CN111733081A - 一种适用于防治番茄根结线虫病害的生物菌剂配方 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及了一种适用于防治番茄根结线虫病害的生物菌剂的制备方法及应用,属于微生物领域。此生物菌剂的制备方法如下:制备浓度百分比配比为:硝酸钠1.0、蛋白胨0.50、七水硫酸镁0.005、硫酸铵0.50、磷酸二氢钾0.05、葡萄糖4.0和菊芋秸秆浸提液0.3的液体培养基,将1x107个/ml的孢子悬浮液接种在制备的液体培养基上,在28℃、180r/min条件下培养7天,过滤后稀释一倍即为淡紫拟青霉代谢产物生物菌剂。本发明采用将具有杀线效果的有机物与培养基复配的技术制备的生物菌剂可以有效降低番茄根结线虫病害的发生及促进番茄生长、施用简便、可批量生产、无寄生性影响、安全性高等优点,在缓解番茄根结线虫病害方面具有较好的应用前景及发展潜力。
Description
技术领域
本发明涉及了利用菊芋秸秆浸提液等制作生物菌剂及其制备方法,属于微生物领域,具体涉及一种适用于防治番茄根结线虫病害的淡紫拟青霉代谢产物生物菌剂的制备。
背景技术
番茄为茄科,番茄属的一年生或多年生草本植物。番茄作为世界主要水果型蔬菜之一,营养价值较高,目前已在世界各地广泛种植。由于其需求量大,种植面积有限,连作栽培成为普遍现象。而长期连作栽培会使番茄受到连作障碍的影响,导致土壤微生物群落结构失调,土壤理化性质发生改变,严重影响番茄植株的生长、果实产量和品质。而引发番茄连作障碍的各种土传病害因素中,以根结线虫病害为主,一旦发病势必对番茄产量造成巨大影响,严重时甚至会导致绝产。目前人们通常使用化学杀虫剂来防治番茄根结线虫病害,然而却给环境、可持续发展和人类健康带来了负面影响。
在防治番茄根结线虫病害的方法中,生物杀线虫剂因其安全、高效、无污染等优点成为目前最重要的生物防治方法。淡紫拟青霉是线虫卵的寄生性真菌,因其对多种植物上的根结线虫具有良好的生防作用,被认为是最具有应用前景的线虫生防真菌。淡紫拟青霉作为一种生防菌,不仅可侵染多种植物寄生线虫,还能够促进植物生长。然而在实际应用中淡紫拟青霉在田间的防治效果却不稳定,淡紫拟青霉菌剂存在着活菌高温下易失活、在土壤中定殖困难、防治效果不稳定、活菌孢子飘散对人类健康有危害等问题。而且淡紫拟青霉具有中等毒力,对人类具有致病作用,感染严重者将会导致角膜发炎。
有研究表明淡紫拟青霉的代谢产物同样对植物具有一定的杀线及促生作用,且有可固化、施用简便、可批量生产、无孢子扩散危害等优点,具有巨大的研发潜力。但不同培养条件下的淡紫拟青霉代谢产物对根结线虫抑杀作用存在明显差异。且将具有杀线作用的有机物与培养基复配对淡紫拟青霉进行培养,其代谢产物的杀线效果好于传统培养基的代谢产物。若能筛选到相应的高效培养基,将其用于番茄根结线虫病害的应用,将会有很好的应用前景。
发明内容
本发明的目的在于提供一种防治番茄根结线虫病害的生物菌剂,可以在实际的番茄生产过程中替代现有的生物防治剂;在一定程度上解决了原有的淡紫拟青霉活菌生物制剂活菌高温下易失活、在土壤中定殖困难、防治效果不稳定、活菌孢子飘散对人类健康有危害等问题,还可显著促进植物生长及降低番茄根结线虫病害。
为实现上述目的,本发明采用如下技术方案:
一种适用于防治番茄根结线虫病害的生物菌剂配方,其组成包括液体培养基的制备及淡紫拟青霉代谢产物的制备。其特征是:所述的液体培养基包括硝酸钠、蛋白胨、七水硫酸镁、硫酸铵、磷酸二氢钾、葡萄糖和菊芋秸秆浸提液,其浓度(百分比)配比为1.0:0.50:0.005: 0.50:0.05:4.0:0.3。所述的淡紫拟青霉代谢产物的制备包括淡紫拟青霉84604孢子悬浮液的制备,在28℃、180r/min条件下培养7天,得到发酵液,过滤后得到淡紫拟青霉的代谢产物。
本发明的另一目的在于提供一种适用于防治番茄根结线虫病害的生物菌剂的制备工艺,包括步骤:
1)待菊芋块茎成熟后,将残留的地上部秸秆进行自然晾干,用粉碎机将菊芋秸秆粉碎成直径为0.2cm x 1cm左右的碎屑备用。
2)取10g菊芋秸秆碎屑,添加100ml蒸馏水,在28℃、200r/min的条件下培养24h后用三层滤纸粗过滤,再用0.45mm滤膜过滤,得到的滤液即为菊芋秸秆浸提液,放置在-80℃冰箱保存备用。
3)配置硝酸钠、蛋白胨、七水硫酸镁、硫酸铵、磷酸二氢钾和葡萄糖,其浓度(百分比)配比为1.0:0.50:0.005:0.50:0.05:4.0的液体培养基,向其中加入0.3%的菊芋秸秆浸提液,制备成培养淡紫拟青霉的液体培养基。
4)将淡紫拟青霉84604接种在PDA培养基中,使菌株充分生长,活化7天后,制成浓度为 1x107个/ml的孢子悬浮液。
5)取液体培养基总量1%的孢子悬浮液接种到培养基中,在28℃、180r/min条件下培养7天,得到发酵液。
6)将发酵液通过三层滤纸粗过滤,得到的滤液在8000rpm条件下离心10min,最后通过0.22 μm微孔滤膜过滤,过滤后所得到的滤液,稀释一倍后即为淡紫拟青霉代谢产物生物菌剂。
本发明制备的生物菌剂是能够显著促进植物生长及降低根结线虫病害,具有施用简便、可批量生产、无生物源危害等优点,同时相比于淡紫拟青霉活菌菌剂来说具有可固化、无寄生性影响、安全性高的优势。在缓解番茄根结线虫病害方面具有较好的利用前景
附图说明
图1为不同淡紫拟青霉液体培养基配方
具体实施方式
实施例1淡紫拟青霉代谢产物生物菌剂的制备
具体实施方式一:不同淡紫拟青霉液体培养基的制备
取10g菊芋秸秆碎屑,添加100ml蒸馏水,在28℃200r/min的条件下培养24h后用三层滤纸粗过滤,再用0.45mm微孔滤膜过滤,得到的滤液即为菊芋秸秆浸提液,放置在-80℃冰箱保存备用。
将淡紫拟青霉84604接种在PDA培养基中,使菌株充分生长,活化7天后,制成浓度为 1x107个/ml的孢子悬浮液。在I、II、III、IV四种培养基配方中分别加入0%、0.1%、0.3%、 0.5%浓度的菊芋秸秆浸提液对淡紫拟青霉进行培养,共16个配方(如图1)。
具体实施方式二:不同淡紫拟青霉代谢产物生物菌剂的制备
取液体培养基总量1%的孢子悬浮液接种到各培养基中,在28℃、180r/min条件下培养 7天,得到发酵液,将各发酵液通过三层滤纸粗过滤,得到的滤液在8000rpm条件下离心10 min,最后通过0.22μm微孔滤膜过滤,过滤后所得到的滤液,即为淡紫拟青霉代谢产物(混合组分)。将获得的淡紫拟青霉代谢产物稀释一倍制成淡紫拟青霉代谢产物生物菌剂,保存在4℃冰箱备用(也可制成冻干粉保存)。
实施例2淡紫拟青霉代谢产物生物菌剂的筛选
在东北农业大学园艺实验站线虫培养池中获取线虫土壤,除去表层土后取土,将土壤过 10mm筛网后混匀,用改良的贝曼漏斗法分离线虫,配制成20条/100μl的线虫悬浮液,在 24孔培养板中将200μl 16个处理代谢产物生物菌剂施加到200μl的线虫悬浮液中,对照添加无菌水,盖培养板保湿,每个处理3次重复。于24h镜检观察并统计其对根结线虫的杀虫效果以及恢复情况。通过对各淡紫拟青霉代谢产物生物菌剂对二龄幼虫的抑杀情况,确定最适宜的淡紫拟青霉代谢产物生物菌剂,即III-2(P)。
实施例3淡紫拟青霉代谢产物生物菌剂对番茄生长及番茄根结线虫病害的影响
将“金粉一号”番茄种子浸种催芽,常规管理后进行穴盘育苗,待幼苗长至三叶一心时,移栽至装有400g试验土的花盆(10x10cm),定植前,将20ml的P与连作土壤混匀,不施入代谢产物的处理作为对照,每个处理三次重复,每次重复20盆,随机排列,进行常规水肥管理,定植30d,40d,50d,60d进行取样,测定番茄植株生长、生理及根结线虫病害相关指标(株高、茎粗、根干鲜重、根体积、根系活力、计算番茄植株G值、壮苗指标。测定植株根结数、土壤中线虫指数,计算单位根鲜重根结及病情指数)。
试验结果表明,本淡紫拟青霉生物菌剂能够显著促进植物生长及降低根结线虫病害,而且具有施用简便、可批量生产、没有孢子扩散危害等优点,同时相比于淡紫拟青霉活菌菌剂来说具有可固化、无寄生性影响、安全性高的优势,在番茄连作栽培中具有较好的实际应用潜力与前景。
Claims (5)
1.一种适用于防治番茄根结线虫病害的生物菌剂,其特征包括:
1)菊芋秸秆浸提液与培养基复配的液体培养基的制备。
2)菌剂的活性成分为淡紫拟青霉84604的代谢产物。
2.根据权利要求1所述的防治番茄根结线虫病害的生物菌剂,其特征在于:所述的液体培养基包括硝酸钠、蛋白胨、七水硫酸镁、硫酸铵、磷酸二氢钾、葡萄糖和菊芋秸秆浸提液,其浓度(百分比)配比为1.0:0.50:0.005:0.50:0.05:4.0:0.3。
3.根据权利要求1所述的防治番茄根结线虫病害的生物菌剂,其特征在于:所述的淡紫拟青霉代谢产物的制备包括淡紫拟青霉84604孢子悬浮液的制备,在28℃、180r/min条件下培养7天,得到发酵液,过滤后得到淡紫拟青霉的代谢产物。
4.一种适用于防治番茄根结线虫病害的生物菌剂的液体培养基的制备,包括如下步骤:
1)待菊芋块茎成熟后,将残留的地上部秸秆进行自然晾干,用粉碎机将菊芋秸秆粉碎成直径为0.2cm x 1cm左右的碎屑备用。
2)取10g菊芋秸秆碎屑,添加100ml蒸馏水,在28℃、200r/min的条件下培养24h后用三层滤纸粗过滤,再用0.45mm微孔滤膜过滤,得到的滤液即为菊芋秸秆浸提液,放置在-80℃冰箱保存备用
3)配置硝酸钠、蛋白胨、七水硫酸镁、硫酸铵、磷酸二氢钾和葡萄糖,其浓度(百分比)配比为1.0:0.50:0.005:0.50:0.05:4.0的液体培养基,向其中加入0.3%的菊芋秸秆浸提液,制备成培养淡紫拟青霉的液体培养基。
5.菌剂的活性成分淡紫拟青霉84604的代谢产物的制备:
1)将淡紫拟青霉84604接种在PDA培养基中,使菌株充分生长,活化7天后,制成浓度为1x107个/ml的孢子悬浮液。
2)取液体培养基总量1%的孢子悬浮液接种到培养基中,在28℃、180r/min条件下培养7天,得到发酵液。
3)将发酵液通过三层滤纸粗过滤,得到的滤液在8000rpm条件下离心10min,最后通过0.22μm微孔滤膜过滤,过滤后所得到的滤液,稀释一倍后即为淡紫拟青霉代谢产物生物菌剂。
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CN202010531746.0A Pending CN111733081A (zh) | 2020-06-11 | 2020-06-11 | 一种适用于防治番茄根结线虫病害的生物菌剂配方 |
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- 2020-06-11 CN CN202010531746.0A patent/CN111733081A/zh active Pending
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