CN107849610B - 早期阿尔茨海默病或轻度认知障碍诊断方法 - Google Patents

早期阿尔茨海默病或轻度认知障碍诊断方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及早期阿尔茨海默病或轻度认知障碍诊断方法。本发明的阿尔茨海默病或轻度认知障碍诊断方法通过确认嗅觉组织的miR‑206的表达水平，来诊断阿尔茨海默病及轻度认知障碍具有高的诊断率，可以用低的费用进行诊断，且由于组织检查的安全性非常高，因此对阿尔茨海默病或轻度认知障碍诊断具有显著的效果。

Description

早期阿尔茨海默病或轻度认知障碍诊断方法
技术领域
本发明涉及早期阿尔茨海默病或轻度认知障碍诊断方法。
背景技术
众所周知，阿尔茨海默疾病是伴随老化的大脑疾病，在整个大脑中通过作为细胞外β淀粉样蛋白沉着的老年斑和细胞内过磷酸化tau蛋白神经细胞死亡，这是导致渐进性记忆障碍、认知缺陷、个人性格的变化等的疾病。在全世界有350万名以上患有阿尔茨海默病，但是实际上未开发获得美国食品药品监督管理局(FDA)认证的具有疾病改善效果的药物。
对阿尔茨海默病的早期阶段的患者的早期诊断针对患者治疗是必需的，对计划潜在性阿尔茨海默病治疗剂的临床试验也是必要的。
但是，目前为止，尽管通过许多研究来对发病机制的研究和治疗剂开发进行了投资，但是，目前为止，阿尔茨海默病作为很难进行早期诊断的疾病，实际上没有确切的诊断性生物标记。
出于这些原因，正进行多种诊断法及与其相关的研发，但是，由目前为止所知的多个方法难以对阿尔茨海默病进行早期诊断。例如，尽管集落刺激因子(CSF)标记及多种类型的神经影像技术法发展迅速，但各个生物标记都有其局限性，最重要的，难以区分认知功能正常的人与具有轻度认知损伤的患者是有限的。并且，集落刺激因子A42测定及淀粉样蛋白聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)影像是淀粉样蛋白蓄积的标记，但是不能提供淀粉样蛋白阳性可靠的临床诊断结果。
即，利用磁共振成像(magnetic resonance imaging，MRI)或计算机体层摄影(computed tomography，CT)的影像诊断、在脑脊液(Cerebrospinal fluid，CSF)或血液中测定tau蛋白质、β-淀粉样蛋白(beta-amyloid)的量的诊断、作为遗传性危险因素，多样化型分析等利用于阿尔茨海默疾病的诊断方法，但是作为用于早期诊断阿尔茨海默的方法，依然具有局限性。
在这种背景下，确定可以早期诊断阿尔茨海默病的新型生物标记及利用其的诊断方法，急需开发基于其的阿尔茨海默病的早期诊断及预后预测方法。
发明内容
技术问题
本发明提供阿尔茨海默病或轻度认知障碍的诊断或者预后分析标记的检测方法，为了提供在阿尔茨海默病或轻度认知障碍的诊断或者预后分析中所需的信息，利用对嗅觉(Olfactory)组织试样中的miR-206(miR-206)的表达进行检测的方法。
本发明还提供用于诊断阿尔茨海默病或轻度认知障碍的信息提供方法，包括：在从患者所分离的嗅觉组织试样中测定miR-206的表达水平的步骤；以及比较所述miR-206的表达水平与基准水平的步骤。
本发明还提供作为测定miR-206的表达水平的制剂，包含与所述基因特异性结合的引物对、探针或反义核苷酸的用于诊断早期阿尔茨海默病或轻度认知障碍的组合物。
本发明还提供包含用于诊断早期阿尔茨海默病或轻度认知障碍的组合物的用于诊断早期阿尔茨海默病或轻度认知障碍的试剂盒。
技术方案
为了解决如上所述的技术问题，本发明包括阿尔茨海默病或轻度认知障碍的诊断或者预后分析标记的检测方法，为了提供在阿尔茨海默病或轻度认知障碍的诊断或者预后分析中所需的信息，利用对嗅觉组织试样中的miR-206的表达进行检测的方法。
并且，在本发明中，阿尔茨海默病或轻度认知障碍的诊断或者预后分析标记的检测方法的特征在于，在所述miR-206的表达的检测中利用与miR-206特异性结合的引物对、探针或反义核苷酸。
并且，在本发明中，阿尔茨海默病或轻度认知障碍的诊断或者预后分析标记的检测方法的特征在于，所述miR-206的表达检测基于逆转录聚合酶链反应、竞争性逆转录聚合酶链反应、实时逆转录聚合酶链反应、RNA酶保护分析法、RNA印迹或DNA芯片。
并且，在本发明中，阿尔茨海默病或轻度认知障碍的诊断或者预后分析标记的检测方法的特征在于，所述嗅觉组织试样为嗅觉粘膜试样或嗅觉上皮试样。
并且，在本发明中，阿尔茨海默病或轻度认知障碍的诊断或者预后分析标记的检测方法的特征在于，所述阿尔茨海默病为早期阿尔茨海默病。
而且，本发明包括用于诊断阿尔茨海默病或轻度认知障碍的信息提供方法，包括：在从患者所分离的嗅觉组织试样中测定miR-206的表达水平的步骤；以及比较所述miR-206的表达水平与基准水平的步骤。
并且，在本发明中，用于诊断阿尔茨海默病或轻度认知障碍的信息提供方法的特征在于，还包括通过比较所述miR-206的表达水平与基准水平，若所述表达增加，则判定为诊断为阿尔茨海默病或轻度认知障碍的步骤。
并且，在本发明中，用于诊断阿尔茨海默病或轻度认知障碍的信息提供方法的特征在于，所述miR-206的表达水平测定利用与miR-206特异性结合的引物对、探针或反义核苷酸。
并且，在本发明中，用于诊断阿尔茨海默病或轻度认知障碍的信息提供方法的特征在于，miR-206的表达检测基于逆转录聚合酶链反应、竞争性逆转录聚合酶链反应、实时逆转录聚合酶链反应、RNA酶保护分析法、RNA印迹或DNA芯片。
并且，在本发明中，用于诊断阿尔茨海默病或轻度认知障碍的信息提供方法的特征在于，所述嗅觉组织试样为嗅觉粘膜试样或嗅觉上皮试样。
并且，在本发明中，用于诊断阿尔茨海默病或轻度认知障碍的信息提供方法的特征在于，所述阿尔茨海默病为早期阿尔茨海默病。
而且，本发明包括用于诊断早期阿尔茨海默病或轻度认知障碍的组合物，作为测定miR-206的表达水平的制剂，包含与所述基因特异性结合的引物对、探针或反义核苷酸。
并且，包括本发明的用于诊断早期阿尔茨海默病或轻度认知障碍的组合物。
有益效果
本发明的阿尔茨海默病或轻度认知障碍诊断方法通过确认嗅觉组织的miR-206的表达水平，来诊断阿尔茨海默病及轻度认知障碍具有高的诊断率，可以用低的费用进行诊断，且由于组织检查的安全性非常高，因此对阿尔茨海默病或轻度认知障碍诊断具有显著的效果。
因此，可通过基于此的治疗法和预防法来提高对阿尔茨海默病或轻度认知障碍的治疗效果并最小化治疗的副作用。
附图说明
图1为示出嗅觉上皮试样的miRNA-206实时聚合酶链反应(real time PCR)结果的附图。
图2为示出嗅觉上皮miRNA-206水平与临床评分测定结果之间的相关性分析结果的附图。
具体实施方式
以下参照后述的实施例使本发明的优点、特征及实现这些优点和特征的方法更加明确。但是，本发明并不局限于以下所公开的实施例，而是能够以互不相同的各种方式实施，本实施例使本发明的公开完整，并用于使本发明所属技术领域的普通技术人员完整地理解本发明的范畴，本发明由发明要求保护范围定义。
本发明人致力于开发用于早期诊断阿尔茨海默病的生物标记开发及诊断方法，确认在嗅觉组织中miRNA-206(miR-206)表达水平作为用于诊断早期阿尔茨海默病的生物标记具有显著的效果，从而完成了本发明。
本发明提供阿尔茨海默病或轻度认知障碍的诊断或者预后分析标记的检测方法，为了提供在阿尔茨海默病或轻度认知障碍的诊断或者预后分析中所需的信息，利用对嗅觉组织试样中的miR-206的表达进行检测的方法。
在本发明中，诊断包括确定对特定疾病或疾患的一个个体的感受性(susceptibility)、确定一个个体目前是否具有特定疾病或疾患、确定患有特定疾病或疾患的一个个体的预后(prognosis)(例如，阿尔茨海默疾病的阶段确定或对治疗的反应性确定或治疗度量(therametrics)(例如，为了提供有关治疗功效的信息监视个体的状态)。
阿尔茨海默病是伴随老化的疾病，在整个大脑中通过作为细胞外β淀粉样蛋白沉着的老年斑和细胞内过磷酸化tau蛋白神经细胞死亡，这是导致渐进性记忆障碍、认知缺陷、个人性格的变化等的疾病。
轻度认知障碍是与相同年龄段相比，认知功能，尤其记忆力下降的状态，且因保留有执行日常生活的能力而还不是痴呆的状态。轻度认知障碍可转变为阿尔茨海默病并被指定为高危人群，是可以在最早时期发现阿尔茨海默病的阶段且可以极大化治疗效果的临床上重要的阶段。
在本发明中，阿尔茨海默病的早期阶段可根据CDR来示出，将CDR 0.5定义为非常轻微的痴呆(very mild dementia)阶段和/或轻微认知障碍，CDR 1为轻微(milddementia)。
并且，标准受试者可根据本领域的技术人员已知的方法，还可根据具有阿尔茨海默病的特异性阶段的另一定义进行分类。
本申请的阿尔茨海默病或轻度认知障碍的诊断或者预后分析标记的检测方法包括轻度认知障碍，因此对诊断早期阿尔茨海默病或者检测预后分析标记具有显著的效果。
为了对本申请的诊断阿尔茨海默病或轻度认知障碍或者检测预后分析提供所需的信息，利用检测嗅觉组织试样中的miR-206的表达的方法。
在本发明中，嗅觉组织试样为构成嗅觉上皮的组织，是位于前鼻中隔(anteriornasal septum)的组织。所述嗅觉组织试样为动物，优选地，可以为从人体中取出的试样。嗅觉组织试样并不局限于此，但是优选为粘膜(mucosal)或上皮(epithelium)。例如，可利用通过刷子(brush)捋嗅觉粘膜来得到的上皮细胞，或者还可通过手术取出上皮组织来使用。可根据本领域已知的方法对这些试样进行适当地加工。
检测本发明的miR-206的表达的方法利用miR-206成熟序列，优选地，可利用与具有序列号1的碱基序列的miR-206序列特异性结合的引物对、探针或反义核苷酸。
在本发明中，表达水平测定包括miRNA-206表达水平测定。在本发明中，“miRNA-206表达水平测定”是指为了提供在阿尔茨海默病或轻度认知障碍的诊断或者预后分析中所需的信息，作为确认试样中是否存在miRNA-206和表达程度的过程，可通过测定miRNA-206的量来确认。作为对此的分析方法有逆转录聚合酶链反应、竞争性逆转录聚合酶链反应、实时逆转录聚合酶链反应、RNA酶保护分析法、RNA印迹或DNA芯片等，但并不局限于此。
例如，通过定量实时RT-PCR(Real-time RT-PCR)来测定miRNA-206的表达水平。并且，测定各基因的计算机体层摄影(实现基准值所需的周期次数)，通过计算ΔCT值(各标记的CT-参照基因的平均CT)，来可以用2-ΔCt对miRNA-206的表达量进行定量。
在本发明中，优选地，利用于所述检测的方法为定量实时聚合酶链反应，可使用商用化的miR-206检测引物(例如，美国应用生物系统公司(Applied biosystem)，TM：000510等)。
本发明还提供用于诊断阿尔茨海默病或轻度认知障碍的信息提供方法，包括：在从患者所分离的嗅觉组织试样中测定miR-206的表达水平的步骤；以及比较所述miR-206的表达水平与基准水平的步骤。
本发明的用于诊断阿尔茨海默病或轻度认知障碍的信息提供方法对阿尔茨海默病或轻度认知障碍诊断具有显著的效果，尤其，因包括轻度认知障碍而对用于诊断早期阿尔茨海默病的信息提供具有显著的效果。
本发明的用于诊断阿尔茨海默病或轻度认知障碍的信息提供方法包括在从患者分离的嗅觉组织试样中测定miR-206的表达水平的步骤，这可以将与如前所述的检测miR-206的表达的方法相关的内容适用在本发明的范围内。
本发明的用于诊断阿尔茨海默病或轻度认知障碍的信息提供方法还可以包括比较所述miR-206的表达水平与基准水平的步骤。
在本发明中，基准水平是指与通过记载于本申请的方法来从基准试样检测及判断的能够示出高的诊断的预测性的基因的表达水平相同的水平。这种基准水平可从数学算法及所计算的指数、群落的统计学分析和/或危险性预测数据导出。作为基准的特性系数也可以通过利用统计学及结构分类算法及其他方法来构成并使用。
在一些实施方式中，本发明中的术语“基准水平”是指预先所测定的值，例如，本领域技术人员可将基准水平设定为预先测定的且在特异性、敏感性和/或正确性的观点上满足要求。作为一例，敏感性或特异性分别设定至一定的限度，例如，80％、90％或95％，这些要求可以根据阳性或阴性预测值来进行定义。基准水平可以从健康的个体中预先测定，并且可以从患者所属的疾病单元(disease entity)预先测定。
在本发明中，为了决定表达水平的基准，可使用计算平均值或受试者工作特征(ROC)曲线分析等统计学分析方法。
本发明的一实施方式的受试者工作特征曲线分析为表示诊断的性能的曲线，包括敏感度(sensitivity)、特异度(specificity)、准确度(accuracy)。在本发明中，敏感度表示患有阿尔茨海默病的人中作为阳性的比率，特异度表示没有患阿尔茨海默病的人中作为阴性的比率，准确度表示在所有事例中的检查结果的命中率。其中，当特异度和敏感度均高时，由于检查的准确度变高，因此，在受试者工作特征曲线中，x轴为1-特异度、y轴为敏感度，而表示准确度的曲线下面积(area under curve，AUC)是指曲线下的面积。
在本发明的一实施方式中，基准水平是预测及诊断阿尔茨海默病的具有高的预测及诊断效果的截断值(cutoff value)。为了预测及诊断阿尔茨海默病，miR-206的表达量以miR-206的受试者工作特征曲线分析中的曲线下面积值为中等水平(约0.6水平)以上，优选地，将曲线下面积值最高水平的基因表达量作为最佳截止值(best cutoff value)，来预测阿尔茨海默发病高于基准水平以上的试样。
在本发明中，术语“以上”或“大于”是指大于基准水平的水平，或者与基准试样表达水平相比，通过记载于本申请的方法来所检测的表达水平中的1％、2％、5％、10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或其以上的所有增加。在本发明中，术语“以下”或“小于”是指小于基准水平的水平，或者通过记载于本申请的方法来所检测的表达水平中的1％、2％、5％、10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或其以上的所有减少。
本发明的用于诊断阿尔茨海默病或轻度认知障碍的信息提供方法还可包括通过比较所述miR-206的表达水平与基准水平，若所述表达增加，则判定为诊断为阿尔茨海默病或轻度认知障碍的步骤。
如前所述，根据所观察的方法，对基准水平以上的试样预测阿尔茨海默发病高。
本发明还提供作为测定miR-206的表达水平的制剂，包含与所述基因特异性结合的引物对、探针或反义核苷酸的用于诊断早期阿尔茨海默病或轻度认知障碍的组合物。
所述用于诊断早期阿尔茨海默病或轻度认知障碍的组合物可通过测定miR-206的表达水平，来诊断预测早期阿尔茨海默病或轻度认知障碍。
所述用于诊断的组合物可包含与所述基因特异性结合的引物对、探针或反义核苷酸中的一种以上。本领域技术人员可从在本发明中所提供的碱基序列容易地设计所述引物对、探针或反义核苷酸的序列。在本发明的一实施方式中，测定所述miRNA-206表达水平的制剂作为引物对，可具有序列号2及序列号3的碱基序列。
本发明还提供作为测定miR-206的表达水平的制剂，包含用于诊断早期阿尔茨海默病或轻度认知障碍的组合物的用于诊断早期阿尔茨海默病或轻度认知障碍的试剂盒，所述用于诊断早期阿尔茨海默病或轻度认知障碍的组合物包含与所述基因特异性结合的引物对、探针或反义核苷酸。
试剂盒可通过确认编码所述蛋白质的多核苷酸中的一种以上的表达水平来进行检测。本发明的试剂盒为了诊断早期阿尔茨海默病或轻度认知障碍，不仅可以包含用于测定表达水平的引物或探针，而且包含对所述多核苷酸分析方法适合的一种或其以上的其他构成成分组合物或装置。优选地，用于定量检测miR-206的诊断试剂盒可包含与所述多核苷酸特异性结合的一种以上的寡核苷酸，但是可包含与它们的一些序列相对应的引物、逆转录酶、Taq聚合酶、聚合酶链反应用引物及脱氧核糖核苷三磷酸(dNTP)，并且为了测定多核苷酸表达水平，可利用所述“miRNA-206表达水平测定”相关的分析方法。例如，所述试剂盒可选自RT-PCR试剂盒、竞争性RT-PCR试剂盒、实时RT-PCR试剂盒、实时RT-PCR试剂盒或DNA芯片试剂盒中。
实施例1.患者招募及临床评估
利用首尔大学附属医院临床试验检查委员会批准的研究方案，获得患者同意后进行实验。本研究包括50岁以上的实验对象。由首尔大学附属医院神经科门诊招募患有认知障碍的患者，具有一般认知功能的参与者通过广告招募。为了评估认知功能，对所有患者都进行了韩国版本的临床痴呆评定量表(clinical dementia rating，CDR)、简短精神状态检查(Mini-Mental State Examination，MMSE-K)及阿尔茨海默病评估量表认知分量表(Alzheimer's Disease Assessment Scale-cognitive subscale，ADAS-cog-K)。为了确定基于抑郁症的认知损伤，对所有患者进行贝克抑郁量表第2版(Beck DepressionInventory-II，BDI-II)。具有轻度至重度抑郁症的患者与认知功能评分无关地被分类为抑郁症组。符合对神经及交流障碍及脑卒中的国立协会和阿尔茨海默病及有关疾病协会的阿尔茨海默病可能性的基准的患者被分类为痴呆组，具有一般认知功能(CDR 0)的人群被分类为对照组。基础嗅觉功能通过使用韩国版的嗅觉测试(Korean version of theSniffing stick test，KVSS)进行了评估。
实施例2.嗅觉上皮的鼻腔组织检查
鼻腔组织检查在首尔大学附属医院耳鼻咽喉科进行。将浸入2％的利多卡因及0.1％的肾上腺素的混合物的棉纱布插入血管收缩和局部麻醉的裂缝中。由熟练的耳鼻喉科医师根据内窥镜指导进行组织检查。从前鼻中隔收集组织试样。使用小刮匙或小的非镊子，从鼻孔中回收两个或三个2mm的组织块。在组织学检查后进行鼻腔填塞10分钟以控制出血。临床观察受试者15分钟至10分钟，所有患者在进行组织检查之前均接受用于评估基础嗅觉功能的韩国版的嗅觉测试评估。
并且，确认嗅觉上皮组织检查的稳定性的结果，在组织检查30分钟后，鼻血大部分被调节。进一步地，确认所有患者都没有急性合并症，大部分患者没有感到不适，确保了在采取组织试样中的稳定性。
实施例3.miRNA-206的实时聚合酶链反应
通过使用Trizol(美国英杰(Invitrogen，USA))从鼻粘膜分离总RNA(Total RNA)，通过使用Ambion mirVana isolation试剂盒来分离miRNA。RT-PCR通过使用有关mirVanaqRT-PCR miRNA detection试剂盒及miR-206(TM:000510)and U6(TM:001973)snRNA(美国应用生物系统(Applied Biosystems，USA))的引物对来进行测定。
所有RT-PCR反应在ABI PRISM 7000序列检测系统(ABI PRISM 7000sequencedetection system)(美国应用生物系统)中重复3次，并进行40个循环的扩增。相对表达使用比较临界循环进行计算，相对于U6水平使miRNA的水平标准化(normalize)。
实施例4.基本特性分析结果
在所述实施例1至3中，对于实验对象的基本特性的分析结果如下述表1所示。
41名的受试者参加了分析，受试者根据他们的临床痴呆评定量表评分及贝克抑郁量表评分进行分类。并且，将9名认知健康且没有抑郁的患者分配到CDR 0(对照)组。将具有轻度认知功能障碍的13名患者分配到CDR 0.5，将具有更为强一点的认知障碍的11名患者分配到CDR 1。将具有轻度至重度抑郁症的8名患者被分类为抑郁症组。患者的年龄在组间发生了变化，而患者的性别并没有大的差异。另一方面，相对miR-206水平是指除以CDR 0组的平均值的值。
在表1中示出所述事项。
表1
患者的基本统计信息及临床测定结果
CDR 0 CDR 0.5 CDR 1 Depression P-value
年龄、平均(范围) 63(50-74) 68(56-79) 69(57-80) 61.5(56-66) 0.039
性别(男性：女性) 4:5 4:9 6:5 2:6
简短精神状态检查 28.32.4 26.81.4 23.82.1 25.14.0 0.001
临床痴呆评定量表 0 0.5 1 0.60.4
临床痴呆评定量表 8.44.1 11.23.9 16.07.8 14.68.9 0.031
贝克抑郁量表第2版 5.25.3 11.15.2 9.36.6 29.46.9 <0.001
韩国版的嗅觉测试 24.23.3 23.65.7 22.63.1 21.97.3 0.750
相对miR-206水平 1 7.8 41.5 1.2 <0.001
在如所述结果中所确认，与正常对照组相比，具有认知异常的CDR 0.5组及CDR 1组具有显著高的miR-206表达水平。
实施例5.确认具有早期痴呆的患者的嗅觉上皮中增加的miR-206水平
嗅觉上皮试样的miRNA RT-PCR结果如图1所示。
图1的A在各个患者中示出相对miRNA-206水平，图1的B在CDR 0.5组中示出受试者工作特征曲线。
在如图1的A中所确认，在早期痴呆(早期阿尔茨海默、轻度认知障碍)组中，与这些对照组相比，miR-206水平有所增加。在如图1的A中所确认，在CDR 0.5组中增加了7.8倍，在CDR 1中增加了41.5倍。即，具有随着痴呆(阿尔茨海默、认知障碍)的进行而显著增加的倾向。与此相反，在抑郁症组的情况下，在miR-206水平上没有变化(1.2倍，统计学上不显著)，确认具有区别于基于抑郁症的认知异常的特征。
并且，受试者工作特征曲线(Receiver operating characteristic curve)用作决定用于确认具有CDR 0.5、CDR 1痴呆的患者的相对miR-206水平的最佳截止值。最佳截断值被定义为灵敏度和特异度的最高总和，通过分析曲线下面积来评估对CDR 0.5或CDR 1痴呆的诊断的嗅觉上皮miR-206水平的效率。所述结果如图1的B及图1的C所示。
如图1的B所示，当用于诊断CDR 0.5痴呆的曲线下面积值为0.942、对U6的相对miR-206表达大于7.06×10-4时，敏感度为87.5％，特异度为94.1％。在认知功能正常的对照组中均未见miR-206水平高于此水平。
并且，如图1的C所示，用于诊断CDR 1痴呆的曲线下面积为0.976、对U6的相对miR-206大于49.72×10-4时，敏感度为90.9％，特异度为93.3％。在对照组和抑郁症组中都没有显示出高于所述值的miR-206值。
从所述结果可以确认，从嗅觉组织确认的miR-206值对早期阿尔茨海默及轻度认知障碍具有显著的诊断效果。
实施例6.嗅觉上皮miR-206水平及临床评分相关性
由于已知抑郁症会影响认知功能，因此在没有抑郁症的患者中评估认知功能评分与相对miR-206水平之间的相关性。其结果如图2所示。
如图2的A及B所示，确认嗅觉上皮miR-206水平与认知功能评分之间具有显著的相关性。即，确认相对miR-206水平与阿尔茨海默病评估量表认知分量表评分具有正相关性(图2的A)，而与简短精神状态检查具有负相关性(图2的B)。
另一方面，评估所有患者的贝克抑郁量表第2版及韩国版的嗅觉测试评分与相对miR-206水平之间相关性，其结果如图2的C及D所示。
如图2的C及D所示，确认相对miR-206水平与贝克抑郁量表第2版及韩国版的嗅觉测试评分不相关。
从所述结果确认，嗅觉上皮miR-206水平区分由抑郁症引起的认知障碍的同时，对早期阿尔茨海默病及轻度认知障碍的诊断具有显著的效果。
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uggaauguaa ggaagugugu gg 22

Claims (9)

1.一种测定嗅觉组织试样中miR-206的表达水平的制剂在制备用于早期阿尔茨海默病或轻度认知障碍的诊断标记的检测的制剂或试剂盒中的应用，为了提供在早期阿尔茨海默病或轻度认知障碍的诊断中所需的信息，利用测定miR-206的表达水平的制剂对嗅觉组织试样中的miR-206的表达进行检测，以能够区分基于抑郁症的认知损伤与CDR为0.5和1的早期阿尔茨海默病或轻度认知障碍，所述miR-206的序列如序列表序列1所述。
2.根据权利要求1所述的测定嗅觉组织试样中miR-206的表达水平的制剂在制备用于早期阿尔茨海默病或轻度认知障碍的诊断标记的检测的制剂或试剂盒中的应用，其特征在于，所述测定miR-206的表达水平的制剂包括与miR-206特异性结合的引物或者探针。
3.根据权利要求1所述的测定嗅觉组织试样中miR-206的表达水平的制剂在制备用于早期阿尔茨海默病或轻度认知障碍的诊断标记的检测的制剂或试剂盒中的应用，其特征在于，所述miR-206的表达检测基于逆转录聚合酶链反应、RNA酶保护分析法、RNA印迹或DNA芯片。
4.根据权利要求1所述的测定嗅觉组织试样中miR-206的表达水平的制剂在制备用于早期阿尔茨海默病或轻度认知障碍的诊断标记的检测的制剂或试剂盒中的应用，其特征在于，所述嗅觉组织试样为嗅觉粘膜试样或嗅觉上皮试样。
5.一种测定嗅觉组织试样中miR-206的表达水平的制剂在制备用于早期阿尔茨海默病或轻度认知障碍的诊断标记的检测的制剂或试剂盒中的应用，其特征在于，
利用测定miR-206的表达水平的制剂在从患者所分离的嗅觉组织试样中测定miR-206的表达水平，
并比较所述miR-206的表达水平与基准水平，从而能够区分基于抑郁症的认知损伤与CDR为0.5和1的早期阿尔茨海默病或轻度认知障碍，
所述miR-206的序列如序列表序列1 所述。
6.根据权利要求5所述的测定嗅觉组织试样中miR-206的表达水平的制剂在制备用于早期阿尔茨海默病或轻度认知障碍的诊断标记的检测的制剂或试剂盒中的应用，其特征在于，通过比较所述miR-206的表达水平与基准水平，若所述表达增加，则判定为诊断为早期阿尔茨海默病或轻度认知障碍。
7.根据权利要求5所述的测定嗅觉组织试样中miR-206的表达水平的制剂在制备用于早期阿尔茨海默病或轻度认知障碍的诊断标记的检测的制剂或试剂盒中的应用，其特征在于，所述测定miR-206的表达水平的制剂包括与miR-206特异性结合的引物或者探针。
8.根据权利要求5所述的测定嗅觉组织试样中miR-206的表达水平的制剂在制备用于早期阿尔茨海默病或轻度认知障碍的诊断标记的检测的制剂或试剂盒中的应用，其特征在于，所述miR-206的表达检测基于逆转录聚合酶链反应、RNA酶保护分析、RNA印迹或DNA芯片。
9.根据权利要求5所述的测定嗅觉组织试样中miR-206的表达水平的制剂在制备用于早期阿尔茨海默病或轻度认知障碍的诊断标记的检测的制剂或试剂盒中的应用，其特征在于，所述嗅觉组织试样为嗅觉粘膜试样或嗅觉上皮试样。
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