CN107955014B - 萘并呋喃酮类化合物及制备与在制备抗肿瘤药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种萘并呋喃酮类化合物及制备与在制备抗肿瘤药物中的应用。所述的萘并呋喃酮类化合物，分子式为C25H28O7，其化学结构式如式Ⅰ。本发明以长寿菜为原料，用乙醇溶液进行热回流提取，得到长寿菜总稠膏；长寿菜总稠膏经大孔吸附树脂柱、Sephadex LH‑20柱、硅胶柱层析以及Toyopearl HW‑40柱分离、纯化，得到萘并呋喃酮类化合物。该萘并呋喃酮类化合物对SGC‑7901、Bel‑7402、A549、HT1080和Heps肿瘤细胞抑制作用较好，可用于制备抗肿瘤药物。
Description
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种萘并呋喃酮类化合物及制备与在制备抗肿瘤药物中的应用。
背景技术
长寿菜(Ipomoea batatas)，俗称白薯叶、番薯叶、地瓜叶，四川称之为苕尖，是甘薯的叶、叶柄和芽梢部，为旋花科(Convolvulaceae)牵牛花属草本匍匐性蔓生植物，原产于热带美洲。现广泛栽培于全世界热带和亚热带地区。我国南北各地都有栽培，叶蔓作饲料，民间也有采食叶作为粗菜。近年来发现，薯叶中富含氨基酸、维生素、蛋白质、矿物质等营养成分及黄酮类化合物、多糖、绿原酸等生物活性物质，具有增强免疫功能、提高抗病能力、延缓衰老、抗突变、抑菌、通便利尿、解毒、防夜盲症等保健功能。因此，被誉为“长寿食品”、“蔬菜皇后”的长寿菜具有极大的开发利用价值。
但是，目前人们主要采集长寿菜块茎，其叶、梗除少量用于食用或牲口饲料以外，都被丢弃，不仅造成资源浪费，而且污染环境。为了更好地开发利用长寿菜丰富的植物资源，对其化学成分进行重点研究，寻找其活性成分及新的药理活性，明确其有效成分和临床新用途，是目前研究的主要方向。
发明内容
为了克服现有技术的不足和缺点，本发明的首要目的在于提供一种萘并呋喃酮类化合物。
本发明的另一目的在于提供上述萘并呋喃酮类化合物的制备方法。
本发明的再一目的在于提供上述萘并呋喃酮类化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
本发明的目的通过下述技术方案实现：
一种萘并呋喃酮类化合物，分子式为C25H28O7，其化学结构式如式Ⅰ：
所述的萘并呋喃酮类化合物的制备方法，包含如下步骤：
(1)将干燥的长寿菜粉碎，用体积分数为80％～95％的乙醇溶液进行热回流提取，过滤，合并滤液并浓缩，得到长寿菜总稠膏；
(2)将步骤(1)制得的长寿菜总稠膏上大孔吸附树脂柱，依次用体积分数为15～95％的乙醇溶液进行梯度洗脱，收集体积分数为35％的乙醇溶液洗脱得到的流份B；
(3)将步骤(2)收集的流份B上Sephadex LH-20柱，依次用体积分数为90％和95％的甲醇溶液作为洗脱剂进行洗脱，收集体积分数为95％的甲醇溶液洗脱得到的亚流份B-2；
(4)将步骤(3)收集的亚流份B-2进行硅胶柱层析，采用石油醚-丙酮洗脱系统进行梯度洗脱，收集石油醚-丙酮体积比为6:1洗脱得到的次流份B-2-2；
(5)将步骤(4)收集的次流份B-2-2进行硅胶柱层析，采用石油醚-乙酸乙酯洗脱系统进行梯度洗脱，收集石油醚-乙酸乙酯体积比为5:1洗脱得到的次流份B-2-2-2；
(6)将步骤(5)收集的次流份B-2-2-2上Toyopearl HW-40柱，用体积分数为95％的乙腈溶液作为洗脱剂进行洗脱，经过分离、纯化，得到萘并呋喃酮类化合物；
步骤(1)中所述的热回流提取的条件优选为：提取温度70～90℃，提取时间2～4小时，提取次数为2～3次；
步骤(1)中所述的浓缩优选为将滤液在低温条件下干燥至无醇味；
所述的低温优选为45～55℃；
步骤(2)中所述的大孔吸附树脂优选为AB-8大孔吸附树脂；
步骤(2)中所述的梯度洗脱优选为依次用体积分数为15％、35％和95％的乙醇溶液进行梯度洗脱；
步骤(4)中所述的硅胶柱层析优选为湿法上柱，硅胶优选为100～200目；
步骤(4)中所述的梯度洗脱优选为按照石油醚-丙酮体积比为10:1、6:1和4:1进行梯度洗脱；
步骤(5)中所述的硅胶柱层析优选为湿法上柱，硅胶优选为200～300目；
步骤(5)中所述的梯度洗脱优选为按照石油醚-乙酸乙酯体积比为8:1、5:1和3:1进行梯度洗脱；
所述的萘并呋喃酮类化合物在制备抗肿瘤药物中的应用；
所述药物中含有治疗有效量的萘并呋喃酮类化合物，余量为药用辅料或其它可配伍的药物；
所述药用辅料是指常规的药用赋形剂，如溶剂、崩解剂、矫味剂、防腐剂、着色剂和粘合剂等；
所述其它可配伍的药物，指的是以有效剂量的萘并呋喃酮类化合物为药物原料，再配伍其它天然药物或化学药品；
所述的抗肿瘤药物包括多种临床药物剂型，如片剂、注射液、脂质体纳米粒、控释剂等；
本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果
(1)本发明选取民间常见野菜——长寿菜作为研究对象，资源丰富，营养价值高，具有潜在的开发价值。
(2)本发明提供的萘并呋喃酮类化合物(3,5-二甲氧基-4-(异戊烯基)-6-(2-羟基丙醇基)-10-(2-丙二烯基)-萘并呋喃-1-酮)结构新颖，抗肿瘤活性较强，制备方法简便、快捷，产率较高。
(3)本发明提供的萘并呋喃酮类化合物的制备方法和抗肿瘤活性迄今为止尚未专利或参考文献报道。
附图说明
图1是本发明提供的萘并呋喃酮类化合物的制备流程图。
图2是本发明提供的萘并呋喃酮类化合物的偶联相关图。
具体实施方式
下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
实施例1
(1)将干燥的长寿菜(8.7kg)粉碎，用体积分数为85％的乙醇溶液80℃热回流提取3次，每次3小时，过滤，合并滤液并在低温(45℃)条件下干燥至无醇味，得到长寿菜总稠膏(0.75kg)；
(2)将步骤(1)制得的长寿菜总稠膏上大孔吸附树脂(AB-8)柱，依次用体积分数为15％、35％、95％的乙醇溶液进行梯度洗脱，分别得到流份A(16.5g)、B(38.7g，体积分数为35％的乙醇溶液洗脱得到)、C(9.7g)；
(3)利用生物活性指导分离的方法(参见实施例4)，采用MTT法对步骤(2)制得的各流份进行抗肿瘤活性筛选，确定活性部位为流份B；
(4)将步骤(3)制得的流份B上Sephadex LH-20柱，用体积分数为90％、95％的甲醇溶液作为洗脱剂进行洗脱，得到亚流份B-1(13.6g)、B-2(18.4g，体积分数为95％的甲醇溶液洗脱得到)；
(5)将步骤(4)制得的亚流份B-2上硅胶柱(100～200目)，采用石油醚-丙酮洗脱系统按照石油醚-丙酮体积比10:1→6:1→4:1进行梯度洗脱，得到次流份B-2-1(4.31g)、B-2-2(7.53g，石油醚-丙酮体积比为6:1洗脱得到)、B-2-3(5.02g)；
(6)将步骤(5)制得的次流份B-2-2上硅胶柱(200～300目)，采用石油醚-乙酸乙酯洗脱系统按照石油醚-乙酸乙酯体积比8:1→5:1→3:1进行梯度洗脱，得到次流份B-2-2-1(1.46g)、B-2-2-2(3.27g，油醚-乙酸乙酯体积比为5:1洗脱得到)、B-2-2-3(2.04g)；
(7)将步骤(6)制得的次流份B-2-2-2上Toyopearl HW-40柱，用体积分数为95％的乙腈溶液作为流动相进行洗脱，经过反复的分离、纯化，得到式Ⅰ所示的单体化合物(9.82mg，图1)。
本发明得到的式Ⅰ所示的单体化合物为无色固体(溶于丙酮)，HR-ESI-MSm/z463.1753[M+Na]+提示其分子组成为C25H28O7(calcd.for C25H28O7Na，463.1755)。化合物Ⅰ的UV(MeOH)λmax:223，255，350nm；IRνmax:3387.2，2938.1，1726.4，1624.3，1362.4cm-1；化合物Ⅰ的1H NMR(CD3COCD3，400MHz)和13C NMR(CD3COCD3，400MHz)数据见表1。利用现代波谱技术和式Ⅰ所示的单体化合物的HMBC、2D-NOESY、1H-1H COSY等偶联相关(图2)，最终确定式Ⅰ所示的单体化合物为一个新萘并呋喃酮类化合物。
表1式Ⅰ所示的单体化合物的1H NMR、13C NMR和HMBC相关数据
实施例2
(1)将干燥的长寿菜粉碎，用体积分数为80％的乙醇溶液90℃热回流提取2次，每次4小时，过滤，合并滤液并在低温(50℃)条件下干燥至无醇味，得到长寿菜总稠膏；
(2)将步骤(1)制得的长寿菜总稠膏上大孔吸附树脂(AB-8)柱，依次用体积分数为15％、35％、95％的乙醇溶液进行梯度洗脱，分别得到流份A、B(体积分数为35％的乙醇溶液洗脱得到)、C；
(3)将步骤(2)制得的流份B上Sephadex LH-20柱，用体积分数为90％、95％的甲醇溶液作为洗脱剂进行洗脱，得到亚流份B-1、B-2(体积分数为95％的甲醇溶液洗脱得到)；
(4)将步骤(3)制得的亚流份B-2上硅胶柱(100～200目)，采用石油醚-丙酮洗脱系统按照石油醚-丙酮体积比10:1→6:1→4:1进行梯度洗脱，得到次流份B-2-1、B-2-2(石油醚-丙酮体积比为6:1洗脱得到)、B-2-3；
(5)将步骤(4)制得的次流份B-2-2上硅胶柱(200～300目)，采用石油醚-乙酸乙酯洗脱系统按照石油醚-乙酸乙酯体积比8:1→5:1→3:1进行梯度洗脱，得到次流份B-2-2-1、B-2-2-2(油醚-乙酸乙酯体积比为5:1洗脱得到)、B-2-2-3；
(6)将步骤(5)制得的次流份B-2-2-2上Toyopearl HW-40柱，用体积分数为95％的乙腈溶液作为流动相进行洗脱，经过反复的分离、纯化，得到式Ⅰ所示的单体化合物。
实施例3
(1)将干燥的长寿菜粉碎，用体积分数为95％的乙醇溶液70℃热回流提取3次，每次2小时，过滤，合并滤液并在低温(55℃)条件下干燥至无醇味，得到长寿菜总稠膏；
(2)将步骤(1)制得的长寿菜总稠膏上大孔吸附树脂(AB-8)柱，依次用体积分数为15％、35％、95％的乙醇溶液进行梯度洗脱，分别得到流份A、B(体积分数为35％的乙醇溶液洗脱得到)、C；
(3)将步骤(2)制得的流份B上Sephadex LH-20柱，用体积分数为90％、95％的甲醇溶液作为洗脱剂进行洗脱，得到亚流份B-1、B-2(体积分数为95％的甲醇溶液洗脱得到)；
(4)将步骤(3)制得的亚流份B-2上硅胶柱(100～200目)，采用石油醚-丙酮洗脱系统按照石油醚-丙酮体积比10:1→6:1→4:1进行梯度洗脱，得到次流份B-2-1、B-2-2(石油醚-丙酮体积比为6:1洗脱得到)、B-2-3；
(5)将步骤(4)制得的次流份B-2-2上硅胶柱(200～300目)，采用石油醚-乙酸乙酯洗脱系统按照石油醚-乙酸乙酯体积比8:1→5:1→3:1进行梯度洗脱，得到次流份B-2-2-1、B-2-2-2(油醚-乙酸乙酯体积比为5:1洗脱得到)、B-2-2-3；
(6)将步骤(5)制得的次流份B-2-2-2上Toyopearl HW-40柱，用体积分数为95％的乙腈溶液作为流动相进行洗脱，经过反复的分离、纯化，得到式Ⅰ所示的单体化合物。
实施例4萘并呋喃酮类化合物的抗肿瘤活性
(1)用二甲基亚砜(DMSO)将实施例1制得的萘并呋喃酮类化合物溶解(DMSO的最大体积分数不超过3‰)，并用含体积分数为10％灭活胎牛血清的RPMI-1640培养液将供试品稀释成一定初质量浓度，用0.22μmol·L-1的微孔滤器在超净台中过滤除菌，然后用培养液稀释成2.5、5、10、20mg·L-1的终质量浓度。
(2)采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法进行体外抗肿瘤活性测定。将SGC-7901、Bel-7402、A549、HT1080和Heps细胞(上述细胞均购自武汉普诺赛生命科技有限公司)用培养液稀释为1×105mL-1，分别接种于96孔培养板中，每孔100μL。待10h后除去培养液，每孔加不同质量浓度的药液及空白培养液100μL，每组设3复孔。在37℃、5％CO2条件下培养48h后，每孔加入5g·L-1MTT10μL，继续培养4h后，加二甲基亚砜150μL终止反应，在波长492nm下用酶标仪测定吸光度(OD)值，按公式计算抑制率。抑制率(％)＝(1-用药组平均OD值/对照组平均OD值)×100。
(3)筛选结果表明，实施例1制得的萘并呋喃酮类化合物对上述5种体外培养的肿瘤细胞抑制作用较好，而且在测定质量浓度范围内剂量依赖关系良好，其IC50数据见表2。该萘并呋喃酮类化合物的抗肿瘤活性为长寿菜中首次发现。
表2萘并呋喃酮类化合物抗肿瘤活性筛选结果
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种萘并呋喃酮类化合物，其特征在于分子式为C25H28O7，其化学结构式如式Ⅰ：
2.权利要求1所述的萘并呋喃酮类化合物的制备方法，其特征在于包含如下步骤：
(1)将干燥的长寿菜粉碎，用体积分数为80％～95％的乙醇溶液进行热回流提取，过滤，合并滤液并浓缩，得到长寿菜总稠膏；
(2)将步骤(1)制得的长寿菜总稠膏上大孔吸附树脂柱，依次用体积分数为15～95％的乙醇溶液进行梯度洗脱，收集体积分数为35％的乙醇溶液洗脱得到的流份B；
(3)将步骤(2)收集的流份B上Sephadex LH-20柱，依次用体积分数为90％和95％的甲醇溶液作为洗脱剂进行洗脱，收集体积分数为95％的甲醇溶液洗脱得到的亚流份B-2；
(4)将步骤(3)收集的亚流份B-2进行硅胶柱层析，采用石油醚-丙酮洗脱系统进行梯度洗脱，收集石油醚-丙酮体积比为6:1洗脱得到的次流份B-2-2；
(5)将步骤(4)收集的次流份B-2-2进行硅胶柱层析，采用石油醚-乙酸乙酯洗脱系统进行梯度洗脱，收集石油醚-乙酸乙酯体积比为5:1洗脱得到的次流份B-2-2-2；
(6)将步骤(5)收集的次流份B-2-2-2上Toyopearl HW-40柱，用体积分数为95％的乙腈溶液作为洗脱剂进行洗脱，经过分离、纯化，得到萘并呋喃酮类化合物。
3.根据权利要求2所述的萘并呋喃酮类化合物的制备方法，其特征在于：
步骤(1)中所述的热回流提取的条件为：提取温度70～90℃，提取时间2～4小时，提取次数为2～3次。
4.根据权利要求2所述的萘并呋喃酮类化合物的制备方法，其特征在于：
步骤(2)中所述的大孔吸附树脂为AB-8大孔吸附树脂。
5.根据权利要求2所述的萘并呋喃酮类化合物的制备方法，其特征在于：
步骤(2)中所述的梯度洗脱为依次用体积分数为15％、35％和95％的乙醇溶液进行梯度洗脱。
6.根据权利要求2所述的萘并呋喃酮类化合物的制备方法，其特征在于：
步骤(4)中所述的梯度洗脱为按照石油醚-丙酮体积比为10:1、6:1和4:1进行梯度洗脱。
7.根据权利要求2所述的萘并呋喃酮类化合物的制备方法，其特征在于：
步骤(5)中所述的梯度洗脱为按照石油醚-乙酸乙酯体积比为8:1、5:1和3:1进行梯度洗脱。
8.权利要求1所述的萘并呋喃酮类化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
9.根据权利要求8所述的萘并呋喃酮类化合物在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于：
所述药物中含有治疗有效量的萘并呋喃酮类化合物，余量为药用辅料。
10.根据权利要求8所述的萘并呋喃酮类化合物在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于：
所述的抗肿瘤药物的剂型为片剂、注射液、脂质体纳米粒或控释剂。
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