CN108095093A - 一种具有抗氧化活性的甜柿酵素的制备方法 - Google Patents

一种具有抗氧化活性的甜柿酵素的制备方法 Download PDF

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向福
袁婷
方元平
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付俊
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Abstract

本发明提供了一种具有抗氧化活性的甜柿酵素的制备方法，使用番茄果浆和甜柿果浆，在丙酸杆菌HX1202、乳酸杆菌HX2116和酿酒酵母HX3201条件下进行发酵后，取出打浆，再离心，过滤，收集滤液即得，本发明所得的酵素原液SOD活性＞50U/mL，具有抗氧化活性；本发明方法材料易得，安全绿色，成本较低，所得酵素具有很好的抗氧化功效，安全环保。

Description

一种具有抗氧化活性的甜柿酵素的制备方法
技术领域
本发明涉及酵素技术领域，具体涉及一种具有抗氧化活性的甜柿酵素及其制备方法。
背景技术
酵素存在于所有活的动植物体内，是维持机体正常功能，消化食物，修复组织等生命活动的一种必需物质；随着年龄的增长和饮食安全、生活环境等问题，人体内的酵素含量在逐年的下降，身体会由于酵素的流失使身体代谢速率下降，容易产生亚健康和慢性病等问题，如身体的老化，三高等，已经是属于常见慢性病。
酵素富含酶、维生素和次生代谢产物等活性营养成分，具有促进人体新陈代谢、增强机体免疫、调节肠道、抗氧化、抑菌消炎等功效，随着生活水平日益提高，人们日益关注养生保健；据预测，全球处于亚健康状态的人占75％，养生保健品在全球市场开发前景广阔。
罗田甜柿，系中国湖北省大别山区罗田县产的甜柿，是中国地理标志产品，是世界唯一自然脱涩的甜柿品种，成熟后不需加工，可直接食用，其富含果胶，有助于降低血压，软化血管，增加冠状动脉流量，并且能活血消炎，改善心血管功能。
发明内容
为了解决上述问题，
本发明提供了一种具有降脂活性的酵素的制备方法，包括以下步骤：
(1)番茄洗净沥干，粉碎打浆后向番茄浆液中加入蒸馏水和果胶酶，混匀后在15—45℃条件下静置20—100min，得到番茄果浆；所述蒸馏水的质量为番茄浆液质量的20—60％，果胶酶的质量为番茄浆液质量的1—8％；
(2)甜柿洗净沥干，粉碎打浆，粉碎打浆后向甜柿浆液中加入蒸馏水和果胶酶，混匀后在15—45℃条件下静置20—100min，得到甜柿果浆；所述蒸馏水的质量为甜柿浆液质量的20—60％，果胶酶的质量为甜柿浆液质量的1—8％；
(3)将甜柿果浆和番茄果浆按质量比1—10:1的比例搅拌混匀，用白砂糖调整使其糖度为8—20％，制得料液备用；
(4)分别将丙酸杆菌HX1202和乳酸杆菌HX2116培养至OD值0.6 —0.8，将酿酒酵母HX3201培养至106—107个/mL；将丙酸杆菌 HX1202、乳酸杆菌HX2116和酿酒酵母HX3201按照质量比为1—3： 1—3：1—6的比例接种到料液，然后在30℃条件下密封发酵，当料液不再产生气泡时，将料液至于4℃条件下静置密封保藏≥30d，熟化产生酵香后，取出料液，对其依次打浆、离心、过滤，收集滤液，滤液即为甜柿酵素原液；所述丙酸杆菌HX1202、乳酸杆菌HX2116和酿酒酵母HX3201三者接种量总和为料液质量的1—10％；所述丙酸杆菌HX1202的保藏分类命名为Propionibacterium sp.HX1202，保藏日期为2017年11月27日，保藏单位代码：CCTCC；保藏单位地址：中国.武汉.武汉大学；保藏编号为CCTCC NO:M2017736；
所述乳酸杆菌HX2116的保藏分类命名为Lactobacillus sp.HX2116；保藏日期为2017年11月27日，保藏单位代码：CCTCC；保藏单位地址：中国.武汉.武汉大学；保藏编号为CCTCC NO:M2017734；
酿酒酵母HX3201的保藏分类命名为Saccharomyces cerevisiae HX3201；保藏日期为2017年11月27日，保藏单位代码：CCTCC；保藏单位地址：中国.武汉.武汉大学；保藏编号为CCTCC NO:M2017735；
作为优选项：所述的步骤(4)浆液离心在转速＜5000r/min的低速下离心20min。
作为优选项：所述的步骤(4)微滤膜孔径为0.2-0.45μm。
作为优选项：所述的步骤(4)中密封发酵过程中前6d每天搅拌≥3次，之后每天搅拌≤1次；每次搅拌＜2min。
有益效果：(1)本发明所得的酵素原液SOD活性＞50U/mL，具有抗氧化活性；
(2)三种特定菌种进行复合发酵，形成了富含超氧化物歧化酶、乳酸、醋酸和乙醇等代谢产物的酵素产品，不仅改善了发酵基质原有的风味，更通过微生物发酵强化了产品的功能保健作用，如抗氧化、降脂作用等；
(3)产品加工技术均在40℃以下进行操作处理，充分保留了发酵基质及发酵过程产生的各种营养活性成分；
(4)本发明能够充分利用富余的金银花、甜柿、山药、葛根、红薯、板栗、藜蒿等特色资源，利用现代生物发酵技术开发了集营养保健一体的酵素健康产品，延伸了地方特色资源的产业链，附加值高，实现了特色资源的精深加工和综合利用；
(5)本发明方法材料易得，技术简单可行，投入成本低，绿色无污染，所得酵素具有很好的抗氧化功效，安全环保；有利于产业化。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步说明。
原料选取：甜柿选取地为黄冈市罗田县
实施例1：
番茄洗净沥干，粉碎打浆后向番茄浆液中加入蒸馏水和果胶酶，混匀后在30℃条件下静置30min，得到番茄果浆；所述蒸馏水的质量为番茄浆液质量的40％，果胶酶的质量为番茄浆液质量的2.5％；
甜柿洗净沥干，粉碎打浆，按甜柿浆液40％的质量比添加蒸馏水，按甜柿浆液2.5％的质量比加入果胶酶，混匀后在30℃条件下静置 30min，得到甜柿果浆；
将甜柿果浆和番茄果浆按质量比2:1放入灭菌的纤巧壶，搅拌混匀，用白砂糖调整糖度到12％，制得料液备用；
将丙酸杆菌HX1202和乳酸杆菌HX2116培养至OD值0.65，将酿酒酵母HX3201培养至3×106个/mL，丙酸杆菌HX1202、乳酸杆菌 HX2116和将酿酒酵母HX3201按照质量比为1:1:2的比例接种到料液，接种量为料液质量的6％，然后在30℃条件下密封发酵，前6d每天搅拌3次，之后每天搅拌1次，每次约1min，不再产生气泡时即结束发酵，调整温度到4℃静置密封保藏30d产生酵香，取出发酵液，在 150r/min转速下离心20min，离心液用0.25μm微滤膜过滤，滤液即为甜柿酵素原液，测定其SOD活性为95.24U/mL。
实施例2：
番茄洗净沥干，粉碎打浆，按番茄浆液40％的质量比添加蒸馏水，按番茄浆液3％的质量比加入果胶酶，混匀后在30℃条件下静置 30min，得到番茄果浆；
甜柿洗净沥干，粉碎打浆，按甜柿浆液40％的质量比添加蒸馏水，按甜柿浆液3％的质量比加入果胶酶，混匀后在30℃条件下静置 30min，得到甜柿果浆；
将甜柿果浆和番茄果浆按质量比2:1放入灭菌的纤巧壶，搅拌混匀，用白砂糖调整糖度到10％，制得料液备用；
将丙酸杆菌HX1202和乳酸杆菌HX2116培养至OD值0.65，将酿酒酵母HX3201培养至3×106个/mL，丙酸杆菌HX1202、乳酸杆菌 HX2116和将酿酒酵母HX3201按照质量比为1:1:2的比例接种到料液，接种量为料液质量的6％，然后在30℃条件下密封发酵，前6d每天搅拌3次，之后每天搅拌1次，每次约1min，不再产生气泡时即结束发酵，调整温度到4℃静置密封保藏30d产生酵香，取出发酵液，在 150r/min转速下离心20min，离心液用0.25μm微滤膜过滤，滤液即为甜柿酵素原液，测定其SOD活性为97.38U/mL。
实施例3：
番茄洗净沥干，粉碎打浆，按番茄浆液20％的质量比添加蒸馏水，按番茄浆液1％的质量比加入果胶酶，混匀后在15℃条件下静置 100min，得到番茄果浆；
甜柿洗净沥干，粉碎打浆，按甜柿浆液20％的质量比添加蒸馏水，按甜柿浆液1％的质量比加入果胶酶，混匀后在15℃条件下静置 100min，得到甜柿果浆；
将甜柿果浆和番茄果浆按质量比1:1放入灭菌的纤巧壶，搅拌混匀，用白砂糖调整糖度到8％，制得料液备用；
将丙酸杆菌HX1202和乳酸杆菌HX2116培养至OD值0.6，将酿酒酵母HX3201培养至106个/mL，丙酸杆菌HX1202、乳酸杆菌HX2116 和将酿酒酵母HX3201按照质量比为1:1:1的比例接种到料液，接种量为料液质量的1％，然后在30℃条件下密封发酵，前6d每天搅拌3次，之后每天搅拌1次，每次约1min，不再产生气泡时即结束发酵，调整温度到4℃静置密封保藏30d产生酵香，取出发酵液，在600r/min 转速下离心20min，离心液用0.2μm微滤膜过滤，滤液即为甜柿酵素原液，测定其SOD活性为102.35U/mL。
实施例4：
番茄洗净沥干，粉碎打浆，按番茄浆液60％的质量比添加蒸馏水，按番茄浆液8％的质量比加入果胶酶，混匀后在45℃条件下静置 20min，得到番茄果浆；
甜柿洗净沥干，粉碎打浆，按甜柿浆液60％的质量比添加蒸馏水，按甜柿浆液8％的质量比加入果胶酶，混匀后在45℃条件下静置 20min，得到甜柿果浆；
将甜柿果浆和番茄果浆按质量比10:1放入灭菌的纤巧壶，搅拌混匀，用白砂糖调整糖度到20％，制得料液备用；
将丙酸杆菌HX1202和乳酸杆菌HX2116培养至OD值0.8，将酿酒酵母HX3201培养至107个/mL，丙酸杆菌HX1202、乳酸杆菌HX2116 和将酿酒酵母HX3201按照质量比为1:1:6的比例接种到料液，接种量为料液质量的10％，然后在30℃条件下密封发酵，前6d每天搅拌 3次，之后每天搅拌1次，每次约1min，不再产生气泡时即结束发酵，调整温度到4℃静置密封保藏30d产生酵香，取出发酵液，在150r/min 转速下离心20min，离心液用0.45μm微滤膜过滤，滤液即为甜柿酵素原液，测定其SOD活性为50.18U/mL。
实施例5：抗氧化活性
取实施例1的甜柿酵素原液，利用总抗氧化试剂盒、羟基自由基试剂盒、超氧阴离子试剂盒评价抗氧化活性，维生素C为对照，结果发现1mL金银花-甜柿酵素复合饮料总抗氧化能力相当于90.26mgVC，羟自由基清除能力相当于373.34mgVC，超氧阴离子清除能力相当于 1.06mgVC，表现出较强的抗氧化活性。
上述实施例中酵母培养基配方：1％Yeast Extract(酵母膏)， 2％Peptone(蛋白胨)，2％Dextrose(glucose)(葡萄糖)，培养条件；pH6.8—7.2；细菌培养基配方：蛋白胨1％，酵母提取物0.5％，NaCl 1％，培养条件pH7.0-7.4。
上述培养基和培养方法均属于现有技术，不做其他说明。
应当理解的是，本说明书未详细阐述的部分均属于现有技术。
应当理解的是，上述针对较佳实施例的描述较为详细，并不能因此而认为是对本发明专利保护范围的限制，本领域的普通技术人员在本发明的启示下，在不脱离本发明权利要求所保护的范围情况下，还可以做出替换或变形，均落入本发明的保护范围之内，本发明的请求保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (4)

1.一种具有抗氧化活性的甜柿酵素的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)番茄洗净沥干，粉碎打浆后向番茄浆液中加入蒸馏水和果胶酶，混匀后在15—45℃条件下静置20—100min，得到番茄果浆；所述蒸馏水的质量为番茄浆液质量的20—60％，果胶酶的质量为番茄浆液质量的1—8％；
(2)甜柿洗净沥干，粉碎打浆，粉碎打浆后向甜柿浆液中加入蒸馏水和果胶酶，混匀后在15—45℃条件下静置20—100min，得到甜柿果浆；所述蒸馏水的质量为甜柿浆液质量的20—60％，果胶酶的质量为甜柿浆液质量的1—8％；
(3)将甜柿果浆和番茄果浆按质量比1—10:1的比例搅拌混匀，用白砂糖调整使其糖度为8—20％，制得料液备用；
(4)分别将丙酸杆菌HX1202和乳酸杆菌HX2116培养至OD值0.6—0.8，将酿酒酵母HX3201培养至106—107个/mL；将丙酸杆菌HX1202、乳酸杆菌HX2116和酿酒酵母HX3201按照质量比为1—3：1—3：1—6的比例接种到料液，然后在30℃条件下密封发酵，当料液不再产生气泡时，将料液至于4℃条件下静置密封保藏≥30d，熟化产生酵香后，取出料液，对其依次打浆、离心、过滤，收集滤液，滤液即为甜柿酵素原液；所述丙酸杆菌HX1202、乳酸杆菌HX2116和酿酒酵母HX3201三者接种量总和为料液质量的1—10％。
2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述的步骤(4)浆液离心在转速＜5000r/min的低速下离心20min。
3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述的步骤(4)微滤膜孔径为0.2-0.45μm。
4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述的步骤(4)中密封发酵过程中前6d每天搅拌≥3次，之后每天搅拌≤1次；每次搅拌＜2min。
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