CN1082056A - 具有免疫刺激活性的葡聚糖 - Google Patents
具有免疫刺激活性的葡聚糖 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1082056A CN1082056A CN93109362A CN93109362A CN1082056A CN 1082056 A CN1082056 A CN 1082056A CN 93109362 A CN93109362 A CN 93109362A CN 93109362 A CN93109362 A CN 93109362A CN 1082056 A CN1082056 A CN 1082056A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- dextran
- product
- activity
- candida albicans
- contain
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 title claims abstract description 46
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 title claims abstract description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 27
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 15
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 12
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims description 11
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 claims description 11
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 11
- 241000222122 Candida albicans Species 0.000 claims description 10
- 229940095731 candida albicans Drugs 0.000 claims description 9
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- 239000004141 Sodium laurylsulphate Substances 0.000 claims description 6
- 235000019333 sodium laurylsulphate Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 5
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 5
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 claims description 4
- 241000358324 Viverricula indica Species 0.000 claims description 3
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 claims description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 3
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 3
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 claims description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 3
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 claims 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 claims 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 25
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 13
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 7
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 6
- 229920002101 Chitin Polymers 0.000 description 5
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 4
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 4
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 4
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 4
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 4
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 3
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 3
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 3
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 3
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 3
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 3
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 2
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003187 abdominal effect Effects 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 2
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 2
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 2
- 238000013016 damping Methods 0.000 description 2
- DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N ethyl mercaptane Natural products CCS DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 150000002402 hexoses Chemical class 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 2
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SPFMQWBKVUQXJV-BTVCFUMJSA-N (2r,3s,4r,5r)-2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;hydrate Chemical compound O.OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O SPFMQWBKVUQXJV-BTVCFUMJSA-N 0.000 description 1
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VLEIUWBSEKKKFX-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;2-[2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl-(carboxymethyl)amino]acetic acid Chemical compound OCC(N)(CO)CO.OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O VLEIUWBSEKKKFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FRXSZNDVFUDTIR-UHFFFAOYSA-N 6-methoxy-1,2,3,4-tetrahydroquinoline Chemical compound N1CCCC2=CC(OC)=CC=C21 FRXSZNDVFUDTIR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010007134 Candida infections Diseases 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 208000032170 Congenital Abnormalities Diseases 0.000 description 1
- 230000007023 DNA restriction-modification system Effects 0.000 description 1
- LCGLNKUTAGEVQW-UHFFFAOYSA-N Dimethyl ether Chemical compound COC LCGLNKUTAGEVQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 101000981253 Mus musculus GPI-linked NAD(P)(+)-arginine ADP-ribosyltransferase 1 Proteins 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 1
- LDCAAYAMMOPSAL-UHFFFAOYSA-N [Er].[Pt] Chemical compound [Er].[Pt] LDCAAYAMMOPSAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005903 acid hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 231100000215 acute (single dose) toxicity testing Toxicity 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PQMKYFCFSA-N alpha-D-mannose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PQMKYFCFSA-N 0.000 description 1
- 210000001132 alveolar macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 230000002052 anaphylactic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000002924 anti-infective effect Effects 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 230000008512 biological response Effects 0.000 description 1
- 229920001222 biopolymer Polymers 0.000 description 1
- 230000007698 birth defect Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 201000003984 candidiasis Diseases 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 231100000132 chronic toxicity testing Toxicity 0.000 description 1
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 description 1
- 239000006783 corn meal agar Substances 0.000 description 1
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 1
- 230000002354 daily effect Effects 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 210000000416 exudates and transudate Anatomy 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 1
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000007365 immunoregulation Effects 0.000 description 1
- 230000004957 immunoregulator effect Effects 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 239000013067 intermediate product Substances 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 238000002386 leaching Methods 0.000 description 1
- 231100000636 lethal dose Toxicity 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 1
- 230000007886 mutagenicity Effects 0.000 description 1
- 231100000299 mutagenicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000006916 nutrient agar Substances 0.000 description 1
- 235000020939 nutritional additive Nutrition 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 150000004804 polysaccharides Polymers 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 238000003825 pressing Methods 0.000 description 1
- 235000004252 protein component Nutrition 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001950 radioprotection Effects 0.000 description 1
- 210000000664 rectum Anatomy 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- DAJSVUQLFFJUSX-UHFFFAOYSA-M sodium;dodecane-1-sulfonate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCS([O-])(=O)=O DAJSVUQLFFJUSX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K trisodium citrate Chemical class [Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 235000019263 trisodium citrate Nutrition 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 238000003809 water extraction Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/0006—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid
- C08B37/0024—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid beta-D-Glucans; (beta-1,3)-D-Glucans, e.g. paramylon, coriolan, sclerotan, pachyman, callose, scleroglucan, schizophyllan, laminaran, lentinan or curdlan; (beta-1,6)-D-Glucans, e.g. pustulan; (beta-1,4)-D-Glucans; (beta-1,3)(beta-1,4)-D-Glucans, e.g. lichenan; Derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/04—Polysaccharides, i.e. compounds containing more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic bonds
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明涉及到具有免疫刺激性的葡聚糖，以及其
制备方法和含有此类葡聚糖的药用组合物。
Description
本发明涉及到具有免疫刺激活性的葡聚糖，以及其制备方法和含有此类葡糖的药品。
葡聚糖是一种多糖，存在于真菌，尤其是酵母的细胞壁中。
不同来源（如不同种类的微生物）的葡聚糖其性质各异，甚至提取过程以及对上述微生物的处理方法也不同。其中包括培养保存条件及最终产生的不同产物。这些区别既可能是由于多糖链的三维结构，链中吡喃葡萄糖苷单元的不同，也可以是由于葡聚糖的生物活性以及在通常或多或少难以提纯粗品中存在的非葡聚糖的缘故。
现已来源于嗜热酿酒酵母或香茹的葡聚糖都具有主要为β-1，3吡喃葡萄糖苷键的分枝结构。
上述葡聚糖作为特别研究的原因在于它们具有抗肿瘤及抗细菌活性（Int.J.Cancer24，773-779（1997）;Int.J.Immunopharmacol.Vol.7No.5，747-751（1985））。另外，它们还展示出体内体外的免疫调节效应，以及产生一种放射保护作用（Rev.Microbiol.Vol.15，87-96，1987;Methods and Finding8 Explt.Pharmacol.Vol.8，No.3，151-156（1986））。
也可以从白色念珠菌中得到葡聚糖，并且其免疫调节作用也已有研究（J.Gen.Microbiol.Vol.134，1265-74（1958））。
专利EP-A-0416343（16，08，1990）表明了从白色念珠菌ATCC20955中提取制备的胞壁葡聚糖体至少含有90%的葡聚糖及部分几丁质。
未说明制备这种产物的方法及产物的生物性质，实际上只叙述了有助于最终产物制备，提纯达到药用标准的一种中间产物制备方法，包括消毒处理细胞，然后在高温下反复用氢氧化钠和乙酸进行提取。
美国专利4992540（12，02，1991）表明了从嗜热酿酒酵母中提取到的葡聚糖可作为营养添加剂。
我们现已发现具有高效免疫刺激活性的葡聚糖由于其不含杂质而具有显著的安全性，而这些杂质是经常存在于目前使用的类似产品中的。
本发明葡聚糖产品具有如下特点：
-β（1-3）键与β（1-6）键的比例是1∶1;
-几丁质含量按重量占3-5%;
-残留蛋白质含量低于0.3%;
-不含甘露聚糖;
-能增强NK细胞的体外杀伤细胞活性。
本发明葡聚糖产品是从不同种的酵母中获得的。
尽管在专利EP0416343中提出的白色念珠菌ATCC20955的应用已具有优先权，但本发明葡聚糖产品可从许多不同种念珠菌、酵母或其他的酵母及真菌种类中得到。
本发明葡聚糖产品从细胞中的提取方法包括下列步骤：
a）微生物在低葡萄糖含量的液体培养基中培养;
b）在高于100℃的高压条件下消毒处理培养物;
c）重复用氢氧化钠及稀有机酸提取;
d）高温下用去污剂处理提取物。
从a）到c）的过程与EP0416343中所叙述的极为相似，但（d）却是新的，可作为本发明葡聚糖产品的特征之一。
另外，本发明葡聚糖产品的特征还有比已知的葡聚糖高的免疫刺激活性以及毒性低和具有致免疫活性。
用去污剂高温处理过程主要是用1-5%的十二烷基磺酸钠（SDS），最适浓度为2%，在适当的缓冲液中煮沸1-3小时，b）步骤最好是在120℃左右的高温下处理3小时。
交替使用氢氧化钠和有机酸如乙酸提取24小时，温度控制在80-100℃。
每一步提取后都用水洗至中性，交替提取时最好用氢氧化钠和乙酸重复两次，以期适当除去可溶性碱性的胞壁葡聚糖及所有细胞残留物。
根据发明具体化准则，葡聚糖由白色念珠菌ATCC20955制备，这种菌株已经细胞DNA的限制性多态性分析，由申请者于1988年8月4日按布达佩斯条约存放于ATCC。据悉，最安全与现代的鉴定其生物型的方法是细胞DNA限制性多态性分析（DNA restriction fragment lenght polymorphism Magee of al.Mol.Cell.Biol.8，4721，1988）。
菌株的限制性分析资料提供了微生物的基因指纹以区别于所有其他念珠菌属的菌种。
菌株的培养、生化及生物学特征报告如下：
培养特征：在含玉米粉琼脂上形成厚垣孢子;
生化特征：用葡萄糖和麦芽糖发酵，产酸产气;用蔗糖发酵，只产酸;不用乳糖发酵。
生物学特征：是家兔与小鼠的致病菌。
将白色念珠菌ATCC20955菌株接种于沙保氏琼脂培养基上，于28℃，24小时生长后，保存于4℃的冰箱中。用于制备时，酵母在低葡萄糖含量的培养基中生长有利于胞壁的产生。例如Winge培养基，含有葡萄糖与酵母提取液，酵母在28℃培养18-24小时，控制培养进行以确定酵母生长期，以便获得葡萄糖与几丁质之比为20∶1的最适效果。
生长在培养基中的细胞通过离心收集后，用无菌蒸馏水洗三次后以1-2%的浓度混悬于pH5的柠檬酸缓冲液中，再置于121℃的高压下消毒3小时，使细胞得以破碎，使含有甘露聚糖。蛋白质、甘露蛋白和大部分细胞组分释放并溶解。
离心收集上述沉淀物，悬浮于1%的无菌氢氧化钠中（1%-2%），加热到100℃并持续24小时，而后用无菌蒸馏水洗沉淀物三次直至中性;接着再以1-2%的浓度混悬于无菌0.5M的乙酸溶液加热到80℃并持续24小时，再用无菌蒸馏水洗三次直至中性。
为确保最佳除去所有可能在治疗应用中带来危险的蛋白质成分，应对获得的葡聚糖进一步纯化，具体即以浓度1-2%混悬于含有2%SDS的Tris-EDTA巯基乙醇溶液中，煮沸1.5小时。
产物通过离心用无菌蒸馏水洗至除去所有去污剂，得到的葡聚糖在121℃的高压下消毒30分钟，最后使其冷干，获得的产品不溶于水、甲醇、丙酮、甲醚、稀酸及稀碱，部分溶于热的1M氢氧化钠（0.06%），溶于二甲亚砜中;产物含有95-97%的葡聚糖，3-5%的几丁质和低于0.3%的蛋白质，（通常为0.1-0.3%），不含有甘露聚糖。红外光谱和C13质谱（75MHz，72℃）分析表明本聚合物是，是β（1-3）多糖键形成长直链，支链与主链之间以β（1-6）多糖键相连，β（1-3）与β（1-6）键之比为1∶1，这个特点也影响到本药物的生物学活性。因据报导此产品的免疫学特征可因此比例的改变而呈显著变化（Jong SC et.al.EOS-J Immunol.Immuro pharmacol.11（3），115，1991），从红外光谱和C13质谱中也可明显得知存在以共价键结构相连的几丁质（Kogan，G.et.al，Biopolymers27，1055，1988）。薄层层板或纸层析显示有葡萄糖没有甘露糖，己糖含量占95-97%。
如此得到的葡聚糖没有抗原活性，但具有生物活性，可将其归类为生物应答调节物。
特别的是，对小鼠的研究表明，葡聚糖的给药可诱导增强由急性、慢性感染的多核白细胞及激活巨噬细胞诱导的抗感染活性，也因NK细胞及激活巨噬细胞的作用而增强抗肿瘤活性;可有效地增加白细胞介素，尤其是肿瘤坏死因子-α及白细胞介素-2的产生;还可加强抗体的应答作用。
本品在动物不经胃肠途径给药时有很高的免疫调节活性，且没有显著的副作用;在口服给药时，其活性也是十分显著的，此外，本品对肺泡巨噬细胞的活性也是良好的。
本发明葡聚糖产品的高纯度主要与蛋白质含量有关，较有把握的意见认为这种产品分子特别有意义的性质在于：急性与慢性毒性试验未显示出任何局部及全身毒性（在小鼠试验中，腹腔注射，半数致死量大于每千克1000毫克，（LD50＞100），大鼠口服其LD50＞2000mg/kg，每日重复静脉给药一年，剂量为400mg/kg或250mg/kg，没有表性效应），另外，也没有发现致突变性、致畸胎性、或任何影响繁殖的因素。
下面的例子将进一步阐明本发明：
实例
在沙保氏琼脂斜面上（葡萄糖20%，蛋白胨10%，琼脂1.5%，溶于蒸馏水，pH6，5%），白色念珠菌ATCC20955在28℃条件下生长1-2天，长到呈古铜色，保存于环境温度或4℃，生产时，将一白金铒的白色念珠菌琼脂块接种到100毫升Winge培养基中，（葡萄糖0.3%，酵母提取液0.1%，溶于蒸馏水中，pH6.5），置于28℃，并做轻微摇动（50rpm）的条件下长18-24小时，至生长静止期，（大约2，8×108细胞/毫升，相当于干重14毫克/毫升）。
以100毫升的菌培养液种于1000毫升的Winge培养基中，按上述条件保温培养。
此1000毫升培养液再接种到装有10升的Winge培养基的发酵罐中，酵母在28℃下生长，50rpm轻微搅拌，通气量为1升/分钟，维持pH为6.5，直至生长静止期（大约在24小时后达到2.8-4.8×108细胞/毫升），只有在生长期间可控制检验酵母细胞的数量。
培养基中的细胞可通过低速离心（300rpm）30分钟收集，用无菌蒸馏水洗三次，再悬于pH5.0的柠檬酸缓冲液中（223克柠檬酸钠/升蒸馏水），使浓度达到2-4%，于121℃的高压下灭菌处理3小时。
离心收集菌体，并悬于1%的无菌氢氧化钠溶液中使浓度为2-4%，100℃油浴加热24小时，离心并以消毒蒸馏水洗涤三次至中性，最后离心（5000rpm）30分钟，将沉淀重悬于0.5M无菌乙酸中使浓度达到2-4%，再在80℃的油浴中处理24小时。
离心沉淀物以无菌蒸馏水洗三次至中性。
交替用氢氧化钠和乙酸重复处理两次。
离心收集沉淀并悬浮于含有2%十二烷基硫酸钠（SDS）的Tris-EDTA-巯基乙醇缓冲液中（Thri：0.1M，EDTA：5mM，巯基乙醇100mM，pH6.5），浓度为2-4%，煮沸1.5小时。
然后沉淀物再通过离心方法用无菌食盐蒸馏水洗涤三次，葡聚糖中可能残留的SDS可通过溶解于DMSO，再用水抽提法除去。
约1克葡聚糖悬浮于25毫升DMSO中，77℃下搅拌直至完全溶解，轻微搅拌此溶液15分钟，并加入65毫升的蒸馏水，水的加入会使葡聚糖沉淀，将混合液轻微搅拌5分钟，再加入65毫升蒸馏水，以3500rpm离心混合物5分钟，去除上清液。
进一步向沉淀加少量水，并轻微地搅拌，重复整个步骤直至DMSO：水为1∶19，因而整个步骤是重复使用了两倍体积的DMSO/水混合液。
经最后洗涤后，离心收集的产物置一盘中于60℃烘箱中24小时。
整个过程的产率大约是每升发酵培养液可获得1.8-2.2克。
将本产品溶于DMSO-d6采用Bruker AC300仪在75MHz及70℃条件下记录C13质谱结果，经综合分析，103与86ppm相当于β（1-3）键，60.7与70ppm相当于β（1-6）键，计算得知两种键的比例为1∶1。与已知的葡聚糖，如在US4992540和EP0416343（Biopolymers 27：1055，1988）中提到的此比例相比有很大不同，US499540为65∶35（β1-3∶β1-6），而EP0416343为35∶65。
按Dubis的方法（Anal.Chem.28，350，1956）测定的己糖值为96.4%（US4992540中叙述的为96-97%）。
本品在100℃的三氟乙酸中完全酸水解12小时后，在上行的纸层析（溶剂系统为：吡啶∶乙酸乙酯∶水＝2∶5∶7）中显示出一个Rf值与葡萄糖相当的单点。
按Loury方法计算的蛋白质含量约为0.16%（US4992540中叙述的葡聚糖中蛋白质含量为0.78）。
生物活性检测根据文献（Marcomi.P.et al.Iufeetion and Immunity，50（1）：297-303，1985）报导的方法生产出的葡聚糖，以0.1-1毫克之间的剂量进行腹腔注射，在体外实验前5天，用采用腹腔渗出液和脾细胞的细胞悬液进行对YAC-1敏感的抗肿瘤NK细胞实验，结果见表1与表2，从表中可知本发明葡聚糖产品的免疫值剂活性明显高于已知的产品。
综上所述，药理学一般特性及其良好药理特点-主要指其耐受性和无过敏及过敏性现象-本发明葡聚糖产品适用于治疗肿瘤疾病，细菌或病毒感染症，以及任何希望调节免疫系统的病例：为此，本品将制成多种药用形式以适合于口服、非肠胃用、直肠内用或局部使用，例如片剂、胶囊、香粉、糖浆、溶液、小药水瓶装、乳状液、胶状、喷雾等任何方便形式，日用量由医生根据病情分析及病人本身条件（体重、性别、年龄）决定，剂量为0.1-50mg/kg，分一次或多次服用。
Claims (8)
1、具有下述特征的葡聚糖：
-β(1-3)与β(1-6)键之比为1∶1；
-几丁质的重量含量为3-5%；
-残留蛋白质的含量低于0.3%；
-不含甘露聚糖；
-增强NK细胞的体外细胞毒活性。
2、权利要求1的葡聚糖可从酵母细胞中得到。
3、权利要求2的葡聚糖可从嗜热酿酒酵母或白色念珠菌中获得。
4、权利要求3的葡聚糖可从白色念珠菌ATCC20955中获得。
5、制备权利要求1-4的葡聚糖的方法，其包括：
a）在含低葡萄糖的液体培养基中培养微生物;
b）在高于100℃高压消毒处理细胞;
c）反复用氢氧化钠和稀有机酸提取;
d）用去污剂高温处理提取物。
6、权利要求5的方法，其中涉及到的去污剂为1-5%的十二烷基硫酸钠。
7、将权利要求1-5的葡聚糖用于制备具有免疫刺激活性的药物。
8、含权利要求1-5的葡聚糖作主要成份及适宜载体的药物组合物。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IT92A001967 | 1992-08-10 | ||
| ITMI921967A IT1256035B (it) | 1992-08-10 | 1992-08-10 | Glucani ad attivita' immunostimolante |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN1082056A true CN1082056A (zh) | 1994-02-16 |
Family
ID=11363857
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN93109362A Pending CN1082056A (zh) | 1992-08-10 | 1993-08-06 | 具有免疫刺激活性的葡聚糖 |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0654047A1 (zh) |
| CN (1) | CN1082056A (zh) |
| AU (1) | AU4706393A (zh) |
| IT (1) | IT1256035B (zh) |
| MX (1) | MX9304793A (zh) |
| WO (1) | WO1994003500A1 (zh) |
| ZA (1) | ZA935730B (zh) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101117356B (zh) * | 2007-09-17 | 2010-06-09 | 中国农业大学 | 一种水不溶性β-1,3/1,6-葡聚糖的制备方法 |
| CN101885784A (zh) * | 2010-07-20 | 2010-11-17 | 三峡大学 | 一种魔芋细胞液体培养葡甘聚糖的方法 |
| CN1823092B (zh) * | 2003-07-16 | 2012-10-17 | 斯隆-凯特林癌症研究院 | 提高治疗的葡聚糖 |
| US8563531B2 (en) | 2002-08-13 | 2013-10-22 | Biothera, Inc. | Methods of using beta glucan as a radioprotective agent |
| US8883760B2 (en) | 2002-09-04 | 2014-11-11 | University Of Louisville Research Foundation, Inc. | Cancer therapy using beta glucan and antibodies |
| CN105907714A (zh) * | 2016-04-28 | 2016-08-31 | 王晓冰 | 一种改良的nk细胞培养方法 |
| WO2020034948A1 (en) * | 2018-08-13 | 2020-02-20 | Lifenergy Biotech Corp. | Method for in vitro activation of immune cells |
Families Citing this family (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0490995A1 (en) * | 1989-09-08 | 1992-06-24 | Alpha Beta Technology | Method for producing soluble glucans |
| US5811542A (en) * | 1989-09-08 | 1998-09-22 | Alpha-Beta Technology, Inc. | Method for producing soluble glucans |
| US5622939A (en) * | 1992-08-21 | 1997-04-22 | Alpha-Beta Technology, Inc. | Glucan preparation |
| US5488040A (en) * | 1989-09-08 | 1996-01-30 | Alpha-Beta Technology, Inc. | Use of neutral soluble glucan preparations to stimulate platelet production |
| FR2728269A1 (fr) * | 1994-12-20 | 1996-06-21 | Inst Francais Du Petrole | Procede de traitement d'un mout de fermentation contenant du polysaccharide |
| DE19629118C2 (de) * | 1996-07-19 | 2001-11-29 | Mibelle Ag Cosmetics Buchs | Verfahren zur Isolierung von Glucan aus Hefe |
| US6046323A (en) * | 1997-07-29 | 2000-04-04 | The Collaborative Group, Ltd. | Conformations of PPG-glucan |
| AU6261999A (en) | 1998-09-25 | 2000-04-17 | Collaborative Group, Ltd., The | Very high molecular weight beta-glucans |
| US6369216B1 (en) | 1998-09-25 | 2002-04-09 | Biopolymer Engineering Pharmaceutical, Inc. | Very high molecular weight β-glucans |
| EP1414865B1 (en) | 2000-08-03 | 2014-04-09 | Abac R & D Ag | Isolation of glucan particles and uses thereof |
| SK285346B6 (sk) | 2004-01-14 | 2006-11-03 | Pleuran, S. R. O. | Spôsob prípravy fungálneho glukánového hydrogélu s antibakteriálnymi a imunostimulačnými účinkami |
| BR112023016249A2 (pt) * | 2021-02-14 | 2023-11-14 | Amyris Bio Products Portugal Unipessoal Lda | Glucanos de leveduras, métodos e usos dos mesmos |
| CN114376231A (zh) * | 2021-12-30 | 2022-04-22 | 汤臣倍健股份有限公司 | 酵母-β-葡聚糖在制备具有增强免疫力的药品或保健食品中的应用 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4992540A (en) * | 1984-11-28 | 1991-02-12 | Massachusetts Institute Of Technology | Glucan composition and process for preparation thereof |
| IT1232310B (it) * | 1989-09-04 | 1992-01-28 | Consiglio Nazionale Ricerche | Processo per la preparazione di un prodotto contenente glucano a partire da candida albicans bmm-12 |
| EP0490995A1 (en) * | 1989-09-08 | 1992-06-24 | Alpha Beta Technology | Method for producing soluble glucans |
-
1992
- 1992-08-10 IT ITMI921967A patent/IT1256035B/it active IP Right Grant
-
1993
- 1993-08-03 WO PCT/EP1993/002063 patent/WO1994003500A1/en not_active Application Discontinuation
- 1993-08-03 EP EP93917731A patent/EP0654047A1/en not_active Withdrawn
- 1993-08-03 AU AU47063/93A patent/AU4706393A/en not_active Abandoned
- 1993-08-06 MX MX9304793A patent/MX9304793A/es unknown
- 1993-08-06 CN CN93109362A patent/CN1082056A/zh active Pending
- 1993-08-06 ZA ZA935730A patent/ZA935730B/xx unknown
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8563531B2 (en) | 2002-08-13 | 2013-10-22 | Biothera, Inc. | Methods of using beta glucan as a radioprotective agent |
| US8883760B2 (en) | 2002-09-04 | 2014-11-11 | University Of Louisville Research Foundation, Inc. | Cancer therapy using beta glucan and antibodies |
| US9522187B2 (en) | 2002-09-04 | 2016-12-20 | University Of Louisville Research Foundation, Inc. | Cancer therapy using beta glucan and antibodies |
| CN1823092B (zh) * | 2003-07-16 | 2012-10-17 | 斯隆-凯特林癌症研究院 | 提高治疗的葡聚糖 |
| CN101117356B (zh) * | 2007-09-17 | 2010-06-09 | 中国农业大学 | 一种水不溶性β-1,3/1,6-葡聚糖的制备方法 |
| CN101885784A (zh) * | 2010-07-20 | 2010-11-17 | 三峡大学 | 一种魔芋细胞液体培养葡甘聚糖的方法 |
| CN105907714A (zh) * | 2016-04-28 | 2016-08-31 | 王晓冰 | 一种改良的nk细胞培养方法 |
| WO2020034948A1 (en) * | 2018-08-13 | 2020-02-20 | Lifenergy Biotech Corp. | Method for in vitro activation of immune cells |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ZA935730B (en) | 1994-03-03 |
| ITMI921967A1 (it) | 1994-02-10 |
| ITMI921967A0 (it) | 1992-08-10 |
| EP0654047A1 (en) | 1995-05-24 |
| MX9304793A (es) | 1994-05-31 |
| WO1994003500A1 (en) | 1994-02-17 |
| IT1256035B (it) | 1995-11-21 |
| AU4706393A (en) | 1994-03-03 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN1082056A (zh) | 具有免疫刺激活性的葡聚糖 | |
| EP0417254B1 (en) | Production of beta-1,3-glucan in algae | |
| CN111961617B (zh) | 一株高产免疫多糖和细菌素的多效枯草芽孢杆菌及应用 | |
| Varelas et al. | An evaluation study of different methods for the production of β‐D‐glucan from yeast biomass | |
| CN111978421B (zh) | 一种桑树桑黄多糖及其制备和用途 | |
| CN1796539A (zh) | 冬虫夏草大规模发酵生产及菌粉加工工艺 | |
| CN101492706A (zh) | 一种提高蛹虫草液体发酵虫草菌素产量的方法 | |
| Sánchez et al. | Polysaccharide production by submerged fermentation | |
| EP0459367B1 (en) | Method for preparing an antitumor dextran | |
| US8383368B2 (en) | Method for fermentative production of N-acetyl-D-glucosamine by microorganism | |
| CN103014095A (zh) | 戴氏绿僵菌gyya0601菌株用于产透明质酸的用途 | |
| CN102424802B (zh) | 一种短小芽孢杆菌和菌株培养方法及应用 | |
| KR102007421B1 (ko) | 락토바실러스 플란타륨(Lactobacillus plantarum) 유래의 다당체를 유효성분으로 포함하는 항-인플루엔자 바이러스용 조성물 및 상기 다당체의 제조방법 | |
| CN1294151C (zh) | 一种海洋真菌多糖及其提取方法和用途 | |
| CN1317382C (zh) | 血芝的液体发酵方法及获得的产品 | |
| CN1175766C (zh) | 利用细菌发酵生产多糖保健饮料的方法 | |
| CN1228449C (zh) | 灵芝菌丝体抗肿瘤水溶性杂多糖及其制备方法和用途 | |
| JP4422404B2 (ja) | 感染予防・治療剤および食品 | |
| JPS58198499A (ja) | エリスロマイシンｄおよびそのエステル類からなる抗生物質複合物およびその製法 | |
| CN112626149B (zh) | 桑黄发酵液多糖在抗禽流感病毒药物中的应用 | |
| JPH11209301A (ja) | 蛋白多糖体００４１ | |
| CN101525578A (zh) | 盾叶薯蓣内生真菌螺二萘类化合物的制备及作为杀菌剂的应用 | |
| CN108396042B (zh) | 一种小分子可溶性肽聚糖的制备方法 | |
| KR0140430B1 (ko) | 아스퍼질러스 푸미가투스 돌연변이 균주와 생산효고 및 이를 이용한 키토산-올리고당의 제조방법 | |
| CN100344747C (zh) | 硫酸化nf1菌多糖——抗艾滋病药及其制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C01 | Deemed withdrawal of patent application (patent law 1993) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |