CN108085387B - 检测人brca1/2基因突变的特异性捕获探针、试剂盒、测序文库及其构建方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种检测人BRCA1/2基因突变的特异性捕获探针、试剂盒、测序文库及其构建方法。该特异性捕获探针包括SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:241所示的序列。本申请所提供的特异性捕获探针及试剂盒通过优化探针体系，能够实现以低至30ng的DNA样本起始量，通过一次液相杂交捕获获得BRCA1/2基因目的区域的全部信息，且能够更灵敏地对各种类型突变进行检测。

Description

检测人BRCA1/2基因突变的特异性捕获探针、试剂盒、测序文 库及其构建方法

技术领域

本发明涉及高通量测序技术领域，具体而言，涉及一种检测人BRCA1/2基因突变的特异性捕获探针、试剂盒、测序文库及其构建方法。

背景技术

对于BRCA基因的检测方法，最早是在20世纪90年代使用一代sanger测序的方法，然而随着测序技术的发展，这一方法的缺点日益凸显，主要表现在通量小、成本高，很难满足大量样本的多基因测序分析。伴随着下一代测序技术(Next Generation Sequencing,NGS)的不断成熟应用，在临床应用的适用性也得到广泛认可，而且BRCA1/2基因本身非常大，突变广泛分布在基因的各个外显子及其调控区域，并且没有很明显的高频热点突变。如果采用一代sanger测序对BRCA1/2整个基因进行检测，需要消耗大量检测成本和时间成本；而NGS的目标区域捕获测序可以快速全面地检测BRCA1/2基因全部外显子、外显子内含子交接处的突变情况，Foundation Focus^TMCDx BRCA是第一个获得FDA批准的以目标区域测序为技术的临床伴随诊断，该诊断就是针对BRCA1/2基因进行的全面筛查。

目标序列捕获测序是通过技术手段将基因组特定的区域进行富集后建库测序，是提高检测灵敏度和特异性的重要手段。目前主流的目标序列捕获的方法主要有两种，液相杂交捕获法和多重PCR法。多重PCR法操作简便快速，但是由于引物设计的局限更适合捕获较小的区域，相比之下，液相杂交捕获法适合捕获较大的区域，更适合做基因全外显子的检测。

目前基于Illumina平台液相杂交捕获技术进行BRCA1/2基因检测的专利技术有：《一种用于乳腺癌易感基因BRCA1和BRCA2突变检测的杂交捕获试剂盒及其方法》，专利号CN106676169A；《基于高通量测序检测人BRCA1/2基因变异的质控方法及试剂盒》，专利号CN106381334A；《基于高通量测序检测人BRCA1/2基因的捕获探针及试剂盒》，专利号CN106319065A。其中《一种用于乳腺癌易感基因BRCA1和BRCA2突变检测的杂交捕获试剂盒及其方法》以150ng DNA样本起始，采用了两次杂交捕获，增加了检测的复杂度和质控的不确定性，同时也增加了检测周期；《基于高通量测序检测人BRCA1/2基因变异的质控方法及试剂盒》和《基于高通量测序检测人BRCA1/2基因的捕获探针及试剂盒》使用的DNA样本起始量为200ng，当样本较为珍贵的时候，低起始量准确检测成为可能需求。

因此，如何提供一种能够以低于150ng的DNA样本起始量来获得捕获效率较高的目的片段进行检测，目前还没有有效的解决办法。

发明内容

本发明的主要目的在于提供一种检测人BRCA1/2基因突变的特异性捕获探针、试剂盒、测序文库及其构建方法，以解决现有技术中对人BRCA1/2基因突变进行检测时，对DNA的样本起始量要求比较高的问题。

为了实现上述目的，根据本发明的一个方面，提供了一种检测人BRCA1/2基因突变的特异性捕获探针，该特异性捕获探针包括如表1中SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:241所示的序列。

为了实现上述目的，根据本发明的一个方面，提供了一种检测人BRCA1/2基因突变的试剂盒，试剂盒包括上述任一种特异性捕获探针。

进一步地，特异性捕获探针为SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:241所示的序列按等比例混合的混合物，优选特异性捕获探针的工作浓度为0.5pM-1.0pM。

进一步地，试剂盒还包括接头封闭试剂。

进一步地，接头封闭试剂包括SEQ ID NO:242和SEQ ID NO:243所示的序列。

进一步地，试剂盒还包括文库封闭剂。

进一步地，试剂盒还包括阴性质控品和阳性质控品。

进一步地，试剂盒还包括纯化相关试剂。

根据本发明的另一方面，提供了一种检测人BRCA1/2基因突变的测序文库，测序文库通过采用上述任一种试剂盒构建而成。

根据本发明的另一方面，提供了一种检测人BRCA1/2基因突变的测序文库的构建方法，构建方法采用试剂盒进行构建，试剂盒为上述任一种试剂盒。

应用本发明的技术方案，本申请所提供的特异性捕获探针及试剂盒通过优化探针体系，能够实现以低至30ng的DNA样本起始量，通过一次液相杂交捕获获得BRCA1/2基因目的区域的全部信息，且能够更灵敏地对各种类型(SNP、Insertion、Deletion等)的突变进行检测。

具体实施方式

需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。下面将结合实施例来详细说明本发明。

如背景技术所提到的，现有技术中，在采用Illumina平台液相杂交捕获方法进行BRCA1/2基因检测时，存在样本的DNA起始量较高的缺陷，而当某些珍贵的样本量比较低时，目前的方法无法实现目的区域捕获的目的。为了改善这一状况，在本申请一种典型的实施方式中，提供了一种检测人BRCA1/2基因突变的特异性捕获探针，特异性捕获探针包括如表1中SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:241所示的序列。

表1：

本申请的上述探针序列通过对BRCA1/2整个基因的目标区域进行分区，每个分区进行120bp长度的探针设计，至少1次被探针覆盖。每条探针和全基因组进行比对(网址：https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi？PROGRAM＝blastn&PAGE_TYPE＝BlastSearch&LINK_LOC＝blasthome)，选取Score值均为0的探针。选取的探针集再次比对BRCA1/2整个基因的目标区域，以确保目标区域全部覆盖。

本申请的上述探针序列具有更高的特异性和均一性，每一条探针序列均是特异性结合到BRCA1/2的目标区域，而不能结合到全基因组上的其他区域。每条探针的长度均为120bp，更均一的探针长度使得探针和模板之间的结合温度更一致，从而提高了各条探针和模板结合的均一性，在杂交捕获温度一致的条件下增加了模板利用率。因而利用本申请所提供的检测人BRCA1/2基因突变的特异性捕获探针进行目的区域捕获时，对模板的起始量要求相应较低，在低于150ng的情况下即可完成覆盖整个BRCA1/2基因突变目的区域的捕获。

在本申请第二种典型的实施方式中，提供了一种检测人BRCA1/2基因突变的试剂盒，该试剂盒包括上述提供的SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:241的特异性捕获探针。该试剂盒提供的特异性捕获探针具有更高的特异性和均一性，每一条探针序列均是特异性结合到BRCA1/2目标区域，而不能结合到全基因组上的其他区域。每条探针的长度均为120bp，更均一的探针长度使得探针和模板之间的结合温度更一致，从而提高了各条探针和模板结合的均一性，在杂交捕获温度一致的条件下增加了模板利用率，因而该试剂盒实现了低起始量检测的目标。

上述试剂盒中，特异性捕获探针为SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:241所示的序列按等比例混合的混合物，优选特异性捕获探针的工作浓度为0.5pM-1.0pM。由于特异性捕获探针的末端具有生物素修饰，因此在后续杂交捕获之后，延伸后的片段可以连同杂交捕获得到的目的片段一起被带有链霉亲合素的磁珠所收集。随后的洗脱液可以将未被探针和特异引物捕获的片段冲洗掉。

因而，进一步地，上述试剂盒中，除了包括上述捕获目的区域的特性捕获探针外，还可以包括其他的检测试剂，以使得检测更方便快捷。在本申请一种优选的实施例中，试剂盒还包括接头封闭试剂。此处的接头封闭试剂可以是现有市售的各种用于杂交捕获步骤之前的接头封闭试剂和文库中目的片段中的重复序列的封闭试剂，也可以是在此基础上进行适当改进得到的封闭试剂。在本申请一种优选的实施例中，接头封闭试剂包括SEQ ID NO:242和SEQ ID NO:243所示的序列。

SEQ ID NO:242所示的接头封闭序列为P5接头的封闭序列，具体序列为：AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCInverted dT。

SEQ ID NO:243所示的接头封闭序列为P7接头的封闭序列，具体序列为：CAAGCAGAAGACGGCATACGAGATNGTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCInverted dT，其中N代表index的反向互补序列，N的数量可以是6、8或12。

本申请所提供的上述试剂盒中的封闭试剂采用3’末端反向dT修饰的特异性封闭试剂进行文库接头封闭，该封闭试剂可以与接头头序列高效结合，减少了由于接头封闭不彻底造成的非特异性捕获，进一步提高了特异性捕获探针的捕获效率，从而降低对DNA样本起始量的要求，实现了低起始量检测的目标。

在本申请一种优选的实施例中，上述试剂盒还包括文库封闭剂。用于提高杂交捕获之前对预扩增文库中目的插入片段的重复序列进行封闭，以提高捕获效率。

在本申请一种优选的实施例中，上述试剂盒还包括杂交清洗液和杂交增强剂。具体的杂交清洗液和杂交增强剂可以是现有市售试剂盒中的相关试剂。

在本申请一种优选的实施例中，上述试剂盒还包括阴性质控品和阳性质控品。阴性质控品的目的是作为阴性对照，在利用该试剂盒时，该阴性质控品中的检测结果为阴性，以确保操作过程无误。而阳性质控品的是指含有BRCA1/2基因突变的DNA样品，可以是任何在BRCA1/2基因处为突变基因型的样品。阳性质控品的目的是作为阳性对照，在利用该试剂盒时，该阳性质控品中的检测结果为阳性，以确保操作过程无误。如果操作结果显示，阴性质控品的结果为阳性，或者阳性质控品的结果为阴性，均能表明此处操作过程存在失误，结果不可信。

在本申请一种优选的实施例中，上述试剂盒还包括纯化相关试剂。纯化相关试剂包括与探针特异性结合的磁珠及磁珠清洗液，清洗缓冲液等。

在本申请一种更优选的实施例中，提供了一种具体如下表2所示成份及其数量和储存温度的试剂盒。

表2：

上表2中，接头封闭剂1的序列如SEQ ID NO:242所示，接头封闭剂2-1至接头封闭剂2-24的序列如SEQ ID NO:243所示，不同的是，接头封闭剂2-1至接头封闭剂2-24中的标签(index)封闭剂的序列各不相同，且与各自对应的index序列反向互补。

在本申请第三种典型的实施方式中，提供了一种检测人BRCA1/2基因突变的测序文库，测序文库通过采用上述任一种试剂盒构建而成。采用本申请的试剂盒构建而成的测序文库中，目的区域片段的占比较高，可以高达60％～70％。

在本申请第四种典型的实施方式中，提供了一种检测人BRCA1/2基因突变的测序文库的构建方法，该构建方法采用试剂盒进行构建，试剂盒为上述任一种试剂盒。采用本申请的试剂盒构建而成的测序文库中，目的区域片段的占比较高，可以高达60％～70％。

具体地，上述测序文库的详细构建方法如下：

1)探针的设计和制备

对BRCA1/2整个基因的目标区域进行分区，每个分区进行120bp长度的探针设计，至少1次被探针覆盖。每条探针和全基因组进行比对(网址：https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi？PROGRAM＝blastn&PAGE_TYPE＝BlastSearch&LINK_LOC＝blasthome)，选取Score值均为0的探针。选取的探针集再次BRCA1/2整个基因的目标区域，确保目标区域全部覆盖。

2)封闭试剂的使用

根据文库接头中不同的标签序列(index)，使用对应的接头封闭试剂对文库进行封闭。

3)使用探针和杂交捕获试剂进行目的片段的捕获和洗脱

将以上合成的探针进行等比例混合，最终的浓度为0.5pM-1.0pM使用。由于特异引物末端具有生物素修饰，因此在后续杂交捕获之后，延伸后的片段可以连同杂交捕获得到的目的片段一起被带有链霉亲合素的磁珠所收集。随后的洗脱液可以将未被探针和特异引物捕获的片段冲洗掉。

4)捕获片段的PCR扩增

无论是被杂交探针还是特异引物捕获下来的目的片段两端都已经连接上Illumina平台测序所需的接头，因此使用通用P5/P7引物将目的片段进行扩增。

5)上机测序

将构建的捕获文库使用Illumina测序平台进行上机测序，得到原始测序数据。

6)信息分析

使用杂交捕获信息分析流程，对原始测序数据进行质控参数的分析，包括目标区域覆盖度、平均测序深度、捕获效率和均一性等。

下面将结合具体的实施例来进一步说明本申请的有益效果。

实施例1

采用不同样本起始量来检测BRCA1/2基因变异结果，具体样本信息见表3。

表3：

上述全血样本进行提取，进行定量后精确计算拷贝数，根据拷贝数等比例混合上述样本后获得测试样本，测试样本的理论突变值为商业试剂盒(Agilent SureSelect QXTReagentKit，厂商：安捷伦，货号：G9681B))测试结果。具体所用到的试剂和仪器见表4。

表4：

操作流程：

1)捕获前文库构建：分别取30ng、50ng、100ng、150ng、200ng测试样本DNA打断成200-300bp的片段，使用通用基因测序用文库试剂盒，按照试剂盒说明书进行捕获前文库的构建，并对文库进行纯化和Qubit定量。

2)液相杂交捕获

2.1捕获探针的准备

合成的探针进行等比例混合，最终工作液的浓度为0.75pM使用，放置于冰盒内。

2.2分别取制备的捕获前文库各400ng，命名为样本1和样本2，每份样本分别加入5μL文库封闭剂和1μL接头封闭剂1，对应index的4μL接头封闭剂2，涡旋混匀，将上述混合液真空抽干。

2.3将上一步骤中烘干的混合物加入8.5μL杂交缓冲液，2.7μL杂交增强剂和1.8μL无RNA酶水(Nuclease-Free Water)，颠倒混匀并在室温放置5～10min；

2.4将混合物转移到0.2mL的PCR管中，95℃孵育10min；

2.5在室温条件下，各文库加入1μL探针，涡旋混匀，并瞬时离心。再在PCR仪上65℃孵育4h(PCR仪的加热盖设置为75℃)。

2.6按照表5所示的配方准备洗脱缓冲液(1×)。

表5：

注意：洗脱缓冲液配制前要提前在室温放置2h。

2.7按照表6所示的缓冲液及程序进行孵育。

表6：

溶液	1×洗脱缓冲液	工作温度
			清洗缓冲液1	100μL	65℃
清洗缓冲液1	200μL	室温(15–25℃)
			增强清洗缓冲液	400μL	65℃

2.8磁珠的准备

a.从4℃冰箱取出Dynabeads M-270 streptavidin磁珠，涡旋15 s，在室温下放置30 min左右。

b.在每个200μL EP管内加入100μL磁珠，在磁力架吸附至溶液清亮后，用枪头小心吸取丢弃上清；

c.加入200μL磁珠清洗液，并涡旋混匀10 s。在磁力架吸附至溶液清亮后，用枪头小心吸取丢弃上清；

d.重复步骤3；

e.加入磁珠清洗液，在磁力架吸附至溶液清亮后，用枪头小心吸取丢弃上清。

2.9链霉亲和素磁珠吸附杂交捕获目标区域

将2.5的产物转移到步骤2.8-e中的EP管内，颠倒混匀10次；在热循环仪上(盖子温度设为75℃)进行65℃孵育45min，其中每隔12min涡旋3s。

2.10冲洗链霉亲和素磁珠以去除未结合的DNA

f.加入100μL 65℃预热的清洗缓冲液1，涡旋混匀并瞬时离心；

g.在磁力架吸附至溶液清亮后，用枪头小心吸取丢弃上清；

h.加入200μL增强清洗缓冲液,颠倒混匀10次，并于65℃孵育5min；

i.在磁力架吸附至溶液清亮后，用枪头小心吸取丢弃上清；

j.重复步骤h和i。

k.加入200μL常温孵育的清洗缓冲液1，涡旋混匀2min，并瞬时离心；

l.在磁力架吸附至溶液清亮后，用枪头小心吸取丢弃上清；

m.加入200μL常温孵育的清洗缓冲液2，涡旋混匀1min，并瞬时离心；

n.在磁力架吸附至溶液清亮后，用枪头小心吸取丢弃上清；

o.加入200μL常温孵育的清洗缓冲液3，涡旋混匀30s，并瞬时离心；

p.在磁力架吸附至溶液清亮后，用枪头小心吸取丢弃上清。

q.将上步EP管转移到试管架上，并加入20μL NFW，上下颠倒混匀10次以重悬磁珠。

3)杂交捕获后的PCR扩增

3.1.PCR反应试剂的配制表如下表7。

表7：

反应体系	体积(μL)
		聚合酶	25
引物混合液	5
		带有DNA的磁珠(来自步骤3)	20
总体积	50

将配制好的PCR混合物涡旋混匀，并瞬时离心；

3.2按照以下表8所示的PCR反应程序进行PCR反应。

表8：

4)扩增后的纯化

4.1加入75μL(1.5×)VAHTS DNAClean Beads到每个PCR扩增管内，涡旋混匀，并常温孵育10min；

4.2磁力架吸附5min，待溶液清亮后，用枪头小心吸取丢弃上清；

4.3加入200μL 80％乙醇漂洗DNA，在磁力架上静置30s，用枪头吸取丢弃上清；

4.4重复上一步；

4.5瞬时离心，待乙醇收集至管底，吸净管底残留的液体，室温晾干5-10min；

4.6加入22μL NFW，涡旋混匀，室温静置5min；

4.7瞬时离心，吸取20μL液体至新的EP管内；

5)文库质控

采用VAHTS^TMLibrary Quantification Kit for

试剂盒进行定量杂交捕获的DNA浓度，采用Aglient 2100对文库片段进行检测。

6)使用Illumina Nextseq550测序仪进行文库的测序。

7)使用生物信息分析流程，对原始数据的捕获质控信息进行分析。突变检出结果如下表9。

表9：

表10：目标区域覆盖度、平均测序深度、捕获效率和均一性的检测结果

从以上的描述中，可以看出，本发明上述的实施例实现了如下技术效果：本申请通过提供具有更高特异性和均一性的针对人BRCA1/2基因的特异性捕获探针混合物，其中每一条探针序列均是特异性结合到BRCA1/2目标区域(而不结合到全基因组上的其他区域)，且每条探针的长度均为120bp，更均一的探针长度使得探针和模板之间的结合温度更一致，从而提高了各条探针和模板结合的均一性，在杂交捕获温度一致的条件下增加了模板利用率，因而降低了对模板起始量的要求，实现了低起始量检测的目标。

本申请提供的能够用于低DNA起始量检测BRCA1/2基因突变的探针和试剂盒，试剂盒中除了包括探针外，还包括杂交捕获之前的封闭试剂，本申请提供的封闭试剂采用3’末端进行反向dT修饰的特异性P5和P7接头封闭试剂。该封闭试剂对文库接头具有更高的结合效率，同时可减少因接头连接导致的非目标区域捕获，Index特异性封闭降低了封闭序列对后续PCR过程的影响。提高了捕获效率，进一步提高了模板的利用率。

由此可见，本申请的试剂盒使用的探针长度更加均一，具有更好的结合效率，并且有高度的特异性，使得样本的模板利用率更高。通过探针和接头封闭试剂两方面的优化，使本试剂盒能够在低至30ng的样本起始量条件下准确检出BRCA各类型突变。

以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

序列表

<110> 天津诺禾致源生物信息科技有限公司

<120> 检测人BRCA1/2基因突变的特异性捕获探针、试剂盒、测序文库及其构建方法

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taaaagttgg ttaaccagaa tatctttatg taggattcag agtaaaatca aagtgtttgt 60

tccaatacag cagatgaaat attacctaga tcttgccttg gcaagtaaga tgtttccgtc 120

<210> 19

<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 19

aaatcgtgtg gcccagactc ttccagctgt tgctcctcca catcaacaac cttaatgagc 60

tcctcttgag atgggtagtt tctattctga agactcccag agcaactgtg catgtaccac 120

<210> 20

<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 20

ctatcatcta atgatgggca tttagaaggg gatgacctag aaagataaat ggaaggagaa 60

aaccatcgcc accaattgtg aaaggacaaa tcatacttgc tgggcagcca aagcataaat 120

<210> 21

<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 21

gttcaatata aataaagatg tcagatacca cagcatcttt acattgatgt ttcttacctt 60

tccactcctg gttctttatt tttactggta gaactatctg cagacacctc aaacttgtca 120

<210> 22

<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 22

gcagaaaggc cttctggatt ctggcttata gggtattcac tacttttctg tgaagttaat 60

actgctttaa atggaatgag aaaacaaatc tactttactg ctttgttctg atagtgataa 120

<210> 23

<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 23

cttaagatat cagtgtttgg ccaacaatac acaccttttt ctgatgtgct ttgttctgga 60

tttcgcaggt cctcaagggc agaagagtca cttatgatgg aagggtagct gttagaaggc 120

<210> 24

<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 24

tggctcccat gctgttctaa cacagcttct agttcagcca tttcctgctg gagctttatc 60

aggttatgtt gcatggtatc cctctgcttc aaaaacgata aatggcacca agaaaatgaa 120

<210> 25

<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 25

agaatgtggg atacatacta ctgaatgcaa aggacaccac acacacgcat gtgcacacac 60

acacacgctt tttacctgag tggttaaaat gtcactctga gaggatagcc ctgagcagtc 120

<210> 26

<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 26

ttcagagacg cttgtttcac tctcacaccc agatgctgct tcaccttaaa taacaaaaac 60

agaggttcag atgtaaaagc agactataaa cgctgcaact tgctgtgtct ttttcttctc 120

<210> 27

<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 27

gcaaacacaa aaacctggtt ccaataccta agtttgaatc catgctttgc tcttcttgat 60

tattttcttc caagcccgtt cctctttctt catcatctga aaccaattcc ttgtcactca 120

<210> 28

<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 28

gaccaactcc ctggctttca gactgatgcc tcatttgttt ggaagaacca atcaagaaag 60

gatcctgggt gtttgtattt gcagtcaagt cttccaattc actgcactgt gaagaaaaca 120

<210> 29

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<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 29

agctagcaga acattttgtt tcctcactaa ggtgatgttc ctgagatgcc tttgccaata 60

ttacctggtt actgcagtca tttaagctat tcttcaatga taataaattc tcctctgtgt 120

<210> 30

<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 30

tcttagacag acactcggta gcaacggtgc tatgcctagt agactgagaa ggtatattgt 60

ttactttacc aaataacaag tgttggaagc agggaagctc ttcatcctca ctagataagt 120

<210> 31

<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 31

tctcttctga ggactctaat ttcttggccc ctcttcggta accctgagcc aaatgtgtat 60

gggtgaaagg gctaggactc ctgctaagct ctcctttctg gacgcttttg ctaaaaacag 120

<210> 32

<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 32

cagaactttc cttaatgtca ttttcagcaa aactagtatc ttcctttatt tcaccatcat 60

ctaacaggtc atcaggtgtc tcagaacaaa cctgagatgc atgactactt cccataggct 120

<210> 33

<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 33

gttctaagtt atctgaaatc agatatggag agaaatctgt attaacagtc tgaactactt 60

cttcatattc ttgctttttt atttcaggat gcttacaatt acttccagga agactttgtt 120

<210> 34

<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 34

tatagacctc aggttgcaaa acccctaatc taagcatagc attcaatttt ggccctctgt 60

ttctacctag ttctgcttga atgttttcat cactggaacc tatttcatta atactggagc 120

<210> 35

<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 35

ccacttcatt agtactggaa cctacttcat taatattgct tgagctggct tctttaaaaa 60

cattttctct aatgttatta cggctaattg tgctcactgt acttggaatg ttctcatttc 120

<210> 36

<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 36

ccatttctct ttcaggtgac attgaatgtt cctcaaagtt ttcctctagc agatttttct 60

tacatttagt tttaacaaat gacttgatgg gaaaaagtgg tggtatacga tatgggtttt 120

<210> 37

<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 37

gtaaaagtcc atgtttattt ggagtaatga gtccagtttc gttgcctctg aactgagatg 60

atagacaaaa cctagagcct cctttgatac tacatttggc attatcaact ggcttatctt 120

<210> 38

<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 38

tctgaccaac cacaggaaag cctgcagtga tattaactgt ctgtacaggc ttgatattag 60

actcattctt tccttgattt tcttcctttt gttcacattc aaaagtgact tttggacttt 120

<210> 39

<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 39

gtttctttaa ggacccagag tgggcagaga atgttgcaca ttcctcttct gcatttcctg 60

gatttgaaaa cggagcaaat gactggcgct ttgaaacctt gaatgtattc tgcaaatact 120

<210> 40

<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 40

gagcatcaag ttcactttct tccatttcta tgcttgtttc ccgactgtgg ttaacttcat 60

gtcccaatgg atacttaaag ccttctgtgt catttctatt atctttggaa caaccatgaa 120

<210> 41

<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 41

ttagtccctt ggggttttca aatgctgcac actgactcac acatttattt ggttctgttt 60

ttgccttccc tagagtgcta acttccagta acgagatact ttcctgagtg ccataatcag 120

<210> 42

<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 42

taccaggtac caatgaaata ctgctactct ctacagatct ttcagtttgc aaaacccttt 60

ctccacttaa catgagatct ttggggtctt cagcattatt agacacttta actgtttcta 120

<210> 43

<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 43

gtttctcttc tttttcttct cttggaaggc taggattgac aaattcttta agttcactgg 60

tatttgaaca cttagtaaaa gaaccaggtg catttgttaa cttcagctct gggaaagtat 120

<210> 44

<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 44

cgctgtcatg tcttttactt gtctgttcat ttggcttgtt actcttcttg gctccagttg 60

caggttcttt accttccatg agttgtaggt ttctgctgtg cctgactggc atttggttgt 120

<210> 45

<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 45

actttttttt ctttatctct tcactgctag aacaactatc aatttgcaat tcagtacaat 60

taggtgggct tagatttcta ctgactacta gttcaagcgc atgaatatgc ctggtagaag 120

<210> 46

<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 46

acttcctcct cagcctattc tttttaggtg cttttgaatt gtggatattt aattcgagtt 60

ccatattgct tatactgctg cttataggtt cagctttcgt tttgaaagca gattcttttt 120

<210> 47

<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 47

cgagtgattc tattgggtta ggatttttct cattctgaat agaatcacct tttgttttat 60

tctcatgacc actattagta atattcatca cttgaccatt ctgctccgtt tggttagttc 120

<210> 48

<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 48

cctgatttat catttcagga gtcttttgaa ctgccaaatc tgctttcttg ataaaatcct 60

caggatgaag gcctgatgta ggtctccttt tacgctttaa tttatttgtg aggggacgct 120

<210> 49

<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 49

cttgtattat ctgtggctca gtaacaaatg ctcctataat tagattttca gttacatggc 60

ttaagttggg gaggcttgcc ttcttccgat aggttttccc aaatattttg tcttcaatat 120

<210> 50

<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 50

tactctctac tgatttggag tgaactcttt cacttttaca tattaaagcc tcatgaggat 60

cactggccag taagtctatt ttctctgaag aaccagaata ttcatctacc tcatttagaa 120

<210> 51

<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 51

cgtccaatac atcagctact ttggcatttg attcagactc cccatcatgt gagtcatcag 60

aacctaacag ttcatcactt ctggaaaacc actcattaac tttctgaatg ctgctattta 120

<210> 52

<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 52

gtgttatcca aggaacatct tcagtatctc taggattctc tgagcatggc agtttctgct 60

tattccattc ttttctctca cacaggggat cagcattcag atctaccttt ttttctgtgc 120

<210> 53

<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 53

tgggagtccg cctatcatta catgtttcct tacttccagc ccatctgtta tgttggctcc 60

ttgctaagcc aggctgtttg cttttattac agaattcagc cttttctaca ttcattctgt 120

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<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 54

ctttagtgag taataaactg ctgttctcat gctgtaatga gctggcatga gtatttgtgc 60

cacatggctc cacatgcaag tttgaaacag aactaccctg atacttttct ggatgcctct 120

<210> 55

<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 55

cagctgcacg cttctcagtg gtgttcaaat cattattact gggttgatga tgttcagtat 60

ttgttacatc cgtctcagaa aattcacaag cagctgaaaa tatacaaaaa taacaaggta 120

<210> 56

<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 56

tcttcagaat aatctaatta cagtactgta tctacccact ctcttttcag tgcctgttaa 60

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<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 57

cttgaggggt gatttgtaac aattcttgat ctcccacact atagggaaaa gacagagtcc 60

taataagaaa cactagttac atgtatgcag aactgtcaaa tgaccaagat caaacatttt 120

<210> 58

<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 58

ataccagctt catagacaaa ggttctcttt gactcacctg caataagttg ccttattaac 60

ggtatcttca gaagaatcag atcctaaaaa atttcccccc aaaaaataaa tcaataaaag 120

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<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 59

tggcaaaact ataagataag gaatccagca attattatta aatacttaaa aaacctgaga 60

cccttaccca attcaatgta gacagacgtc ttttgaggtt gtatccgctg ctttgtcctc 120

<210> 60

<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 60

agagttctca cagttccaag gttagagagt tggacactga gactggtttc ctgctaaaca 60

gtatggtaaa gaacagtcaa gcaattgttg gccagttctg tgcttttcct cctgaagaga 120

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<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 61

aaaaaaaaag aaaagaagaa gaagaagaag aagaaaacaa atggttttac caaggaagga 60

ttttcgggtt cactctgtag aagtcttttg gcacggtttc tgtagcccat actttggatg 120

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<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 62

atagaaactt catcttttag atgttcagga gagttatttt ccttttttgc aaaattatag 60

ctgtttgcat ctgtaaaata caagggaaaa cattatgttt gcagttagag aaaaatgtat 120

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<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 63

gaaagtaatt gtgcaaactt cctgagtttt catggacagc acttgagtgt cattcttggg 60

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<210> 64

<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 64

gctcttcaac aagttgacta aatctcgtac tttcttgtag gctcctgaaa ttaaattgtt 60

tgagaaacac actcagcaag tgattatcaa ccttttaagg acactaaaat aagaaaagac 120

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<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 65

aggaacgcta tgttattaaa taatttctac tttttcctac tgtggttgct tccaacctag 60

catcattacc aaattatata ccttttggtt atatcattct tacataaagg acactgtgaa 120

<210> 66

<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 66

ggccctttct tctggttgag aagtttcagc atgcaaaatc tataaattat aaagaaagaa 60

agaacaattt aatttacttc cttttgtaga aagaatactc aaaaggcaaa tagccatgaa 120

<210> 67

<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 67

aataatggag ccacataaca cattcaaact tacttgcaaa atatgtggtc acactttgtg 60

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<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 68

agcattggag gaatatcgta ggtaaaaatg cctattggat ccaaagagag gccaacattt 60

tttgaaattt ttaagacacg ctgcaacaaa gcaggtattg acaaatttta tataacttta 120

<210> 69

<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 69

tcacaaattt gtctgtcact ggttaaaact aaggtgggat ttttttttta aatagattta 60

ggaccaataa gtcttaattg gtttgaagaa ctttcttcag aagctccacc ctataattct 120

<210> 70

<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 70

gaacctgcag aagaatctga acataaaaac aacaattacg aaccaaacct atttaaaact 60

ccacaaagga aaccatctta taatcagctg gcttcaactc caataatatt caaagagcaa 120

<210> 71

<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 71

gggctgactc tgccgctgta ccaatctcct gtaaaagaat tagataaatt caaattagac 60

ttaggtaagt aatgcaatat ggtagactgg ggagaactac aaactaggaa tttaggcaaa 120

<210> 72

<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 72

tccaaagaat gcaaatttat aatccagagt atatacattc tcactgaatt attgtactgt 60

ttcaggaagg aatgttccca atagtagaca taaaagtctt cgcacagtga aaactaaaat 120

<210> 73

<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 73

ggatcaagca gatgatgttt cctgtccact tctaaattct tgtcttagtg aaaggtatga 60

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<210> 74

<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 74

aaataaccta agggatttgc tttgttttat tttagtcctg ttgttctaca atgtacacat 60

gtaacaccac aaagagataa gtcaggtatg attaaaaaca atgcttttta ttcttagaat 120

<210> 75

<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 75

aaataaaact taacaatttt cccctttttt tacccccagt ggtatgtggg agtttgtttc 60

atacaccaaa gtttgtgaag gtaaatattc tacctggttt atttttatga cttagtaatt 120

<210> 76

<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 76

aaaataatat ccttaatgat cagggcattt ctataaaaaa taaactattt tctttcctcc 60

cagggtcgtc agacaccaaa acatatttct gaaagtctag gagctgaggt ggatcctgat 120

<210> 77

<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 77

atgtcttggt caagttcttt agctacacca cccaccctta gttctactgt gctcataggt 60

aataatagca aatgtgtatt tacaagaaag agcagatgag gttgataatt gtcatctcta 120

<210> 78

<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 78

ataatataca atacacataa atttttatct tacagtcaga aatgaagaag catctgaaac 60

tgtatttcct catgatacta ctgctgtaag taaatatgac attgattaga ctgttgaaat 120

<210> 79

<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 79

ggactactac tatatgtgca ttgagagttt ttatactagt gattttaaac tataattttt 60

gcagaatgtg aaaagctatt tttccaatca tgatgaaagt ctgaagaaaa atgatagatt 120

<210> 80

<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 80

tatcgcttct gtgacagaca gtgaaaacac aaatcaaaga gaagctgcaa gtcatggtaa 60

gtcctctgtt tagttgaact acaggttttt ttgttgttgt tgttttgatt tttttttttt 120

<210> 81

<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 81

gcttataaaa tattaatgtg cttctgtttt atactttaac aggatttgga aaaacatcag 60

ggaattcatt taaagtaaat agctgcaaag accacattgg aaagtcaatg ccaaatgtcc 120

<210> 82

<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 82

tagaagatga agtatatgaa acagttgtag atacctctga agaagatagt ttttcattat 60

gtttttctaa atgtagaaca aaaaatctac aaaaagtaag aactagcaag actaggaaaa 120

<210> 83

<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 83

aaattttcca tgaagcaaac gctgatgaat gtgaaaaatc taaaaaccaa gtgaaagaaa 60

aatactcatt tgtatctgaa gtggaaccaa atgatactga tccattagat tcaaatgtag 120

<210> 84

<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 84

caaatcagaa gccctttgag agtggaagtg acaaaatctc caaggaagtt gtaccgtctt 60

tggcctgtga atggtctcaa ctaacccttt caggtctaaa tggagcccag atggagaaaa 120

<210> 85

<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 85

tacccctatt gcatatttct tcatgtgacc aaaatatttc agaaaaagac ctattagaca 60

cagagaacaa aagaaagaaa gattttctta cttcagagaa ttctttgcca cgtatttcta 120

<210> 86

<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 86

gcctaccaaa atcagagaag ccattaaatg aggaaacagt ggtaaataag agagatgaag 60

agcagcatct tgaatctcat acagactgca ttcttgcagt aaagcaggca atatctggaa 120

<210> 87

<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 87

cttctccagt ggcttcttca tttcagggta tcaaaaagtc tatattcaga ataagagaat 60

cacctaaaga gactttcaat gcaagttttt caggtcatat gactgatcca aactttaaaa 120

<210> 88

<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 88

aagaaactga agcctctgaa agtggactgg aaatacatac tgtttgctca cagaaggagg 60

actccttatg tccaaattta attgataatg gaagctggcc agccaccacc acacagaatt 120

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<213> 智人(Homo sapiens)

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ctgtagcttt gaagaatgca ggtttaatat ccactttgaa aaagaaaaca aataagttta 60

tttatgctat acatgatgaa acatcttata aaggaaaaaa aataccgaaa gaccaaaaat 120

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<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

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cagaactaat taactgttca gcccagtttg aagcaaatgc ttttgaagca ccacttacat 60

ttgcaaatgc tgattcaggt acctctgtct tttttttttt gtaaatagta catatagttt 120

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<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

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agtgaatgtg attgatggta ctttaatttt gtcactttgt gtttttatgt ttaggtttat 60

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<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

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taactagctc ttttgggaca attctgagga aatgttctag aaatgaaaca tgttctaata 60

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<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

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agttatttat taccccagaa gctgattctc tgtcatgcct gcaggaagga cagtgtgaaa 60

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<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

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acccagtaca acattcaaaa gtggaataca gtgatactga ctttcaatcc cagaaaagtc 60

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<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

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tgtcaaacct agtcatgatt tctagaggca aagaatcata caaaatgtca gacaagctca 60

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<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

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aagatgtatg tgctttaaat gaaaattata aaaacgttga gctgttgcca cctgaaaaat 60

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<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

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taatccaaaa aaatcaagaa gaaactactt caatttcaaa aataactgtc aatccagact 60

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<213> 智人(Homo sapiens)

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ataatcttgc tttaggaaat actaaggaac ttcatgaaac agacttgact tgtgtaaacg 60

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<213> 智人(Homo sapiens)

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cccaagtgtc aattaaaaaa gatttggttt atgttcttgc agaggagaac aaaaatagtg 60

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<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

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tagataaaat accagaaaaa aataatgatt acatgaacaa atgggcagga ctcttaggtc 60

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<213> 智人(Homo sapiens)

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tctctgaaca taacattaag aagagcaaaa tgttcttcaa agatattgaa gaacaatatc 60

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<213> 智人(Homo sapiens)

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tgagcaagcc tcagtcaatt aatactgtat ctgcacattt acagagtagt gtagttgttt 60

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caaaccataa tttaacacct agccaaaagg cagaaattac agaactttct actatattag 60

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<212> DNA

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agagtacatt tgaagtgcct gaaaaccaga tgactatctt aaagaccact tctgaggaat 60

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gcaagcaatt tgaaggtaca gttgaaatta aacggaagtt tgctggcctg ttgaaaaatg 60

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<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

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tttattctgc tcatggcaca aaactgaatg tttctactga agctctgcaa aaagctgtga 60

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gtttatcttc aagtaaatgt catgattctg ttgtttcaat gtttaagata gaaaatcata 60

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<213> 智人(Homo sapiens)

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<213> 智人(Homo sapiens)

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<213> 智人(Homo sapiens)

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<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

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<212> DNA

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<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

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ctggaaatca actagtgacc ttccagggac aacccgaacg tgatgaaaag atcaaagaac 60

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<212> DNA

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catgtgagac cattgagatc acagctgccc caaagtgtaa agaaatgcag aattctctca 60

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<212> DNA

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atttatgtag acaaactgaa aatctcaaaa catcaaaaag tatctttttg aaagttaaag 60

tacatgaaaa tgtagaaaaa gaaacagcaa aaagtcctgc aacttgttac acaaatcagt 120

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<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

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ccccttattc agtcattgaa aattcagcct tagcttttta cacaagttgt agtagaaaaa 60

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<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

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<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

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<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

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<213> 智人(Homo sapiens)

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tagaaaatca agaaaaatcc ttaaaggctt caaaaagcac tccagatggt aaaattagct 60

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<213> 智人(Homo sapiens)

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acttatatat tttctcccca ttgcagcaca actaaggaac gtcaagagat acagaatcca 60

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<212> DNA

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ttggaaaaat cttcaagcaa tttagcagtt tcaggacatc cattttatca agtttctgct 60

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tttttgtgtg tgtttatttt gtgtagctgt atacgtatgg cgtttctaaa cattgcataa 60

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gatccaaagc ttatttctag aatttgggtt tataatcact atagatggat catatggaaa 120

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<212> DNA

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<213> 智人(Homo sapiens)

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<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

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catatttaac tactaaatca atatatttat taatttgtcc agatttctgc taacagtact 60

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<213> 智人(Homo sapiens)

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<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 155

agttttagtt gcttttgaat ttacagttta gtgaattaat aatccttttg ttttcttaga 60

aaacacaaca aaaccatatt taccatcacg tgcactaaca agacagcaag ttcgtgcttt 120

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<213> 智人(Homo sapiens)

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ggtgagagag taagaggaca tataatgagg cttgatgatt attcaaggtg agaagctgtt 120

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caatatctta aatggtcaca gggttatttc agtgaagagc agttaagagc cttgaataat 120

<210> 158

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<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

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cacaggcaaa tgttgaatga taagaaacaa gctcagatcc agttggaaat taggaaggcc 60

atggaatctg ctgaacaaaa ggaacaaggt ttatcaaggg atgtcacaac cgtgtggaag 120

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<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 159

ttgcgtattg taagctattc aaaaaaagaa aaagattcag gtaagtatgt aaatgctttg 60

tttttatcag ttttattaac ttaaaaaatg accttactaa caaaatgatt ataaatccag 120

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<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

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cttcttccat tgcatctttc tcatctttct ccaaacagtt atactgagta tttggcgtcc 60

atcatcagat ttatattctc tgttaacaga aggaaagaga tacagaattt atcatcttgc 120

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<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

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aacttcaaaa tctaaaagta aatctgaaag agctaacata cagttagcag cgacaaaaaa 60

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<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 162

tgttagttta tggaatctcc atatgttgaa tttttgtttt gttttctgta ggtttcagat 60

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<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

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ccagactttc agccatcttg ttctgaggtg gacctaatag gatttgtcgt ttctgttgtg 60

aaaaaaacag gtaatgcaca atatagttaa ttttttttat tgattctttt aaaaaacatt 120

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<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

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cttaaaattc atctaacaca tctataataa cattcttttc ttttttttcc attctaggac 60

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<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

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tagaccttaa tgaggacatt attaagcctc atatgttaat tgctgcaagc aacctccagt 60

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<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

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ctgctagtcc aaaagagggc cactttcaag agacattcaa caaaatgaaa aatactgttg 60

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<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

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atgtgggttt gcaatttata aagcagcttt tccacttatt ttcttagaat attgacatac 60

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<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

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ccaccccaac taaagactgt acttcagggc cgtacactgc tcaaatcatt cctggtacag 60

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<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

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agttttttat gttactacat aattatgata ggctacgttt tcattttttt atcagatgtc 60

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<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

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gtctgtttcc acacctgtct cagcccagat gacttcaaag tcttgtaaag gggagaaaga 60

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<213> 智人(Homo sapiens)

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tttacctcca cctgttagtc ccatttgtac atttgtttct ccggctgcac agaaggcatt 60

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<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

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ttctcctcag atgactccat ttaaaaaatt caatgaaatt tctcttttgg aaagtaattc 60

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<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

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<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

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<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

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tgctacactg tccaacaccc actctcgggt caccacaggt gcctcacaca tctgcccaat 60

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<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

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tatagcacag gtacatgcag gcaccttacc atggaagcca ttgtcctctg tccaggcatc 60

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<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

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tccataggga ctgacaggtg ccagtcttgc tcacaggaga gaatattgtg tcctccctct 60

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<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

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gaagcaccac acagctgtac catccattcc agttgatcta aaatggacat ttagatgtaa 60

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<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

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<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

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<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

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<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 182

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<213> 智人(Homo sapiens)

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<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

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<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

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<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

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<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 188

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<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 189

acattctttt gttgaccctt tctgttgaag ctgtcaattc tggcttctcc ctgctcacac 60

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<213> 智人(Homo sapiens)

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<213> 智人(Homo sapiens)

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<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

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taaaagttgg ttaaccagaa tatctttatg taggattcag agtaaaatca aagtgtttgt 60

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<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

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<213> 智人(Homo sapiens)

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<212> DNA

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<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

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<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

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<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

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tggctcccat gctgttctaa cacagcttct agttcagcca tttcctgctg gagctttatc 60

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<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

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agaatgtggg atacatacta ctgaatgcaa aggacaccac acacacgcat gtgcacacac 60

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<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

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<213> 智人(Homo sapiens)

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<213> 智人(Homo sapiens)

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<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

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tctcttctga ggactctaat ttcttggccc ctcttcggta accctgagcc aaatgtgtat 60

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<213> 智人(Homo sapiens)

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<213> 智人(Homo sapiens)

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<213> 智人(Homo sapiens)

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<213> 智人(Homo sapiens)

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<211> 120

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<213> 智人(Homo sapiens)

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<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

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<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

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gagcatcaag ttcactttct tccatttcta tgcttgtttc ccgactgtgg ttaacttcat 60

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<210> 215

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<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

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ttagtccctt ggggttttca aatgctgcac actgactcac acatttattt ggttctgttt 60

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<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

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taccaggtac caatgaaata ctgctactct ctacagatct ttcagtttgc aaaacccttt 60

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<213> 智人(Homo sapiens)

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<213> 智人(Homo sapiens)

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<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 220

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<212> DNA

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<213> 智人(Homo sapiens)

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cttgtattat ctgtggctca gtaacaaatg ctcctataat tagattttca gttacatggc 60

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<213> 智人(Homo sapiens)

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<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 225

cgtccaatac atcagctact ttggcatttg attcagactc cccatcatgt gagtcatcag 60

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<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 226

gtgttatcca aggaacatct tcagtatctc taggattctc tgagcatggc agtttctgct 60

tattccattc ttttctctca cacaggggat cagcattcag atctaccttt ttttctgtgc 120

<210> 227

<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 227

tgggagtccg cctatcatta catgtttcct tacttccagc ccatctgtta tgttggctcc 60

ttgctaagcc aggctgtttg cttttattac agaattcagc cttttctaca ttcattctgt 120

<210> 228

<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 228

ctttagtgag taataaactg ctgttctcat gctgtaatga gctggcatga gtatttgtgc 60

cacatggctc cacatgcaag tttgaaacag aactaccctg atacttttct ggatgcctct 120

<210> 229

<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 229

cagctgcacg cttctcagtg gtgttcaaat cattattact gggttgatga tgttcagtat 60

ttgttacatc cgtctcagaa aattcacaag cagctgaaaa tatacaaaaa taacaaggta 120

<210> 230

<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 230

tcttcagaat aatctaatta cagtactgta tctacccact ctcttttcag tgcctgttaa 60

gttggcaaac tttgccatta cccttttttg cagaatccaa actgatttca tccctggttc 120

<210> 231

<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 231

cttgaggggt gatttgtaac aattcttgat ctcccacact atagggaaaa gacagagtcc 60

taataagaaa cactagttac atgtatgcag aactgtcaaa tgaccaagat caaacatttt 120

<210> 232

<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 232

ataccagctt catagacaaa ggttctcttt gactcacctg caataagttg ccttattaac 60

ggtatcttca gaagaatcag atcctaaaaa atttcccccc aaaaaataaa tcaataaaag 120

<210> 233

<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 233

tggcaaaact ataagataag gaatccagca attattatta aatacttaaa aaacctgaga 60

cccttaccca attcaatgta gacagacgtc ttttgaggtt gtatccgctg ctttgtcctc 120

<210> 234

<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 234

agagttctca cagttccaag gttagagagt tggacactga gactggtttc ctgctaaaca 60

gtatggtaaa gaacagtcaa gcaattgttg gccagttctg tgcttttcct cctgaagaga 120

<210> 235

<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 235

aaaaaaaaag aaaagaagaa gaagaagaag aagaaaacaa atggttttac caaggaagga 60

ttttcgggtt cactctgtag aagtcttttg gcacggtttc tgtagcccat actttggatg 120

<210> 236

<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 236

atagaaactt catcttttag atgttcagga gagttatttt ccttttttgc aaaattatag 60

ctgtttgcat ctgtaaaata caagggaaaa cattatgttt gcagttagag aaaaatgtat 120

<210> 237

<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 237

gaaagtaatt gtgcaaactt cctgagtttt catggacagc acttgagtgt cattcttggg 60

atattcaaca cttacactcc aaacctgtgt caagctgaaa agcacaaatg attttcaata 120

<210> 238

<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 238

gctcttcaac aagttgacta aatctcgtac tttcttgtag gctcctgaaa ttaaattgtt 60

tgagaaacac actcagcaag tgattatcaa ccttttaagg acactaaaat aagaaaagac 120

<210> 239

<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 239

aggaacgcta tgttattaaa taatttctac tttttcctac tgtggttgct tccaacctag 60

catcattacc aaattatata ccttttggtt atatcattct tacataaagg acactgtgaa 120

<210> 240

<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 240

ggccctttct tctggttgag aagtttcagc atgcaaaatc tataaattat aaagaaagaa 60

agaacaattt aatttacttc cttttgtaga aagaatactc aaaaggcaaa tagccatgaa 120

<210> 241

<211> 120

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 241

aataatggag ccacataaca cattcaaact tacttgcaaa atatgtggtc acactttgtg 60

gagacaggtt ccttgatcaa ctccagacta gcagggtagg gggggagaaa aagaaaataa 120

<210> 242

<211> 57

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<220>

<221> modified_base

<222> (1)..(57)

<223> 3'末端带有inverted dT修饰

<400> 242

aatgatacgg cgaccaccga gatctacact ctttccctac acgacgctct tccgatc 57

<210> 243

<211> 58

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<220>

<221> modified_base

<222> (1)..(58)

<223> 3'末端带有inverted dT修饰

<220>

<221> V_segment

<222> (25)..(25)

<223> n代表6~12bp的index的互补序列

<220>

<221> misc_feature

<222> (25)..(25)

<223> n is a, c, g, t or u

<400> 243

caagcagaag acggcatacg agatngtgac tggagttcag acgtgtgctc ttccgatc 58

Claims (11)

1.一种检测人BRCA1/2基因突变的特异性捕获探针，其特征在于，所述特异性捕获探针包括如表1中SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:241所示的序列。

2.一种检测人BRCA1/2基因突变的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的特异性捕获探针。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述特异性捕获探针为SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:241所示的序列按等比例混合的混合物。

4.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述特异性捕获探针的工作浓度为0.5pM-1.0pM。

5.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括接头封闭试剂。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述接头封闭试剂包括SEQ ID NO:242和SEQ ID NO:243所示的序列。

7.根据权利要求2至5中任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括文库封闭剂。

8.根据权利要求2至5中任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括阴性质控品和阳性质控品。

9.根据权利要求2至5中任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括纯化相关试剂。

10.一种检测人BRCA1/2基因突变的测序文库，其特征在于，所述测序文库通过采用权利要求2至9中任一项所述的试剂盒构建而成。

11.一种检测人BRCA1/2基因突变的测序文库的构建方法，所述构建方法采用试剂盒进行构建，其特征在于，所述试剂盒为权利要求2至9中任一项所述的试剂盒。