CN107912567A - 一种金花茶叶活性物质的提取方法 - Google Patents

一种金花茶叶活性物质的提取方法 Download PDF

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Abstract

本发明属于茶叶深加工技术领域，具体地说是一种金花茶叶活性物质的提取方法。提取方法步骤包括：(1)制粉：采集新鲜的金花茶叶，用清水洗干净，沥干，放入反应釜中，通入液氮，加超高压进行浸渍处理，然后进行研磨粉碎得到金花茶叶粉末；(2)往金花茶叶粉末中加入磁化水，调节温度为60~80℃，然后进行高速剪切，加入酶分子印迹微球吸附多酚氧化酶和过氧化氢酶，滤除不溶物，获取金花茶叶有效成分溶液；(3)将得到的活性物质进行纯化，在获取的金花茶叶有效成分溶液中加入0.05%浓度的表面活性剂，再加入0.2~0.5%的葡萄糖酸‑δ‑内酯，0.4~0.6%的EDTA二钠，然后过滤，即得金花茶叶活性物质。

Description

一种金花茶叶活性物质的提取方法
技术领域
本发明属于茶叶深加工技术领域，具体地说是一种金花茶叶活性物质的提取方法。
背景技术
金花茶属于山茶科、山茶属，与茶、山茶、南山茶、油茶、茶梅等同为山茶科山茶属植物。金花茶是广西特有的珍稀古老茶树品种。随着对金花茶研究的逐步开展，其药用价值也更多地被发现，被列为国家一级保护植物，享有“茶族皇后”、“植物界大熊猫”等美誉。金花茶的叶中含有黄酮类、茶多糖、多酚、皂苷类、脂溶性成分、微量元素等多种化学成分。经过实验证明金花茶具有显著的抑菌、抗癌、抗氧化活性、抗辐射、降血压、降血脂、降低胆固醇、增强免疫力和防止动脉粥样硬化等功效。为了能利用金花茶叶中的活性物质，对金花茶叶活性物质进行加工提取。
中国专利201110239197.0公开了一种茶鲜叶中酯型儿茶素的提取方法，该专利以在乙酸乙酯为萃取溶剂的条件下，按料液重量体积比为1:20-1:40的比例把茶鲜叶和乙酸乙酯加入到不锈钢搅拌器中再加入液氮，使搅拌时温度维持在0-10℃，搅拌时间为1-2.5min；搅拌结束后用滤纸过滤，得儿茶素提取液，定容，置于2-10℃冷藏保存。该发明采用液氮对空气中的氧气进行隔绝，可以缓和儿茶素的氧化，但是并未并未对儿茶素进行纯化，所得的儿茶素所含有的杂质较多。
中国专利201410604971.7公开了一种金花茶叶片提取物及其用途，该发明的制备方法为：将金花茶的植物叶加水提取后过滤，滤渣也经1～5次的加水提取后过滤，合并所得滤液，减压干燥，得到产品；植物叶和滤渣加水提取的过程为：加入5～30倍重量的水，加热至沸腾后停火，热浸10～180min，再次加热至沸腾后停火，热浸1～180min。该专利采用传统的中药较高温度长时间熬制的方法，存在生产周期长，有效成分损失大，提取率低等问题。
中国专利201611101679.9公开了一种金花茶叶活性成分的提取方法，该提取方法包括以下步骤：收集金花茶叶用清水洗净，用切药机将金花茶叶切成小叶条，用打浆机打浆得到金花茶浆液，再将金花茶浆液转移到不锈钢提取罐中，加入果胶酶，然后加热灭菌，再加入乙醇进行超声波提取，超声波重复提取两次后将所得的滤液进行浓缩即可。由于金花茶叶细胞壁结构比较紧密，叶脉粗硬，组织比较脆硬，该发明的提取方法并未能对金花茶活性成分进行充分提取。
发明内容
本发明提供了一种金花茶叶活性物质的提取方法，能够保证金花茶活性物质组分的完整性和平衡性，有效破坏金花茶叶的植物细胞壁，有利于提取物质的溶出，提取效率高，无溶剂残留，安全性好，极大降低了对环境的污染。
本发明的技术方案是通过这样实现的：一种金花茶叶活性物质的制备方法，提取方法步骤包括：
(1)制粉：采集新鲜的金花茶叶，用清水洗干净，沥干，放入反应釜中，通入液氮，加超高压进行浸渍处理，然后进行研磨粉碎得到金花茶叶粉末；
(2)往金花茶叶粉末中加入磁化水，调节温度为60~80℃，然后进行高速剪切，加入酶分子印迹微球吸附多酚氧化酶和过氧化氢酶，滤除不溶物，获取金花茶叶有效成分溶液；
(3)将得到的活性物质进行纯化，在获取的金花茶叶有效成分溶液中加入0.05%浓度的表面活性剂，再加入0.2~0.5%的葡萄糖酸-δ-内酯、0.4~0.6%的EDTA二钠，然后过滤，即得金花茶叶活性物质。
作为本发明的进一步改进，所述的超高压浸渍操作参数为：压力为400~500MPa，时间为5-10min。
作为本发明的进一步改进，所述的高速剪切操作参数为：高速剪切机转速为10000~12000r/min，提取时间为1~2min。
作为本发明的进一步改进，所述的酶分子印迹微球制备方法步骤包括：
取20~25份金花茶叶多酚氧化酶、15~18份金花茶叶过氧化氢酶、2~3份份环糊精溶于20ml蒸馏水中，超声溶解10min，预聚合2~4h，再加入8~12份二乙烯基苯、15~25份乙酸乙酯，超声溶解10min，混合后通入氮气，经紫外光照射后，聚合20~24h，然后用5:1的乙醇/乙酸进行洗脱，即得所需的酶分子印迹微球。
作为本发明的进一步改进，所述的表面活性剂为蔗糖脂肪酸、山梨酸单硬脂酸酯、大豆磷脂的混合物。
作为本发明的进一步改进，所提取得到的金花茶叶活性成分含有总皂苷、黄酮、茶多酚、茶多糖、茶色素、氨基酸、维生素、微量元素硒铁锌。
本发明实现的技术原理：首先采用液氮和高压联合的方法对金花茶叶进行浸渍处理，利用液氮的低温作用使金花茶叶实现低温深冷的超速东，能够较好地保证金花茶叶的活性物质不受破坏。超高压可以使液氮更好的进入到金花茶叶的细胞中，实现更深入的冷冻，经过冻干后超高压经过瞬间释放压力，可以使金花茶叶表面果胶成分的崩解促进细胞壁破裂使里面的内容物溶出，内容物溶出后加入的液氮可以较好地隔绝氧气，抑制茶多酚、茶多糖等有效成分的氧化，超高压对对多酚氧化酶、过氧化氢酶具有有效的钝化作用，超高压和液氮的协同作用，能够更好地保护金花茶叶中的活性物质。
磁化水具有更高的渗透作用，能够渗透到金花茶叶中的组织细胞中，增强活性物质的渗出能力和提高其在水中的溶解能力。高速剪切是对金花茶叶的二次破碎，提高金花茶叶细胞壁的破壁率，磁化水和高速剪切同时作用，可以促进内容物的快速溶出，节省提取时间。使用剪切时间为1~2min能够使金花茶叶中的有效成分更好地溶出，延长时间会破坏多糖等有效成分，反而降低活性物质的得率。
液氮和超高压能够抑制多酚氧化酶和过氧化氢酶的活性，使茶多酚、茶多糖等活性物质被氧化，但是并未能够使多酚氧化酶、过氧化氢酶的活性完全抑制，采用酶分子印迹微球对过氧化氢酶和多酚氧化酶进行分离，可以更好地保证提取液中的茶多酚、茶多糖等活性物质不被氧化。
对活性物质进行提纯，加入表面活性剂可以使难溶于提取液中的物质更好地溶解在水中，加入的EDTA二钠可以与金花茶叶有效成分溶液中的蛋白质螯合形成沉淀析出。葡萄糖酸-δ-内酯可以与果胶作用形成沉淀，经过过滤，可以将蛋白质和果胶物质分离出来，得到所需的金花茶叶活性物质。
本发明具备以下良好效果：
1.本发明的提取方法能够从金花茶叶中获取皂苷、黄酮、茶多酚、茶多糖、茶色素、氨基酸、维生素、微量元素硒锌铁活性物质，提取效率更高，提取完全。
2.本发明的提取方法能够有效抑制茶多酚、茶多糖等有效成分的氧化，可以较好地保留提取物质的活性不受破坏。
3.本发明的金花茶叶活性物质提取方法，无溶剂残留，安全性高，对环境无污染。
具体实施方式
以下结合实施例描述本发明一种金花茶叶活性物质提取方法，这些描述并不是对本发明内容作进一步的限定。
实施例1
酶分子印迹微球的制备：取23份金花茶叶多酚氧化酶、17份金花茶叶过氧化氢酶、2.5份份环糊精溶于20ml蒸馏水中，超声溶解10min，预聚合4h，再加入10份二乙烯基苯、18份乙酸乙酯，超声溶解10min，混合后通入氮气，经紫外光照射后，聚合22h，然后用5:1的乙醇/乙酸进行洗脱，即得所需的酶分子印迹微球。
制粉：采集新鲜的金花茶叶，用清水洗干净，沥干，放入反应釜中，通入液氮，加超高压进行浸渍处理，压力为480MPa，浸渍时间为6min。然后进行研磨粉碎得到金花茶叶粉末。
往金花茶叶粉末中加入磁化水，调节温度为60℃，然后进行高速剪切，剪切机转速为10000r/min，提取时间为1.5min，然后加入酶分子印迹微球吸附多酚氧化酶和过氧化氢酶，滤除不溶物，获取金花茶叶有效成分溶液。
将得到的活性物质进行纯化，在获取的金花茶叶有效成分溶液中加入0.05%浓度的表面活性剂，再加入0.2%的葡萄糖酸-δ-内酯，0.4%的EDTA二钠，然后过滤，即得金花茶叶活性物质。
实施例2
酶分子印迹微球的制备：取20份金花茶叶多酚氧化酶、18份金花茶叶过氧化氢酶、2份份环糊精溶于20ml蒸馏水中，超声溶解10min，预聚合3.5h，再加入9份二乙烯基苯、20份乙酸乙酯，超声溶解10min，混合后通入氮气，经紫外光照射后，聚合20h，然后用5:1的乙醇/乙酸进行洗脱，即得所需的酶分子印迹微球。
制粉：采集新鲜的金花茶叶，用清水洗干净，沥干，放入反应釜中，通入液氮，加超高压进行浸渍处理，压力为400MPa，浸渍时间为10min。然后进行研磨粉碎得到金花茶叶粉末。
往金花茶叶粉末中加入磁化水，调节温度为75℃，然后进行高速剪切，剪切机转速为11000r/min，提取时间为1 min，然后加入酶分子印迹微球吸附多酚氧化酶和过氧化氢酶，滤除不溶物，获取金花茶叶有效成分溶液。
将得到的活性物质进行纯化，在获取的金花茶叶有效成分溶液中加入0.05%浓度的表面活性剂，再加入0.3%的葡萄糖酸-δ-内酯，0.5%的EDTA二钠，然后过滤，即得金花茶叶活性物质。
实施例3
酶分子印迹微球的制备：取24份金花茶叶多酚氧化酶、16份金花茶叶过氧化氢酶、2.5份份环糊精溶于20ml蒸馏水中，超声溶解10min，预聚合2h，再加入10份二乙烯基苯、23份乙酸乙酯，超声溶解10min，混合后通入氮气，经紫外光照射后，聚合24h，然后用5:1的乙醇/乙酸进行洗脱，即得所需的酶分子印迹微球。
制粉：采集新鲜的金花茶叶，用清水洗干净，沥干，放入反应釜中，通入液氮，加超高压进行浸渍处理，压力为500MPa，浸渍时间为5min。然后进行研磨粉碎得到金花茶叶粉末。
往金花茶叶粉末中加入磁化水，调节温度为70℃，然后进行高速剪切，剪切机转速为12000r/min，提取时间为2min，然后加入酶分子印迹微球吸附多酚氧化酶和过氧化氢酶，滤除不溶物，获取金花茶叶有效成分溶液。
将得到的活性物质进行纯化，在获取的金花茶叶有效成分溶液中加入0.05%浓度的表面活性剂，再加入0.5%的葡萄糖酸-δ-内酯，0.6%的EDTA二钠，然后过滤，即得金花茶叶活性物质。
实施例4
酶分子印迹微球的制备：取25份金花茶叶多酚氧化酶、16份金花茶叶过氧化氢酶、3份份环糊精溶于20ml蒸馏水中，超声溶解10min，预聚合3h，再加入8份二乙烯基苯、15份乙酸乙酯，超声溶解10min，混合后通入氮气，经紫外光照射后，聚合23h，然后用5:1的乙醇/乙酸进行洗脱，即得所需的酶分子印迹微球。
制粉：采集新鲜的金花茶叶，用清水洗干净，沥干，放入反应釜中，通入液氮，加超高压进行浸渍处理，压力为420MPa，浸渍时间为9min。然后进行研磨粉碎得到金花茶叶粉末。
往金花茶叶粉末中加入磁化水，调节温度为80℃，然后进行高速剪切，剪切机转速为11500r/min，提取时间为2 min，然后加入酶分子印迹微球吸附多酚氧化酶和过氧化氢酶，滤除不溶物，获取金花茶叶有效成分溶液。
将得到的活性物质进行纯化，在获取的金花茶叶有效成分溶液中加入0.05%浓度的表面活性剂，再加入0.4%的葡萄糖酸-δ-内酯，0.5%的EDTA二钠，然后过滤，即得金花茶叶活性物质。
实施例5
酶分子印迹微球的制备：取21份金花茶叶多酚氧化酶、15份金花茶叶过氧化氢酶、3份份环糊精溶于20ml蒸馏水中，超声溶解10min，预聚合2.5h，再加入12份二乙烯基苯、25份乙酸乙酯，超声溶解10min，混合后通入氮气，经紫外光照射后，聚合21h，然后用5:1的乙醇/乙酸进行洗脱，即得所需的酶分子印迹微球。
制粉：采集新鲜的金花茶叶，用清水洗干净，沥干，放入反应釜中，通入液氮，加超高压进行浸渍处理，压力为450MPa，浸渍时间为8min。然后进行研磨粉碎得到金花茶叶粉末。
往金花茶叶粉末中加入磁化水，调节温度为65℃，然后进行高速剪切，剪切机转速为10500r/min，提取时间为1 min，然后加入酶分子印迹微球吸附多酚氧化酶和过氧化氢酶，滤除不溶物，获取金花茶叶有效成分溶液。
将得到的活性物质进行纯化，在获取的金花茶叶有效成分溶液中加入0.05%浓度的表面活性剂，再加入0.3%的葡萄糖酸-δ-内酯，0.6%的EDTA二钠，然后过滤，即得金花茶叶活性物质。
将本发明实施例所得的金花茶叶活性物质进行含量测定，以茶多糖、茶多酚、黄酮和茶皂苷占鲜茶叶的含量为主要指标，以及以提取率为指标，测定结果如下表所示。
表1 测试结果表
本发明上述实施例方案仅是对本发明的说明而不能限制本发明，权利要求中指出了本发明产品组成成分、成分比例、制备方法参数的范围，而上述的说明并未指出本发明参数的范围，因此，在与本发明的权利要求书相当的含义和范围内的任何改变，都应当认为是包括在权利要求书的范围内。
本发明是经过多位金花茶加工人员长期工作经验积累，并通过创造性劳动创作而出，本发明的茶多糖含量为8.9~9.7%，提取率为95.8~97.1%；茶多酚含量为7.5~8.9%，提取率为95.7~97.8%；黄酮含量为0.57~0.68%，提取率为95.3~96.7%；茶皂苷含量为0.74~0.87%，提取率为95.7~96.6%。用本发明的金花茶叶提取方法所得的活性物质成分提取率高，提取效果好，并且在提取的过程中能够保证有效组分的活性，有利于金花茶叶的应用。

Claims (6)

1.一种金花茶叶活性物质的提取方法，其特征在于，所述的提取方法步骤包括：
步骤1)制粉：采集新鲜的金花茶叶，用清水洗干净，沥干，放入反应釜中，通入液氮，加超高压进行浸渍处理，然后进行研磨粉碎得到金花茶叶粉末；
步骤2)往金花茶叶粉末中加入磁化水，调节温度为60~80℃，然后进行高速剪切，加入酶分子印迹微球吸附多酚氧化酶和过氧化氢酶，滤除不溶物，获取金花茶叶有效成分溶液；
步骤3)将得到的活性物质进行纯化，在获取的金花茶叶有效成分溶液中加入0.05%浓度的表面活性剂，再加入0.2~0.5%的葡萄糖酸-δ-内酯、0.4~0.6%的EDTA二钠，然后过滤，即得金花茶叶活性物质。
2.根据权利要求1所述的一种金花茶叶活性物质的提取方法，其特征在于，所述的超高压浸渍操作参数为：压力为400~500MPa，时间为5-10min。
3.根据权利要求1所述的一种金花茶叶活性物质的提取方法，其特征在于，所述的高速剪切操作参数为：高速剪切机转速为10000~12000r/min，提取时间为1~2min。
4.根据权利要求1所述的一种金花茶叶活性物质的提取方法，其特征在于，所述的酶分子印迹微球制备方法步骤包括：
取20~25份金花茶叶多酚氧化酶、15~18份金花茶叶过氧化氢酶、2~3份份环糊精溶于20ml蒸馏水中，超声溶解10min，预聚合2~4h，再加入8~12份二乙烯基苯、15~25份乙酸乙酯，超声溶解10min，混合后通入氮气，经紫外光照射后，聚合20~24h，然后用5:1的乙醇/乙酸进行洗脱，即得所需的酶分子印迹微球。
5.根据权利要求1所述的一种金花茶叶活性物质的提取方法，其特征在于，所述的表面活性剂为蔗糖脂肪酸、山梨酸单硬脂酸酯、大豆磷脂的混合物。
6.根据权利要求1所述的一种金花茶叶活性物质的提取方法，其特征在于，所提取得到的金花茶叶活性物质的成分含有总皂苷、黄酮、茶多酚、茶多糖、茶色素、氨基酸、维生素、微量元素硒铁锌。
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