CN108159102A - 一种艾草提取物纳米乳凝胶的制备方法及应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种艾草总黄酮提取物纳米乳凝胶剂制备方法，按质量百分比将艾草总黄酮提取物3~10%、油相5~20%、密罗木提取物2%~8%、乳化剂10~30%、助乳化剂5~25%、水相35~70%置于高压均质机中，高压循环得到艾草总黄酮纳米乳；将1~3份纳米凝胶基质加入40~60份艾草提取物纳米乳中，密封后放置过夜至基质完全溶胀，在磁力搅拌下，依次加入丙二醇5~15份、胶原三肽0.5~1.0份、燕麦β‑葡聚糖0.1~0.5份、尼泊金甲酯0.05~0.2份、继续搅拌1h~2.5h即得艾草总黄酮纳米乳凝胶。本发明首次采用纳米凝胶基质为安全无毒的食品级凝胶复合基质材料，并特别添加具有复活能力的密罗木提取物以及胶原三肽和燕麦β‑葡聚糖的组合，制得的纳米乳凝胶稳定性好，温和无刺激性。

Description

一种艾草提取物纳米乳凝胶的制备方法及应用
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种艾草提取物纳米乳凝胶的制备方法及应用。
背景技术
艾草黄酮类化合物是一类多酚类抗氧化剂，具有抗氧化、抗癌、抗炎、抗菌、抗病毒、抗过敏等多种生理作用，尤其具有良好的抗自由基的作用，对超氧自由基和羟基自由基都能在较小的浓度下起到清除的作用。
纳米乳凝胶剂经皮给药系统是一种具有独特优势的给药制剂，可以直接作用于给药部位，避免肝脏的“首过效应”和胃肠道的副作用，减少不良反应，且使用方便。经皮给药系统中，药物经皮吸收效果是该类制剂亟待解决的主要问题，而影响药物吸收的主要因素则是皮肤角质层的屏障作用，因此如何促进药物透过角质层，从而经皮吸收是该类制剂的研究重点。
发明内容
针对上述情况，本发明的目的在于：提供一种艾草提取物纳米乳凝胶的制备方法及应用，以提供艾草总黄酮纳米乳及纳米乳凝胶的制备技术，使其更好地发挥其抗氧化及抗自由基的作用。
为实现上述目的，本发明所采取的技术方案是：提供一种艾草总黄酮提取物纳米乳凝胶的制备方法及应用，其具体包括如下步骤：制备艾草提取物、制备艾草提取物纳米乳、制备艾草提取物纳米乳凝胶。
所述艾草提取物纳米乳凝胶制备方法为：按照质量百分比将艾草总黄酮提取物3~10 %、油相5~20%、密罗木提取物2~8%、乳化剂10~30%、助乳化剂5~25%、水相35~70%置于高压均质机中，在100~300MPa压力下循环3~10次，得到艾草总黄酮纳米乳；将纳米凝胶基质1~3份加入到40~60份艾草总黄酮纳米乳中，密封后放置至基质完全溶胀；在200~600 r·min-1磁力搅拌下，依次加入丙二醇5~15份、胶原三肽0.5~1.0份、燕麦β-葡聚糖0.1~0.5份、尼泊金甲酯0.05~0.2份，继续搅拌1h~2.5h，即得艾草总黄酮纳米乳凝胶。
所述艾草提取物纳米乳凝胶制备方法为：按照质量百分比将艾草总黄酮提取物3~10 %、密罗木提取物2%~8%、油相5~20%混合制得第一液，乳化剂10~30%、助乳化剂5~25%、水相35~70%混合制得第二液；将第一液加入第二液中，并将其置于高压均质机中，在100~300MPa压力下循环3~10次，得到艾草总黄酮纳米乳；将纳米凝胶基质1~3份、胶原三肽0.5~1.0份、加入40~60份艾草总黄酮纳米乳中，密封后放置至基质完全溶胀，200~600r·min-1电动搅拌下，依次加入燕麦β-葡聚糖0.1~0.5份、尼泊金甲酯0.05~0.2份、丙二醇5~15份、继续搅拌1h~2.5h，即得艾草总黄酮纳米乳凝胶。
所述艾草提取物纳米乳凝胶制备方法为：按照质量百分比将艾草总黄酮提取物3~10 %、密罗木提取物2%~8%混合制得第一液，油相5~20%、乳化剂10~30%、助乳化剂5~25%、水相35~70%混合制得第二液，将第一液加入第二液中，并将其置于高压均质机中，在100~300MPa压力下循环3~10次，得到艾草总黄酮纳米乳；将纳米凝胶基质1~3份、胶原三肽0.5~1.0份、燕麦β-葡聚糖0.1~0.5份、尼泊金甲酯0.05~0.2份加入40~60份艾草总黄酮纳米乳中，密封后放置至基质完全溶胀，200~600r·min-1电动搅拌下，加入丙二醇5~15份继续搅拌1h~2.5h，即得艾草总黄酮纳米乳凝胶。
所述艾草总黄酮提取物提取方法选亚临界流体萃取、超声提取技术、及生物复合酶-超声提取技术中的任意一种。
所述油相选取聚氧乙烯醚蓖麻油、橄榄油、棕榈酸异丙酯、大豆磷脂、沙棘籽油、牡丹籽油、紫苏籽油、翅果油、文冠果油中的任意一种或几种。
所述水相选注射用水，去离子水及蒸馏水中的任意一种。
所述乳化剂选烷基糖苷、卵磷脂、泊洛沙姆188、聚山梨酯80及月桂醇硫酸钠中的任意一种或几种。
所述助乳化剂可选丙三醇、聚乙二醇、卡必醇及乙醇中的任意一种或几种。
所述纳米凝胶基质可选银耳多糖、沙蒿胶、果胶、卡拉胶、聚葡萄糖、抗性糊精中的任意一种或几种。
所述的艾草总黄酮生物复合酶-超声提取技术，艾草干燥后粉碎过10~100目筛，加入适量蒸馏水，加入生物复合酶，调节pH 至3~6左右，30℃~65℃水浴中酶解，之后沸水灭活3~10min，加入一定浓度的乙醇溶液，置于药物超声仪中超声提取，离心，取上清，真空干燥得总黄酮提取物。
所述生物复合酶选自纤维素酶、果胶酶、淀粉酶、脂肪酶、α淀粉酶、蛋白酶中的任意一种或几种。
本发明所述的艾草总黄酮首次采用生物酶-超声法提取，生物酶可以促进艾草药材细胞壁的水解破裂，有利于细胞内物质的溶出，同时除去原料中的蛋白质、淀粉等多种干扰成分，而超声波法能在提取液中产生机械振动和空化作用，可以破坏植物细胞壁，有助于细胞内黄酮类化合物溶出和扩散，本发明把生物酶法和超声法两种技术联用，有效地提高了艾草总黄酮的提取效率。本发明所述的艾草总黄酮首次使用亚临界流体萃取，无溶剂残留，损耗低，黄酮得率高，富含艾草中的活性物质，具有更好的生物活性。
本发明所述艾草总黄酮凝胶基质首次采用食品级的凝胶复合基质，所选用的银耳多糖、沙蒿胶、果胶、卡拉胶、聚葡萄糖及抗性糊精均是食品级材料；基质安全性高，材料生物无毒，无化学残留物的释放，较之于传统的基质材料具有较为明显的优势，同时在药物经皮吸收的过程中减少对于皮肤的刺激性，有助于提高药物的吸收效果。
本发明所述纳米乳及凝胶中添加了密罗木提取物、燕麦β-葡聚糖与胶原蛋白肽的组合，密罗木提取物具有复活能力，胶原三肽具有保湿与抗氧化的作用，和燕麦β-葡聚糖则具有抗衰老和提高免疫力的功效，该组合可以作用于细胞与细胞之间的间隙，将大量的活性物质携带进入皮肤细胞间隙，更有利于活性物质发挥作用，同时本发明中的基质可以在皮肤的表面形成一层保护膜，制得的纳米乳凝胶稳定性好，温和无刺激性，锁水保湿效果显著，更有利于凝胶剂发挥其抗氧化的作用。
本发明的有益效果是：艾草总黄酮纳米乳凝胶作为新型给药形式，可以促进药物的经皮吸收，提高吸收效率；纳米乳凝胶可以直接作用于给药部位，减少不良反应且使用方便，并且可以避免肝脏的“首过效应”和胃肠道的副作用；所采用的食品级凝胶复合基质在药物经皮吸收的过程中减少对于皮肤的刺激性，有助于提高药物的吸收效果；同时所使用的密罗木提取物、燕麦β-葡聚糖与胶原蛋白肽的组合，有利于活性物质发挥作用，在皮肤的表面形成一层保护膜，所制得的纳米乳凝胶稳定性好，温和无刺激性，锁水保湿效果显著，更有利于凝胶剂发挥其抗氧化的作用。
附图说明
图1是艾草总黄酮纳米乳凝胶体外透皮释放曲线；
图2是艾草总黄酮纳米乳凝胶对DPPH的清除率；
图3是艾草总黄酮纳米乳凝胶水分保湿率图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步说明。
实施例1
1、生物复合酶-超声提取技术艾草总黄酮提取物
艾草干燥后粉碎过30目筛，加入适量蒸馏水，加入生物复合酶（纤维素酶、果胶酶、淀粉酶），调节pH 至4.5左右，45℃水浴中酶解，之后沸水灭活6min，加入75%乙醇溶液，置于药物超声仪中超声提取，离心，取上清，真空干燥得总黄酮提取物。
2、艾草提取物纳米乳
艾草总黄酮提取物5 %、聚氧乙烯醚蓖麻油+沙棘籽油5%、密罗木提取物2%、卵磷脂+烷基糖苷15%、乙醇8%、去离子水65%于高压均质机中，在100MPa压力下3次循环，得到艾草总黄酮纳米乳。
3、艾草提取物纳米乳凝胶制备
将纳米凝胶基质（银耳多糖、沙蒿胶、卡拉胶）1份加入40份艾草提取物纳米乳中，密封后放置至基质完全溶胀，200r·min-1磁力搅拌下，依次加入丙二醇5份、胶原三肽0.5份、燕麦β-葡聚糖0.1份、尼泊金甲酯0.05份、继续搅拌1h即得艾草总黄酮纳米乳凝胶。
实施例2
1、亚临界流体萃取艾草总黄酮提取物
艾草干燥后粉碎过50目筛，萃取条件为压力P=20MPa，温度T=26.3℃，时间H=2h，溶剂为75%乙醇，容积流量为2kg/h。得到的艾草黄酮含量为46mg/g。
2、艾草提取物纳米乳
艾草总黄酮提取物10 %、密罗木提取物5%、橄榄油10%混合制得第一液，泊洛沙姆18820%、聚乙二醇400 10%、注射用水45%混合制得第二液，将第一液加入第二液中并将其置于高压均质机中，在300MPa压力下10次循环，得到艾草总黄酮纳米乳。
3、艾草提取物纳米乳凝胶制备
将纳米凝胶基质（果胶、聚葡萄糖）3份、胶原三肽1.0份、加入60份艾草提取物纳米乳中，密封后放置至基质完全溶胀，600r·min-1电动搅拌下，依次加入燕麦β-葡聚糖0.1~0.5份、尼泊金甲酯0.05~0.2份、丙二醇5~15份、继续搅拌1.5h即得艾草总黄酮纳米乳凝胶。
实施例3
1、生物复合酶-超声提取技术艾草总黄酮提取物
艾草干燥后粉碎过100目筛，加入适量蒸馏水，加入生物复合酶（α淀粉酶、蛋白酶、纤维素酶），调节pH 至6左右，5℃水浴中酶解，之后沸水灭活10min，加入一定浓度的乙醇溶液，置于药物超声仪中超声提取，离心，取上清，真空干燥得总黄酮提取物。
2、艾草提取物纳米乳
艾草总黄酮提取物7.5 %、密罗木提取物5.5%混合制得于组织捣碎机中制得第一液，棕榈酸异丙酯7%、聚山梨酯80 15% 、乙醇5%、蒸馏水60%混合制得第二液，将第一液加入第二液中并将其置于高压乳匀机中，在200MPa压力下6次循环，得到艾草总黄酮纳米乳。
3、艾草提取物纳米乳凝胶制备
将纳米凝胶基质（银耳多糖、抗性糊精、果胶）2份、胶原三肽0.75份、燕麦β-葡聚糖0.1~0.5份、尼泊金甲酯0.05~0.2份加入50份艾草提取物纳米乳中，密封后放置至基质完全溶胀，400r·min-1电动搅拌下，加入丙二醇10份，继续搅拌2.5h即得艾草总黄酮纳米乳凝胶。
实施例1-3考察结果如下所示。
验证例1：艾草总黄酮纳米乳凝胶进行透皮研究试验
离体皮肤制备：取15只昆明种小鼠（20 ± 2）g，随机分成3组，用8%硫化钠脱毛剂涂抹于腹部，5min后用温水擦洗干净，断颈处死，剥离腹部皮肤，除去皮下组织、血管及脂肪，生理盐水重复冲洗，并检查其完整性，浸入生理盐水溶液于4℃冰箱中冷藏。
体外透皮释放试验：依据Franz扩散法，采用透皮扩散仪，将处理好的小鼠腹部皮肤固定在供给室和接受室之间，角质层面向上，有效面积为2.8cm2，接收室体积为6.5mL，接受液是PBS缓冲液（pH7.4），在100r·min-1，（32±0.5）℃条件下进行试验。将艾草总黄酮纳米乳凝胶实施例1-3组与艾草总黄酮溶液对照组分别置于角质层上方供给室内，并分别于0.5h、1h、2h、4h、6h、8h、12h、24h取样0.5 mL，并加入等量接受液，取得样品经0.45 μm 微孔滤膜过滤，测定艾草总黄酮的累计释放量Qn ，Qn = ( CnVn + ∑CiVi)/A，公式中 Cn 为第n个取样点药物的校正浓度， Ci 是个取样点测得的药物浓度，Vn 和Vi 分别是接收池的体积和取样体积，A 是扩散池的扩散面积。
试验结果：由图1分析，艾草总黄酮纳米乳凝胶试验组艾草总黄酮透皮释放量明显高于艾草总黄酮溶液对照组，证明纳米乳凝胶可以有效提高艾草总黄酮经皮吸收效率。同时在试验组艾草总黄酮释放第一阶段0~6小时艾草总黄酮释放率较低，这可能与艾草总黄酮在该时间段内在皮肤内产生滞留有关，在第二阶段6小时以后，艾草总黄酮透皮速率缓慢增加。与艾草总黄酮溶液对照组进行相比，艾草总黄酮纳米乳凝胶试验组不仅具有良好的经皮吸收效果，艾草总黄酮也可以缓慢释放吸收，有助于更好地发挥治疗效果。
验证例2：艾草总黄酮纳米乳凝胶抗氧化研究试验
DPPH：DPPH是一种在有机溶剂中呈紫色的自由基清除剂，在517nm处有最大吸收波长，当加入抗氧化剂时，部分自由基被清除掉，使在该波长下的吸光值减弱，以清除率表示样品的抗氧化力，清除率越高说明提取物的抗氧化能力越强。
DPPH自由基清除试验：分别按实施例1-3组，将艾草总黄酮纳米乳凝胶剂加入乙醇溶解，并加入2mL 0.1mM DPPH乙醇溶液，充分混匀，分别配制成0.5mg/mL~2.0mg/mL系列浓度，室温下避光反应30min，测其在517nm处吸光值。DPPH自由基清除率(%)=(A0-A1)/A0×100%，A0为空白吸光值，A1为样品吸光值。
试验结果：由图2可知，艾草总黄酮纳米乳凝胶DPPH清除能力均随浓度的增加而提高，表明本发明中的纳米乳凝胶剂具有良好的抗氧化以及抗自由基的作用。
验证例3：艾草总黄酮纳米乳凝胶保湿性能研究试验
利用皮肤水分测定仪，采用电容法测量人体皮肤角质层的水分含量，其原理是基于水和其他物质的介电常数差异显著，按照皮肤含水量的不同，测得的皮肤的电容值不同，其观测参数可代表皮肤水分值。
测试试验：选受试者15名，每位受试者于左前臂内侧固定并标记五个试样区域，呈测试状态放置，分别给予艾草总黄酮溶液对照组、实施例1-3组，每个区域试样用量为5mg/cm2，依次在5min、15min、0.5h、1.0h、1.5h、2.0h、3.0h取样，连续测定4小时，每次测量3次，并记录实验结果。
试验结果：由图3可知，在4h测试时间内，实施例组水分保湿率范围为25%~45%，显著高于对照组17%~26%，表明艾草提取物以纳米凝胶剂作为载体可以提高艾草总黄酮的保湿效果，本发明中的凝胶剂具有水合保湿与修复保湿的作用特点，帮助皮肤角质层的修复，让新生的角质细胞自然发挥保湿功能。

Claims (10)

1.一种艾草总黄酮提取物纳米乳凝胶剂制备方法，包括艾草提取物纳米乳和凝胶的制备，其特征在于，所述艾草提取物纳米乳凝胶通过如下步骤制备而成：制备艾草提取物、制备艾草提取物纳米乳、制备艾草提取物纳米乳凝胶；
所述艾草提取物纳米乳凝胶制备方法为：按质量百分比将艾草总黄酮提取物3~10 %、油相5~20%、密罗木提取物2%~8%、乳化剂10~30%、助乳化剂5~25%、水相35~70%置于高压均质机中，在100~300MPa压力下循环3~10次，得到艾草总黄酮纳米乳；将纳米凝胶基质1~3份加入40~60份艾草提取物纳米乳中，密封后放置至基质完全溶胀，200~600r·min-1磁力搅拌下，依次加入丙二醇5~15份、胶原三肽0.5~1.0份、燕麦β-葡聚糖0.1~0.5份、尼泊金甲酯0.05~0.2份、继续搅拌1h~2.5h即得艾草总黄酮纳米乳凝胶。
2.根据权利要求1所述的一种艾草总黄酮提取物纳米乳凝胶剂制备方法，其特征在于：所述艾草提取物纳米乳凝胶制备方法还可以是：按质量百分比将艾草总黄酮提取物3~10%、密罗木提取物2%~8%、油相5~20%于乳匀机中制得第一液，乳化剂10~30%、助乳化剂5~25%、水相35~70%于组织捣碎机中制得第二液，将第一液加入第二液中并将其置于高压均质机中，在100~300MPa压力下3~10次循环，得到艾草总黄酮纳米乳；将纳米凝胶基质1~3份、胶原三肽0.5~1.0份、加入40~60份艾草提取物纳米乳中，密封后放置至基质完全溶胀，200~600r·min-1电动搅拌下，依次加入燕麦β-葡聚糖0.1~0.5份、尼泊金甲酯0.05~0.2份、丙二醇5~15份、继续搅拌1h~2.5h即得艾草总黄酮纳米乳凝胶。
3.根据权利要求1所述的一种艾草总黄酮提取物纳米乳凝胶剂制备方法，其特征在于：所述艾草提取物纳米乳凝胶制备方法还可以是：按质量百分比将艾草总黄酮提取物3~10%、密罗木提取物2%~8%混合制得第一液，将油相5~20%、乳化剂10~30% 、助乳化剂5~25%、水相35~70%混合制得第二液，将第一液加入第二液中并将其置于高压均质机中，在100~300MPa压力下3~10次循环，得到艾草总黄酮纳米乳；将纳米凝胶基质1~3份、胶原三肽0.5~1.0份、燕麦β-葡聚糖0.1~0.5份、尼泊金甲酯0.05~0.2份加入40~60份艾草提取物纳米乳中，密封后放置至基质完全溶胀，200~600r·min-1电动搅拌下，加入丙二醇5~15份继续搅拌1h~2.5h即得艾草总黄酮纳米乳凝胶。
4.根据权利要求1所述的一种艾草总黄酮提取物纳米乳凝胶剂制备方法，其特征在于：所述艾草总黄酮提取物提取方法为亚临界流体萃取、超声提取技术、生物复合酶-超声提取技术中的任意一种。
5.根据权利要求1所述的一种艾草总黄酮提取物纳米乳凝胶剂制备方法，其特征在于：所述油相选取聚氧乙烯醚、蓖麻油、橄榄油、棕榈酸异丙酯、大豆磷脂、沙棘籽油、牡丹籽油、紫苏籽油、翅果油、文冠果油中的任意一种或几种。
6.根据权利要求1所述的一种艾草总黄酮提取物纳米乳凝胶剂制备方法，其特征在于：所述水相为注射用水，去离子水、蒸馏水中的任意一种或两种。
7.根据权利要求1所述的一种艾草总黄酮提取物纳米乳凝胶剂制备方法，其特征在于：所述乳化剂为烷基糖苷、卵磷脂、泊洛沙姆188、聚山梨酯80、月桂醇硫酸钠，助乳化剂为丙三醇、聚乙二醇、卡必醇、乙醇其中的任意一种或几种。
8.根据权利要求1所述的一种艾草总黄酮提取物纳米乳凝胶剂制备方法，其特征在于：所述纳米乳凝胶基质组成是由银耳多糖、沙蒿胶、果胶、卡拉胶、聚葡萄糖、抗性糊精中的任意两种或几种复合而成。
9.根据权利要求1、4中所述的一种艾草总黄酮提取物纳米乳凝胶剂制备方法，其特征在于：所述生物复合酶-超声提取技术制备方法为：艾草干燥后粉碎过10~100目筛，加入适量蒸馏水，加入生物复合酶，调节pH 至3~6左右，30℃~65℃水浴中酶解，之后沸水灭活3~10min，加入一定浓度的乙醇溶液，置于药物超声仪中超声提取，离心，取上清，真空干燥得总黄酮提取物。
10.根据权利要求8中所述的生物复合酶-超声提取技术，其特征在于，所述生物复合酶选自纤维素酶、果胶酶、淀粉酶、脂肪酶、α淀粉酶、蛋白酶中的任意一种或几种。
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