CN108077907A - 生物强化细胞营养素在制备治疗烧烫伤医疗食品中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了生物强化细胞营养素在制备治疗烧烫伤医疗食品中的应用,试验验证,生物强化细胞营养素可在体外促进NIH/3T3成纤维细胞的增殖和迁移,在大鼠深Ⅱ度烫伤模型中,明显缩短烫伤创面愈合时间,在烫伤早期显著减轻创面水肿,HE染色和Masson染色证实生物强化细胞营养素改善了烫伤所致的皮肤病理改变,显著降低创面皮肤中炎症因子IL‑8的含量并提高羟脯氨酸的水平。可见,生物强化细胞营养素明显缩短创面愈合时间,见效快、疗程短、无明显毒副作用,对于深Ⅱ度烫伤具有很好的治疗作用。生物强化细胞营养素可外用治疗烧烫伤,为临床上烧烫伤的治疗提供了新的选择。
Description
技术领域
本发明属于制药领域,具体涉及生物强化细胞营养素在制备治疗烧烫伤医疗食品中的应用。
背景技术
烧烫伤包括烧伤和烫伤,一般是指接触火、开水、热油等高热物质或化学腐蚀剂、电、放射性物质等而发生的一种急性皮肤、粘膜甚至深部组织损伤。在当今的工业生产和日常生活中,烧烫伤都是非常常见的对人们造成极大痛苦的意外伤害,据报道,中国每年至少约有2000万人被不同程度烧烫伤。另外,一般烧烫伤很难在短期内全部愈合,并且由烧烫伤引起的致残率较高,应该引起人们的高度重视。烫伤又包括急性烫伤和低热烫伤,其中急性烫伤是指由高温液体(热油,沸水等),高温固体(烧热的金属,瓷器等),高温蒸汽等造成的一种组织损伤,而低热烫伤,亦称低温烫伤,是指皮肤长时间接触温度不太高但是高于体温的物体后造成的皮肤或皮下组织的损伤。
一般根据损伤程度可分为以下四级:Ⅰ度烧烫伤,病变最轻,皮肤变红,没有水泡,虽然疼痛感明显,但是只损伤到皮肤表皮的角质层、透明层和颗粒层,并不能损伤到生发层,所以再生能力较强,短时间内可以自行痊愈,并且不留疤痕。Ⅱ度烧烫伤,分为浅Ⅱ度烧烫伤和深Ⅱ度烧烫伤。浅Ⅱ度烧烫伤是指全部表皮,深至生发层,真皮如头层的损伤,但是由于残留有一部分的生发层以及皮肤附属器的存在,在较短时间内可以自行痊愈,也不会留瘢痕。深Ⅱ度烧烫伤是指包括乳头层以下的真皮损伤,但仍残留有部分真皮,由于人体各部分真皮的厚度不一,烫伤的深浅不一,故深Ⅱ度烧烫伤的临床变异较多,浅的接近浅Ⅱ度,深的则临界Ⅲ度,但由于有真皮残存,仍可再生上皮,创面可自行愈合。Ⅲ度烧烫伤,是指表皮、真皮以及附件全部损毁。坏死的真皮产生大量毒素,可引发脂质过氧化反应。Ⅳ度烧烫伤,深及肌肉、骨骼及内脏器官,需要植皮才能进行创面修复。
目前烧烫伤的治疗主要有西医和中医两大类治疗策略。西医主要着重改善机体液体平衡、控制感染以及营养补给,最常用的几类西药包括:抗感染类、重组人生长激素类、外用生长因子类、能量补充类、免疫调节剂类等。但每种西药作用机制单一、综合疗效较弱。而中医则常采用具有清热解毒、消炎止痛、去腐生肌的民间验方,在烧烫伤的治疗中发挥着重要作用。
《本草纲目》中记载,“米酒气味苦甘辛热,通血脉,厚肠胃,润皮肤,散湿气”。生物强化细胞营养素以黑米、黄米、白糯米为主要原料,辅以大米、高粱、紫米、薏米等辅料,采用生物工程技术制作而成的,含有蛋白质、多肽、多糖、寡糖、维生素、多种氨基酸、核酸和微量元素等有益物质,内服可改善人体微生态和免疫功能,对促进和保障人体健康有着显著的作用。
但目前,尚未有用生物强化细胞营养素在制备治疗烧烫伤医疗食品中的应用的报道。
发明内容
本发明的目的是为临床上烧烫伤的治疗药物提供一种选择,提供一种生物强化细胞营养素在制备治疗烧烫伤医疗食品中的应用。
本发明的技术方案概述如下:
生物强化细胞营养素在制备治疗烧烫伤医疗食品中的应用。
上述生物强化细胞营养素是用下述方法制成:
(一)母液的制备:
(1)选取谷类为原料,清洗分离杂质后,置于纸浆蒸煮机中加入原料总重量30%~50%的水,启动纸浆蒸煮机,旋转浸泡30~60分钟;
(2)停止旋转,将水放净,打开冷气机,通入冷气,旋转保持-4℃以下60~90分钟,停止旋转;
(3)关闭冷气机,打开空压机,通入室温空气,旋转,升温至室温;
(4)关闭空压机,停止旋转,通入蒸汽,旋转,保持100℃,30~60分钟,关闭蒸汽;
(5)停止旋转,打开空压机,通入室温空气,旋转,降至30℃~50℃;
(6)停止旋转,加入原料总重量1%~3%的营养配料粉,旋转30~60分钟;所述营养配料为重量比为1:2:3:1的灵芝、枸杞、蓝莓果和肉桂;
(7)停止旋转,加入原料总重量0.2%~0.4%的复合酶,旋转1~2小时;
(8)加入原料总重量0.2%~1%食用菌种,旋转使均匀;停止旋转,分装至发酵桶,在28~35℃发酵8~15天,即得母液备用;
(二)胶料的制备:
(1)另取谷类为第二原料,用18~30℃水浸泡8~16小时;沥水,置于容器内;
(2)向容器内加入第二原料重量1~2倍的水,煮1~3小时;
(3)过滤,去除水,获得胶料备用;
(三)成品的制备:
(1)将母液与胶料按重量比为1:1~2的比例,混合,分离除渣,得混合液;
(2)加入混合液重量1%~2%的低聚异麦芽糖,混合液重量0.2%~0.7%的黄原胶,混合液重量0~1%的阿胶,均质;灌装灭菌,得生物强化细胞营养素;
所述复合酶是质量比为3:3:1:1的糖化酶、淀粉酶、纤维素酶和果胶酶;
所述食用菌种为面包酵母,甜酒曲酵母、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌和保加利亚乳杆菌至少两种。
原料优选为黑糯米、黄糯米、白糯米、紫米、黍米、粟米、香米、高粱米、大米和薏米中的至少五种。
第二原料优选为黑糯米、黄糯米和白糯米至少一种。
本发明的有益效果:
经试验验证,生物强化细胞营养素可在体外促进NIH/3T3成纤维细胞的增殖和迁移,在大鼠深Ⅱ度烫伤模型中,明显缩短烫伤创面愈合时间,在烫伤早期显著减轻创面水肿,HE染色和Masson染色证实生物强化细胞营养素改善了烫伤所致的皮肤病理改变,显著降低创面皮肤中炎症因子IL-8的含量并提高羟脯氨酸的水平。可见,生物强化细胞营养素明显缩短创面愈合时间,见效快、疗程短、无明显毒副作用,对于深Ⅱ度烫伤具有很好的治疗作用。生物强化细胞营养素可外用治疗烧烫伤,为临床上烧烫伤的治疗提供了新的选择,具有重要的应用价值。
附图说明
图1为MTT实验显示稀释不同倍数的生物强化细胞营养素(图中简称酵汁)对NIH/3T3成纤维细胞增殖的影响。与空白相比,**P<0.01,***P<0.001。(n=6)
图2为划痕实验中稀释不同倍数的生物强化细胞营养素作用后对NIH/3T3细胞迁移率的影响。(A)镜下所示示例图(×100倍)(B)量化分析结果。与空白相比,*P<0.05,***P<0.001。(n=6)
图3为生物强化细胞营养素对大鼠深Ⅱ度烫伤的伤口愈合的影响。(A)不同时间点各组的皮肤伤口图片;(B)烫伤面积量化分析。(C)第1,2,7天烫伤组织中含水率变化。与空白相比,***P<0.001;与对应天数的模型组相比,#P<0.05,##P<0.01,###P<0.001。(n=6)
图4(A)为给药后第21天各组大鼠的背部烫伤皮肤HE染色图(×40倍)。(B-C)为生物强化细胞营养素在不同时间点对烫伤组织中炎症因子IL-8(B)和IL-6(C)水平的影响。与空白相比,**P<0.01,***P<0.001;与对应天数模型组相比,#P<0.05,##P<0.01,###P<0.001。(n=6)
图5(A)为Masson染色显示烫伤后第21天时各组大鼠烫伤皮肤组织中胶原含量及分布形态(×40倍)。红色代表细胞浆、肌肉和红细胞,蓝褐色代表细胞核,蓝色代表胶原纤维。(B)为不同时间点时生物强化细胞营养素对烫伤组织中羟脯氨酸含量的影响。与空白相比,**P<0.01,***P<0.001;与对应天数模型相比,#P<0.05,##P<0.01,###P<0.001。(n=6)
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明。所描述的实施例仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
京万红软膏由天津达仁堂京万红药业有限公司生产,批号212086。
实施例1
生物强化细胞营养素用下述方法制成:
(一)母液的制备:
(1)选取重量比例为1:1:1:2:2的黑糯米、黄糯米、紫米、黍米和大米五种谷物为原料,清洗分离杂质后,置于纸浆蒸煮机中加入原料总重量30%的水,启动纸浆蒸煮机,旋转浸泡30分钟;浸泡的目的是使原料充分吸收水份;
(2)停止旋转,将水放净,打开冷气机,通入冷气,旋转保持-4℃以下60分钟,停止旋转;放冷的目的是使吸水后的原料膨胀;
(3)关闭冷气机,打开空压机,通入室温空气,旋转,升温至室温;提前预热的目的是为了下一步通蒸汽之前的温度升高而节省能源;
(4)关闭空压机,停止旋转,通入蒸汽,旋转,保持100℃,60分钟,关闭蒸汽;其目的是熟化并消毒;
(5)停止旋转,打开空压机,通入室温空气,旋转,降至30℃;其目的为后续加入营养配料、复合酶及菌种提供合适的温度;
(6)停止旋转,加入原料总重量2%的营养配料粉,旋转30分钟;所述营养配料为重量比为1:2:3:1的灵芝、枸杞、蓝莓果和肉桂;
(7)停止旋转,加入原料总重量0.2%的复合酶,旋转1小时;复合酶是质量比为3:3:1:1的糖化酶、淀粉酶、纤维素酶和果胶酶;
(8)加入原料总重量0.2%食用菌种,旋转使均匀;停止旋转,分装至发酵桶,在28℃发酵15天,即得母液备用;食用菌种为重量比为3:1的面包酵母菌和保加利亚乳杆菌;
(二)胶料的制备:
(1)另取重量比为1:1的黄糯米和白糯米为第二原料,用18℃水浸泡16小时;沥水,将沥水后的米置于容器内;
(2)向容器内加入第二原料重量1倍的水,煮1小时;
(3)过滤,去除水,获得胶料备用;
(三)成品的制备:
(1)将母液与胶料按重量比为1:1的比例,混合,分离除渣,得混合液;
(2)加入混合液重量1%的低聚异麦芽糖,混合液重量0.2%的黄原胶,均质;灌装灭菌,得生物强化细胞营养素。
本实施例中的旋转转速均为15转/分钟。
实施例2
生物强化细胞营养素用下述方法制成:
(一)母液的制备:
(1)选取重量比为1:1:2:1:1:2:1的黑糯米、紫米、黍米、白糯米、粟米、高粱米和大米七种谷物为原料,清洗分离杂质后,置于纸浆蒸煮机中加入原料总重量40%的水,启动纸浆蒸煮机,旋转浸泡40分钟;
(2)停止旋转,将水放净,打开冷气机,通入冷气,旋转保持-4℃以下80分钟,停止旋转;
(3)关闭冷气机,打开空压机,通入室温空气,旋转,升温至室温;
(4)关闭空压机,停止旋转,通入蒸汽,旋转,保持100℃,50分钟,关闭蒸汽;
(5)停止旋转,打开空压机,通入室温空气,旋转,降至40℃;
(6)停止旋转,加入原料总重量1%的营养配料粉,旋转60分钟;所述营养配料为重量比为1:2:3:1的灵芝、枸杞、蓝莓果和肉桂;
(7)停止旋转,加入原料总重量0.3%的复合酶,旋转1.5小时,复合酶是质量比为3:3:1:1的糖化酶、淀粉酶、纤维素酶和果胶酶;
(8)加入原料总重量0.5%食用菌种,旋转使均匀;停止旋转,分装至发酵桶,在32℃发酵12天,即得母液备用;食用菌种为重量比为2:1:1的面包酵母、甜酒曲酵母和植物乳杆菌;
(二)胶料的制备:
(1)另取重量比为1:1的黄糯米和白糯米为第二原料,用30℃水浸泡8小时;沥水,置于容器内;
(2)向容器内加入第二原料重量1.5倍的水,煮2小时;
(3)过滤,去除水,获得胶料备用;
(三)成品的制备:
(1)将母液与胶料按重量比为1:1.5的比例,混合,分离除渣,得混合液;
(2)加入混合液重量2%的低聚异麦芽糖,混合液重量0.4%的黄原胶,混合液重量0.1%的阿胶,均质;灌装灭菌,得生物强化细胞营养素。
本实施例中的旋转转速均为20转/分钟。
实施例3
生物强化细胞营养素用下述方法制成:
(一)母液的制备:
(1)选取重量比为1:1:1:2:1:0.5:1:1:0.5的黑糯米、白糯米、紫米、黍米、粟米、香米、高粱米、大米和薏米九种谷物为原料,清洗分离杂质后,置于纸浆蒸煮机中加入原料总重量50%的水,启动纸浆蒸煮机,旋转浸泡60分钟;
(2)停止旋转,将水放净,打开冷气机,通入冷气,旋转保持-4℃以下90分钟,停止旋转;
(3)关闭冷气机,打开空压机,通入室温空气,旋转,升温至室温;
(4)关闭空压机,停止旋转,通入蒸汽,旋转,保持100℃,30分钟,关闭蒸汽;
(5)停止旋转,打开空压机,通入室温空气,旋转,降至50℃;
(6)停止旋转,加入原料总重量3%的营养配料粉,旋转30分钟;营养配料为重量比为1:2:3:1的灵芝、枸杞、蓝莓果和肉桂;
(7)停止旋转,加入原料总重量0.4%的复合酶,旋转2小时,复合酶是质量比为3:3:1:1的糖化酶、淀粉酶、纤维素酶和果胶酶;
(8)加入原料总重量1%食用菌种,旋转使均匀;停止旋转,分装至发酵桶,在35℃发酵8天,即得母液备用;食用菌种为重量比为2:1:1的面包酵母、甜酒曲酵母和嗜酸乳杆菌;
(二)胶料的制备:
(1)另取黑糯米为第二原料,用25℃水浸泡10小时;沥水,置于容器内;
(2)向容器内加入第二原料重量2倍的水,煮3小时;
(3)过滤,去除水,获得胶料备用;
(三)成品的制备:
(1)将母液与胶料按重量比为1:2的比例,混合,分离除渣,得混合液;
(2)加入混合液重量2%的低聚异麦芽糖,混合液重量0.7%的黄原胶,混合液重量1%的阿胶,均质;灌装灭菌,得生物强化细胞营养素。
各实施例中的转速为15-20转/分钟,其目的是使物料混匀,但对转速并不限制,达到混匀目的的其它转速也可以使用。
以下实验是以实施例1制备的生物强化细胞营养素进行的。
实施例4
验证生物强化细胞营养素(简称酵汁)在体外对NIH/3T3成纤维细胞增殖的影响。
鼠成纤维细胞(NIH/3T3)购自武汉博士德生物工程有限公司,培养基为含有10%胎牛血清及1%双抗的高糖培养基,在5%CO2,37℃培养箱中进行培养。长满后胰酶消化,按密度5×104个/mL接种在96孔板中,每孔100μL,待细胞贴壁生长后给药。实验分为5组,空白对照组、阳性对照组、酵汁高、中、低剂量组。酵汁12000rpm离心15min,取上清液用DMEM培养基分别稀释103,104,105倍得到高、中、低剂量酵汁。阳性对照为京万红软膏,用DMSO溶解,细胞给药时终浓度为10-4g/mL。细胞给药30h后每孔加入5mg/mL的MTT溶液20μL,放回培养箱继续培养4h后弃去培养液,每孔加入150μL DMSO,轻微震荡10min,用酶标仪测490nm处吸光度。
MTT实验是一种简单的检测活细胞数量的实验,可以反映细胞的增殖能力。酵汁对NIH/3T3成纤维细胞增殖的影响结果如图1所示,阳性药京万红对成纤维细胞增殖没有明显影响,不同稀释倍数的酵汁对成纤维细胞增殖均有一定的促进作用。酵汁上清液稀释103(酵汁高浓度)和104(酵汁中浓度)倍时,对细胞增殖的促进作用明显,与空白组比有显著性差异(P<0.01或P<0.001),稀释的倍数增高为105(酵汁低浓度)倍时,对细胞增殖的促进作用下降。
实施例5
主要验证酵汁在体外对NIH/3T3成纤维细胞迁移的影响。
细胞培养同实施例4。用记号笔在6孔板背后均匀画几条间隔大约为5mm的直线,保证每孔底部有4-5条直线。细胞培养于标记好的6孔板中,单层铺满后用10μL枪头垂直于6孔板底部在板中间划一条垂直于背后标记线的直线,弃去培养基,用灭菌的PBS洗3遍,以洗去划掉的细胞。给药分组同上,所用培养基为含2%FBS的DMEM。给药后继续培养,并分别在0h、6h和18h对划痕进行观察拍照。
酵汁对细胞迁移能力影响的结果如图2A,与空白组相比,高、中、低剂量酵汁(分别稀释103,104和105倍)对细胞的迁移都有促进作用,到第18h时更为明显。细胞迁移率量化分析结果证实给药18h时酵汁对细胞迁移率的促进作用呈剂量依赖性(图2B),高剂量酵汁的效果与阳性药京万红接近。
实施例6
主要观察使用酵汁后对大鼠深Ⅱ度烫伤伤口愈合的影响。
体重为200g-250g的健康成年雄性SD大鼠,由军事医学科学院实验动物中心提供,动物许可证号:SCXK(军)2012-0004。提供充足的水和饲料,进行适应性饲养,饲养环境为温度21-23℃,湿度为50%-70%,以12h为一个时间段进行明暗交替饲养。将SD大鼠适应性饲养一周后对大鼠背部皮肤进行脱毛处理,第二天随机取90只大鼠腹腔注射10%的水合氯醛(0.3mL/kg)麻醉后造模。将直径2.5cm的铁棒置于沸水中直至铁棒恒温,取出后迅速用纱布擦干,一端紧贴大鼠背部脊柱一侧皮肤10sec,造成深Ⅱ度烫伤,然后重复以上过程在大鼠脊柱另一侧皮肤再造一个烫伤。造模大鼠随机分成模型组、阳性对照(京万红软膏)组、酵汁组,每组30只。京万红组和酵汁组烫伤10min后开始给药,每天一次,以0.5μL/mm2创面的剂量外涂烫伤伤口区,烫伤面不加覆盖,给药持续21天。在烫伤后第1,2,7,14,21天对烫伤面拍照,观察烫伤面愈合情况,愈合标准为烫伤面完全上皮化,其中第1,7,14天用透明坐标纸以数方格的方法测量创面面积。分别在第1,2,7天每组随机取6只大鼠处死后取烫伤创面皮肤组织精确称量,然后在干燥箱中80℃干燥24h,称取干燥后组织的重量,含水率=(组织湿重-组织干重)/组织湿重×100%。
烫伤会导致皮肤屏障的破坏,导致人体一系列病理、免疫、代谢相关的复杂改变,引发严重的并发症,因此,烫伤创面愈合情况是反映烫伤治疗效果的一个重要指标。图3A可见第1天模型组、京万红组和酵汁组大鼠烫伤处皮肤均苍白浑浊,第2天创面四周明显红肿,到第7天时,三组的烫伤面积均有所减小,但较之于模型组,酵汁组烫伤面积的减小更为明显,并且效果与阳性药京万红接近,第14天时结痂脱落,四周有明显的新生皮肤,酵汁组和京万红组的创面面积比模型组减小,第21天时酵汁组创面基本愈合,京万红组已完全愈合,而模型组还有小块结痂未脱落。图3B为前14天各组烫伤面积的量化统计图。结果说明酵汁能显著促进大鼠深Ⅱ度烫伤的伤口愈合。
正常皮肤有一定含水量,烫伤后因炎症反应、体液渗出可表现出创面组织水肿,因此检测皮肤含水率的变化可间接反映创面炎症反应的程度及组织恢复的情况。结果如图3C所示,烫伤第1天模型组、京万红组和酵汁组的皮肤含水率较空白组均明显增高(P<0.001),呈现明显的水肿,第2天模型组水肿更为明显,而酵汁组的含水率则有所下降,与模型组的差异更为显著(P<0.001),说明酵汁可以显著降低组织含水量,促进水肿消退,与阳性药京万红效果接近。结果提示酵汁可以促进烫伤面早期水肿消退,从而促进创面的愈合。
实施例7
主要观察使用酵汁后对大鼠深Ⅱ度烫伤伤口皮肤组织炎症的影响。
动物饲养、分组及造模方法同实施例6。不同之处在于,酵汁组每天一次以1.5μL/mm2创面的剂量外涂烫伤伤口区给药,烫伤面不加覆盖,烫伤后第1,2,7,14,21天各取6只大鼠处死,取烫伤皮肤组织,加入9倍组织重量的生理盐水,冰浴下匀浆后4℃13000rpm离心15min,取上清液按照试剂盒说明书的方法检测炎症因子IL-6和IL-8含量。取第21天各组大鼠烫伤创面皮肤组织用4%的多聚甲醛固定后用蜡块包埋、切片,进行HE染色,光镜下观察。
皮肤组织切片HE染色结果能反映出组织受损及恢复的情况,如图4A所示,空白组皮肤附属器结构清晰完整,表皮细胞排列整齐,上皮细胞核、细胞质着色良好;模型组皮肤附属器消失,表皮基真皮浅层脱失,脱失区周围鳞皮增厚,排列不规则,真皮浅层大量中性粒细胞浸润;酵汁组和阳性药京万红组表皮细胞整齐连续,纤维组织增生,排列致密、规则,含有皮肤附属器。说明酵汁和阳性药京万红一样,对深Ⅱ度烫伤导致的皮肤炎症性病理变化有明显的改善效果。
烫伤伴随着炎症的发生,烫伤的愈合过程是在细胞炎症因子的参与、调控下完成的,检测结果显示(图4B),大鼠深Ⅱ度烫伤后IL-8水平显著升高(P<0.001),并在高水平维持到第7天,之后有所下降,但直到第21天实验结束时仍显著高于空白组(P<0.001),说明烫伤皮肤组织在整个恢复期尤其是早期发生了明显的炎症反应。从给药第1天直至第7天,酵汁组的IL-8水平虽相对于空白组显著上升(P<0.01或0.001),但是显著低于模型组(P<0.01或0.001),第14天时酵汁组IL-8水平明显下降,与空白组之间已无统计学差异。酵汁对炎症因子释放的控制将有助于减少瘢痕生成、促进皮肤组织的修复。与IL-8的变化不同,各组大鼠烫伤皮肤组织IL-6(图4C)水平在烫伤后前7天均显著低于空白组(P<0.001),14天后逐渐升高。这种不一致可能与IL-8和IL-6不同的病理生理作用有关。IL-8是一种白细胞趋化因子,主要功能是吸引中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、T细胞等到达炎症部位,因此在烫伤后的早期炎症阶段即有显著升高;而IL-6是一种作用广泛的细胞因子,主要在炎症、宿主防御和组织损伤中发挥作用,烫伤后由于组织受损严重,因此局部IL-6水平显著下降,后期随组织修复才逐渐恢复。结果显示(图4C),14天时酵汁组与模型组相比,IL-6水平有显著的升高(P<0.05),已经恢复到空白组的水平,第21天时,酵汁组和京万红组IL-6水平相对模型组均显著升高以发挥抗炎的作用。结果说明,酵汁通过对炎症因子的不同调节作用而发挥减轻炎症、促进组织修复的作用。
实施例8
主要观察使用酵汁后对大鼠深Ⅱ度烫伤伤口皮肤组织胶原含量的影响。
动物饲养、分组及造模方法同实施例6。不同之处在于,酵汁组每天一次以5μL/mm2创面的剂量外涂烫伤伤口区给药,烫伤面不加覆盖,给药持续21天。烫伤后第1,2,7,14,21天各取6只大鼠处死,称取每个烫伤皮肤组织样品大约15mg左右并记录,置于带有橡胶塞的玻璃试管中,用羟脯氨酸含量试剂盒对羟脯氨酸的含量进行检测,稀释至水解液总体积为15mL,羟脯氨酸标准样品浓度为5μg/mL。最后测560nm处的吸光度,计算羟脯氨酸含量为:
另取第21天的大鼠烫伤创面皮肤组织用4%的多聚甲醛固定后用蜡块包埋、切片,进行Masson染色,光镜下观察。
胶原纤维是真皮的主要组成部分,在结缔组织中起支持作用,伤口在愈合的过程中胶原蛋白的形态及排列标志着伤口的愈合质量,因此,胶原蛋白的多少及形态能够在一定程度上反映出皮肤愈合的情况。烫伤大鼠皮肤切片胶原Masson染色如图5A所示,空白组的胶原纤维排列整齐有序、条理清晰,模型组则排列杂乱无章,酵汁组和京万红组胶原含量明显增高,并且排列清晰,显示了烫伤部位伤口的快速愈合。羟脯氨酸是皮肤胶原蛋白的主要成分之一,羟脯氨酸的量也是烫伤创面愈合的评价指标之一。由图5B可知,烫伤后各组的羟脯氨酸含量明显降低,之后呈时间依赖性增加,说明各组创面皮肤都在进行修复。其中模型组恢复较为缓慢,京万红和酵汁组给药1天后羟脯氨酸含量即有高于模型组的趋势,到第14天时,京万红组和酵汁组的羟脯氨酸含量已显著高于模型组(P<0.05),基本恢复到原有水平。结果提示,酵汁提高烫伤组织中胶原及羟脯氨酸含量,促进创面愈合。
实验证明,实施例2、3制备的生物强化细胞营养素与实施例1的实验效果相似。
综上所述,本发明所述的生物强化细胞营养素在治疗烧烫伤过程中,治疗效果明显,伤口愈合时间明显缩短,疗效较好。
利用本发明所述的技术方案,或本领域的技术人员在本发明技术方案的启发下,设计出类似的技术方案,而达到上述技术效果的,均是落入本发明的保护范围。
Claims (4)
1.生物强化细胞营养素在制备治疗烧烫伤医疗食品中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用,其特征是所述生物强化细胞营养素是用下述方法制成:
(一)母液的制备:
(1)选取谷类为原料,清洗分离杂质后,置于纸浆蒸煮机中加入原料总重量30%~50%的水,启动纸浆蒸煮机,旋转浸泡30~60分钟;
(2)停止旋转,将水放净,打开冷气机,通入冷气,旋转保持-4℃以下60~90分钟,停止旋转;
(3)关闭冷气机,打开空压机,通入室温空气,旋转,升温至室温;
(4)关闭空压机,停止旋转,通入蒸汽,旋转,保持100℃,30~60分钟,关闭蒸汽;
(5)停止旋转,打开空压机,通入室温空气,旋转,降至30℃~50℃;
(6)停止旋转,加入原料总重量1%~3%的营养配料粉,旋转30~60分钟;所述营养配料为重量比为1:2:3:1的灵芝、枸杞、蓝莓果和肉桂;
(7)停止旋转,加入原料总重量0.2%~0.4%的复合酶,旋转1~2小时;
(8)加入原料总重量0.2%~1%食用菌种,旋转使均匀;停止旋转,分装至发酵桶,在28~35℃发酵8~15天,即得母液备用;
(二)胶料的制备:
(1)另取谷类为第二原料,用18~30℃水浸泡8~16小时;沥水,置于容器内;
(2)向容器内加入第二原料重量1~2倍的水,煮1~3小时;
(3)过滤,去除水,获得胶料备用;
(三)成品的制备:
(1)将母液与胶料按重量比为1:1~2的比例,混合,分离除渣,得混合液;
(2)加入混合液重量1%~2%的低聚异麦芽糖,混合液重量0.2%~0.7%的黄原胶,混合液重量0~1%的阿胶,均质;灌装灭菌,得生物强化细胞营养素;
所述复合酶是质量比为3:3:1:1的糖化酶、淀粉酶、纤维素酶和果胶酶;
所述食用菌种为面包酵母,甜酒曲酵母、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌和保加利亚乳杆菌至少两种。
3.根据权利要求2所述的应用,其特征是所述原料为黑糯米、黄糯米、白糯米、紫米、黍米、粟米、香米、高粱米、大米和薏米中的至少五种。
4.根据权利要求2所述的应用,其特征是所述第二原料为黑糯米、黄糯米和白糯米至少一种。
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