CN103336076A - 鹿产品中激素和肌苷的分析测试方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种鹿产品中激素和肌苷的分析测试方法。步骤为：先制备标准对照品溶液，再制备鹿产品试液，即准确称取鹿产品用甲醇定容，超声波破碎，离心后取上清液再用乙腈定容后进行激素和肌苷含量的测定。检测条件是ODSC8色谱柱，以乙腈和水80:20为流动相，流速为0.6～1.2ml/min，柱温30℃，进样量25μl，用二级管阵列检测器检测。将处理好的标准对照品和试样溶液进行液相色谱分析，以对应的峰面积，用标准工作曲线计算相应的激素和肌苷的含量。本发明解决了多种动物激素检测时间长、费用高，每种动物激素检测需用一种试剂盒的问题。在动物激素和肌苷类方面有应用前景。
Description
技术领域
本发明属于来源于动物的药物中有效成分的分析方法的技术范围。具体涉及鹿体材料中有效成分分析方法。
背景技术
鹿全身都是宝，鹿茸、鹿胎、鹿血、鹿角等均为名贵药材，在我国药用历史悠久。“鹿茸”、“鹿角”、“全鹿”等的功能与主治病证首载于《神农本草经》，此后，中国历代本草皆对鹿的不同药用部位进行了大量收载。《本草新编》中记载的“鹿胎”等，在《本草纲目》中记载鹿药用部位有“鹿茸”、“鹿角”、“鹿骨”、“鹿肉”等的性味、功能与主治病症，鹿不同部位的中药材至今仍广泛应用于临床中。激素是生物体内具有高度生物活性的一类物质，在生物体内即使微量(如ng级水平)也可起到生物活性作用。肌苷是机体内ATP、辅酶A、核糖核酸及脱氧核糖核酸的组成部分，参与机体的物质代谢和能量代谢。它能提高机体ATP的水平，可转化为多种核苷酸，并参与蛋白质的合成。适用于各种原因引起的白细胞减少症、血小板减少症、各种心脏疾患、急性及慢性肝炎、肝硬化等，此外尚可治疗中心视网膜炎、视神经萎缩等。因此对鹿中药材性激素和肌苷含量进行分析，对控制鹿药材的质量及揭示其疗效作用的物质基础具有重要的意义。
目前对中药材真伪的鉴别还主要停留在仅凭感官和经验来判断的水平，具有很严重的不准确性和不科学性，中药材成分的检测也还是处于积累和开发阶段。
动物性激素目前主要采用试剂盒法进行检测，测一种激素需使用一种试剂盒，操作起来比较繁琐。现公开发表的液相色谱方法，仅能测一、两种激素，同时存在着多种激素未被分开，而被误认为一种激素，从而使测定结果有严重不准的可能。
发明内容
本发明的目的在于提供一种激素和肌苷的快速、准确的高效液相色谱分析方法，所述的激素为雌二醇、雌三醇、皮质醇、孕酮、雌酮、前列腺素E1和前列腺素E2中的一种。
本发明采用高效液相色谱同时测定鹿中药材中的7种激素和肌苷含量的方法，色谱条件是ODS C8色谱柱，以乙腈和水为流动相，乙腈和水体积比为80:20，流速为0.6～1.2ml/min，柱温30℃，进样量25μl，用二级管阵列检测器，检测波长：雌二醇212nm，雌三醇204nm，皮质醇242nm，雌酮281nm，孕酮254nm，前列腺素E1212nm、E2242nm，肌苷244nm。将处理好的标准对照品和试样溶液进行液相色谱分析，以对应的峰面积，用标准工作曲线计算相应的激素含量。
本发明的一方面在于，公开一种鹿产品中激素和肌苷的分析测试方法，其包括以下操作步骤，
A.标准对照品溶液的制备：
分别称取雌二醇、雌三醇、皮质醇、孕酮、雌酮、前列腺素E1和前列腺素E2、肌苷的标准对照品作为溶质，混合后加入溶剂甲醇使其溶解；制得的混合液为混合标准贮备液；所述混合标准贮备液中各溶质浓度均为1mg/mL；分别移出一定量的混合标准贮备液用乙腈和甲醇稀释，分别制得各溶质浓度均为1mg/L、2mg/L、3mg/L、4mg/L、5mg/L的混合标准对照品溶液，且每个浓度的混合标准对照品溶液中均含有体积比为10%的甲醇；
B.鹿产品试样溶液的制备：
按照0.3～1.0g鹿产品用10ml甲醇定容的比例将样品混合均匀，再用超声波破碎仪破碎3min，在4000r/min下离心20min，从上清液中取出1mL用乙腈定容至10mL，进行色谱分析；
C.色谱分析：
将步骤A制备的标准对照品溶液和步骤B制备的鹿产品试样溶液分别进行液相色谱分析，以对应的峰面积，用标准工作曲线计算相应的样品含量，液相色谱分析的条件如下：
采用ODS C8色谱柱，流动相为乙腈和水体积比为4:1，流速为0.6～1.2ml/min，柱温30℃，进样量25μl；
用二级管阵列检测器分别检测波长，其中雌二醇212nm，雌三醇204nm，皮质醇242nm，雌酮281nm，孕酮254nm，前列腺素E1212nm、E2242nm，肌苷244nm。
对于上述技术方案中，优选的情况下，所述步骤B中所述的鹿产品为鹿茸、鹿胎、鹿角帽和鹿血中的一种；所述鹿血为公鹿或母鹿的鲜血。
对于上述技术方案中，优选的情况下，所述步骤B中所述的鹿产品为鹿血时，按照1.0g鹿血用10ml甲醇定容的比例将样品混合均匀；鹿产品为鹿茸、鹿胎或鹿角帽时，按照0.3g鹿茸、鹿胎或鹿角帽用10ml甲醇定容的比例将样品混合均匀。
本发明测试方法，其对8种成分的加标平均回收率为96.2～102.8w%。测试的精密度好，稳定性：7种激素和肌苷在48小时内基本是稳定的。最小检出量（μg/g）分别为雌二醇：0.0107，雌三醇：0.00231，皮质醇：0.00806，雌酮：0.0532，孕酮：0.0175，前列腺素E1：0.0201，前列腺素E2：0.0270，肌苷：0.00321。
与现有技术相比较，本发明能够一次将鹿产品中7种激素和肌苷分析测试出来。方法简单、灵敏、准确、重现性好。
附图说明
图1：雌二醇标准对照品色谱图。其中：横纵坐标分别代表保留时间和色谱峰强度，从图中的212nm色谱峰4.0min所示，结果为雌二醇的色谱峰，证明了雌二醇的存在；
图2：雌三醇标准对照品色谱图。其中：横纵坐标分别代表保留时间和色谱峰强度，从图中的204nm色谱峰3.4min所示，结果为雌三醇的色谱峰，证明了雌三醇的存在；
图3：皮质醇标准对照品色谱图。其中：横纵坐标分别代表保留时间和色谱峰强度，从图中的242nm色谱峰3.6min所示，结果为皮质醇的色谱峰，证明了皮质醇的存在；
图4：雌酮标准对照品色谱图。其中：横纵坐标分别代表保留时间和色谱峰强度，从图中的281nm色谱峰4.3min所示，结果为雌酮的色谱峰，证明了雌酮的存在；
图5：孕酮标准对照品色谱图。其中：横纵坐标分别代表保留时间和色谱峰强度，从图中的254nm色谱峰7.1min所示，结果为孕酮的色谱峰，证明了孕酮的存在；
图6：前列腺素E1标准对照品色谱图。其中：横纵坐标分别代表保留时间和色谱峰强度，从图中的212nm色谱峰6.6min所示，结果为前列腺素E1的色谱峰，证明了前列腺素E1的存在；
图7：前列腺素E2标准对照品色谱图。其中：横纵坐标分别代表保留时间和色谱峰强度，从图中的242nm色谱峰5.9min所示，结果为前列腺素E2的色谱峰，证明了前列腺素E2的存在；
图8：肌苷标准对照品色谱图。其中：横纵坐标分别代表保留时间和色谱峰强度，从图中的244nm色谱峰3.0min和3.1min所示，结果为肌苷的色谱峰，证明了肌苷的存在；
图9：雌二醇标准曲线。其中：横纵坐标分别代表雌二醇标准样品溶液的浓度和对应的峰面积，从图中的线性回归方程y=71572x+5297.3所示，相关系数R结果为0.9989，证明了该曲线的线性关系好；
图10：雌三醇标准曲线。其中：横纵坐标分别代表雌三醇标准样品溶液的浓度和对应的峰面积，从图中的线性回归方程y=303073x+36880所示，相关系数R结果为0.9966，证明了该曲线的线性关系好；
图11：皮质醇标准曲线。其中：横纵坐标分别代表雌三醇标准样品溶液的浓度和对应的峰面积，从图中的线性回归方程y=303073x+36880所示，相关系数R结果为0.9966，证明了该曲线的线性关系好；
图12：雌酮标准曲线。其中：横纵坐标分别代表雌酮标准样品溶液的浓度和对应的峰面积，从图中的线性回归方程y=15570x－316.95所示，相关系数R结果为0.9985，证明了该曲线的线性关系好；
图13：孕酮标准曲线。其中：横纵坐标分别代表孕酮标准样品溶液的浓度和对应的峰面积，从图中的线性回归方程y=61915x－2005.2所示，相关系数R结果为0.9993，证明了该曲线的线性关系好；
图14：前列腺素E1标准曲线。其中：横纵坐标分别代表前列腺素E1标准样品溶液的浓度和对应的峰面积，从图中的线性回归方程y=14049x+682.57所示，相关系数R结果为0.9995，证明了该曲线的线性关系好；
图15：前列腺素E2标准曲线。其中：横纵坐标分别代表前列腺素E2标准样品溶液的浓度和对应的峰面积，从图中的线性回归方程y=9134.4x+1847.9所示，相关系数R结果为0.9992，证明了该曲线的线性关系好；
图16：肌苷标准曲线。其中：横纵坐标分别代表肌苷标准样品溶液的浓度和对应的峰面积，从图中的线性回归方程y=26953x+261所示，相关系数R结果为0.9996，证明了该曲线的线性关系好；
图17～22：样品分析中的鹿茸色谱图。其中：横纵坐标分别代表保留时间和色谱峰强度。
图17：鹿茸雌二醇、E1色谱图。从图中4.09min色谱峰所示，结果为雌二醇的色谱峰，证明了雌二醇的存在；从图中色谱峰所示，在6.6min无的色谱峰，证明了无前列腺素E1的色谱峰，无前列腺素E1的存在。
图18：鹿茸雌三醇色谱图。从图中3.43min色谱峰所示，结果为雌三醇的色谱峰，证明了雌三醇的存在。
图19：鹿茸皮质醇、前列腺素E2色谱图。从图中3.63min色谱峰所示，结果为皮质醇的色谱峰，证明了皮质醇的存在；从图中色谱峰所示，在5.80min色谱峰，证明了前列腺素E2的色谱峰，证明了前列腺素E2的存在。
图20：鹿茸孕酮色谱图。从图中7.1min无色谱峰，结果证明了孕酮的存在。
图21：鹿茸雌酮色谱图。从图中4.33min色谱峰所示，结果为雌酮的色谱峰，证明了雌酮的存在。
图22：鹿茸肌苷色谱图。从图中3.20min色谱峰所示，结果为肌苷的色谱峰，证明了肌苷的存在。
图23～28：样品分析中的鹿胎色谱图。其中：横纵坐标分别代表保留时间和色谱峰强度。
图23：鹿胎雌二醇、E1色谱图。从图中4.11min色谱峰所示，结果为雌二醇的色谱峰，证明了雌二醇的存在；从图中色谱峰所示，在6.6min无的色谱峰，证明了无前列腺素E1的色谱峰，无前列腺素E1的存在。
图24：鹿胎雌三醇色谱图。从图中3.45min色谱峰所示，结果为雌三醇的色谱峰，证明了雌三醇的存在。
图25：鹿胎皮质醇、前列腺素E2色谱图。从图中3.6min色谱峰所示，结果为皮质醇的色谱峰，证明了皮质醇的存在；从图中色谱峰所示，在5.8min色谱峰，证明了前列腺素E2的色谱峰，证明了前列腺素E2的存在。
图26：鹿胎孕酮色谱图。从图中7.1min无色谱峰，结果证明了孕酮的存在。
图27：鹿胎雌酮色谱图。从图中4.3min无色谱峰，结果证明了无雌酮的存在。
图28：鹿胎肌苷色谱图。从图中3.20min色谱峰所示，结果为肌苷的色谱峰，证明了肌苷的存在。
图29～34：样品分析中的鹿角帽色谱图。其中：横纵坐标分别代表保留时间和色谱峰强度。
图29：鹿角帽雌二醇、E1色谱图。从图中4.1min色谱峰所示，结果为雌二醇的色谱峰，证明了雌二醇的存在；从图中色谱峰所示，在6.6min无的色谱峰，证明了无前列腺素E1的色谱峰，无前列腺素E1的存在。
图30：鹿角帽雌三醇色谱图。从图中3.4min色谱峰所示，结果为雌三醇的色谱峰，证明了雌三醇的存在。
图31：鹿角帽皮质醇、前列腺素E2色谱图。从图中3.6min色谱峰所示，结果为皮质醇的色谱峰，证明了皮质醇的存在；从图中色谱峰所示，在5.80min色谱峰，证明了前列腺素E2的色谱峰，证明了前列腺素E2的存在。
图32：鹿角帽孕酮色谱图。从图中7.1min无色谱峰，结果证明了孕酮的存在。
图33：鹿角帽雌酮色谱图。从图中4.3min色谱峰所示，结果为雌酮的色谱峰，证明了雌酮的存在。
图34：鹿角帽肌苷色谱图。从图中3.19min色谱峰所示，结果为肌苷的色谱峰，证明了肌苷的存在。
图35～40：样品分析中的鹿:血色谱图。其中：横纵坐标分别代表保留时间和色谱峰强度。
图35：鹿血雌二醇、E1色谱图。从图中4.1min色谱峰所示，结果为雌二醇的色谱峰，证明了雌二醇的存在；从图中色谱峰所示，在6.6min的色谱峰，证明了前列腺素E1的存在。
图36：鹿血雌三醇色谱图。从图中3.4min色谱峰所示，结果为雌三醇的色谱峰，证明了雌三醇的存在。
图37：鹿血皮质醇、前列腺素E2色谱图。从图中3.6min无色谱峰，证明了无皮质醇的存在；从图中色谱峰所示，在5.90min色谱峰，证明了前列腺素E2的色谱峰，证明了前列腺素E2的存在。
图38：鹿血孕酮色谱图。从图中7.1min色谱峰所示，结果为孕酮的色谱峰，结果证明了孕酮的存在。
图39：鹿血雌酮色谱图。从图中4.3min色谱峰所示，结果为雌酮的色谱峰，证明了雌酮的存在。
图40：鹿血肌苷色谱图。从图中3.2min色谱峰所示，结果为肌苷的色谱峰，证明了肌苷的存在。
具体实施方式
下述非限制性实施例可以使本领域的普通技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。
本发明为一种高效液相色谱法在不同波长下，同时测定鹿中药材鹿血、鹿茸、鹿胎和鹿角帽中激素雌二醇、雌三醇、皮质醇、雌酮、孕酮、前列腺素E1、E2和肌苷含量的方法，具体的色谱峰出峰顺序为：雌三醇为3.4min、皮质醇为3.6min、雌二醇为4.0min、雌酮为4.3min、前列腺素E1为6.6min、前列腺素E2为5.9min、孕酮为7.1min、肌苷为双峰3.0和3.1min。
通过考察不同的实验参数，最终确立了最佳的色谱条件，在样品的测定中得到了基线平稳、分离效果好、色谱峰形好的色谱图。
实施例1
仪器：日本岛津公司LC-20AD型高效液相色谱仪，LC-20AB二极管阵列检测器，日本岛津公司UV-2201型紫外-可见分光光度计，超声波破碎仪。
试剂：甲醇、乙腈：色谱纯；
样品来源：鹿茸、鹿胎、鹿角帽、鹿血均来自于吉林鹿业生物制品有限公司
标准样品：雌二醇、雌三醇、皮质醇、雌酮、孕酮、前列腺素E1、前列腺素E2、肌苷为Sigma-Aldrich公司提供。
流动相的选择：本发明采用乙腈:水＝80:20作为流动相，获得的样品分离效果较佳，而采用其他流动相，例如：甲醇、不同比例的甲醇和水、乙腈、以及加入不同比例的丙酮、乙酸乙酯、异丙醇、冰醋酸等作为流动相，经过反复多次试验效果均不理想。
检测波长的选择：雌二醇、雌三醇、皮质醇、雌酮、孕酮、前列腺素E1、E2和肌苷标样分别用甲醇溶解稀释为1mg/mL后，分别取1mL用乙腈稀释至10mL，分别制得相应溶质的标准溶液，经紫外-可见吸收分光光度计在190nm-400nm波长范围内扫描,结合二极管阵列检测器检测，确立检测波长为：雌二醇212nm，雌三醇204nm，皮质醇242nm，雌酮281nm，孕酮254nm，前列腺素E1212nm、E2242nm，肌苷244nm。
最佳的色谱条件：ODS C8色谱柱，以乙腈和水为流动相，乙腈和水体积比为80:20，流速为0.6ml/min-1.2ml/min，柱温30℃，进样量25μl，用二级管阵列检测器，检测波长：雌二醇212nm，雌三醇204nm，皮质醇242nm，雌酮281nm，孕酮254nm，前列腺素E1212nm、E2242nm，肌苷244nm。将处理好的标准对照品和试样溶液进行液相色谱分析，以对应的峰面积，用标准工作曲线计算相应的激素含量。
标准曲线和相关系数：分别称取雌二醇、雌三醇、皮质醇、孕酮、雌酮、前列腺素E1、前列腺素E2、肌苷的标准对照品作为溶质，混合后加入溶剂甲醇使其溶解；制得的混合液为混合标准贮备液；所述混合标准贮备液中各溶质浓度均为1mg/mL；分别移出一定量的混合标准贮备液用乙腈和甲醇稀释，分别制得各溶质浓度均为1mg/L、2mg/L、3mg/L、4mg/L、5mg/L的混合标准对照品溶液，且每个浓度的混合标准对照品溶液中均含有体积比为10%的甲醇；配成不同浓度的混合标准溶液，见表1，雌二醇、雌三醇、皮质醇、雌酮、孕酮、前列腺素E1、前列腺素E2、肌苷标准对照品色谱图分别见图1、图2、图3、图4、图5、图6、图7、图8，7种激素与肌苷的标准曲线见图9、图10、图11、图12、图13、图14、图15、图16。
表1
对上表1中样品的检测结果数据分析证明：本发明利用HPLC法同时测定雌二醇、雌三醇、皮质醇、孕酮、雌酮、前列腺素E1和前列腺素E2、肌苷的含量，标准曲线的线性相关系数R值均在0.9950以上，其中皮质醇、孕酮、前列腺素E1、前列腺素E2和肌苷均在0.999以上，雌二醇和雌酮的线性相关系数R值均在0.998以上，雌三醇的线性相关系数R值在0.996以上，说明方法的标准曲线的线性好。所述雌二醇、雌三醇、皮质醇、孕酮、雌酮、肌苷的标准溶液浓度的线性范围为0-5mg/mL，前列腺素E1和前列腺素E2标准溶液浓度的线性范围为0-15mg/mL。
加标回收率：在含有一定量的鹿血10mL容量瓶中准确加入不同量的各标准溶液，测定各种激素和肌苷的加标回收率，回收率的计算是测定值除以理论值。实验结果见表2。
表2溶液配制和检测结果
从表2数据可见，回收率在106.9%～92.5%，说明本方法的准确性高。
精密度实验：见实施例2.
最低检出限：按如下公式计算7种激素和肌苷的检出限：
Ci=2*HNC/H
其中：Ci：最小检测浓度，HN：噪声峰高，C：标样浓度，H：标样峰高。计算结果见表3。
表3
对上表3中样品的检测结果数据分析证明：本发明的检出限均较低，其中雌三醇、皮质醇、肌苷的检出限低至几纳克，如雌三醇为2.31ng/g、皮质醇为8.06ng/g、肌苷为3.21ng/g；雌二醇、雌酮、孕酮、前列腺素E1、前列腺素E2的检出限为几十纳克，如雌二醇为10.7ng/g、雌酮为53.2ng/g、孕酮为17.5ng/g、前列腺素E1为20.1ng/g、前列腺素E2为27.0ng/g，说明方法的检测灵敏度高。
稳定性实验：用7种激素和肌苷的混标做稳定性实验，实验数据用峰面积来表示，实验结果见表4。
表4用7种激素和肌苷的混标做稳定性实验的结果
由表4可见7种激素和肌苷在48小时内峰面积变化较小，说明测定在48h内基本上是稳定的。
实施例2
仪器、试剂：同实施例1。
色谱条件：ODS C8色谱柱，以乙腈和水为流动相，乙腈和水体积比为80:20，流速为0.6ml/min-1.2ml/min，柱温30℃，进样量25μl，用二级管阵列检测器，检测波长：雌二醇212nm，雌三醇204nm，皮质醇242nm，雌酮281nm，孕酮254nm，前列腺素E1212nm、E2242nm，肌苷244nm。将处理好的标准对照品和试样溶液进行液相色谱分析，以对应的峰面积，用标准工作曲线计算相应的激素含量。
样品来源：鹿茸、鹿胎、鹿角帽、鹿血均来自于吉林鹿业生物制品有限公司
样品处理：分别准确称取约1.0g鹿血（鲜），约0.3g鹿茸、鹿胎和鹿角帽用甲醇定容至10ml体积，然后用超声波破碎仪破碎3min，在4000r/min下离心20min，从上清液中取出1mL用乙腈定容至10mL。此溶液进行分析测试其雌二醇、雌三醇、皮质醇、孕酮、雌酮、前列腺素E1、前列腺素E2和肌苷的含量。
样品的测定及结果：按上述方法分别测定鹿茸、鹿胎、鹿角帽、公鹿和母鹿血（鲜）中雌二醇、雌三醇、皮质醇、雌酮、孕酮、前列腺素E1、前列腺素E2、肌苷含量，鹿茸色谱图见图17、图18、图19、图20、图21、图22，鹿胎色谱图见图23、图24、图25、图26、图27、图28，鹿角帽色谱图见图29、图30、图31、图32、图33、图34，鹿血色谱图见图35、图36、图37、图38、图39、图40，鹿血样品中7种激素和肌苷含量结果见表5，同时精密度试验结果(测定次数n=5)见表5；鹿茸、鹿胎、鹿角帽样品中7种激素和肌苷含量结果见表6，同时精密度试验结果(测定次数n=5)见表6。表中数据为X±RSD。
表5鹿血样品中7种激素和肌苷含量结果n=5
| 样品μg/g | 母鹿血1 | 母鹿血2 | 公鹿血1 | 公鹿血2 |
| 雌二醇 | 17.68±0.042 | 18.14±0.039 | 1.65±0.049 | 2.50±0.051 |
| 雌三醇 | 50.29±0.015 | 43.37±0.021 | 6.03±0.042 | 5.48±0.047 |
| 皮质醇 | 5.80±0.037 | 3.02±0.054 | 4.78±0.044 | 3.60±0.051 |
| 孕酮 | 5.26±0.040 | 3.32±0.052 | ------ | ------ |
| 雌酮 | 14.77±0.038 | 12.84±0.049 | ------ | ------- |
| E1 | ----- | ---- | 1.02±0.055 | 0.98±0.057 |
| E2 | ----- | ---- | 29.79±0.020 | 27.12±0.018 |
| 肌苷 | 43.39±0.012 | 32.15±0.019 | 23.23±0.040 | 22.75±0.043 |
注：母鹿血1：指新鲜的第一批血样；母鹿血2：指新鲜的第二批血样；公鹿血1：指新鲜的第一批血样；公鹿血2：指新鲜的第二批血样；
对上表5中样品的检测结果数据分析证明：本发明对鹿血样品的5次测定结果的相对标准偏差除个别的超过5.0%外，均在5.0%以内，说明本检测方法的重现性好。
表6样品中7种激素和肌苷含量结果n=5
| 样品μg/g | 鹿茸 | 鹿胎 | 鹿角帽 |
| 雌二醇 | 40.6±0.046 | 128.89±0.039 | 22.30±0.047 |
| 雌三醇 | 86.0±0.021 | 126.72±0.015 | 110.02±0.017 |
| 皮质醇 | 3.6±0.059 | 3.63±0.049 | 12.18±0.043 |
| 孕酮 | ---- | ---- | ---- |
| 雌酮 | 26.03±0.039 | ----- | 32.02±0.033 |
| E1 | ------ | ----- | ------- |
| E2 | 403.15±0.0048 | 183.23±0.014 | 383.51±0.0062 |
| 肌苷 | 2763.00±0.021 | 5162.00±0.013 | 21.11±0.039 |
对上表6中样品的检测结果数据分析证明：本发明对鹿茸、鹿胎、鹿角帽样品的5次测定结果的相对标准偏差除个别的超过5.0%外，均在5.0%以内，说明本检测方法的重现性好。
综上所述，本发明上述表1～6中的样品检测结果数据充分证明了：本发明对鹿血、鹿茸、鹿胎、鹿角帽的检测具有很好的准确性，并且具有较好的重复性。
Claims (3)
1.鹿产品中激素和肌苷的分析测试方法，其特征在于：包括以下操作步骤，
A.标准对照品溶液的制备：
分别称取雌二醇、雌三醇、皮质醇、孕酮、雌酮、前列腺素E1、前列腺素E2、肌苷的标准对照品作为溶质，混合后加入溶剂甲醇使其溶解；制得的混合液为混合标准贮备液；所述混合标准贮备液中各溶质浓度均为1mg/mL；分别移出一定量的混合标准贮备液用乙腈和甲醇稀释，分别制得各溶质浓度均为1mg/L、2mg/L、3mg/L、4mg/L、5mg/L的混合标准对照品溶液，且每个浓度的混合标准对照品溶液中均含有体积比为10%的甲醇；
B.鹿产品试样溶液的制备：
按照0.3～1.0g鹿产品用10ml甲醇定容的比例将样品混合均匀，再用超声波破碎仪破碎3min，在4000r/min下离心20min，从上清液中取出1mL用乙腈定容至10mL，进行色谱分析；
C.色谱分析：
将步骤A制备的标准对照品溶液和步骤B制备的鹿产品试样溶液分别进行液相色谱分析，以对应的峰面积，用标准工作曲线计算相应的样品含量，液相色谱分析的条件如下：
采用ODS C8色谱柱，流动相为乙腈和水体积比为4:1，流速为0.6～1.2ml/min，柱温30℃，进样量25μl；
用二级管阵列检测器分别检测波长，其中雌二醇212nm，雌三醇204nm，皮质醇242nm，雌酮281nm，孕酮254nm，前列腺素E1212nm、E2242nm，肌苷244nm。
2.根据权利要求1所述的鹿产品中激素和肌苷的分析测试方法，其特征在于：步骤B中所述的鹿产品为鹿茸、鹿胎、鹿角帽和鹿血中的一种；所述鹿血为公鹿或母鹿的鲜血。
3.根据权利要求1所述的鹿产品中激素和肌苷的分析测试方法，其特征在于：步骤B中所述的鹿产品为鹿血时，按照1.0g鹿血用10ml甲醇定容的比例将样品混合均匀；鹿产品为鹿茸、鹿胎或鹿角帽时，按照0.3g鹿茸、鹿胎或鹿角帽用10ml甲醇定容的比例将样品混合均匀。
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