CN108037200A - 一种滋肾宁神丸的质量检测方法 - Google Patents
一种滋肾宁神丸的质量检测方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种滋肾宁神丸的质量检测方法,包括薄层色谱定性鉴别和五味子醇甲的含量检测。本发明首次建立了滋肾宁神丸中制何首乌和菟丝子的薄层色谱定性鉴别,并对五味子醇甲进行了含量测定,该检测方法具有较强的专属性、耐用性,其准确性、重现性、稳定性均能达到科研和生产的要求,从而可以有效保证产品质量的稳定性和可控性。
Description
技术领域
本发明属于医药技术领域,具体涉及一种滋肾宁神丸的质量检测方法。
背景技术
滋肾宁神丸由熟地黄、山药、金樱子、酸枣仁(炒)、首乌藤、女贞子、菟丝子(制)、牛大力、茯苓、珍珠母、白芍(炒)、丹参、制何首乌、黄精(制)、五味子、五指毛桃16味中药组成,为复方制剂。其具有滋补肝肾、宁心安神的功效,用于肝肾亏损、头晕耳呜、失眠多梦、怔仲健忘、腰酸遗泄、神经衰弱等症。该品种收载于部颁《药品标准》中药成方制剂第十八册340页,标准号为WS3-B-3503-98,为国家中药保护品种。其质量标准只有性状、显微鉴别、丸剂检查项目以及微生物限度检验项目,但尚无薄层鉴别项和含量测定项,质量标准可控性过低,难以监控产品的内在质量,质量检测方法有待提高。
有学者采用HPLC测定滋肾宁神丸中2,3,4,5-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D葡萄糖苷的含量,但滋肾宁神丸的烘干粉末中二苯乙烯苷保留率比原药材粉末低60.3%,所测样品中二苯乙烯苷的转移率仅为3.2%。二苯乙烯苷为何首乌主要化学成分之一,为多羟基酚类化合物,在高温条件和酸性溶液中不稳定,易氧化,并且,二苯乙烯苷自身不稳定性同时给试验带来难度和不易操作性,对照品溶液、试验样品需要现配现用、避光等操作。另外,分析方法中供试品溶液制备采用超声提取两次,每次30min,滤过,合并滤液后定容,存在提取时间较长、操作繁琐、被测物质易残留在滤纸上等问题。
有学者采用HPLC测定滋肾宁神丸中芍药苷的含量,供试品溶液制备中以稀乙醇为提取溶媒,超声提取后离心,精密吸取上清液定容,该方法存在操作繁琐,耗费时间长的缺点。并没有进行耐用性考察,提示该分析方法只限于特定的条件,测定结果不受影响的承受程度不可知,表明其耐用性不强,不能确保该分析方法的可靠性。
发明内容
为了克服上述现有技术的不足,本发明的目的在于提供一种滋肾宁神丸的质量检测方法,该方法专属性好、耐用性强,稳定性好,能够有效保证产品质量的稳定性和可控性。
本发明是通过以下技术方案实现:
一种滋肾宁神丸的质量检测方法,其特征在于,包括薄层色谱定性鉴别和五味子醇甲的含量检测:
(1)菟丝子的薄层色谱定性鉴别:
取本品8g,研细,加乙醇40-50ml,超声20-40分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加水20ml使溶解,用乙醚萃取1-3次,每次20ml,弃去乙醚液,水液用乙酸乙酯萃取1-3次,每次20ml,合并乙酸乙酯萃取液,蒸干,残渣加乙醇1ml使溶解,作为供试品溶液;取菟丝子对照药材1g,加乙醇40-50ml,超声20-40分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加水20ml使溶解,自“用乙醚萃取1-3次”起,同法制成对照药材溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液1~2μl,分别点于同一聚酰胺薄膜上,以体积比乙酸乙酯-丁酮-甲酸=2:2:1为展开剂,展开,取出,晾干;喷三氯化铝试液,吹干试液,置365nm紫外光灯下检视;供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点;
(2)制何首乌的薄层色谱定性鉴别:
取本品8g,研细,加乙醇40-50ml,超声20-40分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加水20ml使溶解,用乙醚萃取1-3次,每次20ml,合并乙醚萃取液,蒸干,残渣加乙酸乙酯1ml使溶解,作为供试品溶液,水相挥干乙醚,备用;另取大黄素甲醚对照品,加乙酸乙酯制成每1ml含0.5mg的溶液;照薄层色谱法试验,吸取供试品溶液5~10μl、对照品溶液2μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以体积比沸程为60~90℃的石油醚-丙酮-甲酸=8-9:1-2:0.2为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%氢氧化钾甲醇溶液,在日光下检视;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
(3)五味子醇甲的含量测定:
采用高效液相色谱法进行测定,具体方法和步骤如下:
色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以体积比为37-47: 53-63的乙腈-水为流动相;检测波长为250nm,流速为1.0ml/min,柱温25℃,理论板数按五味子醇甲峰计算应不低于5000;
对照品溶液的制备取五味子醇甲对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1ml含5μg的溶液,即得;
供试品溶液的制备取本品,研细,过五号筛,取2g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入50-80%甲醇50ml,称定重量,超声处理30-45分钟,取出,放冷,再称定重量,用 50-80%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得;
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得。
优选的,所述(2)中,以体积比沸程为60~90℃的石油醚-丙酮-甲酸=8.5:1.5:0.2为展开剂。
优选的,所述(3)中,供试品溶液的制备为:取本品,研细,过五号筛,取2g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入80%甲醇50ml,称定重量,超声处理45分钟,取出,放冷,再称定重量,用80%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
优选的,所述(3)中,以体积比为42:58的乙腈-水为流动相。
菟丝子具有补肝益肾,固精止遗的功能,为方中臣药,现代药理学表明其有雌性激素样作用、延缓衰老、抗脑缺血、抗骨质疏松、降血糖和血脂、提高免疫、抗肝损伤等作用。因此,本发明鉴别滋肾宁神丸中菟丝子是合理的。
制何首乌为方中的君药,蒽醌类成分为制何首乌活性成分,具有抗菌、止血、抗氧化、护肝等药理作用,本发明以大黄素甲醚为制何首乌的鉴别成分是科学合理的。
本发明选用稳定性好的五味子醇甲作为指标成分,五味子醇甲为中药五味子的指标成分和活性成分,而五味子为方中的臣药。熟地黄、制何首乌、黄精为方中的君药,但是熟地黄的指标成分毛蕊花糖苷不稳定,易分解,《中药药典》2015年版一部中规定熟地黄的限度为 0.02%,含量低,加上制剂工艺中存在干燥工艺,使得成品中毛蕊花糖苷含量更低,不宜检测。制何首乌含量测定规定二苯乙烯苷、游离蒽醌两个指标成分。二苯乙烯苷为大极性化合物,在检测中较快出峰,出峰时间短,经调整色谱条件也没有达到基线分离,不宜检测。游离蒽醌是以大黄素和大黄素甲醚的总量计,不得小于0.05%,由于大黄素甲醚的含量低,色谱峰小,因此没有选用上述指标成分。黄精含量测定中含黄精多糖以无水葡萄糖计,该方法缺乏专属性。因此,本发明选择五味子醇甲作为指标成分是合理的,且五味子醇甲稳定性好,减少了系统误差的引入,提高测定结果的准确性和重现性,保证滋肾宁神丸质量的稳定性和质量可控性。
本发明与现有技术相比,具有如下有益效果:
本发明首次建立了滋肾宁神丸中制何首乌和菟丝子的薄层色谱定性鉴别,并对五味子醇甲进行了含量测定,该检测方法具有较强的专属性、耐用性,其准确性、重现性、稳定性均能达到科研和生产的要求,能够有效保证产品质量的稳定性和可控性。
附图说明
图1为菟丝子的薄层鉴别色谱图;其中①为缺菟丝子的阴性样品,②-④为滋肾宁神丸样品,⑤为菟丝子对照药材;
图2为13批供试品中菟丝子的薄层鉴别色谱图;其中①为缺菟丝子的阴性样品,②-为 13批滋肾宁神丸样品,为菟丝子对照药材;
图3为制何首乌的薄层鉴别色谱图;其中①为缺制何首乌、首乌藤双阴性样品,②为缺制何首乌阴性样品;③-⑤为滋肾宁神丸样品,⑥为大黄素甲醚对照品;
图4为13批供试品中制何首乌的薄层鉴别色谱图;其中①为缺制何首乌、首乌藤双阴性样品,②-为13批滋肾宁神丸样品,为大黄素甲醚对照品;
图5为五味子醇甲对照品标准曲线图;
图6为五味子醇甲对照品HPLC图;
图7为缺五味子阴性对照液HPLC图;
图8为滋肾宁神丸样品HPLC图。
具体实施方式
下面通过具体实施方式来进一步说明本发明,以下实施例为本发明具体的实施方式,但本发明的实施方式并不受下述实施例的限制。
实施例1:
一种滋肾宁神丸的质量检测方法,其特征在于,包括薄层色谱定性鉴别和五味子醇甲的含量检测:
(1)菟丝子的薄层色谱定性鉴别:
取本品8g,研细,加乙醇50ml,超声30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加水20ml使溶解,用乙醚萃取3次,每次20ml,弃去乙醚液,水液用乙酸乙酯萃取3次,每次20ml,合并乙酸乙酯萃取液,蒸干,残渣加乙醇1ml使溶解,作为供试品溶液;取菟丝子对照药材1g,加乙醇50ml,超声30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加水20ml使溶解,自“用乙醚萃取3次”起,同法制成对照药材溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液1~2μl,分别点于同一聚酰胺薄膜上,以体积比乙酸乙酯-丁酮-甲酸=2:2:1为展开剂,展开,取出,晾干;喷三氯化铝试液,吹干试液,置365nm紫外光灯下检视;供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。
方法学验证:
1、专属性考察
供试品色谱中,在与菟丝子对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。薄层图中主斑点清晰易辩,分离度好,而缺菟丝子阴性样品色谱中,在相应的位置上无干扰。说明该方法对菟丝子的鉴别具有专属性,结果见图1。
2、耐用性考察
2.1考察展开温度对色谱行为的影响
考察不同温度10℃、23℃、30℃、35℃对薄层图谱中主斑点分离效果的影响,结果显示主斑点斑点Rf值约0.5,没有随温度的升高而发生显著变化,说明该方法对展开温度的变动具有耐用性。但在低温展开时,主斑点与相邻斑点的分离效果更佳。因此,正文中不对展开温度作出特别规定。
2.2考察相对湿度对色谱行为的影响
将各供试品溶液1μl点于聚酰胺薄膜上,在相对湿度为18%、42%、65%、88%条件下预平衡30min,展开,结果显示不同相对湿度对主斑点影响不大,说明该方法对展开相对湿度的变动具有耐用性。因此,正文中不对展开相对湿度作出特别规定。
2.3考察预饱和时间对色谱行为的影响
比较不同预饱和时间0min、15min、30min对薄层色谱是否产生显著影响,结果显示薄层图中的主斑点分离情况良好,表明该方法对不同的预饱和时间具有耐用性。因此,正文中不对预饱和时间作特别规定。
2.4考察不同点样量对色谱行为的影响
考察不同点样量1μl、2μl、3μl对薄层色谱是否产生显著影响,结果显示在以上3种点样量的供试品色谱中,主斑点均能有效分离。当点样量为1μl或2μl时,薄层色谱图效果较佳,主斑点清晰易辨。3μl点样量时,主斑点清晰,在供试品溶液中与主斑点相邻的黄色斑点拖尾,造成背景干扰。因此,正文中确定点样量为1~2μl。
2.5考察不同展开剂对色谱行为的影响
考察体积比为丙酮-甲醇-水-甲酸=1.5:1:1:0.4的展开系统,待测化合物斑点Rf值约0.4,相邻斑点对待测化合物斑点造成干扰,分离度达不到要求。考察体积比为甲醇-水-甲酸=7:3:2 的展开系统,待测化合物斑点Rf值约0.3,斑点稍拖尾,相邻斑点与待测化合物斑点的分离度达不到要求,有干扰。考察体积比为甲醇-冰醋酸-水=5:1:4的展开系统,待测化合物斑点 Rf值约0.2,且斑点严重拖尾,相邻斑点与待测化合物斑点的分离度达不到要求。考察体积比为氯仿-甲醇-甲酸=8.8:1.2:1的展开系统,待测化合物斑点Rf值约0.2,相邻斑点与待测化合物斑点的分离度基本达到要求,但图谱背景颜色深,对待测化合物斑点造成一定程度的干扰。考察体积比为乙酸乙酯-丁酮-甲酸=2:2:1的展开系统,待测化合物斑点Rf值约0.5,供试品色谱中,在与菟丝子对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,薄层图中主斑点清晰易辩,分离度好,相邻斑点无干扰。故选用体积比为乙酸乙酯-丁酮-甲酸=2:2:1的展开系统。 3、13批供试品中菟丝子的薄层色谱定性鉴别
分别取13批不同生产时期的滋肾宁神丸,制备供试品溶液并进行检验,结果见图2。13 批供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。
综上可见,本发明的菟丝子的薄层色谱定性鉴别中阴性对照在相应的位置上无干扰,表明方法专属性强;色谱图中主斑点Rf值适中,约0.5,与相邻斑点具有很好的分离;同时,考察了不同温度、不同相对湿度、不同预饱和时间、不同点样量、不同展开剂五种因素对菟丝子对照药材色谱行为均无显著性影响,提示该方法具有耐用性,确保方法的可靠性,适于推广应用。
(2)制何首乌的薄层色谱定性鉴别:
取本品8g,研细,加乙醇50ml,超声30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加水20ml使溶解,用乙醚萃取3次,每次20ml,合并乙醚萃取液,蒸干,残渣加乙酸乙酯1ml使溶解,作为供试品溶液,水相挥干乙醚,备用;另取大黄素甲醚对照品,加乙酸乙酯制成每1ml含0.5mg的溶液;照薄层色谱法试验,吸取供试品溶液5~10μl、对照品溶液2μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以体积比沸程为60~90℃的石油醚-丙酮-甲酸=8.5∶1.5:0.2为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%氢氧化钾甲醇溶液,在日光下检视;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。
方法学验证:
1、专属性考察
供试品色谱中,在与大黄素甲醚对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。而缺制何首乌、首乌藤双阴性样品色谱中,在相应的位置上无干扰。说明该方法对制何首乌的鉴别具有专属性。结果见图3。
2、耐用性考察
2.1不同厂家薄层板的研究
分别考察手铺板(100×200mm,厚度0.25mm,见图2)、预制板(青岛谱科分离材料有限公司,20161022,100×200mm,厚度0.20~0.25mm,见图3)和Merck板(厚度0.25mm,见图4),三种薄层层析板对色谱行为的影响。预制板Rf值约0.8,比自制板、Merck板的Rf值大,但以上三种类型的薄层板均能获得良好的分离效果,说明该方法对薄层板类型的变动具有耐用性。
2.2考察展开温度对色谱行为的影响
考察不同温度8℃、21℃、28℃、39℃对图谱中主斑点分离效果的影响。结果显示大黄素甲醚对照品斑点Rf值随着温度增加而略微变大,但没有产生显著的影响,说明该方法对展开温度的变动具有耐用性。因此,正文中不对展开温度作出特别规定。
2.3考察相对湿度对色谱行为的影响
将各供试品溶液10μl点于硅胶G薄层板,在相对湿度为18%、42%、65%、88%条件下预平衡30min,展开。结果显示不同相对湿度对大黄素甲醚斑点影响不大,说明该方法对展开相对湿度的变动具有耐用性。因此,正文中不对展开相对湿度作出特别规定。
2.4考察预饱和时间对色谱行为的影响
比较不同预饱和时间0min、15min、30min对薄层色谱是否产生显著影响。结果显示薄层图中的大黄素甲醚斑点分离情况良好,表明该方法对不同的预饱和时间具有耐用性。因此,正文中不对预饱和时间作特别规定。
2.5考察不同点样量对色谱行为的影响
考察不同点样量3μl、5μl、10μl对薄层色谱是否产生显著影响。在以上3种点样量的供试品色谱中,大黄素甲醚斑点均能有效分离。3μl点样量时,由于量少的缘故大黄素甲醚斑点略显模糊,但可以辨认。当点样量为5μl或10μl时,薄层色谱图效果较佳,大黄素甲醚斑点清晰易辨。考虑到不同批次产品间的含量差异,正文中确定点样量为5~10μl。
2.6考察不同展开剂对色谱行为的影响
考察体积比为沸程为60~90℃的石油醚-乙酸乙酯-甲醇-甲酸=12:1:1:0.4的展开系统,结果显示大黄素甲醚斑点Rf值约0.8,与相邻斑点分离良好,但存在边缘效应。考察体积比为沸程为60~90℃的石油醚-正乙烷-甲酸乙酯-甲酸=1:3:1.5:2d的展开系统,结果显示大黄素甲醚斑点Rf值约0.8,与相邻斑点分离良好,同样存在边缘效应。考察体积比为沸程为60~90℃的石油醚-丙酮-甲酸=8-9:1-2:0.2的展开系统,结果显示大黄素甲醚斑点Rf值约0.6,与相邻斑点分离良好,斑点清晰可辨,故选用该展开系统,优选体积比沸程为60~90℃的石油醚- 丙酮-甲酸=8.5:1.5:0.2的为展开系统。
3 13批供试品的制何首乌的薄层色谱定性鉴别
分别取13批不同生产时期的滋肾宁神丸,制备供试品溶液并进行检验,结果见图4。13 批供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。
综上可见,本发明的制何首乌的薄层色谱定性鉴别阴性对照在相应的位置上无干扰,表明方法专属性强;主斑点Rf值适中,约0.6,与其余斑点具有很好的分离;同时,考察了不同厂家的薄层板、不同相对温度、不同湿度、不同预饱和时间、不同点样量、不同展开剂六种因素对大黄素甲醚色谱行为均无显著性影响,提示该方法耐用性好,确保方法可控性,适于推广应用。
(3)五味子醇甲的含量测定:
采用高效液相色谱法进行测定,具体方法和步骤如下:
色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以体积比为42:58 的乙腈-水为流动相;检测波长为250nm,理论板数按五味子醇甲峰计算应不低于5000;
对照品溶液的制备 取五味子醇甲对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1ml含5μg的溶液,即得;
供试品溶液的制备 取本品,研细,过五号筛,取2g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入80%甲醇50ml,称定重量,超声处理45分钟,取出,放冷,再称定重量,用80%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得;
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得,
本品每1g含五味子以五味子醇甲计,不得少于70μg/g。
方法学验证:
1提取工艺优化
1.1不同提取方式考察
取滋肾宁神丸2.0g,两份,精密称取,精密加入乙醇25ml,称定重量,一份超声提取30min,另一份加热回流30min,放冷,补重,取续滤液,过0.45μm微孔滤膜,进样,结果见表1。结果表明,加热回流提取比超声提取的含量高,但是差异不大,考虑到超声提取方便易操作、环保等优点,选择超声提取。
本发明采用直接超声提取方法制备供试品溶液,省去了超声后离心定容、超声两次滤过定容测定的操作。方法操作简单、方便、省时、环保,避免因操作过程繁琐导致指标成分不必要的损失,最大程度反映出五味子醇甲指标成分的真实含量。
表1不同提取方法含量比较
1.2不同提取溶媒考察
取滋肾宁神丸2.0g,两份,精密称取,一份精密加入乙醇25ml,称定重量,另一份精密加入甲醇25ml,超声提取30min,放冷,补重,取续滤液,过0.45μm微孔滤膜,进样。结果表明,甲醇的提取效果比乙醇好。进一步考察50%甲醇的提取效果,结果表明50%甲醇提取的含量比甲醇高,结果见表2。
表2不同提取溶媒对含量的影响
1.3正交试验
根据单因素考察结果,选择甲醇浓度、溶媒倍量、提取时间为考察因素,分别设3个水平,按照L(34)(有一个水平为空白实验)正交表进行试验,见表3,正交试验结果见表4 和表5。
表3正交试验因素水平表
表4正交试验结果
表5方差分析表
由上表可知,各因素对含量测定结果影响大小顺序为溶媒用量(B)>甲醇浓度(A)>提取时间(C),均无显著性差异。正交试验所得最佳实验方案为A1B3C3,即50ml的80%甲醇超声提取45min。
2系统适用性试验
2.1专属性试验
缺五味子阴性溶液、滋肾宁神丸供试品溶液、五味子醇甲对照品溶液分别进样分析,见图6-8,结果五味子醇甲峰与相近的其它成分峰完全分离(分离度大于1.5),且缺五味子样品溶液在五味子醇甲对照品相同的出峰时间处无干扰。
2.2线性关系考察
取五味子醇甲对照品溶液1ml,分别置于2ml、10ml、25ml、50ml、100ml、200ml 的容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,按上述色谱条件进行测定,以峰面积(Y)对质量浓度 (X)进行线性回归。五味子醇甲的标准曲线方程为Y=25816.31X+1134.01(R2=1.0000) 在浓度为1.0338~103.3760μg/ml范围内线性关系良好,五味子醇甲标准曲线见图5所示。
2.3精密度试验
2.3.1仪器精密度试验
取同一对照品溶液(五味子醇甲浓度为5.1688μg/ml),精密吸取10μl注入高效液相色谱仪,依法测定,结果见表6,峰面积RSD为0.43%,可见仪器精密度良好。
表6精密度试验结果
2.3.2中间精密度试验
平行配制6份供试品溶液(QK001),分别由两个分析人员使用不同的仪器进行测试,结果见表7,表明方法的中间精密度良好。
表7中间精密度试验结果(n=6)
2.4重复性试验
取同一批次样品(QK001)6份,精密称定,制备供试品溶液,记录峰面积并计算含量,见表8所示,五味子醇甲平均含量为132.2μg/g,RSD为0.53%,表明该方法重复性良好。
表8重复性试验结果(n=6)
2.5加样回收试验
取已知含量的样品(批号QK001)1.0g,精密称定,共取6份,置具塞锥形瓶中,分别精密加入对照品溶液(2.5637μg/ml)50ml,按“2.3”项下方法操作测定,计算回收率,结果见表9。
表9加样回收率试验结果(n=6)
2.6耐用性试验
2.6.1稳定性试验
取同一供试品溶液(QK001)2.0g,照含量测定项下供试品溶液的制备方法制备供试品溶液,分别在不同时间进行测定,结果见表10,供试品溶液在30h内稳定。
表10稳定性试验结果
2.6.2柱温考察
取同一供试品溶液(QK001)2.0g,照含量测定项下供试品溶液的制备方法制备供试品溶液,分别对不同的柱温进行测定,结果见表11。试验结果表明在25±5℃内对含量测定结果没有显著性影响,优选为25℃。
表11不同柱温对含量测定的影响
2.6.3流速考察
取同一供试品溶液(QK001)2.0g,照含量测定项下供试品溶液的制备方法制备供试品溶液,分别对0.8ml/min、1.0ml/min、1.2ml/min三个流速进行测定,结果见表12。试验结果表明在0.8~1.2ml/min流速内对含量测定结果没有显著性影响,优选为1.0ml/min。
表12不同流速对含量测定结果的影响
2.6.4不同波长考察
取同一供试品溶液(QK001)2.0g,照含量测定项下供试品溶液的制备方法制备供试品溶液,分别在245nm、248nm、250nm、252nm、255nm五个波长进行测定,结果见表13。试验结果表明在250±5nm内对含量测定结果没有显著性影响,优选为250nm。
表13不同波长对含量测定结果的影响
2.6.5流动相组成比例考察试验
考察甲醇-水流动相系统,结果显示与乙腈-水流动相系统相比较,待测化合物峰形宽,理论塔板数略低,因此选用乙腈-水流动相系统。
取同一供试品溶液(QK001)2.0g,照含量测定项下供试品溶液的制备方法制备供试品溶液,分别在5种不同流动相比例条件下测定,结果见表14。试验结果表明流动相比例在乙腈-水(37:63)~乙腈-水(47:53)内对含量测定结果没有显著性影响,能准确对其进行含量测定。五味子醇甲对照品在流动相乙腈-水(42:58)比例下峰形漂亮,无其余峰干扰,分离效果好,达到基线分离,出峰时间适中,约为13min。当增加乙腈比例时,五味子醇甲对照品出峰时间提前,与相邻峰分离良好,但基线略漂高。当减少乙腈比例时,与相邻峰分离良好,五味子醇甲对照品出峰时间延后,大大增加分析时间,效率降低。在保证五味子醇甲对照品符合液相系统适应性的前提下,又具有合适分析时间,故选择流动相为乙腈-水(42:58)。
表14不同流动相组成比例对含量测定的影响
2.7 14批滋肾宁神丸供试品的含量测定
取滋肾宁神丸14批供试品,照含量测定项下供试品溶液的制备方法制备供试品溶液,记录峰面积并计算含量,结果见表15所示。
表15 14批滋肾宁神丸含量测定结果
Claims (4)
1.一种滋肾宁神丸的质量检测方法,其特征在于,包括薄层色谱定性鉴别和五味子醇甲的含量检测:
(1)菟丝子的薄层色谱定性鉴别:
取本品8g,研细,加乙醇40-50ml,超声20-40分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加水20ml使溶解,用乙醚萃取1-3次,每次20ml,弃去乙醚液,水液用乙酸乙酯萃取1-3次,每次20ml,合并乙酸乙酯萃取液,蒸干,残渣加乙醇1ml使溶解,作为供试品溶液;取菟丝子对照药材1g,加乙醇40-50 ml,超声20-40分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加水20ml使溶解,自“用乙醚萃取1-3次”起,同法制成对照药材溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液1~ 2μl,分别点于同一聚酰胺薄膜上,以体积比乙酸乙酯-丁酮-甲酸=2:2:1为展开剂,展开,取出,晾干;喷三氯化铝试液,吹干试液,置365nm紫外光灯下检视;供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点;
(2)制何首乌的薄层色谱定性鉴别:
取本品8g,研细,加乙醇40-50ml,超声20-40分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加水20ml使溶解,用乙醚萃取1-3次,每次20ml,合并乙醚萃取液,蒸干,残渣加乙酸乙酯1ml使溶解,作为供试品溶液,水相挥干乙醚,备用;另取大黄素甲醚对照品,加乙酸乙酯制成每1ml含0.5mg的溶液;照薄层色谱法试验,吸取供试品溶液5~10μl、对照品溶液2μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以体积比沸程为60~90℃的石油醚-丙酮-甲酸=8-9:1-2:0.2为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%氢氧化钾甲醇溶液,在日光下检视;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
(3)五味子醇甲的含量测定:
采用高效液相色谱法进行测定,具体方法和步骤如下:
色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以体积比为37-47:53-63的乙腈-水为流动相;检测波长为250nm,流速为1.0ml/min,柱温25℃,理论板数按五味子醇甲峰计算应不低于5000;
对照品溶液的制备 取五味子醇甲对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1ml含5μg的溶液,即得;
供试品溶液的制备 取本品,研细,过五号筛,取2g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入50-80%甲醇50ml,称定重量,超声处理30-45分钟,取出,放冷,再称定重量,用50-80%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得;
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得。
2.根据权利要求1所述的一种滋肾宁神丸的质量检测方法,其特征在于,所述(2)中,以体积比沸程为60~90℃的石油醚-丙酮-甲酸=8.5:1.5:0.2为展开剂。
3.根据权利要求1所述的一种滋肾宁神丸的质量检测方法,其特征在于,所述(3)中,供试品溶液的制备为:取本品,研细,过五号筛,取2g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入80%甲醇50ml,称定重量,超声处理45分钟,取出,放冷,再称定重量,用80%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
4.根据权利要求1所述的一种滋肾宁神丸的质量检测方法,其特征在于,所述(3)中,以体积比为42:58的乙腈-水为流动相。
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