CN107897943A - 一种从鹿骨中提取鹿骨天然肽的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于鹿骨深加工技术领域，尤其涉及一种从鹿骨中提取鹿骨天然肽的方法。一种从鹿骨中提取鹿骨天然肽的方法，包括如下步骤：将新鲜鹿骨打碎、烘干、粉碎、浸泡研磨、微波处理、离心、微滤，10000Da和2000Da两级超滤、200Da膜纳滤，再减压浓缩、冷冻和干燥，即得鹿骨天然肽。本发明的方法制备所得鹿骨天然肽产品，其肽段分布在5肽‑14肽，共有46个氨基酸序列，属于低聚肽范围。肽的相对分子量在753‑1589Da之间，鹿骨天然肽的提取率为3.93％。

Description

一种从鹿骨中提取鹿骨天然肽的方法
技术领域
本发明属于鹿骨深加工技术领域，尤其涉及一种从鹿骨中提取鹿骨天然肽的方法。
背景技术
鹿种类包括梅花鹿、马鹿、水鹿。鹿骨是鹿的药用部位之一，其药用价值虽比不上鹿茸、鹿血、鹿鞭等之高，但其相对其他部位的重量来看，是比较多的。骨骼组织是动物机体支持组织，有硬骨、软骨和骨髓。骨骼由外部的硬质层和内部的海绵状结构的松质层构成，其骨的内腔充满骨髓，松质层越厚骨髓越多，其利用价值越高，如管状骨。骨髓有红骨髓和黄骨髓两种，红骨髓是造血组织，黄骨髓是脂肪组织。幼年家畜的骨髓主要是红骨髓。骨骼中骨髓所占的比例、牛占17-30％，猪为5-9％，绵羊为8-14％，鹿为7-11％。骨髓的一般化学分析：水份50％，脂肪15％，有机物12％，无机物21％，骨骼中钙质最多，主要集中在硬骨，软骨没有。(本项目所指的鹿骨是除祛骨髓的骨)，硬骨一般含磷酸钙85％，碳酸钙10％，磷酸镁1.5％，氯化钙0.2％，骨骼中还含有10-32％的胶原纤维。鹿的胴体中骨骼组织占9-14％，鹿的全部骨骼占12-18％。
鹿骨的药用，中医的《本草纲目》载：味甘，性温，无毒。功效：安胎下气，杀鬼精物，久服耐老可酒浸服之。作酒，主内虚，续创伤，补骨除风。烧灰水服，治小儿洞注下痢。传统中医药主要是用鹿骨浸酒服用。浸鹿骨酒，先将鹿骨烘干，打碎或不打碎，添加或不添加中草药，以高度白酒泡制而成。现代对鹿骨的深加工主要是提取鹿骨胶原蛋白来酶解为鹿骨胶原蛋白肽。用于治疗骨关节方面的疾病，其治疗效果不仅远比鹿骨酒好且用量少又服用方便。
在养鹿过程中，鹿的奔跑，因其腿脚细长，常出现意外，特别是交配季节，腿脚骨折伤，时有发生，此时即使不进行治疗，也能很快自癒，在屠宰鹿时特别在意寻找骨折伤痕，但都没有找到任何伤痕的任何痕迹，腿脚受伤的鹿数天即能站起来，不到十天便能慢慢行走，其自瘉能力如此强，猜想鹿体内的骨胳或某一部位存在能促进骨骼生长瘉合的因子，在用30-40°白酒浸10㎏鹿骨的酒中检测发现2.1㎎/mL的肽，鹿骨酒中的肽从那里来？难道鹿骨中含有鹿骨天然肽？于是用鹿骨进行提取天然肽的试验研究，最终从鹿骨中分离提取出鹿骨天然肽，通过单因素的选择试验和对比试验，得到较优化的条件，得到本发明的提取方法。
公开于该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
发明内容
为克服现有技术的不足，本发明提供一种从鹿骨中提取鹿骨天然肽的方法。
本发明提供的技术方案如下：
一种从鹿骨中提取鹿骨天然肽的方法，包括如下步骤：
(1)将新鲜鹿骨除净肌肉，筋膜，血水和骨髓，用锤片式破碎机进行破碎至鹿骨粒径20-30mm，得到破碎后的鹿骨；
(2)将破碎后的鹿骨用鼓风式电热恒温箱烘干至水分10-15％；
(3)将烘干的鹿骨进行二级粉碎，第一级粉碎将鹿骨粒度粉碎至5mm，第二级粉碎将鹿骨粒度粉碎至80目，得到鹿骨粉；
(4)将鹿骨粉用去离子水浸泡3-4h，然后用胶体磨循环研磨8-10min，得到悬浮鹿骨浆，添加去离子水，再使固液比达到1：10，用稀NaOH溶液调骨浆pH值为8.0，通过胶体磨混匀，得到碱性鹿骨浆；
(5)将碱性骨浆置于微波发生罐中处理25-30min，然后在50-60℃下保温30min；
(6)将微波处理过的骨浆悬液排出，用600目滤布三足离心机过滤，滤渣收集待用，待滤液冷却至＜45℃后，用稀盐酸或乙酸，调溶液pH值6.0-6.5；
(7)将步骤(6)调好pH值的溶液，用中空的纤维膜进行微滤，将浓液合并到三足离心机的滤渣中，滤液作下步过滤；
(8)用能拦截10000Da和2000Da的超滤膜进行超滤，两级超滤的浓液与三足离心机滤渣，将微滤浓液合并，在＜75℃下烘干，可作为制备鹿骨胶原蛋白肽的原料；
(9)将2000Da超滤的透过液再用200Da纳滤膜过滤操作，得到纳滤的浓液；
(10)将纳滤的浓液进行减压浓缩，控温60℃，浓缩至Be25度，排出冷却至室温后，置于冰柜或冷库中冷冻至-32℃，并保持1-2h；
(11)将浓液冷冻至-32度，并保持1-2h的冰块取出，打碎成小块，至于微波真空干燥机中脱水干燥至含水率低于6％，结束干燥，得舒松状，白色带微黄的鹿骨天然肽，按使用要求粉碎或不粉碎，按定量包装。
作为优选，步骤(2)中鼓风式电热恒温箱的温度为50-60℃。
作为优选，步骤(4)中去离子水的温度为50-60℃。
作为优选，步骤(4)中鹿骨粉与去离子水的固液比为1：5。
作为优选，步骤(4)中悬浮鹿骨浆的粒度为100目。
作为优选，步骤(5)中微波发生罐的功率为2450mHz，温度为60℃。
作为优选，步骤(8)中10000Da超滤的操作参数为：泵压0.2-0.4Mpa，温度40-45℃，膜面流量1-1.5m/s，浓缩比3-4倍；所述的2000Da超滤的操作参数为：泵压0.3-0.5MPa，温度40-45℃，膜面流量1-1.5m/s，浓缩比4-5倍。
作为优选，步骤(9)中200Da纳滤膜过滤的操作参数为：泵压0.4-0.6MPa，循环流量1.5-2.5m3/h。
作为优选，步骤(10)中微波真空干燥机的真空度为0.05-0.08MPa，温度为58℃。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
(1)本发明通过对鹿骨进行提取天然肽的试验研究，最终从鹿骨中分离提取出鹿骨天然肽，通过单因素的选择试验和对比试验，得到较优化的条件，作为本发明的提取方法。
(2)本发明的方法制备所得鹿骨天然肽产品，其肽段分布在5肽-14肽，肽的相对分子量在753-1589Da之间，鹿骨天然肽的提取率为3.93％。
附图说明
图1为本发明从鹿骨中提取鹿骨天然肽的方法的工艺流程图。
具体实施方式
以下实施例以便更好的理解本发明，并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。
实施例1：
一种从鹿骨中提取鹿骨天然肽的方法，包括如下步骤：
(1)将新鲜鹿骨除净肌肉，筋膜，血水和骨髓，用锤片式破碎机进行破碎至鹿骨粒径30mm，得到破碎后的鹿骨；
(2)将破碎后的鹿骨用鼓风式电热恒温箱烘干至水分15％；所述的鼓风式电热恒温箱的温度为50-60℃；
(3)将烘干的鹿骨进行二级粉碎，第一级粉碎将鹿骨粒度粉碎至5mm，第二级粉碎将鹿骨粒度粉碎至80目，得到鹿骨粉；
(4)将鹿骨粉用去离子水浸泡3-4h，然后用胶体磨循环研磨8-10min，得到悬浮鹿骨浆，添加去离子水，再使固液比达到1：10，用稀NaOH溶液调骨浆pH值为8.0，通过胶体磨混匀，得到碱性鹿骨浆；所述的去离子水的温度为50-60℃；鹿骨粉与去离子水的固液比为1：5；悬浮鹿骨浆的粒度为100目；
(5)将碱性骨浆置于微波发生罐中处理25-30min，然后在50-60℃下保温30min；所述的微波发生罐的功率为2450mHz，温度为60℃；
(6)将微波处理过的骨浆悬液排出，用600目滤布三足离心机过滤，滤渣收集待用，待滤液冷却至＜45℃后，用稀盐酸或乙酸，调溶液pH值6.0-6.5；
(7)将步骤(6)调好pH值的溶液，用中空的纤维膜进行微滤，将浓液合并到三足离心机的滤渣中，滤液作下步过滤；
(8)用能拦截10000Da和2000Da的超滤膜进行超滤，两级超滤的浓液与三足离心机滤渣，将微滤浓液合并，在＜75℃下烘干，可作为制备鹿骨胶原蛋白肽的原料；所述的10000Da超滤的操作参数为：泵压0.2-0.4Mpa，温度40-45℃，膜面流量1-1.5m/s，浓缩比3-4倍；所述的2000Da超滤的操作参数为：泵压0.3-0.5MPa，温度40-45℃，膜面流量1-1.5m/s，浓缩比4-5倍；
(9)将2000Da超滤的透过液再用200Da纳滤膜过滤操作，得到纳滤的浓液；所述的200Da纳滤膜过滤的操作参数为：泵压0.4-0.6MPa，循环流量1.5-2.5m3/h；
(10)将纳滤的浓液进行减压浓缩，控温60℃，浓缩至Be25度，排出冷却至室温后，置于冰柜或冷库中冷冻至-32℃，并保持1-2h；
(11)将浓液冷冻至-32度，并保持1-2h的冰块取出，打碎成小块，至于微波真空干燥机中脱水干燥至含水率低于6％，结束干燥，得舒松状，白色带微黄的鹿骨天然肽，按使用要求粉碎或不粉碎，按定量包装；所述微波真空干燥机的真空度为0.05-0.08MPa，温度为58℃。
按照上述方法，使用原料鹿骨粉7.4kg可提取鹿骨天然肽，得含量为66.8％的肽粉435.86g，按鹿骨原料计，天然肽的提取率为3.93％，其肽段分布及占有量见表1。
表1本发明的方法得到的鹿骨天然肽的肽段分布及占有量测定
肽段 氨基酸序列数(个) 占总肽量(％)
5肽 2 1.77
6肽 4 2.4
7肽 10 19.1
8肽 9 10.32
9肽 11 6.23
10肽 4 27.73
11肽 3 5.25
12肽 2 23.94
14肽 1 3.26
由表1可知，肽段分布从5肽到14肽，相对分子量从753-1589Da，共有氨基酸序列46个，5肽至12肽总肽量为96.74％，从肽量分布来看鹿骨天然肽基本属于低聚肽范围。
前述对本发明的具体示例性实施方案的描述是为了说明和例证的目的。这些描述并非想将本发明限定为所公开的精确形式，并且很显然，根据上述教导，可以进行很多改变和变化。对示例性实施例进行选择和描述的目的在于解释本发明的特定原理及其实际应用，从而使得本领域的技术人员能够实现并利用本发明的各种不同的示例性实施方案以及各种不同的选择和改变。本发明的范围意在由权利要求书及其等同形式所限定。

Claims (9)

1.一种从鹿骨中提取鹿骨天然肽的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)将新鲜鹿骨除净肌肉，筋膜，血水和骨髓，用锤片式破碎机进行破碎至鹿骨粒径20-30mm，得到破碎后的鹿骨；
(2)将破碎后的鹿骨用鼓风式电热恒温箱烘干至水分10-15％；
(3)将烘干的鹿骨进行二级粉碎，第一级粉碎将鹿骨粒度粉碎至5mm，第二级粉碎将鹿骨粒度粉碎至80目，得到鹿骨粉；
(4)将鹿骨粉用去离子水浸泡3-4h，然后用胶体磨循环研磨8-10min，得到悬浮鹿骨浆，添加去离子水，再使固液比达到1：10，用稀NaOH溶液调骨浆pH值为8.0，通过胶体磨混匀，得到碱性鹿骨浆；
(5)将碱性骨浆置于微波发生罐中处理25-30min，然后在50-60℃下保温30min；
(6)将微波处理过的骨浆悬液排出，用600目滤布三足离心机过滤，滤渣收集待用，待滤液冷却至＜45℃后，用稀盐酸或乙酸，调溶液pH值6.0-6.5；
(7)将步骤(6)调好pH值的溶液，用中空的纤维膜进行微滤，将浓液合并到三足离心机的滤渣中，滤液作下步过滤；
(8)用能拦截10000Da和2000Da的超滤膜进行超滤，两级超滤的浓液与三足离心机滤渣，将微滤浓液合并，在＜75℃下烘干，可作为制备鹿骨胶原蛋白肽的原料；
(9)将2000Da超滤的透过液再用200Da纳滤膜过滤操作，得到纳滤的浓液；
(10)将纳滤的浓液进行减压浓缩，控温60℃，浓缩至Be25度，排出冷却至室温后，置于冰柜或冷库中冷冻至-32℃，并保持1-2h；
(11)将浓液冷冻至-32度，并保持1-2h的冰块取出，打碎成小块，至于微波真空干燥机中脱水干燥至含水率低于6％，结束干燥，得舒松状，白色带微黄的鹿骨天然肽，按使用要求粉碎或不粉碎，按定量包装。
2.根据权利要求1所述的从鹿骨中提取鹿骨天然肽的方法，其特征在于，步骤(2)中鼓风式电热恒温箱的温度为50-60℃。
3.根据权利要求1所述的从鹿骨中提取鹿骨天然肽的方法，其特征在于，步骤(4)中去离子水的温度为50-60℃。
4.根据权利要求1所述的从鹿骨中提取鹿骨天然肽的方法，其特征在于，步骤(4)中鹿骨粉与去离子水的固液比为1：5。
5.根据权利要求1所述的从鹿骨中提取鹿骨天然肽的方法，其特征在于，步骤(4)中悬浮鹿骨浆的粒度为100目。
6.根据权利要求1所述的从鹿骨中提取鹿骨天然肽的方法，其特征在于，步骤(5)中微波发生罐的功率为2450mHz，温度为60℃。
7.根据权利要求1所述的从鹿骨中提取鹿骨天然肽的方法，其特征在于，步骤(8)中10000Da超滤的操作参数为：泵压0.2-0.4Mpa，温度40-45℃，膜面流量1-1.5m/s，浓缩比3-4倍；所述的2000Da超滤的操作参数为：泵压0.3-0.5MPa，温度40-45℃，膜面流量1-1.5m/s，浓缩比4-5倍。
8.根据权利要求1所述的从鹿骨中提取鹿骨天然肽的方法，其特征在于，步骤(9)中200Da纳滤膜过滤的操作参数为：泵压0.4-0.6MPa，循环流量1.5-2.5m3/h。
9.根据权利要求1所述的从鹿骨中提取鹿骨天然肽的方法，其特征在于，步骤(10)中微波真空干燥机的真空度为0.05-0.08MPa，温度为58℃。
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