CN108008028A - 一种海产品中邻苯二甲酸酯类环境激素的分散固相萃取-气相色谱-质谱检测方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及海产品污染检测技术领域，尤其涉及一种海产品中邻苯二甲酸酯类环境激素的分散固相萃取‑气相色谱‑质谱检测方法，包括以下步骤：(1)样品的采集；(2)取样和超声波萃取；(3)浓缩；(4)分散固相萃取净化；(5)浓缩定容；(6)气相色谱‑质谱检测器检测；(7)标准曲线绘制；(8)回收率测定。本发明操作简单，超声波萃取效率高，能快速完成样品的前处理；首次采用石墨化炭黑作为固相吸附剂，分散固相萃取效率高，净化效果好；具有较高的灵敏度和回收率及重现性，16种邻苯二甲酸酯检出限为0.15～0.3μg/kg，回收率为74～116％，相对标准偏差(n＝5)为2.5～6.9％，可应用于海产品中邻苯二甲酸酯含量的准确测定。

Description

一种海产品中邻苯二甲酸酯类环境激素的分散固相萃取-气 相色谱-质谱检测方法
技术领域
本发明涉及海产品污染检测技术领域，尤其涉及一种海产品中邻苯二甲酸酯类环境激素的分散固相萃取-气相色谱-质谱检测方法。
背景技术
邻苯二甲酸酯，也称酞酸酯，是邻苯二甲酸酐与各类醇类酯化形成的一类重要有机物，主要包括自然来源和人工合成，广泛应用于塑料的增塑剂，用量占增塑剂总用量的80％左右。由于邻苯二甲酸酯与塑料基质之间以氢键和范德华力连接，因此很容易释放出来进入大气、水体、土壤等环境中，最终通过食物链富集危害人类健康。研究表明，邻苯二甲酸酯类化合物具有类雌激素样活性，它能对人和动物产生明确的生殖、发育毒性和致畸性。而近年来，与邻苯二甲酸酯污染相关的产品安全事件也层出不穷，早在1977年美国环保局将邻苯二甲酸二甲酯等6种邻苯二甲酸酯列为“优先污染物名单”，我国也将邻苯二甲酸二甲酯等3种列为优先监测污染物。
邻苯二甲酸酯可以通过各种途径进入江河湖海。研究发现国内水生生物已普遍受到邻苯二甲酸酯污染，研究对象主要针对淡水鱼和养殖鱼，含量一般在μg/kg至mg/kg数量级，其中以邻苯二甲酸二-2-乙基己酯和邻苯二甲酸二丁酯检出频率最高；国外从20世纪70年代开始对水生生物体内邻苯二甲酸酯污染残留进行了大量研究，研究对象多为海洋生物，含量水平一般较低(痕量甚至微量水平)。造成国内外水生生物体内邻苯二甲酸酯研究现状的差异，很可能是受到国内邻苯二甲酸酯检测技术手段的制约，人们的水产品消费习惯，大多数地区仍以淡水和养殖水产品为主以及人们对海洋生物中邻苯二甲酸酯类环境激素关注度还不够。目前国家对水产品中邻苯二甲酸酯的污染限量还尚未作规定，关于水产品中邻苯二甲酸酯残留量的检测也没有统一的检测方法。已报道的水产品中邻苯二甲酸酯检测方法主要有气相色谱法、高效液相色谱法、气相色谱质谱法及高效液相色谱质谱法，同时还需要结合索氏提取、振荡萃取、超声波萃取、加速溶剂萃取、微波辅助萃取、双水相提取等萃取及冷冻脱脂、乙腈饱和的正己烷脱脂、固相萃取净化、凝胶渗透色谱净化、分散固相萃取等1种至2种净化技术。
海产品基体复杂，萃取及净化步骤成为样品中邻苯二甲酸酯残留分析的关键。海产品中影响邻苯二甲酸酯检测的杂质主要为油脂和色素。文献报道中主要选用凝胶渗透色谱或固相萃取小柱/层析柱进行净化。采用凝胶渗透色谱净化，需要使用大量的洗脱溶剂，且设备投入较大；层析柱虽检测成本较低，但每次使用的吸附剂量较大，且需自己手动装填，重现性也较差；目前商品化的固相萃取小柱在样品净化中得到了广泛的应用，但仍需进行萃取柱活化、上样、淋洗、洗脱等过程，耗时较长，不适合批量样品处理；此外，近年来分散固相萃取净化在食品检测领域得到了广泛的应用，但针对水产品中的邻苯二甲酸酯，目前文献报道的方法是将N-丙基乙二胺吸附剂分散在2mL异丙醇或乙腈中，但研究发明，当水产品提取液颜色较深时，采用N-丙基乙二胺作为吸附剂，提取液颜色基本无变化，无法达到预期除杂效果，且检测灵敏度很差，如在王文文等检测的市售鱼、虾、牡蛎中，5种检出率较高的邻苯二甲酸二甲酯、邻苯二甲酸二乙酯、邻苯二甲酸二异丁酯、邻苯二甲酸二丁酯、邻苯二甲酸二-2-乙基己酯均为未检出。根据进一步实验证明，当N-丙基乙二胺分散在异丙醇中，除邻苯二甲酸二异丁酯、邻苯二甲酸二乙氧基乙基酯、邻苯二甲酸二-2-乙基己酯回收率略高 (70～78％)，其他13种邻苯二甲酸酯回收率均很低(23～64％)；当N-丙基乙二胺分散在乙腈中，16种邻苯二甲酸酯回收率都非常低(26～43％)。邻苯二甲酸酯类种类众多，性质差异较大，寻找一种合适的分散固相吸附剂，且不会带来基质效应，同时选择合适的分散剂以保证所有待分析的邻苯二甲酸酯的回收率，是突破现有方法的关键瓶颈。
发明内容
本发明的目的就是解决现有技术中的问题，提供了一种海产品中邻苯二甲酸酯类环境激素的分散固相萃取-气相色谱-质谱检测方法，以实现快速、准确地测定海产品中邻苯二甲酸酯含量的测定。
为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
一种海产品中邻苯二甲酸酯类环境激素的分散固相萃取-气相色谱-质谱检测方法，包括以下步骤：
(1)样品的采集和制样：将待检测的海产品进行前处理得到块体样品，用高速组织捣碎机匀质，得到待测样品，于-18℃冷冻保存，待测；所述的待检测的海产品可通过渔船拖网直接采集于海洋或购买于水产码头、超市、农贸市场、水产批发市场，采用洁净的锡箔纸包装并密封于聚乙烯袋子中进行运输；
(2)取样和超声波萃取：称取2g上述待测样品，置于玻璃离心管中，加入10～20mL体积比为1:1的正己烷/二氯甲烷萃取剂，涡旋1～3min，以300～400W功率于30～40℃超声波提取10～20min；当样品中含硫化合物的背景干扰时，加入1～3g铜粉超声脱硫，3000～6000r/m 高速离心3～5min，取上清液，得到正己烷/二氯甲烷提取液，所述正己烷/二氯甲烷提取液过无水硫酸钠柱；再向样品中加入10～20mL正己烷，重复上述过程，得到正己烷提取液；将所述正己烷/二氯甲烷提取液和正己烷提取液合并，得到混合提取液；
在进行萃取方式的选择时，考虑到振荡萃取、索氏提取等传统的萃取方法处理周期长、溶剂消耗量大。微波辅助萃取、加速溶剂萃取等仪器和技术成本相对较高。王文文等提出的双水相萃取水产品中邻苯二甲酸酯，萃取效率差，灵敏度低。而超声波萃取法不仅能有效地将结构稳定的有机物从固体样品中萃取出来，且具有效率高、仪器价格便宜、操作简单等优点，目前用该法萃取海产品中邻苯二甲酸酯已有不少报道。因此，本发明选择超声波萃取法萃取海产品中的邻苯二甲酸酯；
(3)浓缩：将步骤(2)得到的混合提取液，在水泵真空度0.08～0.09Mpa，水浴温度35～40℃，转速50～100rpm条件下，用旋转蒸发仪蒸发至干，加入2mL正己烷溶解，得到正己烷溶解液；
(4)分散固相萃取净化：取150～250mg石墨化炭黑于试管中，加入步骤(3)得到的正己烷溶解液，涡旋30～60s，3000～6000r/m高速离心1～3min，取上清液a；再向上述石墨化炭黑中加入2mL丙酮，重复上述涡旋离心过程，取上清液b；再向上述石墨化炭黑中加入2mL 二氯甲烷，重复上述涡旋离心过程，取上清液c；再向上述石墨化炭黑中加入2mL甲醇，重复上述涡旋离心过程，取上清液d；合并上清液a、b、c、d，得到混合上清液；
海产品中影响邻苯二甲酸酯检测的杂质主要为油脂和色素。文献报道中主要选用凝胶渗透色谱或固相萃取小柱/层析柱进行净化。采用凝胶渗透色谱净化，需要使用大量的洗脱溶剂，且设备投入较大；层析柱虽检测成本较低，但每次使用的吸附剂量较大，且需自己手动装填，重现性也较差；目前商品化的固相萃取小柱在样品净化中得到了广泛的应用，但仍需进行萃取柱活化、上样、淋洗、洗脱等过程，耗时较长，不适合批量样品处理；而采用冷冻脱脂、乙腈饱和的正己烷脱脂，一步净化不能除杂干净，还需要结合固相萃取等净化方式；此外，近年来分散固相萃取净化在食品检测领域得到了广泛的应用，但针对水产品中的邻苯二甲酸酯，目前文献报道的方法是将N-丙基乙二胺吸附剂分散在2mL异丙醇或乙腈中，但研究发明，但水产品提取液颜色较深时，采用N-丙基乙二胺作为吸附剂，提取液颜色基本无变化，且检测灵敏度很差，在王文文等检测的市售鱼、虾、牡蛎中，5种检出率较高的邻苯二甲酸二甲酯、邻苯二甲酸二乙酯、邻苯二甲酸二异丁酯、邻苯二甲酸二丁酯、邻苯二甲酸二-2-乙基己酯均为未检出。根据进一步实验证明，当N-丙基乙二胺分散在异丙醇中，除邻苯二甲酸二异丁酯、邻苯二甲酸二乙氧基乙基酯、邻苯二甲酸二-2-乙基己酯回收率略高(70～78％)，其他13种邻苯二甲酸酯回收率均很低(23～64％)；当N-丙基乙二胺分散在乙腈中，16种邻苯二甲酸酯回收率都非常低(26～43％)。为寻找合适的吸附剂和分散剂，本实验分别考察了 200mg石墨化炭黑、N-丙基乙二胺、弗罗里硅土、硅胶、中性氧化铝、C18等吸附剂的除杂效果，结果表明，各吸附剂对分散液颜色的净化效果依次为，石墨化炭黑>弗罗里硅土>硅胶>N-丙基乙二胺>C18>中性氧化铝，使用石墨化炭黑作为吸附剂，分散液颜色基本无色透明。使用石墨化炭黑，所有化合物回收率相对较高(73～107％)。综合考虑提取液的颜色、除杂效果及回收率，最终选择石墨化炭黑作为吸附剂；
根据选定的石墨化炭黑，比较了50mg、100mg、150mg、200mg、250mg、300mg、350mg、400mg石墨化炭黑对净化效果和回收率的影响，结果表明，石墨化炭黑对邻苯二甲酸酯既有富集作用，对杂质又有净化作用。随着吸附剂用量的增加，提取液颜色逐渐趋于透明，但邻苯二甲酸二甲氧基乙酯、邻苯二甲酸二乙氧基乙基酯、邻苯二甲酸二丁氧基乙基酯、邻苯二甲酸二正辛酯、邻苯二甲酸二苯酯回收率逐渐下降，其他组分回收率变化不明显，综合考虑，选择150～250mg石墨化炭黑作为吸附剂；
文献报道中采用分散固相萃取净化土壤或生物样中邻苯二甲酸酯时，仅采用1种分散剂。如将C18分散在丙酮中，N-丙基乙二胺分散在异丙醇中。本发明发现，不同邻苯二甲酸酯性质差别较大，不管采用哪种吸附剂，仅用一种分散剂无法使所有邻苯二甲酸酯类化合物都有较好的回收率。根据上述选定的200mg石墨化炭黑，分别以2mL正己烷、丙酮、甲醇、异丙醇、乙酸乙酯、乙腈、二氯甲烷为分散剂，研究了石墨化炭黑在不同分散剂中对邻苯二甲酸酯的吸附效果。结果表明，使用正己烷，对于大多数邻苯二甲酸酯吸附不明显，仅对邻苯二甲酸二甲氧基乙酯、邻苯二甲酸二丁氧基乙基酯、邻苯二甲酸二苯酯有较强的吸附回收率为 32～62％；使用丙酮，对邻苯二甲酸二苯酯相比吸附较弱；使用二氯甲烷，对邻苯二甲酸二乙氧基乙基酯基本无吸附；使用甲醇，对邻苯二甲酸二甲氧基乙酯、邻苯二甲酸丁苄酯、酸二丁氧基乙基酯、邻苯二甲酸二正辛酯相比吸附较弱；而采用异丙醇、乙酸乙酯、乙腈，对绝大多数邻苯二甲酸酯均有不同程度的吸附，这有可能是因为不同邻苯二甲酸酯在不同分散剂和石墨化炭黑间的分配系数不同。为使各分析物质都有较大的回收率，最终依次选用2mL正己烷、2mL丙酮、2mL二氯甲烷、2mL甲醇作为分散剂；
(5)浓缩定容：将步骤(4)得到的混合上清液在水浴温度40～50℃下，吹氮蒸发至干，用正己烷溶解，并定容至1mL，作为上机溶液；
(6)气相色谱-质谱检测器检测：进样针抽取上述上机溶液，按照设定好的气相色谱-质谱条件进行检测；
(7)标准曲线绘制：以选择离子监测模式定性，外标法定量；
(8)回收率测定：将采集到的实际样品，按照上述步骤(1)～(6)的要求进行操作，并与上述步骤(7)得到的标准曲线比较，通过换算最终得到实际样品中16种邻苯二甲酸酯的含量；
将不同加标浓度的加标样品，按照上述步骤(2)～(6)的要求分别进行五次平行操作，并与上述步骤(7)得到的标准曲线比较，通过换算最终得到加标样品中16种邻苯二甲酸酯的测定浓度；按照下式进行回收率计算：
式中：R——回收率，％；
Cs——加标样品中16种邻苯二甲酸酯的测定浓度，μg/kg；
C0——实际样品中16种邻苯二甲酸酯的浓度，μg/kg；
C——加标样品中16种邻苯二甲酸酯的理论加标浓度，μg/kg；
所述加标样品为经步骤(1)预处理后的实际样品中加入邻苯二甲酸酯后的样品。
本发明采用超声波萃取、分散固相萃取净化、气相色谱质谱法测定海产品中的邻苯二甲酸酯，该方法操作简单，能快速完成样品前处理，其中首次采用石墨化炭黑作为固相吸附剂，且需分别分散在正己烷、二氯甲烷、丙酮、甲醇中，整个分散固相萃取净化过程只需要 5～15min，经分散固相萃取净化后，所有样品上机溶液均无色透明，结果准确，16种邻苯二甲酸酯检出限为0.15～0.3μg/kg，回收率为74～116％，相对标准偏差(n＝5)为2.5～6.9％，具有较高的灵敏度和令人满意的回收率及重现性，能用于海产品中邻苯二甲酸酯的含量测定。
作为优选，步骤(1)中，所述待检测的海产品为鱼，虾，蟹和贝类中的一种。
作为优选，所述将待检测的海产品进行前处理的方法为：
鱼：去鳞、去皮，沿脊背取肌肉；
虾、蟹：去头、去壳、去附肢，取肌肉；
贝类：去壳，取可食部分；
将上述样品切块，得到块体样品，所述块体样品的体积不大于0.5cm×0.5cm×0.5cm。
作为优选，步骤(8)中，所述16种邻苯二甲酸酯为苯二甲酸二甲酯，邻苯二甲酸二乙酯，邻苯二甲酸二异丁酯，邻苯二甲酸二丁酯，邻苯二甲酸二-4-甲基-2-戊基酯，邻苯二甲酸二甲氧基乙酯，邻苯二甲酸二正戊酯，邻苯二甲酸二乙氧基乙基酯，邻苯二甲酸二己酯，邻苯二甲酸丁苄酯，邻苯二甲酸二-2-乙基己酯，邻苯二甲酸二丁氧基乙基酯，邻苯二甲酸二环己酯，邻苯二甲酸二正辛酯，邻苯二甲酸二苯酯和邻苯二甲酸二壬酯。
作为优选，步骤(6)中，
气相色谱-质谱检测器检测的色谱条件为：进样口温度为260℃；载气为体积含量99.999％的高纯氦气，流速为1mL/min；进样体积为1μL；进样方式为不分流进样，0.75min后以15mL/min 吹扫；传输线温度260℃；气相色谱柱升温程序为：初始温度100℃，以10℃/min升温至290℃；保持5.0min，总运行时间24min；
质谱条件为：电子轰击(EI)离子源，离子源温度230℃，电离能量70eV；溶剂延迟3min；四级杆温度150℃，扫描范围50～450amu，检索蒲库NIST；选择离子监测，定性和定量离子见表1：
表1.本发明16种邻苯二甲酸酯的保留时间、定量离子、定性离子
气相色谱柱选用规格为30m×0.25mm×0.25μm的HP-35MS毛细管气相色谱柱，固定相为二苯基与二甲基聚硅氧烷的混合液，其中二苯基的质量分数为35％，二甲基聚硅氧烷的质量分数为65％，能实现16种邻苯二甲酸酯的有效分离。
作为优选，步骤(2)中，所述铜粉使用前先用稀盐酸处理除去其表面氧化膜，再用蒸馏水冲洗除去附在其表面的少量酸，最后用丙酮冲洗并在体积含量99.999％的高纯氮气流下吹干，以防铜粉被再次氧化。
作为优选，步骤(7)中，选择离子监测模式进行定性时，将标准溶液按照上述步骤(6)的要求进行操作得到标准溶液的总离子流图色谱图，并与单个分析物的总离子流图色谱图进行定性离子、定量离子比较，同时结合保留时间，确定16种邻苯二甲酸酯的种类；所述16种邻苯二甲酸酯的定性离子、定量离子、保留时间用以作为外标法定量时，16种邻苯二甲酸酯色谱峰识别的依据；所述的标准溶液中溶质为邻苯二甲酸酯，溶剂为正己烷，浓度均为 100μg/L；
外标法定量时，将不同加标浓度的标准曲线系列溶液，根据加入的邻苯二甲酸酯浓度和相应定量离子积分峰面积的对应关系建立标准曲线；所述标准曲线系列溶液中溶质为邻苯二甲酸酯，溶剂为正己烷，浓度范围均为1～1000μg/L。
因此，本发明具有如下有益效果：
(1)操作简单，超声波萃取效率高，能快速完成样品的前处理；
(2)首次采用石墨化炭黑作为固相吸附剂，且固相吸附剂分散在多种分散剂中，分散固相萃取效率高，净化效果好；
(3)具有较高的灵敏度和回收率及重现性，16种邻苯二甲酸酯检出限为0.15～0.3μg/kg，回收率为74～116％，相对标准偏差(n＝5)为2.5～6.9％，可应用于海产品中邻苯二甲酸酯含量的准确测定。
附图说明
图1为16种邻苯二甲酸酯标准溶液(100μg/L)的总离子流图色谱图。
图2为不同萃取剂对邻苯二甲酸酯的萃取效果比较图。
图3为不同吸附剂对邻苯二甲酸酯净化效果比较图。
图4为不同固相吸附剂净化时总离子流色谱图。
图5为石墨化炭黑在不同分散剂中对邻苯二甲酸酯吸附影响图。
图6为实施例1中温州洞头海域采集的花鲈样品(A)和加标温州洞头海域采集的花鲈样品(B)的总离子流色谱图。
图中，邻苯二甲酸二甲酯1，邻苯二甲酸二乙酯2，邻苯二甲酸二异丁酯3，邻苯二甲酸二丁酯4，邻苯二甲酸二-4-甲基-2-戊基酯5，邻苯二甲酸二甲氧基乙酯6，邻苯二甲酸二正戊酯7，邻苯二甲酸二乙氧基乙基酯8，邻苯二甲酸二己酯9，邻苯二甲酸丁苄酯10，邻苯二甲酸二-2-乙基己酯11，邻苯二甲酸二丁氧基乙基酯12，邻苯二甲酸二环己酯13，邻苯二甲酸二正辛酯14，邻苯二甲酸二苯酯15，邻苯二甲酸二壬酯16。
具体实施方式
下面通过具体实施例，对本发明的技术方案作进一步具体的说明。
在本发明中，若非特指，所有设备和原料均可从市场购得或是本行业常用的，下述实施例中的方法，如无特别说明，均为本领域常规方法。
下面实施例所使用的仪器设备主要有美国Agilent科技有限公司生产的7890B/5977A 气相色谱质谱仪。
实施例1
温州洞头海域采集的花鲈样品中16种多邻苯二甲酸酯的测定：
(1)样品的采集和制样：将温州洞头海域采集的花鲈样品，用洁净的铝箔包装并密封于聚乙烯袋子中，然后用便携式冷藏箱运回实验室，再将样品再将样品去鳞、去皮，沿脊背取肌肉，切为体积不大于0.5cm×0.5cm×0.5cm的块状样品，用高速组织捣碎机匀质，得到待测样品，于-18℃冷冻保存，待测；
(2)取样和超声波萃取：称取2g上述步骤(1)处理好的温州洞头海域采集的花鲈样品，置于玻璃离心管中，加入15mL体积比为1:1的正己烷/二氯甲烷萃取剂，涡旋2min，以300W功率于35℃超声波提取15min；当样品中含硫化合物的背景干扰时，加入2g铜粉超声脱硫，3000r/m高速离心3min，取上清液，得到正己烷/二氯甲烷提取液，所述正己烷/二氯甲烷提取液过无水硫酸钠柱；再向样品中加入15mL的正己烷，重复上述过程，得到正己烷提取液；将所述正己烷/二氯甲烷提取液和正己烷提取液合并，得到混合提取液；
其中，上述铜粉使用前先用稀盐酸处理除去其表面氧化膜，再用蒸馏水冲洗除去附在其表面的少量酸，最后用丙酮冲洗并在体积含量99.999％的高纯氮气流下吹干；
在进行萃取剂选择时，考虑到不同萃取剂对邻苯二甲酸酯的萃取效率不同，本发明选用正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、正己烷：二氯甲烷(1:1，v/v)、正己烷：乙酸乙酯(1:1，v/v)、正己烷：二氯甲烷(1:1，v/v)/正己烷为萃取剂，进行超声波萃取效果对比实验，图2不同萃取剂对邻苯二甲酸酯的萃取效果比较图，结果表明，使用正己烷重复萃取两次时，邻苯二甲酸二甲酯、邻苯二甲酸二异丁酯、邻苯二甲酸二丁酯、邻苯二甲酸二甲氧基乙酯、邻苯二甲酸二乙氧基乙基酯回收率较低(48～67％)，邻苯二甲酸二正辛酯、邻苯二甲酸二苯酯、邻苯二甲酸二壬酯相较其他萃取剂略高(75～77％)；使用二氯甲烷，邻苯二甲酸二甲酯、邻苯二甲酸二异丁酯、邻苯二甲酸二丁酯、邻苯二甲酸二己酯、邻苯二甲酸二环己酯、邻苯二甲酸二正辛酯、邻苯二甲酸二苯酯、邻苯二甲酸二壬酯回收率较低(54～68％)；使用乙酸乙酯，邻苯二甲酸二乙酯、邻苯二甲酸二异丁酯、邻苯二甲酸二丁酯、邻苯二甲酸二乙氧基乙基酯、邻苯二甲酸二己酯、邻苯二甲酸丁苄酯、邻苯二甲酸二丁氧基乙基酯、邻苯二甲酸二环己酯、邻苯二甲酸二正辛酯、邻苯二甲酸二苯酯、邻苯二甲酸二壬酯回收率较低(47～68％)；使用正己烷：乙酸乙酯(1,1，v/v)，邻苯二甲酸二甲酯、邻苯二甲酸二丁酯、邻苯二甲酸二苯酯回收率略低(62～69％)；使用正己烷：二氯甲烷(1,1，v/v)，邻苯二甲酸二正辛酯回收率略低(68％)；使用正己烷：二氯甲烷(1,1，v/v)/正己烷，16种邻苯二甲酸酯回收率范围为72～103％，整体回收率最高，因此实验依次采用正己烷：二氯甲烷(1:1，v/v)、正己烷超声波萃取两次。
(3)浓缩：将步骤(2)得到的混合提取液，在水泵真空度0.085Mpa，水浴温度38℃，转速80rpm条件下，用旋转蒸发仪蒸发至干，加入2mL正己烷溶解，得到正己烷溶解液；
(4)分散固相萃取净化：将步骤(3)得到的正己烷溶解液转移至装有150mg得石墨化炭黑的试管中，涡旋45s，4500r/m高速离心2min，取上清液a；再向石墨化炭黑中加入2mL丙酮，重复上述涡旋离心过程，取上清液b(丙酮溶解液)；再向石墨化炭黑中加入2mL二氯甲烷，重复上述涡旋离心过程，取上清液c(二氯甲烷溶解液)；再向石墨化炭黑中加入2mL甲醇，重复上述涡旋离心过程，取上清液d(甲醇溶解液)；取出的上清液a、b、c、d每次都在一个试管里，合并上清液a、b、c和d，得到混合上清液；
不同吸附剂的除杂效果如附图3和附图4所示，使用N-丙基乙二胺，邻苯二甲酸二苯酯回收率很低(33％)；使用C18，邻苯二甲酸二-4-甲基-2-戊基酯、邻苯二甲酸二甲氧基乙酯、邻苯二甲酸丁苄酯、邻苯二甲酸二环己酯、邻苯二甲酸二壬酯回收率较低(61～66％)，且邻苯二甲酸二正戊酯、邻苯二甲酸二乙氧基乙基酯附近有杂质干扰；使用硅胶，邻苯二甲酸二甲氧基乙酯回收率较低(37％)，且邻苯二甲酸二乙氧基乙基酯附近有杂质干扰；使用弗罗里硅土，邻苯二甲酸二甲氧基乙酯回收率较低(66％)，且邻苯二甲酸二乙氧基乙基酯附近有杂质干扰；使用中性氧化铝，邻苯二甲酸二正辛酯存在一定的基质效应；使用石墨化炭黑，所有化合物回收率相对较高(73～107％)。综合考虑提取液的颜色、除杂效果及回收率，本发明最终选择石墨化炭黑作为吸附剂的效果最好；
图5为石墨化炭黑在不同分散剂中对邻苯二甲酸酯吸附影响图。如图5所示，使用正己烷，对于大多数邻苯二甲酸酯吸附不明显，仅对邻苯二甲酸二甲氧基乙酯、邻苯二甲酸二丁氧基乙基酯、邻苯二甲酸二苯酯有较强的吸附回收率为32～62％；使用丙酮，对邻苯二甲酸二苯酯相比吸附较弱；使用二氯甲烷，对邻苯二甲酸二乙氧基乙基酯基本无吸附；使用甲醇，对邻苯二甲酸二甲氧基乙酯、邻苯二甲酸丁苄酯、酸二丁氧基乙基酯、邻苯二甲酸二正辛酯相比吸附较弱；而采用异丙醇、乙酸乙酯、乙腈，对绝大多数邻苯二甲酸酯均有不同程度的吸附，这有可能是因为不同邻苯二甲酸酯在不同分散剂和石墨化炭黑间的分配系数不同。为使各分析物质都有较大的回收率，最终依次选用2mL正己烷、2mL丙酮、2mL二氯甲烷、2mL甲醇作为分散剂。
(5)浓缩定容：将步骤(4)得到的混合上清液在水浴温度45℃下，吹氮蒸发至干，用正己烷溶解，并定容至1mL，作为上机溶液；
(6)气相色谱-质谱检测器检测：进样针抽取上述上机溶液，按照设定好的气相色谱-质谱条件进行检测；
气相色谱-质谱检测器检测的色谱条件为：进样口温度为260℃；载气为体积含量99.999％的高纯氦气，流速为1mL/min；进样体积为1μL；进样方式为不分流进样，0.75min后以15mL/min 吹扫；传输线温度260℃；气相色谱柱升温程序为：初始温度100℃，以10℃/min升温至290℃；保持5.0min，总运行时间24min；
质谱条件为：电子轰击(EI)离子源，离子源温度230℃，电离能量70eV；溶剂延迟3min；四级杆温度150℃，扫描范围50～450amu，检索蒲库NIST；选择离子监测，定性和定量离子见表1：
表1.本发明16种邻苯二甲酸酯的保留时间、定量离子、定性离子
气相色谱柱选用规格为30m×0.25mm×0.25μm的HP-35MS毛细管气相色谱柱，固定相为二苯基与二甲基聚硅氧烷的混合液，其中二苯基的质量分数为35％，二甲基聚硅氧烷的质量分数为65％，能实现16种邻苯二甲酸酯的有效分离；
(7)标准曲线绘制：以选择离子监测模式定性，外标法定量；
以选择离子监测模式进行定性时，取浓度1000μg/L的邻苯二甲酸二甲酯、邻苯二甲酸二乙酯、邻苯二甲酸二异丁酯、邻苯二甲酸二丁酯、邻苯二甲酸二-4-甲基-2-戊基酯、邻苯二甲酸二甲氧基乙酯、邻苯二甲酸二正戊酯、邻苯二甲酸二乙氧基乙基酯、邻苯二甲酸二己酯、邻苯二甲酸丁苄酯、邻苯二甲酸二-2-乙基己酯、邻苯二甲酸二丁氧基乙基酯、邻苯二甲酸二环己酯、邻苯二甲酸二正辛酯、邻苯二甲酸二苯酯、邻苯二甲酸二壬酯的邻苯二甲酸酯混合标准使用液100μL，用正己烷定容至1mL，得到浓度均为100μg/L的标准溶液；将标准溶液按照上述步骤(6)的要求进行操作得到标准溶液的总离子流图色谱图，并与单个分析物的总离子流图色谱图进行定性离子、定量离子比较，同时结合保留时间，确定16种邻苯二甲酸酯的种类；这16种邻苯二甲酸酯的定性离子、定量离子、保留时间用以作为外标法定量时，16种邻苯二甲酸酯色谱峰识别的依据。附图1为标准溶液的总离子流色谱图。
外标法定量时，分别取浓度为100μg/L的邻苯二甲酸酯标准溶液10、50μL，和浓度为 1000μg/L的邻苯二甲酸酯混合标准使用液50、250、500、1000μL，用正己烷定容至1mL，得到六次加标浓度范围均为1～1000μg/L的标准曲线系列溶液；将六种不同加标浓度的标准曲线系列溶液，根据加入的邻苯二甲酸酯浓度和相应定量离子积分峰面积的对应关系建立标准曲线。
表2为本发明方法的线性回归方程、线性范围、相关系数和检出限。由表2可知，各邻苯二甲酸酯在相应的线性范围内，具有良好的线性关系，满足分析方法要求。
表2.本发明方法的线性回归方程，线性范围，相关系数和检出限
其中，a：y和x分别代表分析物相应定量离子积分峰面积和分析物在1mL正己烷中的理论浓度；b：线性范围代表分析物在标准曲线系列溶液中的浓度；
(8)回收率测定：采集温州洞头海域采集的花鲈样品，按照上述步骤(1)～(6)的要求进行操作，并与上述步骤(7)得到的标准曲线比较，通过换算最终得到实际样品中16种邻苯二甲酸酯的含量；
使用上述实际样品，按照(1)步骤的要求处理后，取2g处理好的温州洞头海域采集的花鲈样品，分别加入100μL的100μg/L邻苯二甲酸酯标准溶液和100、500μL的1000μg/L邻苯二甲酸酯混合标准使用液，配制成低(5μg/kg)，中(50μg/kg)和高(250μg/kg)三种添加浓度水平的温州洞头海域采集的花鲈样品加标样品，按照上述步骤(2)～(6)的要求分别进行五次平行操作，并与上述步骤(7)得到的标准曲线比较，通过换算最终得到加标样品中16 种邻苯二甲酸酯的测定浓度；按照下式进行回收率计算：
式中：R——回收率，％；
Cs——加标样品中16种邻苯二甲酸酯的测定浓度，μg/kg；
C0——实际样品中16种邻苯二甲酸酯的浓度，μg/kg；
C——加标样品中16种邻苯二甲酸酯的理论加标浓度，μg/kg；
表3.温州洞头海域采集的花鲈样品中不同加标浓度水平的加标回收实验结果
经检测，温州洞头海域采集的花鲈样品中邻苯二甲酸二甲酯、邻苯二甲酸二乙酯、邻苯二甲酸二异丁酯、邻苯二甲酸二丁酯、邻苯二甲酸二-2-乙基己酯均有检出，且含量较高，温州洞头海域采集的花鲈样品中不同加标浓度水平的加标回收实验结果见表3。图6为实施例3中温州洞头海域采集的花鲈样品(A)和加标温州洞头海域采集的花鲈样品(B)的总离子流色谱图；
由表3可以看出，通过换算最终得到温州洞头海域采集的花鲈样品中16种邻苯二甲酸酯的测定浓度，其中邻苯二甲酸二甲酯、邻苯二甲酸二乙酯、邻苯二甲酸二异丁酯、邻苯二甲酸二丁酯、邻苯二甲酸二-2-乙基己酯含量分别为1.08、1.72、99.6、32.8、74.8μg/kg，其他邻苯二甲酸酯均未检出。加标温州洞头海域采集的花鲈样品按照上述步骤(1)～(6)的要求分别进行五次平行操作，并与上述步骤(7)得到的标准曲线比较，通过换算最终得到加标温州洞头海域采集的花鲈样品中16种邻苯二甲酸酯的测定浓度，并计算回收率，五次平行测定的相对标准偏差。由表3可知，加标温州洞头海域采集的花鲈样品回收率为74～116﹪，相对标准偏差(n＝5)为2.5～6.9﹪，满足分析方法对回收率和重现性要求。
实施例2
舟山某水产码头购买的哈氏仿对虾样品中16种多邻苯二甲酸酯的测定：
(1)样品的采集和制样：将舟山某水产码头购买的哈氏仿对虾样品，用洁净的铝箔包装并密封于聚乙烯袋子中，然后用便携式冷藏箱运回实验室，再将样品去头、去壳、去附肢，取肌肉，切为体积不大于0.5cm×0.5cm×0.5cm的块状样品，用高速组织捣碎机匀质，得到待测样品，于-18℃冷冻保存，待测；
(2)取样和超声波萃取：称取2g上述步骤(1)处理好的舟山某水产码头购买的哈氏仿对虾样品，置于玻璃离心管中，加入10mL体积比为1:1的正己烷/二氯甲烷萃取剂，涡旋1min，以400W功率于30℃超声波提取10min；当样品中含硫化合物的背景干扰时，加入1g铜粉超声脱硫，6000r/m高速离心3min，取上清液，得到正己烷/二氯甲烷提取液，所述正己烷/二氯甲烷提取液过无水硫酸钠柱；再向样品中加入10mL正己烷，重复上述过程，得到正己烷提取液；将所述正己烷/二氯甲烷提取液和正己烷提取液合并，得到混合提取液；
(3)浓缩：将步骤(2)得到的混合提取液，在水泵真空度0.08Mpa，水浴温度35℃，转速50rpm条件下，用旋转蒸发仪蒸发至干，加入2mL正己烷溶解，得到正己烷溶解液；
(4)分散固相萃取净化：将步骤(3)得到的正己烷溶解液转移至装有250mg得石墨化炭黑的试管中，涡旋30s，3000r/m高速离心3min，取上清液a；再向石墨化炭黑中加入2mL丙酮，重复上述涡旋离心过程，取上清液b(丙酮溶解液)；再向石墨化炭黑中加入2mL二氯甲烷，重复上述涡旋离心过程，取上清液c(二氯甲烷溶解液)；再向石墨化炭黑中加入2mL甲醇，重复上述涡旋离心过程，取上清液d(甲醇溶解液)；取出的上清液a、b、c、d每次都在一个试管里，合并上清液a、b、c和d，得到混合上清液；
(5)浓缩定容：将步骤(4)得到的混合上清液在水浴温度40℃下，吹氮蒸发至干，用正己烷溶解，并定容至1mL，作为上机溶液；
(6)气相色谱-质谱检测器检测：与实施例1的测试条件完全相同；
(7)标准曲线绘制：与实施例1的测试条件完全相同；
(8)回收率测定：舟山某水产码头购买的哈氏仿对虾样品按照上述步骤(1)～(6)的要求进行操作后，与上述步骤(7)得到的标准曲线比较，通过换算最终得到舟山某水产码头购买的哈氏仿对虾样品中16种邻苯二甲酸酯的测定浓度，其中邻苯二甲酸二甲酯、邻苯二甲酸二乙酯、邻苯二甲酸二异丁酯、邻苯二甲酸二丁酯、邻苯二甲酸二-2-乙基己酯含量分别为2.85、15.3、98.6、207、282μg/kg，其他邻苯二甲酸酯均未检出。加标舟山某水产码头购买的哈氏仿对虾样品按照上述步骤(1)～(6)的要求分别进行五次平行操作，并与上述步骤(7)得到的标准曲线比较，通过换算最终得到加标舟山某水产码头购买的哈氏仿对虾样品中16种邻苯二甲酸酯的测定浓度，并计算回收率，五次平行测定的相对标准偏差。加标舟山某水产码头购买的哈氏仿对虾样品回收率为80～112﹪，相对标准偏差(n＝5)为3.5～6.6﹪，满足分析方法对回收率和重现性要求。
实施例3
舟山某农贸市场购买的梭子蟹样品中16种多邻苯二甲酸酯的测定：
(1)样品的采集和制样：将舟山某农贸市场购买的梭子蟹样品，用洁净的铝箔包装并密封于聚乙烯袋子中，然后用便携式冷藏箱运回实验室，再将样品去头、去壳、去附肢，取肌肉，切为体积不大于0.5cm×0.5cm×0.5cm的块状样品，用高速组织捣碎机匀质，得到待测样品，于-18℃冷冻保存，待测；
(2)取样和超声波萃取：称取2g上述步骤(1)处理好的舟山某农贸市场购买的梭子蟹样品，置于玻璃离心管中，加入20mL体积比为1:1的正己烷/二氯甲烷萃取剂，涡旋3min，以350W 功率于40℃超声波提取20min；当样品中含硫化合物的背景干扰时，加入3g铜粉超声脱硫， 4000r/m高速离心4min，取上清液，得到正己烷/二氯甲烷提取液，所述正己烷/二氯甲烷提取液过无水硫酸钠柱；再向样品中加入20mL正己烷，重复上述过程，得到正己烷提取液；将所述正己烷/二氯甲烷提取液和正己烷提取液合并，得到混合提取液；
(3)浓缩：将步骤(2)得到的混合提取液，在水泵真空度0.09Mpa，水浴温度40℃，转速100rpm条件下，用旋转蒸发仪蒸发至干，加入2mL正己烷溶解，得到正己烷溶解液；
(4)分散固相萃取净化：取200mg石墨化炭黑于试管中，加入步骤(3)得到的正己烷溶解液，涡旋60s，6000r/m高速离心3min，取上清液a；再向上述石墨化炭黑中加入2mL丙酮，重复上述涡旋离心过程，取上清液b；再向上述石墨化炭黑中加入2mL二氯甲烷，重复上述涡旋离心过程，取上清液c；再向上述石墨化炭黑中加入2mL甲醇，重复上述涡旋离心过程，取上清液d；合并上清液a、b、c、d，得到混合上清液；(5)浓缩定容：将步骤(4)得到的混合上清液在水浴温度50℃下，吹氮蒸发至干，用正己烷溶解，并定容至1mL，作为上机溶液；
(6)气相色谱-质谱检测器检测：与实施例1的测试条件完全相同；
(7)标准曲线绘制：与实施例1的测试条件完全相同；
(8)回收率测定：舟山某农贸市场购买的梭子蟹样品按照上述步骤(1)～(6)的要求进行操作后，与上述步骤(7)得到的标准曲线比较，舟山某农贸市场购买的梭子蟹样品中不同加标浓度水平的加标回收实验结果见表4。
表4.舟山某农贸市场购买的梭子蟹样品中不同加标浓度水平的加标回收实验结果
由表4可知，通过换算最终得到舟山某农贸市场购买的梭子蟹样品中16种邻苯二甲酸酯的测定浓度，其中邻苯二甲酸二甲酯、邻苯二甲酸二乙酯、邻苯二甲酸二异丁酯、邻苯二甲酸二丁酯、邻苯二甲酸二-2-乙基己酯含量分别为0.96、6.58、170、159、84.8μg/kg，其他邻苯二甲酸酯均未检出。加标舟山某农贸市场购买的梭子蟹样品按照上述步骤(1)～(6)的要求分别进行五次平行操作，并与上述步骤(7)得到的标准曲线比较，通过换算最终得到加标舟山某农贸市场购买的梭子蟹样品中16种邻苯二甲酸酯的测定浓度，并计算回收率，五次平行测定的相对标准偏差。由表3可知，加标舟山某农贸市场购买的梭子蟹样品回收率为79～116 ﹪，相对标准偏差(n＝5)为2.8～6.2﹪，满足分析方法对回收率和重现性要求。
实施例4
乐清湾滩涂采集的缢蛏样品中16种多邻苯二甲酸酯的测定：
(1)样品的采集和制样：将乐清湾滩涂采集的缢蛏样品，用洁净的铝箔包装并密封于聚乙烯袋子中，然后用便携式冷藏箱运回实验室，再将样品去壳，取可食部分，切为体积不大于 0.5cm×0.5cm×0.5cm的块状样品，用高速组织捣碎机匀质，得到待测样品，于-18℃冷冻保存，待测；
(2)取样和超声波萃取：称取2g上述步骤(1)处理好的乐清湾滩涂采集的缢蛏样品，置于玻璃离心管中，加入18mL体积比为1:1的正己烷/二氯甲烷萃取剂，涡旋3min，以330W功率于38℃超声波提取18min；当样品中含硫化合物的背景干扰时，加入2.5g铜粉超声脱硫，4000r/m高速离心4min，取上清液，得到正己烷/二氯甲烷提取液，所述正己烷/二氯甲烷提取液过无水硫酸钠柱；再向样品中加入18mL正己烷，重复上述过程，得到正己烷提取液；将所述正己烷/二氯甲烷提取液和正己烷提取液合并，得到混合提取液；
(3)浓缩：将步骤(2)得到的混合提取液，在水泵真空度0.09Mpa，水浴温度40℃，转速100rpm条件下，用旋转蒸发仪蒸发至干，加入2mL正己烷溶解，得到正己烷溶解液；
(4)分散固相萃取净化：取230mg石墨化炭黑于试管中，加入步骤(3)得到的正己烷溶解液，涡旋60s，4800r/m高速离心3min，取上清液a；再向上述石墨化炭黑中加入2mL丙酮，重复上述涡旋离心过程，取上清液b；再向上述石墨化炭黑中加入2mL二氯甲烷，重复上述涡旋离心过程，取上清液c；再向上述石墨化炭黑中加入2mL甲醇，重复上述涡旋离心过程，取上清液d；合并上清液a、b、c、d，得到混合上清液；(5)浓缩定容：将步骤(4)得到的混合上清液在水浴温度50℃下，吹氮蒸发至干，用正己烷溶解，并定容至1mL，作为上机溶液；
(6)气相色谱-质谱检测器检测：与实施例1的测试条件完全相同；
(7)标准曲线绘制：与实施例1的测试条件完全相同；
(8)回收率测定：乐清湾滩涂采集的缢蛏样品按照上述步骤(1)～(6)的要求进行操作后，与上述步骤(7)得到的标准曲线比较，通过换算最终得到乐清湾滩涂采集的缢蛏样品中16 种邻苯二甲酸酯的测定浓度，其中邻苯二甲酸二甲酯、邻苯二甲酸二乙酯、邻苯二甲酸二异丁酯、邻苯二甲酸二丁酯、邻苯二甲酸二-2-乙基己酯含量分别为2.02、9.73、32.8、45.6、65.0 μg/kg，其他邻苯二甲酸酯均未检出。加标乐清湾滩涂采集的缢蛏样品按照上述步骤(1)～ (6)的要求分别进行五次平行操作，并与上述步骤(7)得到的标准曲线比较，通过换算最终得到加标乐清湾滩涂采集的缢蛏样品中16种邻苯二甲酸酯的测定浓度，并计算回收率，五次平行测定的相对标准偏差。加标乐清湾滩涂采集的缢蛏样品回收率为78～107﹪，相对标准偏差(n＝5)为3.2～6.3﹪，满足分析方法对回收率和重现性要求。
本发明操作简单，超声波萃取效率高，能快速完成样品的前处理；首次采用石墨化炭黑作为固相吸附剂，且固相吸附剂分散在多种分散剂中，分散固相萃取效率高，净化效果好；具有较高的灵敏度和回收率及重现性，16种邻苯二甲酸酯检出限为0.15～0.3μg/kg，回收率为74～116％，相对标准偏差(n＝5)为2.5～6.9％，可应用于海产品中邻苯二甲酸酯含量的准确测定。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并非对本发明作任何形式上的限制，在不超出权利要求所记载的技术方案的前提下还有其它的变体及改型。

Claims (7)

1.一种海产品中邻苯二甲酸酯类环境激素的分散固相萃取-气相色谱-质谱检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)样品的采集和制样：将待检测的海产品进行前处理得到块体样品，用高速组织捣碎机匀质，得到待测样品，于-18℃冷冻保存，待测；
(2)取样和超声波萃取：称取2g上述待测样品，置于玻璃离心管中，加入10～20mL体积比为1:1的正己烷/二氯甲烷萃取剂，涡旋1～3min，以300～400W功率于30～40℃超声波提取10～20min；当样品中含硫化合物的背景干扰时，加入1～3g铜粉超声脱硫，3000～6000r/m高速离心3～5min，取上清液，得到正己烷/二氯甲烷提取液，所述正己烷/二氯甲烷提取液过无水硫酸钠柱；再向样品中加入10～20mL正己烷，重复上述过程，得到正己烷提取液；将所述正己烷/二氯甲烷提取液和正己烷提取液合并，得到混合提取液；
(3)浓缩：将步骤(2)得到的混合提取液，在水泵真空度0.08～0.09Mpa，水浴温度35～40℃，转速50～100rpm条件下，用旋转蒸发仪蒸发至干，加入2mL正己烷溶解，得到正己烷溶解液；
(4)分散固相萃取净化：取150～250mg石墨化炭黑于试管中，加入步骤(3)得到的正己烷溶解液，涡旋30～60s，3000～6000r/m高速离心1～3min，取上清液a；再向上述石墨化炭黑中加入2mL丙酮，重复上述涡旋离心过程，取上清液b；再向上述石墨化炭黑中加入2mL二氯甲烷，重复上述涡旋离心过程，取上清液c；再向上述石墨化炭黑中加入2mL甲醇，重复上述涡旋离心过程，取上清液d；合并上清液a、b、c、d，得到混合上清液；
(5)浓缩定容：将步骤(4)得到的混合上清液在水浴温度40～50℃下，吹氮气蒸发至干，用正己烷溶解，并定容至1mL，作为上机溶液；
(6)气相色谱-质谱检测器检测：进样针抽取上述上机溶液，按照设定好的气相色谱-质谱条件进行检测；
(7)标准曲线绘制：以选择离子监测模式定性，外标法定量；
(8)回收率测定：将采集到的实际样品，按照上述步骤(1)～(6)的要求进行操作，并与上述步骤(7)得到的标准曲线比较，通过换算最终得到实际样品中16种邻苯二甲酸酯的含量；
将不同加标浓度的加标样品，按照上述步骤(2)～(6)的要求分别进行五次平行操作，并与上述步骤(7)得到的标准曲线比较，通过换算最终得到加标样品中16种邻苯二甲酸酯的测定浓度；按照下式进行回收率计算：
<mrow> <mi>R</mi> <mo>=</mo> <mfrac> <mrow> <msub> <mi>C</mi> <mi>s</mi> </msub> <mo>-</mo> <msub> <mi>C</mi> <mn>0</mn> </msub> </mrow> <mi>C</mi> </mfrac> <mo>&amp;times;</mo> <mn>100</mn> <mi>%</mi> <mo>;</mo> </mrow>
式中：R——回收率，％；
Cs——加标样品中16种邻苯二甲酸酯的测定浓度，μg/kg；
C0——实际样品中16种邻苯二甲酸酯的浓度，μg/kg；
C——加标样品中16种邻苯二甲酸酯的理论加标浓度，μg/kg；
所述加标样品为经步骤(1)预处理后的实际样品中加入邻苯二甲酸酯后的样品。
2.根据权利要求1所述的一种海产品中邻苯二甲酸酯类环境激素的分散固相萃取-气相色谱-质谱检测方法，其特征在于，步骤(1)中，所述待检测的海产品为鱼，虾，蟹和贝类中的一种。
3.根据权利要求2所述的一种海产品中邻苯二甲酸酯类环境激素的分散固相萃取-气相色谱-质谱检测方法，其特征在于，所述将待检测的海产品进行前处理的方法为：
鱼：去鳞、去皮，沿脊背取肌肉；
虾、蟹：去头、去壳、去附肢，取肌肉；
贝类：去壳，取可食部分；
将上述样品切块，得到块体样品，所述块体样品的体积不大于0.5cm×0.5cm×0.5cm。
4.根据权利要求1所述的一种海产品中邻苯二甲酸酯类环境激素的分散固相萃取-气相色谱-质谱检测方法，其特征在于，步骤(8)中，所述16种邻苯二甲酸酯为苯二甲酸二甲酯，邻苯二甲酸二乙酯，邻苯二甲酸二异丁酯，邻苯二甲酸二丁酯，邻苯二甲酸二-4-甲基-2-戊基酯，邻苯二甲酸二甲氧基乙酯，邻苯二甲酸二正戊酯，邻苯二甲酸二乙氧基乙基酯，邻苯二甲酸二己酯，邻苯二甲酸丁苄酯，邻苯二甲酸二-2-乙基己酯，邻苯二甲酸二丁氧基乙基酯，邻苯二甲酸二环己酯，邻苯二甲酸二正辛酯，邻苯二甲酸二苯酯和邻苯二甲酸二壬酯。
5.根据权利要求1所述的一种海产品中邻苯二甲酸酯类环境激素的分散固相萃取-气相色谱-质谱检测方法，其特征在于，步骤(6)中，
气相色谱-质谱检测器检测的色谱条件为：进样口温度为260℃；载气为体积含量99.999％的高纯氦气，流速为1mL/min；进样体积为1μL；进样方式为不分流进样，0.75min后以15mL/min吹扫；传输线温度260℃；气相色谱柱升温程序为：初始温度100℃，以10℃/min升温至290℃；保持5.0min，总运行时间24min；
质谱条件为：电子轰击(EI)离子源，离子源温度230℃，电离能量70eV；溶剂延迟3min；四级杆温度150℃，扫描范围50～450amu，检索蒲库NIST；选择离子监测，定性和定量离子见表1：
表1 本发明16种邻苯二甲酸酯的保留时间、定量离子、定性离子
气相色谱柱选用规格为30m×0.25mm×0.25μm的HP-35MS毛细管气相色谱柱，固定相为二苯基与二甲基聚硅氧烷的混合液，其中二苯基的质量分数为35％，二甲基聚硅氧烷的质量分数为65％。
6.根据权利要求1所述的一种海产品中邻苯二甲酸酯类环境激素的分散固相萃取-气相色谱-质谱检测方法，其特征在于，步骤(2)中，所述铜粉使用前先用稀盐酸处理除去其表面氧化膜，再用蒸馏水冲洗除去附在其表面的少量酸，最后用丙酮冲洗并在体积含量99.999％的高纯氮气流下吹干。
7.根据权利要求1所述的一种海产品中邻苯二甲酸酯类环境激素的分散固相萃取-气相色谱-质谱检测方法，其特征在于，步骤(7)中，
选择离子监测模式进行定性时，将标准溶液按照上述步骤(6)的要求进行操作得到标准溶液的总离子流图色谱图，并与单个分析物的总离子流图色谱图进行定性离子、定量离子比较，同时结合保留时间，确定16种邻苯二甲酸酯的种类；所述16种邻苯二甲酸酯的定性离子、定量离子、保留时间用以作为外标法定量时，16种邻苯二甲酸酯色谱峰识别的依据；所述的标准溶液中溶质为邻苯二甲酸酯，溶剂为正己烷，浓度均为100μg/L；
外标法定量时，将不同加标浓度的标准曲线系列溶液，根据加入的邻苯二甲酸酯浓度和相应定量离子积分峰面积的对应关系建立标准曲线；所述标准曲线系列溶液中溶质为邻苯二甲酸酯，溶剂为正己烷，浓度范围均为1～1000μg/L。
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