CN107898852A - 一种化橘红葛花复方解酒含片及其制作方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开一种以化橘红和葛花为主要原料的复方解酒含片及其制作方法，包括如下步骤：(1)提取黄酮；采用超声波辅助乙醇浸提化橘红与葛花中的黄酮类化合物；(2)通过大孔树脂纯化葛花黄酮；(3)进行乙醇脱氢酶活性测定；(4)制作化橘红复方解酒含片。含片优选配方按比例计包括：麦芽糊精35‑％45％，味精10％，白砂糖10％，维生素C 5％，化橘红黄酮10％‑20％，葛花黄酮10％‑20％，DL‑酒石酸10％。本发明采用两种体外活性测定法(乙醇脱氢酶活性测定法和相对密度测酒精度法)测定化橘红和葛花黄酮以及多种解酒片和解酒含片的解酒效果，设计了一种解酒效果较好的配方——化橘红葛花复方解酒含片。本发明的化橘红葛花黄酮复方解酒含片经测定具有较好的解酒效果，携带方便、食用简单，制作工艺稳定，适合规模化生产。

Description

一种化橘红葛花复方解酒含片及其制作方法
技术领域
本申请涉及一种化橘红应用领域，特别涉及一种化橘红葛花复方解酒含片及其制作方法。
背景技术
化橘红是广东省化州市的道地药材，名列‘十大广药’之一，其为芸香科柑橘属植物化州柚(Citrus grandis cv.‘Tomontosa’)未成熟或近成熟果实的干燥外果皮，具有化痰、坦气、健胃、消食的功能，为理气化痰、健脾消食之常用中药。化橘红的主要有效成分是黄酮类。
葛花是为豆科植物野葛Pueraria lobata(Willd.)Ohwi、甘葛藤P.thomsoniiBenth.的花，是传统中医药物之一，具有醒酒、伤口止血的疗效，被人们常用于伤酒护肝，头晕目眩，吐血等病状。葛花的主要有效成分是黄酮类。
黄酮类化合物是一类植物次生代谢产物，具有抑制酶活性、抗癌、抗菌、抗病毒、抗炎症、抗过敏、抗糖尿病并发症等功能，具有良好的解酒效果。李萍等对葛花的解酒原理进行研究发现，葛花进入人体后作用于人的消化道粘膜，降低消化道对酒精的吸收，从而起到解酒的作用。王东坡等人研究发现从葛花提取的黄酮类化合物能提高乙醇脱氢酶的活性，加快肝脏里乙醇脱氢酶氧化体系对酒精的代谢速率，起到解酒的效果。Niiho Y,Yamazaki利用葛花黄酮对小白鼠进行实验发现，葛花黄酮类物质能降低小白鼠血液中乙醇的含量。同时葛花能调节小白鼠的中枢神经系统，降低因醉酒产生的不良生理反应的发生率。葛花解酒制品还具有治疗因醉酒引起的头痛、伤肝、身虚等症状的作用，防止因酒毒引起的肝纤维化、脂肪肝的发生，同时修复受损的肝细胞和组织，改善了肝的功能。
解酒制品按解酒机理可分为：
(1)激活肝脏内乙醇脱氢酶和乙醛脱氢酶的活性的解酒制品，此类产品大部分都是由中药提取物制取而成的，如解酒护肝口服液等。
(2)蛋白肽解酒产品。此类产品是利用小片段的蛋白肽通过激活血液中的酶，提高丙氨酸和亮氨酸的浓度，使血液中的NAD+增加，NAD+和酒精反应使酒精浓度降低，如醒酒蛋白肽饮料等。
解酒制品按中西医药理学可分为：
(1)中药解酒制品，利用中药及中药提取物制成的解酒制品主要是治理慢性酒精中毒，中药解酒制品除了可以解酒外还能治疗因为长期过量饮酒引起的一些肝病，胃病等，拥有一定的保健效果。
(2)西药解酒制品，主要是从利尿等方面进行治疗，西医讲究对症处理，具体问题具体解决。此类产品对酒精急性中毒有比较好的疗效，对于慢性的中毒现象的疗效则不及中药解酒制品。非常迫切需要提供一种快速方便的解酒制品。
发明内容
为解决上述技术问题：本发明提出一种化橘红葛花复方解酒含片及其制作方法，包括如下步骤：
(1)提取黄酮；采用超声波辅助乙醇浸提化橘红与葛花中的黄酮类化合物；
(2)通过大孔树脂纯化葛花黄酮；
(3)进行乙醇脱氢酶活性测定；
(4)制作化橘红葛花复方解酒含片。
所述的化橘红葛花复方解酒含片制作方法，所述步骤(1)具体包括：
A、提取化橘红黄酮：
1)化橘红果实预处理方法：选取干燥的化橘红果实，先用微波炉将其软化，趁热切片，然后粉碎，密封保存备用；所述微波加热温度100-130℃，1-2min；
2)称取10g化橘红粉末于500ml锥形瓶中，按料液比1:50加入80％乙醇溶液500ml，于超声波下中浸提50min；
3)然后抽滤，保留滤液，弃去滤渣，滤液于65℃下旋转蒸发浓缩，直至基本没有乙醇回流为止，所得化橘红黄酮溶液使用水沉法使化橘红黄酮沉淀，抽滤后保留滤渣，滤渣于60℃烘箱烘8h，得到干燥的化橘红粗黄酮粉末；
B、提取葛花黄酮：
1)称量12.5g葛花按料液比1:40加入80％的乙醇溶液500ml，于超声波中浸提50min；
2)然后抽滤，保留滤液和滤渣，滤渣再次提取，合并两次滤液于65℃下旋转蒸发浓缩，直至基本没有乙醇回流为止，得到的就是葛花黄酮粗提取液。
3.如权利要求1所述的化橘红葛花复方解酒含片制作方法，其特征在于，所述步骤(2)具体包括：通过AB-8大孔树脂对葛花黄酮进行纯化，纯化具体包括：
1)大孔树脂的预处理：将大孔树脂装于烧杯中，倒入大孔树脂体积两倍的5％NaOH，静置浸泡1h，随后抽滤；倒入大孔树脂体积一倍的蒸馏水，静置浸泡1h，随后抽滤；倒入大孔树脂体积两倍的10％HCl，静置浸泡1h，随后抽滤，用蒸馏水洗涤大孔树脂至中性；
2)装柱：采用乙醇湿法装柱，随后打开层析柱下端开口，用93％的乙醇溶液以10ml/min的恒定流速冲洗，偶尔检查流出的乙醇溶液，直至乙醇溶液和水混合为1:5，无白色浑浊为止，最后用大量蒸馏水冲洗除去残留的乙醇。
3)上样：先将一个干净的烧杯置于层析柱下端开口，开启层析柱下端开口，控制1ml/min流速将收集到的葛花黄酮提取液缓慢倒入层析柱中，直到层析柱下端流出的液体颜色能与1％FeCl3溶液发生显色反应时，此时表明已经有少量黄酮流出，AB-8大孔树脂吸附达到了饱和，此时停止加入葛花黄酮提取液；
4)洗脱：将干净的烧杯置于层析柱下端开口，开启层析柱下端开口，以1ml/min恒定流速用蒸馏水冲洗大孔树脂，用浓硫酸检测流出液，直至流出液无糖为止；之后重新另取一个干净烧杯置于层析柱下端开口，以恒定流速用浓度为93％的乙醇冲洗大孔树脂，直至层析柱下端开口流下的液体颜色基本与乙醇颜色相近，因为黄酮类化合物易溶于乙醇，所以此时洗脱出来液体即为葛花中的黄酮类化合物；
5)再生：将葛花黄酮完全洗脱后，用浓度为40％-50％的NaOH溶液将大孔树脂浸泡4h，抽滤后用蒸馏水冲洗至PH至中性；随后用浓度为40％-50％的HCl溶液将大孔树脂浸泡4h，抽滤后用蒸馏水冲洗至PH至中性；
6)保存：将完成再生的大孔树脂用浓度为40％的乙醇溶液浸泡，密封容器保存；
7)葛花黄酮浓缩干燥：将收集到的葛花黄酮洗脱液于经旋转蒸发仪，直至基本没有乙醇回流为止，得到即为较纯的葛花黄酮提取液。将所得葛花黄酮提取液使用水沉法葛花黄酮沉淀，抽滤后保留滤渣，将滤渣放进烘箱中，于60℃的温度下烘8h，得到的即为葛花黄酮。
4.如权利要求1所述的一种化橘红葛花复方解酒含片，其包含：
麦芽糊精35-％45％，味精10％，白砂糖10％，维生素C 5％，化橘红黄酮10％-20％，葛花黄酮10％-20％， DL-酒石酸10％。
如权利要求1所述的化橘红复方解酒含片，含片优选包括：麦芽糊精45％，味精10％，白砂糖10％，维生素C 5％，化橘红黄酮10％，葛花黄酮10％，DL-酒石酸10％。
所述的化橘红复方解酒含片，含片优选包括：麦芽糊精40％，味精10％，白砂糖10％，维生素C 5％，化橘红黄酮15％，葛花黄酮10％，DL-酒石酸10％。
所述的化橘红复方解酒含片，含片优选包括：麦芽糊精35％，味精10％，白砂糖10％，维生素C 5％，化橘红黄酮20％，葛花黄酮10％，DL-酒石酸10％。
所述的化橘红复方解酒含片，含片优选包括：麦芽糊精40％，味精10％，白砂糖10％，维生素C 5％，化橘红黄酮10％，葛花黄酮15％，DL-酒石酸10％。
所述的化橘红复方解酒含片，含片优选包括：麦芽糊精35％，味精10％，白砂糖10％，维生素C 5％，化橘红黄酮10％，葛花黄酮20％，DL-酒石酸10％。
本发明采用两种体外活性测定法(乙醇脱氢酶活性测定法和相对密度测酒精度法)测定化橘红和葛花黄酮以及多种解酒片和解酒含片的解酒效果，设计了一种解酒效果较好的配方——化橘红葛花复方解酒含片。本发明的化橘红葛花黄酮复方解酒含片经测定具有较好的解酒效果。
具体实施方式
下面结合表格对本申请作进一步详细描述，有必要在此指出的是，以下具体实施方式只用于对本申请进行进一步的说明，不能理解为对本申请保护范围的限制，该领域的技术人员可以根据上述申请内容对本申请作出一些非本质的改进和调整。
实验材料：化橘红果实、AB-8大孔树脂、葛花、无水乙醇(分析纯)。
试验器材：SHB-LV双A型循环式多用真空泵、PS-30AD型数控超声波清洗机、B402196053型电子天平、HH-4A型数显单控单列恒温水浴锅、高速中药粉碎机、RE-52AA型旋转蒸发仪、DGG-9146A 型恒温干燥箱、层析柱。
如表1为本发明使用的实验试剂，表2为本发明使用的实验仪器；
表1本发明使用的实验试剂
表2本发明使用的实验仪器
实验方法
1黄酮的提取方法
化橘红与葛花中起到解酒效果的主要物质为黄酮类化合物，难溶于水，易溶于乙醇等有机溶剂，所以采用超声波辅助乙醇浸提化橘红与葛花中的黄酮类化合物。
1.1化橘红黄酮提取工艺
化橘红果实预处理方法：干燥的化橘红果实质地较为坚硬，体积较大，直接使用乙醇提取效率不高，因此先用微波炉(微波加热温度100～130℃，1～2min)将其软化，趁热切片，然后粉碎，密封保存备用。
操作步骤：称取10g化橘红粉末于500ml锥形瓶中，按料液比1:50加入80％乙醇溶液500ml，于超声波下中(超声波频率为80HZ、70℃)浸提50min。然后抽滤，保留滤液，弃去滤渣，滤液于 65℃下旋转蒸发浓缩，直至基本没有乙醇回流为止，所得化橘红黄酮溶液使用水沉法使化橘红黄酮沉淀，抽滤后保留滤渣，滤渣于60℃烘箱烘8h，既得干燥的化橘红粗黄酮粉末。
1.2葛花黄酮提取工艺
称量12.5g葛花按料液比1:40加入80％的乙醇溶液500ml，于超声波中(超声波频率为80HZ、 70℃)浸提50min。然后抽滤，保留滤液和滤渣，滤渣再次提取，合并两次滤液于65℃下旋转蒸发浓缩，直至基本没有乙醇回流为止，得到的就是葛花黄酮粗提取液。
2大孔树脂纯化葛花黄酮工艺
通过醇提水沉法得到的化橘红黄酮粗提物纯度相对较高，而经乙醇提取得到葛花黄酮提取液为粗提取液含糖类物质较多，为进一步纯化葛花黄酮。本文选择AB-8大孔树脂对葛花黄酮进行纯化。
(1)大孔树脂的预处理：将大孔树脂装于烧杯中，倒入大孔树脂体积两倍的5％NaOH，静置浸泡 1h，随后抽滤；倒入大孔树脂体积一倍的蒸馏水，静置浸泡1h，随后抽滤；倒入大孔树脂体积两倍的 10％HCl，静置浸泡1h，随后抽滤，用蒸馏水洗涤大孔树脂至中性。
(2)装柱：采用乙醇湿法装柱，随后打开层析柱下端开口，用93％的乙醇溶液以恒定流速(10ml/ min)冲洗，偶尔检查流出的乙醇溶液，直至乙醇溶液和水混合(1:5)，无白色浑浊为止，最后用大量蒸馏水冲洗除去残留的乙醇。
(3)上样：先将一个干净的烧杯置于层析柱下端开口，开启层析柱下端开口，控制流速(1ml/min) 将收集到的葛花黄酮提取液缓慢倒入层析柱中，直到层析柱下端流出的液体颜色能与1％FeCl3溶液发生显色反应时，此时表明已经有少量黄酮流出，AB-8大孔树脂吸附达到了饱和，此时停止加入葛花黄酮提取液。
(4)洗脱：将干净的烧杯置于层析柱下端开口，开启层析柱下端开口，以恒定流速(1ml/min) 用蒸馏水冲洗大孔树脂，因为黄酮类物质不溶于水，所以此时洗脱出来的基本为葛花中的糖类物质，用浓硫酸检测流出液，直至流出液无糖为止。之后重新另取一个干净烧杯置于层析柱下端开口，以恒定流速用浓度为93％的乙醇冲洗大孔树脂，直至层析柱下端开口流下的液体颜色基本与乙醇颜色相近，因为黄酮类化合物易溶于乙醇，所以此时洗脱出来液体即为葛花中的黄酮类化合物。
(5)再生：将葛花黄酮完全洗脱后，用浓度为40％～50％的NaOH溶液将大孔树脂浸泡4h，抽滤后用蒸馏水冲洗至PH至中性。随后用浓度为40％～50％的HCl溶液将大孔树脂浸泡4h，抽滤后用蒸馏水冲洗至PH至中性。
(6)保存：将完成再生的大孔树脂用浓度为40％的乙醇溶液浸泡，密封容器保存。
(7)葛花黄酮浓缩干燥：将收集到的葛花黄酮洗脱液于经旋转蒸发仪(65℃，中等转速)，直至基本没有乙醇回流为止，得到即为较纯的葛花黄酮提取液。将所得葛花黄酮提取液使用水沉法葛花黄酮沉淀，抽滤后保留滤渣，将滤渣放进烘箱中，于60℃的温度下烘8h，得到的即为葛花黄酮。
3体外活性测定方法
3.1相对密度测酒精度法
参考GB/T5009.2-2003，用酒精度计测定实验组与对照组的乙醇浓度的变化。实验组为一定浓度的乙醇加上实验样液，对照组为一定浓度的乙醇加上蒸馏水。因为在加入实验样液或蒸馏水前两组的乙醇浓度一致，若加入实验样液与蒸馏水后，实验组的乙醇浓度大于或等于对照组的乙醇浓度，则可能实验组内存在有能生成乙醇的反应，实验样液无解酒效果；若实验组的乙醇浓度小于对照组的乙醇浓度，则实验样液有解酒效果。
操作流程为：先将配方一、二、三、四、五分别配置成总重量为1克的混合物，然后研磨成粉末，溶于50ml蒸馏水中。取10ml试管六支，分别编号为1号至6号，每支试管分别倒入3ml浓度为50％的乙醇溶液，随后往1号试管中加入2ml蒸馏水，往2号至6号试管加入配置好的配方一至五溶液，充分混合后静置15min，最后使用酒精度测试仪测出并比较每支试管的酒精度。
3.2乙醇脱氢酶活性测定法
参考隋玉杰，何慧等人的方法，检测乙醇脱氢酶的活性。试验步骤为：在试管里依次添加1.5mL pH 8.8的Na4P2O7·10H2O缓冲液，27mmol/L的I(N AD+)添，0.5mL 11.5％的CH3CH2OH溶液和0.1mL 0.1mg/mL样品溶液，充分混匀，放入25℃的恒温水浴锅里保温5min。然后添加0.1mL的 ADH(0.25U/mL)，混合均匀，测定其吸光值，于波长340nm处测定吸光度，每间隔10s记录数据，测试5min，选以0.5mL纯水取代0.5mL 11.5％的CH3CH2OH溶液，作空白实验，取0.1mL纯水取代0.1mL试验样品，测出无肽空白组ADH的酶活性。生成物NADH在340nm处的摩尔消光系数为 6.1,计算ADH的活力单位。ADH的活力以每分钟生成NADH的纳摩尔数(nmol/min)表示。酶活力的计算公式如下:
式中E——酶的活力(U)
E340——340nm处每分钟吸光值的增大值；
Ew——每毫升所用酶液中含酶量(mg/mL)；
6.1——NADH的克分子吸光值系数；
3.1——反应液的总体积(mL)。
U——在规定条件下每分钟还原1μmol NAD+时所需酶量。
根据按下式计算激活率：
激活率＝(酶活力加肽试验组-酶活力无肽对照组)/酶活力无肽对照组×100％
4、化橘红复方解酒含片配方成分的设计
配方一：麦芽糊精45％，味精10％，白砂糖10％，维生素C 5％，化橘红黄酮10％，葛花黄酮10％， DL-酒石酸10％；
配方二：麦芽糊精40％，味精10％，白砂糖10％，维生素C 5％，化橘红黄酮15％，葛花黄酮10％，DL-酒石酸10％；
配方三：麦芽糊精35％，味精10％，白砂糖10％，维生素C 5％，化橘红黄酮20％，葛花黄酮10％， DL-酒石酸10％。
配方四：麦芽糊精40％，味精10％，白砂糖10％，维生素C 5％，化橘红黄酮10％，葛花黄酮15％， DL-酒石酸10％；
配方五：麦芽糊精35％，味精10％，白砂糖10％，维生素C 5％，化橘红黄酮10％，葛花黄酮20％， DL-酒石酸10％。
5实验结果
5.1相对密度测酒精度法
表3相对密度测酒精度法测定结果
如表3所示，化橘红黄酮测定组中实验组酒精度小于对照组酒精度，两者酒精度差为-1.3％，故认为化橘红黄酮具有解酒效果；葛花黄酮测定组中实验组酒精度小于对照组酒精度，两者酒精度差为 -4.4％，故认为葛花黄酮具有解酒效果；RU-21解酒片测定组中实验组酒精度小于对照组酒精度，两者酒精度差为-4.4％，故认为RU-21解酒片具有解酒效果；姜黄解酒片测定组中实验组酒精度小于对照组酒精度，两者酒精度差为-3.7％，故认为姜黄解酒片具有解酒效果；DL-酒石酸测定组中实验组酒精度小于对照组酒精度，两者酒精度差为-1.0％，故认为Dl-酒石酸具有促进解酒作用；配方一测定组中实验组酒精度小于对照组酒精度，两者酒精度差为-7.1％，故认为配方一具有解酒效果；配方二测定组中实验组酒精度小于对照组酒精度，两者酒精度差为-6.6％，故认为配方二具有解酒效果；配方三测定组中实验组酒精度小于对照组酒精度，两者酒精度差为-5.8％，故认为配方三具有解酒效果；配方四测定组中实验组酒精度小于对照组酒精度，两者酒精度差为-8.4％，故认为配方四具有解酒效果；配方五测定组中实验组酒精度小于对照组酒精度，两者酒精度差为-6.6％，故认为配方五具有解酒效果。同时，选定解酒效果最好的配方四为化橘红葛花黄酮复方解酒含片配方。
5.2乙醇脱氢酶活性测定法
5.2.1乙醇脱氢酶活性测定法测化橘红黄酮解酒效果
如表4所示，三组数据计算后，得出的相关系数R2分别为0.9991、0.9955、0.9988，故实验具有良好相关性。根据酶活力计算公式可得实验组1酶活力为：(0.0036*6*3.1)/(0.10*6.1)＝0.110U/mL；实验组2酶活力为(0.0035*6*3.1)/(0.10*6.1)＝0.107U/mL；对照组酶活力为(0.0034*6*3.1)/(0.10*6.1) ＝0.104U/mL；实验组平均酶活力为0.108U/mL，根据乙醇脱氢酶激活率公式得出化橘红黄酮对乙醇脱氢酶的激活率为(0.108-0.104)*100％/0.104＝3.8％，即化橘红黄酮对乙醇脱氢酶具有激活作用。如表4 所示，为乙醇脱氢酶活性测定法测定化橘红黄酮解酒效果。
表4乙醇脱氢酶活性测定法测化橘红黄酮解酒效果
5.2.2乙醇脱氢酶活性测定法测化葛花黄酮解酒效果
如表5所示，为乙醇脱氢酶活性测定法测葛花黄酮解酒效果，三组数据计算后，得出的相关系数 R2分别为0.9981、0.9981、0.9981，故实验具有良好相关性。根据酶活力计算公式可得实验组1酶活力为：(0.0165*6*3.1)/(0.10*6.1)＝0.503U/mL；实验组2酶活力为(0.016*6*3.1)/(0.10*6.1)＝0.488U/mL；对照组酶活力为(0.0148*6*3.1)/(0.10*6.1)＝0.448U/mL；实验组平均酶活力为0.496U/mL，根据乙醇脱氢酶激活率公式得出化橘红黄酮对乙醇脱氢酶的激活率为(0.496-0.448)*100％/0.448＝10.7％，即葛花黄酮对乙醇脱氢酶具有激活作用。
表5乙醇脱氢酶活性测定法测化葛花黄酮解酒效果
5.2.3乙醇脱氢酶活性测定法测化橘红葛花黄酮解酒效果
如表6所示，为乙醇脱氢酶活性测定法测化橘红葛花黄酮解酒效果，三组数据计算后，得出的相关系数R2分别为0.9991、0.9987、0.9995，故实验具有良好相关性。根据酶活力计算公式可得实验组1 酶活力为：(0.0102*6*3.1)/(0.10*6.1)＝0.311U/mL；实验组2酶活力为(0.0123*6*3.1)/(0.10*6.1) ＝0.375U/mL；对照组酶活力为(0.0148*6*3.1)/(0.10*6.1)＝0.305U/mL；实验组平均酶活力为0.343U/mL，根据乙醇脱氢酶激活率公式得出化橘红黄酮对乙醇脱氢酶的激活率为(0.343-0.305) *100％/0.305＝12.4％，即化橘红黄酮加葛花黄酮对乙醇脱氢酶具有激活作用。其中化橘红黄酮与葛花黄酮的比例为2:3。
表6乙醇脱氢酶活性测定法测化橘红葛花黄酮解酒效果
5.2.4乙醇脱氢酶活性测定法测解酒片RU-21解酒效果
如表7所示，为乙醇脱氢酶活性测定法测解酒片RU-21解酒效果，三组数据计算后，得出的相关系数R2分别为0.9987、0.9975、0.9989，故实验具有良好相关性。根据酶活力计算公式可得实验组1 酶活力为：(0.0038*6*3.1)/(0.10*6.1)＝0.116U/mL；实验组2酶活力为(0.0037*6*3.1)/(0.10*6.1) ＝0.113U/mL；对照组酶活力为(0.0039*6*3.1)/(0.10*6.1)＝0.119U/mL；实验组平均酶活力为0.114U/mL，根据乙醇脱氢酶激活率公式得出化橘红黄酮对乙醇脱氢酶的激活率为(0.114-0.119) *100％/0.305＝-4.2％，即RU-21解酒片对乙醇脱氢酶具有抑制作用。原因可能是实验过程中RU-21解酒片在溶解后溶液略显浑浊，影响到吸光度测定，从而使得结果偏高，出现抑制作用。
表7乙醇脱氢酶活性测定法测解酒片RU-21解酒效果
5.2.5乙醇脱氢酶活性测定法测定化橘红葛花复方解酒含片解酒效果
如表8所示，为乙醇脱氢酶活性测定法测化橘红复方解酒含片解酒效果，三组数据中的相关系数 R2分别为0.9908、0.9936、0.9946，故实验具有良好相关性。根据酶活力计算公式可得实验组1酶活力为：(0.0007*6*3.1)/(0.10*6.1)＝0.0274U/mL；实验组2酶活力为(0.0007*6*3.1)/(0.10*6.1) ＝0.0213U/mL；对照组酶活力为(0.0006*6*3.1)/(0.10*6.1)＝0.0113U/mL；实验组平均酶活力为0.0244 U/mL，根据乙醇脱氢酶激活率公式得出化橘红黄酮对乙醇脱氢酶的激活率为(0.244-0.0213) *100％/0.183＝14.3％，即化橘红复方解酒含片对乙醇脱氢酶具有激活作用。化橘红葛花复方解酒含片解酒效果相比化橘红葛花黄酮复合物解酒效果更好，可能是由于配方中含有酒石酸，酒石酸能够降低酒精度。
表8乙醇脱氢酶活性测定法测定化橘红复方解酒含片解酒效果
本发明采用两种体外活性测定法(乙醇脱氢酶活性测定法和相对密度测酒精度法)测定化橘红和葛花黄酮以及多种解酒片和解酒含片的解酒效果，设计了一种解酒效果较好的配方——化橘红葛花复方解酒含片。本发明的化橘红葛花黄酮复方解酒含片经测定具有较好的解酒效果。

Claims (9)

1.一种化橘红葛花复方解酒含片制作方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)提取黄酮；采用超声波辅助乙醇浸提化橘红与葛花中的黄酮类化合物；
(2)通过大孔树脂纯化葛花黄酮；
(3)进行乙醇脱氢酶活性测定；
(4)制作化橘红复方解酒含片。
2.如权利要求1所述的化橘红葛花复方解酒含片制作方法，其特征在于，所述步骤(1)具体包括：
A、提取化橘红黄酮：
1)化橘红果实预处理方法：选取干燥的化橘红果实，先用微波炉将其软化，趁热切片，然后粉碎，密封保存备用；所述微波加热温度100-130℃，1-2min；
2)称取10g化橘红粉末于500ml锥形瓶中，按料液比1:50加入80％乙醇溶液500ml，于超声波下中浸提50min；
3)然后抽滤，保留滤液，弃去滤渣，滤液于65℃下旋转蒸发浓缩，直至基本没有乙醇回流为止，所得化橘红黄酮溶液使用水沉法使化橘红黄酮沉淀，抽滤后保留滤渣，滤渣于60℃烘箱烘8h，得到干燥的化橘红粗黄酮粉末；
B、提取葛花黄酮：
1)称量12.5g葛花按料液比1:40加入80％的乙醇溶液500ml，于超声波中浸提50min；
2)然后抽滤，保留滤液和滤渣，滤渣再次提取，合并两次滤液于65℃下旋转蒸发浓缩，直至基本没有乙醇回流为止，得到葛花黄酮粗提取液。
3.如权利要求1所述的化橘红葛花复方解酒含片制作方法，其特征在于，所述步骤(2)具体包括：通过AB-8大孔树脂对葛花黄酮进行纯化，纯化具体包括：
1)大孔树脂的预处理：将大孔树脂装于烧杯中，倒入大孔树脂体积两倍的5％NaOH，静置浸泡1h，随后抽滤；倒入大孔树脂体积一倍的蒸馏水，静置浸泡1h，随后抽滤；倒入大孔树脂体积两倍的10％HCl，静置浸泡1h，随后抽滤，用蒸馏水洗涤大孔树脂至中性；
2)装柱：采用乙醇湿法装柱，打开层析柱下端开口，用93％的乙醇溶液以10ml/min的恒定流速冲洗，偶尔检查流出的乙醇溶液，直至乙醇溶液和水混合为1:5，无白色浑浊为止，最后用大量蒸馏水冲洗除去残留的乙醇。
3)上样：先将一个干净的烧杯置于层析柱下端开口，开启层析柱下端开口，控制1ml/min流速将收集到的葛花黄酮提取液缓慢倒入层析柱中，直到层析柱下端流出的液体颜色能与1％FeCl3溶液发生显色反应时，此时表明已经有少量黄酮流出，AB-8大孔树脂吸附达到了饱和，此时停止加入葛花黄酮提取液；
4)洗脱：将干净的烧杯置于层析柱下端开口，开启层析柱下端开口，以1ml/min恒定流速用蒸馏水冲洗大孔树脂，用浓硫酸检测流出液，直至流出液无糖为止；之后重新另取一个干净烧杯置于层析柱下端开口，以恒定流速用浓度为93％的乙醇冲洗大孔树脂，直至层析柱下端开口流下的液体颜色基本与乙醇颜色相近，因为黄酮类化合物易溶于乙醇，所以此时洗脱出来液体即为葛花中的黄酮类化合物；
5)再生：将葛花黄酮完全洗脱后，用浓度为40％～50％的NaOH溶液将大孔树脂浸泡4h，抽滤后用蒸馏水冲洗至PH至中性；随后用浓度为40％～50％的HCl溶液将大孔树脂浸泡4h，抽滤后用蒸馏水冲洗至PH至中性；
6)保存：将完成再生的大孔树脂用浓度为40％的乙醇溶液浸泡，密封容器保存；
7)葛花黄酮浓缩干燥：将收集到的葛花黄酮洗脱液于经旋转蒸发仪，直至基本没有乙醇回流为止，得到即为较纯的葛花黄酮提取液。将所得葛花黄酮提取液用水沉法使其沉淀，抽滤后保留滤渣，将滤渣放进烘箱中，于60℃的温度下烘8h，即得葛花黄酮。
4.一种化橘红葛花复方解酒含片，其特征在于，其包含：麦芽糊精35％-45％，味精10％，白砂糖10％，维生素C 5％，化橘红黄酮10％-20％，葛花黄酮10％-20％，DL-酒石酸10％。
5.如权利要求5所述的化橘红葛花复方解酒含片，其特征在于，所述含片优选包括：麦芽糊精45％，味精10％，白砂糖10％，维生素C 5％，化橘红黄酮10％，葛花黄酮10％，DL-酒石酸10％。
6.如权利要求5所述的化橘红葛花复方解酒含片，其特征在于，所述含片优选包括：麦芽糊精40％，味精10％，白砂糖10％，维生素C 5％，化橘红黄酮15％，葛花黄酮10％，DL-酒石酸10％。
7.如权利要求5所述的化橘红葛花复方解酒含片，其特征在于，所述含片优选包括：麦芽糊精35％，味精10％，白砂糖10％，维生素C 5％，化橘红黄酮20％，葛花黄酮10％，DL-酒石酸10％。
8.如权利要求5所述的化橘红葛花复方解酒含片，其特征在于，所述含片优选包括：麦芽糊精40％，味精10％，白砂糖10％，维生素C 5％，化橘红黄酮10％，葛花黄酮15％，DL-酒石酸10％。
9.如权利要求5所述的化橘红葛花复方解酒含片，其特征在于，所述含片优选包括：麦芽糊精35％，味精10％，白砂糖10％，维生素C 5％，化橘红黄酮10％，葛花黄酮20％，DL-酒石酸10％。
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