CN108174775A - 一种提高花生芽中白藜芦醇含量的方法 - Google Patents

一种提高花生芽中白藜芦醇含量的方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种提高花生芽中白藜芦醇含量的方法，包括以下步骤，筛选饱满一致的花生，放入40℃的水中恒温浸泡4h后取出；配制一定浓度的激素和无机盐自来水溶液，形成培养液，置于微波炉中加热杀菌1～2分钟，取出培养液，冷却至室温后，加入浸泡处理后花生，形成花生培养混合液，其上铺上一层纱布，置于温度为20～30℃，湿度为55～60％的阴暗无光环境下，培养一段时间后，取出花生，提取其中的白藜芦醇并测定；该方法工艺简单，微波处理培养液，可有效快速的杀菌消毒，无机盐(NH4)2S2O8与阿魏酸、丁香酸、水杨酸、吲哚乙酸和吲哚丁酸共同配制培养液，更能显著提高花生的生长速度，促进花生细胞的增殖，显著提高花生中白藜芦醇的含量。

Description

一种提高花生芽中白藜芦醇含量的方法
技术领域
本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种提高花生芽中白藜芦醇含量的方法。
背景技术
白藜芦醇是植物体内用于抵抗病原侵染的一种二苯乙烯芪类多酚物质，可以清除体内过多的氧自由基，有效的延缓衰老过程中过氧化造成的损伤，有效的延缓衰老。白藜芦醇具有抗肿瘤作用、抗癌、保护心血管、抗氧化、抗自由基、抗菌和抗真菌、抗炎、保护肝脏等作用。因此，它被誉为继紫杉醇之后的又一个绿色抗癌药物。
白藜芦醇主要来源于葡萄、虎杖、花生、桑椹等植物中。我国花生的资源十分丰富，并且廉价易得。所以研究花生发芽期白藜芦醇含量变化和各种促进剂对其影响，可以使而花在提取白藜芦醇时更加具有针对性，同时也可以在生产过程中节约成本，带来更好效益。但是会存在花生生长周期较长和白藜芦醇含量低的问题。
由于海花一号花生生长期间对外界环境要求不高并且具有高产、颗粒大而饱满便于观察等优点，本发明采用海花一号花生为代表进行研究。
发明内容
为解决上述问题，本发明提供了一种提高花生芽中白藜芦醇含量的方法。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：
一种提高花生芽中白藜芦醇含量的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
(1)筛选颗粒饱满，大小一致的花生，放入40℃的水中恒温浸泡4h后，取出备用；
(2)配制一定浓度的激素和无机盐自来水溶液，形成培养液；
(3)将上述培养液置于微波炉中加热杀菌1～2分钟后，取出培养液，冷却至室温后，加入一定量的步骤(1)处理后花生，形成花生培养混合液；
(4)将所述花生培养混合液容器表面铺上一层纱布，置于温度为20～30℃，湿度为55～60％的阴暗无光环境下，培养一段时间后，取出花生，提取其中的白藜芦醇；
所述激素包括以下组分：阿魏酸、丁香酸、水杨酸、吲哚乙酸和吲哚丁酸。
作为优选，所述步骤(2)中，无机盐为CuCl2、FeSO4、CaCl2、(NH4)2S2O8、NaHCO3或Na2CO3中的至少一种。
作为优选，所述无机盐为(NH4)2S2O8。
作为优选，所述阿魏酸、丁香酸、水杨酸、吲哚乙酸和吲哚丁酸的浓度分别为200、300、25、400、50mg/L。
作为优选，所述微波炉的加热功率为100～300W，微波有着很好的热效应，培养花生前对培养液进行杀菌消毒，避免有害细菌争夺培养液中营养物质和对花生生长过程产生的负作用，微波对微生物有着很好的杀菌效果，并且方便快捷。
作为优选，所述步骤(4)中，花生的培养时间为5天。
本发明的有益效果是：(1)使用微波对培养花生前的培养液进行杀菌消毒，方便快捷，操作简单，节省时间；(2)阿魏酸、丁香酸、水杨酸、吲哚乙酸和吲哚丁酸的协同作用，相对于单一激素，更能提升花生的生长速度，从而在花生细胞生长过程中提高白藜芦醇的合成量；(3)无机盐(NH4)2S2O8能够促进花生的生长，特别是与阿魏酸、丁香酸、水杨酸、吲哚乙酸和吲哚丁酸共同配制培养液，更能显著提高花生的生长速度，促进花生细胞的增殖，显著提高花生中白藜芦醇的含量。
具体实施方式
下面通过具体实施例，对本发明的技术方案作进一步的具体说明。
实施例1：
白藜芦醇的提取方法：
称取培养好的花生30g于烧杯中，加入60mL无水乙醇后，一并倒入高速组织捣碎机中提取1-2min，将捣碎后的混合液倒回烧杯中超声提取30min后，放入50mL离心管中再于4000r/min的离心机中离心10min，分出上层清液约45mL，然后用0.22μm滤膜过滤，滤液经高效液相色谱检测白藜芦醇的含量。
实施例2：
白藜芦醇的含量的测量方法：
(1)高效液相色谱条件：色谱柱为C18柱，250mm X 4.6mm，5.0μm；流动相A为水，B为甲醇，流速比例为55∶45；检测波长为306nm；柱温为室温；进样量为10μL；
(2)标准曲线的绘制：备有100mg/L白藜芦醇对照品储备液，其中，溶剂为色谱级甲醇，将白藜芦醇对照品储备液逐级稀释成0.5mg/L、1.0mg/L、5.0mg/L、25.0mg/L、50.0mg/L浓度的白藜芦醇甲醇溶液，甲醇作为空白参比液，经高效液相色谱检测，得到峰面积Y和白藜芦醇浓度C(mg/L)之间的回归方程为：Y＝71.12C-33.67，相关系数R2＝0.999；
(3)检测白藜芦醇含量：如实施例1中白藜芦醇的提取滤液，经高效液相色谱检测到峰面积Y，代入上述回归方程，计算出滤液中白藜芦醇的浓度，根据滤液的体积，最终计算出花生中白藜芦醇的含量。
实施例3：
一种提高花生芽中白藜芦醇含量的方法，包括以下步骤：
(1)筛选颗粒饱满，大小一致的花生，放入40℃的水中恒温浸泡4h后，取出备用；
(2)将自来水置于微波炉中，微波功率300W，加热杀菌1分钟后，取出，冷却至室温后，加入步骤(1)处理后花生，花生在自来水中的浓度为100g/L，形成花生培养混合液；
(3)将所述花生培养混合液容器表面铺上一层纱布，置于温度为25～30℃，湿度为55～60％的阴暗无光环境下，分别培养1、3、5、7和10天后，取出花生，按实施例1的方法提取其中的白藜芦醇，测定的花生中白藜芦醇的含量分别为0.00052、0.00073、0.0012、0.00123和0.001(mg白藜芦醇/g花生)；
从实施例3可以看出培养时间为5天时，花生中白藜芦醇含量为一个小高峰，时间更长白藜芦醇含量反而会下降，从时间和成本方面考虑，选择最佳培养时间为5天，以下实施例的花生培养时间都为5天。
实施例4：
一种提高花生芽中白藜芦醇含量的方法，包括以下步骤：
(1)筛选颗粒饱满，大小一致的花生，放入40℃的水中恒温浸泡4h；
(2)配制培养液：配制浓度为50、100、200、300和500mg/L的阿魏酸自来水溶液，形成培养液；
(3)将上述培养液置于微波炉中，微波功率300W，加热杀菌1分钟后，取出培养液，冷却至室温后，加入步骤(1)处理后花生，花生在培养液中的浓度为100g/L，形成花生培养混合液；
(4)将所述花生培养混合液容器表面铺上一层纱布，置于温度为25～30℃，湿度为55～60％的阴暗无光环境下，培养5天后，取出花生，按实施例1的方法提取其中的白藜芦醇，测定的花生中白藜芦醇的含量分别为0.00138、0.0019、0.0021、0.00174和0.00157(mg白藜芦醇/g花生)。
实施例5：
按所述的相同步骤重复进行实施例4，但是阿魏酸变为水杨酸，水杨酸的加入量分别为25、50、100、200和300mg/L，测定的花生中白藜芦醇的含量分别为0.0018、0.0019、0.0023、0.002和0.0016(mg白藜芦醇/g花生)。
实施例6：
按所述的相同步骤重复进行实施例4，但是阿魏酸变为丁香酸，丁香酸的加入量分别为50、100、200和300mg/L，测定的花生中白藜芦醇的含量分别为0.00134、0.00156、0.00218和0.00119(mg白藜芦醇/g花生)。
实施例7：
按所述的相同步骤重复进行实施例4，但是阿魏酸变为吲哚乙酸，吲哚乙酸的加入量分别为100、200、300和500mg/L，测定的花生中白藜芦醇的含量分别为0.00155、0.00176、0.00205和0.00154(mg白藜芦醇/g花生)。
实施例8：
按所述的相同步骤重复进行实施例4，但是阿魏酸变为吲哚丁酸，吲哚丁酸的加入量分别为25、50、100和200mg/L，测定的花生中白藜芦醇的含量分别为0.00265、0.00299、0.00309和0.00125(mg白藜芦醇/g花生)，测定的花生的生长状态如表1所示；
表1花生的色泽和形态
吲哚丁酸浓度(mg/L) 色泽 形态
25 白色浅绿 芽干细长，发芽率正常
50 白色浅绿 芽干细长，发芽率正常
100 白色浅绿 芽干细长，发芽率正常
200 白色浅绿 芽干细长，发芽率低
从表1可以看出，吲哚丁酸激素量太多时，会抑制花生的生长，因此激素浓度需要在合适的范围内。
实施例9：
一种提高花生芽中白藜芦醇含量的方法，包括以下步骤：
(1)筛选颗粒饱满，大小一致的花生，放入40℃的水中恒温浸泡4h后，取出备用；
(2)配制培养液：在1L自来水中，加入吲哚乙酸400mg、吲哚丁酸50mg、阿魏酸200mg、丁香酸300mg和水杨酸25mg，形成培养液；
(3)将上述培养液置于微波炉中，微波功率100W，加热杀菌2分钟后，取出培养液，冷却至室温后，加入步骤(1)处理后花生，花生在培养液中的浓度为100g/L，形成花生培养混合液；
(4)将所述花生培养混合液容器表面铺上一层纱布，置于温度为20～25℃，湿度为55～60％的阴暗无光环境下，培养5天后，取出花生，按实施例1的方法提取其中的白藜芦醇，测定的花生中白藜芦醇的含量为0.0051(mg白藜芦醇/g花生)。
从实施例9相对于实施例4～8可以看出，阿魏酸、丁香酸、水杨酸、吲哚乙酸和吲哚丁酸的协同作用，显著提高了花生中白藜芦醇的含量。
实施例10：
一种提高花生芽中白藜芦醇含量的方法，包括以下步骤：
(1)筛选颗粒饱满，大小一致的花生，放人40℃的水中恒温浸泡4h后，取出备用；
(2)配制培养液：配制重量分数为0.05％的无机盐自来水溶液，形成培养液；
(3)将上述培养液置于微波炉中，微波功率100W，加热杀菌2分钟后，取出培养液，冷却至室温后，加入步骤(1)处理后花生，花生在培养液中的浓度为100g/L，形成花生培养混合液；
(4)将所述花生培养混合液容器表面铺上一层纱布，置于温度为20～25℃，湿度为55～60％的阴暗无光环境下，培养5天后，取出花生，按实施例1的方法提取其中的白藜芦醇，测定花生的生长状态和白藜芦醇的含量如表2所示；
表2不同无机盐培养液下的花生生长状态和白藜芦醇含量
由表2和实施例3的空白实验进行对比可以看出，对花生中白藜芦醇含量由提升的无机盐有CuCl2、FeSO4、CaCl2、(NH4)2S2O8、NaHCO3和Na2CO3，其中对白藜芦醇含量有明显提升的是CuCl2和(NH4)2S2O8，但是CuCl2有重金属离子，对花生生长有一定的毒害作用，培养出的花生芽小；而(NH4)2S2O8培养出的花生芽干粗壮，发芽率高。
实施例11：
一种提高花生芽中白藜芦醇含量的方法，包括以下步骤：
(1)筛选颗粒饱满，大小一致的花生，放入40℃的水中恒温浸泡4h后，取出备用；
(2)配制培养液：在1L自来水中，加入吲哚乙酸400mg、吲哚丁酸50mg、阿魏酸200mg、丁香酸300mg和水杨酸25mg，形成溶液；
(3)上述溶液中加入(NH4)2S2O8，配制不同重量份数的(NH4)2S2O8溶液，形成培养液；
(4)将上述培养液置于微波炉中，微波功率100W，加热杀菌2分钟后，取出培养液，冷却至室温后，加入步骤(1)处理后花生，花生在培养液中的浓度为100g/L，形成花生培养混合液；
(5)将所述花生培养混合液容器表面铺上一层纱布，置于温度为20～25℃，湿度为55～60％的阴暗无光环境下，培养5天后，取出花生，按实施例1的方法提取其中的白藜芦醇，测定的白藜芦醇的含量如表3所示；
表3不同重量份数(NH4)2S2O8培养液下花生中白藜芦醇的含量
由表3和实施例9～10对比可以看出，无机盐(NH4)2S2O8与阿魏酸、丁香酸、水杨酸、吲哚乙酸和吲哚丁酸共同配制培养液，更能显著提高花生中白藜芦醇的含量。
以上所述的实施例只是本发明的一种较佳的方案，并非对本发明作任何形式上的限制，对本领域熟悉的人员来说，可容易的实现另外的修改，在不违背权利要求及等同范围所限定的一般概念的情况下，本发明并不限于特定的细节。

Claims (6)

1.一种提高花生芽中白藜芦醇含量的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
(1)筛选颗粒饱满，大小一致的花生，放入40℃的水中恒温浸泡4h后，取出备用；
(2)配制一定浓度的激素和无机盐自来水溶液，形成培养液；
(3)将上述培养液置于微波炉中加热杀菌1～2分钟后，取出培养液，冷却至室温后，加入一定量的步骤(1)处理后花生，形成花生培养混合液；
(4)将所述花生培养混合液容器表面铺上一层纱布，置于温度为20～30℃，湿度为55～60％的阴暗无光环境下，培养一段时间后，取出花生，提取其中的白藜芦醇；
所述激素包括以下组分：阿魏酸、丁香酸、水杨酸、吲哚乙酸和吲哚丁酸。
2.根据权利要求1所述的一种提高花生芽中白藜芦醇含量的方法，其特征在于，所述步骤(2)中，无机盐为CuCl2、FeSO4、CaCl2、(NH4)2S2O8、NaHCO3或Na2CO3中的至少一种。
3.根据权利要求2所述的一种提高花生芽中白藜芦醇含量的方法，其特征在于，所述无机盐为(NH4)2S2O8。
4.根据权利要求1所述的一种提高花生芽中白藜芦醇含量的方法，其特征在于，所述阿魏酸、丁香酸、水杨酸、吲哚乙酸和吲哚丁酸的浓度分别为200、300、25、400、50mg/L。
5.根据权利要求1所述的一种提高花生芽中白藜芦醇含量的方法，其特征在于，所述步骤(3)中，微波炉的加热功率为100～300W。
6.根据权利要求1所述的一种提高花生芽中白藜芦醇含量的方法，其特征在于，所述步骤(4)中，花生的培养时间为5天。
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