CN111671089A - 生物强化细胞营养素在制备抗beta-淀粉样蛋白细胞毒性功能食品中的应用 - Google Patents

生物强化细胞营养素在制备抗beta-淀粉样蛋白细胞毒性功能食品中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了生物强化细胞营养素在制备抗beta‑淀粉样蛋白细胞毒性功能食品中的应用，实验证明，生物强化细胞营养素能抑制beta‑淀粉样蛋白细胞毒性，对神经细胞有营养及保护作用。生物强化细胞营养素还能够抑制beta‑淀粉样蛋白的聚集，对其聚集产生一定的阻抑作用。

Description

生物强化细胞营养素在制备抗beta-淀粉样蛋白细胞毒性功 能食品中的应用
技术领域
本发明涉及一种生物强化细胞营养素的用途，特别是涉及一种生物强化细胞营养素在制备抗beta-淀粉样蛋白细胞毒性功能食品中的应用。
背景技术
我们人类的身体由上万亿个细胞组成，这些细胞是人体结构的基本功能单位，细胞的健康是在核酸的调控下，依靠蚩白质、多种氨基酸、多肽、多糖、多种微量元素、矿物质等带有生物活性的物质以维持细胞的正常代谢。细胞有特定的职责，协同工作，保持着我们的身体健康。身体内的每个组织由细胞构成,而相关细胞组织集群便构成了人体的器官。虽然这些器官由功能不同的细胞构成，但是，它们需要同样的基本营养成分，这便是支撑细胞代谢的基础物质。细胞是有寿命的，理论上说，如果为细胞提供合适的、足够的基本营养成分，淘汰凋亡的细胞，精确复制已经存在的健康的细胞，提高人体对于疾病的自愈能力，我们人类可延缓衰老，保持健康。
人体对于疾病的自愈能力，即是人类依靠自身的内在生命力，依靠免疫系统、神经系统和内分泌系统为主的修复机制，修复受损的细胞、摆脱疾病与亚健康状态的一种保持身体健康的能力。当人体的自愈力下降时，是因为某些人体器官组织系统缺少足够的营养因子,细胞不能正常地代谢，不能完全正确地复制健康细胞和液化凋亡的细胞。由于细胞的不正确的复制，使得细胞的正常功能打了折扣，身体的自我修复能力减低，这直接影响了人体对于疾病的抵抗能力，一旦遭遇外界不良因素,人体就会生病。
β-淀粉样蛋白(Aβ)是由淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein，APP)经β-和γ-分泌酶的催化水解而产生的含有39～43个氨基酸的小分子蛋白质。它可由多种细胞产生，循环于血液、脑脊液和脑间质液中。人大脑中的Aβ最常见的亚型是Aβ40和Aβ42。Aβ42具有更强的神经细胞毒性，且更容易聚集，从而形成Aβ沉积的核心，引发神经毒性作用，并导致神经退行性疾病。Aβ42单体分子倾向于聚集形成寡聚体，原纤维和纤维，目前研究认为Aβ42寡聚体的神经细胞毒性较强，也是导致神经退行性疾病的始发因素。
因此，亟需能针对beta-淀粉样蛋白细胞毒性的功能食品用于抗beta-淀粉样蛋白细胞毒性。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的不足,提供生物强化细胞营养素在制备抗beta-淀粉样蛋白细胞毒性功能食品中的应用。
本发明的技术方案概述如下：
生物强化细胞营养素在制备抗beta-淀粉样蛋白细胞毒性功能食品中的应用。
所述生物强化细胞营养素是用下述方法制成：
(一)母液的制备：
(1)选取谷类为原料，清洗分离杂质后，置于纸浆蒸煮机中加入原料总重量30％～50％的水，启动纸浆蒸煮机，旋转浸泡30～60分钟；
(2)停止旋转，将水放净，打开冷气机，通入冷气，旋转保持-4℃以下60～90分钟，停止旋转；
(3)关闭冷气机，打开空压机，通入室温空气，旋转，升温至室温；
(4)关闭空压机，停止旋转，通入蒸汽，旋转，保持100℃，30～60分钟，关闭蒸汽；
(5)停止旋转，打开空压机，通入室温空气，旋转，降至30℃～50℃；
(6)停止旋转，加入原料总重量1％～3％的营养配料粉，旋转30～60分钟；所述营养配料为重量比为1:2:3:1的灵芝、枸杞、蓝莓果和肉桂；
(7)停止旋转，加入原料总重量0.2％～0.4％的复合酶，旋转1～2小时；
(8)加入原料总重量0.2％～1％食用菌种，旋转使均匀；停止旋转，分装至发酵桶，在28～35℃发酵8～15天，即得母液备用；
(二)胶料的制备：
(1)另取谷类为第二原料，用18～30℃水浸泡8～16小时；沥水，置于容器内；
(2)向容器内加入第二原料重量1～2倍的水，煮1～3小时；
(3)过滤，去除水，获得胶料备用；
(三)成品的制备：
(1)将母液与胶料按重量比为1：1～2的比例，混合，分离除渣，得混合液；
(2)加入混合液重量1％～2％的低聚异麦芽糖，混合液重量0.2％～0.7％的黄原胶，混合液重量0～1％的阿胶，均质；灌装灭菌，得生物强化细胞营养素；
所述复合酶是质量比为3:3:1:1的糖化酶、淀粉酶、纤维素酶和果胶酶；
所述食用菌种为面包酵母，甜酒曲酵母、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌和保加利亚乳杆菌至少两种。
优选地，原料为黑糯米、黄糯米、白糯米、紫米、黍米、粟米、香米、高粱米、大米和薏米中的至少五种。
优选地，第二原料为黑糯米、黄糯米和白糯米至少一种。
本发明的优点：
实验证明，生物强化细胞营养素能抑制beta-淀粉样蛋白细胞毒性，对神经细胞有营养及保护作用。生物强化细胞营养素还能够抑制beta-淀粉样蛋白的聚集，对其聚集产生一定的阻抑作用。
附图说明
图1为MTT法检测生物强化细胞营养素上清全液抑制Aβ42寡聚体对神经母细胞瘤细胞系(SH-SY5Y)的细胞毒性作用。
图2为LDH法检测生物强化细胞营养素上清全液抑制Aβ42寡聚体对神经母细胞瘤细胞系(SH-SY5Y)的细胞损伤作用。
图3为ThT-F法检测生物强化细胞营养素上清全液抑制Aβ42四种状态聚集的作用。
具体实施方式
本发明的实施例是为了使本领域的技术人员能够更好的理解本发明，但并不对本发明作任何限制。
本发明所采用的各个食用酵母菌均购自安琪酵母股份有限公司(但并不对本发明作任何限制，其它公司生产的功能相同的食用酵母菌也可以用于本发明)；各个乳杆菌购自丹麦汉森公司(但并不对本发明作任何限制，其它公司生产的功能相同的乳杆菌也可以用于本发明)。
下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明。
实施例1
生物强化细胞营养素用下述方法制成：
(一)母液的制备：
(1)选取重量比例为1:1:1:2:2的黑糯米、黄糯米、紫米、黍米和大米五种谷物为原料，清洗分离杂质后，置于纸浆蒸煮机中加入原料总重量30％的水，启动纸浆蒸煮机，旋转浸泡30分钟；浸泡的目的是使原料充分吸收水份；
(2)停止旋转，将水放净，打开冷气机，通入冷气，旋转保持-4℃以下60分钟，停止旋转；放冷的目的是使吸水后的原料膨胀；
(3)关闭冷气机，打开空压机，通入室温空气，旋转，升温至室温；提前预热的目的是为了下一步通蒸汽之前的温度升高而节省能源；
(4)关闭空压机，停止旋转，通入蒸汽，旋转，保持100℃，60分钟，关闭蒸汽；其目的是熟化并消毒；
(5)停止旋转，打开空压机，通入室温空气，旋转，降至30℃；其目的为后续加入营养配料、复合酶及菌种提供合适的温度；
(6)停止旋转，加入原料总重量2％的营养配料粉，旋转30分钟；所述营养配料为重量比为1:2:3:1的灵芝、枸杞、蓝莓果和肉桂；
(7)停止旋转，加入原料总重量0.2％的复合酶，旋转1小时；复合酶是质量比为3:3:1:1的糖化酶、淀粉酶、纤维素酶和果胶酶；
(8)加入原料总重量0.2％食用菌种，旋转使均匀；停止旋转，分装至发酵桶，在28℃发酵15天，即得母液备用；食用菌种为重量比为3:1的面包酵母菌和保加利亚乳杆菌；
(二)胶料的制备：
(1)另取重量比为1:1的黄糯米和白糯米为第二原料，用18℃水浸泡16小时；沥水，将沥水后的米置于容器内；
(2)向容器内加入第二原料重量1倍的水，煮1小时；
(3)过滤，去除水，获得胶料备用；
(三)成品的制备：
(1)将母液与胶料按重量比为1：1的比例，混合，分离除渣，得混合液；
(2)加入混合液重量1％的低聚异麦芽糖，混合液重量0.2％的黄原胶，均质；灌装灭菌，得生物强化细胞营养素。
本实施例中的旋转转速均为15转/分钟。
实施例2
生物强化细胞营养素用下述方法制成：
(一)母液的制备：
(1)选取重量比为1:1:2:1:1:2:1的黑糯米、紫米、黍米、白糯米、粟米、高粱米和大米七种谷物为原料，清洗分离杂质后，置于纸浆蒸煮机中加入原料总重量40％的水，启动纸浆蒸煮机，旋转浸泡40分钟；
(2)停止旋转，将水放净，打开冷气机，通入冷气，旋转保持-4℃以下80分钟，停止旋转；
(3)关闭冷气机，打开空压机，通入室温空气，旋转，升温至室温；
(4)关闭空压机，停止旋转，通入蒸汽，旋转，保持100℃，50分钟，关闭蒸汽；
(5)停止旋转，打开空压机，通入室温空气，旋转，降至40℃；
(6)停止旋转，加入原料总重量1％的营养配料粉，旋转60分钟；所述营养配料为重量比为1:2:3:1的灵芝、枸杞、蓝莓果和肉桂；
(7)停止旋转，加入原料总重量0.3％的复合酶，旋转1.5小时，复合酶是质量比为3:3:1:1的糖化酶、淀粉酶、纤维素酶和果胶酶；
(8)加入原料总重量0.5％食用菌种，旋转使均匀；停止旋转，分装至发酵桶，在32℃发酵12天，即得母液备用；食用菌种为重量比为2:1:1的面包酵母、甜酒曲酵母和植物乳杆菌；(二)胶料的制备：
(1)另取重量比为1：1的黄糯米和白糯米为第二原料，用30℃水浸泡8小时；沥水，置于容器内；
(2)向容器内加入第二原料重量1.5倍的水，煮2小时；
(3)过滤，去除水，获得胶料备用；
(三)成品的制备：
(1)将母液与胶料按重量比为1：1.5的比例，混合，分离除渣，得混合液；
(2)加入混合液重量2％的低聚异麦芽糖，混合液重量0.4％的黄原胶，混合液重量0.1％的阿胶，均质；灌装灭菌，得生物强化细胞营养素。
本实施例中的旋转转速均为20转/分钟。
实施例3
生物强化细胞营养素用下述方法制成：
(一)母液的制备：
(1)选取重量比为1:1:1:2:1:0.5:1:1:0.5的黑糯米、白糯米、紫米、黍米、粟米、香米、高粱米、大米和薏米九种谷物为原料，清洗分离杂质后，置于纸浆蒸煮机中加入原料总重量50％的水，启动纸浆蒸煮机，旋转浸泡60分钟；
(2)停止旋转，将水放净，打开冷气机，通入冷气，旋转保持-4℃以下90分钟，停止旋转；
(3)关闭冷气机，打开空压机，通入室温空气，旋转，升温至室温；
(4)关闭空压机，停止旋转，通入蒸汽，旋转，保持100℃，30分钟，关闭蒸汽；
(5)停止旋转，打开空压机，通入室温空气，旋转，降至50℃；
(6)停止旋转，加入原料总重量3％的营养配料粉，旋转30分钟；营养配料为重量比为1:2:3:1的灵芝、枸杞、蓝莓果和肉桂；
(7)停止旋转，加入原料总重量0.4％的复合酶，旋转2小时，复合酶是质量比为3:3:1:1的糖化酶、淀粉酶、纤维素酶和果胶酶；
(8)加入原料总重量1％食用菌种，旋转使均匀；停止旋转，分装至发酵桶，在35℃发酵8天，即得母液备用；食用菌种为重量比为2:1:1的面包酵母、甜酒曲酵母和嗜酸乳杆菌；
(二)胶料的制备：
(1)另取黑糯米为第二原料，用25℃水浸泡10小时；沥水，置于容器内；
(2)向容器内加入第二原料重量2倍的水，煮3小时；
(3)过滤，去除水，获得胶料备用；
(三)成品的制备：
(1)将母液与胶料按重量比为1：2的比例，混合，分离除渣，得混合液；
(2)加入混合液重量2％的低聚异麦芽糖，混合液重量0.7％的黄原胶，混合液重量1％的阿胶，均质；灌装灭菌，得生物强化细胞营养素。
各实施例中的转速为15-20转/分钟，其目的是例物料混匀，但对转速并不限制，达到混匀目的的其它转速也可以使用。
在实施例1－3的基础上再加以微波、气流干燥、喷雾等烘干技术，可将本发明制成粉体状食品，减轻了液体灌装的重量，方便外出携带，食用时即冲即食；
在实施例1－3的基础上再在上述成品工序中将黄原胶的加入比例提高，加入天然果胶，也可制成类似果冻状食品，或添加到巧克力、麦乳精、饼干、面包等食品中食用；也可精制成口服液服用。又可制成固体羹状食品，此外，本发明还可制成饼干、糖果、点心等食品，方便各类群体食用。
实施例4
生物强化细胞营养素的处理：
取生物强化细胞营养素(简称ZGE)170mL与170mL的蒸馏水等体积混合；将混合物在25℃的水浴锅中水浴保持15min；在室温下，7000rpm离心20min。取上清液，即为生物强化细胞营养素上清全液(简称ZGETS)。
实施例5
Aβ42(购自美国Sigma公司)。
将购买的Aβ42加六氟异丙醇，使浓度为1mg/ml，超声10分钟，在通风橱中挥发六氟异丙醇后获得Aβ42单体；
用含有DMSO的PBS(10mM，pH＝7.4)溶解Aβ42至50μM，其中含有DMSO的PBS中DMSO的体积浓度为1％，得到Aβ42单体溶液，将Aβ42单体溶液用PBS(10mM，pH＝7.4)稀释至终浓度为10μM。使其在37℃的条件下孵育3h形成Aβ42寡聚体溶液，在37℃的条件下孵育12h形成Aβ42原纤维溶液，在37℃的条件下孵育48h形成Aβ42纤维溶液。
神经母细胞瘤细胞系(SH-SY5Y)(购自上海康朗生物科技有限公司)
用MTT实验检测生物强化细胞营养素上清全液(ZGETS，用实施例1的生物强化细胞营养素采用实施例4的方法制备)抑制Aβ42寡聚体对神经母细胞瘤细胞系(SH-SY5Y)细胞毒性作用：
(1)使用DMEM培养基(含有10％胎牛血清)将SH-SY5Y细胞培养至80％的密度时，用0.25％胰蛋白酶进行消化，在1000rpm，3min的条件下，离心收集细胞。
(2)然后将细胞接种到96孔细胞培养板中，按照每孔5×103个细胞的密度接种，最后用完全DMEM培养基(含有10％胎牛血清)补足至100μL。
(3)将培养板放至37℃二氧化碳培养箱中，培养12小时,细胞贴壁完全后，吸弃每孔中的培养基；
在孔中加入100μLDMEM培养基(对照组)；
在孔中分别加入用DMEM培养基配制的终浓度为0.01％、0.1％、1％、5％、10％的生物强化细胞营养素上清全液(ZGETS组)；
在另外的孔中分别加入用DMEM培养基配制的终浓度为0.02μM、0.2μM、2μM的Aβ42寡聚体溶液(Aβ42寡聚体组)；
在另外的孔中分别加入用DMEM培养基配制的不同终浓度0.01％、0.1％、1％、5％、10％的生物强化细胞营养素上清全液和不同终浓度为0.02μM、0.2μM、2μM的Aβ42寡聚体溶液的组合(ZGETS&Aβ42寡聚体组)；
只有DMEM培养基组(空白组)；
每组三个平行。
每孔中的液体的总体积为100μL，孵育20h；
(4)在96孔板的每个孔中加入MTT溶液(称取MTT 0.25g，用少量PBS(10mM，pH＝7.4)溶解，待其完全溶解后，PBS(10mM，pH＝7.4)定容至50mL，然后用无菌微孔过滤器(0.22μm)过滤，分装，于-20℃冰箱中放置，避光保存。)每孔20μL，继续在37℃，5％二氧化碳培养箱中，培养4h；
(5)吸弃培养液，在96孔板的每个孔中加入150μL DMSO，轻轻震荡10min，充分溶解结晶物。使用酶标仪，在490nm的波长下测定每孔的吸光值。
(6)以对照组的存活率为100％计。
细胞存活率(％)＝(实验组OD490值-空白组OD490值)/(对照组OD490值-空白组OD490值)×100％。结果见图1，其中ZGETS组从左到右依次为0.01％、0.1％、1％、5％、10％的生物强化细胞营养素上清全液。
除空白组和对照组外，其它各组均属于实验组。
图1中，1.0％的生物强化细胞营养素上清全液和Aβ42寡聚体共同作用于神经母细胞瘤细胞系(SH-SY5Y)后，细胞的存活率提高的最明显。
实验证明，实施例2、3的生物强化细胞营养素按实施例4的方法制备的上清全液，具有抑制Aβ42寡聚体对神经母细胞瘤细胞系(SH-SY5Y)细胞毒性作用。
实施例6
用LDH实验检测生物强化细胞营养素上清全液(ZGETS，用实施例1的生物强化细胞营养素采用实施例4的方法制备)抑制Aβ42寡聚体对神经母细胞瘤细胞系(SH-SY5Y)细胞毒性作用：(LDH试剂盒购自碧云天生物科技公司)
(1)使用DMEM培养基(含有10％胎牛血清)将SH-SY5Y细胞培养至80％的密度时，用0.25％胰蛋白酶进行消化，在1000rpm，3min的条件下，离心收集细胞。将细胞接种到96孔细胞培养板中，按照每孔104个细胞的密度接种，用完全DMEM培养基(含有10％胎牛血清)补足至200μL，培养24小时；
(2)细胞贴壁完全后，吸去每孔中的培养基；
在孔中加入200μLDMEM培养基(对照组)；
在孔中分别加入用DMEM培养基配制的终浓度为0.01％、0.1％、1％的生物强化细胞营养素上清全液(ZGETS组)；
在另外的孔中分别加入用DMEM培养基配制的终浓度为0.02μM、0.2μM、2μM的Aβ42寡聚体溶液(Aβ42寡聚体组)；
在另外的孔中分别加入用DMEM培养基配制的不同终浓度0.01％、0.1％、1％的生物强化细胞营养素上清全液和不同终浓度为0.02μM、0.2μM、2μM的Aβ42寡聚体溶液的组合(ZGETS&Aβ42寡聚体组)；
每组三个平行。
每孔中的液体的总体积为200μL，培养20小时。
(3)在培养第19个小时时(即离培养总时间差1个小时时)，向对照组加20μL LDH释放试剂，反复吹打混匀，使其充分损伤细胞，继续培养1h，此组之后成为样品最大酶活性对照组。
(4)其它组共培养20小时时，对96孔细胞培养板进行离心处理，用多孔板离心机离心(400g，5min)，离心后在各孔中取120μL的上清液，转移到一新的96孔板中，做好标记。
(5)在新的96孔板的各孔中，加入LDH工作液(按照试剂盒中的说明书配制)60μl。混匀，在室温避光条件下、用铝箔包裹96孔板，于水平摇床上缓慢摇动孵育30min。最后在酶标仪上测量490nm处的吸光值(OD490)。
(6)以样品最大酶活性对照组吸光度损伤率为100％计算：细胞毒性(％)＝(处理样品组吸光度-对照组吸光度)/(样品最大酶活性对照组吸光度-对照组吸光度)×100％。结果见图2。
除对照组和样品最大酶活性对照组外，其它各组均属于处理样品组。
图2中，1.0％的生物强化细胞营养素上清全液和Aβ42寡聚体共同作用于神经母细胞瘤细胞系(SH-SY5Y)后，使Aβ42寡聚体对细胞的毒性降至最低。
实验证明，实施例2、3的生物强化细胞营养素按实施例4的方法制备的上清全液，具有抑制Aβ42寡聚体对神经母细胞瘤细胞系(SH-SY5Y)细胞毒性作用。
实施例7
用ThT-F实验检测生物强化细胞营养素上清全液(ZGETS，实施例1的生物强化细胞营养素采用实施例4的方法制备)抑制Aβ42四种状态聚集的作用：
(1)取生物强化细胞营养素上清全液2μL分别与20μL 10μM的Aβ42单体溶液、Aβ42寡聚体溶液、Aβ42原纤维溶液、Aβ42纤维溶液混合，用然后用PBS(10mM，pH＝7.4)补足至100μL；分别得到：Aβ42单体&ZGETS组、Aβ42寡聚体&ZGETS组、Aβ42原纤维&ZGETS组和Aβ42纤维&ZGETS组；
取20μL 10μM的Aβ42单体溶液、Aβ42寡聚体溶液、Aβ42原纤维溶液、Aβ42纤维溶液分别加入80μL的PBS(10mM，pH＝7.4)中；分别得到Aβ42单体组、Aβ42寡聚体组、Aβ42原纤维组和Aβ42纤维组；
将上述各组在培养箱中，37℃孵育，每组三个平行。
(2)分别于0h，12h，24h，36h，48h时对各组进行取样，每个样品取样20μL。
(3)将20μL不同时间段孵育的不同样品的其中一种，5μL、2mM的Th-T溶液(PBS10mM，pH＝6.0为溶剂)加入到975μLPBS(10mM，pH＝6.0)中混匀后，避光静置15min，将其加入石英比色皿中，用RF-6000荧光分光光度计，以Ex＝450nm，Em＝482nm的条件测定其荧光强度。结果见图3。图3中，Aβ42单体简称Aβ42M；Aβ42寡聚体简称Aβ42O；Aβ42原纤维简称Aβ42P；Aβ42纤维简称Aβ42F；
(Th-T溶液配制：准确称取6.4mg Th-T粉末，溶解于10mL 10mM，pH＝6.0的PBS中，得到终浓度为2mM的Th-T溶液，于4℃，避光保存)
(4)图3中，生物强化细胞营养素上清全液能够抑制Aβ42单体(图3A)、Aβ42寡聚体(图3B)、Aβ42原纤维(图3C)的聚集，并且对寡聚体的聚集的抑制作用最为明显，图3D显示对Aβ42纤维的聚集没有抑制作用。
实施例2、3的生物强化细胞营养素上清全液抑制Aβ42寡聚体的聚集效果与本实施例相似。

Claims (4)

1.生物强化细胞营养素在制备抗beta-淀粉样蛋白细胞毒性功能食品中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征是所述生物强化细胞营养素是用下述方法制成：
(一)母液的制备：
(1)选取谷类为原料，清洗分离杂质后，置于纸浆蒸煮机中加入原料总重量30％～50％的水，启动纸浆蒸煮机，旋转浸泡30～60分钟；
(2)停止旋转，将水放净，打开冷气机，通入冷气，旋转保持-4℃以下60～90分钟，停止旋转；
(3)关闭冷气机，打开空压机，通入室温空气，旋转，升温至室温；
(4)关闭空压机，停止旋转，通入蒸汽，旋转，保持100℃，30～60分钟，关闭蒸汽；
(5)停止旋转，打开空压机，通入室温空气，旋转，降至30℃～50℃；
(6)停止旋转，加入原料总重量1％～3％的营养配料粉，旋转30～60分钟；所述营养配料为重量比为1:2:3:1的灵芝、枸杞、蓝莓果和肉桂；
(7)停止旋转，加入原料总重量0.2％～0.4％的复合酶，旋转1～2小时；
(8)加入原料总重量0.2％～1％食用菌种，旋转使均匀；停止旋转，分装至发酵桶，在28～35℃发酵8～15天，即得母液备用；
(二)胶料的制备：
(1)另取谷类为第二原料，用18～30℃水浸泡8～16小时；沥水，置于容器内；
(2)向容器内加入第二原料重量1～2倍的水，煮1～3小时；
(3)过滤，去除水，获得胶料备用；
(三)成品的制备：
(1)将母液与胶料按重量比为1：1～2的比例，混合，分离除渣，得混合液；
(2)加入混合液重量1％～2％的低聚异麦芽糖，混合液重量0.2％～0.7％的黄原胶，混合液重量0～1％的阿胶，均质；灌装灭菌，得生物强化细胞营养素；
所述复合酶是质量比为3:3:1:1的糖化酶、淀粉酶、纤维素酶和果胶酶；
所述食用菌种为面包酵母，甜酒曲酵母、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌和保加利亚乳杆菌至少两种。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征是所述原料为黑糯米、黄糯米、白糯米、紫米、黍米、粟米、香米、高粱米、大米和薏米中的至少五种。
4.根据权利要求2所述的应用，其特征是所述第二原料为黑糯米、黄糯米和白糯米至少一种。
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Citations (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102186489A (zh) * 2008-10-07 2011-09-14 特拉维夫大学拉玛特有限公司 肉桂提取物用于治疗淀粉样蛋白相关疾病的应用
CN102641351A (zh) * 2011-11-18 2012-08-22 张艳波 蓝莓提取物用于预防阿尔茨海默病
CN104171881A (zh) * 2014-08-19 2014-12-03 天津市泉又今生物科技有限公司 生物强化细胞营养素及其制备方法
CN107540759A (zh) * 2017-09-29 2018-01-05 贵州中科健生物医药有限公司 一种从枸杞子中提取多糖的方法
CN107708717A (zh) * 2015-07-04 2018-02-16 株式会社奥碧慧央集团 神经细胞凋亡抑制剂、抗阿尔茨海默症剂、抗脑功能减退剂、具有抗阿尔茨海默症作用或抗脑功能减退作用的医药品或食品及神经细胞凋亡抑制剂的制造方法
CN107997131A (zh) * 2017-11-07 2018-05-08 天津市萌泉生物工程有限公司 生物强化细胞营养素在制备促中枢神经细胞再生的功能食品中的应用
CN108077907A (zh) * 2017-10-31 2018-05-29 天津市萌泉生物工程有限公司 生物强化细胞营养素在制备治疗烧烫伤医疗食品中的应用
CN108113994A (zh) * 2018-01-12 2018-06-05 天津科技大学 矢车菊素-3-O-葡萄糖苷在制备抑制β-淀粉样蛋白聚集的药物或保健品的用途
CN109045005A (zh) * 2018-08-07 2018-12-21 天津科技大学 固绿在抑制β-淀粉样蛋白聚集中的用途
CN109369815A (zh) * 2017-08-08 2019-02-22 中国科学院上海药物研究所 一种枸杞子阿拉伯半乳聚糖及其制备方法及用途
CN110420216A (zh) * 2019-08-09 2019-11-08 天津科技大学 石莼多糖在抑制β-淀粉样蛋白聚集中的用途

Patent Citations (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102186489A (zh) * 2008-10-07 2011-09-14 特拉维夫大学拉玛特有限公司 肉桂提取物用于治疗淀粉样蛋白相关疾病的应用
CN102641351A (zh) * 2011-11-18 2012-08-22 张艳波 蓝莓提取物用于预防阿尔茨海默病
CN104171881A (zh) * 2014-08-19 2014-12-03 天津市泉又今生物科技有限公司 生物强化细胞营养素及其制备方法
CN107708717A (zh) * 2015-07-04 2018-02-16 株式会社奥碧慧央集团 神经细胞凋亡抑制剂、抗阿尔茨海默症剂、抗脑功能减退剂、具有抗阿尔茨海默症作用或抗脑功能减退作用的医药品或食品及神经细胞凋亡抑制剂的制造方法
CN109369815A (zh) * 2017-08-08 2019-02-22 中国科学院上海药物研究所 一种枸杞子阿拉伯半乳聚糖及其制备方法及用途
CN107540759A (zh) * 2017-09-29 2018-01-05 贵州中科健生物医药有限公司 一种从枸杞子中提取多糖的方法
CN108077907A (zh) * 2017-10-31 2018-05-29 天津市萌泉生物工程有限公司 生物强化细胞营养素在制备治疗烧烫伤医疗食品中的应用
CN107997131A (zh) * 2017-11-07 2018-05-08 天津市萌泉生物工程有限公司 生物强化细胞营养素在制备促中枢神经细胞再生的功能食品中的应用
CN108113994A (zh) * 2018-01-12 2018-06-05 天津科技大学 矢车菊素-3-O-葡萄糖苷在制备抑制β-淀粉样蛋白聚集的药物或保健品的用途
CN109045005A (zh) * 2018-08-07 2018-12-21 天津科技大学 固绿在抑制β-淀粉样蛋白聚集中的用途
CN110420216A (zh) * 2019-08-09 2019-11-08 天津科技大学 石莼多糖在抑制β-淀粉样蛋白聚集中的用途

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
张荣平，等, 上海科学技术出版社 *

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