CN109266560B - 一种含有杂草的链格孢菌培养基 - Google Patents

一种含有杂草的链格孢菌培养基 Download PDF

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Abstract

本发明属于微生物培养技术领域，具体涉及一种含有杂草的链格孢菌培养基及其制备方法。配制1000ml该培养基的配方如下：苘麻茎叶片4‑8g、葡萄糖2‑4g、蛋白胨1‑2g、酵母浸粉0.5‑1g、磷酸二氢钾0.5g和琼脂15g，蒸馏水加至1000ml，调节pH为7.0。本发明通过在培养基中添加田间常见杂草，研究出用于真菌产孢用液体发酵的优良培养基。达到杂草资源利用的同时降低了链格孢菌培养成本。

Description

一种含有杂草的链格孢菌培养基
技术领域
本发明属于微生物培养技术领域，具体涉及一种含有杂草的链格孢菌培养基。
背景技术
在我国，链格孢菌作为重要微生物资源被广泛利用。例如，链格孢菌作为分布广泛的一类微生物，作为代谢产物发酵菌和植物内生菌，在次生代谢产物生产和利用方面发挥了一定作用。另一方面，以链格孢菌多样的致病性为基础，作为模式生物，对于链格孢菌和寄主互作的研究也被认为是研究宿主和病原微生物互作的良好菌种，在科研实践中得到广泛利用。因此开发可用于该菌生产培养的广适型、低成本培养基显得至关重要。
苘麻，一年生草本植物，叶多呈圆心形，边缘具细圆锯齿，两面和茎等位置均密被星状柔毛。除青藏高原外，苘麻在我国其他各省区广泛分布，且多地作为栽培作物应用。作为杂草，苘麻广泛分布与多种作物和果蔬田，分布地常见于路旁、荒地和田野间。同时，在世界范围内，苘麻也分布广泛，在越南、印度、日本以及欧洲、北美洲等地区均由苘麻的存在。苘麻在我国多个行业被应用，其茎皮纤维可编织麻袋、搓绳索、编麻鞋等纺织材料。其种子含油量约15-16%，供制皂、油漆和工业用润滑油；全草可作药用。
我国有数千种杂草分布，杂草资源丰富。但是，目前作为作物田中无用植物，化学防控为主，但是作为大量生物质资源的储藏着，杂草被简单的除草剂杀死，无疑也是资源的浪费。同时如果能较好的利用杂草资源，对于减少除草剂应用，避免环境污染均由重要作用。因此，研究以杂草为基础的微生物发酵培养基，最大化的开发杂草资源，较少浪费，对于优化微生物培养基组成，降低配制成本都有重要的意义。
发明内容
针对现有技术上的不足，本发明提供了一种含有杂草的链格孢菌培养基，这种杂草为苘麻，采用该培养基能够快速高效的得到大量链格孢菌分生孢子。本发明通过将苘麻作为培养基主要成分，降低了链格孢菌培养成本。
本发明的技术方案为：
本发明提供了一种含有杂草的链格孢菌培养基，配制1000ml该培养基的配方如下：苘麻茎叶片4g-8g、葡萄糖2g-4g、蛋白胨1g-2g、酵母浸粉0.5g-1g、磷酸二氢钾0.5g和琼脂15g，蒸馏水加至1000ml，调节pH为7.0。
优选的，所述培养基中苘麻茎叶片 5g、葡萄糖2g、蛋白胨1g、酵母浸粉0.5g。
本发明还提供了含有杂草的链格孢菌培养基的制备方法：以田间或人工种植的苘麻为原料，选取正常生长期苘麻，剪取地上部分，烘箱烘干，人工剪碎或机械破碎，称取苘麻干燥后茎叶，加入蒸馏水，煮沸25-30分钟，收集过滤后所获得汁液；在汁液中加入葡萄糖、蛋白胨、酵母浸粉、磷酸二氢钾和琼脂；加蒸馏水，调节pH，定容至1000ml；将定容后的溶液于121℃，1.05×105Pa下灭菌锅灭菌20分钟，灭菌后备用。
本发明还提供了含有杂草的链格孢菌培养基的应用：将培养基倒入9cm培养皿内，每皿20ml培养基，培养温度为链格孢菌培养温度25℃，黑暗条件下培养5-10天。
本发明提供的培养基适用于链格孢菌菌株的培养。
本发明的有益效果是：1.以苘麻为基础材料，该材料极易获得，可人工种植也可田间采集，培养基成本低；2.该培养基配制方法简便，不需要特殊设备；3.本培养基适用于链格孢菌的培养；培养效果优良。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明做进一步说明，但本发明不应解释为局限于这些实施例。
实施例1 本发明所提供培养基的配制及培养计数方法
一种含有杂草的链格孢菌培养基。配制1000ml该培养基的配方如下：苘麻茎叶片5g、葡萄糖2g、蛋白胨1g、酵母浸粉0.5g、磷酸二氢钾0.5g和琼脂15g，蒸馏水加至1000ml，调节pH为7.0。
以田间或人工种植的苘麻为原料，选取正常个生长期苘麻，剪取地上部分，烘箱烘干，人工剪碎或机械破碎，称取5g苘麻干燥后茎叶，加入蒸馏水，煮沸25-30分钟，收集过滤后所获得汁液；在汁液中加入葡萄糖2g、蛋白胨1g、酵母浸粉0.5g、磷酸二氢钾0.5g和琼脂15g；加蒸馏水，调节pH，定容至1000ml；将定容后的溶液于121℃，1.05×105Pa下灭菌锅灭菌20分钟，灭菌后备用。根据组成成分，将该培养基定名为苘麻葡萄糖培养基（AG medium）。
一种含有杂草的链格孢菌培养基的应用：将培养基倒入9cm培养皿内，每皿20ml培养基，培养温度为链格孢菌培养温度（25℃），黑暗条件下培养5-10天。
链格孢菌具体培养方法为：PDA培养基活化保存的菌株，5 天后，选取生长一致的菌落，打取直径为9 mm的菌饼，接种到各供试培养基内。将接种菌块的培养基放置到培养箱内，并将培养条件设定为，25℃，黑暗培养。
观察方法为：自第5天开始，每天取出3皿菌株，量取其菌落直径，用10ml无菌水洗下整皿内分生孢子，血球计数板计数孢子数量。
实施例2培养基杂草成分的筛选
将实施例1中的苘麻替换为其它杂草，其它组分和步骤不变，制作培养基。本实施例中同时采用播娘蒿、荠菜、猪殃殃、狗尾草、看麦娘、节节麦和雀麦等7中杂草作为添加杂草，与添加苘麻的培养基进行横向比较。
表1 添加不同杂草培养基的生长速率
Figure DEST_PATH_IMAGE002
由表1提供的数据可以看出，添加相同含量的7种田间最常见杂草，根据实施例1和2中提到的方法，进行统计，发现培养7天后，添加苘麻的培养基，无论是在分生孢子产孢量和菌落直径方面都有显著优于添加其它杂草的培养基。
实施例3 本发明所提供培养基与其它常用真菌培养基的培养效果对比
马铃薯葡萄糖培养基（PDA）：土豆200 g，人工切成约2×2厘米的土豆块，沸水煮30分钟，纱布过滤，留取汁液。在过滤获得汁液中加入20g葡萄糖和20g琼脂，并定容至1000ml。将定容后的溶液于121℃，1.05×105Pa下灭菌锅灭菌20分钟，灭菌后备用。
葡糖糖蛋白胨培养基（DPA）：葡糖糖40g，蛋白胨10g，琼脂20g，水1000 ml；将定容后的溶液于121℃，1.05×105Pa下灭菌锅灭菌20分钟，灭菌后备用。
真菌培养基（ZJ）：蛋白胨5 g，酵母粉2 g，葡糖糖2 g，KH2PO4 1 g，MgSO4 0.5 g，琼脂20 g，水1000 ml；将定容后的溶液于121℃，1.05×105Pa下灭菌锅灭菌20分钟，灭菌后备用。
配制好的培养基用于培养链格孢菌，培养方法和统计方法同实施例1和2 。
表2不同培养基的生长速率比较
AG PDA DPA ZJ
菌落直径（cm） 8.7±0.3a 8.8±0.2a 8.6±0.3a 7.5±0.4b
产孢量(10<sup>8</sup>/ml) 33.1±8.2a 28.2±6.7a 6.1±2.1c 11.3±3.7b
注：表中数值为平均值±标准误（n=3），同行数据后的不同字母表示在 0.05 水平上差异显著。
由表2提供的数据可以看出，与目前常用的真菌培养基相比，发现添加苘麻的培养基AG，在分生孢子产孢量和真菌生长方面都有一定优势。本发明培养基与PDA培养基在链格孢菌培养过程中效果相近，但是材料成本更低；与成分相近的ZJ培养基相比，培养效果更好，且原材料应用更少。
以上所述仅是本专利的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本专利技术原理的前提下，还可以做出若干改进和替换，这些改进和替换也应视为本专利的保护范围。

Claims (3)

1.一种含有杂草的链格孢菌培养基，其特征在于，配制1000ml该培养基的配方如下：苘麻茎叶片4g-8g、葡萄糖2g-4g、蛋白胨1g-2g、酵母浸粉0.5g-1g、磷酸二氢钾0.5g和琼脂15g，蒸馏水加至1000ml，调节pH为7.0；制备方法如下：以田间或人工种植的苘麻为原料，选取正常生长期苘麻，剪取地上部分，烘箱烘干，人工剪碎或机械破碎，称取苘麻干燥后茎叶，加入蒸馏水，煮沸25-30分钟，收集过滤后所获得汁液；在汁液中加入葡萄糖、蛋白胨、酵母浸粉、磷酸二氢钾和琼脂；加蒸馏水，调节pH，定容至1000ml；将定容后的溶液于121℃，1.05×105Pa下灭菌锅灭菌20分钟，灭菌后备用。
2.根据权利要求1中所述的一种含有杂草的链格孢菌培养基的应用，所述培养基用于链格孢菌菌株的培养。
3.根据权利要求2中所述的一种含有杂草的链格孢菌培养基的应用，其特征在于：将培养基倒入9cm培养皿内，每皿20ml培养基，培养温度为25℃，黑暗条件下培养5-10天。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110257256A (zh) * 2019-05-31 2019-09-20 山东英才学院 一种真菌培养基及其制备方法
CN110878280B (zh) * 2019-12-12 2021-11-09 北京市农林科学院 一种诱导可可毛色二孢快速产生分生孢子的方法

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2006086474A2 (en) * 2005-02-08 2006-08-17 Cornell Research Foundation, Inc. A bioherbicide from festuca spp
CN101024817A (zh) * 2007-01-31 2007-08-29 江苏省农业科学院 一种莲子草假格孢菌株及其生防制剂的制备方法和应用
CN102851217A (zh) * 2012-08-30 2013-01-02 云南省烟草农业科学研究院 一种链格孢菌培养基及其制备方法
CN104017735A (zh) * 2014-05-28 2014-09-03 云南省烟草农业科学研究院 一种链格孢菌培养基及其制备方法
CN105360168A (zh) * 2015-12-07 2016-03-02 井冈山大学 一种利用致病真菌防治外来杂草空心莲子草的方法
CN105886410A (zh) * 2016-04-27 2016-08-24 山东省农业科学院植物保护研究所 一种含有稗草的漆斑菌培养基及其制备方法

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2006086474A2 (en) * 2005-02-08 2006-08-17 Cornell Research Foundation, Inc. A bioherbicide from festuca spp
CN101024817A (zh) * 2007-01-31 2007-08-29 江苏省农业科学院 一种莲子草假格孢菌株及其生防制剂的制备方法和应用
CN102851217A (zh) * 2012-08-30 2013-01-02 云南省烟草农业科学研究院 一种链格孢菌培养基及其制备方法
CN104017735A (zh) * 2014-05-28 2014-09-03 云南省烟草农业科学研究院 一种链格孢菌培养基及其制备方法
CN105360168A (zh) * 2015-12-07 2016-03-02 井冈山大学 一种利用致病真菌防治外来杂草空心莲子草的方法
CN105886410A (zh) * 2016-04-27 2016-08-24 山东省农业科学院植物保护研究所 一种含有稗草的漆斑菌培养基及其制备方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Stimulation of tentoxin synthesis by aged-culture filtrates and continued synthesis in the presence of protein inhibitors;J T Sheu等;《Appl Environ Microbiol》;19861231;第51卷(第2期);第368-372页 *

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