CN108034593B - 一种真菌培养基及其应用 - Google Patents

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Abstract

本申请涉及一种真菌培养基及其的应用，特别是在用于培养草莓褐色叶斑病菌产生菌丝中的应用。其中所述真菌培养基的配方如下：以总体积1000ml计，200ml至300ml的草莓果实的榨汁滤液，150克至300克马铃薯煮熟后的滤液，16克至25克葡萄糖，以及16克至26克的琼脂。

Description

一种真菌培养基及其应用
技术领域
本申请涉及一种真菌培养基及其应用，特别是在用于培养草莓褐色叶斑病菌产生菌丝中的应用。
背景技术
草莓褐色叶斑病菌是引起草莓、牡丹、芍药等的一种重要病原菌，现有研究主要采用PDA培养基对其进行培养，但其一般产孢量非常低，存在草莓褐色叶斑病菌菌丝速度慢不够开展相关研究所用的问题。
发明内容
为了解决现有技术中存在的问题，本申请之一提供了真菌培养基，其中所述真菌培养基的配方如下：以总体积1000ml计，200ml至300ml的草莓果实的榨汁滤液，150克至300克马铃薯煮熟后的滤液，16克至25克葡萄糖，以及16克至26克的琼脂。
在一个具体实施方式中，所述真菌培养基的配方如下：以总体积1000ml计，300ml的草莓果实的榨汁滤液，200克至250克马铃薯煮后的滤液，19克至21克葡萄糖，以及20克至22克的琼脂。
本申请之二提供了本申请之一任意一项所述的真菌培养基在培养草莓褐色叶斑病菌(Pilidium concavum)产生菌丝中的应用。
本申请之三提供了一种培养草莓褐色叶斑病菌(Pilidium concavum)产生菌丝的方法，其包括如下步骤：将草莓褐色叶斑病菌在PDA培养基中活化后，接种至PDA培养基上培养5d至7d，生长出菌落，然后于菌落上打取直径5±3mm的菌饼，然后接种于本申请之一任意一项所述的真菌培养基的平板上，25±2℃黑暗培养6d至8d。
在一个具体实施方式中，将草莓褐色叶斑病菌在PDA培养基中活化后，接种至PDA培养基上培养6d，生长出菌落，然后于菌落边缘同一圆周上打取直径5mm的菌饼，然后接种于本申请之一任意一项所述的真菌培养基的平板上，25℃黑暗培养8d。
本申请的有益效果：
经过大量培养基配方的筛选，本申请意外地发现本申请的ZSPDA培养基的配方特别适于草莓褐色叶斑病菌(Pilidium concavum)产生菌丝。从而克服了现有技术中一直以来的由于草莓褐色叶斑病菌产生菌丝速度慢且菌丝产量低而不够开展相关研究所用的问题。
具体实施方式
为了使本发明所述的内容更加便于理解，下面结合具体实施方式对本发明所述的技术方案做进一步的说明，但是本发明不仅限于此。
实验菌株为前期实验研究中从北京草莓上经常规组织分离、单孢挑取、PDA斜面保存的菌株，标记为BJ-4、BJ-10、BJ-12、BJ-15、BJ-17、BJ-18、BJ-20、BJ-21、BJ-25、BJ-26，经华大基因测序、rDNA ITS序列运用GenBank中Blast比对后确定为草莓褐色叶斑病菌(Pilidium concavum)，可从北京农学院获得。其分离方法按照文献kaivan KARIMI,MAHDIARZANLOU,ASADOLLAH BABAI-AHARI and ILARIA PERTOT.Biological and molecularcharacterisation of Pilidiumlythri,anemerging strawberry pathogen inIran.Phytopathologia Mediterranea,(2016)55,3,366-379分离得到。
实施例1
草莓果实的榨汁操作如下：鲜草莓洗净，切块后，用榨汁机进行榨汁，不进行过滤。
SPDA培养基：将200g马铃薯去皮、切块，加入600ml蒸馏水，然后煮30分钟至软烂，四层纱布过滤后、加入20g葡萄糖，20g琼脂粉，加入100ml未过滤后的草莓汁定容于1L水中，于121℃高压湿热灭菌20min后凉至60℃，制成平板。
实施例2
SPDA培养基：将200g马铃薯去皮、切块，加入600ml蒸馏水，然后煮30分钟至软烂，四层纱布过滤后、加入20g葡萄糖，20g琼脂粉，加入200ml未过滤的草莓汁定容于1L水中，于121℃高压湿热灭菌20min后凉至60℃，制成平板；
草莓果实的榨汁操作同实施例1。
实施例3
SPDA培养基：将200g马铃薯去皮、切块，加入600ml蒸馏水，然后煮30分钟至软烂，四层纱布过滤后、加入20g葡萄糖，20g琼脂粉，加入300ml未过滤的草莓汁定容于1L水中，于121℃高压湿热灭菌20min后凉至60℃，制成平板；
草莓果实的榨汁操作同实施例1。
实施例4
草莓果实榨汁操作如下：鲜草莓洗净，切块后，用榨汁机进行榨汁；榨汁后用四层纱布进行过滤，得到草莓果实的榨汁滤液。
ZSPDA培养基：将200g马铃薯去皮、切块，加入600ml蒸馏水，然后煮30分钟至软烂，四层纱布过滤后、加入20g葡萄糖，20g琼脂粉，加入100ml草莓果实的榨汁滤液定容于1L水中，于121℃高压湿热灭菌20min后凉至60℃，制成平板；
实施例5
ZSPDA培养基：将200g马铃薯去皮、切块，加入600ml蒸馏水，然后煮30分钟至软烂，四层纱布过滤后、加入20g葡萄糖，20g琼脂粉，加入200ml草莓果实的榨汁滤液定容于1L水中，于121℃高压湿热灭菌20min后凉至60℃，制成平板；
草莓果实的榨汁滤液操作同实施例4。
实施例6
ZSPDA培养基：将200g马铃薯去皮、切块，加入600ml蒸馏水，然后煮30分钟至软烂，四层纱布过滤后、加入20g葡萄糖，20g琼脂粉，加入300ml草莓果实的榨汁滤液定容于1L水中，于121℃高压湿热灭菌20min后凉至60℃，制成平板；
草莓果实的榨汁滤液操作同实施例4。
实施例7
V8培养基：V8蔬菜汁200ml，加碳酸钙3g，琼脂粉20g定容于1L水中，于121℃高压湿热灭菌20min后凉至60℃，制成平板。
V8蔬菜汁购自金宝汤公司(CAMPBELL SOUP COMPANY)的v8 100％vegetablejuice。
实施例8
YDA培养基的制备：酵母粉5g，葡萄糖20g，琼脂粉20g，定容于1L水中，于121℃高压湿热灭菌20min后待其凉至60℃左右，制成平板。
实施例9
PDA培养基的制备：将200g马铃薯去皮、切块，加入600ml蒸馏水，然后煮30分钟至软烂，四层纱布过滤后、加入20g葡萄糖，20g琼脂粉定容于1L水中，于121℃高压湿热灭菌20min后凉至60℃，制成平板。
实施例10
CA培养基：200g胡萝卜榨汁后过滤，滤液加入20g琼脂定容于1L水中，于121℃高压湿热灭菌20min后凉至60℃，制成平板。
其中，胡萝卜榨汁操作如下：胡萝卜洗净，去皮，切块后，用榨汁机进行榨汁。
实施例11
将供试草莓褐色叶斑病菌在PDA培养基中活化后，接种至新鲜配制(0-14天)的PDA培养基上培养6d，于菌落边缘同一圆周上打取直径5mm的菌饼，然后分别接种于SPDA培养基、ZSPDA培养基、V8培养基、YDA培养基、PDA培养基、CA培养基的平板上，25℃暗培养7d。分别测量各平板上的菌落直径，将菌丝全部刮下，烘干后，测量菌丝干重，并采用SPSS软件中的最小显著差异法进行统计分析，以获得各菌株在不同培养基上的生长情况。每皿接种一个菌饼，每菌株每种培养基3次重复，整个试验重复2次。结果见表1至4。整个试验重复2次。结果见表1至4。
从表1至4可见，草莓褐色叶斑病菌菌株BJ-4、BJ-10、BJ-12、BJ-15、BJ-17、BJ-18、BJ-20、BJ-21、BJ-25、BJ-26在ZSPDA培养基上与其他培养基上的快速生长菌丝的速率存在显著差异，其中，表1和表2的菌丝干重情况最能说明草莓褐色叶斑病菌在这些不同培养基中的生长差异性。根据表中相同菌株的生长状况的比较，可以明显地得出ZSPDA此类培养基上具有促进草莓褐色叶斑病菌菌丝快速生长的作用，说明ZSPDA具有良好促进草莓褐色叶斑病菌菌丝快速生长的效果。
表1
Figure BDA0001565330850000051
表2
Figure BDA0001565330850000052
表3
Figure BDA0001565330850000053
表4
Figure BDA0001565330850000061
以上仅示例性的列出了筛选过程中部分菌丝生长较好的培养基，对于在培养过程中菌丝生长更差的培养基没有一一列出。

Claims (5)

1.一种真菌培养基，其中所述真菌培养基的配方如下：以总体积1000 ml计，200ml至300ml的草莓果实的榨汁滤液，150克至300克马铃薯用600ml蒸馏水煮熟后的滤液，16克至25克葡萄糖，以及16克至26克的琼脂，余量为蒸馏水。
2.根据权利要求1所述的真菌培养基，其特征在于，所述真菌培养基的配方如下：以总体积1000 ml计，300ml的草莓果实的榨汁滤液，200克至250克马铃薯用600ml蒸馏水煮后的滤液，19克至21克葡萄糖，以及20克至22克的琼脂，余量为蒸馏水。
3.根据权利要求1或2所述的真菌培养基在培养草莓褐色叶斑病菌（Pilidium concavum）产生菌丝中的应用。
4.一种培养草莓褐色叶斑病菌（Pilidium concavum）产生菌丝的方法，其包括如下步骤：将草莓褐色叶斑病菌在PDA培养基中活化后，接种至PDA培养基上培养5d至7d，生长出菌落，然后于菌落上打取直径5±3 mm的菌饼，然后接种于含有如权利要求1或2所述的真菌培养基的平板上，25±2℃黑暗培养6d至8d。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，将草莓褐色叶斑病菌在PDA培养基中活化后，接种至PDA培养基上培养6d，生长出菌落，然后于菌落边缘同一圆周上打取直径5 mm的菌饼，然后接种于含有如权利要求1或2所述的真菌培养基的平板上，25℃黑暗培养7d。
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