CN107884431B - 基于1h-nmr的代谢组学鉴别鲜鹿茸与热炸茸的方法 - Google Patents

基于1h-nmr的代谢组学鉴别鲜鹿茸与热炸茸的方法 Download PDF

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Abstract

基于1H‑NMR的代谢组学鉴别鲜鹿茸与热炸茸的方法，属于中药鉴定技术领域。本发明应用1H‑NMR的代谢组学技术研究鲜鹿茸与热炸茸的化学成分差异，通过多元数据处理模式对鹿茸鲜品和炮品进行鉴别。与现有鹿茸鉴定技术相比，本发明具有明显的优势：从整体上阐明鹿茸的代谢产物，能系统的比较代谢产物之间的差异；PCA、PLS‑DA与OPLS‑DA层层递进，保证了实验结果的准确性；丰富的核磁数据结合现代高科技分析软件，能保证实验结果的稳定、可控，具有宏观准确性和微观精确性。该方法还具有简单、方便、快速、经济，适合于市场和一般个体应用的广泛性和简便性。

Description

基于1H-NMR的代谢组学鉴别鲜鹿茸与热炸茸的方法
技术领域
本发明属于中药鉴定技术领域，特别是涉及到一种基于1H-NMR质子核磁共振谱的代谢组学技术鉴别鲜鹿茸与热炸茸的方法。
背景技术
鹿茸是一种传统名贵中药，为鹿科动物梅花鹿Cervus nippon Temminck或马鹿Cervus elaphus Linnaeus的雄鹿未骨化密生茸毛的幼角。鹿茸作为传统的临床治疗药物,在我国已有几千年的历史。2015版《中国药典》中记载鹿茸味甘、性温，壮肾阳，益精血，强筋骨，调冲任，托疮毒。现代药理学研究表明鹿茸具有多方面的药理作用，其对心肌损伤有保护作用，能修复骨缺损，促进伤口愈合，提高机体免疫功能，促进脂肪分解，延缓衰老，改善学习记忆。目前，鹿茸的化学成分还未能找到能代表其广泛活性的物质。综合各家报道，其有效成分主要有氨基酸、蛋白、肽、多胺、维生素、激素、核酸、碱基、脂质类、芳香族化合物、无机元素等。
鹿茸始载于《神农本草经》,是我国传统名药之一,与人参、灵芝、冬虫夏草和阿胶并称为中华养生五大圣品，是驰名中外的珍稀中药材和名贵补品。在中药市场鱼目混珠，秩序张乱的当今时代，商品鹿茸通常更容易遭到掺假，准确鉴别鹿茸生品和炮品对临床用药及保健品质量控制十分重要。鹿茸中丰富的蛋白质、氨基酸以及矿物元素等营养元素可作为鹿茸的质量控制和药效研究的依据,与鹿茸的品质特征密切相关。然而,长期以来,关于鹿茸品质特征的研究很少。
因此,研究鲜鹿茸与热炸茸中差异性营养成分,对快速准确的鉴别鹿茸生品和炮制品及确保鹿茸的品质特征有着极其重要的意义。
代谢组学技术以组群指标分析为基础，借助高通量检测和数据处理手段，具有整体观的研究思路，特别适合中药这种多成分、复杂体系的分析[8-9]。基于核磁共振的代谢组学分析具有备样简单、重复性好、分析时间短，能同时检测到各种极性化合物的优势，此方法已成功运用于多种中药的分析中，但仅有阿胶、驴皮两种动物药运用此分析手段。
多元统计分析是针对多成分、多靶点复杂中药分析的最常用的化学计量学方法。主成分分析(PCA)和偏最小二乘法判别分析(PLS-DA)和正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)等已经广泛用于食品、药品和农产品等的快速识别，PCA 利用降维思想，将观测指标的维数降低，已获得较低维数的指标，可大量的减少分析的数据而能够最大量的获得可供参考的数据信息。同时，PCA是一种非监督性的的数据分析平台，想要获得更有力的信息，需对数据进一步考证分析，还需进行有监督的偏最小二乘法判别分析(PLS-DA)，可以提供除回归方程之外的主成分分析和典型相关分析的相关信息。正交偏最小二乘判别分析 (OPLS-DA)是对PLS的补充分析，结合了正交信号校正(OSC)和PLS两个方法，能够将X矩阵信息(NMR数据)分解成与Y(分类信息)相关和不相关的两类信息，通过除去不相关的差异，相关的信息就集中表现在第一预测成分，因此可以通过对集中在第一预测成分上的变量的筛选找出特征性变量，从而找出特征性代谢物，因此，OPLS-DA方法建立多元数据统计模型用于分子标志物的筛选。
通过多元数据处理模式，用以判别鹿茸生品与炮品真伪。该方法不仅可以有助于鹿茸生品与炮品质量标准的建立，也为其他中药鉴别研究提供了一定的思路。
发明内容
本发明通过创新性应用基于1H-NMR的代谢组学技术，从整体、宏观上阐明鹿茸的代谢产物，通过多元数据分析系统的比较代谢产物之间的差异；本发明基于1H-NMR的代谢组学技术对鲜鹿茸与热炸茸进行鉴别，通过多元数据处理模式对鲜鹿茸与热炸茸的化学差异成分进行分析，为今后鹿茸生品与炮品的鉴别及质量控制提供科学依据。
本发明对鲜鹿茸与热炸茸药材的1H-NMR指纹图谱进行研究，与传统HPLC、 GC等分析方法相比，本法能更全面的提供化合物的结构信息，能同时鉴别出氨基酸类、有机酸类和核苷类等多种化学成分，具有样品制备简单、检测速度快、分析效率高等优势。
基于1H-NMR的代谢组学鉴别鲜鹿茸与热炸茸的方法，包括以下步骤，并且以下步骤顺次进行，
步骤一、对鹿茸样品进行分离处理
取新鲜二杠茸2～4只，用酒精灯火燎去毛后，纵向切成2份,1份作为鲜品备用，1份用保鲜膜裹住断面，通过传统热炮制方法获得热炸茸炮制品；
步骤二、对鹿茸鲜品与炮制后的热炸茸样品进行提取处理
①鹿茸鲜品的提取处理
称取鹿茸鲜品20g，加入8～12倍重量份的水，通过组织粉碎机破碎10min 至颗粒状，在4℃下浸提18h～30h，取出,离心10min,离心转速为3600r/min，取上清液用微滤膜进行微滤,将微滤液冻干,获得鹿茸鲜品冻干粉末备用；
②热炸茸样品的提取处理
称取热炸茸炮制品20g，加入8～12倍重量份的水，通过组织粉碎机破碎 10min至颗粒状，在4℃下浸提18h～30h，取出,离心10min,离心转速为 3600r/min，取上清液用微滤膜进行微滤,将微滤液冻干,获得热炸茸炮制品冻干粉末备用；
步骤三、对鹿茸鲜品与热炸茸炮制品进行核磁测定前处理
①鹿茸鲜品的核磁测定前处理
称取鹿茸鲜品40mg，置于10mL离心管中,向离心管中加入体积浓度80％的乙腈4ml～6ml，超声溶解1min,室温下离心20min～40min，离心转速为 2000r/min～6000r/min，取上清液，75℃水浴挥干，获得鲜鹿茸样品；
将鲜鹿茸样品溶解于450ul～550ul含质量浓度为0.05％的磷酸三钠TSP的缓冲盐溶液中，加入50ul～150ul重水D2O混和，将溶解后的混合液转入5mm核磁管中进行核磁1H-NMR测定；
②热炸茸样品的核磁测定前处理
称取热炸茸炮制品冻干粉末40mg，置于10mL离心管中,向离心管中加入体积浓度80％的乙腈4ml～6ml，超声溶解1min,室温下离心20min～40min，离心转速为2000r/min～6000r/min，取上清液，75℃水浴挥干，获得热炸茸样品，
将热炸茸样品溶解于450ul～550ul含质量浓度为0.05％的磷酸三钠TSP的缓冲盐溶液中，加入50ul～150ul重水D2O混和，将溶解后的混合液转入5mm核磁管中进行核磁1H-NMR测定；
步骤四、进行核磁1H-NMR测定
将步骤三中溶解后的鲜鹿茸样品和热炸茸样品分别通过核磁共振图谱仪进行测定，所述核磁共振图谱仪为400MHz NMR仪，设定温度为26.8℃，核磁测定采用序列压制水峰，用重水D2O锁场，内标为TSP，扫描次数为64，谱宽为 8196.7HZ，脉冲时间为14μs，采样时间3.997s，延迟时间10s，采样数据点为65536，分别获得鲜鹿茸样品图谱和热炸茸样品图谱；
步骤五、对1H-NMR测定的鹿茸样品图谱进行数据整理获得鲜鹿茸与热炸茸差异性代谢产物
通过MestReNova软件对所述步骤四中获得的鲜鹿茸样品图谱和热炸茸样品图谱数据化，再将数据导入SIMCA-P 11.0软件进行多元统计，分别获得鲜鹿茸样品和热炸茸样品的差异性代谢产物及其相对含量，并形成得分投影图和载荷图作为待测样品的对比数据库：
其中差异性代谢产物及其相对含量为：热炸茸中甘氨酸、磷酸胆碱、缬氨酸、亮氨酸、牛磺酸、丙氨酸、尿苷、苯丙氨酸、尿嘧啶和酪氨酸的含量均高于鲜鹿茸，脂肪酸、胆碱、苏氨酸、脂类物质2和琥珀酸均低于鲜鹿茸；
步骤六、对待测样品进行品质判定
称取待测样品，按照步骤二至步骤五中对于鹿茸鲜品或热炸茸样品的处理方法获得待测样品的得分投影图和载荷图，将待测样品的得分投影图和载荷图与对比数据库的得分投影图和载荷图进行对比，
待测样品的代谢产物及含量70％～90％以上与鲜鹿茸样品的代谢产物及含量一致判定为鲜鹿茸，
待测样品的代谢产物及含量70％～90％以上与热炸茸样品的代谢产物及含量一致判定为热炸茸，
待测样品的代谢产物及含量40％～60％以上与鲜鹿茸样品以及热炸茸样品的代谢产物及含量均不一致判定为假鹿茸。
所述传统热炮制获得热炸茸样品的方法为：首先将包裹好的鹿茸放入开水中进行煮炸，共煮炸5次，每次1min，每次煮炸后将连有氮气的16号针头插入到包裹好的茸尖端进行排血，排血的次数与煮炸的次数一致，煮炸茸排血后放入70℃的烘箱中烘烤8h，取出切成小块，水洗5次，备用。
所述步骤二中优选加入10倍重量份的水，破碎10min至颗粒状，在4℃下浸提24h。
所述步骤二中微滤膜的孔径为0.45μm。
所述步骤三中优选加入体积浓度80％的乙腈5ml，超声溶解1min,室温下离心30min，离心转速为4000r/min。
所述步骤三中优选加入500ul质量浓度0.05％的磷酸三钠TSP的缓冲盐溶液，加入100ul重水D2O混和。
所述步骤五中所述鲜鹿茸样品图谱和热炸茸样品图谱采用MestReNova软件进行处理，核磁图谱经过定标、相位、基线校准后，以δ0.04积分段对化学位移区间进行分段积分，其中δ表示核磁氢谱化学位移，核磁图谱中对化学位移以δ0.0～9.0进行分段积分，去掉残余水峰δ4.70～5.10积分段以消除水峰的影响，将积分数据导入SIMCA-P 11.0软件中进行主成分分析PCA、偏最小二乘法判别分析PLS-DA和正交偏最小二乘判别分析OPLS-DA，获得差异代谢物。
与现有鹿茸鉴定技术相比，本发明具有明显的优势：
①全面性：与以往鉴定技术，本发明更全面，从整体上阐明鹿茸的代谢产物，能系统的比较代谢产物之间的差异。
②关联性：PCA、PLS-DA与OPLS-DA层层递进，环环相扣，相互关联，保证了实验结果的准确性。
③准确性：丰富的核磁数据结合现代高科技分析软件，能保证实验结果的稳定、可控，具有宏观准确性和微观精确性。
④广泛性：本发明具有外延性，在一定的程度上也适合于其他中药的分析鉴定和质量保证。
⑤简便性：本发明公开的方法简单、方便、快速、经济，适合于市场和一般个体应用。
附图说明
以下结合附图和具体实施方式对本发明作进一步的说明：
图1为本发明基于1H-NMR的代谢组学鉴别鲜鹿茸与热炸茸的方法中鲜鹿茸的1H-NMR图。
图2为本发明基于1H-NMR的代谢组学鉴别鲜鹿茸与热炸茸的方法中热炸茸的1H-NMR图。
图3为本发明基于1H-NMR的代谢组学鉴别鲜鹿茸与热炸茸的方法中鲜鹿茸及热炸茸的PCA图。
图4为本发明基于1H-NMR的代谢组学鉴别鲜鹿茸与热炸茸的方法中鲜鹿茸及热炸茸的PLS-DA模型图。
图5为本发明基于1H-NMR的代谢组学鉴别鲜鹿茸与热炸茸的方法中OPLS-DA 得分图。
图6为本发明基于1H-NMR的代谢组学鉴别鲜鹿茸与热炸茸的方法中S-PLOT 图。
具体实施方式
本发明所用的技术方案如下：
本发明基于1H-NMR的代谢组学鉴别鲜鹿茸与热炸茸的方法，所用的技术方案如下：
步骤一，对鹿茸样品进行分离处理，并对分离后的热炸茸样品进一步炮制处理；
步骤二，对鲜鹿茸与炮制后的热炸茸样品进行提取处理；
步骤三，对鲜鹿茸与炮制后的热炸茸样品进行核磁测定前处理；
步骤四，对核磁测定前处理好的鲜鹿茸与热炸茸样品进行1H-NMR测定；
步骤五，对1H-NMR测定的鹿茸样品图谱进行一系列数据整理，对整理好的数据进行多元统计分析，得出鲜鹿茸与热炸茸差异性代谢产物；
步骤六，根据多元统计分析得到的得分投影图和载荷图结合所得到的鲜鹿茸与热炸茸差异性代谢产物组成及其相对含量对待测样品进行综合性分析，得出结论。
优选的，步骤一中所述的样品处理为：取新鲜二杠茸用酒精灯火燎去毛，纵向切成2份,1份用保鲜膜裹住断面，用于传统热炮制，1份作为鲜品。
优选的，步骤一中所述的热炸茸样品炮制处理方法为：将包裹好的鹿茸放入开水中进行煮炸，共煮炸5次，每次1min；每次煮炸后将连有氮气的16号针头插入到包裹好的茸尖端进行排血，第5次煮炸排血后放入70℃的烘箱中烘烤 8h，取出切成小块，水洗5次，备用。
优选的，步骤二中所述的核磁测定前处理样品处理方法为：称取鹿茸样品2 0g，用10倍量的水进行组织粉碎然后在4℃下浸提24h。取出,离心10min，离心转速为3600r/min,上清液用孔径为0.45μm的微滤膜微滤,微滤液冻干,备用。
优选的，步骤三中所述的样品提取处理方法为：精密称取鹿茸鲜品和炮制品冻干粉末粉末各40mg，置于10mL离心管中,分别加体积浓度为80％乙腈5ml，超声溶解1min,室温下离心30min，离心转速为4000r/min，取上清液，75℃水浴挥干。于测定前用500ul质量浓度0.05％的磷酸三钠TSP的缓冲盐溶液溶解，此时缓冲液浓度为0.1Mol，pH值为7.4，加入100ul重水D2O混匀，转至5mm 核磁管中待测。
优选的，步骤四中对核磁测定前处理好的人参样品进行1H-NMR测定的测定条件为：样品于400MHz NMR(26.8℃)仪上测定：水提取物核磁测定采用名称为noesygppr1d的序列压制水峰，用重水锁场，内标为TSP，扫描次数为64，谱宽为8196.7HZ，脉冲时间为14μs，采样时间3.997s，延迟时间10s，采样数据点为65536。
优选的，步骤五中对测定的鹿茸鲜品和炮制品1H-NMR图谱进行一系列数据整理，具体使用MestReNova软件进行处理，最终将1H-NMR图谱数据化，得到所有分析的数据。
优选的，步骤五中所得的数据导入Simca-p+11软件进行多元统计分析，得到相应的得分投影图、载荷图和数据。
优选的，步骤六中将步骤五中所述的得分投影图和载荷图结合所得到的鲜鹿茸与热炸茸差异性代谢产物组成对待测鹿茸样品进行综合性分析。
该方法虽然步骤简单，但每一步需要掌握其中的要领与技巧，下面就结合具体事例简单介绍一下本发明的运用与实施，有利于普通商人和消费者进一步对该法的理解和渗透，而且多数该方法的应用者或机构可以根据自己的需求，通过领会该技术要领而对该发明进行变通利用，已达到更好的效益。任何不违背该发明宏观思想的改进都属于该发明的领域和范畴。
实施案例一
本实施案例涉及一种基于1H-NMR的代谢组学鉴别鲜鹿茸与热炸茸的方法，该方法所包括的步骤如下：
步骤一，取新鲜二杠茸用酒精灯火燎去毛，纵向切成2份,1份用保鲜膜裹住断面，用于传统热炮制，1份作为鲜品。
传统热炮制方法为：将包裹好的鹿茸放入开水中进行煮炸，共煮炸5次，每次1min；每次煮炸后将连有氮气的16号针头插入到包裹好的茸尖端进行排血，第5次煮炸排血后放入70℃的烘箱中烘烤8h，取出切成小块，水洗5次，备用。
步骤二，称取鹿茸样品20g，用10倍量的水进行组织粉碎然后在4℃下浸提24h。取出,离心10min，离心转速为3600r/min,取上清液用孔径为0.45μm 的微滤膜微滤,微滤液冻干,备用。
步骤三，精密称取鹿茸鲜品和炮制品冻干粉末粉末各40mg，置于10mL离心管中,分别加体积浓度80％的乙腈5ml，超声溶解1min,室温下离心30min，离心转速为4000r/min，取上清液，75℃水浴挥干。于测定前用500ul质量浓度0.05％的磷酸三钠TSP的缓冲盐溶液溶解，此时缓冲液浓度为0.1Mol，pH值为7.4，加入100ul重水D2O混匀，转至5mm核磁管中待测。
步骤四，样品于400MHz NMR(26.8℃)仪上测定：水提取物核磁测定采用名称为noesygppr1d的序列压制水峰，用重水锁场，内标为TSP，扫描次数为64，谱宽为8196.7HZ，脉冲时间为14μs，采样时间3.997s，延迟时间 10s，采样数据点为65536。
步骤五，核磁图谱采用MestReNova(version 9.0.0,Mestrelab Research,Santiago de Compostella，西班牙)进行处理。核磁图谱经过定标、相位、基线校准后，以δ0.04积分段对化学位移区间进行分段积分。核磁图谱中对化学位移δ0.0～9.0进行分段积分，去掉δ4.70～5.10(残余水峰) 积分段以消除水峰的影响，将积分数据导入SIMCA-P11.0(瑞典Umetrics，Umea) 软件中进行主成分分析(principal component analysis，PCA)和正交偏最小二乘法-判别分析(orthogonal PLS-DA，OPLS-DA)，获得得分投影图和载荷图以及差异代谢物。
步骤六，将所得的得分投影图和载荷图结合鲜鹿茸与热炸茸差异性代谢产物组成对待测鹿茸样品进行综合性分析：
称取待测样品，按照步骤二至步骤五中对于鹿茸鲜品或热炸茸样品的处理方法获得待测样品的得分投影图和载荷图，将待测样品的得分投影图和载荷图与对比数据库的得分投影图和载荷图进行对比，
待测样品的代谢产物及含量80％以上与鲜鹿茸样品的代谢产物及含量一致判定为鲜鹿茸，
待测样品的代谢产物及含量80％以上与热炸茸样品的代谢产物及含量一致判定为热炸茸，
待测样品的代谢产物及含量50％以上与鲜鹿茸样品以及热炸茸样品的代谢产物及含量均不一致判定为假鹿茸。
根据每个化学成分的化学位移,裂峰情况及文献报道，对所得图谱进行分析，共指认出了52种化合物，如图1和图2,主要成分为有机酸、有机碱和核苷，指认结果见表1。
表1鹿茸样品中主要化合物的1H-NMR数据归属
Table 1 1H-NMR assignments of major metabolites in deer antler

Claims (7)

1.基于1H-NMR的代谢组学鉴别鲜鹿茸与热炸茸的方法，其特征是：包括以下步骤，并且以下步骤顺次进行，
步骤一、对鹿茸样品进行分离处理
取新鲜二杠茸2～4只，用酒精灯火燎去毛后，纵向切成2份,1份作为鲜品备用，1份用保鲜膜裹住断面，通过传统热炮制方法获得热炸茸炮制品；
步骤二、对鹿茸鲜品与炮制后的热炸茸样品进行提取处理
①鹿茸鲜品的提取处理
称取鹿茸鲜品20g，加入8～12倍重量份的水，通过组织粉碎机破碎10min至颗粒状，在4℃下浸提18h～30h，取出,离心10min,离心转速为3600r/min，取上清液用微滤膜进行微滤,将微滤液冻干,获得鹿茸鲜品冻干粉末备用；
②热炸茸样品的提取处理
称取热炸茸炮制品20g，加入8～12倍重量份的水，通过组织粉碎机破碎10min至颗粒状，在4℃下浸提18h～30h，取出,离心10min,离心转速为3600r/min，取上清液用微滤膜进行微滤,将微滤液冻干,获得热炸茸炮制品冻干粉末备用；
步骤三、对鹿茸鲜品与热炸茸炮制品进行核磁测定前处理
①鹿茸鲜品的核磁测定前处理
称取鹿茸鲜品40mg，置于10mL离心管中,向离心管中加入体积浓度80％的乙腈4ml～6ml，超声溶解1min,室温下离心20min～40min，离心转速为2000r/min～6000r/min，取上清液，75℃水浴挥干，获得鲜鹿茸样品；
将鲜鹿茸样品溶解于450ul～550ul含质量浓度为0.05％的磷酸三钠TSP的缓冲盐溶液中，加入50ul～150ul重水D2O混和，将溶解后的混合液转入5mm核磁管中进行核磁1H-NMR测定；
②热炸茸样品的核磁测定前处理
称取热炸茸炮制品冻干粉末40mg，置于10mL离心管中,向离心管中加入体积浓度80％的乙腈4ml～6ml，超声溶解1min,室温下离心20min～40min，离心转速为2000r/min～6000r/min，取上清液，75℃水浴挥干，获得热炸茸样品，
将热炸茸样品溶解于450ul～550ul含质量浓度为0.05％的磷酸三钠TSP的缓冲盐溶液中，加入50ul～150ul重水D2O混和，将溶解后的混合液转入5mm核磁管中进行核磁1H-NMR测定；
步骤四、进行核磁1H-NMR测定
将步骤三中溶解后的鲜鹿茸样品和热炸茸样品分别通过核磁共振图谱仪进行测定，所述核磁共振图谱仪为400MHz NMR仪，设定温度为26.8℃，核磁测定采用序列压制水峰，用重水D2O锁场，内标为TSP，扫描次数为64，谱宽为8196.7HZ，脉冲时间为14μs，采样时间3.997s，延迟时间10s，采样数据点为65536，分别获得鲜鹿茸样品图谱和热炸茸样品图谱；
步骤五、对1H-NMR测定的鹿茸样品图谱进行数据整理获得鲜鹿茸与热炸茸差异性代谢产物
通过MestReNova软件对所述步骤四中获得的鲜鹿茸样品图谱和热炸茸样品图谱数据化，再将数据导入SIMCA-P 11.0软件进行多元统计，分别获得鲜鹿茸样品和热炸茸样品的差异性代谢产物及其相对含量，并形成得分投影图和载荷图作为待测样品的对比数据库：
其中差异性代谢产物及其相对含量为：热炸茸中甘氨酸、磷酸胆碱、缬氨酸、亮氨酸、牛磺酸、丙氨酸、尿苷、苯丙氨酸、尿嘧啶和酪氨酸的含量均高于鲜鹿茸，脂肪酸、胆碱、苏氨酸、脂类物质2和琥珀酸均低于鲜鹿茸；
步骤六、对待测样品进行品质判定
称取待测样品，按照步骤二至步骤五中对于鹿茸鲜品或热炸茸样品的处理方法获得待测样品的得分投影图和载荷图，将待测样品的得分投影图和载荷图与对比数据库的得分投影图和载荷图进行对比，
待测样品的代谢产物及含量70％～90％以上与鲜鹿茸样品的代谢产物及含量一致判定为鲜鹿茸，
待测样品的代谢产物及含量70％～90％以上与热炸茸样品的代谢产物及含量一致判定为热炸茸，
待测样品的代谢产物及含量40％～60％以上与鲜鹿茸样品以及热炸茸样品的代谢产物及含量均不一致判定为假鹿茸。
2.根据权利要求1所述的基于1H-NMR的代谢组学鉴别鲜鹿茸与热炸茸的方法，其特征是：所述传统热炮制获得热炸茸样品的方法为：首先将包裹好的鹿茸放入开水中进行煮炸，共煮炸5次，每次1min，每次煮炸后将连有氮气的16号针头插入到包裹好的茸尖端进行排血，排血的次数与煮炸的次数一致，煮炸茸排血后放入70℃的烘箱中烘烤8h，取出切成小块，水洗5次，备用。
3.根据权利要求1所述的基于1H-NMR的代谢组学鉴别鲜鹿茸与热炸茸的方法，其特征是：所述步骤二中加入10倍重量份的水，破碎10min至颗粒状，在4℃下浸提24h。
4.根据权利要求1所述的基于1H-NMR的代谢组学鉴别鲜鹿茸与热炸茸的方法，其特征是：所述步骤二中微滤膜的孔径为0.45μm。
5.根据权利要求1所述的基于1H-NMR的代谢组学鉴别鲜鹿茸与热炸茸的方法，其特征是：所述步骤三中加入体积浓度80％的乙腈5ml，超声溶解1min,室温下离心30min，离心转速为4000r/min。
6.根据权利要求1所述的基于1H-NMR的代谢组学鉴别鲜鹿茸与热炸茸的方法，其特征是：所述步骤三中加入500ul质量浓度0.05％的磷酸三钠TSP的缓冲盐溶液，加入100ul重水D2O混和。
7.根据权利要求1所述的基于1H-NMR的代谢组学鉴别鲜鹿茸与热炸茸的方法，其特征是：所述步骤五中所述鲜鹿茸样品图谱和热炸茸样品图谱采用MestReNova软件进行处理，核磁图谱经过定标、相位、基线校准后，以δ0.04积分段对化学位移区间进行分段积分，其中δ表示核磁氢谱化学位移，核磁图谱中对化学位移以δ0.0～9.0进行分段积分，去掉残余水峰δ4.70～5.10积分段以消除水峰的影响，将积分数据导入SIMCA-P 11.0软件中进行主成分分析PCA、偏最小二乘法判别分析PLS-DA和正交偏最小二乘判别分析OPLS-DA，获得差异代谢物。
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