CN108203707A - 鸡传染性支气管炎弱毒活疫苗gz14 f80株 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种鸡传染性支气管炎弱毒活疫苗GZ14 F80株，在2017年11月27保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：V201763，保藏地址为：中国，武汉，武汉大学；本发明还提供一种多肽，其氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示；提供编码多肽的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。所述鸡传染性支气管炎弱毒活疫苗株对各种鸡只均安全，且无副反应，将所述弱毒株制成疫苗安全有效，可保护同源强毒的攻毒，具有实际和广泛的应用价值。

Description

鸡传染性支气管炎弱毒活疫苗GZ14 F80株
技术领域
本发明涉及一种弱毒活疫苗，具体是一种鸡传染性支气管炎弱毒活疫 苗GZ14F80株，属于生物技术领域。
背景技术
禽传染性支气管炎(Infectious bronchitis，IB)是鸡的一种急性、 高度接触性传染的呼吸道疾病，是国际兽医局(OIE)及我国规定的家禽 B/二类传染病之一，其致病原是禽传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus，IBV)。IB以呼吸道症状、肾炎和生产性能下降为特征， 尤其是肉鸡发生以肾肿为特征的肾型传支后造成高死亡率，白羽肉鸡死淘 率可达到30％以上，优质肉鸡可造成15％左右的死亡率，发病肉鸡的增重 和饲料报酬降低，与大肠杆菌、支原体等混合感染引发气囊炎使肉鸡品质 下降。蛋雏鸡感染IB，除可引起死亡外，还会造成生殖系统永久非可逆损 伤，表现为输卵管和卵巢发育不良，或输卵管、子宫大量积水囊肿，造成 假母鸡，表现为无产蛋高峰，产蛋数量与产蛋质量下降、产白壳蛋、软壳 蛋、纱皮蛋和崎形蛋。部分IBV毒株还可以引起肠道、腺胃、肌肉的病变。 IB对各个日龄、各个品种鸡群都可造成危害，给全球养禽业造成巨大的经 济损失，是严重影响世界养禽业的重大传染病之一。
IBV属于套式病毒目(Nidovirales)冠状病毒科(Coronaviridae) 冠状病毒属(Coronavirus)，为γ-冠状病毒(Gammacoronavirus)的代 表毒株(King et al.,2011)，是有囊膜的、不分节段的单股正链RNA病 毒。IBV最突出的特点是血清型众多，且不同的血清型相互之间没有或仅 有很低的交叉免疫原性。目前己经报道IBV的血清型或基因型至少有30 多种，并且新的血清型、基因型和变异株仍然不断出现，不同血清型和基 因型间的交叉保护力很弱，目前我国至少存在7种基因型传支流行毒株， 这给IB的诊断、防治带来了非常大的困难。TW I型IBV于1990年后在我 国台湾爆发，2000年后，TW I型IBV在大陆地区逐步蔓延并成为继QX型 之后第二大优势IBV基因型(占分离毒株的25％左右)。TW I型IBV临床表现为间质性肾炎，致病力强，在基因型、血清型与目前商品疫苗毒株存 在差异，疫苗保护效果不佳。TW I型IBV给我国养禽业造成巨大损失。
疫苗在IBV的预防中起着非常重要的作用，目前，在我国使用的疫苗 主要有灭活苗、弱毒苗。灭活苗主要在种鸡、蛋鸡开产前使用，但是仍存 在灭活苗使用量大，需要配合佐剂，制备复杂，成本较高等众多问题。除 此之外，灭活苗还不能引起粘膜免疫和细胞免疫。弱毒活苗是由驯化好的 毒株通过鸡胚的连续传代致弱后制备的，弱毒苗能有效刺激机体的免疫系 统，可以同时激发细胞免疫、粘膜免疫和体液免疫，使用方便，生产成本 低。目前一般主要用于肉鸡、种鸡和蛋鸡的首免。传支弱毒活疫苗从1956 年开始在荷兰使用，H52，H120是目前全世界应用最广泛的活疫苗，尽管 我国一直广泛使用Mass型疫苗(H120、H52)，近年来有LDT3-A及QX型 等疫苗毒株陆续投入使用，但由于血清型、基因型差异，商品疫苗毒株对 TW I型IBV保护效果不佳，因此研制TW I型IBV疫苗毒株对于IBV防控 具有重要意义。
发明内容
本发明的目的是克服现有疫苗株不能够有效防治TW I型鸡传染性支气 管炎病毒流行毒株的攻击，防治效果不理想的缺陷，提供一种TW I型鸡 传染性支气管炎弱毒活疫苗GZ14F80株；
本发明的第二个目的是提供鸡传染性支气管炎弱毒活疫苗GZ14F80 株的应用；
本发明第三个目的是提供含有鸡传染性支气管炎弱毒活疫苗GZ14F80 株的药物。
发明人前期对2013～2015年中国分离株S1基因进行进化分析，TW I 型IBV已成为我国主要IBV基因型，占分离株25％左右，TW I型与我国常 用疫苗毒株(H120、H52、LDT3-A、4/91等)S1基因相似度较低(76.5～ 82.5％)，进化距离较远，进一步研究发现，TW I型毒株与疫苗株H120、 H52、LDT3A、4/91血清型不同，鸡群免疫国内主要弱毒疫苗(H120、H52、LDT3-A、4/91等)，然后用TW I基因型毒株攻毒，表明商品疫苗毒株不能 对目前的优势流行毒株提供足够的保护。
本发明所述弱毒活疫苗GZ14F80株是由GZ14强毒株F5经多次传代 致弱，分离获得，具体是使用9～11日龄SPF鸡胚对GZ14株进行连续传 代致弱，每个代次通过尿囊腔接种5枚鸡胚，每胚接种200μL，置37℃ 孵育36～48h后，无菌收集鸡胚尿囊液，进行下一次传代，连续传至80 代，命名为GZ14F80。
GZ14F80株的生物学特征如下：病毒尿囊液无血凝性，接种9～11 日龄鸡胚可致鸡胚发育受阻或死亡，对SPF鸡无致病性，病毒形态学观察 为典型冠状病毒。
本发明的目的是通过以下技术方案予以实现的：
鸡传染性支气管炎弱毒活疫苗GZ14F80株，在2017年11月27保藏 于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：V201763，保藏地址 为：中国，武汉，武汉大学。
本发明还提供一种多肽，其氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。
本发明还提供编码所述多肽的核苷酸序列，所述序列如SEQ ID NO：1 所示。
经测序和分析，所述疫苗GZ14F80株的基因编码的多肽序列如SEQ ID NO：2所示；所述疫苗GZ14F80株的基因的核苷酸序列为SEQ ID NO：1 所示，或者在SEQ ID NO：1所述序列基础上经替换、缺失和/或添加一个 或多个核苷酸且编码SEQ ID NO：2所述蛋白同等功能的基因序列。
本发明还提供所述鸡传染性支气管炎弱毒活疫苗GZ14F80株在制备 治疗鸡传染性支气管炎的药物中的应用。
本发明还提供含有所述鸡传染性支气管炎弱毒活疫苗GZ14F80株的 药物；具体地可以是疫苗，所述疫苗包括所述鸡传染性支气管炎弱毒活疫 苗GZ14F80株和药学上可以接受的冻干保护剂。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
本发明提供了一种鸡传染性支气管炎弱毒活疫苗GZ14 F80株，在2017 年11月27保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：V201763， 分类命名Infectiousbronchitis virus,IBV GZ14 F80，保藏地址为： 中国，武汉，武汉大学；所述弱毒株对各种鸡只均安全，且无副反应，将 所述弱毒株制成疫苗安全有效，可保护同源强毒的攻毒，具有实际和广泛 的应用价值。
附图说明
附图1为本发明强毒株(GZ14)S1基因与参考毒株构建进化树，GZ14 株为TWI型IBV。
附图2为本发明弱毒株(GZ14F80)株在N基因终止密码子下游3个 碱基后的3’-UTR出现34nt缺失。
具体实施方式
下面通过具体实施例与附图对本发明进一步具体描述，本发明的设计 思想或同类物质的简单替代属于本发明的保护范围，下述所使用的实验方 法若无特殊说明，均为本技术领域现有常规的方法，所使用的配料或材料， 如无特殊说明，均为通过商业途径可得到的配料或材料。
实施例一：传染性支气管炎病毒GZ14株分离鉴定
GZ14于2014年从广东省广州市周边鸡场35日龄发病黄羽肉鸡中分离 鉴定，具体过程如下：
a.病毒的分离培养
无菌采集病死鸡肾脏、脾脏、肺脏、气管，按体积比1：5的比例加 入灭菌磷酸盐缓冲溶液，研磨，冻融3次，12000rpm离心10min，上清液 经0.22μm滤器过滤除菌后尿囊腔接种10日龄SPF鸡胚10枚，每胚接种 0.2ml，接种后的鸡胚37℃孵育，每天照胚2次，弃去24小时之内的死亡 胚，48小时取5枚收获尿囊液，其余继续孵育至144小时，记录鸡胚病变 情况，如此盲传5代，收获的病毒存于-80℃，至第3代鸡胚呈现典型的 传支病毒病变，表现为鸡胚发育迟缓、胚体蜷缩失水等，至第5代(GZ14 F5)测定病毒含量为105.5EID50/0.1ml；
b.病毒鉴定
b.1血凝性：1～5代收获的尿囊液进行血凝试验，结果各代次尿囊液 对1％的鸡红细胞均不发生凝集，病毒无血凝性，排除为正粘病毒、副粘病 毒、腺病毒等有血凝性的禽类病毒的可能性；
b.2PCR鉴定：第五代尿囊液200μl，TAKARA公司RNA提取试剂RNAiso Plus提取病毒RNA，用N基因引物进行RT-PCR；
上游:5’-CGGAGCAATAGCAAGAAAAGC-3’
下游:5’-GCAGCAACCCACACTATACCATC-3’
PCR产物经1.5％琼脂糖凝胶电泳，结果在500bp左右有目的条带，证 明分离病毒为IBV；
b.3传支S1基因测序与分析
第五代(GZ14F5)尿囊液200μl，TAKARA公司RNA提取试剂RNAiso Plus提取病毒RNA，扩增S1基因，IBV S1上游：5’ -AAGACTGAACAAAAGACCGACT-3’；下游：5’-CAAAACCTGCCATAACTAACATA-3’； 产物长度1700bp左右，PCR产物经1.5％琼脂糖凝胶电泳，目的条带清晰 无杂带，直接送至华大基因公司测序，S1基因序列拼接整理后全长1620bp，GZ14株S1基因序列提交Genebank，Accession No：KX107660，与H120 (EU822341)、H52(AF352315)、W93(AY842862)、M41(DQ664534)、4/91 (JN192154)、LDT3-A(AY702975)疫苗株的S1基因进行多重比对，同源 性较低(均低于83％)，分别为77.9％、78.3％、75.5％、77.8％、78.6％、 82.5％，S1基因编码的纤突蛋白位于病毒的表面，诱导机体产生中和抗体， 与机体的保护反应密切相关，S1基因是病毒演化过程中最易发生变异的基 因，其序列相差大于5％可能就不能产生或不能完全产生交叉保护作用；
b.4形态学观察
GZ14F80株病毒尿囊液经离心、磷钨酸负染后在电镜下可见到直径为 80～120nm的冠状毒，病毒粒子呈多形性，多数为圆形，有囊膜，表面有 呈松散、均匀排列的冠状突起，具有冠状病毒典型形态；
b.5动物回归试验
7日龄SPF鸡20只，滴鼻点眼途径接种第五代病毒(GZ14F5)，100 μl每只，鸡群在攻毒后2天开始出现临诊症状，3天开始有鸡只死亡， 发病率为100％(10/10)，死亡率为50％(5/10)，发病鸡表现出轻度呼吸 道症状，部分鸡精神不振，拉稀，饮水增多，采食量下降，病死鸡极度消 瘦，病死鸡只均有轻微气管粘液、出血，有气囊炎，肾脏明显肿大，呈花 斑，有大量白色尿酸盐沉积，从第14天以后临床症状逐渐出现好转，攻 毒后20天，基本上恢复正常，用分离到的传支病毒感染易感雏鸡可复制 出临床病例；
b.6血清中和试验
GZ14株阳性血清制备：14日龄SPF鸡20只饲养于负压隔离器中，滴 鼻点眼途径接种GZ14株(GZ14F5)第五代病毒，剂量0.1ml/只，10天 后将没有死亡的小鸡颈部皮下注射GZ14株油乳剂灭活苗0.3ml，14天后 再次颈部皮下注射GZ14株油乳剂灭活苗0.5m1，10天后心脏采血，无菌 分离血清，按每毫升2000单位加入青链霉素，分装备用。
与类症疾病阳性血清的交叉中和试验：将GZ14株第五代毒(GZ14F5) 稀释1000倍，分别与等量的ND、IBD、ITL、IB(M41)阳性血清(购自中 国兽医药品监察所)及GZ14阳性血清混合后，在37℃感作60min，各接 种10日龄SPF鸡胚5枚，每胚尿囊腔内0.2mL。病毒对照组为GZ14株10-4稀释毒与等量盐水混合。37℃孵化，观察6d，结果见表1：
表1与类症疾病阳性血清中和试验结果
与IB阳性血清的中和试验：用生理盐水将GZ14株稀释至每0.1ml含 100个EID50；IBV M41株、4/91株、LDT3-A株及GZ14株阳性血清，分别 作16倍稀释，稀释的病毒和血清等量混合，37℃感作60min，分别经尿囊 腔接种SPF鸡胚，每份血清5枚，每胚0.2mL，37℃孵化168h，以在24～ 168h内死亡的鸡胚及144小时的活胚中，其胚体具有失水、蜷缩、发育小 等特异性病变，作为是否具有IB特异性病变的感染指标。结果见表2：
表2与IB阳性血清的中和试验结果
组别 鸡胚病变(平均胚重) 判定
GZ14+M41血清 5只鸡胚1死4只发育受阻(12.5g) 不被中和
GZ14+4/91血清 5只鸡胚1死4只发育受阻(10.3g) 不被中和
GZ14+LDT3-A血清 5只鸡胚发育受阻(11.6g) 不被中和
GZ14病毒对照 5只鸡胚发育受阻(9.8g) 全部感染
结果表明，ND、IBD、ILT的阳性血清不能中和IBV GZ14株病毒。IBV， GZ14株能被GZ14株阳性血清完全中和，所有鸡胚发育正常，IBV M41株、 4/91株、LDT3-A株阳性血清不能中和GZ14株病毒。
至此通过病毒的分离鉴定、PCR鉴定、形态学观察、血清鸡胚中和试 验、动物回归实验等病原生物学特性研究，得到一株TWI型禽传染性支气 管炎病毒，命名为GZ14株，GZ14全基因序列已测序完成并上传GenBank， Accession No：KT946798。
实施例二GZ14 F80弱毒株的培育
a.毒株鸡胚连续传代致弱
使用9～11日龄SPF鸡胚对GZ14株进行连续传代致弱，每代次通过 尿囊腔接种10枚鸡胚，0.1ml/枚，37℃孵育，弃去24小时内死亡鸡胚， 36小时收获活胚，无菌收集胚液进行下一次传代，其余留至144小时观察 鸡胚有无传支病变，如此连续传代至第120代，期间间隔一定代次进行病 毒含量、无菌和支原体检测、外源病毒检测、和对易感雏鸡的安全性试验 以确定毒力是否致弱；
b.病毒含量测定
传代过程中分别测定F5、F30、F40、F60、F80、F90、F120代病毒的 EID50，病毒用灭菌生理盐水10倍倍比稀释，选取5个稀释度(10-4～10-8) 分别接种5枚10日龄SPF鸡胚，每胚0.1m1，37℃孵育至144小时，24 小时内死亡鸡胚不计，记录感染鸡胚数，按Reed-Muench法计算EID50。测 定结果见表3：
表3 GZ14传代毒不同代次滴度值
毒株GZ14传代毒可以很快适应鸡胚，传代后病毒滴度持续升高，最高 为GZ14F80代达到107.2EID50/0.1ml；
c.无菌和支原体检测
分别将F5、F30、F40、F60、F80、F90、F120代病毒按照现行《中华 人民共和国兽药典》附录进行无菌和支原体检验，各代次检测结果均为阴 性；
d.外源病毒检测
分别将F5、F30、F40、F60、F80、F90、F120代病毒按照现行《中华 人民共和国兽药典》附录进行外源病毒检测，各代次检测结果均为阴性；
e.对易感雏鸡的安全性试验
连续传代过程中分别进行F5、F30、F40、F60、F80、F90、F120代病 毒的安全性试验，1日龄SPF雏鸡65只随机分为7组，试验组滴鼻点眼途 径接种各代次病毒，每只滴鼻105.0EID50/200μl，另一组作为对照不做处 理，负压隔离器中饲养，自由饮水采食，接种后每日观察，记录鸡群的发 病、死亡情况，及时剖检死亡鸡，观察2周后剖检存活鸡，记录肾脏气管 等器官的病变情况，结果见表4：
表4 GZ14不同代次毒病毒对1日龄SPF鸡的致病力评估
分组 代次 剂量(EID50) 发病率 死亡率
1 GZ14F5 105 10/10 5/10
2 GZ14F30 105 10/10 4/10
3 GZ14F60 105 1/10 0/10
4 GZ14F80 105 0/10 0/10
5 GZ14F90 105 0/10 0/10
6 GZ14F120 105 0/10 0/10
7 空白对照 生理盐水 0/5 0/5
随着病毒逐步适应鸡胚，其对鸡的致病力在逐步下降，F5、F30、F60， 接种后雏鸡发病率100％、100％、10％，死亡率分别为50％、40％、10％，F60 致病力已明显下降，仅有1只(10％)表现一过性呼吸道症状，无死亡， F80，F90、F120代鸡群在接种后精神采食完全正常，无呼吸道症状，无死 亡，剖检气管和肾脏无病变，传代至F80代病毒已没有致病性；
f.GZ14 F80的免疫原性试验
对已致弱的GZ14 F80病毒进行免疫原性测定，1日龄SPF雏鸡35只 随机分为4组，试验组以105.0EID50/只、104.0EID50/只、103.5EID50/只、 103.0EID50/只四个不同剂量滴鼻点眼途径免疫GZ14F80病毒，200μl/只， 第4组作为对照不做处理，负压隔离器中饲养，自由饮水采食，接种后每 日观察记录鸡群的情况，2周后用同源强毒GZ14F5进行攻毒，滴鼻点眼 途径，每只105.5EID50/200μl，攻毒后每日观察记录鸡群的发病、死亡情 况，及时剖检死亡鸡，观察2周后剖检存活鸡，记录肾脏、气管等器官的 病变情况，免疫后实验组和对照组鸡群均正常，攻毒后对照组第3天鸡只 表现呼吸道症状，部分鸡精神不振，排水便，发病率100％，共5只死亡， 存活鸡有不同程度的气管出血、气管有粘液，肾脏肿大苍白等病变，第4 组(103.0EID50/只免疫组)出现2只鸡精神不振，排水便，发病率20％，而 其他免疫组均无发病，无死亡；结果见表5：
表5 GZ14 F80不同免疫剂量免疫保护率
结论：GZ14F80的免疫剂量≥103.5EID50/只时可达到满意的保护效果， 保护率100％；
g.弱毒疫苗株GZ14F80全基因测序
GZ14F80已完成全基因测序，GZ14F80S1基因和GZ14F80 3’-UTR 序列如SEQ IDNO：3所示；
GZ14经过SPF鸡胚连续传代120次，病毒在SPF鸡胚上适应良好，D40 以后毒价稳定在106.5EID50/0.2ml以上，至第80代病毒已完全致弱且保留 有良好的免疫原性，且细菌、支原体、其他外源病毒检测结果均为阴性， GZ14 F80可以作为传支弱毒疫苗原始种毒；
将所得毒株提交保藏，所述毒株的保藏名称为鸡传染性支气管炎病毒 GZ14 F80株，保藏时间为2017年11月27日，保藏编号为CCTCC NO：V201763， 保藏单位是中国典型培养物保藏中心，保藏地址为：中国，武汉，武汉大 学。
所述毒株的S1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，其编码的多 肽序列如SEQID NO：2所示。
实施例三GZ14 F80弱毒疫苗制备
a.IBV病毒液的制备
将实施例二获得的GZ14F80种毒用灭菌生理盐水稀释1000倍，尿囊 腔接种100枚10日龄SPF鸡胚，每胚0.2ml，密封针孔，置37℃继续孵 育，不必翻蛋，接种后24小时内照蛋1次，弃去死胚，以后每隔4小时 照蛋1次，将死亡的鸡胚随时取出，至36小时，不论死亡与否，将全部 鸡胚取出，气室向上直立，置于4℃冷却12小时，将冷却的鸡胚取出，消 毒气室部位，然后以无菌手术剥除气室部卵壳，揭去卵壳膜，剪破绒毛尿 囊膜及羊膜(勿使卵黄破裂)，吸取鸡胚液，分别取样进行检验，置于-20℃ 保存备用；
b.IBV毒液的检验
收获的病毒液按现行《中国兽药典》附录方法逐瓶作无菌检验及红细 胞凝集试验，并抽样一份测定病毒含量(EID50)，结果收获的病毒液无菌 生长，对1％鸡红细胞悬液凝集试验应为阴性，每0.1ml病毒含量为106.5EID50以上；
c.配苗与分装
将检验合格的病毒液用4层灭菌纱布滤过，混合于同一容器内，加入 等量的5％蔗糖脱脂奶作稳定剂，同时按每毫升1000单位加入青链霉素， 充分摇匀，定量分装，使每羽份病毒含量104.0EID50，每瓶1000羽份；
d.冷冻干燥，压盖贴签，-15℃以下保存；
e.疫苗的安全性试验
以10倍免疫剂量免疫1日龄SPF鸡，检验疫苗的安全性，疫苗用灭 菌生理盐水适当稀释免疫1日龄SPF鸡10只，每只滴鼻200μl(含10 羽份疫苗)，同时设10只不免疫对照，负压隔离器饲养，自由饮水采食， 每日观察记录鸡只的健康情况，观察21天，结果免疫组与对照组鸡只无 发病，增重无差异，表明疫苗是安全的；
f.疫苗的效力试验
1日龄SPF鸡20只分为2组，一组免疫一羽份上述制备得到的GZ14 F80 活疫苗，另一组不处理作为对照，负压隔离器中饲养，自由饮水采食，接 种后每日观察记录鸡群的情况，2周后用强毒GZ14F5进行攻毒，滴鼻点 眼途径每只105.5EID50/0.2ml，攻毒后每日观察记录鸡群的发病、死亡情况， 及时剖检死亡鸡，观察2周，剖检存活鸡，记录肾脏、气管等器官的病变 情况。
免疫后实验组和对照组鸡群均正常，攻毒后对照组第5天有鸡只鸡精 神不振，排水便，共5只死亡，存活鸡有不同程度的肾脏肿大苍白等病变， 发病率100％(10/10)，死亡率50％(5/10)，而免疫组无发病死亡，鸡只 健康无异常，表明用致弱的GZ14F80病毒制备的活疫苗安全有效，可以 保护同源强毒的攻毒。
基因序列表
SEQ ID NO：1(GZ14 F80的S1基因的核苷酸序列)
atgttggtgaagtcactgtttttagtgactcttttgtttgcactatctagtgctattttttatgataatgatacgtacgtttactactaccagagcgccttcagaccgcctaatggttggcatctacaaggtggcgcttatgcagtagtaaatgtttcttcacaaactaacaatgcaggtgcagctccagaatgcactgttggtattattagtggtgatacagttgttaatgcctcgtctatagctatgacagcacctgtaggtcaaggtatgcagtggtctaagtcacaattttgtactgcacactgcaatttttctgattttacagtgtttgttacacattgttatgccccgggcaacggtaaatgtcctttaacgggccttattccacgaggtcatattcgtatttctgctatgcggaatcatactttattctataatttaacagttagtgtatctaattaccctacttttaaatctttgcaatgcgttgataatttcacatctgtttacttaaatggtaaccttgtcttcacttctaatcagactacagacgttataagtgcaggtgtgtactttaaatcaggtgggcctataacctataaagttatgaaggaatttaaggttttggcttattttgttaatggtactgcacaagatgttattttgtgtgatgacacacctagaggtttgctagcatgtcaatataatactggcaatttttcagatggtttttatccttttactaatagtagcttagttaagcaaaggtttgttgtttatcgtgagaatagtgttaatactactcttactttaaccaattacacctttcataatgagactactgctcagcctaattcaggtggtgtccataccatctcaacttatcaaacacaaactgctcagagtggttattataattttaatttatcatttctgagtagttttgtgtataaagcttctgattatatgtatgggtcctaccacccacgatgtagttttagaccagaaactattaataatggcttgtggtttaattcactgtcagtctcattagcctatggcccccttcaaggtgggtgtaagcaatcagtttttcaaggcagagctacttgttgttatgcgtattcctataacggaccacgtatgtgtaaaggcttttatagtggtcagttattacaagattttgaatgtggactgttggtttatgttactaagagtgatggctctcgtatacaaacagccacaaaaccaccgctcataactcaacacaattataataatattactttaaatacttgtgttgagtacaatatatatggcagagttggccaaggctttattattaatgtaactgactccgcagctagctataattacttagcagatgctggattggcaattttagatacttcaggtgccatagacactttcgttgtacaaggtgaatatggtcccaactattataaggttaacccttgtgaagatgttaaccagcagtttgtagtgtcaggcggtaagttagtaggcatcctgacttctcgtaatgaaactggttctcagcctcttgaaaatcagttttatattaagttaactaatggaagccgtcgttttagacgt
SEQ ID NO：2(SEQ ID NO：1编码的氨基酸序列)
MLVKSLFLVTLLFALSSAIFYDNDTYVYYYQSAFRPPNGWHLQGGAYAVVNVSSQTNNAGAAPECTVGIISGDTVVNASSIAMTAPVGQGMQWSKSQFCTAHCNFSDFTVFVTHCYAPGNGKCPLTGLIPRGHIRISAMRNHTLFYNLTVSVSNYPTFKSLQCVDNFTSVYLNGNLVFTSNQTTDVISAGVYFKSGGPITYKVMKEFKVLAYFVNGTAQDVILCDDTPRGLLACQYNTGNFSDGFYPFTNSSLVKQRFVVYRENSVNTTLTLTNYTFHNETTAQPNSGGVHTISTYQTQTAQSGYYNFNLSFLSSFVYKASDYMYGSYHPRCSFRPETINNGLWFNSLSVSLAYGPLQGGCKQSVFQGRATCCYAYSYNGPRMCKGFYSGQLLQDFECGLLVYVTKSDGSRIQTATKPPLITQHNYNNITLNTCVEYNIYGRVGQGFIINVTDSAASYNYLADAGLAILDTSGAIDTFVVQGEYGPNYYKVNPCEDVNQQFVVSGGKLVGILTSRNETGSQPLENQFYIKLTNGSRRFRR
序列表
<110> 华南农业大学
<120> 鸡传染性支气管炎弱毒活疫苗GZ14 F80株
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 2
<211> 1620
<212> DNA
<213> 鸡传染性支气管炎病毒GZ14 F80株( Infectious bronchitis virus, IBVGZ14 F80)
<400> 2
atgttggtga agtcactgtt tttagtgact cttttgtttg cactatctag tgctattttt 60
tatgataatg atacgtacgt ttactactac cagagcgcct tcagaccgcc taatggttgg 120
catctacaag gtggcgctta tgcagtagta aatgtttctt cacaaactaa caatgcaggt 180
gcagctccag aatgcactgt tggtattatt agtggtgata cagttgttaa tgcctcgtct 240
atagctatga cagcacctgt aggtcaaggt atgcagtggt ctaagtcaca attttgtact 300
gcacactgca atttttctga ttttacagtg tttgttacac attgttatgc cccgggcaac 360
ggtaaatgtc ctttaacggg ccttattcca cgaggtcata ttcgtatttc tgctatgcgg 420
aatcatactt tattctataa tttaacagtt agtgtatcta attaccctac ttttaaatct 480
ttgcaatgcg ttgataattt cacatctgtt tacttaaatg gtaaccttgt cttcacttct 540
aatcagacta cagacgttat aagtgcaggt gtgtacttta aatcaggtgg gcctataacc 600
tataaagtta tgaaggaatt taaggttttg gcttattttg ttaatggtac tgcacaagat 660
gttattttgt gtgatgacac acctagaggt ttgctagcat gtcaatataa tactggcaat 720
ttttcagatg gtttttatcc ttttactaat agtagcttag ttaagcaaag gtttgttgtt 780
tatcgtgaga atagtgttaa tactactctt actttaacca attacacctt tcataatgag 840
actactgctc agcctaattc aggtggtgtc cataccatct caacttatca aacacaaact 900
gctcagagtg gttattataa ttttaattta tcatttctga gtagttttgt gtataaagct 960
tctgattata tgtatgggtc ctaccaccca cgatgtagtt ttagaccaga aactattaat 1020
aatggcttgt ggtttaattc actgtcagtc tcattagcct atggccccct tcaaggtggg 1080
tgtaagcaat cagtttttca aggcagagct acttgttgtt atgcgtattc ctataacgga 1140
ccacgtatgt gtaaaggctt ttatagtggt cagttattac aagattttga atgtggactg 1200
ttggtttatg ttactaagag tgatggctct cgtatacaaa cagccacaaa accaccgctc 1260
ataactcaac acaattataa taatattact ttaaatactt gtgttgagta caatatatat 1320
ggcagagttg gccaaggctt tattattaat gtaactgact ccgcagctag ctataattac 1380
ttagcagatg ctggattggc aattttagat acttcaggtg ccatagacac tttcgttgta 1440
caaggtgaat atggtcccaa ctattataag gttaaccctt gtgaagatgt taaccagcag 1500
tttgtagtgt caggcggtaa gttagtaggc atcctgactt ctcgtaatga aactggttct 1560
cagcctcttg aaaatcagtt ttatattaag ttaactaatg gaagccgtcg ttttagacgt 1620

Claims (7)

1.鸡传染性支气管炎弱毒活疫苗GZ14F80株，其特征在于，在2017年11月27保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：V201763，保藏地址为：中国，武汉，武汉大学。
2.根据权利要求1所述鸡传染性支气管炎弱毒活疫苗GZ14F80株，其特征在于，还提供一种多肽，所述疫苗GZ14F80株的基因编码的多肽序列如基因序列表SEQ ID NO：2所示。
3.根据权利要求1所述鸡传染性支气管炎弱毒活疫苗GZ14F80株，其特征在于，经测序和分析，所述疫苗GZ14F80株的基因的核苷酸序列为基因序列表SEQ ID NO：1所示。
4.根据权利要求1或2或3所述鸡传染性支气管炎弱毒活疫苗GZ14F80株，其特征在于，在SEQ ID NO：1所述序列基础上经替换、缺失和/或添加一个或多个核苷酸且编码SEQ IDNO：2所述蛋白同等功能的基因序列。
5.根据权利要求1所述鸡传染性支气管炎弱毒活疫苗GZ14F80株，其特征在于，还提供鸡传染性支气管炎弱毒活疫苗GZ14F80株在制备治疗鸡传染性支气管炎的药物中的应用。
6.根据权利要求1所述鸡传染性支气管炎弱毒活疫苗GZ14F80株，其特征在于，还提供含有鸡传染性支气管炎弱毒活疫苗GZ14F80株的药物；具体地可以是疫苗。
7.根据权利要求1或6所述鸡传染性支气管炎弱毒活疫苗GZ14F80株，其特征在于，所述疫苗包括鸡传染性支气管炎弱毒活疫苗GZ14F80株和药学上可以接受的冻干保护剂。
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