CN108143737A - 包含齐墩果酸乙酸酯作为有效成分的药物组合物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及包含齐墩果酸乙酸酯(oleanolic acid acetate)或者其药用盐作为有效成分的预防或者治疗TLR以及IL‑6介导疾病的药物组合物；以及包含含有所述化合物或其盐的红豆提取物或者其流分作为有效成分的，预防或者治疗TLR以及IL‑6介导疾病的药物组合物。本发明中的红豆提取物或者化合物来源于作为天然药材使用已久的天然物质，因此没有副作用，可抑制由dsRNA以及ssRNA的合成类似物Poly(I:C)和Poly(I)诱导的TLR‑3以及TLR‑7的活性以及阻断包括NF‑κB的信号传导通路的活性，并且抑制由IL‑6活化的炎性相关转录因子STAT3的转录活性以及磷酸化，从而可广泛用于开发预防或者治疗TLR以及IL‑6介导疾病(例如，特异反应性皮炎或者关节炎等)的药物。

Description

包含齐墩果酸乙酸酯作为有效成分的药物组合物

本申请是申请日为2012年4月30日、中国专利申请号为 2012800327116且发明名称为“包含齐墩果酸乙酸酯作为有效成分的预防或者治疗TLR及IL-6介导疾病的药物组合物”的中国专利的分案申请，本申请要求申请日为2011年4月29日、申请号为 KR10-2011-0041189的韩国专利申请和申请日为2011年9月28日、申请号为KR10-2011-0098547的韩国专利申请的优先权。

技术领域

本发明涉及包含齐墩果酸乙酸酯作为有效成分的预防或者治疗 TLR以及IL-6介导疾病的药物组合物，更具体地，包含齐墩果酸乙酸酯(oleanolic acid acetate)或者其药用盐作为有效成分的，预防或者治疗TLR以及IL-6介导疾病的药物组合物；包含含有所述化合物或其盐的红豆提取物或者其流分(fraction)作为有效成分的预防或者治疗 TLR以及IL-6介导疾病的药物组合物；以及包含将所述组合物给药至 TLR以及IL-6介导疾病疑似个体的步骤的TLR以及IL-6介导疾病的治疗方法。并且，本发明还涉及包含所述有效成分的用于预防或者改善 TLR以及IL-6介导疾病的皮肤外用剂、保健功能食品以及个人卫生用品。

背景技术

免疫反应是活化的免疫细胞对外源性以及内源性物质(抗原)引起的一系列反应。包含细菌、病毒等的微生物以及生物外来物等进入生物体后，宿主细胞为了克服感染，释放细胞因子(其是引起炎症反应的原因)等因子诱发炎症反应。并且，所述微生物以及生物外来物等被免疫细胞识别后，免疫细胞发生活化，而活化的免疫细胞也分泌很多可引起炎症反应的因子，从而诱发炎症反应(Chen G.Y.,Nat.R ev.Immunol.,10(12):826,2010)。

随着分子生物学以及遗传工程的发展，发现了很多与炎症相关的细胞内分子标记物，尤其是随着在感染初期，非特异性先天性免疫反应步骤中，识别病原体特征部分的基因被发现，形成了对于炎症初期发生过程的新型的分子机制解释。近期，随着Toll-样受体(Toll-like receptor，TLR)(其是炎症初期识别病原体的基因)识别病原体的原生质膜组成物(lipopolysaccharide(LPS：endotoxin)，peptidoglycan) 和核酸组成物(ds RNA，single strand RNA，GpG DNA etc.)的报道，大量的关于TLR的研究正在进行(Brown J.,etal,J.Dent.Res., 2010,Epub ahead of print:Palusinska-Szysz M.,et al.,FoliaMicr obiol.(Praha)，2010，55(5)，508-14)。

TLR是Ⅰ型跨膜信号传导分子(typeⅠtransmembrane signaling m olecule)，主要表达于先天性免疫系统(innate immune system)的细胞中。所述细胞中，TLR通过胞外域(extracellular domain)识别病原相关分子模式(pathogen-associated molecularpatterns，PAMPs) 或者微生物相关分子模式(microorganism-associated molecularpatter ns，MAMPS)，可在先天性免疫细胞中诱导活化炎症细胞。自TLRs 被发现后，关于寻找能与TLRs结合的PAMPs的努力从未间断过，且至今除了TLR10、TLR12、TLR13之外，均分别有一个以上的配体被发现(Kawai T.et al.,Ann.N.Y.Acad.Sci.,2008，1143，1-20)。T LRs虽然互不相同，但共用一个信号传导机制(Liew F.Y.,et al.,Na t.Rev.Immunol.,2005，5(6)，446-458)。

通过TLR的信号传导中的共同点为，利用TIR结构域(Toll/interl eukin-1receptor-like domain，TIR domain)的NF-κB活化。通过TLR 的信号传导过程与具有TIR结构域的MyD88发生相互作用形成复合体。位于MyD88的C-末端的TIR结构域，能与TLR形成复合体，位于 N-末端的死亡结构域(Death domain)，能与白细胞介素-1受体相关激酶(IL-1R associated kinase)-1或者白细胞介素-1受体相关激酶(I L-1R associatedkinase)-2(其是丝氨酸/苏氨酸激酶(Ser/Thr kinas e))形成复合体。IRAK-1再通过与肿瘤坏死因子受体相关因子(tum or necrosis factor receptor-associated factor 6，TRAF6)的相互作用，活化NF-κB诱导的激酶(NF-κB-inducing kinase，NIK)，而NIK的活化可使IκB激酶(IκB kinase，IKK)磷酸化，磷酸化的IKK可使κB抑制剂(inhibitoryκB)磷酸化，最终诱导NF-κB的活化。活化的NF-κ B移动至细胞核，作为转录因子诱导细胞因子以及细胞粘附分子相关基因的表达(Brown J.,et al,J.Dent.Res.,2010,Epub ahead of p rint:Palusinska-Szysz M.,et al.,Folia Microbiol.(Praha)，2010，5 5(5)，508-14)。

尤其是有报道称，TLR-7可识别单链核糖核酸(single-stranded RNA，ssRNA)和ssRNA类似物的聚肌苷酸(polyinosinic acid，poly I)。即TLR-7识别ssRNA后，与衔接蛋白(adaptor protein)MyD88发生反应，活化转录因子NF-κBAP-1，从而形成炎性细胞因子。作为另一个机制，依赖TRIF的机制，可向TRIF、TBK1(TANK-结合激酶1)、 TRAF3和转录因子IRF3连续传导信号，诱导Ⅰ型干扰素的产生。并且，有报道称，TLR-3可识别RNA病毒增殖过程中产生的双链核糖核酸(d ouble-stranded RNA，dsRNA)和dsRNA类似物的双链聚肌胞(polyi nosinic-polycytidylic acid，polyI：C)。即TLR-3识别富含亮氨酸重复基序(leucine-rich repeat motif)形态的胞外域(extodomain)dsRN A后，与衔接蛋白TRIF发生反应，活化转录因子IRF3和NF-κB，从而产生1型干扰素和IL-6以及IL-12等炎性细胞因子(Alexopoulou L.,et al,Nature,2001，413,732-738)。如产生过量的炎性介质，可引起过度的免疫反应，这是使大肠炎、胰腺炎、风湿性关节炎、哮喘等各种人体疾病恶化的原因。因此，如能开发抑制TNF-α、IL-1β以及IL-6、 IL-10等炎性介质的物质，则有助于治疗各种免疫疾病以及人体疾病。

还有报道称，信号转导和转录激活因子3(signal fransducers an d activatorsof transcription，STAT3)是在包括风湿性关节炎的自身免疫疾病中发挥作用的，与NF-κB不同的另一个非常重要的转录因子。尤其是，已知STAT3是通过介导炎症反应的细胞因子白细胞介素 -6(interleukin-6，IL-6)活化的，且还可被表皮生长因子(EGF)活化(DarnellJr.J.E.,et al.,Science，1994,264,1415-1421)。

IL-6是一种细胞因子，其为已知的B细胞刺激因子2或者干扰素β 2，其被发现是与B淋巴细胞系细胞的活化相关的分化因子(Hirano T.,et al.,Nature，1986,324，73-76)，之后还发现其是对T细胞分化以及增殖、神经细胞的分化、破骨细胞的形成、肝细胞中蛋白质的产生等过程产生影响的多功能细胞因子(Akira.,et al.,Adv.In Immun ology，1993,54,1-78)。

诱导IL-6活化需要两个作用不同的膜受体分子，其中一个是与IL -6特异性结合的分子量约为80KD的白细胞介素-6受体(IL-6R)，另一个是分子量约为130KD的，与信号传导相关的gp130。IL-6和IL-6R形成IL-6/IL-6R复合体后，与另一个膜蛋白质gp130结合，从而诱导通过 IL-6进行的细胞内信号传导(Taga T.,et al.,J.Exp.Med.,1987,196, 967)。并且，发现在诱导IL-6的细胞内信号传导的过程中，gp130以及酪氨酸激酶(Janus kinase，JAK)的磷酸化对于STAT3的转录活性是必不可少的(Heinrich P.,et al.,Biochem.J.,2003，374,1-20)。I L-6与受体结合后，细胞内的酪氨酸激酶2(Janus Kinases 2)通过磷酸化被活化，而通过活化的JAK2受体，细胞质内结构域的多个酪氨酸残基被磷酸化，其起到与具有SH2或者其它磷酸化酪氨酸结合基序的STAT3相同的细胞质内蛋白质的结合作用。与受体的细胞质内结构域结合的STAT3被JAK2磷酸化后从受体脱离。活化的STAT3在细胞质内可相互结合，形成同型或异型二聚体后进入细胞核，与标记物分子的转录活性区域结合，从而增加转录(Lecy,D.E.,et al.,Nat.Rev. Mol.Cell Biol.,2002，3,651-62:Darnell,J.E.,Science，1997,277,16 30-1635)。发现此类IL-6的过度产生与风湿性关节炎、巨大淋巴结增生综合征(Castleman Syndrome)、克罗恩病、骨质疏松症、癌症恶病质(Cancercachexia)、动脉硬化症、糖尿病等多种疾病相关(Aki ra S.,et al.,Adv.Immunology，1993，54,1-78:Kallen K.,et al.,E xp.Opin.Invest.Drugs，1997，6，237-266)。同时，STAT3的结构活化以及过度表达也有可能与骨髓瘤、乳腺癌、前列腺癌、脑瘤、头颈癌、黑色素瘤、白血病以及淋巴瘤，尤其是与包含慢性骨髓性白血病以及多发性骨髓瘤的多种形态的癌症相关(Niu,et al.,Cancer Re s.,1999，59，5059-5063)。

根据现有的报告，发现有的物质具有诱导型一氧化氮合酶(iNO S，InducibleNitric Oxide Synthase)活性抑制等抗氧化效果等，即提出此类物质可具有炎性疾病的治疗效果。但也有报告称抗氧化剂对风湿性关节炎以及全身性红斑狼疮等分类为炎性疾病的疾病没有效果(Karen H.Constenbader,et al.,American Journal of Epidemiol ogy，172(2)：205-216，2010)，因此存在抗氧化剂无法直接应用于炎性疾病治疗等问题。

并且，所知的自身免疫皮肤疾病中，最为代表性的为特异反应性皮炎。过敏性皮炎是慢性的，且复发可能性非常高的皮肤疾病，发病时会出现皮肤脱屑、湿疹、瘙痒、炎症反应。其病理学以及遗传学作用机制仍未被明确阐明。特异反应性是受敏感性高的特定基因、环境、皮肤外壁的损伤程度、免疫因素等的复杂影响的免疫反应。特异反应性皮炎定义为典型的Th2形态的免疫疾病(Mamessier,E.,et al,Eur opean Journal of Dermatology，2006,16(2)，103)，其是由于在特异反应性皮炎的开始阶段，Th2型免疫反应发挥重要的功能。作为抗原的过敏原通过皮肤进入体内时，位于皮肤的抗原提呈细胞(Antige npresenting cells，APCs)将其识别，并对其进行反应。此时，过敏原特异性的诱导Th2型免疫反应，因此Th2表型的APCs可刺激T细胞，诱导其向Th2细胞的分化。Th2型细胞可表达大量的Th2形态的细胞因子，而Th2形态的细胞因子可活化肥大细胞(mast cell)，从而促进组胺等水溶性介质的分泌，并且还可刺激B细胞，从而促进IgE的产生。此类介质可再次将免疫细胞诱导至炎症部位，从而可诱导出增强的T h2形态的免疫反应，最终引发特异反应性皮炎。为治疗特异反应性皮炎的标记物候选基因包括：与IgE具有高亲核性的FceR1b，Th2形态的细胞因子IL-4、IL-5、IL-13，作为一种趋化因子的嗜酸性细胞活化趋化因子(eotaxin)、RANTES等，其在诱发特异反应性的过程中发挥非常大的作用(Hoffjan,S.,et al.,Journalof Molecular Medicine，2 005，83(9)，682-692:Cookson,W.,Nat.Rev.Immunol.,2004，4(12)，978-988)。因此，如果能发明调节细胞因子和趋化因子的基因表达的物质，则可有助于治疗包括特异反应性的多种不同的免疫疾病以及人体疾病。

发明内容

本发明要解决的技术问题

本发明发明人为寻找治疗TLR以及IL-6介导疾病的物质而努力的结果，利用天然资源中的红豆(赤豆以及赤小豆)的提取物和流分以及由此纯化而成的化合物，第一，确认了抑制由dsRNA以及ssRNA的合成类似物Poly(I:C)和Poly(I)诱导的TLR-3以及TLR-7的活性以及阻断包括NF-κB的信号传导通路的活性；第二，确认了抑制由IL-6 活化的炎性相关转录因子STAT3的转录活性以及磷酸化；最后，阐明了抑制由二硝基氯苯(DNCB)引起的NC/Nga小鼠的特异反应性皮炎以及胶原诱导关节炎的效果，从而完成了预防以及治疗TLR以及IL-6 介导的疾病的药物组合物发明。

技术方案

本发明的一个目的在于，提供一种包含齐墩果酸乙酸酯及其药用盐作为有效成分的预防或者治疗TLR以及IL-6介导疾病的药物组合物。

本发明的另一个目的在于，提供一种包含含有所述化合物或其盐的红豆提取物或者其流分作为有效成分的，预防或者治疗TLR以及IL -6介导疾病的药物组合物。

本发明的另一个目的在于，提供一种包括将所述组合物给药至T LR以及IL-6介导疾病疑似个体的步骤的，TLR以及IL-6介导疾病的治疗方法。

本发明的又一个目的在于，提供一种包含所述齐墩果酸乙酸酯或其药用盐；或者包含含有所述化合物或其药用盐的红豆提取物或者其流分作为有效成分的，用于预防或者改善TLR以及IL-6介导疾病的皮肤外用剂、保健功能食品以及个人卫生用品。

有益效果

本发明的红豆提取物或者化合物来源于作为天然药材使用已久的天然物，因此没有副作用，可抑制由dsRNA以及ssRNA的合成类似物Poly(I:C)和Poly(I)诱导的TLR-3以及TLR-7的活性以及阻断包括NF-κB的信号传导通路的活性，并且抑制由IL-6活化的炎性相关转录因子STAT3的转录活性以及磷酸化，从而可广泛用于开发预防或者治疗TLR以及IL-6介导疾病(例如，特异反应性皮炎或者关节炎等) 的药物。

附图说明

图1a是表示对赤豆的甲醇提取物、己烷流分、乙酸乙酯流分以及水流分进行高效液相色谱(High Performance Liquid Chromatography，HPLC)的结果的色谱图。

图1b是表示对赤小豆的甲醇提取物、己烷流分、乙酸乙酯流分以及水流分进行HPLC的结果的色谱图。

图2a以及2b是表示红豆甲醇提取物、己烷流分、乙酸乙酯流分以及水流分在THP-1-blue细胞中，对通过poly(I)的处理而增加的分泌型碱性磷酸酶(secreted alkalinephosphatase，SEAP)的活性抑制效果的曲线图以及表。

图3是表示红豆甲醇提取物在THP-1-blue细胞中，对通过poly (I:C)的处理而增加的SEAP的活性抑制效果的曲线图。

图4a以及4b表示红豆甲醇提取物在THP-1-blue细胞中，对通过poly(I)的处理而被活化并向细胞核移动的，NF-κB P50(图4a) 以及AP-1的C-Jun(图4b)的活性抑制效果的蛋白免疫印迹图片。

图4c至图4e表示红豆甲醇提取物在THP-1细胞中，对通过poly (I)的处理而被磷酸化的IKKα/β(图4c)、IκB(图4d)、p38以及 JNK(图4e)的磷酸化抑制效果的蛋白免疫印迹图片。

图5a以及5b表示红豆甲醇提取物在THP-1细胞中，对通过poly (I:C)的处理而被活化并向细胞核移动的，NF-κB P65/P50(图5a) 以及AP-1的C-Jun(图5b)的活性抑制效果的蛋白免疫印迹图片。

图5c至图5e表示红豆甲醇提取物在THP-1细胞中，对通过poly (I:C)的处理而被磷酸化的IKKα/β(图5c)、IκB(图5d)、p38以及JNK(图5e)的磷酸化抑制效果的蛋白免疫印迹图片。

图5f是表示红豆甲醇提取物在THP-1细胞中，对通过poly(I:C) 的处理而被活化并磷酸化的IRF3的磷酸化抑制效果的蛋白免疫印迹图片。

图6a至6e是表示红豆甲醇提取物在THP-1细胞中，对通过poly (I)的处理而被诱导的炎性细胞因子TNFα(图6a)、炎性细胞因子 IL-6(图6b)、趋化因子RANTES(图6c)、IFNβ(图6d)、趋化因子MCP-1(图6e)的mRNA表达的抑制效果的曲线图。

图7a是表示红豆甲醇提取物在THP-1细胞中，对通过poly(I:C) 处理而被诱导的炎性因子TNFα(图7a)、炎性因子IL-6(图7b)、细胞粘附因子ICAM-1(图7c)、趋化因子MCP-1(图7d)的mRNA 表达的抑制效果的曲线图。

图8a是表示红豆甲醇提取物在Hep3B细胞中，对通过IL-6处理而被诱导的STAT3磷酸化的抑制效果的图片。

图8b是表示从红豆中分离、纯化的化学式1的化合物在Hep3B 细胞中，对通过IL-6处理而被诱导的STAT3磷酸化的抑制效果的图片。

图9是表示红豆甲醇提取物在NC/Nga小鼠中，对通过DNCB诱导的特异反应性皮炎症状的改善效果，利用NC/Nga小鼠背部皮肤表示的图片。

图10是将红豆甲醇提取物在NC/Nga小鼠中，对通过DNCB诱导的特异反应性皮炎症状的改善效果，利用皮肤重症度表示的曲线图。

图11是将红豆甲醇提取物在NC/Nga小鼠中，对通过DNCB诱导的特异反应性皮炎血液内的嗜酸性细胞的变化，利用数值表示的曲线图。

图12是表示正常DBA/1 OlaHsd和胶原诱导的关节炎 (collagen-inducedarthritis，CIA)小鼠模型的前腿和后腿状态的图片。

图13是将红豆甲醇提取物，改善利用CIA诱发关节炎的DBA/1 OlaHsd小鼠症状的效果，利用CIA诱发程度表示的曲线图。

图14是表示根据不同浓度的齐墩果酸或齐墩果酸乙酸酯，在 Heps3B细胞中，对IL-6诱导的STAT3荧光素酶活性的抑制效果的曲线图。

图15是表示红豆甲醇提取物，对从小鼠骨髓细胞分离的吞噬细胞向破骨细胞分化的抑制效果的图片。

图16是表示齐墩果酸乙酸酯，对从小鼠骨髓细胞分离的吞噬细胞向破骨细胞分化的抑制效果的图片。

具体实施方式

为实现所述目的，本发明一方面提供一种包含下述化学式1表示的化合物或者其药用盐作为有效成分的预防或者治疗TLR以及IL-6介导的疾病的药物组合物，

[化学式1]

根据本发明的一个实施例，本发明发明人从属于红豆的赤豆和赤小豆分别获得甲醇提取物后，又分别用水、正己烷、乙酸乙酯等对所述甲醇提取物进行分级从而分别获得流分。用HPLC分析所述提取物和流分的结果显示，赤豆和赤小豆显示出类似的HPLC色谱图。从所述正己烷流分分别纯化得到有效成分齐墩果酸乙酸酯(olea nolic acidacetate，化学式1)和豆甾醇(stigmasterol，化学式2)。

下述化学式1或者2的化合物，可通过商品化的化合物或公知的方法获得。本发明中，从红豆获得化合物1和2的提取、分离以及纯化方法具体如下。利用己烷和乙酸乙酯混合溶剂，通过硅胶柱层析分离红豆的可溶于己烷的流分。其中，利用甲醇对Fr.3和Fr.4进行重结晶，分离纯的化学式1和化学式2的化合物。

化学式1

化学式2

本发明中的术语“TLR以及IL-6介导的疾病”是指通过属于Toll 样受体(Toll-like receptor，TLR)的TLR-3和TLR-7的活化而被激活的NF-κB移动至细胞核，引起细胞核中多种细胞因子以及细胞粘附分子相关基因的表达，以及通过IL-6抑制STAT3的活化，从而发生的疾病的总称。所述TLR以及IL-6介导的疾病大体上可为炎症疾病、自身免疫性疾病、癌症疾病或者代谢性疾病，但并不仅限于此。

本发明中所述炎症疾病是指以炎症为主要病变的疾病的总称，根据本发明的目的，优选由所述TLR以及IL-6介导的炎症疾病。所述炎症疾病优选包括ssRNA以及dsRNA病毒感染症、败血症、多发性软骨炎、系统性硬化、皮炎、湿疹、痛风、牙周疾病、白塞氏综合征、浮肿、脉管炎、川崎病、糖尿病性视网膜炎、自身免疫性胰腺炎、血管炎、肾小球性肾炎、细菌及真菌的急性以及慢性感染、急性以及慢性支气管炎，以及流感感染等，但并不仅限于此。

本发明的一个实施例中，确认了化学式1的齐墩果酸乙酸酯浓度依赖性地抑制STAT3荧光素酶活性(表7)，尤其是还确认了其具有与公知的齐墩果酸相比显著优异的预防以及治疗炎性疾病的效果(图1 4)，从而确认了包含所述化合物作为有效成分的药物组合物，对于由 IL-6引起的与STAT3活化相关的炎症疾病的预防或者治疗非常有效。

本发明中所述自身免疫性疾病是指患病个体对自身抗原的免疫反应为直接或间接原因的疾病的总称，根据本发明的目的，优选由所述TLR以及IL-6介导的自身免疫性疾病。所述自身免疫性疾病优选包括特异反应性皮炎、关节炎、牛皮癣、哮喘、移植物抗宿主疾病、免疫缺陷综合征、全身性红斑狼疮以及多发性硬化，更优选特异反应性皮炎以及关节炎，但并不仅限于此。TLR刺激免疫反应，与自身免疫疾病的发生相关，通过IL-6被激活的STAT3在多种自身免疫疾病中，作为重要的转录因子而发挥作用。由此，本发明中还确认了能浓度依赖性地抑制STAT3荧光素酶活性的化学式1的齐墩果酸乙酸酯，对于T LR以及IL-6介导的自身免疫性疾病有效。包含本发明的化学式1表示的化合物或者其药用盐作为有效成分的药物组合物，可通过与现有的抗氧化剂作用机制不同的作用机制表现治疗效果。

本发明中所述癌症疾病是指在组织内未分化细胞无视必要的状态，无限制的进行增殖的而形成肿块或者肿瘤的疾病，根据本发明的目的，优选由所述TLR以及IL-6介导的癌症疾病。所述癌症疾病优选包括骨髓瘤、乳腺癌、前列腺癌、脑瘤、头颈癌、黑色素瘤、白血病以及淋巴瘤，但并不仅限于此。通过IL-6被活化的STAT3的结构活化以及过度表达，与包含慢性骨髓性白血病以及多发性骨髓瘤的多种形态的癌症相关，因此抑制所述STAT3的活性，可表现出预防或者治疗所述癌症疾病的效果。

本发明中所述代谢性疾病是指由体内物质代谢障碍而引起的疾病的总称，根据本发明的目的，优选由所述TLR以及IL-6介导的代谢性疾病。所述代谢性疾病优选包括骨质疏松症、动脉硬化症以及心肌梗塞，更优选骨质疏松症，但并不仅限于此。有多项报道称，IL-6的过度产生尤其与骨质疏松症相关，因此本发明的组合物可预防或者治疗IL-6介导的疾病。本发明的一个实施例中，确认了当用化学式1的化合物进行处理时，破骨细胞数和大小减少，且其呈浓度依赖性，从而确认了所述化合物可抑制破骨细胞的分化，表现出预防以及治疗骨质疏松症的效果(图16)。

本发明中所述TLR以及IL-6介导的疾病，除了所述疾病外，还可包括所有由TLR以及IL-6介导的多种疾病，例如可包括：全身型过敏性反应(anaphylaxis)、过敏反应、阿尔茨海默病、恶病质、肥胖症、超免疫球蛋白血症、美尼尔氏病、疼痛、过敏性肺部疾病、内分泌性眼科疾病等。

根据本发明的实施例，本发明发明人确认了齐墩果酸乙酸酯能显著抑制由poly(I)以及Poly(I:C)诱导的SEAP的活性，但豆甾醇则不显示对由poly(I)以及Poly(I:C)诱导的SEAp活性的抑制活性(表 4)。由于所述化学式1的化合物可抑制由ssRNA的poly(I)和dsRNA 的Poly(I:C)诱导的TLR7和TLR3信号传导通路，其流分可抑制由po ly(I)诱导的TLR7的信号传导通路，因此确认了其适于预防或者治疗TLR以及IL-6介导的疾病。

并且，根据本发明的另一个实施例，本发明发明人确认了化学式 1以及2的化合物浓度依赖性地抑制STAT3荧光素酶活性(表7)，还确认了其具有与公知的齐墩果酸相比显著优异的预防以及治疗炎性疾病的效果(图14)。由此，确认了本发明化学式1的化合物或者其药用盐，可用于由IL-6引起的与STAT3活化相关的炎症疾病的预防或者治疗。

包含本发明化学式1的化合物或者其药用盐的药物组合物还可额外包含在制备药物组合物时通常使用的适当的载体、赋形剂或者稀释剂。此时，虽然没有特别的限制，但相对于组合物总重量，所述包含于组合物的所述齐墩果酸乙酸酯、其盐、提取物或者流分的含量可为0.0001至10重量％，优选0.001至1重量％。

本发明的术语“药用盐”是指在阳离子与阴离子以静电引力结合的盐中，可在药剂学中使用的形态的盐，其通常可为金属盐、有机碱盐、无机酸盐、有机酸盐、碱性或者酸性氨基酸盐等。例如，金属盐可为碱金属盐(钠盐、钾盐等)、碱土金属盐(钙盐、镁盐、钡盐等)、铝盐等；有机碱盐可为与三乙胺、吡啶、甲基吡啶、2,6-二甲基吡啶、乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、环己胺、二环己胺、N,N-二苄基乙二胺等形成的盐；无机酸盐可为与盐酸、氢溴酸、硝酸、硫酸、磷酸等形成的盐；有机酸盐可为与甲酸、乙酸、三氟乙酸、邻苯二甲酸、富马酸、草酸、酒石酸、马来酸、柠檬酸、琥珀酸、甲磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸等形成的盐；碱性氨基酸盐可为与精氨酸、赖氨酸、鸟氨酸等形成的盐；酸性氨基酸盐包括与天冬氨酸、谷氨酸等形成的盐。

包含本发明的化学式1化合物或者其药用盐的组合物可分别通过通常的方法，以散剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、混悬液、乳剂、糖浆、气雾剂等口服剂型、外用剂、栓剂以及灭菌注射溶液的形态剂型化而使用。本发明中，可包含在含有红豆提取物和流分的组合物中的载体、赋形剂、以及稀释剂可为乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、木糖醇、赤藓糖醇、麦芽糖醇、淀粉、阿拉伯胶、海藻酸盐(alginate)、明胶、磷酸钙、硅酸钙、纤维素、甲基纤维素、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、水、羟苯甲酯(methyl hydroxybenzoate)、羟苯丙酯(pr opylhydroxybenzoate)、滑石、硬脂酸镁以及矿物油。制剂化时，可使用通常采用的填充剂、增量剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、表面活性剂等稀释剂或者赋形剂而制备。为口服给药的固体剂型包括片剂、丸剂、散剂、颗粒剂、胶囊剂等，这些固体剂型可在所述红豆提取物和其流分中混合至少一种以上的赋形剂而制备，例如淀粉、碳酸钙、蔗糖或者乳糖、明胶等。并且，单纯的赋形剂外还可使用硬脂酸镁、滑石等润滑剂。用于口服给药的液体剂型可为混悬剂、内服液剂、乳剂、糖浆剂等，除了通常使用的单一稀释剂的水、液体石蜡之外，还可包括多种赋形剂，例如湿润剂、调味剂、芳香剂、保存剂等。用于非口服给药的剂型包括灭菌水溶液、非水性溶剂、混悬剂、乳剂、冻干剂、栓剂。作为非水性溶剂、混悬剂可使用丙二醇、聚乙二醇、如橄榄油等植物油，如油酸乙酯等可注射的酯类。栓剂的主剂可使用w itepsol、聚乙二醇、吐温(tween)61、可可油脂、月桂精脂 甘油明胶等。

本发明的所述药物组合物的优选给药量可根据患者的状态以及体重、疾病的程度、药物形态、给药途径以及时间而不同，但可由本领域技术人员作出适当的选择。但是，为达到较有效的预防以及治疗效果，每天给予患者0.0001至100mg/kg的本发明所述的齐墩果酸乙酸酯、其盐、提取物或者流分为最佳，优选给药0.001至100mg/kg，且每天可给药一次或者分几次给药。

本发明的药物组合物可以通过多种途径，给药至老鼠、小鼠、家畜、人等哺乳动物。所有的给药方式都可被应用，例如口服给药，直肠或者静脉、肌肉、皮下、子宫内膜或侧脑室(intracerebroventricul ar)注射给药。

另一方面，本发明提供一种包括将所述组合物给药至TLR以及IL -6介导疾病疑似个体的步骤的TLR以及IL-6介导疾病的治疗方法。

本发明中，所述TLR以及IL-6介导疾病疑似个体是指已经发生或可能发生TLR以及IL-6介导的疾病的，包括人的所有动物。可将包含本发明化学式1的化合物或者其药用盐作为有效成分的药物组合物给药至TLR以及IL-6介导疾病的疑似个体，从而有效治疗所述个体。关于TLR以及IL-6介导的疾病以及给药，如上所述。

另一方面，本发明提供一种包含含有所述化学式1的化合物或者其药用盐的红豆提取物或者其流分作为有效成分的，预防或者治疗 TLR以及IL-6介导疾病的药物组合物。

本发明的所述药物组合物包含含有所述化学式1的化合物或者其药用盐的红豆提取物或者其流分作为有效成分，可预防或者治疗TLR 以及IL-6介导的疾病。关于TLR以及IL-6介导的疾病，如上所述。如包含所述红豆提取物或者其流分作为有效成分时，TLR以及IL-6介导的疾病，优选可为自身免疫性疾病、癌症疾病或者代谢性疾病。

本发明的一个实施例中，确认了红豆提取物在关节炎模型小鼠 (自身免疫性疾病的代表疾病)中，改善CIA诱发程度(图13)；并确认了红豆提取物在自身免疫性皮肤疾病，即特异反应性皮炎中，具有改善症状的效果(图9以及10)，从而确认了所述红豆提取物是有效预防或者治疗自身免疫性疾病的有效成分。并且，本发明的另一个实施例中，确认了在用红豆提取物处理时，浓度依赖性地减小破骨细胞的数量和大小，从而确认了所述提取物抑制破骨细胞的分化，具有预防以及治疗骨质疏松的效果(图15)。

本发明的术语“红豆”是指豆科的赤豆(Phaseolus angularis Wi ght)的种子，形态上呈圆柱形、较扁平，种皮为红棕色、且非常平滑、有光泽，在药理活性反面，一直被用于利尿、消炎、排脓、解热、全身浮肿、肝硬化、黄疸、疖、化脓性疾病、水肿、脚气、消渴、痢疾性腹泻等治疗的民间疗法。但对于通过本发明TLR-3以及TLR-7活化而被诱导的疾病的治疗用途，则很少所知，因此本发明的发明人首次对其进行了研究。根据本发明的目的，所述红豆是指赤豆或者赤小豆(Phaseolus calcaratus Roxburgh)的种子，但并不仅限于此。

本发明的术语“红豆提取物”是指从红豆提取获得的提取物，根据本发明的目的，红豆提取物可为从红豆的粉碎物中，利用水、碳数为1至6的醇类(甲醇、乙醇、丁醇等)及其混合溶剂进行提取获得的产物，但并不仅限于此。所述产物包括提取液、提取液的稀释液或者浓缩液、对提取液进行干燥获得的干燥物、或者其粗纯化物或纯化物等。

根据本发明的一个实施例，可使用红豆粉碎物干重的约2至20倍，优选约3至5倍体积的水，甲醇、乙醇以及丁醇等碳数为1(C1)至6 (C6)的醇类极性溶剂或者具有约1：0.1至1:10的混合比的水和醇类的混合溶剂作为提取溶剂。提取温度可为20至100℃，优选室温；提取时间可为12小时至4天，优选3天；可采用热水提取、冷浸提取、回流冷却提取或者超声提取等提取方法进行提取。优选利用冷浸提取，进行1次至5次的连续提取后进行减压过滤，用真空旋转浓缩机在20 至100℃条件下，优选室温条件下，对所述过滤提取物进行减压浓缩，从而获得可溶于水、低级醇或者它们的混合溶剂的红豆(赤豆以及赤小豆)粗提取物。

本发明的术语“流分”是从含有多种组成成分的混合物，利用分离特定成分或者特定群的分级方法获得的产物。本发明中优选利用正己烷、乙酸乙酯等溶剂的溶剂分级方法分级的产物，可包括极性溶剂流分和非极性溶剂流分，具体可使用己烷流分、乙酸乙酯流分以及水流分等所有流分。

根据本发明的一个实施例，将所述获得的红豆粗提取物混悬于蒸馏水后，添加约1至100倍，优选约1至5倍于混悬液体积的己烷、乙酸乙酯等非极性溶剂，经过1次至10次，优选2次至5次，对非极性溶剂的可溶层进行提取、分离而获得。并且，还可额外进行通常的分级工序(Harborne J.B.Phytochemical methods:A guide to modern techn iques ofplant analysis,3rd Ed.P6-7，1998)。具体地说，将所述红豆粗提取物混悬于水后，用等量的正己烷以及乙酸乙酯溶剂，采用连续萃取获得红豆各溶剂的可溶提取物；更具体地说，将所述红豆粗提取物混悬于水后，混合等量的正己烷进行分级后，可获得正己烷可溶性流分以及水可溶性流分，并在所述水可溶性流分中添加乙酸乙酯获得乙酸乙酯可溶性流分以及水可溶性流分。

根据本发明的一个实施例，本发明发明人确认了红豆的甲醇提取物、己烷流分、乙酸乙酯流分以及水流分可显著抑制通过poly(I)诱导的SEAP的活性(图2)；红豆的甲醇提取物可显著抑制通过poly(I: C)诱导的SEAP的活性(图3)；红豆的95％甲醇提取物能显著抑制通过poly(I)以及poly(I:C)诱导的SEAP活性，但50％甲醇提取物仅显示较低的抑制活性(表2以及表3)；还确认了红豆提取物可抑制通过poly(I)或者poly(I:C)诱导的炎性因子的表达(图6以及图7)。由于本发明红豆提取物可抑制由ssRNA的poly(I)和dsRNA的Poly(I:C)诱导的TLR7和TLR3信号传导通路，其流分可抑制由poly(I)诱导的TLR7的信号传导通路，由此确认了其适于预防或者治疗TLR以及IL-6介导的疾病。

根据本发明的另一个实施例，本发明发明人确认了红豆提取物可浓度依赖性地减少通过poly(I)和poly(I:C)的处理而被激活的转录因子NF-κB(p65，p50)和AP-1(p-c-Jun)的核内移动(图4a，图4b，图5a以及图5b)；能浓度依赖性地减少NF-κB之前步骤的IKK、IκB活化(图4c，4d，5c以及5d)；并且浓度依赖性地减少属于MAP激酶信号系统JNK、p-38的磷酸化活性(图4e以及5e)。并且，还确认了红豆提取物对通过poly(I:C)诱导的属于TLR3信号传导过程中的一种的I RF3的磷酸化活化显示抑制活性，且呈浓度依赖性(图5f)。从以上结果可知，本发明的红豆提取物适用于预防或者治疗TLR以及IL-6介导的疾病。

并且，根据本发明的另一个实施例，本发明发明人确认了红豆的甲醇提取物、己烷流分、乙酸乙酯流分以及水流分能浓度依赖性地抑制STAT3荧光素酶的活性(表5以及表6)；给特异反应性皮炎动物模型摄取红豆提取物时，改善了特异反应性皮炎的的症状(图9以及图1 0)；与特异反应性皮炎诱发以及非给药组相比，嗜酸性细胞的数值发生了减少(图11)。同时，红豆提取物改善了在关节炎小鼠模型中CI A诱发程度(图13)。因此可知，包含含有本发明的化学式1的化合物或者其药用盐的红豆提取物或者其流分可用于预防或者治疗由IL-6 引起的，与STAT3的活化相关的疾病，例如特异反应性皮炎、关节炎等。

包含本发明的所述红豆提取物或者其流分的药物组合物还可额外包括制备药物组合物时通常使用的适当的载体、赋形剂或者稀释剂。对于这些相关内容，如上所述。

另一方面，本发明提供一种包括将所述组合物给药至TLR以及IL -6介导疾病疑似个体的步骤的，TLR以及IL-6介导疾病的治疗方法。所述组合物是包含含有化学式1表示的化合物或者其药用盐的红豆提取物或其流分作为有效成分的药物组合物，而关于所述TLR以及IL-6 介导的疾病、疑似个体以及给药等方面，如上所述。

另一方面，本发明提供一种包含所述化学式1表示的化合物或者其药用盐；或者包含含有所述化学式1表示的化合物或者其药用盐的红豆提取物或其流分作为有效成分的，用于预防或者改善TLR以及IL -6介导疾病的皮肤外用剂。

关于所述化学式1的化合物，红豆提取物或者其流分，如上所述。所述有效成分可包含于能预防或者改善TLR以及IL-6介导疾病的皮肤外用剂。虽然没有特殊限制，所述皮肤外用剂可以是以软膏剂、乳液剂、喷剂、贴剂、霜剂、散剂、混悬剂、凝胶剂或者啫喱的形态而制备使用。

另一方面，本发明提供一种包含所述化学式1表示的化合物或者其药用盐；或者包含含有所述化学式1表示的化合物或者其药用盐的红豆提取物或其流分作为有效成分的，用于预防或者改善TLR以及IL-6介导疾病的保健功能食品。

关于所述化学式1的化合物、红豆提取物或者其流分，如上所述。所述有效成分可包含于能预防或者改善TLR以及IL-6介导疾病的保健功能食品。

本发明的化学式1的化合物来源于以往作为药材使用的红豆提取物，可证明其安全性，因此可用于食品组合物。相对于食品组合物的总重量，所述化学式1的化合物、其药用盐、包含其的红豆提取物或其流分可包含0.01至100重量％，优选包含1至80重量％。如食品为饮料时，以100ml为基准可包含1-30g，优选包含3-20g。并且，所述组合物还可包含通常用于食品组合物，可提高气味、味道、视觉效果的额外成分。例如，可包括维生素A、维生素C、维生素D、维生素E、维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素B12、烟酸(niacin)、生物素(biotin)、叶酸(folate)、泛酸(pantothenic acid)等。并且，还可包括锌(Zn)、铁(Fe)、钙(Ca)、铬(Cr)、镁(Mg)、锰(Mn)、铜(Cu)等矿物质。并且，还可包括赖氨酸、色氨酸、半胱氨酸、缬氨酸等氨基酸。并且，还可添加防腐剂(山梨酸钾、苯甲酸钠、水杨酸、脱氢醋酸钠等)、杀菌剂(漂白粉和高度漂白粉、次氯酸钠等)、抗氧化剂(丁基羟基茴香醚(BHA)、丁基羟基甲苯(BHT)等)、着色剂(焦油颜料等)、固色剂(亚硝酸钠、亚硝酸钠等)、漂白剂(亚硫酸钠)、调味料 (MSG谷氨酸钠等)、甜味剂(甜精、甜蜜素、糖精、钠灯)、香料 (香草醛、内酯类等)、膨胀剂(明矾、D-酒石酸氢钾等)、增强剂、乳化剂、增稠剂(糊料)、涂层剂、胶基、消泡剂、溶剂、改良剂等食品添加剂(foodadditives)。所述添加剂根据食品的种类进行选择，并采用适当的量使用。

利用包含所述化学式1的化合物、及其药用盐、包含其的红豆提取物或者其流分的食品组合物可制备多种不同的保健功能食品。

本发明中的术语“保健功能食品”是与特殊保健用食品(food for specialhealth use，FoSHU)相同的术语，是指经过加工的，使其除了提供营养之外，还具有身体调节功能的，医学、医疗效果非常高的食品。本发明中的术语“健康食品(health food)”是指与一般食品相比具有积极地维持或增进健康效果的食品；而健康辅助食品(healthsupplement food)是指以健康辅助为目的的食品。有时，保健功能食品、健康食品、健康辅助食品的术语可相互混用。所述食品为获得对 TLR以及IL-6介导疾病的改善以及恢复效果，可以以片剂、胶囊、粉末、颗粒、液体、丸等多种形态制备。

作为这类保健功能食品的一个具体例，可利用所述组合物，制备突出农产品、畜产品或水产品的特性，并进行变形的同时，保存性较好的加工食品。虽然对包含所述组合物的保健功能食品没有特别限制，但其优选以人造黄油、脂肪持续性(fat continuous)或水持续性 (water continuous)或双持续性(bicontinuous)涂抹食品、低脂涂抹食品、巧克力或巧克力包衣或巧克力馅或等饼干类、冰淇淋、冰淇淋包衣、冰淇淋内含物、调味汁、蛋黄酱、奶酪、奶油替代品、干汤料、饮料、压缩干粮、调味料、点心棒、乳制品、临床营养食品、婴儿用食品的形态而制备使用。

另一方面，本发明提供一种包含所述化学式1表示的化合物或者其药用盐；或者包含含有所述化学式1表示的化合物或其药用盐的红豆提取物或者其流分作为有效成分的，用于预防或者改善TLR以及IL -6介导疾病的个人卫生用品。

关于所述化学式1的化合物、红豆提取物或者其流分，如上所述。所述有效成分可包含于能预防或者改善TLR以及IL-6介导疾病的个人卫生用品。虽然对于所述个人卫生用品没有特殊的限制，其优选可为香皂、化妆品、湿巾、纸巾、洗发精、皮肤霜、面霜、牙膏、口红、香水、彩妆粉底、腮红、睫毛膏、眼影、防晒霜、毛发修饰产品、空气清新凝胶、清洁凝胶等。

具体实施方式

以下，将通过实施例详述本发明。这些实施例仅是为了示例本发明，本发明的范围不会被实施例所限制。

实施例1：红豆提取物以及流分的制备以及化学式1和2的化合物的分离纯化

实施例1-1：红豆提取物的制备

将红豆(赤豆或赤小豆)用水洗干净，在阴凉地方晾干后，利用韦林氏搅切器进行粉末化。将粉末化的红豆20kg加入至100L的甲醇中，冷浸提取3天后，用滤纸(沃特曼公司，美国)进行减压过滤，后在室温条件下，用真空旋转浓缩机将过滤提取物中的甲醇溶液去除，得到提取残渣450g即为红豆提取物。

实施例1-2：流分的制备

为从所述制备的红豆提取物中分离活性流分，将红豆提取物混悬于1L的水后，加入等量的正己烷，进行混合、分级，反复4次此过程，获得1L的水可溶性流分和4L的正己烷可溶性流分。

接着，对所述正己烷可溶性流分进行减压浓缩，获得50g的正己烷可溶性提取物。

并且，在所述1L的水可溶性流分中添加等量的乙酸乙酯，进行混合、分级，反复3次此过程，从而重新获得1L的水可溶性流分和3L的乙酸乙酯可溶性流分。

对所述获得的乙酸乙酯可溶性流分进行减压浓缩，获得35g乙酸乙酯可溶性提取物。对剩余的水可溶性流分进行减压浓缩至35g，将其用作水流分。

实施例1-3：红豆提取物以及流分的HPLC分析

以所述实施例1-1以及1-2获得的各个红豆提取物以及流分为对象，进行了HPLC分析。

此时，HPLC使用了安捷伦科技1200系列(Agilent Technologies 1200 series)，分析用柱子使用了YMC公司的J’sphere ODS-H80(YM C，4μm，4.6mm I.D.×150mm)柱(图1a以及1b)。此时，使5-90％的 CH₃CN分析溶剂，以1ml/分钟的流过，并在210nm处进行分析，样品注射了10μl(表1)。

表1.溶剂条件

图1a表示对赤豆的甲醇提取物、己烷流分、乙酸乙酯流分以及水流分进行HPLC的结果的色谱图；图1b表示对赤小豆的甲醇提取物、己烷流分、乙酸乙酯流分以及水流分进行HPLC的结果的色谱图。

如在所述图1a以及1b中所示，右旋儿茶精-7-吡喃葡萄糖甙(cate chin-7-glucopyranoside，catechin-7-glu)、芸香苷(rutin)、齐墩果酸乙酸酯以及豆甾醇的峰可分别在5.5、24.5、35.5、35.5谱带观察到，且能确认赤豆以及赤小豆的HPLC色谱图表现出相互类似的形状。

实施例1-4：有效成分的纯化

将所述实施例1-2中获得的80g的正己烷流分，利用由己烷：乙酸乙酯(100:1→1:1)构成的浓度梯度(step gradient)的溶剂系统进行硅胶柱层析，从而完成了5个活性流分(Fr.1-5)。所述活性流分中的3 号以及4号流分中加入甲醇，进行重结晶过程，从而纯化出具有白色粉末状的两种化合物。

对所述纯化出的两种化合物，使用仪器分析(1H-，13C-NMR，MS)以及文献值(Voutquenne L.et al.Phytochemstry 2003,64,781- 789；Kongduang D.etal.Tetrahedron letters 2008,49,4067-4072)，确认了其分别为齐墩果酸乙酸酯(化学式1)以及豆甾醇(化学式2)。

化学式1：齐墩果酸乙酸酯

(4aS,6aR,6aS,6bR,8aR,10S,12aR,14bS)-10-羟基-2,2,6a,6b,9,9,12a- 庚甲基-1,3,4,5,6,6a,7,8,8a,10,11,12,13,14b-十四氢化二萘品苯-4a-羧酸酯[(4aS,6aR,6aS,6bR,8aR,10S,12aR,14bS)-10-hydroxy-2,2,6a,6b,9,9,12a -heptamethyl-1,3,4,5,6,6a,7,8,8a,10,11,12,13,14b-tetradecahydropicene-4 a-carboxylic acid acetate]

化学式2：豆甾醇

(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-[(E,2R,5S)-5-乙基-6-甲庚基-3- 烯-2-基]-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,11,12,14,15,16,17-十二氢化-1H-环戊并[a]菲-3-醇[(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-[(E,2R,5S)-5-ethyl-6- methylhept-3-en-2-yl]-10,13-dimethyl-2,3,4,7,8,9,11,12,14,15,16,17-dode cahydro-1H-cyclopenta[a]phenanthren-3-ol]

实施例2：红豆提取物、流分以及化合物对于通过poly(I)或poly(I:C)处理引起的 NF-κB/AP-1依赖性SEAP活性的抑制效果

将THP1-Blue-CD14细胞，以2×10⁵个/100μl的浓度接种于96孔板中，在37℃条件下培养3个小时。

作为样品，利用所述实施例1-1至1-2中获得的红豆提取物以及各个流分对细胞培养液预处理1个小时，再用50μg/ml的poly(I)或100 μg/ml的poly(I:C)处理，从而测定了对NF-κB依赖性SEAP活性抑制效果(图2以及图3)。

图2是表示红豆甲醇提取物、己烷流分、乙酸乙酯流分以及水流分在THP-1-blue细胞中，红豆对通过poly(I)的处理而增加的SEAP 的活性抑制效果的曲线图；图3是表示红豆甲醇提取物在THP-1-blue 细胞中，对通过poly(I:C)的处理而增加的SEAP的活性抑制效果的曲线图。

如图2所示，确认了红豆的甲醇提取物、己烷流分、乙酸乙酯流分以及水流分，能显著抑制通过poly(I)的处理而被诱导的SEAP活性。如图3所示，确认了红豆甲醇提取物可显著抑制通过poly(I:C) 的处理被而诱导的SEAP活性。

并且，为了确认是否会由于不同的红豆提取物原料的表现出不同的差异，以来源于赤豆的提取物和来源于赤小豆的95％以及50％甲醇提取物为对象，测定了对通过poly(I)以及poly(I:C)诱导的SEAP 的抑制活性(表2以及3)。

表2.对通过poly(I)处理而增加的SEAP活性的抑制效果

表3.对通过poly(I:C)处理而增加SEAP活性的抑制效果

如上述表2以及表3所述，确认了与红豆的种类(赤豆或赤小豆) 无关，95％的甲醇提取物显著抑制了通过poly(I)以及poly(I:C)诱导的SEAP活性，而50％的甲醇提取物则显示出较低的抑制活性。

并且，还检测了从己烷流分纯化的化学式1的齐墩果酸乙酸酯或化学式2的豆甾醇，对通过poly(I)以及poly(I:C)诱导的SEAP活性的影响(表4)。

表4.齐墩果酸乙酸酯或豆甾醇对通过poly(I)以及poly(I:C) 诱导的SEAP活性的影响

如所述表4所示，齐墩果酸乙酸酯显著抑制了通过poly(I)以及p oly(I:C)诱导的SEAP的活性，而豆甾醇则不显示对通过poly(I)以及poly(I:C)诱导的SEAP活性的抑制活性。不仅如此，对红豆的主要化合物右旋儿茶精-7-吡喃葡萄糖甙以及芸香苷进行抑制活性检测的结果，确认了对通过poly(I)以及poly(I:C)诱导的SEAP的活性不产生影响。

实施例3：红豆甲醇提取物对通过poly(I)或者poly(I:C)诱导的炎性因子表达的 影响

为测定红豆提取物对通过poly(I)和poly(I:C)诱导的炎性因子表达的抑制效果，利用人外周血单核细胞株(Human peripheral bloo d monocytic cell line)THP-1进行了下述实验。

首先，为了测定对通过poly(I)和poly(I:C)诱导的炎性因子表达的抑制效果，将THP-1细胞以每孔5×10⁵个细胞接种到12孔板中后，利用未添加胎牛血清(FBS)的RPMI1640(100单位的青霉素，100μg 的链霉素)培养基进行培养。12小时后，用二甲基亚砜(dimethylsulfoxide，DMSO)将红豆甲醇提取物稀释至终浓度为 60μg/ml，并进行1小时的预处理，再用50μg/ml的poly(I)或100μg/ml 的poly(I:C)进行处理，在37℃条件下培养6小时。培养结束后，用试管收集细胞，通过离心去除培养基，用磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤 1次后，使用RNeasy Mini Elute Cleanup试剂盒提取RNA。RNA的浓度和纯度用2100Bioanalyzer system(安捷伦科技)测定，并使用 Taqman reverse transcriptionreagents试剂盒(应用生物系统公司)合成cDNA。炎性因子的表达程度利用SYBR Green PCRmaster mix试剂盒(应用生物系统公司)，通过实时聚合酶链式反应(Real-time PCR) 进行测定(图6以及图7)。

图6是表示红豆甲醇提取物在THP-1细胞中，对通过poly(I) 的处理诱导的炎性细胞因子表达的抑制效果的曲线图；图7是表示红豆甲醇提取物在THP-1细胞中，对通过poly(I:C)处理诱导的炎性因子表达的抑制效果的曲线图。如图6以及图7所示，确认了相比于对照组，用50μg/ml的poly(I)处理的组的炎性因子TNFα、IL-6、 MCP-1、RANTES、IFNβ的表达显著增加；且用100μg/ml的poly(I:C) 处理的组，相比于对照组，其炎性因子TNFα、IL-6、ICAM-1、MCP-1 的表达显著增加。

而与此相反，用红豆甲醇提取物(60μg/ml)预处理1小时的组中，显示出了各个炎性因子的数值均被显著抑制，从而确认了红豆甲醇提取物能抑制通过poly(I)或poly(I:C)诱导的炎性因子的表达。

实施例4：可由红豆甲醇提取物调节的TLR-7以及TLR-3信号传导通路

TLRs(Toll-like receptors)上结合各个配体后，MyD88或TRIF 衔接子向TLR移动，当ssRNA作为配体与TLR7结合、dsRNA作为配体与TLR3结合时，细胞内信号传导被启动，共同活化NF-κB和 MAPK/AP-1，另外TLR3还额外活化IRF-3通路，从而生成细胞因子。因此，通过下述实验确认了本发明的红豆提取物对TLR7、TLR3信号传导通路的影响。

首先，将THP-1细胞以每孔5×10⁶个细胞接种，并用未添加胎牛血清的RPMI1640培养基培养12小时。之后提取物以30、60或 100μg/ml的浓度进行1小时的预处理，再用50μg/ml的poly(I)或 100μg/ml的poly(I:C)处理3小时。3小时后，用试管收集细胞，通过离心去除培养基，用PBS洗涤1次后，使用NE-PER Nuclear extraction reagents(Thermoscientific)和细胞裂解缓冲液(Cell lysis buffer)提取核提取物和总蛋白质，进行了蛋白免疫印迹分析。在所述核提取物中测定了NF-κB p65/p50以及p-c-Jun，在总蛋白质中测定了MAPKs、IKB、IKK亚型(isoforms)、IRF3(图4以及图5)。

图4a是表示红豆甲醇提取物在THP-1细胞中，对通过poly(I) 的处理而被活化，并向细胞核移动的NF-κB P50的活性抑制效果的蛋白免疫印迹图片；图4b是表示对AP-1的C-Jun的活性抑制效果的蛋白免疫印迹图片；图4c是表示对IKKα/β的磷酸化抑制效果的免疫蛋白印记图片；图4d是表示对IκB的磷酸化抑制效果的免疫蛋白印记图片；图4e是表示对p38以及JNK的磷酸化抑制效果的免疫蛋白印记图片。

并且，图5a是表示红豆甲醇提取物在THP-1细胞中，对通过poly (I:C)的处理而被活化，并向细胞核移动的NF-κB P65/p50的活性抑制效果的蛋白免疫印迹图片；图5b是表示对AP-1的C-Jun的活性抑制效果的蛋白免疫印迹图片；图5c是表示对IKKα/β的磷酸化抑制效果的免疫蛋白印记图片；图5d是表示对IκB的磷酸化抑制效果的免疫蛋白印记图片；图5e是表示红豆甲醇提取物在THP-1细胞中，对通过poly(I:C)的处理而被磷酸化的p38以及JNK的磷酸化抑制效果的蛋白免疫印迹图片；图5f是表示对IRF3的磷酸化抑制效果的蛋白免疫印迹图片。

如所述图4以及图5所示，可确认红豆提取物能使通过poly(I) 和poly(I:C)的NFκB和p-c-Jun的细胞核内移动，呈浓度依赖性的减少(图4a、4b、5a以及5b)；可确认浓度依赖性的减少NFκB之前的步骤的IKK、IκB的活化浓度(图4c、图4d、图5c以及图5d)；还可确认提取物还可浓度依赖性的减少AP-1活化之前的步骤的 MAPKs，即JNK，p-38的活化(图4e以及图5e)；还可确认红豆提取物可浓度依赖性地抑制TLR3信号传导过程中出现的P-IRF3的活化(图5f)。

综合以上结果，可确认红豆提取物可在TLR-7和TLR-3信号传导通路中，抑制NFκB和MAPKs/AP-1的活化，从而抑制炎性因子的表达。

实施例5：红豆提取物、流分以及化合物对通过IL-6诱导的STAT3转录活性的抑制 效果

确认了红豆提取物、流分以及由其纯化而来的各个化合物对于通过IL-6诱导的STAT3表达的抑制效果。

实施例5-1：制备转化体

在Hep3B细胞(ATCC HB-8064)中，利用pStat3-Luc和pcDNA3.1 (+)(Clontechlaboratories，Palo Alto，CA)，并一同使用lipofectamin plus(英俊，Carlsbad，CA，美国)进行转染。两天后开始用潮霉素进行处理(100μg/ml)，获得能稳定表达荧光素酶的集落。通过荧光素酶分析法确认了在所述集落中荧光素酶是否稳定表达。

实施例5-2：检测IL-6反应性STAT3报告基因

将包含于所述实施例5-1获得的集落的转染细胞，利用DMEM (Gibco，119950965)进行无血清培养(serum starvation)，之后样品按照下述方法处理1小时后再添加10ng/ml的IL-6(R&D system，美国)培养12小时。

1：阴性对照组(非处理组)；

2：阳性对照组(IL-6 10ng/ml)；以及

3：流分(10、30、60μg/ml)以及化合物。

用PBS洗涤所述培养的细胞后，加入到50μl的裂解缓冲液 (luciferase assaysystem，promega，美国)搅拌20分钟，之后再加入30-100μl的荧光素酶底物(luciferaseassay system，promega，美国)，在5分钟内通过光度计(luminometer；EG&G BERTHOLD，美国) 进行测定(表5以及表6)。

表5.红豆甲醇提取物以及己烷、乙酸乙酯、丁醇以及水流分对于STAT3荧光素酶活性的抑制效果

通过所述表5可知，红豆的甲醇提取物、己烷流分、乙酸乙酯流分以及水流分，浓度依赖性地抑制STAT3荧光素酶的活性。

表6.赤豆以及赤小豆的95％以及50％甲醇提取物对于STAT3荧光素酶活性的抑制效果

通过所述表6可知，赤豆以及赤小豆的95％及50％甲醇提取物，浓度依赖性地抑制STAT3荧光素酶的活性。

并且，测定了从己烷流分纯化的齐墩果酸乙酸酯和豆甾醇对于 STAT3荧光素酶活性的抑制效果(表7)。

表7.齐墩果酸乙酸酯和豆甾醇对于STAT3荧光素酶活性的抑制效果

如所述表7所示，齐墩果酸乙酸酯和豆甾醇浓度依赖性地抑制 STAT3荧光素酶的活性，测定的IC50值分别为＜1μM和90μM。并且确认了已知的红豆主要化合物右旋儿茶精-7-吡喃葡萄糖甙和芸香苷并不显示对STAT3荧光素酶的抑制活性。

实施例5-3：对IL-6诱导STAT3磷酸化的抑制活性的检测

将Hep3B细胞以每孔5×10⁵个的细胞数接种到6孔板中，培养至细胞占培养皿的80％时，将培养基换成无血清培养基，继续培养12 小时，并用以下方法处理样品60分钟。

1：阴性对照组(非处理组)；

2：阳性对照组(IL-6 10ng/ml)；

3：流分(10、30或60μg/ml)以及化合物1(3、6、10或30μM)；

4：染料木黄酮处理组(100μM)。

之后，用20ng/ml的IL-6处理20分钟后，利用40μl裂解缓冲液 (pH8、20mM的三羟甲基氨基甲烷盐酸(Tris-HCl)、137mM的氯化钠、10％的甘油、1％的曲通X-100、1mM的钒酸钠(Na₃VO₄)、2mM 的乙二胺四乙酸二钠(EDTA)、1mM的4-氨基苯基-甲磺酰氟 (APMSF)、20μM的亮抑肽酶(leupeptin)、20μg/ml的抑肽酶(aprotonin)；西格玛，美国)裂解细胞后，离心(13000g，15分钟) 获得包含有蛋白质的上层液。用DC蛋白质检测试剂盒(Bio-Rad，美国)对蛋白质的浓度进行定量，再用4-12％的十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)对蛋白质进行上样，在175mA的条件下进行2小时的电泳。电泳结束后，将凝胶上的蛋白质，在35V条件下，经90分钟转移至聚偏二氟乙烯(PVDF)膜(Westran S，孔径 0.2mm；沃特曼，美国)。利用Tris缓冲溶液(T-TBS；50mM的Tri-HCl，pH7.6，150mM的NaCl，0.2％的吐温-20，5％的脱脂牛奶；西格玛，美国)在常温条件下将转印的膜封闭1小时，之后用T-TBS洗涤5 次。在4℃条件下，利用phospho-STAT3(1:1000稀释)的多克隆抗体作为一抗，对所述膜处理12小时。用T-TBS洗涤5次后，利用辣根过氧化物酶(HRP)-结合抗-小鼠抗体(1:5000稀释)作为二抗，反应1小时。T-TBS洗涤后，利用ECL试剂盒(阿莫仙，美国)，在暗示对胶片进行显影(图8a以及8b)。

图8a是表示红豆甲醇提取物在Hep3B细胞中，对通过IL-6处理诱导的STAT3磷酸化的抑制效果的图片；图8b是表示从红豆中分离、纯化的化学式1的化合物在Hep3B细胞中，对通过IL-6处理诱导的 STAT3磷酸化的抑制效果的图片。

如图8a以及8b所示，可确认红豆提取物以及化学式1的化合物能够抑制通过IL-6诱导的STAT3磷酸化的活性。

实施例6：红豆甲醇提取物改善特异反应性皮炎症状的效果

制备实验动物模型使用的无特异病原体(Specific Pathogen Free，SPF)NC/Nga小鼠购自SLC公司(日本)。为实施实验，将小鼠在一定的温度(23±3℃)、湿度(55±15％)及照射量(从7:00至19:00) 的条件下进行饲养。购入后将8周龄的雌性NC/Nga小鼠在SPF动物饲养室内培养1周，使其稳定之后再用于实验。

大体将NC/Nga小鼠分为3个实验组。具体设置为：1)未诱导特异反应性皮炎的阴性对照组；2)诱导特异反应性皮炎，但未给药的对照组；以及3)诱导特异反应性皮炎，并给药的组。

将用于活性评价的红豆甲醇提取物，溶于100％甲醇后添加至饲料，根据个体差异，使小鼠摄取不同量的样品，共摄取2周。2周后，为诱发特异反应性皮炎，将浓度为1％的二硝基氯苯 (2,4-Dinitrochlorobenzene，DNCB)稀释为0.2％，在整个实验期间以4天为间隔，向NC/Nga小鼠的整个背部皮肤涂布DNCB使其致敏，每次涂布100μl。涂布DNCB后，与特异反应性皮炎诱发以及未给药对照组以及给药组的NC/Nga小鼠比较，测定皮肤重症度(skinseverity)。

特异反应性皮炎重症度以红斑(erythema)、浮肿(edema)、干燥度(dryness)、表皮剥落症(excoriation)的程度作为临床指标，将各个指标进行数值化后，取其平均值表示。对于各个症状的值是通过肉眼观察，根据症状的重症度标记为轻微(分数1)、普通(分数2)、严重(分数3)，并通过下述公式计算出皮肤重症度的数值(图9以及图10)。

皮肤重症度＝Σ个体的(红斑+浮肿+干燥度+表皮剥落症)/个体数

图9是表示红豆甲醇提取物在NC/Nga小鼠中，改善通过DNCB 诱导的特异反应性皮炎症状效果的NC/Nga小鼠背部皮肤的图片；图 10是将红豆甲醇提取物在NC/Nga小鼠中，改善通过DNCB诱导的特异反应性皮炎症状的效果，利用皮肤重症度表示的曲线图。

如图9以及10所示，未诱发特异反应性皮炎的阴性对照组中未观察到包括特异反应性皮炎在内的任何临床症状；而在诱发特异反应性皮炎，但未给药的对照组中，确认了自涂布DNCB的第7天起可观察到包括红斑以及浮肿等症状的特异反应性皮炎的症状。

并且，相比于诱发特异反应性皮炎，但未给药的组别，在诱发特异反应性皮炎，并给药的组中，使小鼠每天以50mg/kg、250mg/kg、500mg/kg浓度摄取红豆甲醇提取物的结果，在各个给药组中均可确认改善红斑、浮肿等特异反应性皮炎的症状的效果。

实施例7：红豆甲醇提取物减小血液内嗜酸性细胞(eosinophil)数值的效果

测定了实施例6中的未诱发特异反应性皮炎的阴性对照组；诱发特异反应性皮炎，但未给药的对照组；以及诱发特异反应性皮炎，并给药的组中的嗜酸性细胞的数值变化。

具体地说，自第1天涂布DNCB开始，第22天后处死各个实验组的NC/Nga小鼠，利用自动血液分析仪(automated Hematology Analyzer)测定血液内的嗜酸性细胞的数值(图11)。

图11是将红豆甲醇提取物在NC/Nga小鼠中，对通过DNCB诱导的特异反应性皮炎模型血液内的嗜酸性细胞引起的变化，利用数值表示的曲线图。

如图11所示，相比于未诱发特异反应性皮炎的阴性对照组，诱发特异反应性皮炎，但未给药对照组的嗜酸性细胞的数值增加，相比于诱发特异反应性皮炎，但未给药的组别，在诱发特异反应性皮炎，并给药的组中，使小鼠每天以50mg/kg、250mg/kg、500mg/kg浓度摄取红豆甲醇提取物的结果，在各个给药组中均可确认嗜酸性细胞数值的减小。

实施例8：红豆甲醇提取物改善通过胶原蛋白诱导的CIA关节炎小鼠症状的效果

首先，6周龄的雌性DBA/1 OlaHsd小鼠(15-20g)由Harlan(San Jese，CA，美国)提供。直至实验当天，给老鼠提供充足的固体饲料 (未添加抗生素，三洋饲料公司)和水，且在温度22±2℃、湿度 55±15％及12小时白昼循环(light-dark cycle)的条件下饲养1周，使其适应后用于实验。

之后用所述适应的DBA/1 OlaHsd制备风湿性关节炎小鼠(CIA) 模型。

具体地说，共将DBA/1 OlaHsd小鼠分为四个组别：未诱发关节炎的正常组；诱发CIA后，未用药物处理的对照组；诱发CIA后，用甲氨蝶呤(methotrexate)(2mg/kg)处理的组别；诱发CIA后，用红豆提取物处理的组别(100mg/kg)，每组共6只小鼠。CIA的诱发是将100μg的牛2型胶原和0.1ml的弗氏完全佐剂(Complete Freund’s Adjuvants)混合后，给8周龄的DBA/1 OlaHsd小鼠的尾部附近的背部进行皮下注射，并在21天后再次注射相同量，从而制备CIA模型。

最后，给所述制备的CIA模型给予红豆甲醇提取物，进行了关节炎指标(Arthritisindex，AI)以及发病率的分析。

具体地说，每天利用0.1ml生理盐水，给正常组和对照组进行1 次灌胃；甲氨蝶呤(MTX)以2mg/kg的浓度给药；红豆甲醇提取物 (100mg/kg)处理组则在每天上午11点口服给药。接着，用2型胶原诱发后，DBA/1 OlaHsd小鼠四个爪子(paw)的关节炎的征兆用下述标准决定发病率(incidence，％)。并且，根据下述表8图示的CIA 诱发程度指标，记录小鼠的症状，每周记录一次(图12以及图13)。

表8.CIA诱发程度

图12是表示正常DBA/1 OlaHsd和胶原蛋白诱导的关节炎小鼠模型的前腿和后腿状态的图片；图13是红豆甲醇提取物在CIA诱发关节炎的DBA/1 OlaHsd小鼠中，对症状的效果利用CIA诱发程度表示的曲线图。

如图13所示，与对照组相比，红豆甲醇提取物可在诱发CIA关节炎的DBA/1 OlaHsd小鼠中，具有改善CIA诱发程度的效果。

实施例9：利用对IL-6诱导STAT3磷酸化的抑制活性的验证，比较齐墩果酸与齐墩 果酸乙酸酯的活性

通过上述实施例，确认了来源于红豆的本发明齐墩果酸乙酸酯具有预防或者治疗TLR以及IL-6介导疾病的效果。为了确认与现有的齐墩果酸相比，所述本发明的齐墩果酸乙酸酯是具有显著效果的特异性衍生物，因此利用所述实施例5-2的方法确认本发明的齐墩果酸乙酸酯较已知的齐墩果酸，在活性方面有何差异。

具体地说，除了作为样品利用0.1、1、3、6或10μM的齐墩果酸或者齐墩果酸乙酸酯进行处理之外，其余均采用与实施例5-2相同的方法进行。测定并比较了齐墩果酸或者齐墩果酸乙酸酯对于STAT3 荧光素酶活性的抑制活性(图14)。

图14是表示根据不同浓度的齐墩果酸或齐墩果酸乙酸酯，在 Heps3B细胞中，抑制IL-6诱导出的STAT3荧光素酶活性的效果的曲线图。如图14所示，本发明的齐墩果酸乙酸酯显示IC50＝0.9μM的抑制活性，而已知的齐墩果酸在10μM浓度下也仅显示约14％的抑制活性。

因此，可确认与已知的齐墩果酸相比，本发明的齐墩果酸乙酸酯具有显著优异的预防以及治疗炎性疾病的效果。

实施例10：红豆提取物以及齐墩果酸乙酸酯对于由核因子κB受体激活剂配体 (RNAKL)诱导的破骨细胞分化的效果

分离5周龄老鼠的股骨和胫骨，用1cc注射器水洗骨髓腔收集骨髓细胞。分离出的骨髓细胞用包含10％胎牛血清、抗生素、M-CSF (30ng/ml)的α-MEM(α-minimum essentialmedium)培养基培养3 天。3天后，贴壁的细胞作为吞噬细胞(bone marrow macrophage，BMM)使用。吞噬细胞中添加M-CSF(30ng/ml)和破骨细胞分化因子RNAKL(Receptoractivator of nuclear factor kappa-B ligand (50ng/ml)进行培养，并利用不同浓度的红豆提取物以及齐墩果酸乙酸酯进行处理。4天后，利用TRAP溶液(西格玛奥德里奇，美国)对培养的细胞进行染色，并将染为红色的细胞判断为分化的破骨细胞。

其结果，确认了用红豆提取物以及齐墩果酸乙酸酯处理的实验组中，破骨细胞的分化受到了抑制。图15及16分别是表示红豆甲醇提取物以及齐墩果酸乙酸酯，抑制从小鼠骨髓细胞分离的吞噬细胞向破骨细胞分化的效果的图片。如所述图15所示，可确认未用红豆提取物处理的对照组的细胞中，形成很多TRAP阳性多核型破骨细胞；但利用红豆提取物处理的实验组中，可确认破骨细胞的数量和大小呈浓度依赖性地减少。特别是，可确认在50ng/ml的浓度下可显著减少破骨细胞的分化。并且，如图16所示，利用齐墩果酸乙酸酯处理的组中，也可以确认其能显著抑制向破骨细胞的分化，特别是在10μM的低浓度下，就可显示显著的效果。

因此，本发明的红豆提取物以及齐墩果酸乙酸酯可通过抑制破骨细胞的分化，从而对预防以及治疗骨质疏松症具有显著的效果。

制剂例1：散剂的制备

混合0.1g的齐墩果酸乙酸酯、包含其的红豆提取物或者所述提取物的流分、1.5g的乳糖以及0.5g的滑石，将其填充至气密布，制备成散剂。

制剂例2：片剂的制备

混合0.1g的齐墩果酸乙酸酯、包含其的红豆提取物或者所述提取物的流分、7.9g的乳糖、1.5g的结晶性纤维素以及0.5g的硬脂酸镁，利用直接压片法(direct tabletingmethod)制备包含50mg有效成分的500mg片剂。

制剂例3：粉末剂的制备

混合0.1g的齐墩果酸乙酸酯、包含其的红豆提取物或者所述提取物的流分、5g的玉米淀粉以及4.9g的羧甲基纤维素后，制备成粉末，将500mg粉末加入到硬胶囊中制备胶囊剂。

制剂例4：注射剂的制备

根据通常注射剂的制备方法，制备了包含0.1g的齐墩果酸乙酸酯，包含其的红豆提取物或所述提取物的流分和适量的注射用灭菌蒸馏水以及pH调节剂的2ml容量的注射用安瓿。

制剂例5：液剂的制备

根据通常液剂的制备方法，在纯净水中溶解0.1g的齐墩果酸乙酸酯，包含其的红豆提取物或所述提取物的流分、10g的异构糖以及 5g的甘露醇后，加入适量的柠檬香料，并混合所述成分后，加入纯净水调节整体体积至100ml后移至棕色瓶，进行灭菌制备成液剂。

Claims (11)

1.由下述化学式1表示的化合物或者其药用盐在制备用于预防或者治疗TLR以及IL-6介导疾病的药物中的用途，

其中所述TLR以及IL-6介导疾病选自特异反应性皮炎和关节炎，

[化学式1]

2.由下述化学式1表示的化合物或者其药用盐在制备用于预防或者改善TLR以及IL-6介导疾病的皮肤外用剂中的用途，

其中所述TLR以及IL-6介导疾病选自特异反应性皮炎和关节炎，

[化学式1]

3.由下述化学式1表示的化合物或者其药用盐在制备用于预防或者改善TLR以及IL-6介导疾病的保健功能食品中的用途，

其中所述TLR以及IL-6介导疾病选自特异反应性皮炎和关节炎，

[化学式1]

4.由下述化学式1表示的化合物或者其药用盐作为有效成分在制备用于预防或者改善TLR以及IL-6介导疾病的个人卫生用品中的用途，

其中所述TLR以及IL-6介导疾病选自特异反应性皮炎和关节炎，

[化学式1]

5.含有由下述化学式1表示的化合物或者其药用盐的红豆提取物在制备用于预防或者治疗TLR以及IL-6介导疾病的药物中的用途，

其中所述TLR以及IL-6介导疾病选自特异反应性皮炎和关节炎，

[化学式1]

6.根据权利要求5所述的用途，其中所述红豆提取物是通过使用选自水、碳数为1-6的醇类及它们的混合溶剂组成的组中的溶剂提取红豆获得的。

7.根据权利要求5所述的用途，其中所述红豆提取物是通过使用甲醇或乙醇提取红豆获得的。

8.根据权利要求5所述的用途，其中所述红豆提取物是通过使用溶剂在20-100℃的温度下提取红豆12小时至4天获得的。

9.含有由下述化学式1表示的化合物或者其药用盐的红豆提取物在制备用于预防或者改善TLR以及IL-6介导疾病的皮肤外用剂中的用途，

其中所述TLR以及IL-6介导疾病选自特异反应性皮炎和关节炎，

[化学式1]

10.含有由下述化学式1表示的化合物或者其药用盐的红豆提取物在制备用于预防或者改善TLR以及IL-6介导疾病的保健功能食品中的用途，

其中所述TLR以及IL-6介导疾病选自特异反应性皮炎和关节炎，

[化学式1]

11.含有由下述化学式1表示的化合物或者其药用盐的红豆提取物在制备用于预防或者改善TLR以及IL-6介导疾病的个人卫生用品中的用途，

其中所述TLR以及IL-6介导疾病选自特异反应性皮炎和关节炎，

[化学式1]