CN103301188A - 一种苦参地龙纳米乳凝胶剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种苦参地龙纳米乳凝胶剂及其制备方法。本发明纳米乳凝胶剂由苦参总碱、地龙提取物、油相、表面活性剂、助表面活性剂、凝胶基质、甘油和水组成。可用于治疗皮肤烧烫伤及皮肤湿疹、皮炎、皮肤瘙痒等皮肤病，且可促进烧烫伤创面快速愈合。本发明所制备的制剂粒径小且均一，形态规整，稳定性良好；对皮肤几乎无刺激性，使用安全，经皮渗透量大，经皮渗透速率高，药效作用明显，对于皮肤创面损伤具有良好的促进愈合作用。本发明制备方法简单、成本低廉、质量可控、使用方便安全。

Description

一种苦参地龙纳米乳凝胶剂及其制备方法

技术领域    

本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种苦参地龙纳米乳凝胶剂及其制备方法，该苦参地龙纳米乳凝胶剂可用于有效治疗皮肤烧烫伤及皮肤湿疹、皮炎、皮肤瘙痒等皮肤病，且可促进烧烫伤创面快速愈合。

背景技术

烧烫伤是日常生活和工作中较常见的机体损伤，湿疹是临床常见的皮肤病，病程漫长且难以治愈，严重影响着患者的生活质量。现代医学对烧烫伤和湿疹的治疗多采用抗生素等药物，虽能缓解急性期症状，但长期使用易产生耐药性，临床使用受限。中医药对烧烫伤和湿疹的治疗独具优势，能通过多种途径实现清热解毒、活血通络、祛风利湿、清热润燥、祛腐生肌等功效，且重视整体平衡，因而疗效好、副作用少，体现出明显的治疗优势和特色。 

苦参、地龙药对始见于清朝陈士铎《辨证录》，是清热解毒、息风止痉的有效方，苦参苦寒，入大肠、膀胱经，地龙咸寒，归肝、脾、膀胱经，二药相伍为用，取苦参之清热燥湿和地龙之清热通络，可有效治疗皮肤烧烫伤及湿热型皮肤湿疹、皮炎、皮肤瘙痒等皮肤病，且具有促进烧烫伤创面快速愈合的显著优点，这是有别于其它抗炎止痒方剂的显著特点。但是长期以来，该药对现有剂型洗剂存在给药剂量大且不准确、药物易流散、有效成分透皮吸收差、作用时间短、顺应性不佳、质量不可控、使用及携带均不方便等问题，极大地影响了其在临床的推广应用，因而急需通过采用适宜的药物载体，改进剂型对该药对进行二次开发。 

纳米乳是一种粒径在10-100nm之间的热力学性质稳定、各向同性、外观澄明的胶体分散体系。纳米乳的优点为：1）可以增加药物的溶解度，提高包封药物的稳定性；2）纳米乳具有较低的表面张力，易于润湿皮肤，使角质层的结构发生变化，因而可促进药物经皮吸收；3）与其它微粒给药系统如纳米粒、脂质体等相比，纳米乳具有制备工艺简单、性质稳定、载药量大等优点。但是，纳米乳存在粘度低、流动性强、药物在皮肤表面保留时间短的缺点。 

纳米乳凝胶是在纳米乳中加入明胶、纤维素、卡波姆、泊洛沙姆等水溶性高分子材料，形成透明、稳定的网状结构胶体。纳米乳凝胶可以提高纳米乳的粘度，改善纳米乳与皮肤的粘附性和涂展性，并且由于体系粘度的增大，药物在凝胶中的扩散受阻，有效扩散系数减小，因此可以使药物维持更长的作用时间。与普通水凝胶相比，纳米乳凝胶与皮肤有更好的耦合和水化效应，生物相容性好，可较长时间与作用部位紧密粘附，分散均匀，有利于药物的充分吸收，从而提高了药物的生物利用度，并且用药方便、卫生，不易污染衣物，患者的顺应性较好。但至今未见有关中药小复方可以有效治疗皮肤烧烫伤及皮肤湿疹、皮炎、皮肤瘙痒等皮肤病的纳米乳凝胶剂的报道。 

发明内容

本发明的目的在于提供一种苦参地龙纳米乳凝胶剂，该苦参地龙纳米乳凝胶剂可用于有效治疗皮肤烧烫伤及皮肤湿疹、皮炎、皮肤瘙痒等皮肤病，且可促进烧烫伤创面快速愈合。 

另外，本发明还提供了上述苦参地龙纳米乳凝胶剂的制备方法。 

本发明首先将药物制备成O/W（水包油）型纳米乳，这样既可以提高药物的溶解性，又可以隔离外界与药物的接触，提高稳定性，增加透皮吸收的效果；鉴于纳米乳存在粘度低、流动性强、药物在皮肤表面保留时间短的缺点，所以本发明进一步将纳米乳制备成纳米乳凝胶，从而提高纳米乳的粘度，改善纳米乳与皮肤的粘附性和涂展性，并且由于体系粘度的增大，药物在凝胶中的扩散受阻，有效扩散系数减小，因此可以使药物维持更长的作用时间。 

本发明苦参地龙纳米乳凝胶剂，其组分及其重量百分比为： 

苦参总碱          0.5%-10%，

地龙提取物        0.5%-5%，

油相              0.5%-5%，

表面活性剂        10%-30%，

助表面活性剂      8%-25%，

凝胶基质           0.1%-1%，

甘油               10%-20%， 

水                 余量，

所述苦参地龙纳米乳凝胶剂的制剂粒径为15-30nm，多分散系数为0.2-0.5。

所述苦参地龙纳米乳凝胶剂其组分和重量百分比进一步优选为： 

苦参总碱          0.5%-5%，

地龙提取物        0.5%-2%，

油相              0.5%-2%，

表面活性剂        10%-20%，

助表面活性剂      8%-15%，

凝胶基质           0.1%-0.5%，

甘油               10%-15%， 

水                 余量，

所述苦参地龙纳米乳凝胶剂的制剂粒径为20-25nm，多分散系数为0.3-0.4。

所述苦参总碱的主要有效成分为苦参碱和氧化苦参碱，二者总量不少于50%，所述地龙提取物的主要有效成分为水溶性浸出物，其含量不少于16%。 

所述的油相选自橄榄油、三乙酸甘油酯、油酸乙酯、肉豆蔻酸异丙酯中的一种。 

所述的表面活性剂选自吐温80和聚氧乙烯35蓖麻油（EL35）中的一种。 

所述的助表面活性剂选自无水乙醇、聚乙二醇400（PEG-400）、丙二醇中的一种。 

所述的凝胶基质选自羟丙基甲基纤维素（HPMC），羧甲基纤维素钠（CMC-Na），卡波姆980（CP-980），卡波姆934（CP-934），卡波姆940（CP-940），聚丙烯酸钠700（NP700）中的一种或几种。 

本发明还提供所述苦参地龙纳米乳凝胶剂的制备方法，其操作步骤为： 

    （1）将苦参总碱溶入油相，加入表面活性剂、助表面活性剂溶解混合为含药内相，在室温下恒速搅拌至均匀；将地龙提取物溶于水中，再在室温下边搅拌边缓慢滴加到含药内相中，恒速搅拌至澄清透明，得A液；

（2）称取凝胶基质加入甘油研磨润湿，分散均匀，得B液； 

（3）将A液加入B液中，研磨均匀，冷藏放置溶胀后，得纳米乳凝胶剂。 

苦参总碱：购自宁夏紫荆花制药有限公司，1g相当于原生药材125g。 

地龙提取物：实验室自制（制备方法参照文献：贺葵邦，王英姿，张春泥，等.正交试验法研究地龙水提取工艺 [J]. 中国实验方剂学杂志，2013，19（6）：33-35），出膏率4.08%，其主要有效成分为水溶性浸出物，含量不少于16%。 

表面活性剂：是指具有固定的亲水亲油基团，在溶液的表面能定向排列，并能使表面张力显著下降的物质。表面活性剂在纳米乳中的种类及用量直接影响着纳米乳能否形成及其毒性的大小，表面活性剂的HLB值在8-18时形成O/W型纳米乳，在4-7时形成W/O型纳米乳。 

助表面活性剂：助表面活性剂可降低界面张力、促进药物溶解、降低界面张力及电荷斥力、调节表面活性剂的HLB值，从而促进纳米乳形成并增加其稳定性。 

纳米乳：纳米乳（nano emulsion，NE）是由油、水、表面活性剂和助表面活性剂以适当比例混合，自发形成的各向同性、透明、热力学稳定的胶体分散体系，分为水/油（W/O）、油/水（O/W）和双连续型。大小均匀，透明或半透明，经热压灭菌或离心也不会分层，粒径通常在10-100nm，又称微乳。 

纳米乳凝胶：纳米乳凝胶（nanoemulsion-based gels，NBGs）是指在纳米乳的基础上加入明胶、卡波姆、纤维素、泊洛沙姆等水溶性高分子材料，形成透明、稳定的网状结构胶体，具有纳米乳的透皮促渗透作用，同时具有凝胶的特性，有利于药物的透皮吸收。 

本发明所选用的油相、表面活性剂、助表面活性剂、凝胶基质均为药剂学上广泛应用的药用辅料，具有无毒、无刺激性的特性。理化性质及稳定性考察表明，本发明所制备的制剂粒径小且均一，形态规整，稳定性良好。 

动物实验表明，本发明所制备的纳米乳凝胶剂对皮肤几乎无刺激性，使用安全，经皮渗透量大，经皮渗透速率高，药效作用明显，对于皮肤创面损伤具有良好的促进愈合作用。 

将传统的中药药对配伍和先进的纳米乳凝胶给药系统（NBGs）相结合，合并苦参、地龙药材的有效部位制备经皮给药制剂，使之具有载药量大、生物利用度高的特点，体现了中药多组分经皮给药研究方面的创新，可为中药小复方的经皮给药研究提供有价值的参考。 

本发明制备方法简单、成本低廉、质量可控、使用方便安全，为治疗皮肤病尤其是烧烫伤、皮肤湿疹、皮炎或皮肤瘙痒提供了一种新的药物及其制剂，也为中药复方外用经皮给药制剂的研究提供新的思路和方法。 

附图说明

图1为苦参地龙纳米乳凝胶透射电镜形态图（60000×）； 

图2为本发明的苦参地龙纳米乳凝胶粒径图；

图3为苦参地龙4种不同体系的体外经皮吸收评价研究图；

图4-1为正常组小鼠皮肤的病理切片图（HE染色，200×）；

图4-2为浅Ⅱ度烫伤小鼠模型的病理切片图（HE染色，200×）；

图5-1 空白基质对烧烫伤模型动物创面病理形态学的影响图（HE染色，200×）；

图5-2 苦参纳米乳凝胶对烧烫伤模型动物创面病理形态学的影响图（HE染色，200×）；

图5-3 苦参地龙纳米乳凝胶对烧烫伤模型动物创面病理形态学的影响图（HE染色，200×）；

图5-4 京万红软膏对烧烫伤模型动物创面病理形态学的影响图（HE染色，200×）；

图6 不同制剂对湿疹模型动物创面病理形态学的影响图（HE染色，200×）；

图5-1~图5-4中，A：给药2d后，B：给药8d后，C：给药22d后；

图6中，按照从左向右、先上后下的顺序，依次为：正常皮肤组、空白基质组、苦参纳米乳凝胶组、苦参地龙纳米乳凝胶组、糠酸莫米松乳膏组。

具体实施方式

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下实施例。

实施例1.  苦参地龙纳米乳的制备

将0.2g苦参总碱溶入肉豆蔻酸异丙酯（IPM）0.15g，加入聚氧乙烯35蓖麻油（EL35）1.89g、无水乙醇1.62g，溶解混合为含药内相，在室温下恒速搅拌至均匀；将0.1g地龙提取物溶于水中，再在室温下边搅拌边缓慢滴加到含药内相中，加水至总重10g，恒速搅拌至澄清透明，即得苦参地龙纳米乳。

实施例2.  苦参地龙纳米乳的制备

将0.1g苦参总碱溶入肉豆蔻酸异丙酯0.09g，加入聚氧乙烯35蓖麻油（EL35）1.73g、无水乙醇1.36g，溶解混合为含药内相，在室温下恒速搅拌至均匀；将0.2g地龙提取物溶于水中，再在室温下边搅拌边缓慢滴加到含药内相中，加水至总重10g，恒速搅拌至澄清透明，即得苦参地龙纳米乳。

实施例3.  苦参地龙纳米乳凝胶剂的制备

（1）将0.2g苦参总碱溶入肉豆蔻酸异丙酯（IPM）0.15g，加入聚氧乙烯35蓖麻油（EL35）1.89g、无水乙醇1.62g，溶解混合为含药内相，在室温下恒速搅拌至均匀；将0.1g地龙提取物溶于水中，再在室温下边搅拌边缓慢滴加到含药内相中，加水至总重10g，恒速搅拌至澄清透明，得A液。

（2）称取0.02g卡波姆934（CP-934）加入甘油1mL（1.26g）研磨润湿，分散均匀，得B液。 

（3）将A液加入B液中，研磨均匀，冷藏放置溶胀后，得纳米乳凝胶剂。 

实施例4.  苦参地龙纳米乳凝胶剂的制备

（1）将0.2g苦参总碱溶入肉豆蔻酸异丙酯（IPM）0.09g，加入聚氧乙烯35蓖麻油（EL35）1.25g、无水乙醇0.98g，溶解混合为含药内相，在室温下恒速搅拌至均匀；将0.2g地龙提取物溶于水中，再在室温下边搅拌边缓慢滴加到含药内相中，加水至总重10g，恒速搅拌至澄清透明，得A液。

（2）称取0.04g聚丙烯酸钠700（NP700）加入甘油1mL（1.26g）研磨润湿，分散均匀，得B液。 

（3）将A液加入B液中，研磨均匀，冷藏放置溶胀后，得纳米乳凝胶剂。 

实施例5.  苦参地龙纳米乳凝胶剂的制备

（1）将0.1g苦参总碱溶入肉豆蔻酸异丙酯0.09g，加入聚氧乙烯35蓖麻油（EL35）1.73g、无水乙醇1.36g，溶解混合为含药内相，在室温下恒速搅拌至均匀；将0.2g地龙提取物溶于水中，再在室温下边搅拌边缓慢滴加到含药内相中，加水至总重10g，恒速搅拌至澄清透明，得A液。

（2）称取0.02g聚丙烯酸钠700（NP700）加入甘油1mL（1.26g）研磨润湿，分散均匀，得B液。 

（3）将A液加入B液中，研磨均匀，冷藏放置溶胀后，得纳米乳凝胶剂。 

实施例6.  苦参地龙纳米乳凝胶剂的制备

（1）将0.5g苦参总碱溶入肉豆蔻酸异丙酯0.09g，加入聚氧乙烯35蓖麻油（EL35） 1.73g、无水乙醇1.36g，溶解混合为含药内相，在室温下恒速搅拌至均匀；将0.2g地龙提取物溶于水中，再在室温下边搅拌边缓慢滴加到含药内相中，加水至总重10g，恒速搅拌至澄清透明，得A液。 

（2）称取0.02g卡波姆940（CP-940）加入甘油1m（1.26g）L研磨润湿，分散均匀，得B液。 

（3）将A液加入B液中，研磨均匀，冷藏放置溶胀后，得纳米乳凝胶剂。 

实施例7.  苦参地龙纳米乳凝胶的形态观察及粒径测定

透射电镜形态观察：采用磷钨酸负染法，将苦参地龙纳米乳凝胶（制备方法参考实施例5）稀释至适当浓度，滴于300目铜网表面，5～6 min后用滤纸吸去多余液体，加入1滴1%磷钨酸溶液（pH7.0）染色5min，滤纸吸去多余液体，晾干后将此铜网置透射电子显微镜下观测并拍照，电镜检测结果如图1所示。由图1可见，苦参地龙纳米乳凝胶外观圆整，大小均一。

粒径测定：采用马尔文动态光散射粒径仪检测纳米乳凝胶的平均粒径和多分散系数。检测条件为：激光束波长633nm，入射与散射光束夹角173°，温度25℃。取苦参地龙纳米乳凝胶（制备方法参考实施例5）以超纯水稀释10倍，混合均匀，平衡3min后测定，粒径结果表明该制剂粒径为20.32nm，多分散系数PDI=0.365，如图2所示。 

实施例8.  动物实验

1. 苦参地龙4种不同体系的体外经皮吸收评价研究

选用SD大鼠的离体腹部皮肤为渗透屏障，采用Franz扩散池，有效渗透面积A为3.14cm²，接收池体积为15mL。分别量取苦参地龙纳米乳（制备方法参考实施例2）、苦参地龙纳米乳凝胶剂（制备方法参考实施例5）、苦参地龙水溶液（仅用水溶解处方量的苦参总碱和地龙提取物至定量，苦参总碱和地龙提取物的量参考实施例2）、苦参地龙水凝胶（除以水代替纳米乳外，其余处方、制法同纳米乳凝胶，具体组分的用量和制备方法参考实施例5）各5g置于供给池中于（32±1）℃、320r/min条件下实验，分别于0.5、1、2、4、6、8、10、12、18、24h时取出接收液1.5mL（同时补充同温等量的空白接收液），过0.45μm微孔滤膜，取续滤液，注入高效液相仪测定接收液中Mat和Omt的含量，以二者之和作为评价指标对苦参地龙纳米凝胶进行体外经皮吸收评价研究，计算各体系样品的累积渗透量（Q_n）、透皮渗透速率（J_s）等透皮行为参数，各体系的体外透皮吸收情况如表1和图3所示。

表1 各体系体外透皮吸收的比较（n=3） 

结果可知，苦参地龙纳米乳、纳米乳凝胶的24h累积渗透量及透皮渗透速率均优于苦参地龙水溶液和苦参地龙水凝胶。因此，纳米乳凝胶载药体系为苦参地龙药对经皮给药提供了新的较好的剂型选择。

苦参地龙纳米乳凝胶的皮肤刺激性考察

选用健康的2kg±100g成年家兔2只，试验前24h将其背部两侧对称脱毛6块，用细砂纸造成局部擦伤，每块面积为3cm×3cm，造成局部擦伤，以渗血为度，作为给药区。

单次给药：家兔左侧为空白纳米乳凝胶基质（除未添加药物外，其余处方、制法同苦参地龙纳米乳凝胶，参考实施例5）区；右侧为苦参地龙纳米乳凝胶（制备方法参考实施例5）区。取受试基质或药物1g涂抹于已处理的皮肤上，用两层纱布覆盖，再用无刺激胶布加以固定，贴敷时间不少于4h，保持湿润状态，去除受试物后用温水清洁给药部位，0.5、12、24、48h肉眼观察各项指标并记录。 

多次给药：方法同单次给药，每日给药1次，连续涂药3天，于第4天用温水洗去残留受试物。去除受试物后0.5、12、24、48h观察涂抹部位，记录各项指标。 

观察指标及评分标准

在自然光线下观察皮肤反应，按表2给出的评分标准对皮肤红斑和水肿进行评分。

单次给药皮肤刺激性实验，在去除药物后0.5、12、24、48h后肉眼观察并记录涂抹部位有无水肿和红斑情况。 

多次给药皮肤刺激性实验，于再次贴敷前观察及记录红斑及水肿、涂敷部位有无色素沉积、出血点、皮肤粗糙或皮肤厚度情况。末次贴敷后，在去除药物0.5、12、24、48h后肉眼观察并记录涂敷部位有无水肿和红斑情况。 

表2 皮肤刺激反应评分标准 

表3 皮肤刺激强度评价标准

分值	评价
		0-0.49	无刺激性
0.5-2.99	轻度刺激性
		3.0-5.99	中度刺激性
6.0-8.0	强刺激性

2.2结果判断

    单次给药皮肤刺激性试验，按表2计算每一观察时间点各组受试药物皮肤反应积分值。实验结果见表4，结合表3进行刺激强度评价，可知单次给药未发现任何刺激性现象，说明制备得到的纳米乳和纳米乳凝胶对皮肤均无刺激性。

多次给药皮肤刺激性试验，末次贴敷后，在去除药物0.5、12、24、48h后按表2计算每一观察时间点各组受试药物皮肤反应积分值，结果见表5，结合表3进行刺激强度评价，可见在多次给药的前两天，有轻微红斑现象发生，但很快就恢复正常。 

因此，皮肤刺激性实验结果表明，苦参地龙纳米乳凝胶单次皮肤给药无任何刺激性，而多次给药前期有轻微红斑现象，但很快自行消失，说明本发明所制备的制剂符合外用药物的皮肤刺激性要求。 

表4 单次给药皮肤刺激性实验结果 

表5 多次给药皮肤刺激性实验结果

3. 苦参地龙纳米乳凝胶对烧烫伤模型的药效学考察

3.1 小鼠浅Ⅱ度烫伤动物模型的建立

浅Ⅱ度烫伤会伤及动物的全层表皮和真皮浅层，使得表皮与真皮分开，渗出液积聚而形成水泡。水泡表皮脱落后可见淡红色彩基底，其上有均匀的鲜红色斑点，皮肤肿胀明显。

将昆明小鼠背部皮肤脱毛，面积约2cm×2cm，用温水洗净脱毛剂，擦干，归笼观察24h，确定皮肤无损伤、红肿、皮疹等异常现象。1.5%戊巴比妥麻醉处理后，将小鼠仰位固定于带孔木板上（圆形孔2cm×2cm），使去毛皮肤暴露于木板孔内，然后将木板置电热恒温水浴锅上，使裸露背部皮肤浸泡于80℃水温中浸烫15s，取出，擦干水渍，达浅Ⅱ度烫伤。正常组小鼠的病理切片如图4-1所示，浅Ⅱ度烫伤小鼠模型的病理切片如图4-2所示，建立的小鼠模型表皮破溃，真皮层内见急慢性炎性细胞浸润，浅层见坏死及脓肿，肉眼观察可见明显水泡和肿胀，基本符合浅Ⅱ度烧伤模型的要求。 

实验方法及结果

小鼠随机分为5组，每组10只，分为正常对照组，空白基质（除未添加药物外，其余处方、制法同苦参地龙纳米乳凝胶，参考实施例5）组，苦参纳米乳凝胶（未添加地龙提取物，其余处方、制法同苦参地龙纳米乳凝胶，具体组分的量及制备方法参考实施例5）组，苦参地龙纳米乳凝胶（制备方法参考实施例5）组，京万红软膏（天津达仁堂京万红药业有限公司）组。造模后24h开始涂药，给药面积为2cm×2cm，每日1次，涂药后创面不加覆盖，逐日观察创面感染、愈合动物全身表现及其他情况。在参考文献和预实验的基础上，于给药后6d、14d、22d用电子数显卡尺测量创面纵长与横长直径，计算创面面积，并按下式计算创面愈合率；于给药后第2d、8d、22d在伤口局部组织取创面组织标本，每组每个时间点各处死2只，以10%中性甲醛固定，常规石蜡包埋切片，经HE染色后在光学显微镜下观察。 

创面愈合率=（给药前创面面积-药后创面面积）/给药前创面面积×100% 。 

3.2.1烧烫伤创面结痂时间和愈合时间的比较

观察创面结痂和愈合情况，以整块结痂（而非部分结痂）作为创面结痂时间的依据，以完全上皮覆盖作为创面愈合时间的依据，各试验组的创面愈合时间如表6所示。结果可知，与空白基质组相比，3个给药组的结痂时间和愈合时间均有显著性差异。统计学分析显示，苦参纳米乳凝胶组的结痂时间和愈合时间均有显著性差异（P<0.05），苦参地龙纳米乳凝胶组的结痂时间和愈合时间均有极显著性差异（P<0.01），说明纳米乳凝胶中地龙的加入对促进伤口愈合起到了促进作用。由直观数据可知，苦参地龙纳米乳凝胶组的结痂时间早于京万红软膏组，二者平均愈合时间相差1d说明苦参地龙纳米乳凝胶对浅Ⅱ度烫伤有较好的治疗作用。

  

表6 烧烫伤创面结痂时间和愈合时间的比较（

）

组别	结痂时间（d）	愈合时间（d）
			空白基质组	8.83±0.75	27±0.63
苦参纳米乳凝胶组	7.66±0.52*	25.6±0.82*
			苦参地龙纳米乳凝胶组	6.67±0.51**	24±0.89**
京万红软膏组	7.16±0.41**	23±0.89**

注：与空白基质组比较，*P<0.05，**P<0.01  。

3.2.2烧烫伤创面愈合率的比较

于给药后6d，14d，22d测量创面大小，并计算创面愈合率，结果如表7所示。表中结果及统计学分析表明：给药后6d，与空白基质组相比，苦参纳米乳凝胶组的愈合率并无显著性差异；苦参地龙纳米乳凝胶组、京万红软膏组均有显著性差异。给药后14d，苦参纳米乳凝胶组的愈合率与空白基质组相比，并无显著性差异；苦参地龙纳米乳凝胶组、京万红软膏组均有显著性差异；苦参地龙纳米乳凝胶组与苦参纳米乳凝胶组之间有显著性差异。给药后22d，3个实验组的愈合率与空白基质组相比，均有显著性差异。总体来说，3个实验组与空白基质组相比均有显著性差异；苦参纳米乳凝胶组的药效作用弱于苦参地龙纳米乳凝胶组和京万红软膏组；京万红软膏组的总愈合率高于苦参地龙纳米乳凝胶组，但二者在统计学上并无显著性差异。

表7 伤后不同时间创面愈合率的比较(%)（

） 

注：与空白基质组比较，*P<0.05，**P<0.01  。

3.2.3烧烫伤创面病理切片结果观察

给药后第2d、8d、22d在伤口局部组织取创面组织标本，每组每个时间点各处死2只，用10%中性甲醛固定，常规石蜡包埋切片，经伊红染色法（HE染色）后在光学显微镜下观察，结果如图5所示。

结果表明，给药后2d，各组皮肤病理反应均为：表皮破溃，真皮层及皮下肌层内见急慢性炎细胞浸润，浅层见坏死或可见灶状脓肿，各组之间未见太大差异。给药后8d，各组皮肤病理反应分别为：空白基质组表皮破溃，真皮及皮下浅层可见大量急慢性炎细胞浸润，并可见大量坏死，皮下可见小脓肿形成；苦参纳米乳凝胶组可见轻微表皮破溃，真皮层内见急慢性炎细胞弥散浸润，真皮内可见坏死；苦参地龙纳米乳凝胶和阳性药京万红软膏组均为表皮未见破溃，真皮内可见少量急慢性炎细胞浸润。给药后22d，各组皮肤病理切片均未发现表皮破溃及糜烂，空白基质组表皮见较多小角化囊肿形成，真皮层内见少量急慢性炎细胞浸润及纤维组织轻度增生；苦参纳米乳凝胶组真皮层内见较多急慢性炎细胞浸润，纤维组织及小血管明显增生，并可见肉芽形成；苦参地龙纳米乳凝胶组表皮见小角化囊肿形成，真皮层内见急慢性炎细胞浸润，纤维组织及小血管明显增生，皮肤组织已基本痊愈完全；阳性药京万红软膏组的病理表现与苦参地龙纳米乳凝胶组相近，但其表皮小角化囊肿较少。 

 各项试验结果均表明，3个实验组与空白基质组的药效有显著性差异，说明所制备的苦参纳米乳凝胶和苦参地龙纳米乳凝胶对烧烫伤动物均有一定程度的治疗作用，且苦参地龙纳米乳凝胶的治疗作用强于苦参纳米乳凝胶，说明地龙的加入对伤口的愈合有明显的促进作用。本实验所制备的苦参地龙纳米乳凝胶有与阳性药治疗烧烫伤作用相当，说明苦参地龙纳米乳凝胶能够很好治疗烧烫伤。 

苦参地龙纳米乳凝胶对湿疹模型的药效学考察

取体重18-20g昆明种小鼠30只，雌雄各半，按性别体重随机分为5组：即空白基质对照组，苦参纳米乳凝胶组，苦参地龙纳米乳凝胶组，糠酸莫米松乳膏组，每组6只。分组后将各组小鼠背部脱毛处理，面积2cm×2cm。实验第1d起，各组（除正常组外）于背部脱毛区涂以7%二硝基氯苯（DNCB）-丙酮溶液100uL致敏一次，每d1次，连续5天。第6d起各组（除正常组外）于小鼠右耳内侧涂1%DNCB-丙酮液10uL激发，每隔2天激发1次，每次激发后1h各给药组按剂量涂抹给药，正常对照组、模型对照组涂抹等量空白基质。于第3次激发后24h处死小鼠，然后在小鼠双耳相同部位打下直径为6.5mm的耳片，称量，计算两耳重量差。各组小鼠右耳组织制成病理切片，观察小鼠右耳组织病理学变化。 

各组耳重量差比较

比较空白基质对照组，苦参纳米乳凝胶（未添加地龙提取物，其余处方、制法同苦参地龙纳米乳凝胶，具体组分的量及制备方法参考实施例5）组，苦参地龙纳米乳凝胶（制备方法参考实施例5）组，糠酸莫米松乳膏（上海先灵葆雅制品有限公司）组4个实验组小鼠的耳重量差，结果如表8所示。与空白基质组相比，3个给药组的两耳重量差均有显著性差异，苦参地龙纳米乳凝胶组的效果强于苦参纳米乳凝胶组。统计学分析显示，苦参纳米乳凝胶组和糠酸莫米松乳膏组间有显著性差异（P<0.05），苦参地龙纳米乳凝胶组和糠酸莫米松乳膏组间无显著性差异（P>0.1）。

表8 各组耳重量差比较（） 

组别	耳重量差/mg
		空白基质组	4.09±0.84
苦参纳米乳凝胶组	1.71±0.12**
		苦参地龙纳米乳凝胶组	0.93±0.28**
糠酸莫米松乳膏组	0.54±0.14**

注：与空白基质组比较，*P<0.05，**P<0.01 。

4.2湿疹小鼠组织病理切片结果观察

取每组小鼠右耳组织标本，用10%中性甲醛固定，常规石蜡包埋切片，经HE染色后在光学显微镜下观察，结果如图6所示。与正常皮肤组相比，空白基质组小鼠鼠耳表皮轻度角化过度、增厚，耳边缘皮下及部分表皮层见大量急慢性炎细胞浸润，以急性中性粒细胞为主；苦参纳米乳凝胶组耳边缘皮下小灶见急慢性炎细胞浸润，能极明显减轻二硝基氯苯所致的耳表皮增厚，明显减轻表皮溃疡和真皮炎细胞浸润；苦参地龙纳米乳凝胶组耳边缘皮下见慢性炎细胞灶状浸润，能极明显减轻二硝基氯苯所致的耳表皮增厚和溃疡以及真皮炎细胞浸润，明显减轻真皮充血和渗出；糠酸莫米松乳膏组耳边缘皮下部分区域见慢性炎细胞灶状浸润，能极明显减轻二硝基氯苯所致的耳表皮增厚，明显减轻表皮溃疡和真皮充血、渗出及炎细胞浸润。

各项试验结果均表明，3个实验组与空白基质组的药效有显著性差异，说明所制备的苦参纳米乳凝胶和苦参地龙纳米乳凝胶对湿疹模型动物均有一定程度的治疗作用，且苦参地龙纳米乳凝胶的作用强于苦参纳米乳凝胶，说明地龙的加入对湿疹动物模型的治疗有一定的促进作用。统计学分析显示，糠酸莫米松乳膏组的两耳重量差与苦参地龙纳米乳凝胶组相比无显著性差异，说明苦参地龙纳米乳凝胶能够很好治疗湿疹。 

  

该项目受北京中医药大学复方中药制药研究创新团队（2011-CXTD-13）、北京中医药大学自主选题（2011-JYBZZ-JS048）项目资助。

Claims (9)

1.一种苦参地龙纳米乳凝胶剂，其特征在于，组分及其重量百分比如下：

苦参总碱          0.5%-10%，

地龙提取物        0.5%-5%，

油相              0.5%-5%，

表面活性剂        10%-30%，

助表面活性剂      8%-25%，

凝胶基质           0.1%-1%，

甘油               10%-20%， 

水                 余量，

所述苦参地龙纳米乳凝胶剂的制剂粒径为15-30nm，多分散系数为0.2-0.5。

2.如权利要求1所述的苦参地龙纳米乳凝胶剂，其特征在于：组分及其重量百分比如下：

苦参总碱          0.5%-5%，

地龙提取物        0.5%-2%，

油相              0.5%-2%，

表面活性剂        10%-20%，

助表面活性剂      8%-15%，

凝胶基质           0.1%-0.5%，

甘油               10%-15%， 

水                 余量，

所述苦参地龙纳米乳凝胶剂的制剂粒径为20-25nm，多分散系数为0.3-0.4。

3.如权利要求1-2任一项所述的苦参地龙纳米乳凝胶剂，其特征在于：所述苦参总碱的主要有效成分为苦参碱和氧化苦参碱，二者总量不少于50%，所述地龙提取物的主要有效成分为水溶性浸出物，其含量不少于16%。

4.如权利要求1-2任一项所述的苦参地龙纳米乳凝胶剂，其特征在于：所述的油相选自橄榄油、三乙酸甘油酯、油酸乙酯、肉豆蔻酸异丙酯中的一种。

5.如权利要求1-2任一项所述的苦参地龙纳米乳凝胶剂，其特征在于：所述的表面活性剂选自吐温80和聚氧乙烯35蓖麻油中的一种。

6.如权利要求1-2任一项所述的苦参地龙纳米乳凝胶剂，其特征在于：所述的助表面活性剂选自无水乙醇、聚乙二醇400和丙二醇中的一种。

7.如权利要求1-2任一项所述的苦参地龙纳米乳凝胶剂，其特征在于：所述的凝胶基质选自羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、卡波姆980、卡波姆934、卡波姆940和聚丙烯酸钠700中的一种或几种。

8.权利要求1-7任一项所述的苦参地龙纳米乳凝胶剂的制备方法，其特征在于，步骤如下：

    （1）将苦参总碱溶入油相，加入表面活性剂、助表面活性剂溶解混合为含药内相，在室温下恒速搅拌至均匀；将地龙提取物溶于水中，再在室温下边搅拌边缓慢滴加到含药内相中，恒速搅拌至澄清透明，得A液；

（2）称取凝胶基质加入甘油研磨润湿，分散均匀，得B液；

（3）将A液加入B液中，研磨均匀，冷藏放置溶胀后，得纳米乳凝胶剂。

9.权利要求1-7任一项所述的苦参地龙纳米乳凝胶剂在制备治疗皮肤病药物中的应用，所述皮肤病选自：皮肤烧烫伤、皮肤湿疹、皮炎或皮肤瘙痒。

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