CN106538610B - 一种芹菜茎叶提取物的用途 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种芹菜茎叶提取物的用途，芹菜茎叶提取物作为番茄病害抑制剂的应用。本发明发现了芹菜茎叶提取物的新用途，能有效抑制番茄青枯病菌、根腐病菌的生长速率，显著降低生产中青枯病菌、根腐病菌对番茄植株的危害。芹菜茎叶提取物使用方便，成本低廉，纯天然，不存在残留和抗药性问题。

Description

一种芹菜茎叶提取物的用途
技术领域
本发明涉及番茄抗病栽培技术领域，特别涉及一种芹菜茎叶提取物的用途。
背景技术
番茄(Solanum lycopersicum)以其丰富的维生素和营养成分深受广大消费者的喜爱。作为我国设施栽培面积最大的蔬菜之一，番茄受病害的影响巨大，设施园艺的快速发展使得各种病毒性、细菌性和真菌性病害的发展更为猖獗，严重影响了我国番茄的产量和品质，造成了极为严重的经济损失。
目前，番茄青枯病、番茄根腐病在我国长江以南，尤其是华南地区发生日益严重，造成番茄种植的减产甚至绝收，严重制约了我国南方地区番茄种植产业的健康发展。常规的处理方法通常是使用化学药剂进行灭杀，这样长期使用会导致病菌的抗药性增强，效果降低，其次，长期大量使用化学药剂容易在植物体内残留，不利于健康。
发明内容
本发明的目的在于提供一种芹菜茎叶提取物的用途，能有效抑制番茄青枯病菌、根腐病菌的生长速率，显著降低生产中青枯病菌、根腐病菌对番茄植株的危害。芹菜茎叶提取物使用方便，成本低廉，纯天然，不存在残留和抗药性问题。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种芹菜茎叶提取物的用途，芹菜茎叶提取物作为番茄病害抑制剂的应用。
发明人在研究中意外发现芹菜茎叶提取物能有效抑制番茄青枯病菌、根腐病菌的生长速率，显著降低生产中青枯病菌、根腐病菌对番茄植株的危害。而芹菜茎叶提取物使用方便，成本低廉，纯天然，不存在残留和抗药性问题。青枯病为细菌病，根腐病为真菌病，芹菜茎叶提取物同时对细菌、真菌均有抑制作用。本发明发现芹菜茎叶提取物能有效抑制番茄青枯病菌、根腐病菌，能为农业生产带来显著的经济、生态效益。
作为优选，所述番茄病害为番茄青枯病或番茄根腐病。
作为优选，所述芹菜茎叶提取物的制备方法为：将芹菜茎叶洗净切碎后，放入榨汁机中榨汁，所得汁液过滤后，4℃低温保存。
作为优选，汁液过滤为先经过滤纸粗过滤，所得滤液然后再经过0.22微米滤头过滤除菌。
作为优选，所述芹菜茎叶提取物的制备方法为：将芹菜茎叶洗净切碎后，放入榨汁机中榨汁，所得汁液先经过滤纸粗过滤，所得滤液真空减压浓缩至原体积的20％，最后再经过0.22微米滤头过滤除菌，4℃低温保存。浓缩后的芹菜茎叶提取物使用效果更佳。
作为优选，所述芹菜茎叶提取物的制备方法为：将芹菜茎叶洗净切碎后，用研磨棒磨碎，滤纸过滤后收集滤液，滤液在-50℃条件下冷冻蒸发，浓缩至原体积的20％，最后再经过0.22微米滤头过滤除菌，4℃低温保存。
本发明的有益效果是：本发明发现了芹菜茎叶提取物的新用途，能有效抑制番茄青枯病菌、根腐病菌的生长速率，显著降低生产中青枯病菌、根腐病菌对番茄植株的危害。芹菜茎叶提取物使用方便，成本低廉，纯天然，不存在残留和抗药性问题。
附图说明
图1是加入芹菜茎叶提取物与不加芹菜茎叶提取物的番茄的生长对照图。
具体实施方式
下面通过具体实施例，对本发明的技术方案作进一步的具体说明。
本发明中，若非特指，所采用的原料和设备等均可从市场购得或是本领域常用的。下述实施例中的方法，如无特别说明，均为本领域的常规方法。
实施例1：芹菜茎叶抽提物对番茄青枯病菌(Pseudomonas solanacearum)的抑制作用
1.通过研磨法和超低温蒸发法搜集茎叶抽提物，具体步骤如下：
1)芹菜品种为‘津南实芹一号’，采用营养钵(草炭：蛭石＝3:1)，每钵均匀撒播种子20粒，人工气候室内培养(12小时人工光照，昼夜温度25℃/20℃)；2)60天后，将培养芹菜(高约40-50cm)地上部茎叶用剪刀搜集，洗净后切碎，用研磨棒磨碎，滤纸过滤后收集滤液，-50℃条件下冷冻蒸发，浓缩至原体积的1/5，即为芹菜茎叶提取物的浓缩液，0.22微米滤头过滤灭菌后4℃低温保存。
2.采用青枯假单胞菌Pseudomonas solanacearum(race1)(番茄抗青枯病筛选方法及其在抗青枯病育种中的应用，王荣青等，2007)作为本次评价菌种。该菌种的扩繁条件如下：
523培养基制备：七水合硫酸镁(0.3g)、磷酸氢二钾(2.0g)、酵母提取物(4.0g)、酪蛋白水解物(8.0g)、蔗糖(10.0g)、琼脂(15.0g)。上述组分混合并加入蒸馏水，形成1升溶液制剂，所述的溶液制剂进行高温高压(121℃，15分钟)后，放于4℃待用；
扩繁培养条件：高温融化固体培养基，20ml倒入90mm一次性灭菌培养皿，凝固后接种环接种Pseudomonas solanacearum(race1)。28℃黑暗培养2天，待用。
芹菜茎叶抽提物抑制番茄青枯病菌生长与繁殖：
1)从523培养基刮取扩繁的Pseudomonas solanacearum(race1)菌体，无菌水溶解稀释到OD600＝0.1；2)配置分别含有芹菜茎叶抽提物0微升,200微升,400微升,800微升的523固体培养基(20ml/培养皿)；3)在步骤2)中的4种含有不同浓度芹菜茎叶抽提物的固体培养基上接种OD600＝0.1的Pseudomonas solanacearum(race1)菌液2微升；4)三个不同时间点(48h、72h和96h)利用标尺分别测量固体培养基上的菌斑直径。
如表1所示，在523固体培养基上，不同浓度的芹菜茎叶抽提物对Pseudomonassolanacearum(race1)均有抑制作用，芹菜茎叶抽提物浓度越高，抑制作用越明显。
在人工气候室穴盘中种植番茄野生型株系‘Alisa’。待番茄植株长至5叶1心时，3株移栽至正常基质中(对照)，3株移栽至拌有芹菜茎叶提取物的基质中(处理)，同时在处理和对照的基质中加入番茄青枯病菌Pseudomonas solanacearum(race1)200ml(OD600＝0.1)，高湿环境下观察。结果表明5天后，对照组中3株番茄均发生青枯病症状，而处理组中的番茄生长正常(图1)。说明芹菜茎叶提取物有效抑制了基质中青枯病菌的活性，从而延缓甚至阻止了番茄植株的发病。
实施例2：芹菜茎叶抽提物对番茄根腐病的抑制作用
1、芹菜茎叶提取物的制备为：将芹菜(津南实芹一号)茎叶洗净切碎后，放入榨汁机中榨汁，所得汁液先经过滤纸粗过滤，所得滤液真空减压浓缩至原体积的20％，最后再经过0.22微米滤头过滤除菌，4℃低温保存。
2.采用番茄根腐病菌尖孢镰刀菌Fusariumoxysporumf.sp.Lycopersici(race 1)(浙江省农业科学院提供)作为本次评价菌种。该菌种的扩繁条件如下：
PDA培养基制备：：新鲜马铃薯200g，加蒸馏水煮沸，继续加热30分钟后，4层纱布过滤，滤液加葡萄糖18g，琼脂20g，溶解后加蒸馏水定容至1000ml，然后进行高温高压(121℃，15分钟)灭菌，自然pH；
扩繁培养条件：高温融化固体培养基，20ml倒入90mm一次性灭菌培养皿，凝固后接种环接种Fusariumoxysporumf.sp.Lycopersici(race 1)。25℃黑暗培养7-10天，待用。
芹菜茎叶抽提物抑制番茄根腐病菌生长与繁殖：
1)从PDA培养基刮取扩繁的Fusariumoxysporumf.sp.Lycopersici(race1)菌体，无菌水溶解稀释，置于摇床中以25℃、120r·min-1振荡30分钟，过滤除去菌体，配制浓度为3x106-5x106个·mL-1的孢子悬浮液；2)配置分别含有芹菜茎叶抽提物0微升,200微升,400微升,800微升的PDA固体培养基(20ml/培养皿)；3)在步骤2)中的4种含有不同浓度芹菜茎叶抽提物的固体培养基上接种3×106-5×106个孢子·mL-1的Fusariumoxysporumf.sp.Lycopersici(race 1)菌液2微升；4)三个不同时间点(24h、48h和72h)利用标尺分别测量固体培养基上的菌斑直径。
如表2所示，在PDA固体培养基上，不同浓度的芹菜茎叶抽提物对Fusariumoxysporumf.sp.Lycopersici(race 1)均有抑制作用，芹菜茎叶抽提物浓度越高，抑制作用越明显。
表1.不同剂量芹菜茎叶抽提物对青枯病菌斑的抑制效果
表2.不同剂量芹菜茎叶抽提物对根腐病菌斑的抑制效果
以上所述的实施例只是本发明的一种较佳的方案，并非对本发明作任何形式上的限制，在不超出权利要求所记载的技术方案的前提下还有其它的变体及改型。

Claims (4)

1.一种芹菜茎叶提取物的用途，其特征在于，芹菜茎叶提取物作为番茄病害抑制剂的应用；所述番茄病害为番茄青枯病或番茄根腐病；所述芹菜茎叶提取物的制备方法为：将芹菜茎叶洗净切碎后，放入榨汁机中榨汁，所得汁液过滤后，4℃低温保存。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，汁液过滤为先经过滤纸粗过滤，所得滤液然后再经过0.22微米滤头过滤除菌。
3.根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述芹菜茎叶提取物的制备方法为：将芹菜茎叶洗净切碎后，放入榨汁机中榨汁，所得汁液先经过滤纸粗过滤，所得滤液真空减压浓缩至原体积的20％，最后再经过0.22微米滤头过滤除菌，4℃低温保存。
4.一种芹菜茎叶提取物的用途，其特征在于，芹菜茎叶提取物作为番茄病害抑制剂的应用；所述番茄病害为番茄青枯病或番茄根腐病；所述芹菜茎叶提取物的制备方法为：将芹菜茎叶洗净切碎后，用研磨棒磨碎，滤纸过滤后收集滤液，滤液在-50℃条件下冷冻蒸发，浓缩至原体积的20％，最后再经过0.22微米滤头过滤除菌，4℃低温保存。
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