CN108047287B - 用于合成加利车霉素衍生物的中间体和方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及式I的中间体

Description

用于合成加利车霉素衍生物的中间体和方法
本申请是申请号为201480060096.9、申请日为2014年10月28日、发明名称为“用于合成加利车霉素衍生物的中间体和方法”的专利申请的分案申请。
技术领域
本发明涉及加利车霉素(calicheamicin)衍生物的合成。本发明还涉及可用于制备加利车霉素衍生物和使加利车霉素与生物大分子例如单克隆抗体缀合的中间体和连接体分子。
背景技术
Figure BDA0001505234350000011
(吉妥珠单抗奥佐米星)由通过酸可水解的连接体与加利车霉素结合的CD33的单克隆抗体组成。该商品作为第一种抗体靶向的化疗剂上市销售且被批准用于治疗老年患者的急性髓性白血病(AML)。伊珠单抗奥佐米星是目前处于治疗某些类型癌症的临床试验中的连接至加利车霉素的CD22抗体。
共同称作加利车霉素或LL-E33288复合物的抗(细)菌药和抗肿瘤药的有效家族公开在美国专利No.4,970,198中。美国专利No.5,053,394也公开了甲基三硫化物抗(细)菌药和抗肿瘤药。美国专利No.4,970,198和美国专利No.5,053,394中的这些化合物包含甲基三硫化物基团，其可以与适合的硫醇类反应，形成二硫键，同时引入官能团，例如酰肼或类似亲核体。美国专利No.5,053,394中给出了这种与加利车霉素反应的实例。美国专利No.5,770,701涉及用于制备LL-E33288复合物的二硫化物化合物的靶向形式的方法。连接体4-(4-乙酰基-苯氧基)丁酸与N-乙酰基γ加利车霉素二甲基酰肼化合物缩合，得到羧酸-腙，进一步将其用N-羟基琥珀酰亚胺处理，得到OSu酯(N-琥珀酰亚氨基氧基)，其易于与选择的生物大分子缀合。
美国专利No.8,273,862描述了用于构建连接体中间体分子(其中被称作“三连接体-活化的酯类”或“三官能连接体中间体”)的合成方法。这些连接体中间体可以与加利车霉素缀合，以便制备加利车霉素衍生物，然后加利车霉素衍生物可以进一步与生物大分子，例如单克隆抗体缀合。在这些导致制备连接体中间体的步骤中，美国专利No.8,273,862中所述的合成方法使用巯基化合物(其中的“化合物2”)、例如3-甲基-3-巯基丁酸酰肼作为中间体。
WO 2008/147765描述了用于合成包含巯基的中间体，例如3-甲基-3-巯基丁酸酰肼的方法，其可用于制备如上述段落中所述的连接体中间体酸和加利车霉素衍生物。WO2008/147765还涉及3-甲基-3-巯基丁酸酰肼作为“DMH连接体”。WO 2008/147765注意到，就使加利车霉素连接至单克隆抗体以制备例如吉妥珠单抗奥佐米星或伊珠单抗奥佐米星的目的而言，3-甲基-3-巯基丁酸酰肼是优选的包含巯基的N-酰基肼。
在WO 2008/147765中，化合物3-甲基-3-巯基丁酸酰肼是通过在酸性条件下从对甲氧基苄基硫醚酰肼上除去苄基保护基制备的。为了得到对甲氧基苄基硫醚酰肼，WO2008/147765教导了首先使对甲氧基苄基硫醚酸与草酰氯在二氯甲烷中反应，形成对甲氧基苄基硫醚酰氯。然后将对甲氧基苄基硫醚酰氯加到无水肼和二氯甲烷的混合物中，得到对甲氧基苄基硫醚酰肼。然而，正如WO 2008/147765中所述，所述两种反应物对甲氧基苄基硫醚酸和对甲氧基苄基硫醚酰氯它们自身一起生成不期望的副产物双甲氧基苄硫醚酰肼，导致较低的收率和质量。此外，正如WO 2008/147765中所述，由于酰氯分子对甲氧基苄基硫醚酰氯的反应性和不稳定的性质，必须使用无水肼和低温，例如-70℃。
制备加利车霉素衍生物中的另一方面包括使加利车霉素与连接体分子化学连接。为了使加利车霉素与美国专利No.8,273,862中的连接体中间体缀合，进行加利车霉素与“三连接体活化的酯”(或“三官能连接连接体中间体”)之间的最终反应。结构上，如上文所解释，加利车霉素包含以其衍生形式使用的三硫化物部分，且加利车霉素的三硫化物部分与三连接体活化的酯之间的这种反应的化学在实现良好收率和纯度方面是重要的。以前使用的用于加利车霉素衍生物的硫交换反应得到了复杂的反应混合物、多种副产物和低收率。
最终，加利车霉素衍生物在其形成后被纯化。美国专利No.8,273,862的方法包括纯化加利车霉素衍生物，该方法包括正相色谱法步骤。美国专利No.8,273,862中所述的纯化方法中的正相色谱法步骤使用二氯甲烷作为溶剂，且如上所述，暴露于高于各种最低水平的二氯甲烷被视为形成潜在的健康危害。因此，当使用包括二氯甲烷的正相色谱法法时，必须小心限制暴露于二氯甲烷。
发明内容
本发明提供用于合成和纯化连接体中间体的新中间体和方法，所述连接体中间体可用于将加利车霉素类抗肿瘤抗生素与生物大分子，例如单克隆抗体缀合。本发明还提供用于合成加利车霉素衍生物的新方法，该衍生物包含与连接体共价键合的加利车霉素。可以使如此制备的加利车霉素衍生物与生物大分子，例如单克隆抗体缀合，以制备抗体-药物缀合物。例如，本发明的中间体和合成方法可以用于制备加利车霉素衍生物，该衍生物用于制备吉妥珠单抗奥佐米星
Figure BDA0001505234350000031
或伊珠单抗奥佐米星。
本发明提供对合成和纯化加利车霉素衍生物的现有技术方法的改进，其克服了一些与这些现有技术方法相关的问题。
如上文所解释，WO 2008/147765教导首先使中间体对甲氧基苄基硫醚酸与草酰氯在二氯甲烷中反应，形成可用于合成加利车霉素衍生物的对甲氧基苄基硫醚酰氯中间体。在WO 2008/147765中，然后将对甲氧基苄基硫醚酰氯加到无水肼和二氯甲烷的混合物中，得到对甲氧基苄基硫醚酰肼中间体。然而，如WO 2008/147765中所述，两种反应物对甲氧基苄基硫醚酸和对甲氧基苄基硫醚酰氯它们自身共同生成不期望的副产物双-甲氧基苄硫醚酰肼，导致较低的收率和质量。本发明通过完全避免使用对甲氧基苄基硫醚酰氯作为中间体共同解决了双-甲氧基苄硫醚酰肼副产物这一问题。通过完全避免酰氯中间体对甲氧基苄基硫醚酰氯，本发明现在还允许使用肼的水合形式，其无需与无水肼所需的相同的专门处理程序，且这种新方法还避免了低温的繁琐要求。最终，因为在本发明中避免了使用对甲氧基苄基硫醚酰氯，所以无需使用与甲氧基苄基硫醚酰氯一起使用的二氯甲烷和安全性警惕。
与现有方法，例如美国专利No.8,273,862中所述的方法相比，本发明还改善了加利车霉素与连接体中间体之间反应的收率。本发明通过在反应中包括碳二亚胺提高了所得到的加利车霉素衍生物的收率。
如本申请中所述，还发现可以得到用于纯化加利车霉素衍生物的新方法，该方法包括使用反相高效液相色谱法法(RP-HPLC)，尽管在加利车霉素衍生物上存在两个遇水不稳定的基团(腙和N-羟基琥珀酰亚胺酯)。由此，本发明克服了上文提到的与使用正相色谱法法，例如如美国专利No.8,273,862中所述使用二氯甲烷，纯化加利车霉素衍生物相关的问题。
本发明提供式I的化合物，
Figure BDA0001505234350000041
其中，R12选自直链和支链C1-C8烷基；
R10各自独立地选自氢、R12和–OR12；
R8和R9各自独立地选自氢以及直链和支链C1-C8烷基，其中所述R8和R9的烷基各自独立地任选地被-NH2、-NHR11、-NR11R13、-OR11、-OH或–SR11取代，其中各R11和各R13独立地选自直链和支链C1-C5烷基；
r是选自0和1的整数；
G是氧或硫；
Z1是H或者直链或支链C1-C5烷基；
Ar是任选地被1、2或3个基团取代的1,2-、1,3-或1,4-亚苯基，所述基团独立地选自直链或支链C1-C6烷基、-OR14、-SR14、卤素、硝基、-COOR14、-C(＝O)NHR14、-O(CH2)nCOOR14、-S(CH2)nCOOR14、-O(CH2)nC(＝O)NHR14和–S(CH2)nC(＝O)NHR14，或Ar是任选地被1、2、3或4个基团取代的1,2-、1,3-、1,4-、1,5-、1,6-、1,7-、1,8-、2,3-、2,6-或2,7-亚萘基，所述基团独立地选自直链或支链C1-C6烷基、-OR14、-SR14、卤素、硝基、-COOR14、-C(＝O)NHR14、-O(CH2)nCOOR14、-S(CH2)nCOOR14、-O(CH2)nC(＝O)NHR14和–S(CH2)nC(＝O)NHR14；
其中R14各自独立地选自(C1-C5)烷基，且R14各自独立地任选地被1或2个选自–OH、-(C1-C4)烷基和–S(C1-C4)烷基的基团取代；
n各自是独立地选自0、1、2、3、4和5的整数；
W选自–O-、-S-、-C(＝O)NH-、-NHC(＝O)-和-NR15-，其中R15是(C1-C5)烷基，且R15任选地被1或2个选自-OH、-(C1-C4)烷基和-S(C1-C4)烷基的基团取代；且
Y是直链或支链(C1-C6)亚烷基基团或者直链或支链(C2-C6)亚烯基基团。
式1的化合物可用作合成连接体中间体和包含这类连接体中间体的加利车霉素衍生物的中间体，所述加利车霉素衍生物又可以与生物大分子例如单克隆抗体缀合。
在本发明的一个实施方案中，式I的化合物上的R10各自是氢。在另一个实施方案中，式I的化合物上的R10各自是氢，且R12是甲基。
在本发明的另一个实施方案中，式I的化合物是具有如下结构的化合物：
Figure BDA0001505234350000061
在本发明的另一个实施方案中，式I的化合物上的R8和R9均为甲基，r是0，G是氧，Z1是甲基，Ar是1,4-亚苯基，W是–O-，且Y是-(CH2)3-。
在本发明的另一个实施方案中，式I的化合物上的R8和R9均为甲基。
在本发明的另一个实施方案中，式I的化合物中的r是0。在本发明的另一个实施方案中，式I的化合物中的r是0，且G是氧。在本发明的另一个实施方案中，式I的化合物中的r是0，且G是硫。
本发明还提供用于合成上文提及的式I的化合物的方法，如所述，式I的化合物可用作用于合成连接体中间体和包含所述连接体中间体基团的加利车霉素衍生物的中间体。在一个实施方案中，本发明提供用于合成式I的化合物的方法，
Figure BDA0001505234350000062
其中R12选自直链和支链C1-C8烷基；
R10各自独立地选自氢、R12和–OR12；
R8和R9各自独立地选自氢以及直链和支链C1-C8烷基，其中所述R8和R9的烷基各自独立地任选地被-NH2、-NHR11、-NR11R13、-OR11、-OH或–SR11取代，其中各R11和各R13独立地选自直链和支链C1-C5烷基；
r是选自0和1的整数；
G是氧或硫；
Z1是H或者直链或支链C1-C5烷基；
Ar是任选地被1、2或3个基团取代的1,2-、1,3-或1,4-亚苯基，所述基团独立地选自直链或支链C1-C6烷基、-OR14、-SR14、卤素、硝基、-COOR14、-C(＝O)NHR14、-O(CH2)nCOOR14、-S(CH2)nCOOR14、-O(CH2)nC(＝O)NHR14和–S(CH2)nC(＝O)NHR14，或Ar是任选地被1、2、3或4个基团取代的1,2-、1,3-、1,4-、1,5-、1,6-、1,7-、1,8-、2,3-、2,6-或2,7-亚萘基，所述基团独立地选自直链或支链C1-C6烷基、-OR14、-SR14、卤素、硝基、-COOR14、-C(＝O)NHR14、-O(CH2)nCOOR14、-S(CH2)nCOOR14、-O(CH2)nC(＝O)NHR14和–S(CH2)nC(＝O)NHR14；
其中R14各自独立地选自(C1-C5)烷基，且R14各自独立地任选地被1或2个选自–OH、-(C1-C4)烷基和–S(C1-C4)烷基的基团取代；
n各自是独立地选自0、1、2、3、4和5的整数；
W选自-O-、-S-、-C(＝O)NH-、-NHC(＝O)-和-NR15-，其中R15是(C1-C5)烷基，且R15任选地被1或2个选自-OH、-(C1-C4)烷基和–S(C1-C4)烷基的基团取代；且Y是直链或支链(C1-C6)亚烷基基团或者直链或支链(C2-C6)亚烯基基团；该方法包括使式II的化合物
Figure BDA0001505234350000081
其中R10、R12、R8、R9、r和G如上述所定义，与式III的化合物反应，
Figure BDA0001505234350000082
其中Z1、Ar、W和Y如上文所定义。在合成式I的化合物的方法的一个实施方案中，r是0，G是氧，Z1是甲基，Ar是1,4-亚苯基，W是–O-，且Y是–(CH2)3-。在合成式I的化合物的方法的另一个实施方案中，R8和R9是甲基。在合成式I的化合物的方法的一个实施方案中，R10各自是氢。在合成式I的化合物的方法的另一个实施方案中，R10各自是氢，且R12是甲基。
在本发明用于合成式I的化合物的方法的另一个实施方案中，式II的化合物上的R8和R9均为甲基。
在本发明用于合成式I的化合物的方法的另一个实施方案中，式II的化合物中的r是0。在本发明用于合成式I的化合物的方法的另一个实施方案中，式II的化合物中的r是0，且G是氧。在本发明用于合成式I的化合物的方法的另一个实施方案中，式II的化合物中的r是0，且G是硫。
本发明还提供合成式II的化合物的方法，
Figure BDA0001505234350000091
其中R12选自直链和支链C1-C8烷基；
R10各自独立地选自氢、R12和–OR12；
R8和R9各自独立地选自氢以及直链和支链C1-C8烷基，其中各自所述R8和R9的烷基独立地任选地被-NH2、-NHR11、-NR11R13、-OR11、-OH或–SR11取代，其中各R11和各R13独立地选自直链和支链C1-C5烷基；
r是选自0和1的整数；且
G是氧或硫；
该方法包括在有机溶剂中用式IX的唑系活化剂处理式VII的化合物，
Figure BDA0001505234350000092
其中R16是–C(＝O)OH或-C(＝V)SH，其中V是氧或硫，或R16是–NH2；
Figure BDA0001505234350000093
其中V’是氧或硫；且
其中E是
Figure BDA0001505234350000101
其中m是整数0、1、2或3；q是整数0、1或2；且p是整数0、1、2、3或4；且其中连接至E的各R17独立地选自直链和支链(C1-C6)烷基基团；
形成式VIII的化合物，
Figure BDA0001505234350000102
其中当R16是–C(＝O)OH时，r是0，且G是氧；当R16是-C(＝V)SH时，r是0，且G是V；且当R16是–NH2时，r是1，且G是V’；
然后使式VIII的化合物与肼结合，由此形成式II的化合物。式II的化合物可用作合成连接体中间体和包含所述连接体中间体基团的加利车霉素衍生物的中间体，所述加利车霉素衍生物又可以与生物大分子例如单克隆抗体缀合。
所述唑系活化剂是指定式IX的包含唑类结构的任意化合物，当其与式VII的化合物反应时，得到式VIII的化合物，其中E如上所述。可以用于本发明的唑系活化剂的实例包括羰基二咪唑；硫代羰基二咪唑；羰基双-吡唑，其中各吡唑任选地被1～3个(C1-C6)烷基基团取代；羰基双-1,2,3-三唑；羰基双-苯并三唑和羰基双-1,2,4-三唑。优选地，所述唑系活化剂是羰基二咪唑。
任选地分离式VIII的化合物，然后将其与肼结合。在一个实施方案中，在与肼结合之前不分离式VIII的化合物。在另一个实施方案中，分离式VIII的化合物，然后将其与肼结合。
优选地，R16是–C(＝O)OH，且所述唑系活化剂是羰基二咪唑。
在本发明用于制备式II的化合物的方法的一个实施方案中，在式II的化合物中，r是0，且G是氧。在用于制备式II的化合物的方法的另一个实施方案中，在式II的化合物中，r是0，且G是氧，且式VII的化合物上的R16是–C(＝O)OH。在用于制备式II的化合物的方法的另一个实施方案中，在式II的化合物中，r是0，且G是氧，式VII上的R16是–C(＝O)OH，且所述唑系活化剂是羰基二咪唑。
在本发明用于制备式II的化合物的方法的另一个实施方案中，式VIII的化合物具有如下结构：
Figure BDA0001505234350000111
在用于制备式II的化合物的方法的另一个实施方案中，式VIII的化合物具有如下结构：
Figure BDA0001505234350000121
且所述唑系活化剂是羰基二咪唑。
在本发明用于合成式II的化合物的方法的另一个实施方案中，式VII的化合物上的R8和R9均为甲基。
在本发明用于合成式II的化合物的方法的另一个实施方案中，式VII的化合物包含R16，其为–C(＝V)SH，且V为氧或硫。应当理解，当式VII的化合物包含为–C(＝V)SH的R16和为氧的V时，这类式VII的化合物可以以互变体形式存在，其为式VII的相同化合物，但其中R16是–(C＝S)OH。当式VII的化合物包含为–C(＝O)SH的R16及其互变体时，其中R16是–C(＝S)OH，得到的式II的产物化合物包含为氧的G。
在本发明用于合成式II的化合物的方法的另一个实施方案中，式VII的化合物包含为–NH2的R16。当合成式II的化合物的方法中的式VII的化合物包含为–NH2的R16时，得自该方法的式II的化合物中的r是1。在用于合成式II的化合物的方法的另一个实施方案中，该方法包括其中R16是–NH2的式VII的化合物；以及其中V’是氧的式IX的化合物；得自该方法的式II的化合物包含为1的r和为V’的G(即氧)。在用于合成式II的化合物的方法的另一个实施方案中，该方法包括其中R16是–NH2的式VII的化合物；以及其中V’是硫的式IX的化合物；得自该方法的式II的化合物包含为1的r和为V’的G(即硫)。
在用于合成式II的化合物的方法的另一个实施方案中，该方法包括式IX的唑系活化剂，其中V’是氧。在用于合成式II的化合物的方法的另一个实施方案中，该方法包括式IX的唑系活化剂，其中V’是硫。
在合成式II的化合物的方法的另一个实施方案中，所述肼是无水肼。在合成式II的化合物的方法的另一个实施方案中，所述肼是一水合肼。在另一个实施方案中，所述肼是肼的水溶液。在另一个实施方案中，所述肼是肼的四氢呋喃溶液。
如上文所解释，式I的化合物可用作用于合成连接体中间体和包含所述连接体中间体基团的加利车霉素衍生物的中间体。因此，本发明提供用于合成式IV的化合物的方法，式IV的化合物也用作用于合成连接体中间体和包含所述连接体中间体基团的加利车霉素衍生物的中间体。在一个实施方案中，本发明提供用于合成式IV的化合物的方法，
Figure BDA0001505234350000131
其中R8和R9各自独立地选自氢以及直链和支链C1-C8烷基，其中所述R8和R9的烷基各自独立地任选地被-NH2、-NHR11、-NR11R13、-OR11、-OH或–SR11取代，其中各R11和各R13独立地选自直链和支链C1-C5烷基；
r是选自0和1的整数；
G是氧或硫；
Z1是H或者直链或支链C1-C5烷基；
Ar是任选地被1、2或3个基团取代的1,2-、1,3-或1,4-亚苯基，所述基团独立地选自直链或支链C1-C6烷基、-OR14、-SR14、卤素、硝基、-COOR14、-C(＝O)NHR14、-O(CH2)nCOOR14、-S(CH2)nCOOR14、-O(CH2)nC(＝O)NHR14和–S(CH2)nC(＝O)NHR14，或Ar是任选地被1、2、3或4个基团取代的1,2-、1,3-、1,4-、1,5-、1,6-、1,7-、1,8-、2,3-、2,6-或2,7-亚萘基，所述基团独立地选自直链或支链C1-C6烷基、-OR14、-SR14、卤素、硝基、-COOR14、-C(＝O)NHR14、-O(CH2)nCOOR14、-S(CH2)nCOOR14、-O(CH2)nC(＝O)NHR14和–S(CH2)nC(＝O)NHR14；
其中R14各自独立地选自(C1-C5)烷基，且R14各自独立地任选地被1或2个选自–OH、-(C1-C4)烷基和–S(C1-C4)烷基的基团取代；
n各自是独立地选自0、1、2、3、4和5的整数；
W选自–O-、-S-、-C(＝O)NH-、-NHC(＝O)-和-NR15-，其中R15是(C1-C5)烷基，且R15任选地被1或2个选自–OH、-(C1-C4)烷基和–S(C1-C4)烷基的基团取代；且Y是直链或支链(C1-C6)亚烷基基团或者直链或支链(C2-C6)亚烯基基团，该方法包括用强酸处理式I的化合物，
Figure BDA0001505234350000141
其中R12选自直链和支链C1-C8烷基；
R10各自独立地选自氢、R12和–OR12；
且R8、R9、r、G、Z1、Ar、W和Y如所定义的；
形成包含式IV的化合物的混合物。用于合成式IV的化合物的方法中的强酸可以由本领域普通技术人员确定，因为它是从硫原子上除去取代的苯基-亚甲基基团得到式IV的化合物的任意酸。在一个实施方案中，用于本发明合成式IV的化合物的方法中的强酸选自三氟乙酸、硫酸、三氟甲磺酸、HCl、HBr、HI。在用于合成式IV的化合物的方法的一个实施方案中，R8和R9是甲基，r是0，G是氧，Z1是甲基，Ar是1,4-亚苯基，W是–O-，且Y是–(CH2)3-。在用于合成式IV的化合物的方法的另一个实施方案中，R10各自是氢。在用于合成式IV的化合物的方法的另一个实施方案中，R10各自是氢，且R12是甲基。
在本发明用于合成式IV的化合物的另一个实施方案中，式I的化合物上的R8和R9均为甲基。
在本发明用于合成式IV的化合物的另一个实施方案中，式I的化合物中的r是0。在本发明用于合成式IV的化合物的另一个实施方案中，式I的化合物中的r是0，且G是氧。在本发明用于合成式IV的化合物的另一个实施方案中，式I的化合物中的r是0，且G是硫。
本发明还提供使用式I的中间体和式IV的中间体合成式V的连接体中间体的方法。在一个实施方案中本发明提供用于合成式V的连接体中间体的方法，
Figure BDA0001505234350000151
其中R8和R9各自独立地选自氢以及直链和支链C1-C8烷基，其中所述R8和R9的烷基各自独立地任选地被-NH2、-NHR11、-NR11R13、-OR11、-OH或–SR11取代，其中各R11和各R13独立地选自直链和支链C1-C5烷基；
r是选自0和1的整数；
G是氧或硫；
Z1是H或者直链或支链C1-C5烷基；
Ar是任选地被1、2或3个基团取代的1,2-、1,3-或1,4-亚苯基，所述基团独立地选自直链或支链C1-C6烷基、-OR14、-SR14、卤素、硝基、-COOR14、-C(＝O)NHR14、-O(CH2)nCOOR14、-S(CH2)nCOOR14、-O(CH2)nC(＝O)NHR14和–S(CH2)nC(＝O)NHR14，或Ar是任选地被1、2、3或4个基团取代的1,2-、1,3-、1,4-、1,5-、1,6-、1,7-、1,8-、2,3-、2,6-或2,7-亚萘基，所述基团独立地选自直链或支链C1-C6烷基、-OR14、-SR14、卤素、硝基、-COOR14、-C(＝O)NHR14、-O(CH2)nCOOR14、-S(CH2)nCOOR14、-O(CH2)nC(＝O)NHR14和–S(CH2)nC(＝O)NHR14；
其中R14各自独立地选自(C1-C5)烷基，且R14各自独立地任选地被1或2个选自–OH、-(C1-C4)烷基和–S(C1-C4)烷基的基团取代；
n各自是独立地选自0、1、2、3、4和5的整数；
W选自–O-、-S-、-C(＝O)NH-、-NHC(＝O)-和-NR15-，其中R15是(C1-C5)烷基，且R15任选地被1或2个选自–OH、-(C1-C4)烷基和–S(C1-C4)烷基的基团取代；
Y是直链或支链(C1-C6)亚烷基基团或者直链或支链(C2-C6)亚烯基基团；且
Z选自由如下基团组成的组
Figure BDA0001505234350000161
该方法包括
a)用强酸处理式I的化合物，
Figure BDA0001505234350000162
其中R12选自直链和支链C1-C8烷基和各自R10独立地选自氢、R12和–OR12；
形成包含式IV的化合物的混合物；
Figure BDA0001505234350000171
且
b)使式IV的化合物与化合物ZH反应；
由此合成式V的连接体中间体。在合成式V的连接体中间体的方法的一个实施方案中，所述强酸是三氟乙酸或硫酸。
在本发明用于合成式V的连接体中间体的另一个实施方案中，式I的化合物上的R8和R9均为甲基。
在本发明用于合成式V的连接体中间体的另一个实施方案中，式I的化合物中的r是0。在本发明用于合成式V的连接体中间体的另一个实施方案中，式I的化合物中的r是0，且G是氧。在本发明用于合成式V的连接体中间体的另一个实施方案中，式I的化合物中的r是0，且G是硫。
在用于合成式V的连接体中间体的方法的另一个实施方案中，ZH是
Figure BDA0001505234350000172
在用于合成式V的连接体中间体的方法的另一个实施方案中，所述连接体中间体是具有如下结构的化合物：
Figure BDA0001505234350000173
在用于合成式V的连接体中间体的方法的另一个实施方案中，用于该方法中的式I的化合物时通过使式II的化合物
Figure BDA0001505234350000181
与式III的化合物反应得到的，
Figure BDA0001505234350000182
正如所解释的，所述连接体中间体可用于制备包含所述连接体中间体基团的加利车霉素衍生物。所述加利车霉素衍生物又可以与生物大分子例如单克隆抗体缀合。因此，本申请中所述的式I的化合物和合成方法可用于制备这类加利车霉素衍生物。因此，本发明提供合成式VI的加利车霉素衍生物的方法，
Figure BDA0001505234350000183
其中J是
Figure BDA0001505234350000191
R1是
Figure BDA0001505234350000192
或CH3；R2是
Figure BDA0001505234350000197
或H；
R3是
Figure BDA0001505234350000194
或H；R4是
Figure BDA0001505234350000195
或H；
R5是-CH3、-C2H5或-CH(CH3)2；
X是碘或溴原子；
R5’是氢或基团RCO，其中R是氢、1～10个碳原子的有支链或无支链的烷基、2～10个碳原子的亚烷基、6～11个碳原子的芳基、(C6-C11)芳基-烷基(C1-C5)基团或者杂芳基或杂芳基-烷基(C1-C5)基团，其中杂芳基定义为2-或3-呋喃基、2-或3-噻吩基、2-或3-(N-甲基吡咯基)、2-、3-或4-吡啶基、2-、4-或5-(N-甲基咪唑基)、2-、4-或5-
Figure BDA0001505234350000196
唑基、2-、3-、5-或6-嘧啶基、2-、3-、4-、5-、6-、7-或8-喹啉基或1-、3-、4-、5-、6-、7-或8-异喹啉基，所有的芳基和杂芳基任选地被一个或多个羟基、氨基、羧基、卤素、硝基、(C1-C3)烷氧基或1～5个碳原子的硫代烷氧基取代；
R6和R7各自独立地选自H和
Figure BDA0001505234350000201
R8和R9各自独立地选自氢以及直链和支链C1-C8烷基，其中所述R8和R9的烷基各自独立地任选地被-NH2、-NHR11、-NR11R13、-OR11、-OH或–SR11取代，其中R11各自和R13各自独立地选自直链和支链C1-C5烷基；
r是整数0或1；
G是氧或硫；
Z1是H或者直链或支链C1-C5烷基；
Ar是任选地被1、2或3个基团取代的1,2-、1,3-或1,4-亚苯基，所述基团独立地选自直链或支链C1-C6烷基、-OR14、-SR14、卤素、硝基、-COOR14、-C(＝O)NHR14、-O(CH2)nCOOR14、-S(CH2)nCOOR14、-O(CH2)nC(＝O)NHR14和–S(CH2)nC(＝O)NHR14，或Ar是任选地被1、2、3或4个基团取代的1,2-、1,3-、1,4-、1,5-、1,6-、1,7-、1,8-、2,3-、2,6-或2,7-亚萘基，所述基团独立地选自直链或支链C1-C6烷基、-OR14、-SR14、卤素、硝基、-COOR14、-C(＝O)NHR14、-O(CH2)nCOOR14、-S(CH2)nCOOR14、-O(CH2)nC(＝O)NHR14和–S(CH2)nC(＝O)NHR14；
其中R14各自独立地选自(C1-C5)烷基，且R14各自独立地任选地被1或2个选自–OH、-(C1-C4)烷基和–S(C1-C4)烷基的基团取代；
n各自是独立地选自0、1、2、3、4和5的整数；
W选自–O-、-S-、-C(＝O)NH-、-NHC(＝O)-和-NR15-，其中R15是(C1-C5)烷基，且R15任选地被1或2个选自–OH、-(C1-C4)烷基和–S(C1-C4)烷基的基团取代；
Y是直链或支链(C1-C6)亚烷基基团或者直链或支链(C2-C6)亚烯基基团；且
Z选自由如下基团组成的组
Figure BDA0001505234350000211
Figure BDA0001505234350000212
该方法包括
a)用强酸处理式I的化合物，
Figure BDA0001505234350000213
其中R12选自直链和支链C1-C8烷基,
且R10各自独立地选自氢、R12和–OR12，形成包含式IV的化合物的混合物；
Figure BDA0001505234350000214
b)使式IV的化合物与化合物ZH反应；
形成式V的连接体中间体，
Figure BDA0001505234350000215
且
c)使得自步骤(b)的式V的连接体中间体与甲基三硫化物化合物CH3-S-S-S-J反应；
由此合成式VI的加利车霉素衍生物。在本发明用于合成式VI的加利车霉素衍生物的方法的一个实施方案中，所述强酸是硫酸或三氟乙酸。在本发明用于合成式VI的加利车霉素衍生物的方法的另一个实施方案中，R8和R9是甲基，r是0，G是氧，Z1是甲基，Ar是1,4-亚苯基，W是–O-，且Y是–(CH2)3-。在合成式VI的加利车霉素衍生物的方法的另一个实施方案中，R10各自是氢。在合成式VI的加利车霉素衍生物的方法的另一个实施方案中，R10各自是氢，且R12是甲基。
在本发明用于合成式VI的加利车霉素衍生物的另一个实施方案中，式I的化合物上的R8和R9均为甲基。
在本发明用于合成式VI的加利车霉素衍生物的另一个实施方案中，式I的化合物中的r是0。在本发明用于合成式VI的加利车霉素衍生物的另一个实施方案中，式I的化合物中的r是0，且G是氧。在本发明用于合成式VI的加利车霉素衍生物的另一个实施方案中，式I的化合物中的r是0，且G是硫。
在合成式VI的加利车霉素衍生物的方法的另一个实施方案中，式I的化合物是通过使式II的化合物
Figure BDA0001505234350000221
与式III的化合物反应得到的，
Figure BDA0001505234350000231
在合成式VI的加利车霉素衍生物的方法的另一个实施方案中，R6和R7之一是氢，而R6和R7的另一个是
Figure BDA0001505234350000232
在本发明式I的中间体和合成方法的一个实施方案中，Z1是甲基。在本发明的中间体和合成方法的另一个实施方案中，r是0，且G是氧。在本发明中间体和合成方法的另一个实施方案中，Z1是甲基，r是0，且G是氧。
在本发明合成方法的另一个实施方案中，J是奥佐米星部分。
在本发明合成方法的另一个实施方案中，式VI的加利车霉素衍生物具有如下结构：
Figure BDA0001505234350000233
由本发明方法合成的式VI的加利车霉素衍生物可以与生物大分子例如单克隆抗体缀合。例如，由本发明方法合成的式VI的加利车霉素衍生物可以与单克隆抗-CD22抗体伊珠单抗(与某些癌细胞表面上表达的CD22抗原特异性结合的抗体)或抗-CD33抗体吉妥珠单抗(特异性地靶向某些癌细胞表面上表达的抗-CD33抗原的抗体)缀合。在一个实施方案中，由本发明方法合成的式VI的加利车霉素衍生物，在与单克隆抗体缀合时，具有如下结构：
Figure BDA0001505234350000241
其中Ab是单克隆抗体。单克隆抗体Ab的实例包括，但不限于吉妥珠单抗和伊珠单抗。
本说明书中使用的术语一般具有其在本领域中、本发明上下文中和使用各术语的专有环境中通常的含义。
除非另有说明，否则本申请中所使用的术语“加利车霉素衍生物”是指式CH3-S-S-S-J的化合物的衍生物，其中J如本申请中所定义，该衍生物包含键合至连接体中间体基团的加利车霉素部分–S-S-J：
Figure BDA0001505234350000242
其中R8、R9、r、G、Z1、Ar、W、Y和Z如本申请中所定义。加利车霉素衍生物还可以在包含–C(＝O)Z部分的末端上与生物大分子，例如单克隆抗体缀合(即共价键合)。式CH3-S-S-S-J的化合物的实例描述在例如美国专利No.4,970,198和美国专利No.5,053,394中，通过引用将这两篇专利的全部内容并入本申请。化合物CH3-S-S-S-J的实例是加利车霉素奥佐米星。
除非另有说明，否则本申请中所使用的术语“连接体中间体”是指本申请中所述的那些分离的式V的分子，其能够在其一个末端上共价键合至式CH3-S-S-S-J的分子，并且在另一端(–C(＝O)Z端)上具有可以共价键合至生物大分子例如单克隆抗体的官能团。分离的连接体中间体可用作用于制备连接至生物大分子例如单克隆抗体的加利车霉素衍生物和加利车霉素的成分。
除非另有说明，否则术语“烃基”自身或作为另一个术语的一部分是指具有所示碳原子数的直链或支链、饱和或不饱和的烃(例如“C1-C8”烃基是指具有1～8个碳原子的烃基基团)。当未显示碳原子数时，烃基基团具有1～8个碳原子(除非它是不饱和的，在此情况下，烃基基团具有2～8个碳原子)。有代表性的直链C1-C8烃基包括，但不限于甲基、乙基、正丙基、正丁基、正戊基、正己基、正庚基和正辛基；而支链C1-C8烃基包括，但不限于-异丙基、-仲丁基、-异丁基、-叔丁基、-异戊基和-2-甲基丁基；不饱和C2-C8烃基包括，但不限于乙烯基、烯丙基、1-丁烯基、2-丁烯基、异丁烯基、1-戊烯基、2-戊烯基、3-甲基-1-丁烯基、2-甲基-2-丁烯基、2,3-二甲基-2-丁烯基、1-己基、2-己基、3-己基、乙炔基、丙炔基、1-丁炔基、2-丁炔基、1-戊炔基、2-戊炔基和3-甲基-1-丁炔基。
除非另有说明，否则“亚烷基”自身或作为另一个术语的一部分是指具有所示碳原子数的饱和支链或直链或环状烃基，其具有两个通过从母体烷烃的相同或两个不同碳原子上除去两个氢原子衍生的两个一价基团中心。在一个实施方案中，“亚烷基”是指具有两个一价基团中心的所示碳原子数的饱和支链或直链亚烷基基团。典型的亚烷基基团包括，但不限于：亚甲基(-CH2-)、1,2-亚乙基-CH2CH2-)、1,3-亚丙基(-CH2CH2CH2-)、1,4-亚丁基(-CH2CH2CH2CH2-)等。术语“亚烯基”是指具有所示碳原子数，但具有至少两个通过双键连接的碳原子的支链或直链或环状烃基团，其中该基团具有两个通过从母体烷的两个不同碳原子上除去两个氢原子衍生的两个一价基团中心。在一个实施方案中，“亚烷基”是指具有所示碳原子数，但具有至少两个通过双键连接的碳原子的支链或直链基团，其中该基团具有两个一价基团中心。亚烯基的实例包括，但不限于-CH＝CH-、-CH2CH＝CH-和-CH(CH3)CH＝CH。
除非另有说明，否则“芳基”自身或作为另一个术语的一部分意指6～20、优选6～14个碳原子的通过从母体芳香环系的一个或多个碳原子上各自除去一个氢原子衍生的碳环芳香烃基团。典型的芳基基团包括，但不限于衍生自苯、萘、蒽、联苯等的基团。如果有说明，则本申请中的芳基基团可以任选地被取代。术语“亚芳基”是指衍生自如本申请中所定义的芳基基团的二价基团。
“卤素”是指氟、氯、溴或碘原子。
本发明还提供合成式VI的加利车霉素衍生物的方法，
Figure BDA0001505234350000261
其中J是
Figure BDA0001505234350000262
R1是
Figure BDA0001505234350000263
或CH3；R2是
Figure BDA0001505234350000264
或H；
R3是
Figure BDA0001505234350000271
或H；R4是
Figure BDA0001505234350000272
或H；
R5是-CH3、-C2H5或-CH(CH3)2；
X是碘或溴原子；
R5’是氢或基团RCO，其中R是氢、1～10个碳原子的有支链或无支链的烷基、2～10个碳原子的亚烷基、6～11个碳原子的芳基、(C6-C11)芳基-烷基(C1-C5)基团或者杂芳基或杂芳基-烷基(C1-C5)基团，其中杂芳基定义为2-或3-呋喃基、2-或3-噻吩基、2-或3-(N-甲基吡咯基)、2-、3-或4-吡啶基、2-、4-或5-(N-甲基咪唑基)、2-、4-或5-
Figure BDA0001505234350000274
唑基、2-、3-、5-或6-嘧啶基、2-、3-、4-、5-、6-、7-或8-喹啉基或1-、3-、4-、5-、6-、7-或8-异喹啉基，所有的芳基和杂芳基任选地被一个或多个羟基、氨基、羧基、卤素、硝基、(C1-C3)烷氧基或1～5个碳原子的硫代烷氧基取代；
R6和R7各自独立地选自H和
Figure BDA0001505234350000273
R8和R9各自独立地选自氢以及直链和支链C1-C8烷基，其中各自所述R8和R9的烷基独立地任选地被-NH2、-NHR11、-NR11R13、-OR11、-OH或–SR11取代，其中各R11和各R13独立地选自直链和支链C1-C5烷基；
r是整数0或1；
G是氧或硫；
Z1是H或者直链或支链C1-C5烷基；
Ar是任选地被1、2或3个基团取代的1,2-、1,3-或1,4-亚苯基，所述基团独立地选自直链或支链C1-C6烷基、-OR14、-SR14、卤素、硝基、-COOR14、-C(＝O)NHR14、-O(CH2)nCOOR14、-S(CH2)nCOOR14、-O(CH2)nC(＝O)NHR14和–S(CH2)nC(＝O)NHR14，或Ar是任选地被1、2、3或4个基团取代的1,2-、1,3-、1,4-、1,5-、1,6-、1,7-、1,8-、2,3-、2,6-或2,7-亚萘基，所述基团独立地选自直链或支链C1-C6烷基、-OR14、-SR14、卤素、硝基、-COOR14、-C(＝O)NHR14、-O(CH2)nCOOR14、-S(CH2)nCOOR14、-O(CH2)nC(＝O)NHR14和–S(CH2)nC(＝O)NHR14；
其中R14各自独立地选自(C1-C5)烷基，且R14各自独立地任选地被1或2个选自–OH、-(C1-C4)烷基和–S(C1-C4)烷基的基团取代；
n各自是独立地选自0、1、2、3、4和5的整数；
W选自–O-、-S-、-C(＝O)NH-、-NHC(＝O)-和-NR15-，其中R15是(C1-C5)烷基，且R15任选地被1或2个选自–OH、-(C1-C4)烷基和–S(C1-C4)烷基的基团取代；
Y是直链或支链(C1-C6)亚烷基基团或者直链或支链(C2-C6)亚烯基基团；且
Z选自由如下基团组成的组
Figure BDA0001505234350000281
该方法包括使式V的连接体中间体
Figure BDA0001505234350000282
与甲基三硫化物化合物CH3-S-S-S-J在碳二亚胺的存在下反应；由此合成式VI的加利车霉素衍生物。
本发明还提供合成式X的加利车霉素衍生物的方法，
Figure BDA0001505234350000291
其中J是
Figure BDA0001505234350000292
R1是
Figure BDA0001505234350000293
或CH3；R2是
Figure BDA0001505234350000294
或H；
R3是
Figure BDA0001505234350000295
或H；R4是
Figure BDA0001505234350000296
或H；
R5是-CH3、-C2H5或-CH(CH3)2；
X是碘或溴原子；
R5’是氢或基团RCO，其中R是氢、1～10个碳原子的有支链或无支链的烷基、2～10个碳原子的亚烷基、6～11个碳原子的芳基、(C6-C11)芳基-烷基(C1-C5)基团或者杂芳基或杂芳基-烷基(C1-C5)基团，其中杂芳基定义为2-或3-呋喃基、2-或3-噻吩基、2-或3-(N-甲基吡咯基)、2-、3-或4-吡啶基、2-、4-或5-(N-甲基咪唑基)、2-、4-或5-
Figure BDA0001505234350000302
唑基、2-、3-、5-或6-嘧啶基、2-、3-、4-、5-、6-、7-或8-喹啉基或1-、3-、4-、5-、6-、7-或8-异喹啉基，所有的芳基和杂芳基任选地被一个或多个羟基、氨基、羧基、卤素、硝基、(C1-C3)烷氧基或1～5个碳原子的硫代烷氧基取代；
R6和R7各自独立地选自H和
Figure BDA0001505234350000301
Y’是直链和支链(C1-C18)亚烷基基团、直链和支链(C2-C18)亚烯基基团、亚芳基基团或亚杂芳基基团、亚芳基(C1-C18)亚烷基基团、亚芳基(C2-C18)亚烯基基团、亚杂芳基(C1-C18)亚烷基基团或亚杂芳基(C1-C18)亚烯基基团，其中所述亚杂芳基基团是衍生自呋喃基、噻吩基、N-甲基吡咯基、吡啶基、N-甲基咪唑基、
Figure BDA0001505234350000303
唑基、嘧啶基、喹啉基、异喹啉基、N-甲基咔唑基、氨基香豆素基或吩嗪基的二价基团，且其中所述Y’可以任选地被1～5个碳原子的二烷基氨基、1～5个碳原子的烷氧基、羟基、-SH或1～5个碳原子的烷硫基取代；
Q选自–C(＝O)NHN＝、-C(＝S)NHN＝、-NHC(＝O)NHN＝、-NHC(＝S)NHN＝和–O-N＝；
Z1是H或者直链或支链C1-C5烷基；
Ar是任选地被1、2或3个基团取代的1,2-、1,3-或1,4-亚苯基，所述基团独立地选自直链或支链C1-C6烷基、-OR14、-SR14、卤素、硝基、-COOR14、-C(＝O)NHR14、-O(CH2)nCOOR14、-S(CH2)nCOOR14、-O(CH2)nC(＝O)NHR14和–S(CH2)nC(＝O)NHR14，或Ar是任选地被1、2、3或4个基团取代的1,2-、1,3-、1,4-、1,5-、1,6-、1,7-、1,8-、2,3-、2,6-或2,7-亚萘基，所述基团独立地选自直链或支链C1-C6烷基、-OR14、-SR14、卤素、硝基、-COOR14、-C(＝O)NHR14、-O(CH2)nCOOR14、-S(CH2)nCOOR14、-O(CH2)nC(＝O)NHR14和–S(CH2)nC(＝O)NHR14；
其中R14各自独立地选自(C1-C5)烷基，且自R14各独立地任选地被1或2个选自–OH、-(C1-C4)烷基和–S(C1-C4)烷基的基团取代；
n各自是独立地选自0、1、2、3、4和5的整数；
W选自–O-、-S-、-C(＝O)NH-、-NHC(＝O)-和-NR15-，其中R15是(C1-C5)烷基，且R15任选地被1或2个选自–OH、-(C1-C4)烷基和–S(C1-C4)烷基的基团取代；
Y是直链或支链(C1-C6)亚烷基基团或者直链或支链(C2-C6)亚烯基基团；且
Z选自由如下基团组成的组
Figure BDA0001505234350000311
该方法包括使式XI的连接体中间体
Figure BDA0001505234350000312
与甲基三硫化物化合物CH3-S-S-S-J在碳二亚胺的存在下反应；由此合成式X的加利车霉素衍生物。
在这种在碳二亚胺的存在下合成式VI或式X的加利车霉素衍生物的方法的一个实施方案中，R6和R7之一是氢，且R6和R7的另一个是
Figure BDA0001505234350000321
在本发明合成式VI或式X的加利车霉素衍生物的方法的另一个实施方案中，所述甲基三硫化物在所述与式V的连接体中间体(或其可以是式XI的连接体中间体)的反应中具有大于约3g/L反应混合物的起始浓度。在另一个实施方案中，所述甲基三硫化物在所述与式V的连接体中间体(或其可以是式XI的连接体中间体)的反应中具有约10g/L至110g/L反应混合物之间的起始浓度。
在这种合成式VI或式X的加利车霉素衍生物的方法的另一个实施方案中，所述碳二亚胺是1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺。本发明合成式VI或式X的加利车霉素衍生物的该方法中的碳二亚胺可以是包含碳二亚胺部分的任意分子，且这类分子是本领域中已知的。可以用于本发明中的碳二亚胺类的实例包括，但不限于1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺(EDC)；N,N’-二环己基碳二亚胺(DCC)；N,N’-二异丙基碳二亚胺(DIC)；N-环己基-N’-(2-吗啉代乙基)碳二亚胺；N-环己基-N’-[2-(4-甲基吗啉-4-
Figure BDA0001505234350000322
-4-基)乙基]碳二亚胺甲苯磺酸盐；N-环己基-N’-[4-(二乙基甲基铵基)环己基]碳二亚胺甲苯磺酸盐；N,N’-双(2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基)甲基]碳二亚胺；以及N-苄基-N’-异丙基碳二亚胺。适用于本发明方法中的另外的碳二亚胺类可以由本领域普通技术人员确定。
本发明还提供用于纯化式VI的加利车霉素衍生物或式X的加利车霉素衍生物的方法，其中式VI和式X如上文所定义，该方法包括使式VI的加利车霉素衍生物或式X的加利车霉素衍生物经受反相高效液相色谱法(RP-HPLC)纯化方案。反相纯化方案可以用于纯化式VI或式X的加利车霉素衍生物分子是令人意外的，因为这些化合物具有两个遇水不稳定的基团，即腙基和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)酯基，每个基团其水解具有不同的pH依赖性。另外，使用反相纯化相对于现有技术中所述的正相色谱法纯化(参见，美国专利No.8,273,862)是有利的，因为正相色谱法法使用毒性的对环境不友好的溶剂，例如二氯甲烷和甲醇。反相高效液相色谱法(RP-HPLC)方案确保使用结合反应混合物成分的C-18固定相。然后洗脱这些成分并且使用由对于所存在的两个可水解基团具有最佳稳定性的约4至约6的pH的含水和有机流动相组成的梯度分离。在一个实施方案中，该梯度包含至少两相。在另一个实施方案中，该梯度包含1、2、3、4或5相。在另一个实施方案中，该梯度包含2或3相。在另一个实施方案中，该梯度包含2相。每个相可以是有机的、水性的或其组合。该梯度经过一定时间从水性特性移动至增加有机特性。本领域中已知的水相可以用于本发明中。可以用于本发明中的水相的实例包括，但不限于乙酸钠(NaOAc)、琥珀酸钠、N-甲基吗啉、柠檬酸钠和2-(N-吗啉代)乙磺酸。本领域中已知的有机相可以用于本发明中。可以用于本发明中的有机相的实例包括，但不限于乙腈、异丙醇、丙酮、二甲氧基乙烷和N-甲基-2-吡咯烷酮。正如所述的，所述相的任意一个可以包含水性和有机特性的混合物，例如NaOAc和乙腈的混合物。例如，由pH5的55％20mM乙酸钠和45％乙腈组成的流动相是可以用于本发明的RP-HPLC纯化的水/有机流动相。作为另一个实例，可用于本发明的梯度的实例是包含第一个流动相，接着第二个流动相的梯度，所述第一个流动相由pH 5的55％20mM乙酸钠和45％乙腈组成，所述第二个流动相由乙腈组成。
在包含RP-HPLC方案的纯化式VI或式X的加利车霉素衍生物的方法的一个实施方案中，式VI或式X的加利车霉素衍生物包含选自如下的Z：
Figure BDA0001505234350000341
在包含RP-HPLC方案的纯化式VI或式X的加利车霉素衍生物的方法的另一个实施方案中，式VI或式X的加利车霉素衍生物包含选自如下的Z：
Figure BDA0001505234350000342
在包含RP-HPLC方案的纯化式VI或式X的加利车霉素衍生物的方法的另一个实施方案中，式VI或式X的加利车霉素衍生物包含Z，其为：
Figure BDA0001505234350000343
在反相纯化后，可以如本领域中所述，例如通过浓缩和分配分离得到的纯化的加利车霉素衍生物；或可以通过使用固相萃取(SPE)方案分离纯化的加利车霉素衍生物。将固相萃取方案鉴定为用于从RP-HPLC级分中进行产物分离的二氯甲烷分配的有效替代者。在固相萃取中，产物通过载入弱溶剂而与反相树脂结合，洗涤以除去缓冲剂盐(从RP-HPLC纯化中剩余)，然后用有机溶剂例如乙腈洗脱，得到不含或基本上不含盐的浓缩产物溶液。
因此，本申请中所述用于合成式VI或式X的加利车霉素衍生物的本发明的任意方法的另外的实施方案还包括通过进行反相纯化方案纯化所合成的式VI或式X的加利车霉素衍生物。在本发明的另外的实施方案中，随后使得自反相纯化方案的式VI或式X的加利车霉素衍生物经受固相萃取方案。
具体实施方式
本发明用于合成式V的连接体中间体的方法描述在如下反应方案I-IV中。在方案I-IV中的化学式中，R8、R9、R10、R12、Q、Ar、W、Y、Z1和Z如上文所定义。
方案I
Figure BDA0001505234350000351
就方案I而言，使(4-烷氧基苯基)甲硫醇1，其中R12如本申请中所述，与千里光酸甲酯2反应，得到羧酸中间体化合物3。然后向中间体3中加入适合的有机溶剂，例如四氢呋喃和如本申请中所述的式IX的唑系活化剂，例如羰基二咪唑(CDI)。得到中间体3.5。在该反应之后使3.5与肼结合。肼源可以是如WO 2008/147765中所述的无水肼；然而，优选肼源是含水肼，例如一水合肼。该反应得到中间体化合物4。化合物对甲氧基苄基硫醚酰肼(其为其中R12是甲基且R10各自是氢的中间体化合物4)描述在WO 2008/147765中，通过引用将该文献的全部内容并入本申请。
方案II
Figure BDA0001505234350000361
在方案II中，使中间体4与化合物5(其中Z1如本申请中所述)，例如4-(4-酰基-苯氧基)丁酸，在惰性(换句话说，非反应性)溶剂中、任选地使用酸性催化剂反应，得到中间体6。可以用于该反应中的惰性溶剂的实例包括，但不限于醇类(例如甲醇)、醚类和酯类，例如乙酸乙酯。本领域普通技术人员可以确定用于该反应的适合惰性溶剂。酸性催化剂也可以由本领域普通技术人员确定；酸性催化剂的实例包括，但不限于乙酸。
方案III
Figure BDA0001505234350000362
在方案III中，使中间体化合物6脱保护，形成化合物7。在该反应中，向化合物6中加入甲氧基苯和任选在加热条件下的强酸，例如在加热条件下的三氟乙酸，得到中间体化合物7。可以使用其它强酸，例如硫酸替代三氟乙酸。
方案IV
Figure BDA0001505234350000371
在方案IV中，将中间体7转化成化合物8，其为本申请中所述的式V的连接体中间体的实施方案。可以如本领域中所述，例如美国专利8,273,862(通过引用将该文献的全部内容并入本申请)中所述，将中间体7转化成连接体中间体，例如8。然而，优选地，如方案IV中所述，使中间体7与叔胺碱例如三乙胺(TEA)和三甲基乙酰氯(PivCl)在惰性溶剂例如四氢呋喃的存在下反应。随后，引入式ZH的化合物，例如N-羟基琥珀酰亚胺，得到连接体中间体8。
在合成式V的连接体中间体(例如化合物8)后，然后使用来自反应方案IV的连接体中间体和本领域已知的方法，例如美国专利No.8,273,862中所述的方法，合成式VI的加利车霉素衍生物。例如，可以首先使式V的连接体中间体与碱金属碳酸盐(包括，但不限于碳酸钠)反应，通过在温和回流下加热，形成在乙腈中的连接体中间体的钠盐。再使所述连接体中间体的钠盐与甲基三硫化物CH3-S-S-S-J在约-15℃下在惰性有机溶剂(优选乙腈)中反应，得到式VI的加利车霉素衍生物。优选该反应在乙腈中在约0℃下进行。任选地，有机碱可以替代所述碱金属碳酸盐，其优选包括在乙腈中在约0℃下的三乙胺。
或者，可以通过使用本申请中所述包含碳二亚胺的方法，通过与式CH3-S-S-S-J的分子反应，由式V的连接体中间体合成式VI的加利车霉素衍生物。
还可以使用本领域中所述的技术，例如美国专利No.5,053,394和美国专利No.5,770,701中所述的方法，使式VI的加利车霉素衍生物与生物大分子例如单克隆抗体缀合，形成抗体-药物缀合物，通过引用将上述两篇文献的全部内容并入本申请。
提供下列实施例以举例说明本发明的一些实施方案，但不应将其解释为限制本发明的范围。本领域技术人员容易理解，可以使用下列实施例的特定条件的已知变化形式。
实施例1
3-(4-甲氧基苄硫基)-3-甲基丁酸
Figure BDA0001505234350000381
在20-25℃，将85g的1和255mL的2-甲基四氢呋喃加到反应器中。向反应器中加入125.05g的2，通过使氮气气流经过搅拌的溶液起泡15-20分钟给反应器脱气。向反应器中加入氟化四丁基铵(1M的THF溶液,0.05当量,36.1mL)，将该反应在20-30℃维持2小时。
加入二水合氯化钙(0.35当量,28.060g)在255mL水中的溶液。搅拌20分钟后，除去下面的水相。向上面的有机相中加入252mL甲醇和3当量的NaOH在252mL水中的溶液。将该反应混合物搅拌直到观察到中间体酯(3)完全耗尽为止。
将该反应冷却至15℃，加入2-甲基四氢呋喃(252mL)，然后加入252mL水。缓慢地加入浓HCl(3.1当量,184mL)，维持该反应在15-30℃的范围内。除去下面的水相。用1M HCl(252mL)洗涤有机层，加入庚烷(1940mL)。蒸馏该溶液以便除去2-甲基四氢呋喃。将得到的淤浆搅拌1小时，然后过滤，干燥。浓缩母液，得到第二批固体。
标题化合物酸4的总收率为162.59g(88.5％)。1H NMR(CDCl3)：δ(ppm)1.5(s,6H),2.3(s,2H),3.6(m,5H),6.7(d,2H),7.6(d,2H)。
实施例2
3-(4-甲氧基苄硫基)-3-甲基丁酰肼
Figure BDA0001505234350000391
将酸4(81.67g,321mmol)加到375mL THF(四氢呋喃)中。分3部分装入CDI(1.05eq.,54.7g)，将该反应在20℃搅拌2.5小时。在单独的反应器中，制备一水合肼(2.5当量,40.19g)在200mL THF中的溶液。将中间体5的溶液加到水合肼溶液中，保持内部温度在20℃。添加完成后，将该反应搅拌18小时，然后浓缩至100mL。加入850mL EtOAc(乙酸乙酯)，将该溶液用500mL水洗涤3次、然后用200mL盐水洗涤。用Na2SO4干燥有机层，通过硅藻土过滤，用旋转蒸发器浓缩，得到白色淤浆。加入300mL庚烷，用旋转蒸发器除去200mL。再加入200mL庚烷，汽提得到浓稠白色淤浆。过滤该混合物，用庚烷洗涤，干燥。由4得到83.15g(96.5％)标题化合物6。MS 269(M+1),121,120。
实施例3
4-(4-(1-(2-(3-(4-甲氧基苄硫基)-3-甲基丁酰基)亚肼基)-乙基)苯氧基)丁酸
Figure BDA0001505234350000401
将68g的6和57.43g的7加到680mL甲醇(MeOH)中。加入68mL乙酸(HOAc)，将该混合物在45℃加热3小时，冷却至20℃，并保持16小时。过滤该淤浆，用甲醇洗涤，干燥。得到112.60g标题化合物8，为E和Z异构体的混合物。1H NMR(DMSO-d6)：δ(ppm)1.5(m,6H),2.0(m,2H),2.2(m,3H),2.4(m,2H),2.7(s,1.1H),3.0(s,0.9H),3.7(m,3H),3.8(m,2H),4.0(m,2H),6.8(m 2H),6.9(m,2H),7.3(m,2H),7.7(m,2H),10.2&10.3(s,1H),12.1(s,1H)。LC-MSm/z 473[M+H]+。
实施例4
4-(4-(1-(2-(3-巯基-3-甲基丁酰基)亚肼基)乙基)-苯氧基)丁酸
Figure BDA0001505234350000402
在20-25℃，向反应器中装入290.5g(614.7mmol)的8和1162mL茴香醚。加入三氟乙酸(1162mL)，历时2分钟，将该反应加热至65-70℃，持续2.5小时。将该反应冷却至40℃。真空蒸馏TFA(三氟乙酸)，并代之以2-甲基四氢呋喃(2905mL)。持续蒸馏直到观察到浓稠淤浆(该淤浆的最终体积约为2L)。将该淤浆冷却至15℃，过滤。将粗产物在甲醇(1836.6mL)中再制成淤浆，加热至55℃，然后冷却至20℃过夜。过滤该淤浆，用甲醇洗涤，干燥。由8得到171.80g(93.54％)标题化合物9，为E和Z异构体的混合物。1H NMR(DMSO-d6)：δ(ppm)1.5(m,6H),2.0(m,2H),2.2(m,3H),2.4(m,2H),2.7(s,1.1H),3.0(s,0.9H),3.3(s 1H),4.0(m,2H),6.9(m,2H),7.7(m,2H),10.2&10.3(s,1H),12.1(s,1H)。
实施例5
4-(4-(1-(2-(3-巯基-3-甲基丁酰基)-亚肼基)乙基)苯氧基)-丁酸2,5-二氧代吡 咯烷-1-基酯
Figure BDA0001505234350000411
反应器设置：2-L夹套反应器，Tr探头，氮气入口。
将60g(170.3mmol)加到2400mL THF中，冷却至10℃。加入三乙胺(2当量,34.46g)，然后缓慢地加入三甲基乙酰氯(1.1当量,22.81g)，历时10分钟，维持温度在10-20℃的范围内。将该混合物在10-20℃搅拌30分钟。向反应器中加入N-羟基琥珀酰亚胺(1.1当量,21.99g)，在20-25℃搅拌30分钟。
过滤淤浆以除去TEA-HCl盐，真空浓缩至约800mL体积。缓慢地加入己烷(780mL)以使产物结晶。将该淤浆搅拌1.5小时，然后过滤，用庚烷洗涤，干燥。由9得到70.4g(92％收率)标题化合物连接体中间体10。
将144g的10添加至2100mL THF中，使粗产物重结晶，并加热至60℃。通过硅藻土过滤该混合物，缓慢地加入2100mL己烷，冷却至20℃，历时1.5小时。过滤该淤浆，用冷THF/己烷(1：1)洗涤，然后用己烷洗涤，干燥。由9得到126g(87.5％回收率)标题化合物连接体中间体10。1H NMR(DMSO-d6)：δ(ppm)1.5(m,6H),2.1(m,2H),2.2(m,3H),2.7(s,1.1H),2.9(M,5H)3.0(s,1.9H),3.3(s1H),4.3(m,2H),7.0(m,2H),7.5(m,2H),10.2&10.3(s,1H)。
实施例6
丁酸,3-[[(2E)-2-[(1R,4Z,8S)-8-[[2-O-[4-(乙酰基乙基氨基)-2,4-双脱氧-3- O-甲基-a-L-苏型-吡喃戊糖基]-4,6-双脱氧-4-[[[2,6-双脱氧-4-S-[4-[(6-脱氧-3-O-甲 基-a-L-吡喃甘露糖基)氧基]-3-碘-5,6-二甲氧基-2-甲基苯甲酰基]-4-硫代-β-D-吡喃核 己糖基]氧基]氨基]-β-D-吡喃葡萄糖基]氧基]-1-羟基-10-[(甲氧基羰基)氨基]-11-氧代 双环[7.3.1]十三-4,9-二烯-2,6-二炔-13-亚基]乙基]二硫代]-3-甲基-,2-[(1E)-1-[4- [4-[(2,5-二氧代-1-吡咯烷基)氧基]-4-氧代丁氧基]-苯基]亚乙基]酰肼的制备
在室温，向N-乙酰基-加利车霉素(50mg,0.035mmol)在乙腈(1.0mL)中的溶液中一次加入连接体中间体丁酸,3-巯基-3-甲基-,2-[(E)-1-[4-[4-[(2,5-二氧代-1-吡咯烷基)-氧基]-4-氧代丁氧基]苯基]亚乙基]酰肼(31.9mg,0.07mmol)，然后加入1,(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(6.7mg,0.035mmol)，然后加入三乙胺(5.3mg,7.3μL,0.053mmol)。在室温，将该反应混合物(淤浆)搅拌1小时，此时，它变成黄色溶液。根据相对于衍生物标准品的面积百分比确定了收率(60％收率)。
质谱：
(M+Na)＝1801.4578
1H NMR：
1H NMR(CDCl3+5％CD3OD,400MHz)：8.69(s,1H,18C-NH-N＝),7.75(d,J＝8.7Hz,2H,22),6.95(d,J＝8.7Hz,2H,23),6.38(br t,J＝7Hz,1H,14),6.23(d,J＝1.5Hz,1H,8),5.90(d,J＝9.5Hz,1H,4),5.80(dd,J＝9.5,1.5Hz,1H,5),5.72(d,J＝1.5Hz,1H,1D),5.63(brd,J＝2.2Hz,1H,1E),5.03(dd,J＝11.5,1.6Hz,1H,1B),4.70(m,1H,5E),4.61(d,J＝7.8Hz,1H,1A),4.6(m,1H,3E),4.49(m,1H,2D),4.31(m,1H,3B),4.20(m,1H,5D),4.10(m,2H,25),4.07(m,1H,5B),4.03(m,1H,3A),3.91(m,1H,15),3.89(s,3H,2C-OCH3),3.84(s,3H,3C-OCH3),3.8(m,1H,3D),3.76(m,1H,15),3.75(m,1H,4B),3.65(m,1H,5A),3.63(bs,3H,10-NHCOOCH3),3.62(m,1H,2A),3.6(m,1H,4D),3.57(s,3H,3D-OCH3),3.4(m,1H,5E),3.37(s,3H,3E-OCH3),3.30(m,2H,4E-N-CH2CH3),3.12(d,J＝17.6Hz,1H,12),3.0(m,1H,4E),2.85(m,2H,27),2.85(bs,4,30),2.72(d,J＝17.6Hz,1H,12),2.5(m,2H,17),2.4(m,1H,2E平伏),2.33(m,1H,4A),2.25(m,2H,26),2.18(s,3H,19),2.08(s,3H,4E-N-COCH3),2.0(m,1H,2B),1.8(m,1H,2B),1.50(s,3H,16a),1.44(s,3H,16b),1.42(d,J＝6.2Hz,3H,6B),1.4(m,1H,2E轴),1.31(d,J＝6.1Hz,3H,6A),1.31(d,J＝6.1Hz,3H,6D),1.19(t,J＝7.2Hz,3H,4E-N-CH2CH3)。
实施例7
丁酸,3-[[(2E)-2-[(1R,4Z,8S)-8-[[2-O-[4-(乙酰基乙基氨基)-2,4-双脱氧-3- O-甲基-a-L-苏型-吡喃戊糖基]-4,6-双脱氧-4-[[[2,6-双脱氧-4-S-[4-[(6-脱氧-3-O-甲 基-a-L-吡喃甘露糖基)氧基]-3-碘-5,6-二甲氧基-2-甲基苯甲酰基]-4-硫代-β-D-吡喃核 己糖基]氧基]氨基]-β-D-吡喃葡萄糖基]氧基]-1-羟基-10-[(甲氧基羰基)氨基]-11-氧代 双环[7.3.1]十三-4,9-二烯-2,6-二炔-13-亚基]乙基]二硫代]-3-甲基-,2-[(1E)-1-[4- [4-[(2,5-二氧代-1-吡咯烷基)氧基]-4-氧代丁氧基]-苯基]亚乙基]酰肼的制备，不使用 EDC
作为与实施例6中举例说明的本发明的方法的比较，进行了如下反应：在室温，向N-乙酰基-加利车霉素(50mg,0.035mmol)在乙腈(1.0mL)中的溶液中一次加入连接体中间体丁酸,3-巯基-3-甲基-,2-[(E)-1-[4-[4-[(2,5-二氧代-1-吡咯烷基)氧基]-4-氧代丁氧基]苯基]-亚乙基]-酰肼(31.9mg,0.07mmol)，然后加入三乙胺(5.3mg,7.3uL,0.053mmol)。在室温，将该反应混合物(淤浆)搅拌1小时，此时，它变成黄色溶液。根据相对于衍生物标准品的面积百分比确定了收率(35％收率)。
质谱：
(M+Na)＝1801.4578
1H NMR：
1H NMR(CDCl3+5％CD3OD,400MHz)：8.69(s,1H,18C-NH-N＝),7.75(d,J＝8.7Hz,2H,22),6.95(d,J＝8.7Hz,2H,23),6.38(br t,J＝7Hz,1H,14),6.23(d,J＝1.5Hz,1H,8),5.90(d,J＝9.5Hz,1H,4),5.80(dd,J＝9.5,1.5Hz,1H,5),5.72(d,J＝1.5Hz,1H,1D),5.63(brd,J＝2.2Hz,1H,1E),5.03(dd,J＝11.5,1.6Hz,1H,1B),4.70(m,1H,5E),4.61(d,J＝7.8Hz,1H,1A),4.6(m,1H,3E),4.49(m,1H,2D),4.31(m,1H,3B),4.20(m,1H,5D),4.10(m,2H,25),4.07(m,1H,5B),4.03(m,1H,3A),3.91(m,1H,15),3.89(s,3H,2C-OCH3),3.84(s,3H,3C-OCH3),3.8(m,1H,3D),3.76(m,1H,15),3.75(m,1H,4B),3.65(m,1H,5A),3.63(bs,3H,10-NHCOOCH3),3.62(m,1H,2A),3.6(m,1H,4D),3.57(s,3H,3D-OCH3),3.4(m,1H,5E),3.37(s,3H,3E-OCH3),3.30(m,2H,4E-N-CH2CH3),3.12(d,J＝17.6Hz,1H,12),3.0(m,1H,4E),2.85(m,2H,27),2.85(bs,4,30),2.72(d,J＝17.6Hz,1H,12),2.5(m,2H,17),2.4(m,1H,2E平伏),2.33(m,1H,4A),2.25(m,2H,26),2.18(s,3H,19),2.08(s,3H,4E-N-COCH3),2.0(m,1H,2B),1.8(m,1H,2B),1.50(s,3H,16a),1.44(s,3H,16b),1.42(d,J＝6.2Hz,3H,6B),1.4(m,1H,2E轴),1.31(d,J＝6.1Hz,3H,6A),1.31(d,J＝6.1Hz,3H,6D),1.19(t,J＝7.2Hz,3H,4E-N-CH2CH3)
实施例8
丁酸,3-[[(2E)-2-[(1R,4Z,8S)-8-[[2-O-[4-(乙酰基乙基氨基)-2,4-双脱氧-3- O-甲基-a-L-苏型-吡喃戊糖基]-4,6-双脱氧-4-[[[2,6-双脱氧-4-S-[4-[(6-脱氧-3-O-甲 基-a-L-吡喃甘露糖基)氧基]-3-碘-5,6-二甲氧基-2-甲基苯甲酰基]-4-硫代-β-D-吡喃核 己糖基]氧基]氨基]-β-D-吡喃葡萄糖基]氧基]-1-羟基-10-[(甲氧基羰基)氨基]-11-氧代 双环[7.3.1]十三-4,9-二烯-2,6-二炔-13-亚基]乙基]二硫代]-3-甲基-,2-[(1E)-1-[4- [4-[(2,5-二氧代-1-吡咯烷基)氧基]-4-氧代丁氧基]-苯基]亚乙基]酰肼的大规模制备， 然后纯化
在4℃，向N-乙酰基-加利车霉素(60.2g,42.7mmol)在乙腈(900mL)中的溶液中一次加入连接体中间体丁酸,3-巯基-3-甲基-,2-[(E)-1-[4-[4-[(2,5-二氧代-1-吡咯烷基)氧基]-4-氧代丁氧基]-苯基]亚乙基]酰肼(38.4g,85.4mmol)，然后加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(8.2g,42.7mmol)。用乙腈(300mL)冲洗包含连接体和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺的瓶子，加到该反应混合物中。然后将三乙胺(6.5g,8.9mL,64.1mmol)加到反应混合物中。将该反应混合物(淤浆)在4℃搅拌1小时，此时它变成黄色溶液。再用乙腈(600mL)和pH 5.0的20mM乙酸钠缓冲液(1200mL)稀释该反应混合物，通过反相HPLC柱，使用流动相A和B的梯度纯化(流动相A：55：45(v/v)20mM NaOAc缓冲液pH 5.0(pH4.5-5.5)：乙腈；流动相B：乙腈)。收集期望纯度的级分，然后进行固相萃取(SPE)。在SPE中，使纯化的级分上柱，然后用水/乙腈混合物洗涤，然后用乙腈洗脱，得到包含产物的浓缩级分。真空浓缩得到的级分，溶于乙酸乙酯，通过添加己烷使其沉淀。将固体过滤，干燥，得到标题化合物，为白色固体，通过HPLC测定纯度为96.9％(45.2g,60％收率)。
质谱：
(M+Na)＝1801.4578
1H NMR：
1H NMR(CDCl3+5％CD3OD,400MHz)：8.69(s,1H,18C-NH-N＝),7.75(d,J＝8.7Hz,2H,22),6.95(d,J＝8.7Hz,2H,23),6.38(br t,J＝7Hz,1H,14),6.23(d,J＝1.5Hz,1H,8),5.90(d,J＝9.5Hz,1H,4),5.80(dd,J＝9.5,1.5Hz,1H,5),5.72(d,J＝1.5Hz,1H,1D),5.63(brd,J＝2.2Hz,1H,1E),5.03(dd,J＝11.5,1.6Hz,1H,1B),4.70(m,1H,5E),4.61(d,J＝7.8Hz,1H,1A),4.6(m,1H,3E),4.49(m,1H,2D),4.31(m,1H,3B),4.20(m,1H,5D),4.10(m,2H,25),4.07(m,1H,5B),4.03(m,1H,3A),3.91(m,1H,15),3.89(s,3H,2C-OCH3),3.84(s,3H,3C-OCH3),3.8(m,1H,3D),3.76(m,1H,15),3.75(m,1H,4B),3.65(m,1H,5A),3.63(bs,3H,10-NHCOOCH3),3.62(m,1H,2A),3.6(m,1H,4D),3.57(s,3H,3D-OCH3),3.4(m,1H,5E),3.37(s,3H,3E-OCH3),3.30(m,2H,4E-N-CH2CH3),3.12(d,J＝17.6Hz,1H,12),3.0(m,1H,4E),2.85(m,2H,27),2.85(bs,4,30),2.72(d,J＝17.6Hz,1H,12),2.5(m,2H,17),2.4(m,1H,2E平伏),2.33(m,1H,4A),2.25(m,2H,26),2.18(s,3H,19),2.08(s,3H,4E-N-COCH3),2.0(m,1H,2B),1.8(m,1H,2B),1.50(s,3H,16a),1.44(s,3H,16b),1.42(d,J＝6.2Hz,3H,6B),1.4(m,1H,2E轴),1.31(d,J＝6.1Hz,3H,6A),1.31(d,J＝6.1Hz,3H,6D),1.19(t,J＝7.2Hz,3H,4E-N-CH2CH3)

Claims (4)

1.制备化合物伊珠单抗奥佐米星的方法，它包括如下步骤：
(a)用强酸处理式I的化合物：
Figure FDA0002789071230000011
形成式IV的化合物：
Figure FDA0002789071230000012
(b)使式IV的化合物与1-羟基吡咯烷-2,5-二酮反应形成式V的化合物：
Figure FDA0002789071230000013
(c)使式V化合物与N-乙酰基-加利车霉素在乙腈中反应，然后与1- (3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺反应，在三乙胺的存在下，形成如下连接体-有效负荷：
Figure FDA0002789071230000014
以及
(d)将所述的连接体-有效负荷与伊珠单抗缀合。
2.制备化合物吉妥珠单抗奥佐米星的方法，它包括如下步骤：
(a)用强酸处理式I的化合物：
Figure FDA0002789071230000021
形成式IV的化合物：
Figure FDA0002789071230000022
(b)使式IV的化合物与1-羟基吡咯烷-2,5-二酮反应形成式V的化合物：
Figure FDA0002789071230000023
(c)使式V化合物与N-乙酰基-加利车霉素在乙腈中反应，然后与1- (3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺反应，在三乙胺的存在下，形成如下连接体-有效负荷：
Figure FDA0002789071230000024
以及
(d)将所述的连接体-有效负荷与吉妥珠单抗缀合。
3.制备化合物伊珠单抗奥佐米星的方法，它包括如下步骤：
(a)使式V的化合物：
Figure FDA0002789071230000031
与N-乙酰基-加利车霉素在乙腈中反应，然后与1- (3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺反应，在三乙胺的存在下，形成如下连接体-有效负荷：
Figure FDA0002789071230000032
以及
(b)将所述的连接体-有效负荷与伊珠单抗缀合。
4.制备化合物吉妥珠单抗奥佐米星的方法，它包括如下步骤：
(a)使式V化合物：
Figure FDA0002789071230000033
与N-乙酰基-加利车霉素在乙腈中反应，然后与1- (3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺反应，在三乙胺的存在下，形成如下连接体-有效负荷：
Figure FDA0002789071230000041
以及
(b)将所述的连接体-有效负荷与吉妥珠单抗缀合。
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Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3086619A1 (en) * 2008-09-10 2016-10-26 Nextnav, LLC Wide area positioning system
DK3066074T3 (da) * 2013-11-04 2020-02-10 Pfizer Mellemprodukter og fremgangsmåder til syntetisering af calicheamicin-derivater

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0313873A1 (en) * 1987-10-30 1989-05-03 American Cyanamid Company Targeted forms of methyltrithio antitumor agents
CN1665532A (zh) * 2002-05-02 2005-09-07 惠氏控股公司 加利车霉素衍生物－载体缀合物
CN101389639A (zh) * 2006-02-21 2009-03-18 惠氏公司 汇集合成卡奇霉素（calicheamicin）衍生物的方法
CN101835494A (zh) * 2007-05-22 2010-09-15 惠氏有限责任公司 制造酰肼的改良方法

Family Cites Families (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US577070A (en) 1897-02-16 Machines
US4970198A (en) 1985-10-17 1990-11-13 American Cyanamid Company Antitumor antibiotics (LL-E33288 complex)
US5053394A (en) 1988-09-21 1991-10-01 American Cyanamid Company Targeted forms of methyltrithio antitumor agents
US5770701A (en) * 1987-10-30 1998-06-23 American Cyanamid Company Process for preparing targeted forms of methyltrithio antitumor agents
IL115770A (en) * 1989-04-14 1999-03-12 American Cyanamid Co Substituted disulfides of formula q-sp-ss-w their preparation and use for inhibiting the growth of tumours and for treating bacterial infections
US5773001A (en) * 1994-06-03 1998-06-30 American Cyanamid Company Conjugates of methyltrithio antitumor agents and intermediates for their synthesis
WO2007014054A2 (en) * 2005-07-22 2007-02-01 Glaxo Group Limted Benzenesulfonamide inhibitor of ccr2 chemokine receptor
US8142287B2 (en) 2005-10-11 2012-03-27 Zeemote Technology Inc. Universal controller for toys and games
JP2007210974A (ja) * 2006-02-13 2007-08-23 Sankyo Co Ltd 置換されたウレア化合物を含有する医薬
EP2114897A2 (en) * 2006-09-12 2009-11-11 Pfizer Products Inc. Benzimidazolone derivatives
DK3066074T3 (da) * 2013-11-04 2020-02-10 Pfizer Mellemprodukter og fremgangsmåder til syntetisering af calicheamicin-derivater
EP3065780A1 (en) * 2013-11-04 2016-09-14 Pfizer Inc. Anti-efna4 antibody-drug conjugates

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0313873A1 (en) * 1987-10-30 1989-05-03 American Cyanamid Company Targeted forms of methyltrithio antitumor agents
CN1665532A (zh) * 2002-05-02 2005-09-07 惠氏控股公司 加利车霉素衍生物－载体缀合物
CN101389639A (zh) * 2006-02-21 2009-03-18 惠氏公司 汇集合成卡奇霉素（calicheamicin）衍生物的方法
CN101835494A (zh) * 2007-05-22 2010-09-15 惠氏有限责任公司 制造酰肼的改良方法

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