CN107982290A - 一种银杏黄酮组合物的提取工艺 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种银杏黄酮组合物的提取工艺，所述提取工艺包括以下步骤：(1)将银杏叶在低于220℃的高温下烘干0.8‑1.2h；粉碎后过筛，得到银杏叶干粉；(2)在银杏叶干粉中加入水，进行水提，粗提液经抽滤后得到滤液，滤液经干燥后，得到银杏黄酮粗提物；(3)银杏黄酮粗提物经纯化后，得到银杏黄酮组合物。本发明的提取工艺显著降低了黄酮组合物中的毒性成分银杏酸以及多糖类杂质的含量，提高了黄酮提取率，获得的黄酮组合物具有很好的抗氧化活性；使用水做提取溶剂，价格低廉，不仅经济环保，而且安全性更高；工艺简单易实现工业化，可以快速、稳定、规模化获取银杏黄酮组合物。

Description

一种银杏黄酮组合物的提取工艺
技术领域
本发明属于植物有效成分提取的技术领域，具体涉及一种银杏黄酮组合物的提取工艺。
背景技术
银杏(Ginkgo biloba L.)别名有：白果，公孙树，鸭脚树，蒲扇，素有“活化石”之称，集食用、药用、材用、绿化美化环境于一体，被誉为“东方的圣者”，也称植物中的“大熊猫”，具有敛肺、平喘、活血化瘀、止痛的功效，临床用于改善微循环，防治心脑血管疾病等。我国也是世界上银杏的最大生产地，占世界总产量的70％以上。银杏中有效活性成分有黄酮类化合物、银杏内酯化合物、酚酸、烷基酚及烷基酚酸类、蛋白质、维生素、矿物质等微量元素。其中黄酮类化合物作为主要的活性成分，具有抗氧化、抗炎、降脂、抗癌、镇痛镇静和舒张血管等作用，也日益成为大家研究的热点。
目前对于银杏中黄酮的提取工艺，提取方法主要有以下几种：(1)水提法。将银杏叶干燥、粉碎后，水蒸气减压浸提，提取液冷却后浓缩，过滤，滤液用硅胶柱吸附精制，然后用乙醇洗脱、蒸干，即得银杏叶提取物。该方法设备简单，成本低，且符合环保要求，但由于目前水提法提取率低，杂质含量高，后处理工艺难度大，因此应用的较少。(2)有机溶剂提取法。这种方法是目前国内外采用最广泛的提取方法。甲醇、乙醇、丙酮等可和水任意比例混溶，又可与多数有机溶剂互溶，对银杏中的各成分溶解性较好，乙醇以无毒且易回收等特点已经广泛应用于银杏叶黄酮的提取中。(3)碱液提取法。黄酮类化合物分子中多有酚羟基，显酸性，故可用碱性溶液提取。但所用碱的浓度过高时，容易在加热过程中破坏黄酮类化合物的母核。(4)微波提取法。微波提取速度快，提取剂用量少，提取设备简单，能耗低。但在微波提取银杏黄酮的过程中还存在着一些障碍，因为细胞要吸收足够的微波产热才能破裂并释放出内含物，所以该法要求被分离提取的物质具有较高的耐热性。(5)超临界流体提取法。超临界流体需要在较高的压力下操作，设备费用比较昂贵，操作较困难，难以用于较大规模的生产，目前尚未工业化大规模生产。(6)酶提取法。能极大地缩短提取银杏黄酮的时间，提高提取效率。但是由于酶对温度及pH比较敏感，所以在提取银杏黄酮过程中要严格控制酶反应的温度及pH值，这对提取设备要求较高。
发明内容
为了解决以上现有技术的不足，本发明提供了一种银杏黄酮组合物的提取工艺，该提取工艺具有条件温和、操作简便、成本低廉等优点。
本发明提供了一种银杏黄酮组合物的提取工艺，所述提取工艺包括以下步骤：
(1)将银杏叶在低于220℃的高温下烘干0.8-1.2h；粉碎后过筛，得到银杏叶干粉；
(2)在银杏叶干粉中加入水，进行水提，粗提液经抽滤后得到滤液，滤液经减压干燥后，得到银杏黄酮粗提物；
(3)银杏黄酮粗提物经纯化后，得到银杏黄酮组合物。
优选地，步骤(1)的高温为175-180℃。
优选地，步骤(1)中过40-60目筛。
优选地，在银杏叶中加入其50-60质量倍的水，95-105℃提取3-4h。
优选地，上述水提步骤重复三次。
优选地，步骤(2)的干燥为减压干燥或冷冻干燥。
优选地，步骤(3)中上大孔树脂柱进行纯化。
优选地，上大孔树脂柱进行纯化。
优选地，其纯化步骤是：分别用水、30％乙醇、60％乙醇洗脱大孔树脂柱，收集60％乙醇洗脱的产物，即获得所述银杏黄酮组合物。
本发明的有益效果为：
(1)本发明的提取工艺显著降低了黄酮组合物中的毒性成分银杏酸以及多糖类成分的含量，提高了黄酮提取率，获得的黄酮组合物具有很好的抗氧化活性。
(2)本发明的提取工艺用使用水做提取溶剂，价格低廉，不仅经济环保，而且安全性更高；工艺简单易实现工业化，可以快速、稳定、规模化获取银杏黄酮组合物。
(3)本发明提取工艺获得的黄酮组合物具有较强的还原能力、·OH清除能力和DPPH清除能力，具有很好的抗氧化活性，广泛适用于亚健康人群，正常人食用后可以达到保健的效果，可以作为食品添加剂用于饮料、茶叶等的深加工中，也可以做成微胶囊用于保健品领域。此外，也可在化妆品领域、烟草行业、饲料行业、边缘学科乃至药品领域进行应用。
附图说明
图1为本发明银杏黄酮组合物的提取工艺的技术路线图；
图2为本发明提取工艺中高温预处理温度对银杏黄酮粗提物还原力的影响；
图3为本发明提取工艺中高温预处理温度对银杏黄酮粗提物·OH清除能力的影响；
图4为本发明提取工艺中高温预处理温度对银杏黄酮粗提物DPPH清除能力的影响；
图5为本发明银杏黄酮组合物对还原力的影响；
图6为本发明银杏黄酮组合物对·OH清除能力的影响；
图7为本发明银杏黄酮组合物对DPPH清除率的影响。
具体实施方式
下面结合实施例和附图对本发明进行详细地解释说明。
如附图1所示，一种银杏黄酮组合物的提取工艺，所述提取工艺包括以下步骤：
(1)将银杏叶在低于220℃的高温下烘干0.8-1.2h；粉碎后过筛，得到银杏叶干粉；
(2)在银杏叶干粉中加入水，进行水提，粗提液经抽滤后得到滤液，滤液经减压干燥后，得到银杏黄酮粗提物；
(3)银杏黄酮粗提物经纯化后，得到银杏黄酮组合物。
本发明银杏黄酮组合物的提取工艺，在原来水提工艺的基础上，预先对银杏叶采取高温处理，再经过水提得到粗提物，并对水提条件进行了优化和改进。发明人在研究银杏叶黄酮组合物的提取工艺中惊奇的发现，对银杏叶在低于220℃的高温下进行烘干处理，虽然得到的银杏叶出现某种程度的烧焦现象，但是将能将大部分银杏酸除去，并且在高温处理的过程中，提取物中的多糖类杂质成分也可以除掉，减少了反复柱层析去除有害成分带来的样品损失；并且得到的黄酮组合物具有很好抗氧化活性。
优选地，步骤(1)的高温为175-180℃。如附图2-4所示，在175-180℃的高温预处理下，得到的银杏黄酮组合物具有较好的还原力、·OH清除能力和DPPH清除能力，具有很好的抗氧化活性。
优选地，步骤(1)中粉碎后过40-60目筛。将银杏叶干粉粉碎成一定的细度，某种程度上破坏了叶片的细胞壁，更有利于有效活性成分的溶出。
优选地，将干粉中加入到其50-60质量倍的水，95-105℃提取3-4h。更优选地，上述水提步骤重复三次。上述水提条件对传统的水提工艺进行了优化，提高了银杏叶中黄酮组合物有效成分的提取率。
优选地，步骤(2)的干燥为减压干燥或冷冻干燥。减压干燥或冷冻干燥处理后，除去了滤液中的水蒸气，析出了银杏黄酮粗提物，对粗提物中有效成分的活性没有任何影响。
优选地，步骤(3)中上大孔树脂柱进行纯化。更优选地，其纯化步骤是：分别用水、30％乙醇、60％乙醇洗脱大孔树脂柱，收集60％乙醇洗脱的产物，即获得所述银杏黄酮组合物。选择大孔树脂柱对银杏叶提取物用水洗脱，能将大孔树脂柱上溶于水的杂质去除，然后用30％乙醇洗脱，能将大孔树脂柱上剩余溶于水，部分溶于有机溶剂的杂质进一步去除；然后用60％乙醇洗脱，获得所述银杏黄酮组合物。组合物中的黄酮纯度为42-45％，银杏酸含量未检出，符合2015版药典中银杏叶提取物黄酮含量大于24％，银杏酸含量低于10ppm的要求。
实施例1
一种银杏黄酮组合物的提取工艺，该提取工艺包括以下步骤：
(1)将银杏叶在175℃的高温下烘干0.8h；粉碎后过40目筛，得到银杏叶干粉；
(2)在银杏叶干粉中加入其60质量倍的水，105℃提取3h，过滤后得到上层粗提液，上述水提步骤重复三次，合并粗提液，然后将粗提液抽滤得到滤液；滤液经减压干燥后，得到银杏黄酮粗提物；
(3)将得到的银杏黄酮粗提物，选择大孔树脂柱进一步纯化；分别用水、30％乙醇、60％乙醇洗脱，收集60％乙醇部分，即获得所述银杏黄酮组合物。
实施例2
一种银杏黄酮组合物的提取工艺，该提取工艺包括以下步骤：
(1)将银杏叶在177℃的高温下烘干1h；粉碎后过50目筛，得到银杏叶干粉；
(2)在银杏叶干粉中加入其56质量倍的水，100℃提取3.5h，过滤后得到上层粗提液，上述水提步骤重复三次；合并粗提液，然后将粗提液抽滤得到滤液，滤液经减压干燥后，得到银杏黄酮粗提物；
(3)将得到的银杏黄酮粗提物，选择大孔树脂柱进一步纯化；分别用水、30％乙醇、60％乙醇洗脱，收集60％乙醇部分，即获得所述银杏黄酮组合物。
实施例3
一种银杏黄酮组合物的提取工艺，该提取工艺包括以下步骤：
(1)将银杏叶在180℃的高温下烘干1.2h；粉碎后过60目筛，得到银杏叶干粉；
(2)将银杏叶干粉加入到其60质量倍的水中，95℃提取4h，过滤后得到上层粗提液，上述水提步骤重复三次；合并粗提液，然后将粗提液抽滤得到滤液。滤液经冷冻干燥后，得到银杏黄酮粗提物；
(3)将得到的银杏黄酮粗提物，选择大孔树脂柱进一步纯化；分别用水、30％乙醇、60％乙醇洗脱，收集60％乙醇部分，即获得所述银杏黄酮组合物。
按照本发明实施例2和传统的水提工艺对银杏叶进行水提：传统的水提工艺的具体步骤为：将银杏叶加入到其15倍质量的水中，94℃提取3.7h。过滤后得到上层粗提液，上述水提步骤重复三次。合并粗提液，然后将粗提液抽滤得到滤液。滤液经减压干燥后，得到银杏黄酮粗提物。
获得银杏黄酮组合物，本发明实施例2提取工艺得到的银杏黄酮组合物中多糖含量为7.39％，银杏酸含量未检出，黄酮提取率为70.07％；传统的水提工艺得到的银杏黄酮组合物中多糖含量为16.36％，银杏酸含量为24.91ppm，黄酮提取率为55.35％。其中，多糖含量的测定方法为：苯酚-硫酸法。银杏酸含量的测定方法为：参照中国药典2015版中银杏酸含量的测定方法。黄酮含量的测定方法为：将银杏叶除杂、干燥、粉碎、过筛。称取4g样品于索氏提取器，用甲醇回流提取至提取液无色，放置于50mL容量瓶中，定容，摇匀，取1mL按NaNO2-Al(NO3)3方法测定黄酮含量。
本发明提取工艺显著降低了黄酮组合物中多糖类成分的含量并提高了黄酮提取率，无须进一步纯化即可使毒性成分银杏酸的含量达到药典规定，从而有效解决了现有技术中水提法黄酮提取率低及毒性成分残留的问题。
对本发明实施例2提取工艺得到的银杏叶黄酮组合物进行体外抗氧化活性实验、·OH清除能力测定和DPPH清除能力测定。
其中，抗氧化活性实验具体的操作步骤为：还原能力的测定采用普鲁士蓝法。具体做法为：于25mL的具塞试管中加入pH6.6，浓度为0.2mol/L的磷酸缓冲液2mL和1％的K3Fe(CN)6溶液2mL，加入不同体积的样品，用漩涡振荡器混匀，将试管放置于50℃水浴锅反应20min后迅速冷却，加入10％的三氯醋酸(TCA)溶液2mL，混匀，以4500r/min的速度离心10min，吸取上清液2mL，加入蒸馏水1mL和0.1％的FeC13溶液0.2mL，混合均匀，静置10min后，在波长700nm处测吸光值，本实验取200uL待测液，采用酶标仪进行测定。
·OH清除能力测定的具体做法为：取不同体积的样品于10mL具塞试管中，加入6mmol/LFeSO4、6mmol/LH2O2各1mL，用漩涡振荡器混匀，静置10min，加入1mL 6mmol/L的水杨酸溶液，混匀，放置水浴锅37℃静置30min，在510nm处测定其吸光度。
DPPH清除能力测定的具体做法为：准确称取0.020g DPPH至50mL容量瓶中，用甲醇配制标准溶液。取标准液溶液0.2mL，0.4mL，0.6mL，0.8mL，1mL置25mL具塞试管中，用甲醇补齐至10mL，测定在517nm处的吸光值。
本发明提取工艺得到的银杏叶黄酮组合物的体外抗氧化活性实验、·OH清除能力测定和DPPH清除能力测定的结果见图5-7。如图5-7所示，在0-0.35mg/mL范围内，其还原力IC50值为0.063，·OH清除能力IC50值为0.001，DPPH清除能力IC50值为0.009。还原能力、·OH清除能力和DPPH清除能力随浓度增大而增强，且同等浓度下均高于阳性对照BHT。BHT的还原力IC50值为0.159，·OH清除能力IC50值为0.068，DPPH清除能力值为0.707。
以上仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明实质内容上所作的任何修改、等同替换和简单改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (8)

1.一种银杏黄酮组合物的提取工艺，其特征在于，所述提取工艺包括以下步骤：
(1)将银杏叶在低于220℃的高温下烘干0.8-1.2h；粉碎后过筛，得到银杏叶干粉；
(2)在银杏叶干粉中加入水，进行水提，粗提液经抽滤后得到滤液，滤液经干燥后，得到银杏黄酮粗提物；
(3)银杏黄酮粗提物经纯化后，得到银杏黄酮组合物。
2.根据权利要求1所述的银杏黄酮组合物的提取工艺，其特征在于，步骤(1)的高温为175-180℃。
3.根据权利要求1所述的银杏黄酮组合物的提取工艺，其特征在于，步骤(1)中过40-60目筛。
4.根据权利要求1所述的银杏黄酮组合物的提取工艺，其特征在于，步骤(2)中，在银杏叶干粉中加入其50-60质量倍的水，95-105℃提取3-4h。
5.根据权利要求4所述的银杏黄酮组合物的提取工艺，其特征在于，上述水提步骤重复三次。
6.根据权利要求1所述的银杏黄酮组合物的提取工艺，其特征在于，步骤(2)的干燥为减压干燥或冷冻干燥。
7.根据权利要求1所述的银杏黄酮组合物的提取工艺，其特征在于，步骤(3)中上大孔树脂柱进行纯化。
8.根据权利要求7所述的银杏黄酮组合物的提取工艺，其特征在于，其纯化步骤是：分别用水、30％乙醇、60％乙醇洗脱大孔树脂柱，收集60％乙醇洗脱的产物，即获得所述银杏黄酮组合物。
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