生长以及自身免疫疾病的发病过程中起着重要作用，主要通过模式识别受体识别病原微生物和癌细胞组分，启动下游信号通路，最终通过诱导细胞因子表达，杀灭病原微生物和癌细胞组分，以及适应免疫系统促进抗体和特异性T淋巴细胞生成。
STING(干扰素基因刺激因子，TMEM173，MITA等)是胞内应答DNA入侵的关键节点分子，在胞质DNA刺激下，识别胞质DNA受体的信号，对诱导产生干扰素的过程起关键作用。宿主细胞的DNA识别受体识别外源或内源“非己”DNA后，将信号传递给节点分子STING，然后STING迅速二聚化并从内质网转移至核外周小体上。STING的活化导致IRF3和NKκB途径的上调，从而导致干扰素-β和其它细胞因子的诱导。
CDN首先被发现是负责控制原核细胞应答的第二信使。细菌CDN直接激活STING已通过X射线晶体学进行验证(Burdette DL et al.Nature Immunolog,2013(14):19-26)。已发现新的CDN信号转导分子cGAMP可激活STING，其与STING的相互作用也已经通过X射线晶体学进行验证(Cai X et al.Molecular Cell,2014(54):289-296)。
已经显示与STING结合并充当激动剂的化合物在与人PBMC孵育时诱导1型干扰素和其他细胞因子。诱导人干扰素的化合物可用于治疗各种病症，例如治疗过敏性疾病和其它炎性病症，例如过敏性鼻炎和哮喘，治疗感染性疾病、神经退行性疾病、癌前期综合症和癌症，也可以用作免疫组合物或疫苗佐剂。激活STING可能是用于治疗有关1型IFN途径疾病的潜在方法，所述疾病和病症包括炎性、变应性和自身免疫性疾病、感染性疾病、癌症、癌前期综合征，或作为免疫组合物或疫苗佐剂。
发明内容
为了解决上述问题，本发明提供了一种免疫调节剂。
本发明提供了式Ⅰ所示的化合物、或其立体异构体、或其药学上可接受的盐、或其溶剂合物、或其前体药物、或其代谢产物：
其中，
X1、X2、X3、X4、X1’、X2’、X3’、X4’分别独自选自C或N；
B环选自
C环选自被0～4个R5’任选取代的苯环、被0～4个R5’任选取代的5～6元芳杂环；
R4、R4’分别独立地选自氢、C1～C6烷基、卤素；
R5、R6、R7分别独立地选自氢、C1～C6烷基、卤素取代的C1～C6烷基；
R1、R2、R3、R1’、R2’、R3’、R5’分别独自选自氢、-ORd、-NRdRe、卤素、-CN、C(O)ORd、C1～C6烷基、卤素取代的C1～C6烷基、-C(O)NRaRb或无；
Ra、Rb、Rd、Re分别独立地选自氢、C1～C6烷基；
L选自被0～4个Rn任选取代的C4～C6的亚烷基、被0～4个Rn任选取代的C4～C6的亚烯基、被0～4个Rn任选取代的C4～C6的亚炔基；其中，任选取代的C4～C6的亚烷基、任选取代的C4～C6的亚烯基、任选取代的C4～C6的亚炔基中的碳原子可被-O-、-S-、-NRm-取代；
Rm选自氢、C1～C6烷基；
Rn选自卤素、羟基、氨基、C1～C6烷基、C1～C6烷氧基、C1～C6烷氨基、卤素取代的C1～C6烷基；
当X1、X2、X3、X4、X1’、X2’、X3’、X4’中至少有一个N时：
Rs、Rt分别独自选自氢、卤素、被0～4个Rh任选取代的C1～C6烷基、-ORf、-NRfRg、-C(O)Rf、-CO2Rf、-C(O)NRfRg、-NRfC(O)Rg或无；
当X1、X2、X3、X4、X1’、X2’、X3’、X4’中都为C时：
Rt选自氢、卤素、被0～4个Rh任选取代的C1～C6烷基、-ORf、-NRfRg、-C(O)Rf、-CO2Rf、-C(O)NRfRg、-NRfC(O)Rg或无；
Rs选自当m为0时，A环选自被0～4个Rc任选取代的3～6元环烷基、被0～4个Rc任选取代的3～6元杂环烷基；当m为1、2、3、4、5、6时，A环选自被0～4个Rc任选取代的3～6元环烷基、被0～4个Rc任选取代的4元杂环烷基；
Rc独立地选自氢、-ORd、-NRdRe、卤素、＝O、C1～C6烷基、-C(O)ORd；
Rf、Rg分别独立地选自氢、被0～4个Rh任选取代的C1～C6烷基、被0～4个Ri任选取代的苯环、被0～4个Ri任选取代的5～6元芳杂环、被0～4个Ri任选取代的3～6元环烷基、被0～4个Ri任选取代的3～6元杂环烷基；
Rh选自卤素、-ORj、-NRjRk、-C(O)Rj、-CO2Rj、-C(O)NRjRk、-NRjC(O)Rk、被0～4个Ri任选取代的苯环、被0～4个Ri任选取代的5～6元芳杂环、被0～4个Ri任选取代的3～6元环烷基、被0～4个Ri任选取代的3～6元杂环烷基；
Ri选自卤素、羟基、氨基、C1～C6烷基、C1～C6烷氧基、C1～C6烷氨基、卤素取代的C1～C6烷基、氰基；
Rj、Rk分别独立地选自氢、C1～C6烷基。
进一步地，所述化合物如式II所示：
其中，
X1’、X2’、X3’、X4’中至少有一个N；
B环选自C环选自
R15、R16、R17、R15’、R16’、R17’分别独立地选自氢、C1～C6烷基、卤素取代的C1～C6烷基；
R14、R14’分别独立地选自氢、C1～C6烷基；
R11、R13分别独自选自氢、-ORd、卤素、-CN、C(O)ORd、C1～C6烷基；
R11’、R13’分别独自选自氢、-ORd、卤素、-CN、C(O)ORd、C1～C6烷基或无；
R12选自氢、-C(O)NRaRb；
R12’选自氢、-C(O)NRaRb或无；
Ra、Rb、Rd分别独立地选自氢、C1～C6烷基；
Rt1选自氢、C1～C6烷基；
Rf选自氢、被0～4个Rh任选取代的C1～C6烷基、被0～4个Ri任选取代的苯环、被0～4个Ri任选取代的5～6元芳杂环、被0～4个Ri任选取代的3～6元环烷基、被0～4个Ri任选取代的3～6元杂环烷基；
Rh选自卤素、-ORj、-NRjRk、-C(O)Rj、-CO2Rj、-C(O)NRjRk、-NRjC(O)Rk、被0～4个Ri任选取代的苯环、被0～4个Ri任选取代的5～6元芳杂环、被0～4个Ri任选取代的3～6元环烷基、被0～4个Ri任选取代的3～6元杂环烷基；
Ri选自卤素、羟基、氨基、C1～C6烷基、C1～C6烷氧基、C1～C6烷氨基、卤素取代的C1～C6烷基、氰基；
Rj、Rk分别独立地选自氢、C1～C6烷基；
L选自C4～C6的亚烯基。
更进一步地，所述式II所示化合物为：
进一步地，所述化合物如式III所示：
其中，
B环选自
C环选自被0～4个R5’任选取代的苯环、被0～4个R5’任选取代的5～6元芳杂环；
R21、R23、R24、R25、R26、R27分别独立地选自氢、C1～C6烷基；
R22选自-C(O)NRaRb、-C(O)ORd；
R21’、R23’、R5’分别独立地选自氢、-ORd、-NRdRe、卤素、C1～C6烷基；
R24’选自氢、C1～C6烷基；
Ra、Rb、Rd、Re分别独立地选自氢、C1～C6烷基；
R22’选自氢、-ORd、-NRdRe、卤素、-CN、C(O)ORd、C1～C6烷基、-C(O)NRaRb；
Rt2选自氢、卤素、被0～4个Rh任选取代的C1～C6烷基、-ORf、-NRfRg、-C(O)Rf、-C(O)ORf、-CONRfRg、-NRfCORg；
Rf、Rg分别独立地选自氢、被0～4个Rh任选取代的C1～C6烷基、被0～4个Ri任选取代的苯环、被0～4个Ri任选取代的5～6元芳杂环、被0～4个Ri任选取代的3～6元环烷基、被0～4个Ri任选取代的3～6元杂环烷基；
Rh选自卤素、-ORj、-NRjRk、-CORj、-CO2Rj、-CONRjRk、-NRjCORk、被0～4个Ri任选取代的苯环、被0～4个Ri任选取代的5～6元芳杂环、被0～4个Ri任选取代的3～6元环烷基、被0～4个Ri任选取代的3～6元杂环烷基；
Ri选自卤素、羟基、氨基、C1～C6烷基、C1～C6烷氧基、C1～C6烷氨基、卤素取代的C1～C6烷基、氰基；
Rj、Rk分别独立地选自氢、C1～C6烷基；
L选自被0～4个Rn任选取代的C4～C6的亚烷基、被0～4个Rn任选取代的C4～C6的亚烯基、被0～4个Rn任选取代的C4～C6的亚炔基；其中任选取代的C4～C6的亚烷基、任选取代的C4～C6的亚烯基、任选取代的C4～C6的亚炔基中的碳原子可被-O-、-S-、-NRm-取代；
Rm选自氢、C1～C6烷基；
Rn选自卤素、羟基、氨基、C1～C6烷基、C1～C6烷氧基、C1～C6烷氨基、卤素取代的C1～C6烷基。
进一步地，R21、R23、R24、R27分别独立地选自氢；
R25、R26分别独立地选自C1～C6烷基；
Ra、Rb分别独立地选自氢；
C环选自
s为0、1、2、3；
R21’、R23’、R5’分别独立地选自氢、C1～C6烷基；
R24’选自氢；
R22’选自-C(O)NRaRb；
Rt2选自氢、-ORf；
Rf选自被0～4个Rh任选取代的C1～C6烷基、被0～4个Ri任选取代的3～6元环烷基、被0～4个Ri任选取代的3～6元杂环烷基；
Rh选自被0～4个Ri任选取代的3～6元环烷基、被0～4个Ri任选取代的3～6元杂环烷基；
Ri选自卤素、羟基、氨基、C1～C6烷基、C1～C6烷氧基、C1～C6烷氨基、卤素取代的C1～C6烷基、氰基；
L选自0～4个Rn任选取代的C4～C6的亚烷基、被0～4个Rn任选取代的C4～C6的亚烯基；
Rn选自卤素、羟基、氨基、C1～C6烷基、C1～C6烷氧基、C1～C6烷氨基、卤素取代的C1～C6烷基。
进一步地，所述化合物如式IIIa所示：
其中，
R21、R23、R24、R27分别独立地选自氢；
R25、R26分别独立地选自C1～C6烷基；
R22’选自-C(O)NRaRb；
Ra、Rb分别独立地选自氢；
X选择-C-、-O-、-NRz-、-S-；
Rz选自氢、C1～C6烷基；
m为0、1、2、3、4、5、6；
n为1、2、3、4；
p为0、1、2、3、4。
更进一步地，所述式IIIa所示化合物为：
进一步地，所述化合物如式IIIb所示：
其中，
R21、R23、R24、R27分别独立地选自氢；R25、R26分别独立地选自C1～C6烷基；
Ra、Rb分别独立地选自氢。
更进一步地，所述式IIIb所示化合物为：
进一步地，所述化合物如式Ⅳ所示：
其中，
B环选自
当m为0时，A环选自被0～4个Rc任选取代的3～6元环烷基、被0～4个Rc任选取代的3～6元杂环烷基；
当m为1、2、3、4、5、6时，A环选自被0～4个Rc任选取代的3～6元环烷基、被0～4个Rc任选取代的4元杂环烷基；
R31、R33、R34分别独立地选自氢、卤素、C1～C6烷基；
R35、R36、R37分别独立地选自氢、C1～C6烷基；
R32选自-CONRaRb；
Ra、Rb分别独立地选自氢、C1～C6烷基；
Rc分别独立地选自氢、-ORd、-NRdRe、卤素、＝O、C1～C6烷基、-C(O)ORd；
Rd、Re分别独立地选自氢、C1～C6烷基；
C环选自被0～4个R5’任选取代的苯环、被0～4个R5’任选取代的5～6元芳杂环；
R31’、R33’、R5’分别独立地选自氢、-ORd、-NRdRe、卤素、C1～C6烷基；
R34’选自氢、C1～C6烷基；
R32’选自氢、-ORd、-NRdRe、卤素、-CN、C(O)ORd、C1～C6烷基、-C(O)NRaRb；
Rt3选自氢、卤素、被0～4个Rh任选取代的C1～C6烷基、-ORf、-NRfRg、-C(O)Rf、-CO2Rf、-C(O)NRfRg、-NRfC(O)Rg；
Rf、Rg分别独立地选自氢、被0～4个Rh任选取代的C1～C6烷基、被0～4个Ri任选取代的苯环、被0～4个Ri任选取代的5～6元芳杂环、被0～4个Ri任选取代的3～6元环烷基、被0～4个Ri任选取代的3～6元杂环烷基；
Rh选自卤素、-ORj、-NRjRk、-C(O)Rj、-CO2Rj、-C(O)NRjRk、-NRjC(O)Rk、被0～4个Ri任选取代的苯环、被0～4个Ri任选取代的5～6元芳杂环、被0～4个Ri任选取代的3～6元环烷基、被0～4个Ri任选取代的3～6元杂环烷基；
Ri选自卤素、羟基、氨基、C1～C6烷基、C1～C6烷氧基、C1～C6烷氨基、卤素取代的C1～C6烷基、氰基；
Rj、Rk分别独立地选自氢、C1～C6烷基；
L选自被0～4个Rn任选取代的C4～C6的亚烷基、被0～4个Rn任选取代的C4～C6的亚烯基、被0～4个Rn任选取代的C4～C6的亚炔基；其中任选取代的C4～C6的亚烷基、任选取代的C4～C6的亚烯基、任选取代的C4～C6的亚炔基中的碳原子可被-O-、-S-、-NRm-取代；
Rm选自氢、C1～C6烷基；
Rn选自卤素、羟基、氨基、C1～C6烷基、C1～C6烷氧基、C1～C6烷氨基、卤素取代的C1～C6烷基。
进一步地，R31、R33、R34分别独立地选自氢、卤素；
R37独立地选自氢；
R35、R36分别独立地选自C1～C6烷基；
Ra、Rb分别独立地选自氢；
A环选自被0～4个Rc任选取代的3～6元环烷基、4元杂环烷基；
C环选自
s为0、1、2、3；
R31’、R33’、R35’分别独立地选自氢、卤素、C1～C6烷基；
R34’选自氢；
R32’选自-NRdRe、-C(O)NRaRb；
Rt3选自氢、-ORf；
Rf选自被0～4个Rh任选取代的C1～C6烷基、被0～4个Ri任选取代的3～6元环烷基、被0～4个Ri任选取代的3～6元杂环烷基；
Rh选自-ORj、被0～4个Ri任选取代的3～6元环烷基、被0～4个Ri任选取代的3～6元杂环烷基；
L选自0～4个Rn任选取代的C4～C6的亚烷基、被0～4个Rn任选取代的C4～C6的亚烯基。
进一步地，所述化合物如式Ⅳa所示：
其中，
R31、R33、R34、R37分别独立地选自氢；
R35、R36分别独立地选自C1～C6烷基；
Ra、Rb分别独立地选自氢；
m为0、1、2、3、4、5、6；
n为0、1、2、3；
p为0、1、2、3、4；
Rc分别独立地选自氢、-ORd、-NRdRe、卤素、＝O、C1～C6烷基、-C(O)ORd；
Rd、Re分别独立地选自氢、C1～C6烷基。
更进一步地，所述式Ⅳa所示化合物为：
进一步地，所述化合物如式Ⅳb所示：
其中，
R31、R33、R34分别独立地选自氢、卤素；
R37独立地选自氢；
R35、R36分别独立地选自C1～C6烷基；
Ra、Rb分别独立地选自氢；
X选择-O-、-NRy-、-S-；
NRy选自氢、C1～C6烷基；
当m为0时，n和q相加为2、3、4；
当m为1、2、3、4、5、6时，n和q相加为2；
p为0、1、2、3、4；
Rc分别独立地选自氢、-ORd、-NRdRe、卤素、＝O、C1～C6烷基；
Rd、Re分别独立地选自氢、C1～C6烷基。
更进一步地，所述式Ⅳb所示化合物为：
本发明还提供了前述的化合物、或其立体异构体、或其药学上可接受的盐、或其溶剂合物、或其前体药物、或其代谢产物在制备激活STING类药物中的用途。
本发明还提供了前述的化合物、或其立体异构体、或其药学上可接受的盐、或其溶剂合物、或其前体药物、或其代谢产物在制备治疗与STING活性相关的疾病的药物中的用途。
进一步地，所述与STING活性相关的疾病是与炎性、自身免疫性疾病、感染性疾病、癌症、癌前期综合征相关的疾病中的一种或几种。
本发明还提供了前述的化合物、或其立体异构体、或其药学上可接受的盐、或其溶剂合物、或其前体药物、或其代谢产物在制备治疗炎性、自身免疫性疾病、感染性疾病、癌症或癌前期综合征的药物中的用途。
本发明还提供了前述的化合物、或其立体异构体、或其药学上可接受的盐、或其溶剂合物、或其前体药物、或其代谢产物在制备免疫佐剂中的用途。
本发明还提供了一种药物，它是以前述的化合物、或其立体异构体、或其药学上可接受的盐、或其溶剂合物、或其前体药物、或其代谢产物，加上药学上可接受的辅料制备而成的制剂。
本发明所定义的STING活性相关的疾病是STING在该疾病的病理发生中起重要作用的疾病。
STING活性相关的疾病包括炎性、变应性和自身免疫性疾病、感染性疾病、癌症、癌前期综合征。
“癌症”或“恶性肿瘤”是指以不受控制的细胞异常增殖为特征的多种疾病中的任何一种，受影响的细胞在局部或通过血流和淋巴系统扩散到其他部位的能力的身体(即转移)以及许多特征结构和/或分子特征中的任何一个。“癌细胞”是指经历多步骤肿瘤进展的早期，中期或晚期阶段的细胞。癌症包括肉瘤、乳腺癌、肺癌、脑癌、骨癌、肝癌、肾癌、结肠癌和前列腺癌。在一些实施方案中，式I的化合物用于治疗选自结肠癌、脑癌、乳腺癌、纤维肉瘤和鳞状细胞癌的癌症。在一些实施方案中，癌症选自黑素瘤、乳腺癌、结肠癌、肺癌和卵巢癌。在一些实施方案中，所治疗的癌症是转移性癌症。
炎性疾病包括以组织病理性炎症为特征的多种病症。炎性疾病的例子包括寻常性痤疮、哮喘、腹腔疾病、慢性前列腺炎、肾小球性肾炎、炎症性肠病、盆腔炎、再灌注损伤、类风湿性关节炎、结节病、血管炎、房尘螨引起的气道炎症和间质性膀胱炎。炎性疾病与自身免疫性疾病之间存在显著重叠。本发明的一些实施方案涉及炎性疾病哮喘的治疗。免疫系统通常涉及炎症性疾病，在过敏反应和一些肌病中都有表现，许多免疫系统疾病导致异常炎症。
本发明中提供的化合物和衍生物可以根据IUPAC(国际纯粹与应用化学联合会)或CAS(化学文摘服务社，Columbus，OH)命名系统命名。
关于本发明的使用术语的定义：除非另有说明，本文中基团或者术语提供的初始定义适用于整篇说明书的该基团或者术语；对于本文没有具体定义的术语，应该根据公开内容和上下文，给出本领域技术人员能够给予它们的含义。
“取代”是指分子中的氢原子被其它不同的原子或分子所替换。
碳氢基团中碳原子含量的最小值和最大值通过前缀表示，例如，前缀(Ca～Cb)烷基表明任何含“a”至“b”个碳原子的烷基。因此，例如，(C1～C4)烷基是指包含1～4个碳原子的烷基。
本发明中Ca～Cb烷氧基、Ca～Cb烷酯基、Ca～Cb烷氨基、Ca～Cb酰基分别是指含有“a”至“b”个碳原子的烷基与对应的氧原子、酯基、氨基、酰基相连得到的基团。
本发明中-C(O)NRaRb、-C(O)OR、-C(O)R、-NRC(O)R的-C(O)-表示由碳和氧两种原子通过双键连接而成的羰基(-C＝O-)。
术语“药学上可接受的”是指某载体、运载物、稀释剂、辅料，和/或所形成的盐通常在化学上或物理上与构成某药物剂型的其它成分相兼容，并在生理上与受体相兼容。
术语“盐”和“可药用的盐”是指上述化合物或其立体异构体，与无机和/或有机酸和碱形成的酸式和/或碱式盐，也包括两性离子盐(内盐)，还包括季铵盐，例如烷基铵盐。这些盐可以是在化合物的最后分离和纯化中直接得到。也可以是通过将上述化合物，或其立体异构体，与一定数量的酸或碱适当(例如等当量)进行混合而得到。这些盐可能在溶液中形成沉淀而以过滤方法收集，或在溶剂蒸发后回收而得到，或在水介质中反应后冷冻干燥制得。本发明中所述盐可以是化合物的盐酸盐、硫酸盐、枸橼酸盐、苯磺酸盐、氢溴酸盐、氢氟酸盐、磷酸盐、乙酸盐、丙酸盐、丁二酸盐、草酸盐、苹果酸盐、琥珀酸盐、富马酸盐、马来酸盐、酒石酸盐或三氟乙酸盐。
在某些实施方式中，本发明的一种或多种化合物可以彼此联合使用。也可选择将本发明的化合物与任何其它的活性试剂结合使用，用于制备调控细胞功能或治疗疾病的药物或药物组合物。如果使用的是一组化合物，则可将这些化合物同时、分别或有序地对受试对象进行给药。
本发明公开了式Ⅰ所示化合物，并公开了该化合物在制备治疗与STING活性相关的疾病的药物中的用途，具体为在制备治疗炎性、变应性、自身免疫性疾病、感染性疾病、癌症或癌前期综合征的药物中的用途，以及在制备免疫佐剂中的用途。为临床上筛选和/或制备与STING活性相关的疾病的药物提供了一种新的选择。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
附图说明
图1为实施例2制备的化合物不同给药浓度对CT-26肿瘤体积的影响。
图2为浓度为1mg/kg实施例2制备的化合物与对照组对CT-26肿瘤体积的影响。
具体实施方式
本发明具体实施方式中使用的原料、设备均为已知产品，通过购买市售产品获得。
化合物的结构是通过核磁共振(NMR)或(和)质谱(MS)来确定的。NMR位移(δ)以10-6(ppm)的的单位给出。NMR的测定是用(Bruker AvanceIII 400和Bruker Avance 300)核磁仪，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(DMSO-d6)，氘代氯仿(CDCl3),氘代甲醇(CD3OD)，内标为四甲基硅烷(TMS)。
LC-MS的测定用岛津液质联用仪(Shimadzu LC-MS 2020(ESI))。
HPLC的测定使用岛津高压液相色谱仪(Shimadzu LC-20A)。
反相制备色谱使用Gilson GX-281反相制备色谱仪。
薄层层析硅胶板用烟台黄海HSGF254或青岛GF254硅胶板，薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.4mm～0.5mm。
柱层析一般使用烟台黄海硅胶200～300目硅胶为载体。
本发明的已知的起始原料可以采用或按照本领域已知的方法来合成，或可购买于安耐吉化学、成都科龙化工、韶远化学科技、百灵威科技等公司。
氢气氛围是指反应瓶连接一个约1L容积的氢气球。
氢化反应通常抽真空，充入氢气，反复操作3次。
实施例中无特殊说明，反应在氮气氛围下进行。
实施例中无特殊说明，溶液是指水溶液。
实施例中无特殊说明，反应的温度为室温。
实施例中无特殊说明，M是摩尔每升。
室温为最适宜的反应温度，为20℃～30℃。
过夜为12±1h。
PE是指石油醚；EA是指乙酸乙酯；DCM是指二氯甲烷；MeOH是指甲醇；DMF是指N,N-二甲基甲酰胺；DMSO是指二甲基亚砜；DMAP是指4-二甲氨基吡啶；DIPEA是指二异丙基乙基胺；Boc是指叔丁基氧羰基；TFA是指三氟乙酸；DBU是指1,8-二氮杂二环十一碳-7-烯；HATU是指2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯。
本发明化合物的制备
中间体化合物1a：4-氯-3-甲氧基-5-硝基苯甲酰胺的合成
将4-氯-3-甲氧基-5-硝基苯甲酯(18.5g，75.3mmol)加入到含有氨水(200mL)的单口瓶中，在60℃搅拌3h。反应液浓缩至100mL，冷却后过滤，固体用冰水洗涤，经干燥后得到4-氯-3-甲氧基-5-硝基苯甲酰胺(12.5g，54.1mmol)，褐色固体。
MS(ESI)m/z＝231[M+H]+,
1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.29(s,1H),8.04(d,1H),7.87(d,1H),7.78(s,1H),4.01(s,3H)。
中间体化合物2：4-氯-3-羟基-5-硝基苯甲酰胺的合成
在冰浴下，将中间体化合物1a(7.5g，32.5mmol)分散于干燥的DCM(90mL)中，再把三溴化硼(120mL，1M)慢慢滴加到其中。滴加完后撤掉冰浴，氮气保护，室温下反应过夜。反应完全后，反应液倒入冰水中，剧烈搅拌30min后，过滤，并用水洗涤滤饼，滤饼经干燥后得到4-氯-3-羟基-5-硝基苯甲酰胺(6.00g，27.7mmol，85.3％收率)，淡黄色固体。
MS(ESI)m/z＝217[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ11.73(s,1H),8.21(s,1H),7.92(s,1H),7.80(s,1H),7.66(s,1H)。
中间体化合物3：1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-羰基异硫氰酸酯的合成
将1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-羧酸(4.00g，25.9mmol)分散于干燥DCM(80mL)中，在冰浴下，向其中滴加草酰氯(3.9g，31.1mmol)和催化量的DMF。在室温下反应1h后，将可挥发物减压旋蒸除去。向粗品中加入DCM(20mL)，再旋蒸除去溶剂后得到1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-碳酰氯(4.46g，100％收率)，直接用于下一步反应。
在0℃下，将1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-碳酰氯(4.46g，25.9mmol)溶于干燥丙酮(20mL)并滴加到硫氰酸钾(5.0g，51.5mmol)的丙酮(100ml)溶液中，室温下搅拌3h，反应体系经过滤除去无机盐，滤液浓缩后的粗品经硅胶柱纯化(洗脱剂：乙酸乙酯/石油醚(v/v)＝1/15)得到1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-羰基异硫氰酸酯(4.0g，20.4mmol，78.7％)，澄清的棕黄色液体。
MS(ESI)m/z＝196[M+H]+。
中间体化合物4：4-氯-3-硝基-5-(氧杂环丁烷-3-基氧基)苯基)氨基)苯甲酰胺的合成
向4-氯-3-羟基-5-硝基苯甲酰胺(1.0g,4.6mmol)的DMF(30mL)溶液中加入碳酸钾(1.27g,9.2mmol)和3-碘氧杂环丁烷(1.27g,6.9mmol)，在100℃下反应24h。反应完后过滤除掉无机盐，将滤液倒入水中并用乙酸乙酯萃取，有机相浓缩后，经过硅胶柱纯化(DCM/MeOH＝20/1,v/v)得到4-氯-3-硝基-5-(氧杂环丁烷-3-基氧基)苯甲酰胺(0.8g,2.9mmol,63.9％收率)，淡黄色固体。
MS(ESI)m/z＝273[M+H]+。
中间体化合物5：4-氯-3-硝基-5-(氧杂环丁烷-3-甲基氧基)苯基)氨基)苯甲酰胺的合成
向4-氯-3-羟基-5-硝基苯甲酰胺(400mg,1.85mmol)的DMF(10mL)溶液中加入碳酸钾(492mg,2.03mmol)和氧杂环丁烷-3-甲基氧基苯磺酸(673mg，2.78mmol)，在70℃下反应过夜。反应完后过滤除掉无机盐，将滤液倒入水中并用乙酸乙酯萃取，有机相浓缩后，经过硅胶柱纯化(DCM/MeOH＝20/1,v/v)得到4-氯-3-硝基-5-(氧杂环丁烷-3-基氧基)苯甲酰胺(226mg,0.79mmol，43％收率)，白色固体。
MS(ESI)m/z＝287[M+H]+。
中间体化合物6：(S)-4-氯-3-硝基-5-((四氢呋喃-3-基)氧基)苯甲酰胺的合成
向(R)-3-羟基四氢呋喃(1.09g，11.3mmol)的二氯甲烷(20mL)溶液中加入TEA(3.16g，31.3mmol)、DMAP(0.13g，1.1mmol)和对甲苯磺酰氯(2.33g，12.2mmol)，室温下反应2h，加水和二氯甲烷萃取，有机相分别用水、饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥、过滤并浓缩后得到(R)-3-羟基四氢呋喃(2.2g，9.08mmol)，直接用于下一步反应。
向4-氯-3-羟基-5-硝基苯甲酰胺(0.65g，3.01mmol)的DMF(10mL)溶液中加入碳酸钾(1.04g，7.53mmol)、碘化钾(0.1g，0.6mmol)和(R)-3-四氢呋喃对甲苯磺酸酯(0.73g,3.01mmol)，在70℃下反应24h。反应完后过滤除掉无机盐，将滤液倒入水中并用乙酸乙酯萃取，有机相依次用水、饱和食盐水洗，再干燥浓缩后，得到(S)-4-氯-3-硝基-5-((四氢呋喃-3-基)氧基)苯甲酰胺(0.54g,1.88mmol)，淡黄色固体。
MS(ESI)m/z＝287[M+H]+。
中间体化合物7：(R)-4-氯-3-硝基-5-((四氢呋喃-3-基)氧基)苯甲酰胺的合成
向(R)-3-羟基四氢呋喃(1.3g，13.5mmol)的二氯甲烷(20mL)溶液中加入TEA(3.79g，37.6mmol)、DMAP(0.16g，1.3mmol)和对甲苯磺酰氯(2.8g，14.6mmol)，室温下反应2h，加水和二氯甲烷萃取，有机相分别用水、饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥、过滤并浓缩后得到(R)-3-羟基四氢呋喃(2.3g,9.08mmol)，直接用于下一步反应。
向4-氯-3-羟基-5-硝基苯甲酰胺(0.78g,3.6mmol)的DMF(10mL)溶液中加入碳酸钾(1.25g,9.03mmol)、碘化钾(0.12g，0.72mmol)和(R)-3-四氢呋喃对甲苯磺酸酯(0.88g,3.6mmol)，在70℃下反应24h。反应完后过滤除掉无机盐，将滤液倒入水中并用乙酸乙酯萃取，有机相依次用水、饱和食盐水洗，再干燥浓缩后，得到(S)-4-氯-3-硝基-5-((四氢呋喃-3-基)氧基)苯甲酰胺(0.64g,2.25mmol)，淡黄色固体。
MS(ESI)m/z＝287[M+H]+。
中间体化合物8：3-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙氧基)-4-氯-5-硝基苯甲酰胺
向4-氯-3-羟基-5-硝基苯甲酰胺(1.41g，6.52mmol)的DMF(20mL)溶液中加入碳酸钾(1.28g,9.4mmol)和(3-溴丙氧基)叔丁基二甲基硅烷(1.2g，4.7mmol)，在70℃下反应过夜。反应完后过滤除掉无机盐，将滤液倒入水中并用乙酸乙酯萃取，有机相依次用水、饱和食盐水洗，干燥浓缩后得到粗品，再由硅胶色谱柱分离纯化(洗脱剂:PE/EA＝5/1～2/1)得到3-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙氧基)-4-氯-5-硝基苯甲酰胺(1.7g,4.37mmol)。
MS(ESI)m/z＝389[M+H]+。
中间体化合物9：4-氯-3-硝基-5-(2-(氧杂环丁烷-3-基)乙氧基)苯甲酰胺
向2-(氧杂环丁烷-3-基)乙醇(1.0g，9.79mmol)的二氯甲烷(20mL)溶液中加入TEA(2.7mL，19.58mmol)和对甲苯磺酰氯(2.0g，10.77mmol)，室温下反应2h，加水和二氯甲烷萃取，有机相分别用水、饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥、过滤并浓缩后得到2-(氧杂环丁烷-3-基)乙基4-甲基苯磺酸酯，直接用于下一步反应。
向4-氯-3-羟基-5-硝基苯甲酰胺(845mg，3.9mmol)的DMF(10mL)溶液中加入碳酸钾(1.08g，7.8mmol)、碘化钾(0.12g，0.72mmol)和2-(氧杂环丁烷-3-基)乙基4-甲基苯磺酸酯(1.0g，3.9mmol)，在75℃下反应24h。反应完后过滤除掉无机盐，将滤液倒入水中并用乙酸乙酯萃取，有机相依次用水、饱和食盐水洗，再干燥浓缩后，得到4-氯-3-硝基-5-(2-(氧杂环丁烷-3-基)乙氧基)苯甲酰胺(0.86g，收率73.5％)。
中间体化合物10：4-氯-3-(环丙基甲氧基)-5-硝基苯甲酰胺的合成
向4-氯-3-甲氧基-5-硝基苯甲酰胺(1.0g，4.6mmol)的DMF(30mL)溶液中加入碳酸钾(1.27g，9.2mmol)和(溴甲基)环丙烷(0.92g，6.9mmol)，在70℃下反应24h。反应完后过滤除掉无机盐，将滤液倒入水中并用乙酸乙酯萃取，有机相浓缩后，经过硅胶柱纯化(洗脱剂：乙酸乙酯/石油醚,v/v＝3/1)得到4-氯-3-(环丙基甲氧基)-5-硝基苯甲酰胺(1.0g，80％收率)，淡黄色固体。
MS(ESI)m/z＝271[M+H]+。
实施例1
步骤1：(反式)-叔丁基(4-(4-氨基甲酰-2-甲氧基-6-硝基苯基)氨基)正丁-2-烯基)氨基甲酸酯的合成
室温下将4-氯-3-甲氧基-5-硝基苯酰胺(500mg，2.17mmol)和(4-氨基丁-2-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯(966mg，4.34mmol)溶解在二甲亚砜(10mL)中，三乙胺(1.1g，10.84mmol)滴入反应液。反应混合液升温至115℃，并在此温度下搅拌过夜。冷却至室温后，加水稀释，大量橙色固体析出，过滤，滤饼用水洗涤(15mL×3)，真空泵旋转蒸发仪干燥得到(反式)-叔丁基(4-(4-氨基甲酰-2-甲氧基-6-硝基苯基)氨基)正丁-2-烯基)氨基甲酸酯(化合物1b)(450mg，收率57％)，橙黄色固体。
MS(ESI)m/z＝381[M+H]+。
步骤2：(反式)-叔丁基(4-((2氨基-4氨基甲酰-6甲氧苯基)氨基)正丁-2-烯基)氨基甲酸酯的合成
化合物1b(450mg，1.18mmol)溶解于甲醇(15mL)，溶液冷却到0℃，然后依次加入氨水(1.62mL，11.80mmol)、连二亚硫酸钠(1.22g，7.01mmol)的水溶液(6mL)。反应混合液在0℃下搅拌1h，反应液颜色由橙红色变为白色。反应液旋除甲醇，然后加水稀释，加乙酸乙酯萃取(20mL×4)，分离得到的有机相用饱和食盐水洗(20mL×2)，无水硫酸钠干燥，然后旋干得到(反式)-叔丁基(4-((2氨基-4氨基甲酰-6甲氧苯基)氨基)正丁-2-烯基)氨基甲酸酯(化合物1c)(260mg，收率58％)，白色固体。
MS(ESI)m/z＝351[M+H]+。
步骤3：(反式)-叔丁基(4-(5-氨基甲酰-2-(1-乙基-3-甲基-1氢-吡唑-5甲酰胺)-7-甲氧基-1H-苯并咪唑基)正丁2-烯基)氨基甲酸酯的合成
化合物1c(260mg，0.742mmol)和化合物1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰基异硫氰酸酯(145mg，0.74mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，并于室温下搅拌1h，然后2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(338mg，0.89mmol)和1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯(147mg，0.96mmol)加入反应液，继续室温搅拌1h，反应液用水稀释，过滤收集产生的白色固体，并用水(5mL×3)洗涤，然后反相柱分离(洗脱剂：乙腈/水＝1/3,v/v)得到(反式)-叔丁基(4-(5-氨基甲酰-2-(1-乙基-3-甲基-1氢-吡唑-5甲酰胺)-7-甲氧基-1H-苯并咪唑基)正丁2-烯基)氨基甲酸酯(化合物1d)(313mg，收率82％)，白色固体。
MS(ESI)m/z＝512[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.86(s,1H),8.02(s,1H),7.67(s,1H),7.48–7.32(m,2H),7.00–6.87(m,1H),6.65(s,1H),5.85–5.50(m,2H),4.93(d,2H),4.61(q,2H),3.98(s,3H),3.51(m,2H),2.55(m,2H),2.18(s,3H),1.35(t,3H),1.32(s,9H)。
步骤4：(反式)-1-(4-氨基正丁-2-烯基)-2-(1-乙基-3-甲基-1氢-吡唑-5-甲酰胺基)-7-甲氧基-1氢-苯并咪唑-5-甲酰胺的合成
化合物1d(290mg，0.57mmol)溶解在甲醇(10mL)中，盐酸(6N水溶液，3mL，18mmol)逐滴加入。反应液室温搅拌30分钟后，升温至40℃并继续搅拌3h。旋干反应液，得到的粗品用反相柱分离纯化(洗脱剂：水/乙腈＝50/50,v/v)得到化合物(反式)-1-(4-氨基正丁-2-烯基)-2-(1-乙基-3-甲基-1氢-吡唑-5-甲酰胺基)-7-甲氧基-1氢-苯并咪唑-5-甲酰胺(化合物1e)(230mg，收率98％)，浅黄色固体。
MS(ESI)m/z＝412.0[M+H]+。
步骤5：(反式)-1-(4-((4-氨基甲酰-2-硝基-6(氧杂环丁烷-3-基氧基)苯基)氨基)正丁-2-烯基)-2-(1-乙基-3-甲基-1氢-吡唑-5-甲酰胺基)-7-甲氧基-1氢-苯并咪唑-5-甲酰胺的合成
化合物1e(150mg，0.37mmol)、4-氯-3-硝基-5-(氧杂环丁烷-3-基氧基)苯基)氨基)苯甲酰胺(100mg，0.37mmol)和DIPEA(220mg，1.84mmol)混溶于正丁醇(5mL)中，反应混合液升温至120℃并在此温度下搅拌2天，降温至室温后，加水稀释，乙酸乙酯(20mL×3)萃取，合并的有机相以饱和食盐水洗涤(15mL×2)，无水硫酸钠干燥，旋干溶剂得到的粗品经反相柱层析分离(洗脱剂：乙腈/水＝30/70，v/v)得到(反式)-1-(4-((4-氨基甲酰-2-硝基-6(氧杂环丁烷-3-基氧基)苯基)氨基)正丁-2-烯基)-2-(1-乙基-3-甲基-1氢-吡唑-5-甲酰胺基)-7-甲氧基-1氢-苯并咪唑-5-甲酰胺(化合物1f)(38mg，收率16％)，浅黄色固体。
MS(ESI)m/z＝648.0[M+H]+。
步骤6：(反式)-1-(4-(2-氨基-4-甲酰胺基-6-(氧杂环丁烷-3-基氧基)苯基)正丁-2-烯基)-2-(1-乙基-3-甲基-1氢-吡唑-5-甲酰胺基)-7-甲氧基-1氢-苯并咪唑-5-甲酰胺的合成
在冰浴下，氨水(0.08mL，0.56mmol)滴加入化合物1f(38mg，0.05mmol)的甲醇(5mL)溶液中，反应液在零度下搅拌5分钟后，将连二亚硫酸钠(49mg，0.28mmol)水溶液(2mL)缓慢加入。反应混合液缓慢升至室温，继续搅拌3h。加水稀释，过滤，滤液旋干，所得粗品用反相柱层析(洗脱剂：乙腈/水＝50/50，v/v)分离得到(反式)-1-(4-(2-氨基-4-甲酰胺基-6-(氧杂环丁烷-3-基氧基)苯基)正丁-2-烯基)-2-(1-乙基-3-甲基-1氢-吡唑-5-甲酰胺基)-7-甲氧基-1氢-苯并咪唑-5-甲酰胺(化合物1g)(26mg，收率74％)，白色固体。
MS(ESI)m/z＝618.0[M+H]+。
步骤7：(反式)-1-(4-(5-氨甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-(氧杂环丁烷-3-基氧基)苯基)-1氢-咪唑-5-甲酰胺)-7-甲氧基-1氢-苯并咪唑-5-甲酰胺的合成
化合物1g(26mg，0.04mmol)和1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰基异硫氰酸酯(8.6mg，0.05mmol)混溶于DMF(2mL)中，室温下搅拌1h，然后依次加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(19mg,0.05mmol)和DIPEA(10mg，0.08mmol)，得到的反应混合液室温下继续搅拌2h。旋干溶剂得到的粗品，经反相HPLC分离纯化得到实施例化合物1(6.3mg,收率19％)，白色固体。
MS(ESI)m/z＝779.0[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.88(s,1H),7.82(s,1H),7.72(s,1H),7.67(s,1H),7.23(s,3H),6.76(s,1H),6.44(s,2H),5.92–5.65(m,2H),5.31–5.17(m,1H),4.96(d,2H),4.89(d,2H),4.80(t,2H),4.62–4.39(m,6H),3.72(s,3H),2.09(s,6H),1.24(t,6H)。
实施例2
步骤1：(反式)-叔丁基(4-(4-氨基甲酰-2-氧杂环丁烷氧基-6-硝基苯基)氨基)正丁-2-烯基)氨基甲酸酯的合成
室温下将4-氯-3-硝基-5-(氧杂环丁烷-3-基氧基)苯基)氨基)苯甲酰胺(468mg，1.72mmol)和(4-氨基丁-2-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯(422mg，1.90mmol)溶解在正丁醇(10mL)中，DIPEA(445mg，3.40mmol)滴入反应液。反应混合液升温至115℃，并在此温度下搅拌过夜。冷却至室温后，加水稀释，乙酸乙酯萃取，经柱层析分离(石油醚：乙酸乙酯＝5:1-3:1，v/v)得(反式)-叔丁基(4-(4-氨基甲酰-2-氧杂环丁氧基-6-硝基苯基)氨基)正丁-2-烯基)氨基甲酸酯(化合物2b)(420mg,收率57.8％)，黄色固体。
MS(ESI)m/z＝445[M+Na]+。
步骤2：(反式)-叔丁基(4-((2-氨基-4-氨基甲酰-6-氧杂环丁烷氧苯基)氨基)正丁-2-烯基)氨基甲酸酯的合成
化合物2b(210mg，0.5mmol)溶解于甲醇(10mL)，溶清液冷却到0℃，然后依次加入氨水(0.8mL，5.0mmol)、连二亚硫酸钠(435mg，2.5mmol)水溶液(4mL)，在0℃下搅拌反应1h。反应液旋除甲醇，然后加水稀释，加乙酸乙酯萃取(20mL×4)，分离得到的有机相用饱和食盐水洗(20mL×2)，无水硫酸钠干燥，然后旋干得到(反式)-叔丁基(4-((2-氨基-4-氨基甲酰-6氧杂环丁烷氧苯基)氨基)正丁-2-烯基)氨基甲酸酯(化合物2c)(140mg，收率72％)，白色固体。
MS(ESI)m/z＝393[M+H]+。
步骤3：(反式)-叔丁基(4-(5-氨基甲酰-2-(1-乙基-3-甲基-1氢-吡唑-5甲酰胺)-7-氧杂环丁烷氧基-1H-苯并咪唑基)正丁2-烯基)氨基甲酸酯的合成
化合物2c(140mg，0.357mmol)和1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰基异硫氰酸酯(70mg,0.357mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，并于室温下搅拌1h，然后2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(190mg,0.5mmol)和DIPEA(65mg,0.5mmol)加入反应液，继续室温搅拌1h，反应液用水稀释，乙酸乙酯萃取，然后反相柱分离(乙腈/水＝1/3,v/v)得到(反式)-叔丁基(4-(5-氨基甲酰-2-(1-乙基-3-甲基-1氢-吡唑-5甲酰胺)-7-氧杂环丁氧基-1H-苯并咪唑基)正丁2-烯基)氨基甲酸酯(化合物2d)(150mg，收率77％)，白色固体。
MS(ESI)m/z＝554[M+H]+。
步骤4：(反式)-1-(4-氨基正丁-2-烯基)-2-(1-乙基-3-甲基-1氢-吡唑-5-甲酰胺基)-7-氧杂环丁烷氧基-1氢-苯并咪唑-5-甲酰胺的合成
化合物2d(150mg，0.27mmol)溶解在二氯甲烷(5mL)中，三氟乙酸(3mL)逐滴加入。反应液室温搅拌1h。旋干反应液，得到化合物(反式)-1-(4-氨基正丁-2-烯基)-2-(1-乙基-3-甲基-1氢-吡唑-5-甲酰胺基)-7-氧杂环丁烷氧基-1氢-苯并咪唑-5-甲酰胺(化合物2e)(粗品120mg)，直接用于下步反应。
MS(ESI)m/z＝454[M+H]+。
步骤5：(反式)-1-(4-((4-氨基甲酰-2-硝基苯基)氨基)正丁-2-烯基)-2-(1-乙基-3-甲基-1氢-吡唑-5-甲酰胺基)-7-氧杂环丁烷氧基-1氢-苯并咪唑-5-甲酰胺的合成
化合物2e(120mg,0.26mmol)、4-氟-3-硝基-苯甲酰胺(50mg,0.27mmol)和DIPEA(110mg,0.92mmol)混溶于二甲基亚砜(5mL)中，加热至40℃反应过夜，反应结束，冷却至室温，加水有白色固体析出，打浆过滤得到(反式)-1-(4-((4-氨基甲酰-2-硝基苯基)氨基)正丁-2-烯基)-2-(1-乙基-3-甲基-1氢-吡唑-5-甲酰胺基)-7-氧杂环丁烷氧基-1氢-苯并咪唑-5-甲酰胺(化合物2f)(80mg，收率49％)，浅黄色固体。
MS(ESI)m/z＝618[M+H]+。
步骤6：(反式)-1-(4-(2-氨基-4-甲酰胺基苯基)正丁-2-烯基)-2-(1-乙基-3-甲基-1氢-吡唑-5-甲酰胺基)-7-氧杂环丁烷氧基-1氢-苯并咪唑-5-甲酰胺的合成
在冰浴下，氨水(0.17mL，1.3mmol)滴加入化合物2f(80mg，0.13mmol)的甲醇(5mL)溶液中，反应液在零度下搅拌5分钟后，将连二亚硫酸钠(113mg，0.65mmol)水溶液(2mL)缓慢加入。反应混合液缓慢升至室温，搅拌反应1h。反应结束，旋蒸除去反应液中的甲醇，用正丁醇萃取得(反式)-1-(4-(2-氨基-4-甲酰胺基苯基)正丁-2-烯基)-2-(1-乙基-3-甲基-1氢-吡唑-5-甲酰胺基)-7-氧杂环丁烷氧基-1氢-苯并咪唑-5-甲酰胺(化合物2g)(56mg，收率73％)，白色固体。
MS(ESI)m/z＝587[M+H]+。
步骤7：(反式)-1-(4-(5-氨基甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-(氧杂环丁烷-3-基氧基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺的合成
化合物2g(56mg,0.09mmol)和1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰基异硫氰酸酯(19.5mg,0.1mmol)混溶于DMF(2mL)中，室温下搅拌1h，然后依次加入HATU(38mg,0.1mmol)和DIPEA(19.4mg，0.15mmol，得到的反应混合液室温下继续搅拌2h。旋干溶剂得到的粗品，经反相HPLC分离纯化得到实施例化合物2(15mg，收率21％)，白色固体。
MS(ESI)m/z＝749[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.89(s,2H),7.99(d,1H),7.96(s,2H),7.73-7.70(m,2H),7.43-7.35(m,3H),6.90(d,1H),6.55(d,2H),6.05-5.98(m,1H),5.82-5.76(m,1H),5.35-5.32(m,1H),5.00(d,2H),4.85-4.82(m,4H),4.57-4.48(m,6H),2.13(s,6H),1.27(t,6H)。
实施例3
步骤1：(反式)-叔丁基(4-(4-氨基甲酰-2-环丙基甲氧基-6-硝基苯基)氨基)正丁-2-烯基)氨基甲酸酯的合成
室温下将4-氯-3-(环丙基甲氧基)-5-硝基苯甲酰胺(1.00g，3.7mmol)和(4-氨基丁-2-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯(830mg，3.72mmol)溶解在正丁醇(15mL)中，DIPEA(1.2g，11.88mmol)滴入反应液。反应混合液升温至115℃,并在此温度下搅拌过夜。冷却至室温后，加水稀释，用乙酸乙酯萃取(200mL×3)，有机相用水洗涤(60mL×2)，无水硫酸钠干燥，减压旋蒸，硅胶色谱柱分离纯化(洗脱剂:PE/EA＝1/5～1/1)后得到(反式)-叔丁基(4-(4-氨基甲酰-2-环丙基甲氧基-6-硝基苯基)氨基)正丁-2-烯基)氨基甲酸酯(化合物3b)(675mg，收率43％)，橙黄色固体。
MS(ESI)m/z＝421[M+H]+。
步骤2：(反式)-叔丁基(4-((2氨基-4氨基甲酰-6环丙基甲氧苯基)氨基)正丁-2-烯基)氨基甲酸酯的合成
化合物3b(670mg，1.59mmol)溶解于甲醇(15mL)，溶清液冷却到0℃，然后依次加入氨水(1.62mL，11.80mmol)、连二亚硫酸钠(1.22g，7.01mmol)水溶液(6mL)。反应混合液在0℃下搅拌1h，反应液颜色由橙红色变为白色。反应液旋除甲醇，然后加水稀释，加乙酸乙酯萃取(30mL×4)，分离得到的有机相用饱和食盐水洗(20mL×2)，无水硫酸钠干燥，然后旋干得到((反式)-叔丁基(4-((2氨基-4氨基甲酰-6环丙基甲氧苯基)氨基)正丁-2-烯基)氨基甲酸酯(化合物3c)(388mg，收率62％)，白色固体。
MS(ESI)m/z＝391[M+H]+。
步骤3：(反式)-叔丁基(4-(5-氨基甲酰-2-(1-乙基-3-甲基-1氢-吡唑-5甲酰胺)-7-环丙基甲氧基-1H-苯并咪唑基)正丁2-烯基)氨基甲酸酯的合成
化合物3c(380mg，0.971mmol)和1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰基异硫氰酸酯(189mg,0.971mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中，并于室温下搅拌1h，然后2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(370mg,0.973mmol)和N,N-二异丙基乙胺(130mg,1.00mmol)加入反应液,继续室温搅拌3h,反应液用水稀释，过滤收集产生的白色固体，并用水(5mL×3)洗涤，然后柱层析分离(洗脱剂：乙腈/水＝1/3,v/v)得到(反式)-叔丁基(4-(5-氨基甲酰-2-(1-乙基-3-甲基-1氢-吡唑-5甲酰胺)-7-环丙基甲氧基-1H-苯并咪唑基)正丁2-烯基)氨基甲酸酯(化合物3d)(440mg，收率82％)，白色固体。
MS(ESI)m/z＝552[M+H]+。
步骤4：(反式)-1-(4-氨基正丁-2-烯基)-2-(1-乙基-3-甲基-1氢-吡唑-5-甲酰胺基)-7-环丙基甲氧基-1氢-苯并咪唑-5-甲酰胺的合成
化合物3d(430mg，0.78mmol)溶解在二氯甲烷(10mL)中，三氟乙酸(5mL)逐滴加入。反应液室温搅拌30分钟后。旋干反应液，得到化合物(反式)-1-(4-氨基正丁-2-烯基)-2-(1-乙基-3-甲基-1氢-吡唑-5-甲酰胺基)-7-环丙基甲氧基-1氢-苯并咪唑-5-甲酰胺(化合物3e)(350mg，收率99％)，浅黄色固体。
MS(ESI)m/z＝452[M+H]+。
步骤5：(反式)-1-(4-((4-胺甲酰基-2-硝基苯基)胺基)丁基-2-烯-1-基)-7-(环丙基甲氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1氢-吡唑-5-甲酰胺基)-1氢-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺的合成
化合物3e(340mg,0.75mmol)、4-氯-3-硝基苯甲酰胺(150mg,0.75mmol)和DIPEA(291mg,2.25mmol)混溶于正丁醇(10mL)中，反应混合液升温至120℃并在此温度下搅拌2天，降温至室温后，加水稀释，乙酸乙酯(30mL×4)萃取，合并的有机相以饱和食盐水洗涤(10mL×2)，无水硫酸钠干燥，旋干溶剂得到的粗品经反相柱层析分离(洗脱剂：乙腈/水＝30/70，v/v)得到反式)-1-(4-((4-胺甲酰基-2-硝基苯基)胺基)丁基-2-烯-1-基)-7-(环丙基甲氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1氢-吡唑-5-甲酰胺基)-1氢-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺(化合物3f)(307mg，收率65％)，浅黄色固体。
MS(ESI)m/z＝616.0[M+H]+。
步骤6：(反式)-1-(4-((4-胺甲酰基-2-胺基苯基)胺基)丁基-2-烯-1-基)-7-(环丙基甲氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1氢-吡唑-5-甲酰胺基)-1氢-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺的合成
在冰浴下，氨水(0.5mL，4.87mmol)滴加入化合物3f(300mg，0.487mmol)的甲醇(5mL)和四氢呋喃(5mL)溶液中，反应液在零度下搅拌5分钟后，将连二亚硫酸钠(425mg，2.44mmol)水溶液(3mL)缓慢加入。反应混合液缓慢升至室温，继续搅拌1h。加水稀释，过滤，滤液旋干，所得粗品用反相柱纯化(洗脱剂：乙腈/水＝50/50，v/v)分离得到(反式)-1-(4-((4-胺甲酰基-2-胺基苯基)胺基)丁基-2-烯-1-基)-7-(环丙基甲氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1氢-吡唑-5-甲酰胺基)-1氢-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺(化合物3g)(160mg，收率56％)，白色固体。
MS(ESI)m/z＝586[M+H]+。
步骤7：(反式)-1-(4-(5-氨甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-(氧杂环丁烷-3-基氧基)苯基)-1氢-咪唑-5-甲酰胺)-7-甲氧基-1氢-苯并咪唑-5-甲酰胺的合成
化合物3g(150mg,0.256mmol)和1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰基异硫氰酸酯(50mg,0.256mmol)混溶于DMF(2mL)中，室温下搅拌1h，然后依次加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(98mg,0.256mmol)和N,N-二异丙基乙胺(67mg，0.512mmol)，得到的反应混合液室温下继续搅拌3h。反应液经反相HPLC分离纯化得到实施例化合物3(60mg，收率31％)，白色固体。
MS(ESI)m/z＝747[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ7.98(s,1H),7.92(br,2H),7.71(t,1H),7.62(t,1H),7.42(t,1H),7.31(br,2H),7.26(s,1H),6.56(d,1H),6.54(s,1H),5.96～6.05(m,1H),5.73～5.91(m,1H),4.95(m,2H),4.83(d,2H)4.45～4.56(m,4H),3.85(d,2H),2.13(s,3H),2.11(s,3H),1.22～1.33(m,7H),0.40(q,2H),0.20(q,2H)。
实施例4
步骤1：(反式)-1-(4-((4-氨基甲酰-2-硝基-6(氧杂环丁烷-3-甲基氧基)苯基)氨基)正丁-2-烯基)-2-(1-乙基-3-甲基-1氢-吡唑-5-甲酰胺基)-7-甲氧基-1氢-苯并咪唑-5-甲酰胺的合成
化合物1e(256mg,0.62mmol)、4-氯-3-硝基-5-(氧杂环丁烷-3-甲基氧基)苯基)氨基)苯甲酰胺(178mg,0.62mmol)和DIPEA(1.6g,12.4mmol)混溶于正丁醇(3mL)中，反应混合液升温至120℃并在此温度下搅拌2天，降温至室温后，加水稀释，乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并的有机相以饱和食盐水洗涤(15mL×2)，无水硫酸钠干燥，旋干溶剂得到的粗品经正相硅胶柱层析分离(洗脱剂：二氯甲烷/MeOH+乙酸＝8/1+0.1，v/v)得到(反式)-1-(4-((4-氨基甲酰-2-硝基-6(氧杂环丁烷-3-甲基氧基)苯基)氨基)正丁-2-烯基)-2-(1-乙基-3-甲基-1氢-吡唑-5-甲酰胺基)-7-甲氧基-1氢-苯并咪唑-5-甲酰胺(化合物4a)(180mg，收率43％)，浅黄色固体。
MS(ESI)m/z＝662.0[M+H]+。
步骤2：(反式)-1-(4-(2-氨基-4-甲酰胺基-6-(氧杂环丁烷-3-甲基氧基)苯基)正丁-2-烯基)-2-(1-乙基-3-甲基-1氢-吡唑-5-甲酰胺基)-7-甲氧基-1氢-苯并咪唑-5-甲酰胺的合成
在冰浴下，氨水(0.43mL，3.0mmol)滴加入化合物4a(180mg，0.05mmol)的甲醇(5mL)溶液中，反应液在零度下搅拌5分钟后，将连二亚硫酸钠(265mg，1.51mmol)水溶液(5mL)缓慢加入。反应混合液缓慢升至室温，继续搅拌3h。加水稀释，乙酸乙酯(30mL×5)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，旋干得到(反式)-1-(4-(2-氨基-4-甲酰胺基-6-(氧杂环丁烷-3-甲基氧基)苯基)正丁-2-烯基)-2-(1-乙基-3-甲基-1氢-吡唑-5-甲酰胺基)-7-甲氧基-1氢-苯并咪唑-5-甲酰胺(化合物4b)(106mg，收率62％)，白色固体。
MS(ESI)m/z＝632.0[M+H]+。
步骤3：(反式)-1-(4-(5-氨甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-(氧杂环丁烷-3-甲基氧基)苯基)-1氢-咪唑-5-甲酰胺)-7-甲氧基-1氢-苯并咪唑-5-甲酰胺的合成
化合物4b(100mg,0.16mmol)和1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰基异硫氰酸酯(30mg,0.16mmol)混溶于DMF(2mL)中，室温下搅拌1h，然后依次加入HATU(60mg,0.16mmol)和DIPEA(40mg，0.30mmol)，得到的反应混合液室温下继续搅拌2h。反应液用水稀释，乙酸乙酯+正丁醇(6/1，v/v，30mL×3)萃取，得到的有机相旋干后的粗品，经反相HPLC分离纯化得到化合物(反式)-1-(4-(5-氨甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-(氧杂环丁烷-3-甲基氧基)苯基)-1氢-咪唑-5-甲酰胺)-7-甲氧基-1氢-苯并咪唑-5-甲酰胺(实施例化合物4)(39mg，收率31％)，白色固体。
MS(ESI)m/z＝793.0[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.00(s,1H),7.98(s,1H),7.67(d,1H),7.66(d,1H),7.48–7.35(m,3H),7.33(d,1H),6.55(s,1H),6.52(s,1H),5.77(m,2H),4.92(d,2H),4.89(d,2H),4.63–4.45(m,6H),4.32(t,2H),4.18(d,2H),3.75(s,3H),3.17(m,1H),2.13(s,3H),2.11(s,3H),1.27(m,6H)。
实施例5
步骤1：3-(甲苯磺酰氧基)环丁烷羧酸乙酯的合成
向3-羟基环丁烷羧酸乙酯(1.5g，10.4mmol)的二氯甲烷(20mL)溶液中加入TEA(4.34mL，31.21mmol)、DMAP(102mg，0.83mmol)和对甲苯磺酰氯(2.38g，12.5mmol)，室温下反应2h，反应完全后向反应液中加入二氯甲烷和水萃取，有机相分别用水、饱和食盐水洗涤，然后无水硫酸钠干燥、过滤并浓缩后得到3-(甲苯磺酰氧基)环丁烷羧酸乙酯(化合物5b)(1.1g,3.69mmol)，直接用于下一步反应。
步骤2：3-(5-氨基甲酰基-2-氯-3-硝基苯氧基)环丁烷羧酸乙酯的合成
向4-氯-3-羟基-5-硝基苯甲酰胺(0.8g,3.69mmol)的DMF(15mL)溶液中加入碳酸铯(1.81g,5.54mmol)和化合物5b(1.1g,3.69mmol)，在90℃下反应24h。反应完后过滤除掉无机盐，将滤液倒入水中并用乙酸乙酯萃取，有机相浓缩后，经过硅胶柱纯化得到4-氯-3-硝基-5-((四氢呋喃-3-基)氧基)苯甲酰胺(化合物5c)(0.53g,1.5mmol,42％收率)，淡黄色固体。
MS(ESI)m/z＝343[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.30(d,J＝15.9Hz,1H),8.06(d,J＝1.8Hz,1H),7.80(s,1H),7.58(d,J＝1.8Hz,1H),5.18–5.05(m,1H),3.33(m,2H),3.22(m,1H),2.75(m,2H),2.45(m,2H),1.27–1.19(m,3H)。
步骤3：(E)-3-(5-氨基甲酰基-2-((4-(5-氨基甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰氨基)-7-甲氧基-1H-苯并[[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)氨基)-3-硝基苯氧基)环丁烷羧酸乙酯的合成
化合物1e(304mg,0.74mmol)溶于正丁醇(5mL)中，在向其中加入DIPEA(952mg,7.38mmol)和化合物5c(253mg,0.74mmol)，该反应瓶放入升温至120℃的油浴锅并在此温度下搅拌24小时，降温至室温后，加水稀释，乙酸乙酯(20mL×3)萃取，合并的有机相以饱和食盐水洗涤(15mL×2)，无水硫酸钠干燥，旋干溶剂得到的粗品经硅胶柱层析分离(洗脱剂：DCM/MeOH＝50/1，v/v)得到(E)-3-(5-氨基甲酰基-2-((4-(5-氨基甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰氨基)-7-甲氧基-1H-苯并[[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)氨基)-3-硝基苯氧基)环丁烷羧酸乙酯(化合物5d)(150mg，收率28％)，浅黄色固体。
MS(ESI)m/z＝718[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.82(s,1H),8.11(d,J＝1.8Hz,1H),8.01–7.93(m,1H),7.76(t,J＝6.4Hz,1H),7.64(s,1H),7.34(t,J＝5.5Hz,2H),7.16(s,1H),6.58(s,1H),5.92–5.60(m,2H),4.90(d,J＝5.3Hz,2H),4.85–4.72(m,1H),4.65–4.48(m,2H),4.23–4.07(m,2H),3.84(d,J＝10.4Hz,2H),3.06–2.94(m,1H),2.63–2.51(m,2H),2.37–2.20(m,2H),2.15(s,2H),1.31(t,J＝7.1Hz,2H),1.25–1.13(m,3H)。
步骤4：(E)-3-(3-氨基-5-氨基甲酰基-2-((4-(5-氨基甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰氨基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)氨基)苯氧基)环丁烷羧酸乙酯的合成
在冰浴下，氨水(0.3mL，2.0mmol)滴加入化合物5d(143mg，0.20mmol)的甲醇(5mL)溶液中，反应液在零度下搅拌5分钟后，将连二亚硫酸钠(174mg，1.0mmol)水溶液(2mL)缓慢加入。反应混合液缓慢升至室温，继续搅拌3h。加水稀释，过滤，滤液加水稀释，乙酸乙酯/正丁醇(5/1，v/v)萃取，所得有机相干燥，旋干得到(E)-3-(3-氨基-5-氨基甲酰基-2-((4-(5-氨基甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰氨基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)氨基)苯氧基)环丁烷羧酸乙酯(化合物5e)(127mg，93％)，黄色固体。
MS(ESI)m/z＝688.3[M+H]+。
步骤5：(E)-3-((5-氨基甲酰基-1-(4-(5-氨基甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰氨基)-7-甲氧基-1H-苯并[[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)环丁烷羧酸乙酯的合成
在冰浴下，将1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-羰基异硫氰酸酯(33mg,0.17mmol)加入到化合物5e(120mg,0.17mmol)的DMF(3mL)溶液中，滴加完后继续反应20min。然后向反应液中加入HATU(65mg,0.17mmol)和DIPEA(66mg,0.51mmol)，在室温下反应1h，反应液浓缩后得到粗品经反相HPLC制备得到实施例化合物5(92mg,0.11mmol,89％纯度,64％收率)。
MS(ESI)m/z＝849.3[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.97(d,J＝11.7Hz,2H),7.64(dd,J＝6.1,1.2Hz,2H),7.44–7.26(m,3H),7.01(s,1H),6.56(s,1H),6.50(s,1H),5.96–5.76(m,2H),5.04–4.85(m,5H),4.56–4.48(m,4H),4.15–4.05(m,2H),3.75(s,3H),2.99–2.87(m,1H),2.60–2.53(m,2H),2.26–2.13(m,2H),2.12(s,2H),2.08(s,3H),1.32–1.19(m,8H)。
实施例6
步骤1：(E)-3-((5-氨基甲酰基-1-(4-(5-氨基甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰氨基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧)环丁烷羧酸的合成
氢氧化锂一水合物(17mg，0.4mmol)加入实施例化合物5(70mg，0.08mmol)的四氢呋喃/水/MeOH(v/v＝2/1/2,5ml)溶液中，室温下搅拌反应3小时，反应完全后加入0.5M的稀盐酸调pH至5，然后将其浓缩得到的粗品经反相HPLC纯化得到实施例化合物6(17.5mg,收率27％)，白色固体。
MS(ESI)m/z＝821[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.98(d,J＝23.2Hz,2H),7.64(d,J＝6.3Hz,2H),7.33(d,J＝8.8Hz,2H),7.03(s,1H),6.52(d,J＝14.9Hz,2H),6.01–5.75(m,2H),5.04–4.85(m,4H),4.64–4.41(m,3H),3.75(s,3H),2.65–2.55(m,1H),2.26–2.13(m,2H),2.10(m,6H),1.39–1.00(m,6H)。
实施例7
步骤1：(E)-3-((5-氨基甲酰基-1-(4-(5-氨基甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰氨基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)环丁烷羧酸异丙酯的合成
向实施例化合物6(5mg，0.006mmol)的DMF(0.5mL)溶液中加入碳酸钾(1.68mg，0.012mmol)和异丙基碘(2.07mg，0.012mmol)，反应液在室温下搅拌20小时，反应液直接由反相HPLC纯化得到(E)-3-((5-氨基甲酰基-1-(4-(5-氨基甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰氨基)-7-甲氧基-1H-苯并[[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)环丁烷羧酸异丙酯(实施例化合物7)(1.1mg)。
MS(ESI)m/z＝863[M+H]+。
实施例8
步骤1：(S，E)-(4-((4-氨甲酰基-2-硝基-6-((四氢呋喃-3-基)氧基)苯基)氨基)丁-2-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯的合成
室温下，向4-氯-3-硝基-5-(氧杂环丁烷-3-基氧基)苯基)氨基)苯甲酰胺(540mg，1.88mmol)的正丁醇(10mL)溶液中加入DIPEA(608mg，4.71mmol)和(4-氨基丁-2-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯(499mg，2.25mmol)，反应混合液升温至115℃,并在此温度下反应60小时。冷却至室温后，加水稀释，乙酸乙酯萃取，经柱层析分离(石油醚：乙酸乙酯＝4:1-2:1，v/v)得化合物8b(387mg,收率47.0％)，淡黄色固体。
MS(ESI)m/z＝437[M+Na]+。
步骤2：(S，E)-(4-((2-氨基-4-氨甲酰基-6-((四氢呋喃-3-基)氧基)苯基)氨基)丁-2-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯的合成
化合物8b(380mg，0.88mmol)溶解于甲醇/THF(10mL)，溶清液冷却到0℃，然后依次加入氨水(1.0mL，8.8mmol)和连二亚硫酸钠(463mg，2.66mmol)水溶液(1mL)，在0℃下搅拌反应0.5h。反应液旋蒸除掉有机溶剂，然后加水稀释，加乙酸乙酯萃取(20mL×4)，分离得到的有机相用饱和食盐水洗(20mL×2)，无水硫酸钠干燥，然后旋干得到粗品经MPLC(洗脱剂：乙腈/水＝2/3，v/v)纯化得到化合物8c(164mg，收率45.5％)，白色固体。
MS(ESI)m/z＝407[M+H]+
步骤3：((S，E)-(4-(5-氨基甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰氨基)-7-((四氢呋喃-3-基)氧基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯的合成
在冰浴下，1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰基异硫氰酸酯(78mg,0.40mmol)加入化合物8c(160mg，0.40mmol)的DMF(3mL)溶液中，在此温度下反应0.5h，然后将HATU(180mg,0.47mmol)和DIPEA(180mg,1.39mmol)加入反应液，继续室温反应1h，反应液直接用MPLC分离(乙腈/水＝1/3,v/v)得到化合物8d(220mg，收率96％)。
MS(ESI)m/z＝568[M+H]+。
步骤4：(S，E)-1-(4-氨基丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-((四氢呋喃-3-基基)氧基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺的合成
化合物8d(220mg，0.38mmol)溶解在二氯甲烷(5mL)中，三氟乙酸(3mL)逐滴加入。反应液室温搅拌0.5h。旋干反应液，得到化合物8e(粗品180mg)，直接用于下步反应。
MS(ESI)m/z＝468[M+H]+。
步骤5：(S，E)-1-(4-((4-氨基甲酰基-2-硝基苯基)氨基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-((四氢呋喃-3-基)氧基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺的合成
向化合物8e(180mg,0.38mmol)的DMSO(10mL)溶液中,加入DIPEA(370mg,2.87mmol)和4-氟-3-硝基-苯甲酰胺(150mg,0.81mmol)，加热至40℃反应过夜，反应结束，冷却至室温，加水有白色固体析出，打浆过滤得到化合物8f(280mg)，直接用于下一步反应。
MS(ESI)m/z＝632[M+H]+。
步骤6：(S，E)-1-(4-((2-氨基-4-氨基甲酰基苯基)氨基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-((四氢呋喃-3-基)氧基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺的合成
在冰浴下，氨水(0.5mL)滴加入化合物8f(280mg，0.443mmol)的甲醇(2mL)和THF(6mL)溶液中，反应液在零度下搅拌5分钟后，将连二亚硫酸钠(232mg，1.33mmol)水溶液(2mL)缓慢加入。反应混合液缓慢升至室温，搅拌反应1h。反应结束，旋蒸除去反应液中的甲醇和THF，加水稀释正丁醇萃取旋干溶剂得到粗品，经反相MPLC(流动相：乙腈/水＝1/3,v/v)纯化得到化合物8g(218mg，收率81％)，白色固体。
MS(ESI)m/z＝602[M+H]+。
步骤7：(S，E)-1-(4-(5-氨基甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁丙-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-((四氢呋喃-3-基)氧基)-1H-苯并[d]咪唑唑-5-甲酰胺的合成
在冰浴下，将1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰基异硫氰酸酯(70.7mg,0.36mmol)加入化合物8g(210mg,0.36mmol)的DMF(3mL)溶液中，反应0.5h后，依次加入HATU(152mg,0.4mmol)和DIPEA(148mg，1.15mmol，慢慢升至室温继续反应1.5h。反应液直接由反相HPLC分离纯化得到实施例化合物8(29mg)，白色固体。
MS(ESI)m/z＝749[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.81(s,2H),7.97(s,2H),7.94(s,1H),7.71(d,J＝8.2Hz,1H),7.65(s,1H),7.45–7.31(m,2H),7.27(s,1H),6.52(s,2H),6.03–5.87(m,1H),5.83–5.69(m,1H),5.24–5.07(m,1H),4.91(d,J＝4.7Hz,2H),4.80(d,J＝4.7Hz,2H),4.68–4.39(m,4H),3.93–3.56(m,4H),2.23–2.17(m,1H),2.17–2.03(m,6H),1.95–1.81(m,1H),1.37–1.15(m,6H)。
实施例9
实施例9所用起始原料与实施例8构型相反为(S)-3-羟基四氢呋喃，实验步骤的操作相同。最终得到实施例化合物9(25.5mg)。
MS(ESI)m/z＝749[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.83(d,J＝13.7Hz,2H),7.97(s,2H),7.94(s,1H),7.71(d,J＝8.2Hz,1H),7.65(s,1H),7.46–7.31(m,2H),7.27(s,1H),6.52(s,2H),6.05–5.88(m,1H),5.85–5.68(m,1H),5.15(s,1H),4.92(s,2H),4.81(d,J＝4.5Hz,2H),4.66–4.38(m,4H),3.92–3.55(m,4H),2.24–2.01(m,7H),1.94–1.81(m,1H),1.39–1.01(m,6H)。
实施例10
步骤1：(E)-1-(4-((2-硝基-6-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙氧基)-4-氨基甲酰基苯基)氨基)丁-2-烯-1-基)-7-(环丙基甲氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺的合成
向化合物3e(160mg,0.35mmol)的正丁醇(3mL)溶液中,加入DIPEA(140mg,1.08mmol)和3-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙氧基)-4-氯-5-硝基苯甲酰胺(140mg,0.36mmol)，反应混合液升温至110℃并在此温度下搅拌反应过夜，降温至室温后，加水稀释，乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并的有机相以饱和食盐水洗涤(15mL×2)，无水硫酸钠干燥，旋干溶剂得到的粗品经正相硅胶柱层析分离(洗脱剂：DCM/MeOH＝8/1，v/v)得到(反式)-1-(4-((4-氨基甲酰-2-硝基-6(氧杂环丁烷-3-甲基氧基)苯基)氨基)正丁-2-烯基)-2-(1-乙基-3-甲基-1氢-吡唑-5-甲酰胺基)-7-甲氧基-1氢-苯并咪唑-5-甲酰胺(化合物10b)(122mg，收率43％)。
MS(ESI)m/z＝804[M+H]+。
步骤2：(E)-1-(4-((2-氨基-6-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙氧基)-4-氨基甲酰基苯基)氨基)丁-2-烯-1-基)-7-(环丙基甲氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺的合成
在冰浴下，氨水(0.5mL)滴加入化合物10b(120mg，0.15mmol)的甲醇(1mL)和THF(1mL)溶液中，反应液在零度下搅拌5分钟后，将连二亚硫酸钠(120mg，0.69mmol)水溶液(1mL)缓慢加入。反应混合液缓慢升至室温，继续搅拌1h。加水稀释，正丁醇(15mL x 3)萃取，有机相旋干得到的粗品经反相MPLC(流动相：乙腈/水＝2/3,v/v)纯化得到10c(61mg，收率52％)。
MS(ESI)m/z＝774[M+H]+。
步骤3：(E)-7-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙氧基)-1-(4-(5-氨基甲酰基-7-(环丙基甲氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰氨基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1H--苯并[d]咪唑-5-甲酰胺的合成
在冰浴下，将1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰基异硫氰酸酯(15mg,0.078mmol)加入化合物10c(60mg,0.078mmol)的DMF(2mL)溶液中，反应0.5h后，依次加入HATU(36mg,0.094mmol)和DIPEA(30mg，0.23mmol)，缓慢升至室温继续反应1.5h。反应液直接由反相HPLC分离纯化得到化合物10d(50mg)。
MS(ESI)m/z＝936[M+H]+。
步骤4：(E)-1-(4-(5-氨基甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰氨基)-7-(3-羟基丙氧基)-1H-苯并[d]咪唑哌嗪-1-基)丁-2-烯-1-基)-7-(环丙基甲氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺的合成
在冰浴下，向化合物10d(50mg，0.053mmol)的DCM(2mL)溶液中加入TFA(0.5mL)，慢慢升至室温反应0.5h。反应液浓缩后的粗品经反相HPLC纯化得到实施例化合物10(11.5mg)。
MS(ESI)m/z＝821[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.82(s,1H),7.99(s,1H),7.93(s,1H),7.65(s,1H),7.63(s,1H),7.33-7.25(m,4H),6.56(s,1H),6.52(s,1H),5.97-5.81(m,2H),4.99-4.90(m,4H),4.60-4.50(m,5H),4.04(t,2H),3.81(d,2H),3.40(t,2H),2.15(s,3H),2.12(s,3H),1.68(t,2H),1.32-1.25(m,6H),1.03-0.95(m,1H),0.37(q,2H),0.17(q,2H)。
实施例11
步骤1：(E)-(4-((4-氨基甲酰基-2-硝基苯基)氨基)丁-2-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯的合成
室温下，向化合物11a(900mg，4.89mmol)的DMSO(6mL)溶液中加入DIPEA(3.16g，24.5mmol)和(4-氨基丁-2-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯(910mg，4.89mmol)，反应混合液室温搅拌过夜。加水稀释，乙酸乙酯萃取，经柱层析分离(石油醚：乙酸乙酯＝4:1-2:1，v/v)得化合物11b(1.07g,收率63.0％)，白色固体。
MS(ESI)m/z＝373.2[M+Na]+。
步骤2：(E)-(4-((2-氨基-4-氨基甲酰基苯基)氨基)丁-2-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯的合成
化合物11b(1.07g，3.06mmol)溶解于甲醇(20mL)，溶清液冷却到0℃，然后依次加入氨水(4.5mL，30.06mmol)和连二亚硫酸钠(2.66g，15.3mmol)水溶液(4mL)，在0℃下搅拌反应0.5h。反应液旋蒸除掉有机溶剂，然后加水稀释，加乙酸乙酯萃取(20mL×4)，分离得到的有机相用饱和食盐水洗(20mL×2)，无水硫酸钠干燥，然后旋干得到化合物11c(980mg，收率100％)，白色固体。
MS(ESI)m/z＝321.0[M+H]+。
步骤3：(E)-(4-(5-氨基甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰氨基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯的合成
在冰浴下，1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰基异硫氰酸酯(598mg,3.06mmol)加入化合物11c(980mg，3.06mmol)的DMF(6mL)溶液中，在此温度下反应0.5h，然后将HATU(1.16g,3.06mmol)和DIPEA(1.2g,9.18mmol)加入反应液,继续室温反应1h，反应液加水稀释,后用乙酸乙酯萃取,合并的有机相依次用水,饱和食盐水洗涤,硫酸钠干燥,旋干粗品经硅胶柱分离(MeOH/DCM＝8/100,v/v)得到化合物11d(760mg，收率52％)，白色固体。
MS(ESI)m/z＝482[M+H]+。
步骤4：(E)-1-(4-氨基丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺的合成
在冰浴下，向化合物11d(760mg，1.58mmol)的二氯甲烷(30mL)溶液中，加入三氟乙酸(10mL)。随后升至室温搅拌0.5h。旋干反应液，得到化合物11e(粗品590mg)，直接用于下步反应。
MS(ESI)m/z＝382[M+H]+。
步骤5：(E)-1-(4-((4-氨基甲酰基-2-硝基-6-(2-(氧杂环丁烷-3-基)乙氧基)苯基)氨基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺的合成
向化合物11e(200mg,0.52mmol)的叔丁醇(5mL)溶液中,加入DIPEA(370mg,2.87mmol)和4-氯-3-硝基-5-(2-(氧杂环丁烷-3-基)乙氧基)苯甲酰胺(158mg,0.52mmol)，加热至120℃反应24h，反应结束，冷却至室温，加水和乙酸乙酯/正丁醇(5/1,v/v)萃取，分离得到的有机相旋干，经制备薄层色谱分离纯化得到化合物11f(85mg，收率19.4％)，黄色固体。
MS(ESI)m/z＝646[M+H]+。
步骤6：(E)-1-(4-((2-氨基-4-氨基甲酰基-6-(2-(氧杂环丁烷-3-基)乙氧基)苯基)氨基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺的合成
在冰浴下，氨水(0.2mL)滴加入化合物11f(85mg，0.13mmol)的甲醇(10mL)溶液中，反应液在零度下搅拌5分钟后，将连二亚硫酸钠(88mg，0.5mmol)水溶液(2mL)缓慢加入。反应混合液缓慢升至室温，搅拌反应1h。反应结束，旋蒸除去反应液中的甲醇，加水稀释正丁醇萃取旋干溶剂得到粗品经反相MPLC(流动相：乙腈/水＝1/4,v/v)纯化得到化合物11g(60mg，收率74％)，白色固体。
MS(ESI)m/z＝616[M+H]+。
步骤7：(E)-1-(4-(5-氨基甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-(2-(氧杂环丁烷-3-基)乙氧基)-1H-苯并[d]咪唑唑-5-甲酰胺的合成
在冰浴下，将1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰基异硫氰酸酯(23mg,0.11mmol)加入化合物11g(60mg,0.1mmol)的DMF(3mL)中，反应0.5h后，依次加入HATU(37mg,0.1mmol)和DIPEA(37mg，0.3mmol，缓慢升至室温继续反应1.5h。反应液直接由制备HPLC分离纯化得到实施例化合物11(6.0mg，收率8％)，白色固体。
MS(ESI)m/z＝777[M+H]+。
实施例12：
步骤1：(4-氟-3-硝基苯基)氨基甲酸叔丁酯的合成
向化合物12a(3.0g，19.2mmol)的THF(20mL)溶液中滴加BOC酐(6.2g,28mmol)，反应液升至70℃搅拌过夜。反应液浓缩后柱色谱纯化(PE/EA＝20/1～5/1)得到化合物12b(3.4g，收率69％)。
步骤2：(E)-(4-((4-(5-氨基甲酰基-7-(环丙基甲氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰氨基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)氨基)-3-硝基苯基)氨基甲酸叔丁酯的合成
将化合物3e(150mg，0.33mmol)加入正丁醇中(5mL)，然后依次加入DIPEA(148mg，1.15mmol)和化合物12b(93mg，0.36mmol)。反应液升温至100℃，搅拌反应24h。将其浓缩得到的粗品经反相MPLC(流动相：乙腈/水＝2/3,v/v)纯化得到化合物12c(120mg，0.17mmol)。
MS(ESI)m/z＝688[M+H]+。
步骤3：(E)-(3-氨基-4-((4-(5-氨基甲酰基-7-(环丙基甲氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰氨基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)氨基)苯基)氨基甲酸叔丁酯的合成
在冰浴下，氨水(0.5mL)滴加入化合物12c(120mg，0.17mmol)的甲醇(1mL)和THF(1mL)溶液中，反应液在零度下搅拌5分钟后，将连二亚硫酸钠(150mg，0.85mmol)水溶液(1mL)缓慢加入。反应混合液缓慢升至室温，搅拌反应1h。反应结束，减压旋蒸除去反应液中的有机溶剂，加水稀释，用正丁醇萃取，浓缩得到的粗品经反相MPLC纯化得到化合物12d(52mg，收率45％)。
MS(ESI)m/z＝658[M+H]+。
步骤4：(E)-(1-(4-(5-氨基甲酰基-7-(环丙基甲氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)氨基甲酸叔丁酯的合成
在冰浴下，将1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰基异硫氰酸酯(15.4mg,0.079mmol)加入化合物12d(50mg,0.079mmol)的DMF(2mL)中，反应0.5h后，依次加入HATU(30mg,0.0.079mmol)和DIPEA(35mg，0.27mmol，慢慢升至室温继续反应1.5h。反应液直接由制备HPLC分离纯化得到化合物12e(60mg，收率92％)。
MS(ESI)m/z＝819[M+H]+。
步骤5：(E)-1-(4-(5-氨基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-7-(环丙基甲氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺的合成
向化合物12e(60mg，0.073mmol)的二氯甲烷(2mL)溶液中，加入三氟乙酸(1mL)。室温搅拌0.5h。反应液浓缩得到的粗品经制备HPLC纯化得到实施例化合物12(20mg)。
MS(ESI)m/z＝719[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.82(s,1H),12.36(s,1H),7.94(s,1H),7.64(s,1H),7.32(s,1H),7.28(s,1H),7.01(d,1H),6.74(s,1H),6.59(s,1H),6.48(s,1H),6.42(d,1H),6.00-5.94(m,1H),5.89-5.82(m,1H),5.05(s,br,2H),4.98(d,2H),4.72(d,2H),4.60-4.49(m,4H),3.90(d,2H),2.16(s,3H),2.11(s,3H),1.31(t,3H),1.25(t,3H),1.10(m,1H),0.45(q,2H),0.25(q,2H)。
实施例13
步骤1：1-(4-(5-氨基甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-(氧杂环丁烷-3-基氧基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺的合成
向实施例化合物2(20mg，0.027mmol)的甲醇(5mL)和乙酸乙酯(5mL)溶液中加Pd/C(5mg，10％)，氢气置换并维持在氢气环境下室温反应2h，将钯碳过滤掉，滤液浓缩后经反相HPLC纯化得到实施例化合物13(5mg)。
MS(ESI)m/z＝751[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.96(d,1H),7.96(s,2H),7.75-7.73(m,2H),7.66-7.30(m,3H),6.92(d,1H),6.59(d,2H),5.43(t,1H),4.91(t,2H),4.58-4.53(m,6H),4.43(s,2H),4.27(s,2H),2.09(s,6H),1.90(t,4H)1.30(t,6H)。
实施例14
步骤1：1-(4-(5-氨基甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁基)-7-(环丙基甲氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺的合成
向实施例化合物3(20mg，0.027mmol)的甲醇(5mL)和乙酸乙酯(5mL)溶液中加入Pd/C(5mg，10％)，氢气置换并维持在氢气环境下室温反应2h，将钯碳过滤掉，滤液浓缩后经反相HPLC纯化得到实施例化合物14(8mg)。
MS(ESI)m/z＝749[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.82(s,2H),8.06–7.88(m,3H),7.78–7.70(m,1H),7.64–7.58(m,1H),7.55–7.49(m,1H),7.33(s,2H),7.28(s,1H),6.66–6.55(m,2H),4.57(m,5H),4.45–4.34(m,3H),4.32–4.24(m,2H),3.92(d,J＝7.1Hz,2H),2.19–2.03(m,6H),1.90(s,4H),1.36–1.26(m,6H),1.16–1.04(m,1H),0.51–0.35(m,2H),0.31–0.20(m,2H)。
实施例15
步骤1：反式-7-(环丙基甲氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1-(4-((3-硝基吡啶-2-基)氨基)丁-2-烯-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺的合成
化合物3e(280mg,0.507mmol)的DMSO(2.5mL)中，加入DIPEA(200mg,1.55mmol)和2-氟-3-硝基吡啶(90mg,0.663mmol),室温下反应1h。加水稀释，乙酸乙酯(30mL×4)萃取，合并的有机相以饱和食盐水洗涤(10mL×2)，无水硫酸钠干燥，旋干溶剂得到的化合物15a(340mg，收率93％)，浅黄色固体。
MS(ESI)m/z＝574[M+H]+。
步骤2：(E)-1-(4-((3-氨基吡啶-2-基)氨基)丁-2-烯-1-基)-7-(环丙基甲氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺的合成
在冰浴下，氨水(0.5mL，4.87mmol)滴加入化合物15a(300mg，0.487mmol)的甲醇(5mL)和四氢呋喃(5mL)溶液中，5分钟后，将连二亚硫酸钠(425mg，2.44mmol)的水溶液(3mL)缓慢加入。反应混合液缓慢升至室温，继续搅拌1h。加水稀释，过滤，滤液旋干，所得粗品用反相柱纯化(洗脱剂：乙腈/水＝50/50，v/v)分离得到化合物15b(163mg，收率63％)，白色固体。
MS(ESI)m/z＝544[M+H]+。
步骤3：(E)-7-(环丙基甲氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1-(4-(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰氨基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-3-基)丁-2-烯-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺的合成
在冰浴下，将1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰基异硫氰酸酯(60mg,0.307mmol)加入化合物15b(160mg,0.299mmol)的DMF(2.5mL)溶液中，搅拌反应30min，然后加入DIPEA(120mg，0.928mmol)和HATU(114mg,0.3mmol),升至室温继续搅拌2h。反应液经反相HPLC分离纯化得到实施例化合物15(10.95mg，收率5％)，白色固体。
MS(ESI)m/z＝705[M+H]+
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)0.20～0.23(m,2H)0.39～0.43(m,2H)1.04～1.12(m,1H)1.26(t,J＝4.6Hz,3H)1.28(t,J＝4.6Hz,3H)2.10(s,3H)2.13(s,3H)3.87(d,J＝7.2Hz,2H)4.48～4.57(m,4H)4.79(d,J＝3.2Hz,2H)4.96(d,J＝3.2Hz,2H)5.89～6.00(m,2H)6.53(s,1H)6.55(s,1H)7.22～7.26(m,2H)7.30(s,1H)7.62(d,J＝1.2Hz,1H)7.75(dd,J1＝0.8Hz,J2＝7.6Hz,1H)7.91(s,1H)8.15(dd,J1＝1.2Hz,J2＝5.2Hz,1H)12.77(s,2H)
实施例16
步骤1：(E)-(4-((3-硝基吡啶-2-基)氨基)丁-2-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯的合成
化合物16a(2.63g,11.82mmol)的DMF(10mL)中，加入DIPEA(2.91g,22.52mmol)和2-氟-3-硝基吡啶(1.6g,11.26mmol),室温下反应1h。加水稀释，乙酸乙酯(50mL×4)萃取，合并的有机相以饱和食盐水洗涤(50mL×2)，无水硫酸钠干燥，旋干溶剂得到的化合物16b(3.2g，收率92％)，浅黄色固体。
MS(ESI)m/z＝308[M+H]+。
步骤2：(E)-(4-((3-氨基吡啶-2-基)氨基)丁-2-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯的合成
将化合物16b(3.2g,10.38mmol)溶于醋酸(30mL)溶液中，将锌粉(3.37g,51.89mmol)加入反应体系中，室温下继续搅拌1h。加碳酸氢钠水溶液释，乙酸乙酯萃取(30mL×3)，合并的有机相以饱和食盐水洗涤(30mL×2)，无水硫酸钠干燥，旋干溶剂，所得粗品用正相柱纯化(洗脱剂：EA/PE＝10/1，v/v)分离得到化合物16c(1.5g，收率52％)，白色固体。
MS(ESI)m/z＝278[M+H]+。
步骤3：(E)-叔丁基(4-(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-3-基)丁-2-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯的合成
在冰浴下，将1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰基异硫氰酸酯(841.71mg,4.31mmol)加入化合物16c(1.2g,4.31mmol)的DMF(15mL)溶液中，搅拌反应30min，然后加入DIPEA(1.11g,8.62mmol)和HATU(1.80g,4.74mmol),升至室温继续搅拌2h。反应液经正相分离纯化(PE/EA＝1/1，v/v)得到化合物16d(1.5g，收率79％)，白色固体。
MS(ESI)m/z＝440[M+H]+
步骤4：(E)-N-(3-(4-氨基丁-2-烯-1-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-基)-1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺的合成
在冰浴下，将TFA(10mL)加入化合物16d(1.5g,3.41mmol)的DCM(10mL)中，室温下反应1h，监测反应完全后旋干得到粗品化合物16e直接用于下一步。
MS(ESI)m/z＝340[M+H]+
步骤5：(E)-N-(3-(4-((4-氨基甲酰基-2-(2-甲氧基乙氧基)-6-硝基苯基)氨基)丁-2-烯-1-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-基)-1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺的合成
向化合物16e(0.2g,0.59mmol)的正丁醇(2mL)溶液中加入DIPEA(152mg，1.18mmol)和4-氯-3-(2-甲氧基乙氧基)-5-硝基苯甲酰胺(162mg，0.59mmol)。升温至120℃反应18h，反应完全后旋蒸浓缩得到粗品，经硅胶柱纯化(洗脱剂DCM/MeOH＝10/1)得到化合物16f(231mg，收率67％)。
MS(ESI)m/z＝578[M+H]+
步骤6：(E)-N-(3-(4-((2-氨基-4-氨基甲酰基-6-(2-甲氧基乙氧基)苯基)氨基)丁-2-烯-1-基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-2-基)-1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺的合成
在冰浴下，氨水(2mL)滴加入化合物16f(70mg，0.12mmol)的甲醇(5mL)溶液中，5分钟后，将连二亚硫酸钠(105mg，0.61mmol)的水溶液(4mL)缓慢加入。反应混合液缓慢升至室温，继续搅拌1h。加水稀释，过滤，滤液旋干，所得粗品用反相柱纯化(洗脱剂：乙腈/水＝50/50，v/v)分离得到化合物16g(65mg，收率97％)，白色固体。
MS(ESI)m/z＝548[M+H]+。
步骤7：(E)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1-(4-(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-3H-咪唑并〔4,5-b]吡啶-3-基)丁-2-烯-1-基)-7-(2-甲氧基乙氧基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺的合成
在冰浴下，将1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰基异硫氰酸酯(7mg,0.037mmol)加入化合物16g(20mg,0.037mmol)的DMF(1mL)溶液中，搅拌反应30min，然后加入DIPEA(10mg，0.073mmol)和HATU(15mg,0.04mmol),升至室温继续搅拌2h。反应液经反相HPLC分离纯化得到实施例化合物16(2.46mg，收率7％)，白色固体。
MS(ESI)m/z＝709[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.70-12.88(m,2H),8.16-8.17(m,1H),7.90-8.00(m,1H),7.72-7.80(m,1H),7.62-7.67(m,1H),7.30-7.38(m,2H),7.21-7.27(m,1H),6.50-6.57(m,2H),5.89-5.98(m,2H),4.89-4.96(m,2H),4.74-4.83(m,2H),4.46-4.59(m,4H),4.11-4.19(m,2H),3.52-3.61(m,2H),3.14-3.22(m,3H),2.07-2.17(m,6H),1.20-1.33(m,6H).
实施例17
步骤1：(E)-N-(3-(4-((4-氨基甲酰基-2-甲氧基-6-硝基苯基)氨基)丁-2-烯-1-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-基)-1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺的合成
向化合物16e(200mg,0.59mmol)的正丁醇(2mL)溶液中加入DIPEA(152mg，1.18mmol)和4-氯-3-甲氧基-5-硝基苯甲酰胺(136mg，0.59mmol)。升温至120℃反应18h，反应完全后旋蒸浓缩得到粗品，经硅胶柱纯化(洗脱剂DCM/MeOH＝10/1)得到化合物17a(92mg，收率29％)。
MS(ESI)m/z＝534[M+H]+
步骤2：(E)-N-(3-(4-((2-氨基-4-氨基甲酰基-6-甲氧基苯基)氨基)丁-2-烯-1-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-基)-1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺的合成
在冰浴下，氨水(2mL)滴加入化合物17a(35mg，0.065mmol)的甲醇(4mL)溶液中，5分钟后，将连二亚硫酸钠(57mg，0.328mmol)的水溶液(2mL)缓慢加入。反应混合液缓慢升至室温，继续搅拌1h。加水稀释，过滤，滤液旋干，所得粗品用反相柱纯化(洗脱剂：乙腈/水＝50/50，v/v)分离得到化合物17b(32mg，收率97％)，白色固体。
MS(ESI)m/z＝504[M+H]+。
步骤3：(E)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1-(4-(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-3H-咪唑并〔4,5-b]吡啶-3-基)丁-2-烯-1-基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺的合成
在冰浴下，将1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰基异硫氰酸酯(4mg,0.02mmol)加入化合物17b(10mg,0.02mmol)的DMF(1mL)溶液中，搅拌反应30min，然后加入DIPEA(5mg，0.04mmol)和HATU(8mg,0.022mmol),升至室温继续搅拌2h。反应液经反相HPLC分离纯化得到实施例化合物17(1.33mg，收率10％)，白色固体。
MS(ESI)m/z＝665[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.69-12.85(m,2H),8.15-8.20(m,1H),7.94-8.01(m,1H),7.72-7.80(m,1H),7.61-7.67(m,1H),7.30-7.41(m,2H),7.22-7.25(m,1H),6.48-6.57(m,2H),5.83-5.91(m,2H),4.87-4.96(m,2H),4.74-4.83(m,2H),4.47-4.58(m,4H),3.75-3.83(m,3H),2.03-2.16(m,6H),1.24-1.28(m,6H).
实施例18
步骤1：(E)-N-(3-(4-((4-氨基甲酰基-2-硝基-6-(氧杂环丁烷-3-基氧基)苯基)氨基)丁-2-烯-1-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-基)-1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺的合成
向化合物16e(200mg,0.59mmol)的正丁醇(2mL)溶液中加入DIPEA(152mg，1.18mmol)和4-氯-3-甲氧基-5-硝基苯甲酰胺(160mg，0.59mmol)。升温至120℃反应18h，反应完全后旋蒸浓缩得到粗品，经硅胶柱纯化(洗脱剂PE/EA＝)得到化合物18a(116mg，收率34％)。
MS(ESI)m/z＝576[M+H]+
步骤2：((E)-N-(3-(4-((2-氨基-4-氨基甲酰基-6-(氧杂环丁烷-3-基氧基)苯基)氨基)丁-2-烯-1-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-基)-1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺的合成
在冰浴下，氨水(2mL)滴加入化合物18a(52mg，0.09mmol)的甲醇(4mL)溶液中，5分钟后，将连二亚硫酸钠(79mg，0.45mmol)的水溶液(2mL)缓慢加入。反应混合液缓慢升至室温，继续搅拌1h。加水稀释，过滤，滤液旋干，所得粗品用反相柱纯化(洗脱剂：乙腈/水＝50/50，v/v)分离得到化合物18b(48mg，收率97％)，白色固体。
MS(ESI)m/z＝546[M+H]+。
步骤3：((E)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1-(4-(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)--3H-咪唑并〔4,5-b]吡啶-3-基)丁-2-烯-1-基)-7-(氧杂环丁烷-3-基氧基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺的合成
在冰浴下，将1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰基异硫氰酸酯(4mg,0.016mmol)加入化合物18b(9mg,0.016mmol)的DMF(1mL)溶液中，搅拌反应30min，然后加入DIPEA(5mg，0.033mmol)和HATU(7mg,0.018mmol),升至室温继续搅拌2h。反应液经反相HPLC分离纯化得到实施例化合物18(1.25mg，收率10％)，白色固体。
MS(ESI)m/z＝707[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.68-12.87(m,2H),8.15-8.16(m,1H),7.90-7.97(m,1H),7.74-7.76(m,1H),7.66-7.69(m,1H),7.33-7.41(m,1H),7.20-7.27(m,2H),6.86-6.90(m,1H),6.50-6.57(m,2H),5.84-5.97(m,2H),5.29-5.37(m,2H),4.94-5.02(m,2H),4.74-4.86(m,4H),4.43-4.61(m,6H),2.08-2.16(m,6H),1.24-1.28(m,6H).
实施例19
步骤1：(E)-N-(3-(4-((4-氨基甲酰基-2-硝基-6-(氧杂环丁烷-3-基甲氧基)苯基)氨基)丁-2-烯-1-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-基)-1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺的合成
向化合物16e(260mg,0.767mmol)的正丁醇(5mL)溶液中加入DIPEA(270.5mg，2.09mmol)和4-氯-3-甲氧基-5-硝基苯甲酰胺(200mg，0.697mmol)。升温至120℃反应18h，反应完全后旋蒸浓缩得到粗品，经硅胶柱纯化(洗脱剂PE/EA＝)得到化合物19a(107mg，0.181mmol)。
MS(ESI)m/z＝590[M+H]+
步骤2：(E)-N-(3-(4-((2-氨基-4-氨基甲酰基-6-(氧杂环丁烷-3-基甲氧基)苯基)氨基)丁-2-烯-1-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-基)-1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺的合成
在冰浴下，氨水(0.2mL，1.94mmol)滴加入化合物19a(100mg，0.169mmol)的甲醇(1mL)和四氢呋喃(1mL)溶液中，5分钟后，将连二亚硫酸钠(100mg，0.568mmol)的水溶液(1mL)缓慢加入。反应混合液缓慢升至室温，继续搅拌1h。加水稀释，过滤，滤液旋干，所得粗品用反相柱纯化(洗脱剂：乙腈/水＝50/50，v/v)分离得到化合物19b(58mg，收率61％)，白色固体。
MS(ESI)m/z＝560[M+H]+。
步骤3：(E)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1-(4-(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-3H-咪唑并〔4,5-b]吡啶-3-基)丁-2-烯-1-基)-7-(氧杂环丁烷-3-基甲氧基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺的合成
在冰浴下，将1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰基异硫氰酸酯(20mg,0.103mmol)加入化合物19b(55mg,0.103mmol)的DMF(1mL)溶液中，搅拌反应30min，然后加入DIPEA(14mg，0.104mmol)和HATU(40mg,0.104mmol),升至室温继续搅拌2h。反应液经反相HPLC分离纯化得到实施例化合物19(5.56mg，收率7％)，白色固体。
MS(ESI)m/z＝721[M+H]+。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)1.24(t,J＝3.6Hz,3H)1.27(t,J＝3.6Hz,3H)2.10(s,3H)2.12(s,3H)3.21～3.28(m,1H)4.23(d,J＝6.0Hz,2H)4.34(t,J＝6.0Hz,2H)4.48(d,J＝6.8Hz,2H)4.52(d,J＝7.2Hz,2H)4.57(dd,J1＝6.0Hz,J2＝7.6Hz,2H)4.75(d,J＝4.4Hz,2H)4.91(d,J＝4Hz,2H)5.69～5.79(m,1H)5.80～5.90(m,1H)6.52(s,2H)7.23(dd,J1＝4.8Hz,J2＝7.6Hz,1H)7.35(s,2H)7.65(s,1H)7.75(d,J＝7.6Hz,1H)7.96(s,1H)8.16(d,J＝4.0Hz,1H)12.74(s,1H)12.83(s,1H)
实施例20
步骤1：(E)-N-(3-(4-((4-氨基甲酰基-2-硝基-6-(2-(氧杂环丁烷-3-基)乙氧基)苯基)氨基)丁-2-烯-1-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-基)-1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺的合成
向化合物16e(538mg,1.58mmol)的正丁醇(10mL)溶液中加入DIPEA(409mg，3.17mmol)和4-氯-3-甲氧基-5-硝基苯甲酰胺(500mg，1.58mmol)。升温至120℃反应18h，反应完全后旋蒸浓缩得到粗品，经硅胶柱纯化(洗脱剂PE/EA＝1/3)得到化合物20a(526mg，收率53％)。
MS(ESI)m/z＝604[M+H]+
步骤2：((E)-N-(3-(4-((2-氨基-4-氨基甲酰基-6-(2-(氧杂环丁烷-3-基)乙氧基)苯基)氨基)丁-2-烯-1-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-基)-1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺的合成
在冰浴下，氨水(5mL)滴加入化合物20a(526mg，0.85mmol)的甲醇(10mL)溶液中，5分钟后，将连二亚硫酸钠(740mg，4.25mmol)的水溶液(3mL)缓慢加入。反应混合液缓慢升至室温，继续搅拌1h。加水稀释，过滤，滤液旋干，所得粗品用反相柱纯化(洗脱剂：乙腈/水＝50/50，v/v)分离得到化合物20b(169mg，收率33％)，白色固体。
MS(ESI)m/z＝574[M+H]+。
步骤3：(E)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1-(4-(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-3H-咪唑并〔4,5-b]吡啶-3-基)丁-2-烯-1-基)-7-(2-(氧杂环丁烷-3-基)乙氧基)-1H-苯并[d]咪唑唑-5-甲酰胺的合成
在冰浴下，将1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰基异硫氰酸酯(56mg,0.29mmol)加入化合物20b(169mg，0.29mmol)的DMF(2mL)溶液中，搅拌反应30min，然后加入DIPEA(74mg，0.57mmol)和HATU(121mg,0.32mmol),升至室温继续搅拌2h。反应液经反相HPLC分离纯化得到实施例化合物20(132mg，收率61％)，白色固体。
MS(ESI)m/z＝735[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.68-12.90(m,2H),8.13-8.20(m,1H),7.90-7.98(m,1H),7.73-7.80(m,1H),7.61-7.67(m,1H),7.30-7.38(m,1H),7.20-7.29(m,2H),6.49-6.58(m,2H),5.76-5.96(m,2H),4.86-4.96(m,2H),4.73-4.82(m,2H),4.46-4.60(m,6H),4.10-4.25(m,2H),3.82-3.98(m,2H),2.92-3.04(m,2H),2.07-2.16(m,6H),1.85-2.05(m,4H),1.24-1.29(m,6H).
实施例21
步骤1：(E)-7-(环丙基甲氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1-(4-((2-硝基吡啶-3-基)氨基)丁-2-烯-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺的合成
化合物3e(116mg,0.26mmol)的正丁醇(5mL)中，加入DIPEA(95mg,0.78mmol)和2-氟-3-硝基吡啶(35mg,0.25mmol),90℃下反应3h。加水稀释，乙酸乙酯(30mL×4)萃取，合并的有机相以饱和食盐水洗涤(10mL×2)，无水硫酸钠干燥，旋干溶剂得到的化合物21a(120mg，收率84％)，浅黄色固体。
MS(ESI)m/z＝574[M+H]+。
步骤2：(E)-1-(4-((2-氨基吡啶-3-基)氨基)丁-2-烯-1-基)-7-(环丙基甲氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺的合成
将化合物21a(120mg，0.21mmol)溶于醋酸(10mL)溶液中，将锌粉(68mg,1.1mmol)加入反应体系中，室温下继续搅拌1h。加碳酸氢钠水溶液释，乙酸乙酯萃取(30mL×3)，合并的有机相以饱和食盐水洗涤(10mL×2)，无水硫酸钠干燥，旋干溶剂，所得粗品用正相柱纯化(洗脱剂：DCM/MeOH＝10/1，v/v)分离得到化合物21b(70mg，收率61.5％)，白色固体.
MS(ESI)m/z＝544[M+H]+。
步骤3：(E)-7-(环丙基甲氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1-(4-(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-1-基)丁-2-烯-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺的合成
在冰浴下，将1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰基异硫氰酸酯(25mg,0.128mmol)加入化合物21b(70mg,0.128mmol)的DMF(5mL)溶液中，搅拌反应30min，然后加入DIPEA(33mg，0.257mmol)和HATU(54mg,0.142mmol),升至室温继续搅拌2h。反应液经反相HPLC分离纯化得到实施例化合物21(1.01mg，收率1.08％)，白色固体。
MS(ESI)m/z＝705[M+H]+
实施例22
步骤1：6-氯-2-甲氧基烟酸的合成
在冰浴下将无水甲醇(1.6mL，40.0mmol)加入到无水四氢呋喃(15mL)中，再加入NaH(0.96g，40.0mmol)。在冰浴下搅拌30分钟后，加入22a(1.9g，10.0mmol)。然后将该反应置于60℃搅拌过夜。冷却至室温后，加水淬灭反应，用稀盐酸(3M)将反应液PH调至6～7.然后用二氯甲烷萃取(10mL×3)，有机相用盐水洗涤(10mL×1)，无水硫酸钠干燥，减压旋蒸得粗品6-氯-2-甲氧基烟酸(化合物22b)(2.5g，60％纯度)，收率80％。该粗品不需纯化，可直接用于下一步。
MS(ESI)m/z＝188[M+H]+。
步骤2：6-氯-2-甲氧基烟酸甲酯的合成
在冰浴下，将草酰氯(3.4mL,40mmol)滴加到粗品化合物22b(2.5g，13.4mmol，60％纯度)的二氯甲烷溶液中，再加入DMF(200uL)。在冰浴下搅拌2h后。减压旋干反应液，将旋干后的剩余物溶于二氯甲烷，再将此二氯甲烷溶液加入到无水甲醇。然后在室温下搅拌1.5h。加水稀释然后用乙酸乙酯萃(10mL×3)，有机相用盐水洗涤(10mL×1)，无水硫酸钠干燥，减压旋蒸得粗品，将该粗品用反相中压过柱仪(洗脱剂：乙腈/水＝30/80，v/v)纯化得产品6-氯-2-甲氧基烟酸甲酯(化合物22c)，1.3g，收率87％。
MS(ESI)m/z＝202[M+H]+。
步骤3：6-氯-2-甲氧基-5-硝基烟酸甲酯的合成
在冰盐浴下，将HNO3(1.3mL)滴加到化合物6-氯-2-甲氧基烟酸甲酯(1.3g,6.5mmol)的三氟乙酸酐(40mL)溶液中。在冰盐浴中搅拌3h。将该反应液缓慢倒入冰水中，用饱和碳酸钠将PH调至7～8，析出黄色固体。过滤，再用水分散固体，再过滤，减压旋干黄色得6-氯-2-甲氧基-5-硝基烟酸甲酯(化合物22d)，1.1g，黄色固体，收率69％。
MS(ESI)m/z＝247[M+H]+。
步骤4：E)-6-((4-(5-氨基甲酰基-7-(环丙基甲氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-哌嗪-1-基)丁-2-烯-1-基)氨基)-2-甲氧基-5-硝基烟酸甲酯的合成
将6-氯-2-甲氧基-5-硝基烟酸甲酯(330mg，1.3mmol)加入化合物1e(604mg，1.3mmol)和DIPEA(503mg，3.9mmol)的DMF(10mL)溶液中，反应混合液在室温下搅拌2h，待反应完全后加水稀释，乙酸乙酯(30mL×4)萃取，合并的有机相以饱和食盐水洗涤(10mL×2)，无水硫酸钠干燥，旋干溶剂得到的粗品经反相柱层析分离(洗脱剂：乙腈/水＝30/70，v/v)得到(E)-6-((4-(5-氨基甲酰基-7-(环丙基甲氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-哌嗪-1-基)丁-2-烯-1-基)氨基)-2-甲氧基-5-硝基烟酸甲酯(化合物22e)390mg，浅黄色固体，收率44％。
MS(ESI)m/z＝662.0[M+H]+。
步骤5：(E)-5-氨基-6-((4-(5-氨基甲酰基-7-(环丙基甲氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1H-苯并[甲基]d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)氨基)-2-甲氧基烟酸甲酯的合成
向化合物22e(390mg，0.59mmol)的甲醇(10mL)溶液中加入乙酸(2mL)和铁粉(165.2mg，2.95mmol)，反应混合液升温至60℃，搅拌反应2h。反应结束，旋蒸除去反应液中的甲醇，用乙酸乙酯萃取所得粗品用反相柱层析(洗脱剂：乙腈/水＝50/50，v/v)分离得到(E)-5-氨基-6-((4-(5-氨基甲酰基-7-(环丙基甲氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1H-苯并[甲基]d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)氨基)-2-甲氧基烟酸甲酯(化合物22f)180mg，白色固体，收率48％。
MS(ESI)m/z＝632[M+H]+。
步骤6：(E)-3-(4-(5-氨基甲酰基-7-(环丙基甲氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-1-甲基基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰氨基)-5-甲氧基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-6-羧酸甲酯的合成
在冰浴下，将化合物1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰基异硫氰酸酯(57mg，0.29mmol)滴加到(E)-3-(4-(5-氨基甲酰基-7-(环丙基甲氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-1-甲基基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰氨基)-5-甲氧基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-6-羧酸甲酯22f(180mg，0.29mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(10mL)溶液中，反应0.5h。然后HATU(122mg，0.32mmol)和N,N-二异丙基乙胺(124mg,0.96mmol)加入反应液,继续室温搅拌3h，直接减压旋干反应液，然后柱层析分离(洗脱剂乙腈/水＝1/3,v/v)得到(E)-3-(4-(5-氨基甲酰基-7-(环丙基甲氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-1-甲基基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰氨基)-5-甲氧基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-6-羧酸甲酯(化合物22g)70mg，白色固体，收率31％。
MS(ESI)m/z＝793[M+H]+。
步骤7：(E)-3-(4-(5-氨基甲酰基-7-(环丙基甲氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰氨基)-5-甲氧基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-6--羧酸的合成
化合物22h(70mg，0.09mmol)混溶于THF(1mL)与甲醇(1mL)的混合溶剂中，室温下加入氢氧化锂(19mg，0.81mmol)的水溶液，加完室温搅拌1h，反应液经加1N的盐酸调pH＝5～6然后直接旋干反应液得含盐粗品(E)-3-(4-(5-氨基甲酰基-7-(环丙基甲氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰氨基)-5-甲氧基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-6--羧酸(化合物22h)160mg，40％纯度，收率93％，白色固体。
MS(ESI)m/z＝779[M+H]+。
步骤8：(E)-3-(4-(5-氨基甲酰基-7-(环丙基甲氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰氨基)-5-甲氧基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-6--甲酰胺的合成
冰浴下，HATU(38mg,0.10mmol)加入到化合物22h(按纯品折算)(160×40％mg，0.08mmol)的DMF(1mL)溶液中，搅拌0.2h，然后依次加入氯化铵(12.8mg，0.24mmol)和N,N-二异丙基乙胺(52mg，0.40mmol)，得到的反应混合液室温下继续搅拌3h。反应液经反相HPLC分离纯化得到实施例化合物22(12mg)，白色固体，收率19％。
MS(ESI)m/z＝778[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.81(s,2H),8.24(s,1H),7.92(s,1H),7.70–7.61(m,3H),7.29(d,J＝17.4Hz,2H),6.54(d,J＝9.4Hz,2H),6.04–5.96(m,2H),4.99(d,J＝5.3Hz,2H),4.76(d,J＝5.3Hz,2H),4.53(dq,J＝14.4,7.6,7.2Hz,4H),3.87–3.85(m,5H),2.12(d,J＝3.2Hz,6H),1.28(q,J＝6.7Hz,7H),1.08(s,1H),0.42(d,J＝7.6Hz,2H),0.22(d,J＝5.0Hz,2H).
实施例23
步骤1：(反式)-叔丁基(4-(4-氨基甲酰-2-环丙基甲氧基-6-硝基苯基)氨基)正丁-2-烯基)氨基甲酸酯(化合物23b)的合成
室温下将4-氯-3-环丙基甲氧基-5-硝基苯酰胺(1.0g，3.7mmol)和(4-氨基丁-2-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯(830mg，3.72mmol)溶解在正丁醇(15mL)中，DIPEA(1.2g，11.88mmol)滴入反应液。反应混合液升温至115℃，并在此温度下搅拌过夜。冷却至室温后，加水稀释，用乙酸乙酯萃取(200mL×3)，有机相用水洗涤(60mL×2)，无水硫酸钠干燥，减压旋蒸，硅胶色谱柱分离纯化(洗脱剂:PE/EA＝1/5～1/1)后得到(反式)-叔丁基(4-(4-氨基甲酰-2-环丙基甲氧基-6-硝基苯基)氨基)正丁-2-烯基)氨基甲酸酯(化合物23b)675mg，橙黄色固体，收率43％。
MS(ESI)m/z＝421[M+H]+。
步骤2：(反式)-叔丁基(4-((2-氨基-4氨基甲酰-6环丙基甲氧苯基)氨基)正丁-2-烯基)氨基甲酸酯(化合物23c)的合成
在冰浴下，将氨水(1.62mL，11.80mmol)加入化合物23b(670mg，1.59mmol)的甲醇(15mL)溶液中。5min后，缓慢滴加连二亚硫酸钠(1.22g，7.01mmol)的水溶液(6mL)。反应1h后，反应液颜色由橙红色变为白色。反应液旋除甲醇，然后加水稀释，加乙酸乙酯萃取(30mL×4)，分离得到的有机相用饱和食盐水洗(20mL×2)，无水硫酸钠干燥，然后旋干得到((反式)-叔丁基(4-((2-氨基-4氨基甲酰-6环丙基甲氧苯基)氨基)正丁-2-烯基)氨基甲酸酯(化合物23c)的白色固体388mg，收率62％。
MS(ESI)m/z＝391[M+H]+。
步骤3：(反式)-叔丁基(4-(5-氨基甲酰-2-(1-乙基-3-甲基-1氢-吡唑-5甲酰胺)-7-环丙基甲氧基-1H-苯并咪唑基)正丁2-烯基)氨基甲酸酯(化合物23d)的合成
在冰浴下，将化合物1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰基异硫氰酸酯(189mg,0.971mmol)滴加入化合物23c(380mg，0.971mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(10mL)溶液中，反应0.5h。然后HATU(370mg,0.973mmol)和N,N-二异丙基乙胺(130mg,1.00mmol)加入反应液,继续室温搅拌3h，反应液用水稀释，过滤收集产生的白色固体，并用水(5mL×3)洗涤，然后柱层析分离(洗脱剂：乙腈/水＝1/3,v/v)得到(反式)-叔丁基(4-(5-氨基甲酰-2-(1-乙基-3-甲基-1氢-吡唑-5甲酰胺)-7-环丙基甲氧基-1H-苯并咪唑基)正丁2-烯基)氨基甲酸酯(化合物23d)440mg，白色固体，收率82％。
MS(ESI)m/z＝552[M+H]+。
步骤4：(反式)-1-(4-氨基正丁-2-烯基)-2-(1-乙基-3-甲基-1氢-吡唑-5-甲酰胺基)-7-环丙基甲氧基-1氢-苯并咪唑-5-甲酰胺(化合物23e)的合成
将化合物23d(430mg，0.78mmol)溶解在二氯甲烷(10mL)中，三氟乙酸(5mL)逐滴加入。反应液室温搅拌30分钟后。旋干反应液，得到化合物(反式)-1-(4-氨基正丁-2-烯基)-2-(1-乙基-3-甲基-1氢-吡唑-5-甲酰胺基)-7-环丙基甲氧基-1氢-苯并咪唑-5-甲酰胺(化合物23e)350mg，浅黄色固体，收率99％。
MS(ESI)m/z＝452[M+H]+。
步骤5：(反式)-1-(6-((5-硝基-烟酸甲酯)胺基)丁基-2-烯-1-基)-7-(环丙基甲氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1氢-吡唑-5-甲酰胺基)-1氢-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺(化合物23f)的合成
将6-氯-5-烟酸甲酯(162mg，0.75mmol)加入化合物23e(340mg，0.75mmol)和DIPEA(291mg，2.25mmol)的DMF(10mL)溶液中，反应混合液在室温下搅拌2h，待反应完全后加水稀释，乙酸乙酯(30mL×4)萃取，合并的有机相以饱和食盐水洗涤(10mL×2)，无水硫酸钠干燥，旋干溶剂得到的粗品经反相柱层析分离(洗脱剂：乙腈/水＝30/70，v/v)得到反式)-1-(6-((5-硝基-烟酸甲酯)胺基)丁基-2-烯-1-基)-7-(环丙基甲氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1氢-吡唑-5-甲酰胺基)-1氢-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺(化合物23f)307mg，浅黄色固体，收率65％。
MS(ESI)m/z＝632.0[M+H]+。
步骤6：(反式)-1-(6-((5-胺基-烟酸甲酯)胺基)丁基-2-烯-1-基)-7-(环丙基甲氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1氢-吡唑-5-甲酰胺基)-1氢-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺(化合物23g)的合成
向化合物23f(300mg，0.47mmol)的甲醇(10mL)溶液中加入乙酸(2mL)和铁粉(135mg，2.41mmol)，反应混合液升温至60℃，搅拌反应2h。反应结束，旋蒸除去反应液中的甲醇，用乙酸乙酯萃取所得粗品用反相柱层析(洗脱剂：乙腈/水＝50/50，v/v)分离得到反式)-1-(6-((5-胺基-烟酸甲酯)胺基)丁基-2-烯-1-基)-7-(环丙基甲氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1氢-吡唑-5-甲酰胺基)-1氢-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺(化合物23g)210mg，白色固体，收率71％。
MS(ESI)m/z＝602[M+H]+。
步骤7:(反式)-甲基-3-(4-(5-胺基甲酰基-7-(环丙基甲氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1氢-吡唑-5-甲酰胺基)-1氢-苯[并]咪唑-1-基)丁基-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1氢-吡唑-5-胺基甲酰基)-3氢-咪唑[4,5-并]吡啶-6-碳酸甲酯(化合物23h)的合成
在冰浴下，将1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰基异硫氰酸酯(67mg，0.34mmol)滴加入化合物23g(206mg，0.34mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(10mL)溶液中，反应0.5h。然后HATU(130mg，0.34mmol)和N,N-二异丙基乙胺(130mg,1.00mmol)加入反应液,继续室温搅拌3h，反应液用水稀释，过滤收集产生的白色固体，并用水(5mL×3)洗涤，然后柱层析分离(洗脱剂乙腈/水＝1/3,v/v)得到(反式)-甲基-3-(4-(5-胺基甲酰基-7-(环丙基甲氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1氢-吡唑-5-甲酰胺基)-1氢-苯并[d]咪唑-1-基)丁基-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1氢-吡唑-5-胺基甲酰基)-3氢-咪唑[4,5-b]吡啶-6-碳酸甲酯(化合物23h)110mg，白色固体，收率42％。
MS(ESI)m/z＝763[M+H]+。
步骤8：(反式)-3-(4-(5-胺甲酰基-7-(环丙基甲氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1氢-吡唑-5-甲酰胺基)-1氢-苯[并]咪唑-1-基)丁基-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1氢-吡唑-5-甲酰胺基)-3氢-咪唑[4,5-并]吡啶-6-甲酸(化合物23i)的合成
化合物23h(110mg，0.14mmol)混溶于THF(1mL)与甲醇(1mL)的混合溶剂中，室温下加入氢氧化锂(31mg，1.28mmol)的水溶液，加完室温搅拌1h，反应液经加1N的盐酸调pH后析出固体，抽滤，滤饼用水洗后干燥得到(反式)-3-(4-(5-胺甲酰基-7-(环丙基甲氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1氢-吡唑-5-甲酰胺基)-1氢-苯[并]咪唑-1-基)丁基-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1氢-吡唑-5-甲酰胺基)-3氢-咪唑[4,5-并]吡啶-6-甲酸(化合物23i)100mg，白色固体，收率92％。
MS(ESI)m/z＝749[M+H]+。
步骤9：(反式)-3-(4-(5-胺基甲酰基-7-(环丙基甲氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1氢-吡唑-5-甲酰胺基)-1氢-苯[并]咪唑-1-基)丁基-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1氢-吡唑-5-甲酰胺基)-3氢-咪唑[4,5-并]吡啶-6-甲酰胺(化合物23)的合成
冰浴下，HATU(50mg,0.133mmol)加入到化合物23i(100mg，0.133mmol)的DMF(1mL)溶液中，搅拌0.2h，然后依次加入氯化铵(35mg，0.665mmol)和N,N-二异丙基乙胺(35mg，0.256mmol)，得到的反应混合液室温下继续搅拌3h。反应液经反相HPLC分离纯化得到实施例化合物23(10mg，白色固体，收率10％)。
MS(ESI)m/z＝748[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ12.8(s,1.5H),8.69(d,1H),8.13(d,2H),7.93(d,1H),7.62(d,1H),7.53(s,1H),7.33～7.26(m,2H),6.53(d,2H),5.94～5.69(m,2H),5.03～4.89,(m,3H),4.55～4.48(m,4H),4.13～4.01(m,2H),3.86(d,1H),2.11(s,6H),1.29～1.24(m,6H),1.20～1.03(m,1H),0.40(q,2H),0.21(q,2H)。
实施例24
步骤1：(反式)-甲基-6-((4-((叔丁氧羰基)氨基)正丁-2-烯基-1-基)氨基)-5-硝基烟酸(化合物24b)的合成
室温下将6-氯-5-硝基烟酸甲酯(1000mg，4.6mmol)和(4-氨基丁-2-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯(1026mg，4.6mmol)溶解在DMF(20mL)中，三乙胺(1400mg，13.8mmol)滴入反应液。反应混合液室温下搅拌2h。反应完成后，加水稀释，用乙酸乙酯萃取(200mL×3)，有机相用水洗涤(60mL×2)，无水硫酸钠干燥，减压旋蒸，硅胶色谱柱分离纯化(洗脱剂:PE/EA＝1/5～1/1)后得到(反式)-甲基-6-((4-((叔丁氧羰基)氨基)正丁-2-烯基-1-基)氨基)-5-硝基烟酸(化合物24b)1500mg，橙黄色固体，收率89％。
MS(ESI)m/z＝367[M+H]+。
步骤2：(反式)-6-((4-((叔丁氧羰基)氨基)正丁-2-烯-1-基)氨基)-5-硝基烟酸(化合物24c)的合成
化合物24b(1500mg，4.09mmol)混溶于THF(4mL)与甲醇(4mL)的混合溶剂中，室温下加入氢氧化锂(860mg，20.5mmol)的水溶液，加完室温搅拌1h，反应液经加1N的盐酸调pH后析出固体，抽滤，滤饼用水洗后干燥得到(反式)-6-((4-((叔丁氧羰基)氨基)正丁-2-烯-1-基)氨基)-5-硝基烟酸(化合物24c)1300mg,白色固体，收率90％。
MS(ESI)m/z＝353[M+H]+。
步骤3：(反式)-叔丁基(4-((5-氨基甲酰-3-硝基吡啶-2-基)氨基)正丁-2-烯-1-基)氨基甲酸酯(化合物24d)的合成
冰浴下，HATU(1406mg，3.7mmol)加入到化合物24c(1300mg，3.69mmol)的DMF(15mL)溶液中，搅拌0.2h，然后依次加入氯化铵(900mg，18.45mmol)和N,N-二异丙基乙胺(1439mg，11.07mmol)，得到的反应混合液室温下继续搅拌3h。反应液加水稀释，用乙酸乙酯萃取(200mL×3)，有机相用水洗涤(60mL×2)，无水硫酸钠干燥，减压旋蒸，硅胶色谱柱分离纯化(洗脱剂:PE/EA＝1/5～1/1)后得到(反式)-叔丁基(4-((5-氨基甲酰-3-硝基吡啶-2-基)氨基)正丁-2-烯-1-基)氨基甲酸酯(化合物24d)1030mg,白色固体，收率80％。
MS(ESI)m/z＝352[M+H]+。
步骤4：(反式)-叔丁基(4-((3-氨基-5-氨基甲酰吡啶-2-基)氨基)丁基-2-烯-1-基)氨基甲酸酯(化合物24f)的合成
化合物24d(670mg，1.91mmol)溶解于甲醇(15mL)，溶清液冷却到0℃，然后依次加入氨水(1.62mL，11.80mmol)，连二亚硫酸钠(1.22g，7.01mmol)水溶液(6mL)。反应混合液在0℃下搅拌1h，反应液颜色由橙红色变为白色。反应液旋除甲醇，然后加水稀释，加乙酸乙酯萃取(30mL×4)，分离得到的有机相用饱和食盐水洗(20mL×2)，无水硫酸钠干燥，然后旋干得到((反式)-叔丁基(4-((3-氨基-5-氨基甲酰吡啶-2-基)氨基)丁基-2-烯-1-基)氨基甲酸酯(化合物24f)的白色固体320mg，收率62％。
MS(ESI)m/z＝322[M+H]+。
步骤5：(反式)-叔丁基(4-(6-氨基甲酰-2-(1-乙基-3-甲基-1氢-吡唑-5-甲酰胺)-3氢-咪唑[4,5-并]吡啶-3-基)丁基-2-烯-1-基)氨基甲酸酯(化合物24g)的合成
在冰浴下，将1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰基异硫氰酸酯(193mg，0.99mmol)加入化合物24f(320mg，0.99mmol)的DMF(10mL)中，并于室温下搅拌0.5h，然后HATU(376mg，0.99mmol)和N,N-二异丙基乙胺(130mg，1.00mmol)加入反应液，继续室温搅拌3h，反应液用水稀释，过滤收集产生的白色固体，并用水(5mL×3)洗涤，然后柱层析分离(洗脱剂乙腈/水＝1/3,v/v)得到(反式)-叔丁基(4-(6-氨基甲酰-2-(1-乙基-3-甲基-1氢-吡唑-5-甲酰胺)-3氢-咪唑[4,5-并]吡啶-3-基)丁基-2-烯-1-基)氨基甲酸酯(化合物24g)392mg，白色固体，收率82％。
MS(ESI)m/z＝483[M+H]+。
步骤6：(反式)-3-(4-氨基丁酸-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1氢-吡唑-5-氨基甲酰)-3氢-咪唑[4,5-并]吡啶-6-氨基甲酸酯(化合物24h)的合成
化合物24g(392mg，0.81mmol)溶解在二氯甲烷(10mL)中，三氟乙酸(5mL)逐滴加入。反应液室温搅拌30分钟后。旋干反应液，得到化合物(反式)-3-(4-氨基丁酸-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1氢-吡唑-5-氨基甲酰)-3氢-咪唑[4,5-并]吡啶-6-氨基甲酸酯(化合物24h)307mg，浅黄色固体，收率99％。
MS(ESI)m/z＝383[M+H]+。
步骤7：(反式)-3-(4-((4-氨基甲酰基-2-硝基苯基)氨基)正丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1氢-吡唑-5-氨基甲酰基)-3氢-咪唑[4,5-并]吡啶-6-氨基甲酸酯(化合物24i)的合成
4-氟-3-硝基苯甲酰胺(158mg,0.85mmol)和DIPEA(330mg,4.93mmol)加入化合物2h(198mg,0.51mmol)的二甲亚砜(6mL)溶液中,反应混合液升温至50℃并在此温度下搅拌过夜，降温至室温后不做任何处理直接反相柱层析分离(洗脱剂：乙腈/水＝30/70，v/v)得到(反式)-3-(4-((4-氨基甲酰基-2-硝基苯基)氨基)正丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1氢-吡唑-5-氨基甲酰基)-3氢-咪唑[4,5-并]吡啶-6-氨基甲酸酯(化合物24i)264mg，浅黄色固体，收率93％。
MS(ESI)m/z＝547[M+H]+。
步骤8：(反式)-3-(4-((2-氨基-4-氨基甲酰苯基)氨基)正丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1氢-吡唑-5-氨基甲酰基)-3氢-咪唑[4,5-并]吡啶-6-氨基甲酸酯(化合物24j)的合成
向化合物24i(300mg,0.47mmol)的甲醇(10mL)溶液中加入乙酸(2mL)和铁粉(135mg，2.41mmol)，反应混合液升温至60℃，搅拌反应2h。反应结束，旋蒸除去反应液中的甲醇得到粗品，所得粗品用反相柱层析(洗脱剂：乙腈/水＝50/50，v/v)分离得到(反式)-3-(4-((2-氨基-4-氨基甲酰苯基)氨基)正丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1氢-吡唑-5-氨基甲酰基)-3氢-咪唑[4,5-并]吡啶-6-氨基甲酸酯(化合物24j)150mg，白色固体，收率60％。
MS(ESI)m/z＝517[M+H]+。
步骤9：(反式)-3-(4-(5-氨基甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1氢-吡唑-5-甲酰胺)-1氢-苯[并]咪唑-1-基)正丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1氢-吡唑-5-甲酰胺)-3氢-咪唑[4,5-并]吡啶-6-氨基甲酸酯(化合物24)的合成
在冰浴下，将1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰基异硫氰酸酯(50mg，0.29mmol)加入化合物24j(150mg，0.29mmol)的DMF(2mL)溶液中，搅拌反应0.5h，然后依次加入HATU(110mg，0.29mmol)和N,N-二异丙基乙胺(67mg，0.512mmol)，得到的反应混合液室温下继续搅拌3h。反应液经反相HPLC分离纯化得到(反式)-3-(4-(5-氨基甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1氢-吡唑-5-甲酰胺)-1氢-苯[并]咪唑-1-基)正丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1氢-吡唑-5-甲酰胺)-3氢-咪唑[4,5-并]吡啶-6-氨基甲酸酯(实施例化合物24)12.60mg，白色固体，收率6％。
MS(ESI)m/z＝678[M+H]+
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)8.72(d,1H),8.15(s,1H),8.13(d,1H),7.97(d,1H),7.94(s,1H),7.72(dd,1H),7.54(s,1H),7.45(d,1H),7.34(s,1H),6.55(d,2H),5.97～6.04(m,1H),5.845.91(m,1H),4.82(dd,2H),4.49～4.56(m,6H),2.12(s,6H),1.26～1.30(m,6H)。
实施例25
步骤1：(反式)-叔丁基(4-(4-氨基甲酰-2-氧杂环丁烷氧基-6-硝基苯基)氨基)正丁-2-烯基)氨基甲酸酯(化合物25b)的合成
室温下将4-氯-3-氧杂环丁烷氧基-5-硝基苯酰胺(468mg，1.72mmol)和(4-氨基丁-2-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯(422mg，1.90mmol)溶解在正丁醇(10mL)中，DIPEA(445mg，3.40mmol)滴入反应液。反应混合液升温至115℃,并在此温度下搅拌过夜。冷却至室温后，加水稀释，乙酸乙酯萃取，经柱层析分离(石油醚：乙酸乙酯＝5:1-3:1，v/v)得(反式)-叔丁基(4-(4-氨基甲酰-2--氧杂环丁氧基-6-硝基苯基)氨基)正丁-2-烯基)氨基甲酸酯(化合物25b)420mg，黄色固体，收率57.8％。
MS(ESI)m/z＝445[M+Na]+。
步骤2：(反式)-叔丁基(4-((2-氨基-4-氨基甲酰-6-氧杂环丁烷氧苯基)氨基)正丁-2-烯基)氨基甲酸酯(化合物25c)的合成
将化合物25b(210mg，0.5mmol)溶解于甲醇(10mL)，溶清液冷却到0℃，然后依次加入氨水(0.8mL，5.0mmol)，连二亚硫酸钠(435mg，2.5mmol)水溶液(4mL)，在0℃下搅拌反应1h。反应液旋除甲醇，然后加水稀释，加乙酸乙酯萃取(20mL×4)，分离得到的有机相用饱和食盐水洗(20mL×2)，无水硫酸钠干燥，然后旋干得到(反式)-叔丁基(4-((2-氨基-4-氨基甲酰-6氧杂环丁烷氧苯基)氨基)正丁-2-烯基)氨基甲酸酯(化合物25c)的白色固体140mg，收率72％。
MS(ESI)m/z＝393[M+H]+。
步骤3：(反式)-叔丁基(4-(5-氨基甲酰-2-(1-乙基-3-甲基-1氢-吡唑-5甲酰胺)-7-氧杂环丁烷氧基-1H-苯并咪唑基)正丁2-烯基)氨基甲酸酯(化合物25d)的合成
将化合物25c(140mg，0.357mmol)和1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰基异硫氰酸酯(70mg,0.357mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，并于室温下搅拌1h,然后HATU(190mg,0.5mmol)和DIPEA(65mg,0.5mmol)加入反应液,继续室温搅拌1h,反应液用水稀释，乙酸乙酯萃取，然后柱层析分离(乙腈/水＝1/3,v/v)得到(反式)-叔丁基(4-(5-氨基甲酰-2-(1-乙基-3-甲基-1氢-吡唑-5甲酰胺)-7-氧杂环丁氧基-1H-苯并咪唑基)正丁2-烯基)氨基甲酸酯(化合物25d)150mg，白色固体，收率77％。
MS(ESI)m/z＝554[M+H]+。
步骤4：(反式)-1-(4-氨基正丁-2-烯基)-2-(1-乙基-3-甲基-1氢-吡唑-5-甲酰胺基)-7-氧杂环丁烷氧基-1氢-苯并咪唑-5-甲酰胺(化合物25e)的合成
化合物25d(150mg，0.27mmol)溶解在二氯甲烷(5mL)中，三氟乙酸(3mL)逐滴加入。反应液室温搅拌1h。旋干反应液，得到化合物(反式)-1-(4-氨基正丁-2-烯基)-2-(1-乙基-3-甲基-1氢-吡唑-5-甲酰胺基)-7-氧杂环丁烷氧基-1氢-苯并咪唑-5-甲酰胺(化合物25e)粗品120mg，直接用于下步反应。
MS(ESI)m/z＝454[M+H]+。
步骤5：(反式)-1-(6-((3-烟酸甲酯基-5-硝基吡啶)氨基)正丁-2-烯基)-2-(1-乙基-3-甲基-1氢-吡唑-5-甲酰胺基)-7-氧杂环丁烷氧基-1氢-苯并咪唑-5-甲酰胺(化合物25f)
向化合物25e(120mg,0.26mmol)的二甲基亚砜(5mL)溶液中,依次加入DIPEA(110mg,0.92mmol)和6-氯-5-硝基烟酸甲酯(58mg,0.27mmol)，加热至40℃反应过夜，反应结束，冷却至室温，加水有白色固体析出，打浆过滤得到(反式)-1-(6-((3-烟酸甲酯基-5-硝基吡啶)氨基)正丁-2-烯基)-2-(1-乙基-3-甲基-1氢-吡唑-5-甲酰胺基)-7-氧杂环丁烷氧基-1氢-苯并咪唑-5-甲酰胺(化合物25f)150mg，浅黄色固体，收率91％。
MS(ESI)m/z＝634[M+H]+。
步骤6：(反式)-1-(6-((3-烟酸甲酯基-5-氨基吡啶)氨基)正丁-2-烯基)-2-(1-乙基-3-甲基-1氢-吡唑-5-甲酰胺基)-7-氧杂环丁烷氧基-1氢-苯并咪唑-5-甲酰胺(化合物25g)
向化合物25f(120mg,0.26mmol)的甲醇(8.5mL)溶液中加入乙酸(1.5mL)和铁粉(36mg，0.65mmol)，反应混合液升温至60℃，搅拌反应2h。反应结束，旋蒸除去反应液中的甲醇，用乙酸乙酯萃取得(反式)-1-(6-((3-烟酸甲酯基-5-氨基吡啶)氨基)正丁-2-烯基)-2-(1-乙基-3-甲基-1氢-吡唑-5-甲酰胺基)-7-氧杂环丁烷氧基-1氢-苯并咪唑-5-甲酰胺(化合物25g)95mg，白色固体，收率83％。
MS(ESI)m/z＝604[M+H]+。
步骤7：(反式)-1-(6-(3-烟酸甲酯基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-吡啶)-1氢-咪唑-5-甲酰胺)-7-氧杂环丁烷氧基-1氢-苯并咪唑-5-甲酰胺(化合物25h)的合成
化合物25g(95mg，0.16mmol)和化合物1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰基异硫氰酸酯(30.7mg，0.16mmol)混溶于DMF(2mL)中，室温下搅拌1h，然后依次加入HATU(60.8mg，0.16mmol)和DIPEA(25.8mg，0.2mmol)，得到的反应混合液室温下继续搅拌2h。旋干溶剂得到的粗品，经反相HPLC分离纯化得到(反式)-1-(6-(3-烟酸甲酯基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-吡啶)-1氢-咪唑-5-甲酰胺)-7-氧杂环丁烷氧基-1氢-苯并咪唑-5-甲酰胺(化合物25h)86mg,白色固体，收率70％。
MS(ESI)m/z＝765[M+H]+。
步骤8：(反式)-1-(6-(3-羧酸-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-吡啶)-1氢-咪唑-5-甲酰胺)-7-氧杂环丁烷氧基-1氢-苯并咪唑-5-甲酰胺(化合物25i)的合成
化合物25h(86mg,0.11mmol)溶于THF(2mL)与甲醇(2mL)的混合溶剂中，室温下加入氢氧化锂(9mg,0.22mmol)的水溶液，加完室温搅拌1h，反应液经加1N的盐酸调pH后析出固体，抽滤，滤饼用水洗后干燥得到(反式)-1-(6-(3-羧酸-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-吡啶)-1氢-咪唑-5-甲酰胺)-7-氧杂环丁烷氧基-1氢-苯并咪唑-5-甲酰胺(化合物25i)60mg,白色固体，收率73％。
MS(ESI)m/z＝751[M+H]+。
步骤9：(反式)-1-(6-(3-氨基甲酰-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-吡啶)-1氢-咪唑-5-甲酰胺)-7-氧杂环丁烷氧基-1氢-苯并咪唑-5-甲酰胺(化合物25)的合成
冰浴下，HATU(30.4mg，0.08mmol)加入到化合物25i(60mg,0.08mmol)的DMF(5mL)溶液中，搅拌0.2h，然后依次加入氯化铵(8.56mg,0.16mmol)和N,N-二异丙基乙胺(20.64mg，0.16mmol)，得到的反应混合液室温下继续搅拌3h。旋干溶剂得到的粗品，经反相HPLC分离纯化得到(反式)-1-(6-(3-氨基甲酰-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-吡啶)-1氢-咪唑-5-甲酰胺)-7-氧杂环丁烷氧基-1氢-苯并咪唑-5-甲酰胺(实施例化合物25)36mg,白色固体，收率60％。
MS(ESI)m/z:750[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.87(s,2H),8.71(s,1H),8.15(d,2H),7.95(s,1H),7.68(s,1H),7.54(s,1H),7.38(s,1H),6.90(d,1H),6.55(d,2H),5.96～5.87(m,2H),5.35(t,1H),5.00(d,2H),4.84～4.80(m,4H),4.56～4.46(m,6H),2.13(s,6H),1.30～1.25(m,6H)。
以下用实验例的方式说明本发明的有益效果：
实验例1：蛋白质热转移实验(TSA)
用TSA实验进行化合物同Sting蛋白的结合测定，在20mM Hepes,150mM NaCl,1mMMgCl2,1mM DTT,pH＝7.5缓冲液中将100ug/ml Sting蛋白同不同浓度的化合物及5X SYPROOrange染料混合，在qPCR仪上测定蛋白的溶解曲线，用Protein Thermal Shift Software1.3软件拟合Tm值，计算加入不同浓度化合物和未加入化合物时蛋白的Tm差值，根据ΔTm随化合物浓度变化拟合Kd。本发明实施例1化合物最大右移ΔTm为9.6℃。
试验结果说明，本发明化合物与STING能发生相互作用，可能用于制备调节STING活性相关的疾病的药物。
实验例2：细胞实验
本实验通过检测化合物刺激人外周血单核细胞系THP1细胞(上海细胞库)产生的CXCL10(IP10)细胞因子变化来评价sting激动剂的功能。实验第一天按IP10ELISA检测试剂盒(BD,#550926)说明书包被ELISA板。取化合物DMSO溶解成储液，并用培养基稀释成2X工作浓度，加入96孔板，每孔100μL；取对数生长期的THP1细胞计数，并稀释成2*106/mL浓度，加入上述含化合物的96孔板中，每孔100μL，混匀，于37℃，5％CO2培养箱中培养18小时。第二天取上述细胞培养上清，每孔100uL，按IP10ELISA检测试剂盒(BD,#550926)说明书进行检测，读取OD450值，根据标准曲线换算成IP10浓度，并用GraphPad 5.0拟合剂效曲线计算EC50值。本发明实施例化合物能强烈地刺激THP-1释放CXCL-10，EC50值小于10μM。
试验结果说明，本发明制备的化合物对STING具有激活作用，能够用于制备激活STING或与STING活性相关的疾病的药物。
实验例3：动物实验
本实验通过CT-26结肠癌同系小鼠模型进行化合物药效评价。将CT-26结肠癌细胞接种于Balb/C小鼠，当肿瘤体积达到100mm3后的第1，第4，第7天依次使用实施例2制备的化合物进行三次瘤内给药。每组的给药剂量分别为0.01mg每只小鼠，0.03mg每只小鼠，0.1mg每只小鼠。在治疗开始时进行肿瘤体积的测量。在给药开始后，小鼠肿瘤逐渐消退至完全消失。结果如图1所示。
本实验通过CT-26结肠癌同系小鼠模型进行化合物药效评价。将CT-26结肠癌细胞接种于Balb/C小鼠，当肿瘤体积达到100mm3后的每两天使用1mg/kg实施例2制备的化合物进行腹腔给药，ML-RR-S2CDA作为对照。在治疗开始时进行肿瘤体积的测量。在给药开始后，小鼠肿瘤增长速度变慢，在第29天，肿瘤生长抑制作用为89％。结果如图2所示，图中ADU-S100为Aduro Biotech的临床化合物。
动物试验结果说明本发明制备的化合物对肿瘤具有抑制作用。
综上，本发明公开了式Ⅰ所示化合物，并公开了该化合物在制备治疗与STING活性相关的疾病的药物中的用途，具体为在制备治疗炎性、变应性、自身免疫性疾病、感染性疾病、癌症或癌前期综合征的药物中的用途，以及在制备免疫佐剂中的用途。为临床上筛选和/或制备与STING活性相关的疾病的药物提供了一种新的选择。

Claims (21)

1.式Ⅰ所示的化合物、或其立体异构体、或其药学上可接受的盐、或其溶剂合物、或其前体药物、或其代谢产物：
其中，
X1、X2、X3、X4、X1’、X2’、X3’、X4’分别独自选自C或N；
B环选自
C环选自被0～4个R5’任选取代的苯环、被0～4个R5’任选取代的5～6元芳杂环；
R4、R4’分别独立地选自氢、C1～C6烷基、卤素；
R5、R6、R7分别独立地选自氢、C1～C6烷基、卤素取代的C1～C6烷基；
R1、R2、R3、R1’、R2’、R3’、R5’分别独自选自氢、-ORd、-NRdRe、卤素、-CN、C(O)ORd、C1～C6烷基、卤素取代的C1～C6烷基、-C(O)NRaRb或无；
Ra、Rb、Rd、Re分别独立地选自氢、C1～C6烷基；
L选自被0～4个Rn任选取代的C4～C6的亚烷基、被0～4个Rn任选取代的C4～C6的亚烯基、被0～4个Rn任选取代的C4～C6的亚炔基；其中，任选取代的C4～C6的亚烷基、任选取代的C4～C6的亚烯基、任选取代的C4～C6的亚炔基中的碳原子可被-O-、-S-、-NRm-取代；
Rm选自氢、C1～C6烷基；
Rn选自卤素、羟基、氨基、C1～C6烷基、C1～C6烷氧基、C1～C6烷氨基、卤素取代的C1～C6烷基；
当X1、X2、X3、X4、X1’、X2’、X3’、X4’中至少有一个N时：
Rs、Rt分别独自选自氢、卤素、被0～4个Rh任选取代的C1～C6烷基、-ORf、-NRfRg、-C(O)Rf、-CO2Rf、-C(O)NRfRg、-NRfC(O)Rg或无；
当X1、X2、X3、X4、X1’、X2’、X3’、X4’中都为C时：
Rt选自氢、卤素、被0～4个Rh任选取代的C1～C6烷基、-ORf、-NRfRg、-C(O)Rf、-CO2Rf、-C(O)NRfRg、-NRfC(O)Rg或无；
Rs选自当m为0时，A环选自被0～4个Rc任选取代的3～6元环烷基、被0～4个Rc任选取代的3～6元杂环烷基；当m为1、2、3、4、5、6时，A环选自被0～4个Rc任选取代的3～6元环烷基、被0～4个Rc任选取代的4元杂环烷基；
Rc独立地选自氢、-ORd、-NRdRe、卤素、＝O、C1～C6烷基、-C(O)ORd；
Rf、Rg分别独立地选自氢、被0～4个Rh任选取代的C1～C6烷基、被0～4个Ri任选取代的苯环、被0～4个Ri任选取代的5～6元芳杂环、被0～4个Ri任选取代的3～6元环烷基、被0～4个Ri任选取代的3～6元杂环烷基；
Rh选自卤素、-ORj、-NRjRk、-C(O)Rj、-CO2Rj、-C(O)NRjRk、-NRjC(O)Rk、被0～4个Ri任选取代的苯环、被0～4个Ri任选取代的5～6元芳杂环、被0～4个Ri任选取代的3～6元环烷基、被0～4个Ri任选取代的3～6元杂环烷基；
Ri选自卤素、羟基、氨基、C1～C6烷基、C1～C6烷氧基、C1～C6烷氨基、卤素取代的C1～C6烷基、氰基；
Rj、Rk分别独立地选自氢、C1～C6烷基。
2.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于：所述化合物如式II所示：
其中，
X1’、X2’、X3’、X4’中至少有一个N；
B环选自C环选自
R15、R16、R17、R15’、R16’、R17’分别独立地选自氢、C1～C6烷基、卤素取代的C1～C6烷基；
R14、R14’分别独立地选自氢、C1～C6烷基；
R11、R13分别独自选自氢、-ORd、卤素、-CN、C(O)ORd、C1～C6烷基；
R11’、R13’分别独自选自氢、-ORd、卤素、-CN、C(O)ORd、C1～C6烷基或无；
R12选自氢、-C(O)NRaRb；
R12’选自氢、-C(O)NRaRb或无；
Ra、Rb、Rd分别独立地选自氢、C1～C6烷基；
Rt1选自氢、C1～C6烷基；
Rf选自氢、被0～4个Rh任选取代的C1～C6烷基、被0～4个Ri任选取代的苯环、被0～4个Ri任选取代的5～6元芳杂环、被0～4个Ri任选取代的3～6元环烷基、被0～4个Ri任选取代的3～6元杂环烷基；
Rh选自卤素、-ORj、-NRjRk、-C(O)Rj、-CO2Rj、-C(O)NRjRk、-NRjC(O)Rk、被0～4个Ri任选取代的苯环、被0～4个Ri任选取代的5～6元芳杂环、被0～4个Ri任选取代的3～6元环烷基、被0～4个Ri任选取代的3～6元杂环烷基；
Ri选自卤素、羟基、氨基、C1～C6烷基、C1～C6烷氧基、C1～C6烷氨基、卤素取代的C1～C6烷基、氰基；
Rj、Rk分别独立地选自氢、C1～C6烷基；
L选自C4～C6的亚烯基。
3.根据权利要求2所述的化合物，其特征在于：所述式II所示化合物为：
4.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于：所述化合物如式III所示：
其中，
B环选自
C环选自被0～4个R5’任选取代的苯环、被0～4个R5’任选取代的5～6元芳杂环；
R21、R23、R24、R25、R26、R27分别独立地选自氢、C1～C6烷基；
R22选自-C(O)NRaRb、-C(O)ORd；
R21’、R23’、R5’分别独立地选自氢、-ORd、-NRdRe、卤素、C1～C6烷基；
R24’选自氢、C1～C6烷基；
Ra、Rb、Rd、Re分别独立地选自氢、C1～C6烷基；
R22’选自氢、-ORd、-NRdRe、卤素、-CN、C(O)ORd、C1～C6烷基、-C(O)NRaRb；
Rt2选自氢、卤素、被0～4个Rh任选取代的C1～C6烷基、-ORf、-NRfRg、-C(O)Rf、-C(O)ORf、-CONRfRg、-NRfCORg；
Rf、Rg分别独立地选自氢、被0～4个Rh任选取代的C1～C6烷基、被0～4个Ri任选取代的苯环、被0～4个Ri任选取代的5～6元芳杂环、被0～4个Ri任选取代的3～6元环烷基、被0～4个Ri任选取代的3～6元杂环烷基；
Rh选自卤素、-ORj、-NRjRk、-CORj、-CO2Rj、-CONRjRk、-NRjCORk、被0～4个Ri任选取代的苯环、被0～4个Ri任选取代的5～6元芳杂环、被0～4个Ri任选取代的3～6元环烷基、被0～4个Ri任选取代的3～6元杂环烷基；
Ri选自卤素、羟基、氨基、C1～C6烷基、C1～C6烷氧基、C1～C6烷氨基、卤素取代的C1～C6烷基、氰基；
Rj、Rk分别独立地选自氢、C1～C6烷基；
L选自被0～4个Rn任选取代的C4～C6的亚烷基、被0～4个Rn任选取代的C4～C6的亚烯基、被0～4个Rn任选取代的C4～C6的亚炔基；其中任选取代的C4～C6的亚烷基、任选取代的C4～C6的亚烯基、任选取代的C4～C6的亚炔基中的碳原子可被-O-、-S-、-NRm-取代；
Rm选自氢、C1～C6烷基；
Rn选自卤素、羟基、氨基、C1～C6烷基、C1～C6烷氧基、C1～C6烷氨基、卤素取代的C1～C6烷基。
5.根据权利要求4所述的化合物，其特征在于：
R21、R23、R24、R27分别独立地选自氢；
R25、R26分别独立地选自C1～C6烷基；
Ra、Rb分别独立地选自氢；
C环选自
s为0、1、2、3；
R21’、R23’、R5’分别独立地选自氢、C1～C6烷基；
R24’选自氢；
R22’选自-C(O)NRaRb；
Rt2选自氢、-ORf；
Rf选自被0～4个Rh任选取代的C1～C6烷基、被0～4个Ri任选取代的3～6元环烷基、被0～4个Ri任选取代的3～6元杂环烷基；
Rh选自被0～4个Ri任选取代的3～6元环烷基、被0～4个Ri任选取代的3～6元杂环烷基；
Ri选自卤素、羟基、氨基、C1～C6烷基、C1～C6烷氧基、C1～C6烷氨基、卤素取代的C1～C6烷基、氰基；
L选自0～4个Rn任选取代的C4～C6的亚烷基、被0～4个Rn任选取代的C4～C6的亚烯基；
Rn选自卤素、羟基、氨基、C1～C6烷基、C1～C6烷氧基、C1～C6烷氨基、卤素取代的C1～C6烷基。
6.根据权利要求5所述的化合物，其特征在于：所述化合物如式IIIa所示：
其中，
R21、R23、R24、R27分别独立地选自氢；
R25、R26分别独立地选自C1～C6烷基；
R22’选自-C(O)NRaRb；
Ra、Rb分别独立地选自氢；
X选择-C-、-O-、-NRz-、-S-；
Rz选自氢、C1～C6烷基；
m为0、1、2、3、4、5、6；
n为1、2、3、4；
p为0、1、2、3、4。
7.根据权利要求6所述的化合物，其特征在于：所述式IIIa所示化合物为：
8.根据权利要求5所述的化合物，其特征在于：所述化合物如式IIIb所示：
其中，
R21、R23、R24、R27分别独立地选自氢；
R25、R26分别独立地选自C1～C6烷基；
Ra、Rb分别独立地选自氢。
9.根据权利要求8所述的化合物，其特征在于：所述式IIIb所示化合物为：
10.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于：所述化合物如式Ⅳ所示：
其中，
B环选自
当m为0时，A环选自被0～4个Rc任选取代的3～6元环烷基、被0～4个Rc任选取代的3～6元杂环烷基；
当m为1、2、3、4、5、6时，A环选自被0～4个Rc任选取代的3～6元环烷基、被0～4个Rc任选取代的4元杂环烷基；
R31、R33、R34分别独立地选自氢、卤素、C1～C6烷基；
R35、R36、R37分别独立地选自氢、C1～C6烷基；
R32选自-CONRaRb；
Ra、Rb分别独立地选自氢、C1～C6烷基；
Rc分别独立地选自氢、-ORd、-NRdRe、卤素、＝O、C1～C6烷基、-C(O)ORd；
Rd、Re分别独立地选自氢、C1～C6烷基；
C环选自被0～4个R5’任选取代的苯环、被0～4个R5’任选取代的5～6元芳杂环；
R31’、R33’、R5’分别独立地选自氢、-ORd、-NRdRe、卤素、C1～C6烷基；
R34’选自氢、C1～C6烷基；
R32’选自氢、-ORd、-NRdRe、卤素、-CN、C(O)ORd、C1～C6烷基、-C(O)NRaRb；
Rt3选自氢、卤素、被0～4个Rh任选取代的C1～C6烷基、-ORf、-NRfRg、-C(O)Rf、-CO2Rf、-C(O)NRfRg、-NRfC(O)Rg；
Rf、Rg分别独立地选自氢、被0～4个Rh任选取代的C1～C6烷基、被0～4个Ri任选取代的苯环、被0～4个Ri任选取代的5～6元芳杂环、被0～4个Ri任选取代的3～6元环烷基、被0～4个Ri任选取代的3～6元杂环烷基；
Rh选自卤素、-ORj、-NRjRk、-C(O)Rj、-CO2Rj、-C(O)NRjRk、-NRjC(O)Rk、被0～4个Ri任选取代的苯环、被0～4个Ri任选取代的5～6元芳杂环、被0～4个Ri任选取代的3～6元环烷基、被0～4个Ri任选取代的3～6元杂环烷基；
Ri选自卤素、羟基、氨基、C1～C6烷基、C1～C6烷氧基、C1～C6烷氨基、卤素取代的C1～C6烷基、氰基；
Rj、Rk分别独立地选自氢、C1～C6烷基；
L选自被0～4个Rn任选取代的C4～C6的亚烷基、被0～4个Rn任选取代的C4～C6的亚烯基、被0～4个Rn任选取代的C4～C6的亚炔基；其中任选取代的C4～C6的亚烷基、任选取代的C4～C6的亚烯基、任选取代的C4～C6的亚炔基中的碳原子可被-O-、-S-、-NRm-取代；
Rm选自氢、C1～C6烷基；
Rn选自卤素、羟基、氨基、C1～C6烷基、C1～C6烷氧基、C1～C6烷氨基、卤素取代的C1～C6烷基。
11.根据权利要求10所述的化合物，其特征在于：
R31、R33、R34分别独立地选自氢、卤素；
R37独立地选自氢；
R35、R36分别独立地选自C1～C6烷基；
Ra、Rb分别独立地选自氢；
A环选自被0～4个Rc任选取代的3～6元环烷基、4元杂环烷基；
C环选自
s为0、1、2、3；
R31’、R33’、R35’分别独立地选自氢、卤素、C1～C6烷基；
R34’选自氢；
R32’选自-NRdRe、-C(O)NRaRb；
Rt3选自氢、-ORf；
Rf选自被0～4个Rh任选取代的C1～C6烷基、被0～4个Ri任选取代的3～6元环烷基、被0～4个Ri任选取代的3～6元杂环烷基；
Rh选自-ORj、被0～4个Ri任选取代的3～6元环烷基、被0～4个Ri任选取代的3～6元杂环烷基；
L选自0～4个Rn任选取代的C4～C6的亚烷基、被0～4个Rn任选取代的C4～C6的亚烯基。
12.根据权利要求11所述的化合物，其特征在于：所述化合物如式Ⅳa所示：
其中，
R31、R33、R34、R37分别独立地选自氢；
R35、R36分别独立地选自C1～C6烷基；
Ra、Rb分别独立地选自氢；
m为0、1、2、3、4、5、6；
n为0、1、2、3；
p为0、1、2、3、4；
Rc分别独立地选自氢、-ORd、-NRdRe、卤素、＝O、C1～C6烷基、-C(O)ORd；
Rd、Re分别独立地选自氢、C1～C6烷基。
13.根据权利要求12所述的化合物，其特征在于：所述式Ⅳa所示化合物为：
14.根据权利要求11所述的化合物，其特征在于：所述化合物如式Ⅳb所示：
其中，
R31、R33、R34分别独立地选自氢、卤素；
R37独立地选自氢；
R35、R36分别独立地选自C1～C6烷基；
Ra、Rb分别独立地选自氢；
X选择-O-、-NRy-、-S-；
NRy选自氢、C1～C6烷基；
当m为0时，n和q相加为2、3、4；
当m为1、2、3、4、5、6时，n和q相加为2；
p为0、1、2、3、4；
Rc分别独立地选自氢、-ORd、-NRdRe、卤素、＝O、C1～C6烷基；
Rd、Re分别独立地选自氢、C1～C6烷基。
15.根据权利要求14所述的化合物，其特征在于：所述式Ⅳb所示化合物为：
16.权利要求1～15任一项所述的化合物、或其立体异构体、或其药学上可接受的盐、或其溶剂合物、或其前体药物、或其代谢产物在制备激活STING类药物中的用途。
17.权利要求1～15任一项所述的化合物、或其立体异构体、或其药学上可接受的盐、或其溶剂合物、或其前体药物、或其代谢产物在制备治疗与STING活性相关的疾病的药物中的用途。
18.根据权利要求17所述的用途，其特征在于：所述与STING活性相关的疾病是与炎性、自身免疫性疾病、感染性疾病、癌症、癌前期综合征相关的疾病中的一种或几种。
19.权利要求1～15任一项所述的化合物、或其立体异构体、或其药学上可接受的盐、或其溶剂合物、或其前体药物、或其代谢产物在制备治疗炎性、自身免疫性疾病、感染性疾病、癌症或癌前期综合征的药物中的用途。
20.权利要求1～15任一项所述的化合物、或其立体异构体、或其药学上可接受的盐、或其溶剂合物、或其前体药物、或其代谢产物在制备免疫佐剂中的用途。
21.一种药物，其特征在于：它是以权利要求1～15任一项所述的化合物、或其立体异构体、或其药学上可接受的盐、或其溶剂合物、或其前体药物、或其代谢产物，加上药学上可接受的辅料制备而成的制剂。
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