CN107937462A - 一种牦牛胶原蛋白的制备方法 - Google Patents
一种牦牛胶原蛋白的制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN107937462A CN107937462A CN201711139508.XA CN201711139508A CN107937462A CN 107937462 A CN107937462 A CN 107937462A CN 201711139508 A CN201711139508 A CN 201711139508A CN 107937462 A CN107937462 A CN 107937462A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- degreasing
- butanone
- yak
- enzymolysis
- preparation
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 title claims abstract description 34
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 title claims abstract description 34
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 title claims abstract description 33
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 21
- ZWEHNKRNPOVVGH-UHFFFAOYSA-N 2-Butanone Chemical compound CCC(C)=O ZWEHNKRNPOVVGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 76
- 238000005238 degreasing Methods 0.000 claims abstract description 42
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 38
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 claims abstract description 19
- 210000002435 tendon Anatomy 0.000 claims abstract description 19
- 108091005508 Acid proteases Proteins 0.000 claims abstract description 18
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 17
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims abstract description 16
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 16
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 12
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims abstract description 11
- GTCCGKPBSJZVRZ-RFZPGFLSSA-N (2r,4r)-pentane-2,4-diol Chemical compound C[C@@H](O)C[C@@H](C)O GTCCGKPBSJZVRZ-RFZPGFLSSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims abstract description 7
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims abstract description 6
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims abstract description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 31
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 13
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 13
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 claims description 12
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims description 10
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 claims description 10
- PVRATXCXJDHJJN-QWWZWVQMSA-N dimethyl (2r,3r)-2,3-dihydroxybutanedioate Chemical compound COC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(=O)OC PVRATXCXJDHJJN-QWWZWVQMSA-N 0.000 claims description 9
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 9
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 8
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 claims description 7
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 claims description 7
- 230000009849 deactivation Effects 0.000 claims description 6
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 claims description 6
- ZTQSAGDEMFDKMZ-UHFFFAOYSA-N Butyraldehyde Chemical compound CCCC=O ZTQSAGDEMFDKMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 241000370738 Chlorion Species 0.000 claims description 5
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 5
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 claims description 5
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 5
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 5
- 230000008961 swelling Effects 0.000 claims description 5
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 claims description 4
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 claims description 4
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 claims description 4
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 claims description 4
- 238000002525 ultrasonication Methods 0.000 claims description 4
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 2
- 244000099147 Ananas comosus Species 0.000 claims 1
- 235000007119 Ananas comosus Nutrition 0.000 claims 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 claims 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 21
- 239000000758 substrate Substances 0.000 abstract description 10
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 abstract description 5
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 abstract description 5
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 abstract description 5
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 abstract description 5
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 abstract description 5
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 abstract description 5
- 230000009471 action Effects 0.000 abstract description 4
- 238000001976 enzyme digestion Methods 0.000 abstract description 3
- PVRATXCXJDHJJN-UHFFFAOYSA-N dimethyl 2,3-dihydroxybutanedioate Chemical class COC(=O)C(O)C(O)C(=O)OC PVRATXCXJDHJJN-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 2
- 235000015277 pork Nutrition 0.000 abstract 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 abstract 1
- 241001416153 Bos grunniens Species 0.000 description 22
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 description 6
- 230000008859 change Effects 0.000 description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 4
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 4
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 4
- 108010004032 Bromelains Proteins 0.000 description 3
- 235000019835 bromelain Nutrition 0.000 description 3
- 230000003628 erosive effect Effects 0.000 description 3
- 239000004519 grease Substances 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283074 Equus asinus Species 0.000 description 2
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 241000282849 Ruminantia Species 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 2
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 2
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 2
- QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 5,5-dimethyl-2,4-dioxo-1,3-oxazolidine-3-carboxamide Chemical compound CC1(C)OC(=O)N(C(N)=O)C1=O QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001247317 Bos mutus Species 0.000 description 1
- 241000282817 Bovidae Species 0.000 description 1
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 1
- 235000009300 Ehretia acuminata Nutrition 0.000 description 1
- 244000046038 Ehretia acuminata Species 0.000 description 1
- 241001493546 Suina Species 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 1
- 238000004332 deodorization Methods 0.000 description 1
- 235000014103 egg white Nutrition 0.000 description 1
- 210000000969 egg white Anatomy 0.000 description 1
- 238000009313 farming Methods 0.000 description 1
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 1
- 239000000446 fuel Substances 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 210000000003 hoof Anatomy 0.000 description 1
- -1 hydrogen Sodium hydroxide Chemical class 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 238000011017 operating method Methods 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 1
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 235000020255 yak milk Nutrition 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
- C12P21/06—Preparation of peptides or proteins produced by the hydrolysis of a peptide bond, e.g. hydrolysate products
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/78—Connective tissue peptides, e.g. collagen, elastin, laminin, fibronectin, vitronectin or cold insoluble globulin [CIG]
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
Abstract
本发明公开了一种牦牛胶原蛋白的制备方法，包括：脱脂与酶解，将牦牛蹄筋以L‑酒石酸二甲酯的丁酮溶液脱脂后以氢氧化钠溶液浸泡除杂，然后以酸性蛋白酶对脱脂牦牛蹄筋粉进行酶解，酶解后以蒸馏水进行浸提，浸提后加入氯化钠盐析，取沉淀干燥得牦牛胶原蛋白。有益效果为：丁酮具有较高的脱脂能力，可以去除牛蹄筋中多余的脂肪，提高蛋白质含量，L‑酒石酸二甲酯可以与丁酮形成部分氢键作用，能够有效缓解丁酮脱脂时的发粘现象，提高丁酮的脱脂效果；酶解体系中加入（2R，4R）‑戊二醇可以降低酶与底物之间的能量壁垒，增大酶与底物之间的反应活性，提高反应效率，加快酶解反应的进行，降低了时间成本。
Description
技术领域
本发明涉及胶原蛋白领域，尤其是涉及一种牦牛胶原蛋白的制备方法。
技术背景
牦牛（学名：Bos mutus或Bos grunniens，英文名称：wild yak），属于哺乳纲、真兽亚纲、偶蹄目、反刍亚目、牛科、牛亚科动物，是以中国青藏高原为中心，及其毗邻高山、亚高山高寒地区的特有珍稀牛种之一，草食性反刍家畜。牦牛能适应高寒气候，是世界上生活在海拔最高处的（除人类外）哺乳动物，分布于中国青藏高原海拔[1]3000米以上地区。牦牛的藏语叫雅客，世界通称为“yak”，即藏语译音。 牦牛叫声像猪鸣，所以又称猪声牛。西方国家因其主产于中国青藏高原藏族地区，也称西藏牛。牦牛尾如马尾，所以又名马尾牛。
牦牛全身都是宝，藏族人民衣食住行烧耕都离不开它。人们喝牦牛奶，吃牦牛肉，烧牦牛粪。它的毛可做衣服或帐篷，皮是制革的好材料。它既可用于农耕，又可作高原运输工具，为当地牧民提供奶、肉、毛、役力、燃料等生产生活必需品，是青藏高原牧民的重要生活和经济来源，也是当地畜牧业经济中不可缺少的重要畜种。牦牛作为一种“全能”家畜，在遗传上是一个极为宝贵的基因库，对人类有着不可忽视的社会及经济意义。
胶原蛋白因具有良好的生物相容性、可生物降解性以及生物活性，因此在食品、医药、组织工程、化妆品等领域获得广泛的应用。比如中国传统的胶原保健品“阿胶”，主要是以驴皮为原料（其实就是驴皮中所含胶原蛋白），具有较高的滋补保健作用，有中药三宝之一的美誉。
关于牦牛胶原蛋白的制备技术有很多方法，现有技术如授权公众号为CN103783254 B的中国发明专利，公开了一种牦牛骨胶原蛋白肽的制备方法，该发明方法的工艺过程包括原料前处理、明胶提取、分离胶原蛋白提取液、复合酶解、灭酶灭菌、分离肽液、脱色脱腥、浓缩干燥，具有制备过程完备，工序完整的优点，但是该发明方法工序太过复杂，一次性投产成本太高，而且其复合酶酶解太为彻底，会把胶原蛋白酶解为多肽、小肽甚至氨基酸分子，从而造成胶原蛋白的获取率较低。
发明内容
本发明的目的在于提供一种牦牛胶原蛋白的制备方法，本制备方法简单，脱脂过程中不易发生粘结，牦牛胶原蛋白的得率较高。
本发明针对背景技术中提到的问题，采取的技术方案为：一种牦牛胶原蛋白的制备方法，包括：脱脂与酶解，具体包括以下步骤：
脱脂：将牛蹄筋切成2-3mm的小丁，以料液比1:10-18加入丁酮溶液，丁酮溶液的质量分数为8-10%，浸泡脱脂18-24小时，每4-6小时换１次丁酮溶液，每次换液后以双频率超声波处理30-45秒；脱脂后的牛蹄筋经蒸馏水冲洗至无异味残留，按照料液比1:15-16（m/v）加入0.20-0.21M氢氧化钠溶液，持续缓慢搅拌18-24小时，蒸馏水冲洗去除残留的氢氧化钠，低温干燥后粉碎，过60-120目筛后得脱脂粉；丁酮具有较高的脱脂能力，可以去除牛蹄筋中多余的脂肪，提高蛋白质含量，为进一步的酶解做准备；高能量超声波处理可以对液体进行高强度的翻动，增加油脂与丁酮的作用，同时以较大的机械冲刷力将组织从容器壁上撕掉或冲击下来，避免牛蹄筋组织的粘附，提高脱脂效果；
酶解：取脱脂粉按照料液比1:28-30加入0.5-0.6M的乙酸，缓慢搅拌溶胀8-10小时，然后在0-4℃、8000-8500r/min离心30-45分钟，取沉淀加入10-12倍蒸馏水中，添加2000-2500U/g酸性蛋白酶，再加入酸性蛋白酶重量20-35‰的（2R，4R）-戊二醇，酶解45-60分钟后灭酶，酶解液中加入等量蒸馏水浸提，浸提结束后，过滤并收集滤液，在滤液中加入18-23%的氯化钠进行盐析，离心后取沉淀进行透析至无氯离子检出，将透析后的溶液冷冻干燥得到固体胶原蛋白；酶解体系中加入（2R，4R）-戊二醇可以与酸性蛋白酶的活性中心发生络合反应，增大蛋白酶的活性，同时还可以降低酶与底物之间的能量壁垒，增大酶与底物之间的反应活性，提高反应效率，加快酶解反应的进行，降低了时间成本。
作为优选，丁酮溶液中L-酒石酸二甲酯的含量为0.98-1.05‰，L-酒石酸二甲酯可以与丁酮形成部分氢键作用，能够有效缓解丁酮脱脂时的发粘现象，提高丁酮的脱脂效果。
作为优选，双频率超声波的超声频率为25-35kHz、80-95kHz，超声密度为0.6-0.85W/cm2、1.5-1.8W/cm2；双频率超声波的两个空化效应可以产生叠加与协同作用，其所产生的崩溃效应也远远大于两个超声波的简单叠加，具有较好的分散效果。
作为优选，酸性蛋白酶为重量比为2-5:1的胃蛋白酶与菠萝蛋白酶；选用复合蛋白酶酶解可以发挥复合蛋白酶的协同作用，提高酶解效率。
作为优选，酶解的pH为2.3-3.5，反应温度为32-37℃，反应时间为1.5-2.5小时。
与现有技术相比，本发明的优点在于：1）丁酮具有较高的脱脂能力，可以去除牛蹄筋中多余的脂肪，提高蛋白质含量，L-酒石酸二甲酯可以与丁酮形成部分氢键作用，能够有效缓解丁酮脱脂时的发粘现象，提高丁酮的脱脂效果；2）酶解体系中加入（2R，4R）-戊二醇可以降低酶与底物之间的能量壁垒，增大酶与底物之间的反应活性，提高反应效率，加快酶解反应的进行，降低了时间成本。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明方案作进一步说明：
实施例1：
一种牦牛胶原蛋白的制备方法，包括以下步骤：
1）将牛蹄筋切成2mm的小丁，以料液比1:10加入丁酮溶液，丁酮溶液的质量分数为8%，浸泡脱脂18小时，每4小时换１次丁酮溶液，每次换液后以双频率超声波处理30秒；脱脂后的牛蹄筋经蒸馏水冲洗至无异味残留，按照料液比1:15加入0.20M氢氧化钠溶液，持续缓慢搅拌18小时，蒸馏水冲洗去除残留的氢氧化钠，低温干燥后粉碎，过60目筛后得脱脂粉；2）取脱脂粉按照料液比1:28加入0.5M的乙酸，缓慢搅拌溶胀8小时，然后在0℃、8000r/min离心30分钟，取沉淀加入10倍蒸馏水中，添加2000U/g酸性蛋白酶，再加入酸性蛋白酶重量20‰的（2R，4R）-戊二醇，酶解45分钟后灭酶，酶解液中加入等量蒸馏水浸提，浸提结束后，过滤并收集滤液，在滤液中加入18%的氯化钠进行盐析，离心后取沉淀进行透析至无氯离子检出，将透析后的溶液冷冻干燥得到固体胶原蛋白。
实施2：
一种牦牛胶原蛋白的制备方法，包括：脱脂与酶解，具体包括以下步骤：
1）脱脂：将牛蹄筋切成3mm的小丁，以料液比1:18加入丁酮溶液，丁酮溶液的质量分数为10%，丁酮溶液中L-酒石酸二甲酯的含量为0.98‰，浸泡脱脂24小时，每6小时换１次丁酮溶液，每次换液后以双频率超声波处理45秒，超声频率为25kHz、80kHz，超声密度为0.6 W/cm2、1.5W/cm2；脱脂后的牛蹄筋经蒸馏水冲洗至无异味残留，按照料液比1:16加入0.21M氢氧化钠溶液，持续缓慢搅拌24小时，蒸馏水冲洗去除残留的氢氧化钠，低温干燥后粉碎，过120目筛后得脱脂粉；丁酮具有较高的脱脂能力，可以去除牛蹄筋中多余的脂肪，提高蛋白质含量，为进一步的酶解做准备，L-酒石酸二甲酯能够有效缓解丁酮脱脂时的发粘现象，提高丁酮的脱脂效果；高能量超声波处理可以对液体进行高强度的翻动，增加油脂与丁酮的作用，同时以较大的机械冲刷力将组织从容器壁上撕掉或冲击下来，避免牛蹄筋组织的粘附，提高脱脂效果；
2）酶解：取脱脂粉按照料液比1:30加入0.6M的乙酸，缓慢搅拌溶胀10小时，然后在4℃、8500r/min离心45分钟，取沉淀加入12倍蒸馏水中，添加2500U/g酸性蛋白酶，酸性蛋白酶为重量比为2:1的胃蛋白酶与菠萝蛋白酶，再加入酸性蛋白酶重量35‰的（2R，4R）-戊二醇，pH为2.3，反应温度为32℃，反应时间为1.5小时，酶解60分钟后灭酶，酶解液中加入等量蒸馏水浸提，浸提结束后，过滤并收集滤液，在滤液中加入23%的氯化钠进行盐析，离心后取沉淀进行透析至无氯离子检出，将透析后的溶液冷冻干燥得到固体胶原蛋白；酶解体系中加入（2R，4R）-戊二醇可以与酸性蛋白酶的活性中心发生络合反应，增大蛋白酶的活性，同时还可以降低酶与底物之间的能量壁垒，增大酶与底物之间的反应活性，提高反应效率，加快酶解反应的进行，降低了时间成本。
实施3：
一种牦牛胶原蛋白的制备方法，包括：脱脂与酶解，具体包括以下步骤：
脱脂：将牛蹄筋切成2mm的小丁，以料液比1:15加入丁酮溶液，丁酮溶液的质量分数为9%，浸泡脱脂20小时，每4小时换１次丁酮溶液，每次换液后以双频率超声波处理40秒；脱脂后的牛蹄筋经蒸馏水冲洗至无异味残留，按照料液比1:15加入0.21M氢氧化钠溶液，持续缓慢搅拌20小时，蒸馏水冲洗去除残留的氢氧化钠，低温干燥后粉碎，过100目筛后得脱脂粉；丁酮具有较高的脱脂能力，可以去除牛蹄筋中多余的脂肪，提高蛋白质含量，为进一步的酶解做准备；高能量超声波处理可以对液体进行高强度的翻动，增加油脂与丁酮的作用，同时以较大的机械冲刷力将组织从容器壁上撕掉或冲击下来，避免牛蹄筋组织的粘附，提高脱脂效果；
酶解：取脱脂粉按照料液比1:28加入0.55M的乙酸，缓慢搅拌溶胀8小时，然后在2℃、8200r/min离心35分钟，取沉淀加入10倍蒸馏水中，添加2400U/g酸性蛋白酶，再加入酸性蛋白酶重量25‰的（2R，4R）-戊二醇，pH为3.5，反应温度为37℃，反应时间为2.5小时，酶解45分钟后灭酶，酶解液中加入等量蒸馏水浸提，浸提结束后，过滤并收集滤液，在滤液中加入20%的氯化钠进行盐析，离心后取沉淀进行透析至无氯离子检出，将透析后的溶液冷冻干燥得到固体胶原蛋白；酶解体系中加入（2R，4R）-戊二醇可以与酸性蛋白酶的活性中心发生络合反应，增大蛋白酶的活性，同时还可以降低酶与底物之间的能量壁垒，增大酶与底物之间的反应活性，提高反应效率，加快酶解反应的进行，降低了时间成本。
丁酮溶液中L-酒石酸二甲酯的含量为1.05‰，L-酒石酸二甲酯可以与丁酮形成部分氢键作用，能够有效缓解丁酮脱脂时的发粘现象，提高丁酮的脱脂效果。
双频率超声波的超声频率为35kHz、95kHz，超声密度为0.85W/cm2、1.8W/cm2；双频率超声波的两个空化效应可以产生叠加与协同作用，其所产生的崩溃效应也远远大于两个超声波的简单叠加，具有较好的分散效果。
酸性蛋白酶为重量比为5:1的胃蛋白酶与菠萝蛋白酶；选用复合蛋白酶酶解可以发挥复合蛋白酶的协同作用，提高酶解效率。
本发明操作步骤中的常规操作为本领域技术人员所熟知，在此不进行赘述。
以上所述的实施例对本发明的技术方案进行了详细说明，应理解的是以上所述仅为本发明的具体实施例，并不用于限制本发明，凡在本发明的原则范围内所做的任何修改、补充或类似方式替代等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (9)
1.一种牦牛胶原蛋白的制备方法，其特征在于：包括以下方法：
脱脂：将牛蹄筋切成2-3mm的小丁，加入L-酒石酸二甲酯的丁酮溶液，浸泡脱脂18-24小时，每4-6小时换1次丁酮溶液，每次换液后以双频率超声波处理30-45秒；脱脂后的牛蹄筋经蒸馏水冲洗至无异味残留，加入氢氧化钠溶液，持续缓慢搅拌18-24小时，蒸馏水冲洗去除残留的氢氧化钠，低温干燥后粉碎，过60-120目筛后得脱脂粉；
酶解：取脱脂粉加入乙酸溶液，缓慢搅拌溶胀8-10小时，然后在0-4℃、8000-8500r/min离心30-45分钟，取沉淀加入10-12倍蒸馏水中，添加酸性蛋白酶，再加入（2R，4R）-戊二醇，酶解45-60分钟后灭酶，酶解液中加入等量蒸馏水浸提，浸提结束后，过滤并收集滤液，在滤液中加入18-23%的氯化钠进行盐析，离心取沉淀进行透析至无氯离子检出，将透析后的溶液冷冻干燥得到固体胶原蛋白。
2.根据权利要求1所述的一种牦牛胶原蛋白的制备方法，其特征在于：所述脱脂步骤中所加入丁酮溶液的料液比为1:10-18，丁酮溶液的质量分数为8-10%。
3.根据权利要求1所述的一种牦牛胶原蛋白的制备方法，其特征在于：所述脱脂步骤中丁酮溶液中L-酒石酸二甲酯的含量为0.98-1.05‰。
4.根据权利要求1所述的一种牦牛胶原蛋白的制备方法，其特征在于：所述脱脂步骤中双频率超声波的超声频率为25-35kHz、80-95kHz，超声密度为0.6-0.85W/cm2、1.5-1.8W/cm2。
5.根据权利要求1所述的一种牦牛胶原蛋白的制备方法，其特征在于：所述脱脂步骤中所加入氢氧化钠溶液的料液比1:15-16，氢氧化钠溶液的浓度为0.20-0.21M。
6.根据权利要求1所述的一种牦牛胶原蛋白的制备方法，其特征在于：所述酶解步骤中所加入乙酸溶液的料液比为1:28-30，乙酸溶液的浓度为0.5-0.6M。
7.根据权利要求1所述的一种牦牛胶原蛋白的制备方法，其特征在于：所述酶解步骤中的酸性蛋白酶的添加量为2000-2500U/g，酸性蛋白酶为重量比为2-5:1的胃蛋白酶与菠萝蛋白酶。
8.根据权利要求1所述的一种牦牛胶原蛋白的制备方法，其特征在于：所述酶解步骤中（2R，4R）-戊二醇的重量为酸性蛋白酶重量的20-35‰。
9.根据权利要求1所述的一种牦牛胶原蛋白的制备方法，其特征在于：所述酶解步骤中酶解的pH为2.3-3.5，反应温度为32-37℃，反应时间为1.5-2.5小时。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201711139508.XA CN107937462A (zh) | 2017-11-16 | 2017-11-16 | 一种牦牛胶原蛋白的制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201711139508.XA CN107937462A (zh) | 2017-11-16 | 2017-11-16 | 一种牦牛胶原蛋白的制备方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN107937462A true CN107937462A (zh) | 2018-04-20 |
Family
ID=61932624
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201711139508.XA Pending CN107937462A (zh) | 2017-11-16 | 2017-11-16 | 一种牦牛胶原蛋白的制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN107937462A (zh) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108991395A (zh) * | 2018-09-07 | 2018-12-14 | 青海省畜牧兽医科学院 | 牦牛肉制品的制备方法 |
| CN109566845A (zh) * | 2018-12-03 | 2019-04-05 | 甘肃农业大学 | 一种食源性牛蹄筋ace抑制肽、果蔬咀嚼片及其制备方法 |
| CN111184221A (zh) * | 2019-10-21 | 2020-05-22 | 青海宏健生物科技集团有限公司 | 一种牦牛蹄筋胶原蛋白口服液及其制备方法 |
| CN118235862A (zh) * | 2024-04-06 | 2024-06-25 | 梅州市富德食品科技有限公司 | 一种多肽胶原蛋白粉及其制备方法 |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102229971A (zh) * | 2011-05-10 | 2011-11-02 | 苏州瑞蓝博中药技术开发有限公司 | 一种用牦牛鲜骨制备胶原蛋白肽的方法 |
| CN103070393A (zh) * | 2013-01-08 | 2013-05-01 | 浙江工业大学 | 一种纳米骨粉的制备方法 |
| CN104087641A (zh) * | 2014-07-08 | 2014-10-08 | 天津大学 | 牦牛皮降血压胶原蛋白多肽及其制备方法 |
| CN106701878A (zh) * | 2017-02-20 | 2017-05-24 | 青海师范大学 | 一种酶法提取牦牛皮胶原蛋白的方法 |
| CN106946988A (zh) * | 2017-04-07 | 2017-07-14 | 李毅 | 一种牛跟腱胶原蛋白的提取方法 |
-
2017
- 2017-11-16 CN CN201711139508.XA patent/CN107937462A/zh active Pending
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102229971A (zh) * | 2011-05-10 | 2011-11-02 | 苏州瑞蓝博中药技术开发有限公司 | 一种用牦牛鲜骨制备胶原蛋白肽的方法 |
| CN103070393A (zh) * | 2013-01-08 | 2013-05-01 | 浙江工业大学 | 一种纳米骨粉的制备方法 |
| CN104087641A (zh) * | 2014-07-08 | 2014-10-08 | 天津大学 | 牦牛皮降血压胶原蛋白多肽及其制备方法 |
| CN106701878A (zh) * | 2017-02-20 | 2017-05-24 | 青海师范大学 | 一种酶法提取牦牛皮胶原蛋白的方法 |
| CN106946988A (zh) * | 2017-04-07 | 2017-07-14 | 李毅 | 一种牛跟腱胶原蛋白的提取方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 陈渭: "碱性蛋白酶提取牦牛皮胶原蛋白的工艺研究", 《青海大学学报》 * |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108991395A (zh) * | 2018-09-07 | 2018-12-14 | 青海省畜牧兽医科学院 | 牦牛肉制品的制备方法 |
| CN109566845A (zh) * | 2018-12-03 | 2019-04-05 | 甘肃农业大学 | 一种食源性牛蹄筋ace抑制肽、果蔬咀嚼片及其制备方法 |
| CN111184221A (zh) * | 2019-10-21 | 2020-05-22 | 青海宏健生物科技集团有限公司 | 一种牦牛蹄筋胶原蛋白口服液及其制备方法 |
| CN118235862A (zh) * | 2024-04-06 | 2024-06-25 | 梅州市富德食品科技有限公司 | 一种多肽胶原蛋白粉及其制备方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN107937462A (zh) | 一种牦牛胶原蛋白的制备方法 | |
| CN102630957B (zh) | 一种牛肉快速成熟嫩化的方法 | |
| CN1234990A (zh) | 一种火腿肠及其制作方法 | |
| CN102960749A (zh) | 一种重组膨化猪皮的加工方法 | |
| EP0419529A1 (en) | IMPROVEMENTS RELATING TO PROTEIN PRODUCTS. | |
| CN1653087A (zh) | 胶原蛋白及其制备方法 | |
| CN101836687A (zh) | 速溶性淡水鱼肽粉的制备方法 | |
| CN101570772A (zh) | 一种天然骨胶原的制备方法 | |
| CN101912027A (zh) | 一种复合酶解鲍鱼内脏制备蛋白水解液的方法 | |
| Neklyudov | Nutritive fibers of animal origin: Collagen and its fractions as essential components of new and useful food products | |
| CN110663957A (zh) | 一种耗牛牛骨补钙营养物质的提取方法 | |
| CN102551106A (zh) | 一种低脂复合型鱼肉鹅肠的生产方法 | |
| CN102366125B (zh) | 生物酶结合胶原蛋白重组海鳗鱼肉边角料的方法 | |
| CN109497446A (zh) | 采用复合酶制剂的肉制品生产工艺 | |
| CN102210455B (zh) | 一种复合天然胶原蛋白的保健食品及其制造方法 | |
| CN111084347A (zh) | 一种高膳食纤维鱼肉火腿肠及其制备方法 | |
| Liu et al. | Meat co-products | |
| CN110269200A (zh) | 鹅肉红肠及制作方法 | |
| KR100828667B1 (ko) | 산란노계육을 이용한 식육 푸레이크 및 그 제조 방법 | |
| RU2007926C1 (ru) | Способ получения коллагеновых волокон из коллагенсодержащих тканей животных | |
| CN1586289A (zh) | 含肉、鱼材料的鸡精类调味品制造方法及其产品 | |
| CN104824696B (zh) | 一种高品质骨粒及其生产方法 | |
| Kantale et al. | Utilization of Abattoir Byproducts and Its Applications in Meat Industry | |
| CN105077341A (zh) | 一种用鹿肉和鹿血制作腊肠的方法 | |
| RU2783534C2 (ru) | Способ получения мясных гранул для полукопченых колбас |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20180420 |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |