CN107868833A - 一种鉴别南海棘鲯鳅和鲯鳅的分子标记引物及方法 - Google Patents
一种鉴别南海棘鲯鳅和鲯鳅的分子标记引物及方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN107868833A CN107868833A CN201711186778.6A CN201711186778A CN107868833A CN 107868833 A CN107868833 A CN 107868833A CN 201711186778 A CN201711186778 A CN 201711186778A CN 107868833 A CN107868833 A CN 107868833A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- mahi
- loach
- spine
- mahi loach
- differentiating
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/156—Polymorphic or mutational markers
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明涉及一种鉴别棘鲯鳅和鲯鳅的分子标记引物,该标记引物序列为:MiFish‑U‑F:5’‑GTCGGTAAAACTCGTGCCAGC‑3′;MiFish‑U‑R:5’‑CATAGTGGGGTATCTAATCCCAGTTTG‑3′。本发明有助于解决鲯鳅属鱼类种质混杂问题,本发明方法操作简单,易于掌握,准确性高。
Description
技术领域
本发明涉及分子生物学领域,尤其涉及一种鉴别南海棘鲯鳅和鲯鳅的分子标记引物及方法。
背景技术
棘鲯鳅隶属于辐鳍鱼纲、鲈形目、鲯鳅科、鲯鳅属,棘鲯鳅国内罕见,偶尔出现在台湾地区西南海域。其外部形态特征与鲯鳅极其相似,主要特征为:体极延长而侧扁,头部高大,向后逐渐变细,最高处在头部;额部具1骨质隆起,吻长而钝,眼中大,口大,微斜,下颌略突出上颌,上下颌、腭骨及舌面均具齿,上下颌牙多行,外形齿排列稀疏;体被不易脱落小圆鳞,头部除颊部外均裸露无鳞;侧线完全,在胸鳍上方呈不规则波浪形弯曲,向后平直,伸达尾鳍基。背鳍单一,基底颇长,自眼上缘起止于尾鳍基,具48~59鳍条,臀鳍较短,凸面,起点在背鳍中部鳍条下方,胸鳍小,镰刀形,不超过头长的一半,腹鳍颇长,部分可纳入腹沟内,尾鳍深叉形。体绿褐色,腹面颜色浅,体侧散布若干黑色斑点,背鳍与臀鳍黑色,其余各鳍黄褐色。棘鲯鳅与鲯鳅一样,皆为重要的经济鱼类,骨肉桃红色,极似三文鱼,口味鲜美,具有很高的食用价值。
由于棘鲯鳅和鲯鳅的外部形态非常相似,仅凭借其形态特征很难将两者区分。目前,用于鉴定棘鲯鳅的方法尚无正式报道。因此寻找区分棘鲯鳅和鲯鳅的可靠标准,从混杂的种质中鉴别、分离种质成为一个亟待解决的问题。这将有助于解决种质混杂等问题,为种质保护、合理利用以及种质的生物多样性研究提供技术支撑。
发明内容
本发明要解决的技术问题在于提供一种鉴别南海棘鲯鳅和鲯鳅的分子标记引物及方法,有助于解决鲯鳅属鱼类种质混杂问题,本发明方法操作简单,易于掌握,准确性高。
为解决上述技术问题,本发明提出的技术方案为:
一种鉴别棘鲯鳅和鲯鳅的分子标记引物,该标记引物序列为:
MiFish-U-F:5’-GTCGGTAAAACTCGTGCCAGC-3′;
MiFish-U-R:5’-CATAGTGGGGTATCTAATCCCAGTTTG-3′。
作为一个总的技术构思,本发明还提供一种鉴别棘鲯鳅和鲯鳅的分子标记方法,包括以下步骤:
(1)西太平洋和南海游泳动物调查采集的棘鲯鳅和鲯鳅,组成棘鲯鳅样本群和鲯鳅样本群,提取2个样本群体的总基因组DNA;
(2)以所提取的总基因组DNA为模板进行PCR扩增反应;
(3)对成功扩增的PCR产物进行纯化、测序,比对测序结果。
优选地,所述步骤(2)中的PCR扩增反应操作方法是将17.5ul的超纯水,2.5ul的10×buffer,2ul的dNTPs,0.15ul的rTaq酶,1ul的总基因组DNA模板,1ul的Primer依次加入到0.2ml的离心管中。
优选地,所述步骤(2)中的PCR扩增程序为:94℃预变性2min,(94℃变性15sec,50℃退火15sec,72℃延伸15sec)×30个循环,72℃延伸3min,4℃保存。
本发明的有益效果是:
由棘鲯鳅和鲯鳅线粒体DNA 12S基因168bp序列比对结果,可以看出棘鲯鳅和鲯鳅序列间存在7个碱基变异位点,分别为2个转换,5个颠换,无插入/缺失。5尾棘鲯鳅个体的扩增结果一致,5尾鲯鳅个体的扩增结果亦一致,均表现出高度的一致性。由此可以看出该方法的结果稳定,可重复性强。因此基于12S基因的碱基差异可以作为棘鲯鳅和鲯鳅的种质区分的分子标记。同时,鉴别方法简单,易操作。
具体实施方式
下面通过实例来对本发明的技术方案作进一步解释,但本发明的保护范围不受实例任何形式上的限制。
一种鉴别南海棘鲯鳅和鲯鳅的分子标记引物及方法,包括以下步骤:
(1)选用西太平洋和南海游泳动物调查采集的棘鲯鳅和鲯鳅,组成棘鲯鳅样本群和鲯鳅样本群,提取2个样本群体的总基因组DNA;
(2)以所提取的总基因组DNA为模板进行PCR扩增反应;
(3)对成功扩增的PCR产物进行纯化、测序,比对测序结果。
得到的分子标记引物序列为MiFish-U-F:5’-GTCGGTAAAACTCGTGCCAGC-3′;MiFish-U-R:5’-CATAGTGGGGTATCTAATCCCAGTTTG-3′。
分别取1ul的2个样本群体的总基因组DNA,并分别进行PCR扩增反应,PCR扩增反应在0.2ml的离心管中进行,操作方法具体为:在0.2ml的离心管中分别依次加入17.5ul的超纯水,2.5ul的10×buffer,2ul的dNTPs,0.15ul的rTaq酶,1ul的总基因组DNA模板,1ul的Primer。
PCR扩增程序为94℃预变性2min,(94℃变性15sec,50℃退火15sec,72℃延伸15sec)×30个循环,72℃延伸3min,4℃保存。
棘鲯鳅样本群和鲯鳅样本群的线粒体DNA 12S基因168bp序列的比对结果为:
其中Ce代表棘鲯鳅样品;Ch代表鲯鳅样品;“*”表示相同的碱基序列位点;“Ruler:·”表示碱基序列位点的序号。
由棘鲯鳅和鲯鳅的线粒体DNA 12S基因168bp序列排序结果,可以看出棘鲯鳅和鲯鳅序列间存在7个碱基变异位点,分别为2个转换,5个颠换,无插入/缺失。
测序结果表明,5尾棘鲯鳅个体扩增结果一致,5尾鲯鳅个体扩增结果亦一致,均表现出高度的一致性,结果稳定且可重复性。
由棘鲯鳅和鲯鳅线粒体DNA 12S基因168bp序列比对结果,可以看出棘鲯鳅和鲯鳅序列间存在7个碱基变异位点,分别为2个转换,5个颠换,无插入/缺失。5尾棘鲯鳅个体的扩增结果一致,5尾鲯鳅个体的扩增结果亦一致,均表现出高度的一致性。由此可以看出该方法的结果稳定,可重复性强,保证了极高的准确性,因此基于12S基因的碱基差异可以作为棘鲯鳅和鲯鳅的种质区分的分子标记。同时,鉴别方法简单,易操作。
本具体实施例仅仅是对本发明的解释,其并不是对本发明的限制,本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改,但只要在本发明的权利要求范围内都受到专利法的保护。
Claims (4)
1.一种鉴别棘鲯鳅和鲯鳅的分子标记引物,该标记引物序列为:
MiFish-U-F:5’-GTCGGTAAAACTCGTGCCAGC-3′;
MiFish-U-R:5’-CATAGTGGGGTATCTAATCCCAGTTTG-3′。
2.一种鉴别棘鲯鳅和鲯鳅的分子标记方法,其包括以下步骤:
(1)西太平洋和南海游泳动物调查采集的棘鲯鳅和鲯鳅,组成棘鲯鳅样本群和鲯鳅样本群,提取2个样本群体的总基因组DNA;
(2)以所提取的总基因组DNA为模板进行PCR扩增反应;
(3)对成功扩增的PCR产物进行纯化、测序,比对测序结果。
3.根据权利要求2所述的一种鉴别棘鲯鳅和鲯鳅的分子标记方法,其特征在于:所述步骤(2)中的PCR扩增反应的操作方法是将17.5ul的超纯水,2.5ul的10×buffer,2ul的dNTPs,0.15ul的rTaq酶,1ul的总基因组DNA模板,1ul的Primer依次加入到0.2ml的离心管中。
4.根据权利要求2所述的一种鉴别棘鲯鳅和鲯鳅的分子标记方法,其特征在于:所述步骤(2)中的PCR扩增程序为:94℃预变性2min,(94℃变性15sec,50℃退火15sec,72℃延伸15sec)×30个循环,72℃延伸3min,4℃保存。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201711186778.6A CN107868833A (zh) | 2017-11-24 | 2017-11-24 | 一种鉴别南海棘鲯鳅和鲯鳅的分子标记引物及方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201711186778.6A CN107868833A (zh) | 2017-11-24 | 2017-11-24 | 一种鉴别南海棘鲯鳅和鲯鳅的分子标记引物及方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN107868833A true CN107868833A (zh) | 2018-04-03 |
Family
ID=61754701
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201711186778.6A Pending CN107868833A (zh) | 2017-11-24 | 2017-11-24 | 一种鉴别南海棘鲯鳅和鲯鳅的分子标记引物及方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN107868833A (zh) |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102912012A (zh) * | 2012-08-30 | 2013-02-06 | 浙江海洋学院 | 海洋鱼类线粒体12S rRNA基因扩增引物及其设计和扩增方法 |
-
2017
- 2017-11-24 CN CN201711186778.6A patent/CN107868833A/zh active Pending
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102912012A (zh) * | 2012-08-30 | 2013-02-06 | 浙江海洋学院 | 海洋鱼类线粒体12S rRNA基因扩增引物及其设计和扩增方法 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
MIYA,M等: "Coryphaena hippurus mitochondrial gene for 12S rRNA, partial sequence", 《NCBI》 * |
廖梦香等: "核糖体DNA在厦门白姑鱼和大黄鱼染色体上的比较定位", 《水产学报》 * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN109234442B (zh) | 一种与绵羊多羔性状相关的snp分子标记及其检测试剂盒和应用 | |
CN106755326A (zh) | 一种与鸭产蛋性状相关的分子遗传标记及应用 | |
CN107699626A (zh) | 一种鉴别北太平洋大马哈鱼和虹鳟的分子标记引物及方法 | |
CN105441576B (zh) | 一种用于长牡蛎亲子鉴定的微卫星多重pcr方法 | |
CN113637794A (zh) | 一种果桑新品种‘粤椹201’的ssr分子标记及其核心引物组、试剂盒和应用 | |
CN110331217B (zh) | 一种适用于尼罗罗非鱼、奥利亚罗非鱼及其杂交种的微卫星标记亲权鉴定引物、方法及应用 | |
CN106591460B (zh) | 一种ssr分子标记鉴定“中茶302”茶树品种的方法及应用 | |
CN114262748B (zh) | 一种鉴定果桑品种‘粤椹143’的分子标记、鉴定引物组、试剂盒和应用 | |
CN111304337A (zh) | 鉴定江黄颡鱼、瓦氏黄颡鱼和杂交子一代的srap分子标记、试剂盒和方法及应用 | |
CN108754014B (zh) | 鉴别脐橙的分子标记及其鉴别脐橙的方法、应用和试剂盒 | |
CN110747281A (zh) | 一种三疣梭子蟹耐低盐的分子标记c62及其应用 | |
CN107868833A (zh) | 一种鉴别南海棘鲯鳅和鲯鳅的分子标记引物及方法 | |
CN117144017A (zh) | 与鸡生长性状相关的分子标记及其应用 | |
CN106834495A (zh) | 一种肉苁蓉分子身份证及快速鉴定方法 | |
CN108250285B (zh) | 一种与大口黑鲈快速生长相关的单倍型标记及其应用 | |
CN113528702B (zh) | 与胡萝卜中番茄红素主效qtl紧密连锁的kasp标记及其引物和应用 | |
CN107699628A (zh) | 一种鉴别梅芳蛇鲻和花斑蛇鲻的分子标记引物及方法 | |
CN111118130B (zh) | 快速鉴别罗氏沼虾性别的方法 | |
CN107699627A (zh) | 一种鉴别南极革首南极鱼的分子标记引物及方法 | |
CN115058537A (zh) | 一种海带的选育方法 | |
CN110951890B (zh) | 一种快速鉴定中华鳖中清溪乌鳖品系和日本品系的方法 | |
CN111454958B (zh) | 快长优质草鱼SNPs及其应用 | |
CN111705146B (zh) | 一种用于鉴定鸭黄麻羽性状的分子标记及其应用 | |
CN114622035A (zh) | 一种甘薯全基因组高通量特异性InDel分子标记引物组及其应用 | |
Liu et al. | Multiplex PCR sets of novel microsatellite loci for iwagaki oyster Crassostrea nippona and their application in parentage assignment |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20180403 |