CN112521371B - 杂环酰胺类化合物、其可药用的盐及其制备方法和用途 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了具有通式(I)的杂环酰胺类化合物、其可药用的盐，还公开了式I所示化合物及其可药用的盐的制备方法，并公开了该化合物在制备治疗与STING活性相关的疾病的药物中的用途、在制备免疫佐剂中的用途、在制备激活STIGN药物中的用途。为临床上筛选和/或制备与STING活性相关的疾病的药物提供了一种新的选择。

Description

杂环酰胺类化合物、其可药用的盐及其制备方法和用途
技术领域
本发明涉及杂环酰胺类化合物、其可药用的盐及其制备方法和用途。
背景技术
近年来，免疫疗法的出现显示出改变癌症治疗方法的潜力。通过免疫检查点阻断释放抗肿瘤T细胞反应，在无法治疗的肿瘤中产生了显著的反应。扩大免疫治疗方法有效性的主要领域之一是要找到能够免疫免疫地转变“冷”到肿瘤“热”的方法，并因此克服局部免疫抑制机制，增加免疫检查等方法的有效性。这些类型的方法包括使用免疫刺激性单克隆抗体(例如抗-OX40，一种激动性单克隆抗体针对受体OX40或BB1，靶向 CD74)直接刺激T细胞活性和溶瘤病毒，它可以选择性地和特异性地裂解肿瘤细胞，建立炎症微环境。局部免疫刺激的一个策略是激活STING通路，这是一个关键的传感系统，它允许先天免疫系统对感染和肿瘤生长做出反应，协调免疫反应。
在细胞质中，环GMP-AMP合成酶(cGAS)与来自病原体or宿主受损细胞的dsDNA 结合，产生小分子配体，环GMP-AMP(cGAMP)。cGAMP与内质网(ER)上的STING 二聚体结合后，STING被SER/THR激酶--TANK-binding kinase 1(TBK1)磷酸化。磷酸化的STING招募了一个转录因子，干扰素调节因子3(IRF3)，并促进TBK1磷酸化IRF3，导致IRF3二聚化。IRF3二聚体后转移到细胞核，与IFN-β启动子结合，导致IFN-β和其他细胞因子的产生。
自2008年STING被发现以来，其被发现在感染疾病，癌症以及自身免疫性疾病中扮演重要角色。因此，STING逐步发展成为一个潜在的免疫疗法靶点。细菌CDN直接激活STING已通过X射线晶体学进行验证(Burdette DL et al.Nature Immunolog， 2013(14)：19-26)。已发现新的CDN信号转导分子cGAMP可激活STING，其与STING 的相互作用也已经通过X射线晶体学进行验证(Cai X et al.Molecular Cell， 2014(54)：289-296)。合成具有良好成药性的STING激动剂可以用来作为佐剂，抗肿瘤药物或者其他免疫疗法制剂。
发明内容
发明目的：本发明目的是提供杂环酰胺类化合物、其可药用的盐。
本发明另一目的是提供一种药物组合物。
本发明另一目的提供所述杂环酰胺类化合物、其可药用的盐的制备方法。
本发明最后一目的提供所述杂环酰胺类化合物、其可药用的盐的用途。
技术方案：本发明提供杂环酰胺类化合物、其可药用的盐，
Figure BDA0002207130760000021
其中，
A环选自
Figure BDA0002207130760000022
B环选自
Figure BDA0002207130760000023
R4、R4’分别选自氢、C1～C6烷基、卤素；
R5、R5’分别选自氢、C1～C6烷基、C3～C6环烷基、C3～C6炔烃基、C3～C6烯烃基、卤素取代的C1～C6烷基；
R6、R7分别选自氢、C1～C6烷基、硝基、卤素、卤素取代的C1～C6烷基，R6、R7及与R6、R7连接的原子三者之间环化成饱和或不饱和的4～6元碳环或杂环；
R6’、R7’分别选自氢、C1～C6烷基、硝基、卤素、卤素取代的C1～C6烷基，R6’、R7’及与R6’、R7’连接的原子三者之间环化成饱和或不饱和的4～6元碳环或杂环；
R1、R2、R3、R1’、R2’、R3’分别选自氢、-ORd、-NRdRe、卤素、CN、C(O)ORd、 C1～C6烷基、卤素取代的C1～C6烷基、-SO2NH2、-C(O)NRaRb；
Ra、Rb、Rd、Re分别选自氢、C1～C6烷基；
RA、RB分别选自氢、卤素、被0～4个Rh取代的C1～C6烷基、-ORf、-NRfRg、-C(O)Rf、 -CO2Rf、-C(O)NRfRg、-NRfC(O)Rg、-NRfC(O)Rg；
Rf、Rg分别选自氢、被0～4个Rh取代的C1～C6烷基、被0～4个Ri取代的3～6元环烷基、被0～4个Ri取代的3～6元杂环烷基；
Rh选自卤素、-ORj、-NRjRk、-C(O)Rj、-CO2Rk、-C(O)NRjRk、-NRjC(O)Rk、-NRjC(O)Rk、被0～4个Ri取代的3～6元环烷基、被0～4个Ri取代的3～6元杂环烷基；
Ri选自卤素、羟基、氨基、C1～C6烷基、C1～C6烷氧基、C1～C6烷氨基、卤素取代的 C1～C6烷基、氰基；
Rj、Rk分别选自氢、C1～C6烷基；
L选自被0～4个Rn取代的C4～C6的亚烷基、被0-4个Rn取代的C4～C6的亚烯基、被0～4个Rn取代的C4～C6的亚炔基；所述C4～C6的亚烷基、C4～C6的亚烯基、C4～C6的亚炔基中的碳原子被-O-、-S-、-NRm-取代；
Rm选自氢、C1～C6烷基；
Rn选自卤素、羟基、氨基、C1～C6烷基、C1～C6烷氧基、C1～C6烷氨基、卤素取代的C1～C6烷基。
进一步地，R4、R4’分别为氢；
R6、R7分别选自氢、C1～C6烷基，R6、R7及与R6、R7连接的原子三者之间环化成饱和或不饱和的4～6元碳环或杂环；
R6’、R7’分别独立地选自氢、C1～C6烷基，R6’、R7’及与R6’、R7’连接的原子三者之间环化成饱和或不饱和的4～6元碳环或杂环；
R1、R3分别选自氢、C1～C6烷基、-ORd；
R1’、R3’分别选自氢、C1～C6烷基、-ORd；
R2、R2’分别选自氢、-SO2NH2、-C(O)NRaRb；
Ra、Rb分别选自氢、C1～C6烷基；
Rd选自氢、C1～C6烷基、C3～C6环烷基、C3～C6炔烃基、C3～C6烯烃基、卤素取代的C1～C6烷基；
RA、RB分别选自氢、被0～4个Rh取代的C1～C6烷基、-ORf；
Rf自氢、被0～4个Rh取代的C1～C6烷基、被0～4个Ri取代的3～6元环烷基、被0～4个Ri取代的3～6元杂环烷基；
Rh选自卤素、-ORj、-NRjRk、-C(O)Rj、-CO2Rk、-C(O)NRjRk、-NRjC(O)Rk、-NRjC(O)Rk、被0～4个Ri取代的3～6元环烷基、被0～4个Ri取代的3～6元杂环烷基；
Ri选自卤素、羟基、氨基、C1～C6烷基；
Rj、Rk分别选自氢、C1～C6烷基；
L选自C4～C6的亚烯基、C4～C6的亚烷基。
进一步地，R4、R4’分别为氢；
R1、R3分别选自氢、C1～C6烷基；
R1’、R3’分别选自氢、C1～C6烷基；
R2、R2’分别选自氢、-SO2NH2、-C(O)NH2；
RA、RB分别为氢、-ORf，其中，Rf选自氢、被0～4个Rh任选取代的C1～C6烷基、被0～4个Ri任选取代的3～6元环烷基、被0～4个Ri任选取代的3～6元杂环烷基；
Rh选自卤素、-ORj、-NRjRk、-C(O)Rj、-CO2Rk、-C(O)NRjRk、-NRjC(O)Rk、-NRjC(O)Rk、被0～4个Ri取代的3～6元环烷基、被0～4个Ri取代的3～6元杂环烷基；
Ri选自卤素、羟基、氨基、C1～C6烷基；
Rj、Rk分别选自氢、C1～C6烷基。
进一步地，所述的具有通式(I)的杂环酰胺类化合物、其可药用的盐，为如下任一种：
Figure BDA0002207130760000041
Figure BDA0002207130760000051
一种药物组合物，其含有治疗有效量的一种或多种所述的具有通式(I)的杂环酰胺类化合物、其可药用的盐，及药学上可接受的载体。
一种药物组合物，其含有治疗有效量的一种或多种所述的具有通式(I)的杂环酰胺类化合物、其可药用的盐，及药学上可接受的辅料。
进一步地，所述的具有通式(I)的杂环酰胺类化合物、其可药用的盐的制备方法，包括如下步骤：
Figure BDA0002207130760000061
原料1a与单Boc保护的丁二胺或反式丁烯-1，4-二胺在正丁醇中N，N-二异丙基乙胺存在下，发生亲核取代反应生成化合物1b，在乙酸乙酯的盐酸溶液中脱去Boc保护生成中间体1c，后在正丁醇中N，N-二异丙基乙胺存在下发生取代反应生成中间体1d，中间体1d在甲醇中经连二亚硫酸钠还原生成化合物1e，然后与不同的异硫氰酸酯在 EDCI条件下缩合获得目标化合物。
具有通式(I)的杂环酰胺类化合物、其可药用的盐在制备免疫佐剂中的用途。
具有通式(I)的杂环酰胺类化合物、其可药用的盐在制备激活STING 药物中的用途。
具有通式(I)的杂环酰胺类化合物、其可药用的盐在制备治疗与STING 活性相关的疾病的药物中的用途，所述与STING 活性相关的疾病是与炎性、自身免疫性疾病、感染性疾病、癌症、癌前期综合征相关的疾病中的一种或几种。
本发明所定义的STING活性相关的疾病是STING在该疾病的病理发生中起重要作用的疾病。
STING活性相关的疾病包括炎性、变应性和自身免疫性疾病、感染性疾病、癌症、癌前期综合征。
本发明化合物用于治疗结肠癌、脑癌、乳腺癌、纤维肉瘤和鳞状细胞癌、黑素瘤、乳腺癌、结肠癌、肺癌和卵巢癌等癌症。
炎性疾病包括以组织病理性炎症为特征的多种病症。炎性疾病的例子包括寻常性痤疮、哮喘、腹腔疾病、慢性前列腺炎、肾小球肾炎、炎症性肠病、盆腔炎、再灌注损伤、类风湿性关节炎、结节病、血管炎、房尘螨引起的气道炎症和间质性膀胱炎。炎性疾病与自身免疫性疾病之间存在显著重叠。本发明的一些实施方案涉及炎性疾病哮喘的治疗。免疫系统通常涉及炎症性疾病，在过敏反应和一些肌病中都有表现，许多免疫系统疾病导致异常炎症。
本发明中的-C(O)NRaRb、-C(O)OR、-C(O)R、-NRC(O)R的-C(O)-表示由碳和氧两种原子通过双键链接而成的羰基(-C＝O-)。
有益效果：本发明本发明公开了式I所示化合物及其可药用的盐，并公开了该化合物在制备治疗与STING活性相关的疾病的药物中的用途、在制备免疫佐剂中的用途、激活STING 药物中的用途。为临床上筛选和/或制备与STING活性相关的疾病的药物提供了一种新的选择。
具体实施方式
化合物的结构通过核磁共振(1H-NMR)或质谱(MS)来确定。NMR测定是用BrukerAV-300型核磁共振仪，测定溶剂为氘代二甲亚砜(DMSO-D6)或氘代氯仿 (CDCl3)，TMS为内标。
本发明化合物的制备
中间体化合物1：1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-羰基异硫氰酸酯的合成
Figure BDA0002207130760000071
将1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-羧酸乙酯(1g，5.49mmol)溶于甲醇(10mL)和水(5mL)的混合溶液中。室温搅拌十分钟后，向上述反应液中加入氢氧化锂(0.263g，10.98mmol)。继续室温反应3小时，减压蒸馏除去甲醇，稀盐酸调PH至5-6，抽滤获得白色固体。未经纯化，直接用于下一步反应。
将1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-羧酸(0.8g，5.19mmol)溶于二氯甲烷(5mL)溶液中，滴入3滴N，N-二甲基甲酰胺，冰浴下搅拌十分钟后，向上述反应液中缓慢滴入二氯甲烷(5mL)稀释的草酰氯(0.527mL，6.23mmol)。冰浴下继续搅拌十分钟后，移除冰浴，室温反应两个小时。TLC监测反应完全后，减压蒸馏浓缩，残留物用于下一步反应。将硫氰酸钾(0.61g，6.26mmol)冰浴下溶于丙酮(10mL)溶液中，冰浴下搅拌十分钟，缓慢向上述反应液中滴入丙酮(5mL)稀释的残留物，冰浴下继续反应30分钟。TLC监测反应完成后，向上述反应液中加入正己烷(15mL)，减压蒸馏浓缩溶液体积至1/2，再加入正己烷(15mL)，减压蒸馏浓缩溶液体积至1/2，减压抽滤，收集滤液制砂，经柱层析分离纯化(石油醚∶乙酸乙酯＝6∶1)获得无色透明油状化合物为中间体化合物1。MS(ESI)m/z＝196[M+H]+；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.76(s，1H)，4.52 (s，2H)，2.32(s，3H)，1.42(s，3H).
中间体化合物2：1-炔丙基-3-甲基-1H-吡唑-5-羰基异硫氰酸酯的合成
Figure BDA0002207130760000081
操作过程和反应条件同中间体化合物1，不同的原料是1-炔丙基-3-甲基-1H-吡唑-5- 羧酸乙酯，MS(ESI)m/z＝206[M+H]+。
中间体化合物3：1-烯丙基-3-甲基-1H-吡唑-5-羰基异硫氰酸酯的合成
Figure BDA0002207130760000082
操作过程和反应条件同中间体化合物1，不同的原料是1-烯丙基-3-甲基-1H-吡唑-5- 羧酸乙酯，MS(ESI)m/z＝208[M+H]+。
中间体化合物4：1-(环丙基甲基)-3-甲基-1H-吡唑-5-羰基异硫氰酸酯的合成
Figure BDA0002207130760000083
操作过程和反应条件同中间体化合物1，不同的原料是1-(环丙基甲基)-3-甲基-1H- 吡唑-5-羧酸乙酯，MS(ESI)m/z＝222[M+H]+。
中间体化合物5：3-甲基-1-(2，2，2-三氟乙基)-1H-吡唑-5-羰基异硫氰酸酯的合成
Figure BDA0002207130760000084
操作过程和反应条件同中间体化合物1，不同的原料是3-甲基-1-(2，2，2-三氟乙基) -1H-吡唑-5-羧酸乙酯，MS(ESI)m/z＝250[M+H]+。
中间体化合物6：2-乙基-2，4，5，6-四氢环戊[c]吡唑-3-羰基异硫氰酸酯的合成
Figure BDA0002207130760000091
操作过程和反应条件同中间体化合物1，不同的原料是2-乙基-2，4，5，6-四氢环戊二烯并[c]吡唑-3-羧酸乙酯，MS(ESI)m/z＝222[M+H]+。
中间体化合物7：2-乙基-2，6-二氢-4H-呋喃并[3，4-c]吡唑-3-羰基异硫氰酸酯的合成
Figure BDA0002207130760000092
操作过程和反应条件同中间体化合物1，不同的原料是2-乙基-2，6-二氢-4H-呋喃并 [3，4-c]吡唑-3-羧酸乙酯，MS(ESI)m/z＝224[M+H]+。
中间体化合物8：2-乙基-5-甲基-2，4，5，6-四氢环戊[c]吡唑-3-羰基异硫氰酸酯的合成
Figure BDA0002207130760000093
操作过程和反应条件同中间体化合物1，不同的原料是2-乙基-5-甲基-2，4，5，6-四氢环戊二烯并[c]吡唑-3-羧酸乙酯，MS(ESI)m/z＝236[M+H]+。
中间体化合物9：4-氯-3-甲氧基-5-硝基苯甲酰胺的合成
Figure BDA0002207130760000094
将4-氯-3-甲氧基-5-硝基苯甲酸甲酯(4g，16.3mmol)分散于氨水(20mL)溶液中，升温至50℃，反应过夜。次日TLC监测反应完全后，抽滤，纯净水(10ml)洗涤，获得淡黄色固体为中间体化合物9。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.31(s，1H)，8.05(d， J＝2.1Hz，1H)，7.85(d，J＝21.0Hz，2H)，4.02(d，J＝2.1Hz，3H).
中间体化合物10：4-氯-3-羟基-5-硝基苯甲酰胺的合成
Figure BDA0002207130760000095
将4-氯-3-甲氧基-5-硝基苯甲酰胺(4g，8.67mmol)分散于二氯甲烷(30mL)溶液中，室温搅拌十分钟，缓慢向上述反应液中滴入1M/L的三溴化硼二氯甲烷溶液(52 mL，52mmol)，继续室温搅拌过夜。TLC监测反应完成后，将上述反应液缓慢滴入冰水(100mL)中，滴完后，继续搅拌两个小时，抽滤获得灰白色固体为中间体化合物 10。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ11.51(s，1H)，8.16(s，1H)，7.92(s，1H)，7.72(s，1H)， 7.65(s，1H).
中间体化合物11：3-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙氧基)-4-氯-5-硝基苯甲酰胺的合成
Figure BDA0002207130760000101
将4-氯-3-羟基-5-硝基苯甲酰胺(1g，4.62mmol)溶于N.N-二甲基甲酰胺(10mL)溶液中，然后向上述溶液中分别加入(3-溴丙氧基)(叔丁基)二甲基硅烷(1.29mL，5.54mmol)和碳酸钾(0.83g，6.0mmol)，室温搅拌十分钟后，转移至油浴升温至80℃，反应过夜。TLC监测反应完成后，将上述反应液滴入水(20mL)中，加入乙酸乙酯(20 mL)，分离有机相，再次使用乙酸乙酯(20mL)萃取两次合并有机相，无水硫酸钠干燥。减压蒸馏浓缩制砂，经柱层析(石油醚∶乙酸乙酯＝8∶1-3∶1)分离纯化，获得白色固体为中间体化合物11。1H NMR(400MHz，DMSO)δ8.30(s，1H)，8.09-7.98(m，1H)， 7.88(t，J＝9.0Hz，1H)，7.79(s，1H)，4.30(t，J＝5.9Hz，2H)，3.80(dd，J＝7.8，4.2Hz，2H)， 1.97(dd，J＝12.0，6.0Hz，2H)，0.84(s，9H)，0.07-0.04(m，6H).
中间体化合物12：4-氯-3-(3-吗啉代)-5-硝基苯甲酰胺的合成
Figure BDA0002207130760000102
将4-氯-3-羟基-5-硝基苯甲酰胺(1g，4.62mmol)溶于N.N-二甲基甲酰胺(10mL)溶液中，然后向上述溶液中分别加入4-(3-溴丙基)吗啉(0.86mL，5.54mmol)和碳酸钾(0.83g，6.0mmol)，室温搅拌十分钟后，转移至油浴升温至80℃，反应过夜。TLC 监测反应完成后，将上述反应液滴入水(20mL)中，加入乙酸乙酯(20mL)，分离有机相，再次使用乙酸乙酯(20mL)萃取两次合并有机相，无水硫酸钠干燥。减压蒸馏浓缩制砂，经柱层析(石油醚∶乙酸乙酯＝8∶1-3∶1)分离纯化，获得白色固体为中间体化合物12。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)68.32(s，1H)，8.04(d，J＝2.9Hz，1H)，7.84(d， J＝17.6Hz，2H)，4.27(s，2H)，3.41-3.32(m，3H)，2.45(s，2H)，2.37(s，4H)，1.96(s，2H).
中间体化合物13：4-氯-3-硝基苯磺酰胺的合成
Figure BDA0002207130760000111
将4-氯-3-硝基苯磺酰氯(5.5g，21.48mmol)溶于乙醚(50mL)中，冰浴下缓慢滴加氨水(22.06mL，171.84mmol)，然后置于室温反应0.5h。TLC点板监测至反应完全后，加水和乙酸乙酯萃取，有机层用饱和食盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，浓缩后得到淡黄色固体中间体化合物13。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.47(t，J＝2.3Hz，1H)，8.11-7.99 (m，2H)，7.78(s，2H).
中间体化合物14：4-氯-3-硝基-5-(氧杂环丁烷-3-基氧基)苯甲酰胺的合成
Figure BDA0002207130760000112
将4-氯-3-羟基-5-硝基苯甲酰胺(1g，4.62mmol)溶于N.N-二甲基甲酰胺(10mL)溶液中，然后向上述溶液中分别加入3-碘氧杂环丁烷(0.48mL，5.54mmol)和碳酸钾(1.28g，9.23mmol)，室温搅拌十分钟后，转移至油浴升温至80℃，反应过夜。TLC监测反应完成后，将上述反应液滴入水(20mL)中，加入乙酸乙酯(20mL)，分离有机相，再次使用乙酸乙酯(20mL)萃取两次合并有机相，无水硫酸钠干燥。减压蒸馏浓缩制砂，经柱层析(石油醚∶乙酸乙酯＝8∶1-3∶1)分离纯化，获得黄色固体为中间体化合物14。1H NMR(400MHz，DMSO)δ8.29(s，1H)，8.11(d，J＝1.7Hz，1H)，7.89-7.78(m， 1H)，7.45(d，J＝1.6Hz，1H)，5.56(dt，J＝10.3，5.2Hz，1H)，5.00(dd，J＝13.4，7.4Hz，2H)， 4.63(dd，J＝7.4，4.6Hz，2H).
实施例1
Figure BDA0002207130760000121
步骤a：(4-((4-氨基甲酰基-2-甲氧基-6-硝基苯基)氨基)丁基)氨基甲酸叔丁酯的合成
将4-氯-3-甲氧基-5-硝基苯甲酰胺(1g，4.34mmol)溶于正丁醇(10mL)溶液中，室温搅拌，然后向上述反应液中加入N-(叔丁氧羰基)-1，4-二氨基丁烷(1.1mL，5.64 mmol)和N，N-二异丙基乙胺(2.15mL，13.0mmol)，封管中升温至110℃，反应12 小时，次日抽滤，适量乙酸乙酯洗涤获得(4-((4-氨基甲酰基-2-甲氧基-6-硝基苯基) 氨基)丁基)氨基甲酸叔丁酯(化合物1A)，淡黄色固体，收率89％。1H NMR(300MHz， DMSO-d6)δ8.23-8.17(m，1H)，8.02(s，1H)，7.72(d，J＝5.9Hz，1H)，7.55(s，1H)，7.33(s， 1H)，6.81(s，1H)，3.92-3.86(m，3H)，3.46(d，J＝6.3Hz，2H)，2.89(d，J＝6.4Hz，2H)，1.49 (s，4H)，1.37-1.32(m，9H).
步骤b：4-((4-氨基丁基)氨基)-3-甲氧基-5-硝基苯甲酰胺盐酸盐的合成
将化合物1A(2g，5.23mmol)分散于乙酸乙酯(20mL)溶液中，置于冰浴下搅拌十分钟，向上述溶液中通入新制的HCl气体至饱和。继续冰浴反应10分钟后，移除冰浴，室温反应两个小时。TLC监测反应完全后，减压蒸馏除去乙酸乙酯，向残留物中加入乙醚(15mL)，室温搅拌两个小时，抽滤获得4-((4-氨基丁基)氨基)-3-甲氧基-5-硝基苯甲酰胺盐酸盐(化合物1B)，红褐色固体，收率93％。1H NMR(300MHz， DMSO-d6)δ8.21(dd，J＝3.9，2.0Hz，1H)，8.04(s，1H)，7.73(s，1H)，7.57(d，J＝3.0Hz，1H)， 7.34(s，1H)，3.89(d，J＝4.0Hz，3H)，3.50(s，2H)，2.78(s，2H)，1.61-1.51(m，4H).
步骤c：3-甲氧基-5-硝基-4-((4-((2-硝基-4-氨磺酰基苯基)氨基)丁基)氨基)苯甲酰胺的合成
将化合物4-((4-氨基丁基)氨基)-3-甲氧基-5-硝基苯甲酰胺盐酸盐(1g，3.14mmol) 溶于正丁醇(10mL)溶液中，室温搅拌，然后向上述反应液中加入4-氯-3-硝基苯磺酰胺(0.89g，3.76mmol)和N，N-二异丙基乙胺(1.56mL，9.41mmol)，封管中升温至 110℃，反应12小时，次日抽滤，适量乙酸乙酯洗涤获得3-甲氧基-5-硝基-4-((4-((2- 硝基-4-氨磺酰基苯基)氨基)丁基)氨基)苯甲酰胺(化合物1C)，红褐色固体，收率72％。MS(ESI)m/z＝483[M+H]+。
步骤d：3-氨基-4-((4-((2-氨基-4-氨磺酰基苯基)氨基)丁基)氨基)-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
将化合物1D(0.8g，1.66mmol)分散于甲醇(30mL)溶液中，向上述反应液中分别加入连二亚硫酸钠(2.9g，16.58mmol)和氨水(2mL)，室温搅拌十分钟后，转移至油浴升温至60℃，反应4个小时。TLC监测反应完全后，抽滤，甲醇洗涤滤饼，合并收集滤液，减压蒸馏浓缩制砂，经柱层析(二氯甲烷∶甲醇＝30∶1-7∶1)分离纯化，获得3-氨基-4-((4-((2-氨基-4-氨磺酰基苯基)氨基)丁基)氨基)-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物1D)，淡黄色固体，收率63％。MS(ESI)m/z＝423[M+H]+。
步骤e：2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1-(4-(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5- 甲酰胺基)-5-氨磺酰基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺的合成
将化合物1D(0.5g，1.18mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(5mL)溶液中，加入0.4M 的1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-羰基异硫氰酸酯的二氧六环溶液(4mL，1.6mmol)，冰浴下搅拌十分钟后，加入另一份0.4M的1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-羰基异硫氰酸酯的二氧六环溶液(1mL，0.4mmol)，冰浴下搅拌十五分钟后，加入最后一份0.4M的1-乙基-3- 甲基-1H-吡唑-5-羰基异硫氰酸酯的二氧六环溶液(1mL，0.4mmol)，继续冰浴反应半个小时后，加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(0.57mg，2.96mmol)和三乙胺(0.98mL，7.1mmol)，继续冰浴下搅拌十分钟后，转移至室温反应过夜。TLC监测反应完成后，将反应液缓慢滴入到水(20mL)中，有白色不溶物析出，抽滤，收集滤饼干燥，经柱层析(二氯甲烷∶甲醇＝20∶1-5∶1)分离纯化得2-(1-乙基-3-甲基-1H- 吡唑-5-甲酰胺基)-1-(4-(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-5-氨磺酰基-1H- 苯并[d]咪唑-1-基)丁基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺(实施例化合物1)，灰白色固体，收率78％。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ12.92(s，2H)，8.01(s，1H)，7.93(s，1H)，7.66(dd，J＝16.4，7.5Hz，4H)，7.37(s，3H)，6.61(d，J＝5.0Hz，2H)，4.58(s，4H)，4.37 (s，2H)，4.28(s，2H)，3.86(s，3H)，2.11(s，6H)，1.85(s，4H)，1.31(td，J＝7.4，3.7Hz，6H).
实施例2
Figure BDA0002207130760000141
操作过程和反应条件同实施例1相同，不同的是步骤c中原料为4-氯-3-甲氧基-5-硝基苯甲酰胺，步骤e中原料为2-乙基-2，4，5，6-四氢环戊[c]吡唑-3-羰基异硫氰酸酯，淡黄色固体，收率54％。1H NMR(400MHz，DMSO)δ12.78(s，2H)，7.99(s，2H)，7.61(s，2H)， 7.36(s，4H)，4.59(s，4H)，4.31(s，4H)，3.90(s，6H)，2.68(s，4H)，2.42(s，4H)，2.08(s，4H)，1.82(s，4H)，1.32(s，6H).
实施例3
Figure BDA0002207130760000142
操作过程和反应条件同实施例2同，不同的原料是1-(环丙基甲基)-3-甲基-1H-吡唑-5-羰基异硫氰酸酯，获得灰白色固体，收率63％。1H NMR(400MHz，DMSO)δ12.76 (s，2H)，7.98(s，2H)，7.59(s，2H)，7.34(s，4H)，6.61(s，2H)，4.44(d，J＝6.8Hz，4H)，4.37(s，4H)，3.87(s，6H)，2.10(s，6H)，1.85(s，4H)，1.32(s，2H)，0.40(d，J＝7.5Hz，4H)，0.32(d，J ＝3.7Hz，4H).
实施例4
Figure BDA0002207130760000151
操作过程和反应条件同实施例2同，不同的原料是1-炔丙基-3-甲基-1H-吡唑-5-羰基异硫氰酸酯，灰白色固体，收率58％。1H NMR(300MHz，DMSO)δ12.82(s，2H)，8.03(s，2H)，7.57(s，2H)，7.40(s，2H)，7.33(s，2H)，6.65(s，2H)，5.46(s，4H)，4.39(s，4H)，3.86(s，6H)，3.24(t，J＝2.3Hz，2H)，2.12(s，6H)，1.86(s，4H).
实施例5
Figure BDA0002207130760000152
操作过程和反应条件同实施例2同，不同的原料是3-甲基-1-(2，2，2-三氟乙基)-1H- 吡唑-5-羰基异硫氰酸酯，灰白色固体，收率62％。1H NMR(300MHz，DMSO)δ12.83(s，2H)，8.04(s，2H)，7.60(s，2H)，7.38(d，J＝19.7Hz，4H)，6.76(s，2H)，5.63(s，4H)，4.37(s，4H)，3.86(s，6H)，2.16(d，J＝16.2Hz，6H)，1.85(s，4H).
实施例6
Figure BDA0002207130760000153
Figure BDA0002207130760000161
步骤a：(E)-(4-((4-氨基甲酰基-2-甲氧基-6-硝基苯基)氨基)丁-2-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯的合成
将4-氯-3-甲氧基-5-硝基苯甲酰胺(1g，4.34mmol)溶于正丁醇(10mL)溶液中，室温搅拌，然后向上述反应液中加入(E)-(4-氨基丁-2-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯(0.97 g，5.2mmol)和N，N-二异丙基乙胺(2.15mL，13.0mmol)，封管中升温至110℃，反应12小时，次日抽滤，适量乙酸乙酯洗涤获得(E)-(4-((4-氨基甲酰基-2-甲氧基 -6-硝基苯基)氨基)丁-2-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯(化合物6A)，淡黄色固体，收率 84％。1H NMR(400MHz，DMSO)δ8.19(d，J＝1.9Hz，1H)，8.04(s，1H)，7.76(t，J＝6.0Hz， 1H)，7.56(d，J＝1.7Hz，1H)，7.34(s，1H)，6.95(t，J＝5.5Hz，1H)，5.54(s，2H)，4.09(s，2H)， 3.88(s，3H)，3.50(d，J＝12.4Hz，2H)，1.37(d，J＝9.6Hz，9H).
步骤b：(E)-4-((4-氨基丁-2-烯-1-基)氨基)-3-甲氧基-5-硝基苯甲酰胺盐酸盐的合成
将化合物6A(2g，5.26mmol)分散于乙酸乙酯(20mL)溶液中，置于冰浴下搅拌十分钟，向上述溶液中通入新制的HCl气体至饱和。继续冰浴反应10分钟后，移除冰浴，室温反应两个小时。TLC监测反应完全后，减压蒸馏除去乙酸乙酯，向残留物中加入乙醚(15mL)，室温搅拌两个小时，抽滤获得(E)-4-((4-氨基丁-2-烯-1-基) 氨基)-3-甲氧基-5-硝基苯甲酰胺盐酸盐(化合物6B)，红褐色固体，收率88％。1H NMR (300MHz，DMSO-d6)δ8.21(s，1H)，8.06(s，1H)，7.88(s，2H)，7.58(s，1H)，7.37(s，1H)， 5.86(d，J＝16.0Hz，1H)，5.64-5.55(m，1H)，4.17(s，2H)，3.88(s，3H)，3.40(d，J＝7.6Hz， 2H).
步骤c：(E)-3-甲氧基-5-硝基-4-((4-((2-硝基-4-氨磺酰基苯基)氨基)丁-2-烯-1- 基)氨基)苯甲酰胺的合成
将化合物(E)-4-((4-氨基丁-2-烯-1-基)氨基)-3-甲氧基-5-硝基苯甲酰胺盐酸盐 (1g，3.14mmol)溶于正丁醇(10mL)溶液中，室温搅拌，然后向上述反应液中加入4-氯-3-硝基苯磺酰胺(0.90g，3.8mmol)和N，N-二异丙基乙胺(1.57mL，9.47mmol)，封管中升温至110℃，反应12小时，次日抽滤，适量乙酸乙酯洗涤获得(E)-3-甲氧基 -5-硝基-4-((4-((2-硝基-4-氨磺酰基苯基)氨基)丁-2-烯-1-基)氨基)苯甲酰胺(化合物6C)，红褐色固体，收率68％。MS(ESI)m/z＝481[M+H]+。1H NMR(300MHz， DMSO-d6)δ8.66(s，1H)，8.47(s，1H)，8.16(s，1H)，8.04(s，1H)，7.74(s，2H)，7.52(s，1H)，7.34(s，3H)，7.05(d，J＝9.2Hz，1H)，5.66(s，2H)，4.06(d，J＝17.5Hz，4H)，3.83(s，3H).
步骤d：(E)-3-氨基-4-((4-((2-氨基-4-氨磺酰基苯基)氨基)丁-2-烯-1-基)氨基) -5-甲氧基苯甲酰胺的合成
将化合物6C(0.8g，1.67mmol)分散于甲醇(30mL)溶液中，向上述反应液中分别加入连二亚硫酸钠(2.9g，16.65mmol)和氨水(2mL)，室温搅拌十分钟后，转移至油浴升温至60℃，反应4个小时。TLC监测反应完全后，抽滤，甲醇洗涤滤饼，合并收集滤液，减压蒸馏浓缩制砂，经柱层析(二氯甲烷∶甲醇＝30∶1-7∶1)分离纯化，获得E)-3-氨基-4-((4-((2-氨基-4-氨磺酰基苯基)氨基)丁-2-烯-1-基)氨基)-5- 甲氧基苯甲酰胺(化合物6D)，淡黄色固体，收率56％。MS(ESI)m/z＝421[M+H]+。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.64(s，1H)，7.05-6.90(m，4H)，6.90-6.75(m，5H)，6.39 (d，J＝8.2Hz，1H)，5.81-5.61(m，3H)，5.29(s，1H)，4.90(s，2H)，4.68(s，2H)，4.18-4.08 (m，1H)，3.85(s，1H)，3.77-3.68(m，5H)，3.36(s，2H)，3.17(dd，J＝5.7，1.8Hz，2H).
步骤e：(E)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1-(4-(2-(1-乙基-3-甲基-1H- 吡唑-5-甲酰胺基)-5-氨磺酰基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-l-基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺的合成
操作过程和反应条件同实施例1步骤e，不同的是原料为化合物6D，淡黄色固体，收率71％。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ12.97(s，1H)，12.86(s，1H)，7.97(d，J＝18.8 Hz，2H)，7.63(s，2H)，7.54(s，1H)，7.38(s，3H)，7.31(s，1H)，6.57(s，2H)，5.92(s，1H)，5.74 (s，1H)，4.91(s，2H)，4.83(s，2H)，4.54(s，4H)，3.75(s，3H)，2.12(s，6H)，1.27(s，6H).
实施例7
Figure BDA0002207130760000181
操作过程和反应条件同实施例6相同，不同的是步骤c中原料为1-(4-氯-3-甲氧基-5-硝基苯甲酰基)哌啶-4-甲酰胺，淡黄色固体，收率68％。1H NMR(400MHz，DMSO) δ12.79(s，2H)，8.00(s，1H)，7.70(ddd，J＝16.8，9.3，5.4Hz，3H)，7.34(s，3H)，7.17(s，1H)， 6.83(d，J＝15.8Hz，2H)，6.53(s，2H)，5.85(s，2H)，4.91(s，4H)，4.52(s，5H)，4.26-4.08(m，4H)，3.79(s，4H)，3.73(s，3H)，2.11(s，6H)，2.03(d，J＝3.0Hz，2H)，1.39-1.32(m，4H)，1.28(d，J＝6.6Hz，6H).
实施例8
Figure BDA0002207130760000182
操作过程和反应条件同实施例6相同，不同的是步骤c中原料为4-氯-3-甲氧基-5-硝基苯甲酰胺，步骤e中原料为1-(环丙基甲基)-3-甲基-1H-吡唑-5-羰基异硫氰酸酯，灰白色固体，收率59％。1H NMR(400MHz，DMSO)δ12.79(s，2H)，7.95(s，2H)，7.64(s，2H)， 7.32(s，4H)，6.55(s，2H)，5.85(s，2H)，4.91(s，4H)，4.40(s，4H)，3.75(s，6H)，2.11(s，6H)，1.29(s，2H)，0.37(s，4H)，0.29(s，4H).
实施例9
Figure BDA0002207130760000191
操作过程和反应条件同实施例8相同，不同的原料是3-甲基-1-(2，2，2-三氟乙基)-1H- 吡唑-5-羰基异硫氰酸酯，灰白色固体，收率72％。1H NMR(400MHz，DMSO)δ12.83(s， 2H)，7.96(s，2H)，7.65(s，2H)，7.33(d，J＝9.6Hz，4H)，6.67(s，2H)，5.85(s，2H)，5.55(d，J ＝8.4Hz，4H)，4.92(s，4H)，3.74(s，6H)，2.12(s，6H).
实施例10
Figure BDA0002207130760000192
操作过程和反应条件同实施例8相同，不同的原料是1-炔丙基-3-甲基-1H-吡唑-5-羰基异硫氰酸酯，灰白色固体，收率68％。1H NMR(400MHz，DMSO)δ12.85(s，2H)，7.97 (s，2H)，7.66(s，2H)，7.34(d，J＝10.7Hz，4H)，6.60(s，2H)，5.89(s，2H)，5.41(s，4H)，4.95(s，4H)，3.75(s，6H)，3.21(s，2H)，2.13(s，6H).
实施例11
Figure BDA0002207130760000193
操作过程和反应条件同实施例8相同，不同的原料是1-烯丙基-3-甲基-1H-吡唑-5-羰基异硫氰酸酯，灰白色固体，收率64％。1H NMR(400MHz，DMSO)δ12.81(s，2H)，7.97 (s，2H)，7.65(s，2H)，7.34(d，J＝7.2Hz，4H)，6.57(s，2H)，6.02-5.80(m，4H)，5.17(d，J＝4.3Hz，4H)，5.01(d，J＝10.2Hz，2H)，4.88(d，J＝18.7Hz，6H)，3.77(s，6H)，3.58(s，2H)，2.12(s，6H).
实施例12
Figure BDA0002207130760000201
操作过程和反应条件同实施例8相同，不同的原料是2-乙基-2，6-二氢-4H-呋喃并[3，4-c]吡唑-3-羰基异硫氰酸酯，淡黄色固体，收率71％。MS(ESI)m/z＝793[M+H]+。
实施例13
Figure BDA0002207130760000202
操作过程和反应条件同实施例8相同，不同的原料是2-乙基-2，4，5，6-四氢环戊[c]吡唑 -3-羰基异硫氰酸酯，淡黄色固体，收率66％。1H NMR(400MHz，DMSO)δ12.81(s，2H)， 7.98(s，2H)，7.64(s，2H)，7.36(s，4H)，5.76(s，2H)，4.87(s，4H)，4.56(s，4H)，3.84(s，6H)， 2.61(s，4H)，2.42(s，4H)，2.02(s，4H)，1.30(s，6H).
实施例14
Figure BDA0002207130760000211
步骤a：(E)-4-((4-((4-氨基甲酰基-2-(3-吗啉代)-6-硝基苯基)氨基)丁-2-烯-1- 基)氨基)-3-甲氧基-5-硝基苯甲酰胺的合成
将化合物6B(1g，3.16mmol)溶于正丁醇(10mL)溶液中，室温搅拌，然后向上述反应液中加入4-氯-3-(3-吗啉代)-5-硝基苯甲酰胺(1.3g，3.8mmol)和N，N-二异丙基乙胺(1.57mL，9.47mmol)，封管中升温至110℃，反应12小时，次日抽滤，适量乙酸乙酯洗涤获得(E)-4-((4-((4-氨基甲酰基-2-(3-吗啉代)-6-硝基苯基)氨基)丁-2-烯-1-基)氨基)-3-甲氧基-5-硝基苯甲酰胺(化合物14A)，红褐色固体，收率73％。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.19(dd，J＝12.1，6.3Hz，2H)，8.04(s，2H)，7.80 -7.70(m，2H)，7.55(d，J＝14.3Hz，2H)，7.34(s，2H)，5.62(s，2H)，4.19-4.11(m，2H)，4.08 -4.03(m，2H)，3.93-3.88(m，2H)，3.86-3.80(m，3H)，3.58(dd，J＝10.8，5.4Hz，4H)， 2.43-2.31(m，4H)，1.90(s，2H).
步骤b：(E)-3-氨基-4-((4-((2-氨基-4-氨基甲酰基-6-(3-吗啉代)苯基)氨基)丁-2-烯-1-基)氨基)-5-甲氧的合成
将化合物14A(1g，1.7mmol)分散于甲醇(30mL)溶液中，向上述反应液中分别加入连二亚硫酸钠(2.96g，17.02mmol)和氨水(2mL)，室温搅拌十分钟后，转移至油浴升温至60℃，反应4个小时。TLC监测反应完全后，抽滤，甲醇洗涤滤饼，合并收集滤液，减压蒸馏浓缩制砂，经柱层析(二氯甲烷∶甲醇＝30∶1-7∶1)分离纯化，获得(E)-3-氨基-4-((4-((2-氨基-4-氨基甲酰基-6-(3-吗啉代)苯基)氨基)丁-2- 烯-1-基)氨基)-5-甲氧(化合物14B)，淡黄色固体，收率56％。MS(ESI)m/z＝528[M+H]+。
步骤c：(E)-1-(4-(5-氨基甲酰基-2-(2-乙基-2，4，5，6-四氢环戊并[c]吡唑-3-甲酰氨基) -7-(3-吗啉代丙基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(2-乙基-2，4，5，6-四氢环戊并[c]吡唑-3-甲酰氨基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺的合成
操作过程和反应条件同实施例1步骤e相同，不同的是原料为化合物14B，淡黄色固体，收率64％。1H NMR(400MHz，DMSO)δ12.82(s，2H)，7.98(s，2H)，7.64(d，J＝6.3Hz， 2H)，7.32(d，J＝20.0Hz，4H)，5.92-5.65(m，2H)，4.87(d，J＝12.1Hz，4H)，4.57(d，J＝5.2 Hz，4H)，3.97(s，2H)，3.80(d，J＝3.8Hz，3H)，3.44(s，4H)，2.67(s，4H)，2.58(s，4H)，2.45(d， J＝7.3Hz，4H)，2.27(s，2H)，2.17(s，4H)，1.71(s，2H)，1.31(d，J＝3.5Hz，6H).
实施例15
Figure BDA0002207130760000221
操作过程和反应条件同实施例14相同，不同的原料是1-(环丙基甲基)-3-甲基-1H- 吡唑-5-羰基异硫氰酸酯，淡黄色固体，收率64％。1H NMR(400MHz，DMSO)δ12.82(s，2H)，7.97(s，2H)，7.65(d，J＝8.4Hz，2H)，7.35(d，J＝8.7Hz，2H)，7.30(s，1H)，7.26(s，1H)，6.59(d，J＝7.4Hz，1H)，6.54(s，1H)，5.85(d，J＝4.4Hz，2H)，4.92(d，J＝18.4Hz，4H)，4.41(dd，J＝13.8，6.7Hz，4H)，3.91(t，J＝5.8Hz，2H)，3.67(d，J＝9.2Hz，3H)，3.45(d，J＝3.8Hz，4H)，2.23-2.19(m，2H)，2.14(s，6H)，2.11(s，4H)，1.62(d，J＝6.4Hz，2H)，1.31(d，J＝5.8Hz，2H)，0.39(t，J＝7.5Hz，4H)，0.35-0.27(m，4H).
实施例16
Figure BDA0002207130760000231
操作过程和反应条件同实施例14相同，不同的原料是3-甲基-1-(2，2，2-三氟乙基) -1H-吡唑-5-羰基异硫氰酸酯，淡黄色固体，收率68％。1H NMR(400MHz，DMSO)δ 12.87(s，2H)，7.98(s，2H)，7.65(d，J＝10.1Hz，2H)，7.37(d，J＝7.1Hz，2H)，7.31(s，1H)，7.26(s，1H)，6.72(s，1H)，6.64(s，1H)，5.86(t，J＝9.7Hz，2H)，5.56(dd，J＝15.5，7.7Hz， 4H)，4.92(d，J＝15.5Hz，4H)，3.90(s，2H)，3.67(s，3H)，3.44(s，4H)，2.19(d，J＝7.2Hz， 2H)，2.15(d，J＝6.4Hz，7H)，2.12(s，3H)，1.58(s，2H).
实施例17
Figure BDA0002207130760000232
操作过程和反应条件同实施例14相同，不同的原料是2-乙基-5-甲基-2，4，5，6-四氢环戊[c]吡唑-3-羰基异硫氰酸酯，淡黄色固体，收率62％。1H NMR(400MHz，DMSO)δ12.84(s，2H)，7.97(s，2H)，7.65(s，2H)，7.32(d，J＝12.6Hz，4H)，5.80(s，2H)，4.91(s，4H)，4.56(s， 4H)，3.97(s，2H)，3.82-3.64(m，3H)，3.47(s，4H)，2.58(s，4H)，2.20(s，10H)，1.66(s，4H)， 1.29(s，6H)，1.10(d，J＝22.0Hz，3H)，0.93(s，3H).
实施例18
Figure BDA0002207130760000241
步骤a：(E)-3-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙氧基)-4-((4-((4-氨基甲酰基-2-甲氧基-6-硝基苯基)氨基)丁-2-烯-1-基)氨基)-5-硝基苯甲酰胺的合成
将化合物6B(1g，3.16mmol)溶于正丁醇(10mL)溶液中，室温搅拌，然后向上述反应液中加入3-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙氧基)-4-氯-5-硝基苯甲酰胺(1.47g，3.8mmol)和N，N-二异丙基乙胺(1.57mL，9.47mmol)，封管中升温至 110℃，反应12小时，次日抽滤，适量乙酸乙酯洗涤获得(E)-3-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙氧基)-4-((4-((4-氨基甲酰基-2-甲氧基-6-硝基苯基)氨基) 丁-2-烯-1-基)氨基)-5-硝基苯甲酰胺(化合物18A)，红褐色固体，收率66％。MS(ESI) m/z＝633[M+H]+。
步骤b：(E)-3-氨基-4-((4-((2-氨基-4-氨基甲酰基-6-甲氧基苯基)氨基)丁-2-烯 -1-基)氨基)-5-(3-((叔丁基二甲基)氧基)丙氧基)苯甲酰胺的合成
将化合物18A(1g，1.58mmol)分散于甲醇(30mL)溶液中，向上述反应液中分别加入连二亚硫酸钠(2.75g，15.8mmol)和氨水(2mL)，室温搅拌十分钟后，转移至油浴升温至60℃，反应4个小时。TLC监测反应完全后，抽滤，甲醇洗涤滤饼，合并收集滤液，减压蒸馏浓缩制砂，经柱层析(二氯甲烷∶甲醇＝30∶1-7∶1)分离纯化，获得(E)-3-氨基-4-((4-((2-氨基-4-氨基甲酰基-6-甲氧基苯基)氨基)丁-2-烯-1- 基)氨基)-5-(3-((叔丁基二甲基)氧基)丙氧基)苯甲酰胺(化合物18B)，淡黄色固体，收率61％。MS(ESI)m/z＝573[M+H]+。
步骤c：(E)-7-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙氧基)-1-(4-(5-氨基甲酰基-2- (1-(环丙基甲基)-4-甲基-1H-吡唑-5-甲酰基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2- 烯-1-基)-2-(1-(环丙基甲基)-4-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺的合成
操作过程和反应条件同实施例1步骤e相同，不同的原料是化合物18B和1-(环丙基甲基)-3-甲基-1H-吡唑-5-羰基异硫氰酸酯，淡黄色固体，收率58％。MS(ESI)m/z＝ 945[M+H]+
步骤d：(E)-1-(4-(5-氨基甲酰基-2-(1-(环丙基甲基)-4-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基) -7-(3-羟基丙氧基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-(环丙基甲基)-4-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺的合成
将化合物18C(0.5g，0.53mmol)分散于4M HCL的二氧六环(5mL)溶液中，室温搅拌30分钟，TLC监测反应完成后，减压蒸馏除去溶剂，加入乙醚(5mL)室温搅拌30分钟后，抽滤，收集滤饼，干燥得(E)-1-(4-(5-氨基甲酰基-2-(1-(环丙基甲基)-4-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-(3-羟基丙氧基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯 -1-基)-2-(1-(环丙基甲基)-4-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑 -5-甲酰胺(实施例化合物18)，灰白色固体，收率89％。1H NMR(400MHz，DMSO)δ 12.81(s，2H)，7.99(s，2H)，7.65(d，J＝2.6Hz，2H)，7.34(d，J＝12.3Hz，4H)，6.55(d，J＝1.6 Hz，2H)，5.86(s，2H)，4.92(s，4H)，4.56(t，J＝5.0Hz，1H)，4.41(d，J＝6.5Hz，4H)，4.06(t，J ＝6.1Hz，2H)，3.73(s，3H)，3.45(d，J＝5.4Hz，2H)，2.11(d，J＝2.3Hz，6H)，1.73-1.66(m， 2H)，1.31(s，2H)，0.38(d，J＝7.6Hz，4H)，0.30(d，J＝3.8Hz，4H).
实施例19
Figure BDA0002207130760000261
操作过程和反应条件同实施例18相同，不同的原料3-甲基-1-(2，2，2-三氟乙基)-1H- 吡唑-5-羰基异硫氰酸酯，灰白色固体，收率91％。1H NMR(400MHz，DMSO)δ12.84(s，2H)，7.99(s，2H)，7.65(d，J＝2.3Hz，2H)，7.34(d，J＝17.6Hz，4H)，6.65(s，2H)，5.85(s，2H)，5.54(q，J＝9.4Hz，4H)，4.92(s，4H)，4.55(t，J＝5.1Hz，1H)，4.04(t，J＝6.4Hz，2H)，3.71(s，3H)，3.43(dd，J＝11.1，5.6Hz，2H)，2.12(d，J＝2.3Hz，6H)，1.72-1.63(m，2H).
实施例20
Figure BDA0002207130760000262
操作过程和反应条件同实施例18相同，不同的原料1-烯丙基-3-甲基-1H-吡唑-5-羰基异硫氰酸酯，灰白色固体，收率82％。1H NMR(300MHz，DMSO)δ8.01(s，2H)，7.65(d，J＝1.5Hz，2H)，7.33(s，4H)，6.57(s，2H)，6.01-5.89(m，2H)，5.83(s，2H)，5.15(d，J＝5.0 Hz，4H)，5.01(d，J＝10.0Hz，2H)，4.95-4.83(m，6H)，4.07(s，2H)，3.45(t，J＝5.9Hz，3H)， 2.11(d，J＝1.8Hz，6H)，1.75-1.66(m，2H).
实验例1：细胞实验
本实验通过检测化合物刺激人外周血单核细胞系PBMC细胞(AllCells，Cat#：PB005F)产生的I型干扰素IFNβ变化来评价STING激动剂的功能。使用前将低温保存的PBMCs在RPMI1640培养基中解冻复苏过夜后。将测试化合物溶解到DMSO中配制为浓度为10mM的母液。测试前，将化合物稀释至工作浓度的100倍(工作浓度分别为30、10、3.33、1.11、0.370、0.123、0.0412、0.0137uM)。采集PBMCs，调整至细胞浓度为5x10^5/ml浓度。将LPS添加到PBMCs中，最终浓度为10ng/ml。96孔细胞培养板中，每孔加入200ul PBMCs(每孔1x10^5个细胞)。然后每孔加入2ul稀释后的化合物(复孔，每孔中DMSO最终浓度为1％)。然后用移液管小心地将细胞和化合物混合均匀。阴性对照，加入2ul DMSO(1％终浓度)。细胞在37℃培养箱中培养过夜。收集细胞培养上清液检测I型干扰素IFNβ浓度。通过固相抗体R&D-MAB8144-100和检测抗体 R&D-MAB8143-100(Biotinylated)的ELISA试剂盒来测定IFNβ的浓度，根据标准曲线换算成IP10浓度，并用GraphPad 5.0拟合剂校曲线计算EC50值。本发明实施例化合物能强烈地刺激人PBMCs细胞释放IFNβ，EC50值小于10μM。实验结果见表1。
表1细胞实验结果一览表
实施例 EC<sub>50</sub>(μM)
1 2.976
5 0.06986
6 0.03099
7 0.04891
8 0.01766
实验结果说明，本发明制备的化合物对STING具有激活作用，能够用于制备激活STING或与STING活性相关的疾病的药物。

Claims (5)

1.杂环酰胺类化合物及其可药用的盐，结构如下：
Figure FDA0003871732690000011
2.一种药物组合物，其含有治疗有效量的如权利要求1所述的杂环酰胺类化合物及其可药用的盐，及药学上可接受的载体。
3.权利要求1所述的杂环酰胺类化合物及其可药用的盐在制备免疫佐剂中的用途。
4.权利要求1所述的杂环酰胺类化合物及其可药用的盐在制备激活STING 药物中的用途。
5.权利要求1所述的杂环酰胺类化合物及其可药用的盐在制备治疗与STING 活性相关的疾病的药物中的用途，所述与STING 活性相关的疾病是炎性疾病、自身免疫性疾病、感染性疾病、癌症、癌前期综合征中的一种或几种。
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