WO2016186360A1 - 초기 알츠하이머 병 또는 경도 인지 장애 진단 방법 - Google Patents

초기 알츠하이머 병 또는 경도 인지 장애 진단 방법 Download PDF

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alzheimer
mir
mild cognitive
cognitive impairment
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김만호
주건
정근화
이순태
문장섭
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Definitions

  • the present invention relates to a method for diagnosing early Alzheimer's disease or mild cognitive impairment.
  • Alzheimer's disease is a brain disease that accompanies aging and is known to kill neurons by senile plaques, which are extracellular beta amyloid deposits throughout the brain, and intracellular hyperphosphorylated tau protein, which causes progressive memory impairment, cognitive deficits, and personality. It is a disease that causes such changes. More than 3.5 million people worldwide suffer from Alzheimer's disease, but no drug has been developed that has been approved by the US FDA.
  • Alzheimer's disease is still difficult to diagnose early and there is no clear early diagnosis biomarker.
  • MRI magnetic resonance imaging
  • CT computed tomography
  • tau protein beta-amyloid in cerebrospinal fluid
  • CSF cerebrospinal fluid
  • APOE-e4 gene diversity analysis has been used for the diagnosis of Alzheimer's disease, but still has limitations as a method for early diagnosis of Alzheimer's disease.
  • the present invention provides a method for detecting the expression of miRNA-206 (miR-206) in Olfactory tissue samples to provide information necessary for the diagnosis or prognosis of Alzheimer's disease or mild cognitive impairment. It is intended to provide a method of detecting a diagnostic or prognostic analysis marker of a disorder.
  • the invention also includes measuring the expression level of miR-206 in Olfactory tissue samples isolated from a patient; And to provide an information providing method for diagnosing Alzheimer's disease or mild cognitive disorder comprising the step of comparing the expression level of miR-206 with a reference level.
  • the present invention also provides an agent for measuring the expression level of miR-206, to provide a composition for diagnosing early Alzheimer's disease or mild cognitive impairment comprising a primer pair, a probe or an antisense nucleotide specifically binding to the gene.
  • the present invention also provides a kit for diagnosing early Alzheimer's disease or mild cognitive impairment, comprising a composition for diagnosing early Alzheimer's disease or mild cognitive impairment.
  • the present invention provides a method for detecting the expression of miR-206 in Olfactory tissue samples in order to provide information necessary for the diagnosis or prognosis of Alzheimer's disease or mild cognitive impairment.
  • Methods of detecting a diagnostic or prognostic analysis marker of a disease or mild cognitive impairment are possible.
  • the expression detection of the miR-206 is characterized by using a primer pair, a probe or an antisense nucleotide that specifically binds to miR-206.
  • the expression detection of miR-206 is characterized by reverse transcriptase polymerase reaction, competitive reverse transcriptase polymerase reaction, real time reverse transcriptase polymerase reaction, RNase protection assay, Northern blotting or DNA chip. do.
  • the olfactory tissue sample is characterized in that the olfactory mucosa sample or olfactory epithelial sample.
  • the Alzheimer's disease is characterized in that the initial Alzheimer's disease.
  • the present invention comprises the steps of measuring the expression level of miR-206 in Olfactory tissue samples isolated from the patient; And a method for providing information for diagnosing Alzheimer's disease or mild cognitive disorder, comprising comparing the expression level of miR-206 with a reference level.
  • comparing the expression level of the miR-206 with a reference level, if the expression is increased characterized in that it further comprises the step of determining in the diagnosis of Alzheimer's disease or mild cognitive impairment.
  • the expression level of the miR-206 is characterized by using a primer pair, a probe or an antisense nucleotide that specifically binds to miR-206.
  • the expression detection of miR-206 is characterized by reverse transcriptase polymerase reaction, competitive reverse transcriptase polymerase reaction, real time reverse transcriptase polymerase reaction, RNase protection assay, Northern blotting or DNA chip. .
  • the olfactory tissue sample is characterized in that the olfactory mucosa sample or olfactory epithelial sample.
  • the Alzheimer's disease is characterized in that the initial Alzheimer's disease.
  • the present invention is a preparation for measuring the expression level of miR-206, comprising a composition for diagnosing early Alzheimer's disease or mild cognitive impairment comprising a primer pair, a probe or an antisense nucleotide specifically binding to the gene.
  • the present invention comprises a composition for diagnosing early Alzheimer's disease or mild cognitive impairment.
  • the method of diagnosing Alzheimer's disease or mild cognitive impairment of the present invention confirms the expression level of miR-206 in olfactory tissue, shows a high diagnosis rate for diagnosing Alzheimer's disease and mild cognitive impairment, and can be diagnosed at low cost, and stability of biopsy This is very high and has a significant effect on the diagnosis of Alzheimer's disease or mild cognitive impairment.
  • treatment and prophylaxis based on this can increase the therapeutic effect and minimize the side effects of Alzheimer's disease or mild cognitive impairment.
  • 1 is a diagram showing miRNA-206 real time PCR results of olfactory epithelium samples.
  • FIG. 2 is a diagram showing a correlation analysis result between olfactory epithelial miRNA-206 levels and clinical score measurement results.
  • the present inventors have made diligent efforts to discover biomarkers and develop diagnostic methods for early diagnosis of Alzheimer's disease.
  • miRNA-206 miR-206 expression levels in olfactory tissues have marked effects as biomarkers for early diagnosis of Alzheimer's disease. Confirmed that the present invention was completed.
  • the present invention provides a method for detecting the expression of miR-206 in Olfactory tissue samples to provide information necessary for the diagnosis or prognosis of Alzheimer's disease or mild cognitive impairment.
  • the diagnosis is to determine the susceptibility of an object to a particular disease or condition, to determine whether an object currently has a particular disease or condition, or to an object with a particular disease or condition. Determining the prognosis (eg, determining a stage of Alzheimer's disease or determining responsiveness to treatment), or monitoring the condition of an object to provide information about the therapeutic efficacy (eg, treatment efficacy). ).
  • Alzheimer's disease is a brain disease that accompanies aging and is known to kill neurons by senile plaques, which are extracellular beta amyloid deposits throughout the brain, and intracellular hyperphosphorylated tau protein, which causes progressive memory impairment, cognitive deficits, and individuals. It is a disease that causes a change in personality.
  • Mild cognitive impairment is a state of cognitive function, especially memory compared to the same age, the ability to perform everyday life is preserved, it means a state not yet dementia. Mild cognitive impairment is a high-risk group for the transition to Alzheimer's disease, the earliest stage of early detection of Alzheimer's disease, and a clinically important step in maximizing treatment effectiveness.
  • the early stage of Alzheimer's disease can be represented by CDR
  • CDR 0.5 can be defined as very mild dementia stage and / or mild cognitive impairment
  • CDR 1 can be defined as mild dementia have.
  • Standard subjects may also be classified according to other definitions having specific stages of Alzheimer's disease according to methods known to those of skill in the art.
  • the method of detecting a diagnostic or prognostic analysis marker of Alzheimer's disease or mild cognitive impairment of the present invention has a significant effect on the detection of a diagnostic or prognostic marker of early Alzheimer's disease, including mild cognitive impairment.
  • a method of detecting the expression of miR-206 in Olfactory tissue samples is used.
  • the olfactory tissue sample is a tissue located in the anterior nasal septum as the tissue constituting the olfactory epithelium.
  • the olfactory tissue sample may be a sample taken from an animal, preferably a human.
  • Olfactory tissue samples include, but are not limited to, mucosal or epithelium.
  • the epithelial cells can be used by brushing the olfactory mucosa, or the epithelial tissue can be collected through surgery. These samples can be suitably processed according to methods known in the art for measuring expression levels.
  • the method for detecting the expression of miR-206 may use primer pairs, probes or antisense nucleotides that specifically bind to the miR-206 mature sequence, preferably the miR-206 sequence having the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1. have.
  • expression level measurement includes miRNA-206 expression level measurement.
  • “measurement of miRNA-206 expression level” refers to a process of confirming the presence and expression level of miRNA-206 in a sample in order to provide information necessary for diagnosing or prognostic analysis of Alzheimer's disease or mild cognitive disorder. This can be seen by measuring the amount.
  • Analytical methods for this purpose include, but are not limited to, reverse transcriptase polymerase reaction, competitive reverse transcriptase polymerase reaction, real time reverse transcriptase polymerase reaction, RNase protection assay, northern blotting or DNA chip.
  • expression levels of miRNA-206 are measured via quantitative real-time RT-PCR.
  • CT of each gene the number of cycles required to achieve the reference value
  • ⁇ CT value CT of each marker-average CT of the reference gene
  • the method used in the detection method is preferably quantitative real-time RT-PCR, and commercialized miR-206 detection primers (eg, Applied biosystem, TM: 000510, etc.) may be used.
  • commercialized miR-206 detection primers eg, Applied biosystem, TM: 000510, etc.
  • the invention also includes measuring the expression level of miR-206 in Olfactory tissue samples isolated from a patient; And it provides an information providing method for diagnosing Alzheimer's disease or mild cognitive disorders comprising comparing the expression level of miR-206 with a reference level.
  • the method of providing information for diagnosing Alzheimer's disease or mild cognitive impairment according to the present invention has a remarkable effect in diagnosing Alzheimer's disease or mild cognitive impairment, and particularly has a remarkable effect in providing information for early Alzheimer's disease including mild cognitive impairment. .
  • Information providing method for diagnosing Alzheimer's disease or mild cognitive impairment comprises measuring the expression level of miR-206 in Olfactory tissue samples isolated from the patient, which previously described the expression of miR-206 The content of the detection method is applicable within the scope of the present invention.
  • the method of providing information for diagnosing Alzheimer's disease or mild cognitive disorder according to the present invention also includes comparing the expression level of the miR-206 with a reference level.
  • the reference level means a level equal to the expression level of a gene capable of exhibiting a high diagnostic predictability detected and determined from reference samples by the methods described herein.
  • This reference level can be derived from statistical analysis of the population and / or risk prediction data obtained from mathematical algorithms and calculated indices. Specific coefficients as reference may also be constructed and used by using statistical and structural classification algorithms and other methods.
  • the term “reference level” herein means a pre-measured value, for example one of skill in the art can be set such that the reference level is pre-measured and meets requirements in terms of specificity, sensitivity, and / or accuracy. have.
  • the sensitivity or specificity may be set at certain limits, eg, 80%, 90% or 95%, respectively, and these requirements may be defined in terms of positive or negative predictive values.
  • the reference level can be measured in advance in a healthy subject and can be measured in advance in the disease entity to which the patient belongs.
  • ROC curve analysis is a curve representing the performance of the diagnosis is composed of sensitivity (sensitivity), specificity (specificity), accuracy (accuracy).
  • the sensitivity is the proportion of positive days in people with Alzheimer's disease
  • the specificity is the proportion of negative days in people without Alzheimer's disease
  • the accuracy is the percentage of hits of the test results in all cases. Indicates. In this case, when both the specificity and the sensitivity are high, the accuracy of the test is increased, so that the x-axis is 1-specificity and the y-axis is sensitive in the ROC curve, and the AUC (area under curve) representing the accuracy is the curve of the curve. Means the area below.
  • the reference level is a cutoff value that exhibits a high predictive and diagnostic effect on Alzheimer's disease prediction and diagnosis.
  • the expression level of miR-206 is determined by the ROC curve analysis of miR-206. It is predicted that Alzheimer's incidence is high for a sample of the reference level or more.
  • the term “above” or “over” means a level above the reference level, or 1%, 2%, 5% at the expression level detected by the methods described herein relative to the reference sample expression level. , 10%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% or its It means the total increase over.
  • the term “less than” or “less than” means a level below the reference level, or 1%, 2%, 5% at the expression level detected by the methods described herein relative to the reference sample expression level. , 10%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% or its It means the overall decrease over.
  • the method of providing information for diagnosing Alzheimer's disease or mild cognitive impairment of the present invention further compares the expression level of the miR-206 with a reference level, and when the expression increases, determining the diagnosis as Alzheimer's disease or mild cognitive impairment. It may include.
  • the present invention also provides a composition for diagnosing early Alzheimer's disease or mild cognitive impairment as an agent for measuring the expression level of miR-206, comprising a primer pair, a probe or an antisense nucleotide specifically binding to the gene.
  • composition for diagnosing early Alzheimer's disease or mild cognitive impairment is capable of diagnosing and predicting early Alzheimer's disease or mild cognitive impairment by measuring the expression level of miR-206.
  • the diagnostic composition may include any one or more of primer pairs, probes or antisense nucleotides specifically binding to the gene. From the base sequences provided in the present invention, the primer pairs, probes or antisense nucleotides can be easily designed by those skilled in the art. According to one embodiment of the invention, the agent for measuring miRNA-206 expression level may have a base sequence of SEQ ID NO: 2 and SEQ ID NO: 3 as a primer pair.
  • the present invention also provides an agent for measuring the expression level of miR-206, including early primer Alzheimer's disease comprising a primer pair, a probe or an antisense nucleotide specifically binding to the gene or early Alzheimer's disease comprising a composition for diagnosing mild cognitive impairment or A kit for diagnosing mild cognitive impairment is provided.
  • Kits can be detected by identifying the expression level of any one or more of the polynucleotides encoding the protein.
  • Kits of the present invention may include primers or probes for measuring expression levels to diagnose early Alzheimer's disease or mild cognitive impairment, as well as one or more other component compositions or devices suitable for the polynucleotide analysis method.
  • the diagnostic kit for quantitative detection of miR-206 may comprise one or more oligonucleotides that specifically bind to the polynucleotide, including primers, reverse transcriptase, Taq polymerase, PCR corresponding to some of these sequences.
  • Primers and dNTPs, and kits using the assay methods described in connection with “measurement of miRNA-206 expression levels” above may be used to determine polynucleotide expression levels.
  • the kit can be selected from RT-PCR kits, competitive RT-PCR kits, real time RT-PCR kits, real time RT-PCR kits or DNA chip kits.
  • Nasal biopsy was performed at Seoul National University Hospital. Cotton gauze moistened with a mixture of 2% lidocaine and 0.1% epinephrine was inserted into the gap for vasoconstriction and local anesthesia. Biopsy performance was performed by a skilled otolaryngologist under endoscopic guidance. Tissue samples were collected from the anterior nasal septum. Using small curettes or small non-tweezers, two or three 2 mm tissue blocks were recovered from the nostrils. Nasal packing was performed for 10 minutes after biopsy to control bleeding. Subjects were observed clinically for 15 to 10 minutes and all patients received KVSS prior to biopsy for evaluation of basal olfactory function.
  • RT-PCR reactions were performed in 3 replicates in an ABI PRISM 7000 sequence detection system (Applied Biosystems, USA) and 40 cycles of amplification was performed. Relative expression was calculated using a comparative critical cycle, and the levels of miRNAs were normalized to U6 levels.
  • CDR 0 control
  • CDR 0.5 eleven patients with stronger cognitive impairment
  • CDR 1 Eight patients with mild to severe depression were divided into depression groups. The age of patients varied across groups and the sex of patients did not differ significantly across groups.
  • the relative miR-206 level means the value divided by the average value of the CDR 0 group.
  • the miRNA RT-PCR results of the olfactory epithelium samples are shown in FIG. 1.
  • FIG. 1A shows the relative miRNA-206 levels in each patient
  • FIG. 1B shows the ROC curves in the CDR 0.5 group
  • FIG. 1C shows the ROC curves in the CDR 1 group.
  • a receiver operating characteristic curve was used to determine the best cutoff values of relative miR-206 levels for identifying patients with CDR 0.5, CDR 1 dementia.
  • the optimal cutoff value was defined as the highest sum of sensitivity and specificity, and the area under the curve (AUC) was analyzed to determine the efficiency of olfactory epithelial miR-206 levels for the diagnosis of CDR 0.5 or CDR 1 dementia.
  • AUC area under the curve
  • FIG. 1 AUC values, CDR 1 for the diagnosis of dementia, as shown in C of 1 is 0.976, and the relative miR-206 expression on U6 49.72 ⁇ 10 - when it exceeds 4, the sensitivity was 90.9%, specificity The figure was 93.3%. None of the control or depression groups showed miR-206 values above this value.
  • miR-206 values identified from olfactory tissue have a significant diagnostic effect on early Alzheimer's and mild cognitive impairment.
  • the olfactory epithelial miR-206 level has a significant effect on the diagnosis of early Alzheimer's disease and mild cognitive impairment while distinguishing cognitive impairment caused by depression.

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Abstract

본 발명은 알츠하이머병 또는 경도 인지 장애 진단 방법에 관한 것이다. 본 발명의 알츠하이머병 또는 경도 인지 장애 진단 방법은 후각 조직의 miR-206의 발현 수준을 확인하여, 알츠하이머병 및 경도 인지 장애 진단에 높은 진단율을 보이며, 적은 비용으로 진단이 가능하며, 조직 검사의 안정성이 매우 높아 알츠하이머병 또는 경도 인지 장애 진단에 현저한 효과를 보인다.

Description

초기 알츠하이머 병 또는 경도 인지 장애 진단 방법
본 발명은 초기 알츠하이머병 또는 경도 인지 장애 진단 방법에 관한 것이다.
알츠하이머 질환은 노화에 따라 수반되는 뇌 질환으로서 뇌 전체에 걸쳐 세포외 베타아밀로이드 침착인 노인성 반점과 세포내 과인산화 타우단백질에 의해 신경세포가 사멸하는 것으로 알려져 있으며 이는 점진적인 기억력 장애, 인지력 결손, 개인 성격의 변화 등을 초래하는 질병이다. 전 세계적으로 350만명 이상이 알츠하이머병에 고통을 받고 있으나, 미국 FDA에 승인받은 질환 개선 효과를 가지는 약물이 개발되지 않은 실정이다.
알츠하이머병의 초기 단계의 환자의 조기 진단은 환자 치료에 필수적이며 잠재적 알츠하이머병 치료제에 대한 임상 시험을 계획하는 데에도 필요하다.
그러나, 현재까지 많은 연구를 통하여 발병기전의 연구와 치료제 개발에 많은 투자가 이루어졌음에도 불구하고, 아직까지도 알츠하이머병은 조기진단이 어려운 질환으로 확실한 조기 진단 바이오마커가 없는 실정이다.
이런 이유로 다양한 진단법 및 이와 관련된 연구개발이 진행 중에 있으나, 현재까지 알려진 방법들로는 알츠하이머병 조기 진단에 어려움이 있다. 예컨대, CSF 마커 및 다양한 유형의 신경 영상 기법의 빠른 발전에도 불구하고, 각각의 바이오마커들은 제한점을 가지고 있으며, 무엇보다도 인지 기능이 정상인 사람으로부터 약한 인지 손상을 가진 환자들을 구별하기 어렵다는 한계가 있다. 또한, CSF A42 측정 및 아밀로이드 PET 영상은 아밀로이드 축적의 마커이지만, 아밀로이드 양성이 신뢰할만한 임상 진단 결과를 제공하지 못한다.
즉, MRI(magnetic resonance imaging) 또는 CT(computed tomography)를 이용한 뇌 영상 진단, 뇌척수액(Cerebrospinal fluid, CSF) 또는 혈액에서 타우(tau) 단백질, 베타-아밀로이드(beta-amyloid)의 양을 측정한 진단, 유전적 위험요소로서 APOE-e4 유전자 다양성형 분석 등이 알츠하이머 질환의 진단 방법에 이용되고 있으나, 알츠하이머 조기 진단을 위한 방법으로써는 여전히 제한점을 가진다.
이러한 배경 하에, 알츠하이머병을 조기에 진단할 수 있는 새로운 바이오마커 및 이를 이용한 진단 방법을 규명하고, 이에 의거한 알츠하이머병의 조기 진단 및 예후 예측 방법에 개발이 시급한 실정이다.
본 발명은 알츠하이머병 또는 경도 인지 장애의 진단 또는 예후 분석에 필요한 정보를 제공하기 위하여 후각(Olfactory) 조직 시료에 있는 miRNA-206 (miR-206)의 발현을 검출하는 방법을 통해 알츠하이머병 또는 경도 인지 장애의 진단 또는 예후 분석 마커를 검출하는 방법을 제공하고자 한다.
본 발명은 또한 환자로부터 분리된 후각(Olfactory) 조직 시료 중에서 miR-206의 발현 수준을 측정하는 단계; 및 상기 miR-206의 발현 수준을 기준 수준과 비교하는 단계를 포함하는 알츠하이머병 또는 경도 인지 장애 진단을 위한 정보 제공 방법을 제공하고자 한다.
본 발명은 또한 miR-206의 발현 수준을 측정하는 제제로써, 상기 유전자에 특이적으로 결합하는 프라이머쌍, 프로브 또는 안티센스 뉴클레오티드를 포함하는 초기 알츠하이머병 또는 경도 인지 장애 진단용 조성물을 제공하고자 한다.
본 발명은 또한 초기 알츠하이머병 또는 경도 인지 장애 진단용 조성물을 포함하는 초기 알츠하이머병 또는 경도 인지 장애 진단용 키트를 제공하고자 한다.
상기와 같은 과제를 해결하기 위하여, 본 발명은 알츠하이머병 또는 경도 인지 장애의 진단 또는 예후 분석에 필요한 정보를 제공하기 위하여 후각(Olfactory) 조직 시료에 있는 miR-206의 발현을 검출하는 방법을 통해 알츠하이머병 또는 경도 인지 장애의 진단 또는 예후 분석 마커를 검출하는 방법을 포함한다.
또한, 본 발명에 있어서, 상기 miR-206의 발현 검출은 miR-206에 특이적으로 결합하는 프라이머쌍, 프로브 또는 안티센스 뉴클레오티드를 이용하는 것을 특징으로 한다.
또한, 본 발명에 있어서, 상기 miR-206의 발현 검출은 역전사효소 중합효소반응, 경쟁적 역전사효소 중합효소반응, 실시간 역전사효소 중합효소반응, RNase 보호 분석법, 노던 블랏팅 또는 DNA 칩에 의한 것임을 특징으로 한다.
또한, 본 발명에 있어서, 상기 후각(Olfactory) 조직 시료는 후각 점막 시료 또는 후각 상피 시료인 것을 특징으로 한다.
또한, 본 발명에 있어서, 상기 알츠하이머병은 초기 알츠하이머병인 것을 특징으로 한다.
그리고, 본 발명은 환자로부터 분리된 후각(Olfactory) 조직 시료 중에서 miR-206의 발현 수준을 측정하는 단계; 및 상기 miR-206의 발현 수준을 기준 수준과 비교하는 단계를 포함하는 알츠하이머병 또는 경도 인지 장애 진단을 위한 정보 제공 방법을 포함한다.
또한, 본 발명에 있어서, 상기 miR-206의 발현 수준을 기준 수준과 비교하여, 상기 발현이 증가하면 알츠하이머병 또는 경도 인지 장애 진단으로 판정하는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 한다.
또한, 본 발명에 있어서, 상기 miR-206의 발현 수준 측정은 miR-206에 특이적으로 결합하는 프라이머쌍, 프로브 또는 안티센스 뉴클레오티드를 이용하는 것을 특징으로 한다.
또한, 본 발명에 있어서, miR-206의 발현 검출은 역전사효소 중합효소반응, 경쟁적 역전사효소 중합효소반응, 실시간 역전사효소 중합효소반응, RNase 보호 분석법, 노던 블랏팅 또는 DNA 칩에 의한 것임을 특징으로 한다.
또한, 본 발명에 있어서, 상기 후각(Olfactory) 조직 시료는 후각 점막 시료 또는 후각 상피 시료인 것을 특징으로 한다.
또한, 본 발명에 있어서, 상기 알츠하이머병은 초기 알츠하이머병인 것을 특징으로 한다.
그리고, 본 발명은 miR-206의 발현 수준을 측정하는 제제로써, 상기 유전자에 특이적으로 결합하는 프라이머쌍, 프로브 또는 안티센스 뉴클레오티드 포함하는 초기 알츠하이머병 또는 경도 인지 장애 진단용 조성물을 포함한다.
또한, 본 발명에 따른 초기 알츠하이머병 또는 경도 인지 장애 진단용 조성물을 포함한다.
본 발명의 알츠하이머병 또는 경도 인지 장애 진단 방법은 후각 조직의 miR-206의 발현 수준을 확인하여, 알츠하이머병 및 경도 인지 장애 진단에 높은 진단율을 보이며, 적은 비용으로 진단이 가능하며, 조직 검사의 안정성이 매우 높아 알츠하이머병 또는 경도 인지 장애 진단에 현저한 효과를 보인다.
따라서 이에 의거한 치료법과 예방법을 통해 알츠하이머병 또는 경도 인지 장애에 대한 치료 효과를 높이고 치료의 부작용을 최소화할 수 있다.
도 1은 후각 상피 시료의 miRNA-206 real time PCR 결과를 나타내는 도이다.
도 2는 후각 상피 miRNA-206 수준과 임상 점수 측정 결과 간의 상관관계 분석 결과를 나타내는 도이다.
본 발명의 이점 및 특징, 그리고 그것들을 달성하는 방법은 상세하게 후술되어있는 실시예들을 참조하면 명확해질 것이다. 그러나 본 발명은 이하에서 개시되는 실시예들에 한정되는 것이 아니라 서로 다른 다양한 형태로 구현될 것이며, 단지 본 실시예들은 본 발명의 개시가 완전하도록 하고, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 발명의 범주를 완전하게 알려주기 위해 제공되는 것이며, 본 발명은 청구항의 범주에 의해 정의될 뿐이다.
본 발명자들은 알츠하이머병 조기 진단을 위한 바이오 마커 발굴 및 진단 방법개발을 위해 예의 노력한 결과, 후각(Olfactory) 조직에서 miRNA-206 (miR-206) 발현 수준이 초기 알츠하이머병 진단을 위한 바이오마커로 현저한 효과를 보임을 확인하고 본 발명을 완성하였다.
본 발명은 알츠하이머병 또는 경도 인지 장애의 진단 또는 예후 분석에 필요한 정보를 제공하기 위하여 후각(Olfactory) 조직 시료에 있는 miR-206의 발현을 검출하는 방법을 통해 알츠하이머병 또는 경도 인지 장애의 진단 또는 예후 분석 마커를 검출하는 방법을 제공한다.
본 발명에 있어서, 진단은 특정 질병 또는 질환에 대한 한 객체의 감수성(susceptibility)을 판정하는 것, 한 객체가 특정 질병 또는 질환을 현재 가지고 있는지 여부를 판정하는 것, 특정 질병 또는 질환에 걸린 한 객체의 예후(prognosis)(예컨대, 알츠하이머 질환의 단계 결정 또는 치료에 대한 반응성 결정)를 판정하는 것, 또는 테라메트릭스(therametrics)(예컨대, 치료 효능에 대한 정보를 제공하기 위하여 객체의 상태를 모니터링 하는 것)를 포함한다.
알츠하이머병이란, 노화에 따라 수반되는 뇌 질환으로서 뇌 전체에 걸쳐 세포외 베타아밀로이드 침착인 노인성 반점과 세포내 과인산화 타우단백질에 의해 신경세포가 사멸하는 것으로 알려져 있으며 이는 점진적인 기억력 장애, 인지력 결손, 개인 성격의 변화 등을 초래하는 질병이다.
경도 인지 장애란 동일 연령대에 비해 인지기능, 특히 기억력이 떨어져 있는 상태이며, 일상생활을 수행하는 능력은 보존되어 있어 아직은 치매가 아닌 상태를 의미한다. 경도 인지 장애는 알츠하이머병으로 이행할 수 있는 고위험군으로 지목되며, 알츠하이머병을 가장 이른 시기에 발견할 수 있는 단계이며 치료 효과를 극대화시킬 수 있는 임상적으로 중요한 단계이다.
본 발명에 따르면 알츠하이머 병의 초기 단계는, CDR에 의해 나타내질 수 있으며, CDR 0.5는 매우 약한 치매(very mild dementia) 단계 및/또는 경도 인지장애, CDR 1은 경도(mild dementia)로 정의할 수 있다.
또한, 표준 대상체는 당업자들에 알려진 방법에 따라 알츠하이머 병의 특이적 단계를 가지는 다른 정의에 따라서도 분류될 수도 있다.
본원 발명의 알츠하이머병 또는 경도 인지 장애의 진단 또는 예후 분석 마커를 검출하는 방법은 경도 인지 장애를 포함하여 초기 알츠하이머병의 진단 또는 예후 분석 마커 검출에 현저한 효과를 보인다.
본원 발명의 알츠하이머병 또는 경도 인지 장애의 진단 또는 예후 분석에 필요한 정보를 제공하기 위하여 후각(Olfactory) 조직 시료에 있는 miR-206의 발현을 검출하는 방법을 이용한다.
본 발명에 있어서, 후각 조직 시료는 후각 상피를 구성하는 조직으로써 전방 비중격(anterior nasal septum)에 위치한 조직이다. 상기 후각 조직 시료는 동물, 바람직하게 사람으로부터 채취한 시료일 수 있다. 후각 조직 시료는 이에 제한되지 않으나, 점막(mucosal) 또는 상피(epithelium)가 바람직하다. 예컨대 후각 점막을 brush로 훑어서 묻어나오는 상피 세포를 이용할 수 있거나, 수술을 통해 상피 조직을 채취해서 사용할 수도 있다. 이들 시료들은 발현 수준 측정을 위하여 당업계에 알려진 방법들에 따라 적절하게 가공될 수 있다.
본 발명에 따른 miR-206의 발현을 검출하는 방법은 miR-206 성숙 서열, 바람직하게 서열번호 1의 염기서열을 가지는 miR-206 서열에 특이적으로 결합하는 프라이머쌍, 프로브 또는 안티센스 뉴클레오티드를 이용할 수 있다.
본 발명에 있어서, 발현 수준 측정은 miRNA-206 발현 수준 측정을 포함한다. 본 발명에서 "miRNA-206 발현 수준 측정"이란 알츠하이머병 또는 경도 인지 장애의 진단 또는 예후 분석에 필요한 정보를 제공하기 위하여 시료에서 miRNA-206 존재 여부와 발현 정도를 확인하는 과정으로, miRNA-206의 양을 측정함으로써 알 수 있다. 이를 위한 분석 방법으로는 역전사효소 중합효소반응, 경쟁적 역전사효소 중합효소반응, 실시간 역전사효소 중합효소반응, RNase 보호 분석법, 노던 블랏팅 또는 DNA 칩 등이 있으나 이로 제한되는 것은 아니다.
예컨대, 정량적 실시간 RT-PCR (Real-time RT-PCR)을 통하여 miRNA-206의 발현 수준을 측정한다. 또한, 각 유전자의 CT(기준치를 달성하는데 소요되는 사이클 횟수)를 측정하고, ΔCT 값(각 마커의 CT - 참조 유전자의 평균 CT)을 계산하여, miRNA-206의 발현량을 2-ΔCt로 발현량을 정량화할 수 있다.
본 발명에서 상기 검출 방법에 이용되는 방법은 바람직하게, 정량적 실시간 RT-PCR이며, 상용화된 miR-206 검출 프라이머(예컨대, Applied biosystem사, TM:000510 등)를 사용할 수 있다.
본 발명은 또한, 환자로부터 분리된 후각(Olfactory) 조직 시료 중에서 miR-206의 발현 수준을 측정하는 단계; 및 상기 miR-206의 발현 수준을 기준 수준과 비교하는 단계를 포함하는 알츠하이머병 또는 경도 인지 장애 진단을 위한 정보 제공 방법을 제공한다.
본 발명에 따른 알츠하이머병 또는 경도 인지 장애 진단을 위한 정보 제공 방법은 알츠하이머병 또는 경도 인지 장애 진단에 현저한 효과를 보이며, 특히 경도 인지 장애를 포함하여 초기 알츠하이머병 진단을 위한 정보 제공에 현저한 효과를 가진다.
본 발명에 따른 알츠하이머병 또는 경도 인지 장애 진단을 위한 정보 제공 방법은 환자로부터 분리된 후각(Olfactory) 조직 시료 중에서 miR-206의 발현 수준을 측정하는 단계를 포함하며, 이는 앞서 miR-206의 발현을 검출하는 방법에 관한 내용을 본 발명의 범위 내에서 적용 가능하다.
본 발명에 따른 알츠하이머병 또는 경도 인지 장애 진단을 위한 정보 제공 방법은 또한 상기 miR-206의 발현 수준을 기준 수준과 비교하는 단계를 포함한다.
본 발명에 있어서, 기준 수준이란 본원에 기재된 방법에 의해 기준 시료들로부터 검출 및 판단되는 높은 진단의 예측성을 나타낼 수 있는 유전자의 발현 수준과 동일한 수준을 의미한다. 이러한 기준 수준은 수학적 알고리즘 및 계산된 지수로부터 수득된, 군집의 통계학적 분석 및/또는 위험성 예측 데이터로부터 유도될 수 있다. 기준이 되는 특정 계수 또한 통계학적 및 구조적 분류 알고리즘 및 기타 다른 방법을 이용함으로써 구성되고 사용될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에서 용어 "기준 수준"은 미리 측정된 값을 의미하며, 예를 들어 당업자는 기준 수준이 미리 측정되고 특이성, 민감성 및/또는 정확성의 관점에서 요건을 충족시키도록 설정될 수 있다. 일례로, 민감성 또는 특이성은 각각 일정 한계, 예를 들면, 80%, 90% 또는 95%로 설정될 수 있으며, 이들 요건은 양성 또는 음성 예측 값의 관점에서 정의될 수도 있다. 기준 수준은 건강한 개체에서 미리 측정될 수 있으며, 환자가 속하는 질환체(disease entity)에서 미리 측정될 수 있다.
본 발명에 있어서, 발현 수준의 기준 수준을 결정하기 위하여 평균값 산출이나 ROC 곡선 분석 등의 통계적 분석 방법이 사용될 수 있다.
본 발명의 일실시양태에 따른 ROC 곡선 분석은 진단의 성능을 나타내는 곡선으로 민감도(sensitivity), 특이도(specificity), 정확도(accuracy)로 구성된다. 본 발명에 있어서, 민감도(sensitivity)는 알츠하이머병이 있는 사람 중에 양성일 비율이며, 특이도(specificity)는 알츠하이머병이 없는 사람 중에 음성일 비율이며, 정확도(accuracy)는 전체 사례 중에서 검사결과의 적중 비율을 나타낸다. 여기서, 특이도와 민감도가 모두 높을 때, 검사의 정확도가 높아지게 되므로, ROC 곡선에서 x 축이 1-특이도, y 축이 민감도가 되고, 정확도(acccuracy)를 나타내는 AUC(area under curve)는 곡선의 아래 면적을 의미한다.
본 발명의 일실시양태에 따르면, 기준 수준은 알츠하이머병 예측 및 진단에 높은 예측 및 진단 효과를 보이는 cutoff value이다. 알츠하이머병 예측 및 진단을 위해 miR-206의 발현량은 miR-206의 ROC 곡선 분석에서 AUC 값이 중등 수준(약 0.6 수준) 이상, 바람직하게 AUC 값이 가장 높은 수준의 유전자 발현량을 best cutoff value로 하여 기준 수준 이상의 시료에 대해 알츠하이머 발병이 높음을 예측한다.
본 발명에 있어서, 용어 "이상" 또는 "초과"는 기준 수준 초과의 수준을 의미하거나, 기준 시료 발현 수준과 대비하여 본원에 기재된 방법에 의해 검출된 발현 수준에서의 1%, 2%, 5%, 10%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 전체 증가를 의미한다. 본 발명에 있어서, 용어 "이하" 또는 "미만"은 기준 수준 미만의 수준을 의미하거나, 기준 시료 발현 수준과 대비하여 본원에 기재된 방법에 의해 검출된 발현 수준에서의 1%, 2%, 5%, 10%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 전체 감소를 의미한다.
본 발명의 알츠하이머병 또는 경도 인지 장애 진단을 위한 정보 제공 방법은 또한, 상기 miR-206의 발현 수준을 기준 수준과 비교하여, 상기 발현이 증가하면 알츠하이머병 또는 경도 인지 장애 진단으로 판정하는 단계를 더 포함할 수 있다.
앞서, 살핀 방법에 따라, 기준 수준 이상의 시료에 대해서는 알츠하이머 발병이 높음을 예측한다.
본 발명은 또한, miR-206의 발현 수준을 측정하는 제제로써, 상기 유전자에 특이적으로 결합하는 프라이머쌍, 프로브 또는 안티센스 뉴클레오티드 포함하는 초기 알츠하이머병 또는 경도 인지 장애 진단용 조성물을 제공한다.
상기 초기 알츠하이머병 또는 경도 인지 장애 진단용 조성물은 miR-206의 발현 수준을 측정함으로써, 초기 알츠하이머병 또는 경도 인지 장애에 대한 진단 및 예측이 가능하다.
상기 진단용 조성물은 상기 유전자에 특이적으로 결합하는 프라이머쌍, 프로브 또는 안티센스 뉴클레오티드 중 어느 하나 이상을 포함할 수 있다. 본 발명에서 제공되는 염기 서열로부터 상기 프라이머쌍, 프로브 또는 안티센스 뉴클레오티드는 당업자가 용이하게 서열을 디자인할 수 있다. 본 발명의 일 실시양태에 따르면, 상기 miRNA-206 발현 수준을 측정하는 제제는 프라이머 쌍으로, 서열번호 2 및 서열번호 3의 염기 서열을 가질 수 있다.
본 발명은 또한 miR-206의 발현 수준을 측정하는 제제로써, 상기 유전자에 특이적으로 결합하는 프라이머쌍, 프로브 또는 안티센스 뉴클레오티드를 포함하는 초기 알츠하이머병 또는 경도 인지 장애 진단용 조성물을 포함하는 초기 알츠하이머병 또는 경도 인지 장애 진단용 키트를 제공한다.
키트는 상기 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 중 어느 하나 이상의 발현 수준을 확인함으로써 검출할 수 있다. 본 발명의 키트는 초기 알츠하이머병 또는 경도 인지 장애를 진단하기 위하여 발현 수준을 측정하기 위한 프라이머 또는 프로브뿐만 아니라, 상기 폴리뉴클레오티드 분석 방법에 적합한 하나 또는 그 이상의 다른 구성 성분 조성물 또는 장치가 포함될 수 있다. 바람직하게, miR-206 정량 검출을 위한 진단 키트는 상기 폴리뉴클레오티드에 특이적으로 결합하는 1 종 이상의 올리고 뉴클레오티드를 포함할 수 있는데, 이들의 일부 서열에 대응하는 프라이머, 역전사 효소, Taq 폴리머레이즈, PCR용 프라이머 및 dNTP를 포함할 수 있으며, 폴리뉴클레오티드 발현 수준을 측정하기 위해 상기 "miRNA-206 발현 수준 측정"과 관련하여 기술된 분석 방법을 이용한 키트를 이용할 수 있다. 예컨대 상기 키트는 RT-PCR 키트, 경쟁적 RT-PCR 키트, 실시간 RT-PCR 키트, 실시간 RT-PCR 키트 또는 DNA 칩 키트 중 선택될 수 있다.
<실시예 1> 환자 모집 및 임상적 평가
서울대학교 병원 임상 시험 심사 위원회에 의해 승인된 연구 프로토콜을 이용하여, 환자로부터 동의를 얻은 후 실험을 수행하였다. 50세 이상의 실험 대상들이 이 연구에 포함되었다. 인지 장애를 가지는 환자들은 서울대학교 병원 신경과 외래 환자 클리닉으로부터 모집되었고, 일반 인지 기능을 가진 참가자들은 광고를 통해 모집되었다. 인지 기능을 평가하기 위하여, 모든 환자들은 한국 버전의 임상 치매 등급(clinical dementia rating, CDR), 간이 정신상태 검사(Mini-Mental State Examination, MMSE-K) 및 알츠하이머병 평가 스케일-인지 하위척도(Alzheimer's Disease Assessment Scale-cognitive subscale, ADAS-cog-K)를 받았다. Beck 우울 척도 II(Beck Depression Inventory-II, BDI-II)는 우울증에 의한 인지 손상을 결정하기 위해 모든 환자에서 수행되었다. 경증 내지 중증 우울증을 가진 환자들은 인지 기능 점수에 상관없이 우울증 그룹으로 분리되었다. 신경 및 의사소통 장애 및 뇌졸중의 국립협회와 알츠하이머 병 및 관련 질환 협회의 알츠하이머 병 가능성에 대한 기준을 만족하는 환자들은 치매 그룹으로 분리되었고, 일반 인지 기능(CDR 0)을 가지는 사람들은 대조군으로 분리되었다. 기초 후각 기능은 한국형 후각 검사(Korean version of the Sniffing stick test, KVSS)를 사용하여 평가되었다.
<실시예 2> 후각 상피의 비강 조직 검사
비강 조직 검사는 서울대학교 병원 이비인후과에서 수행되었다. 2% 리도카인 및 0.1% 에피네프린의 혼합물에 적셔진 면 거즈는 혈관 수축 및 국소 마취에 대해 갈라진 틈으로 삽입되었다. 조직 검사 수행은 내시경 안내에 따라 숙련된 이비인후과 전문의에 의해 수행되었다. 조직 샘플은 전방 비중격(anterior nasal septum)으로부터 수집되었다. 작은 큐렛 또는 작은 비-집게를 사용하여, 2개 또는 3개 2mm 조직 블록이 콧구멍으로부터 회수되었다. 비강 패킹은 출혈을 제어하기 위해 조직 검사 후 10분 동안 수행되었다. 실험 대상들은 15분 내지 10분 동안 임상적으로 관찰되었고, 모든 환자들은 기초 후각 기능에 대한 평가를 위한 조직 검사 전 KVSS를 받았다.
또한, 후각 상피 조직 검사의 안정성을 확인한 결과, 코피의 대부분은 조직 검사 30분 후 조절되었다. 더욱이, 모든 환자들은 급성 합병증 없었으며, 대부분의 환자들이 어떠한 불편도 느끼지 못하여, 조직 시료 채취에 안정성이 확보됨을 확인하였다.
<실시예 3> miRNA-206의 real time PCR
Total RNA는 Trizol(Invitrogen, USA)를 사용하여 코 점막 조직으로부터 분리되었고, miRNA는 Ambion mirVana isolation 키트를 사용하여 분리되었다. RT-PCR은 mirVana qRT-PCR miRNA detection 키트 및 miR-206(TM:000510) and U6 (TM:001973) snRNA (Applied Biosystems, USA)에 대한 프라이머 세트를 사용하여 수행되었다.
모든 RT-PCR 반응은 ABI PRISM 7000 sequence detection system(Applied Biosystems, USA)에서 3 반복으로 수행되었고, 40사이클 증폭이 수행되었다. 상대적 발현은 비교 임계 사이클을 사용하여 계산되었고, miRNA의 수준은 U6 수준에 대해 normalize되었다.
< 실시예 4> 기본 특성 분석 결과
상기 실시예 1 내지 3에서 실험대상들의 기본 특성에 대한 분석 결과는 하기 표 1과 같았다.
41명의 대상체들이 분석에 등록되었으며, 대상체들은 그들의 CDR 점수 및 BDI- 점수에 기초하여 카테고리화되었다. 또한, 인지적으로 건강하고 우울증을 보이지 않는 9명의 환자는 CDR 0(대조군) 그룹으로 할당되었다. 약한 인지 장애를 보이는 13명 환자는 CDR 0.5로 할당되었고 조금더 강한 인지 장애를 보이는 11명의 환자는 CDR 1로 할당되었다. 경증 내지 중증 우울증을 가진 8명의 환자는 우울증 그룹으로 분리되었다. 환자의 나이는 그룹에 걸쳐 변화하였으며, 환자의 성별은 그룹에 걸쳐 큰 차이가 없었다. 한편, 상대적 miR-206 수준은 CDR 0 그룹의 평균값으로 나눈 값을 의미한다.
상기 사항들에 대해서는 정리하여 표 1에 나타내었다.
환자의 기본 통계 정보 및 임상적 측정 결과
CDR 0 CDR 0.5 CDR 1 Depression P-value
나이, 평균 (범위) 63 (50-74) 68 (56-79) 69 (57-80) 61.5 (56-66) 0.039
성별 (남성:여성) 4:5 4:9 6:5 2:6
MMSE-K 28.32.4 26.81.4 23.82.1 25.14.0 0.001
CDR 0 0.5 1 0.60.4
ADAS-Cog-K 8.44.1 11.23.9 16.07.8 14.68.9 0.031
BDI-II 5.25.3 11.15.2 9.36.6 29.46.9 <0.001
KVSS 24.23.3 23.65.7 22.63.1 21.97.3 0.750
상대적miR-206 수준 1 7.8 41.5 1.2 <0.001
상기 결과에서 확인되는 바와 같이, 정상대조군과 대비하여 인지 이상이 있는 CDR 0.5 및 CDR 1 그룹이 현저히 높은 miR-206 발현 수준을 보이는 것이 확인되었다.
< 실시예 5> 초기 치매를 가진 환자의 후각 상피에서 증가된 miR -206 수준 확인
후각 상피 시료의 miRNA RT-PCR 결과를 도 1에 나타내었다.
도 1의 A는 각각의 환자에서 상대적인 miRNA-206 수준을 나타내며, 도 1의 B는 CDR 0.5 그룹에서 ROC 커브를 나타내며, 도 1의 C는 CDR 1 그룹에서 ROC 커브를 나타낸다.
도 1의 A에서 확인되는 바와 같이, 초기 치매(초기 알츠하이머, 경도 인지 장애) 그룹에서, miR-206 수준은 이들의 대조군과 대비하여 크게 증가되었다. 도 1의 A에서 확인되는 바와 같이, CDR 0.5 그룹에서 7.8 배의 증가가 확인되었고 CDR 1 그룹에서 41.5 배의 증가가 확인되었다. 즉, 치매(알츠하이머, 인지 장애)의 진행에 따라 상당히 증가되는 경향을 보였다. 반면, 우울증 그룹의 경우 miR-206 수준에서 변화를 보이지 않아(1.2 배, 통계적으로 유의하지 않음), 우울증에 의한 인지 이상과 구별되는 특징이 있음이 확인되었다.
또한, 수신자 조작 특성 곡선(Receiver operating characteristic curve)은 CDR 0.5, CDR 1 치매를 가지는 환자를 확인하기 위한 상대적 miR-206 수준의 best cutoff 값을 결정하기 위해 사용되었다. 최적의 cutoff 값은 민감도와 특이도의 가장 높은 합으로 정의되었고, 곡선하 면적(area under the curve, AUC)가 분석되어, CDR 0.5 또는 CDR 1 치매의 진단에 대한 후각 상피 miR-206 수준의 효율이 평가되었다. 상기 결과를 도 1의 B 및 도 1의 C에 나타내었다.
도 1의 B에 나타낸 바와 같이, CDR 0.5 치매 진단을 위한, AUC 값은 0.942이고, U6 에 대한 상대적인 miR-206 발현이 7.06×10- 4을 초과할 때, 민감도는 87.5%였고, 특이도는 94.1%였다. 인지 기능이 정상인 대조군 그룹 중 어느 누구도 이 수준보다 높은 miR-206 수준을 나타내지 않았다.
또한, 도 1의 C에 나타낸 바와 같이, CDR 1 치매 진단을 위한, AUC 값은 0.976이고, U6 에 대한 상대적인 miR-206 발현이 49.72×10- 4을 초과할 때, 민감도는 90.9%였고, 특이도는 93.3%였다. 대조군 또는 우울증 그룹 중 어느 누구도 상기 값을 넘어서는 miR-206 값을 보이지 않았다.
상기 결과로부터, 후각 조직으로부터 확인되는 miR-206 값이 초기 알츠하이머 및 경도 인지 장애에 현저한 진단 효과가 있음이 확인되었다.
<실시예 6> 후각 상피 miR-206 수준 및 임상 점수의 상관관계
우울증이 인지 기능에 영향을 주는 것으로 알려져 있기 때문에, 우울증을 가지지 않는 환자에서 인지 기능 점수와 상대적 miR-206 수준 간의 상관관계를 평가하였다. 그 결과를 도 2에 나타내었다.
도 2의 A 및 B에 나타낸 바와 같이, 후각 상피 miR-206 수준과 인지 기능 점수 간에 상당한 상관관계가 확인되었다. 즉, 상대적 miR-206 수준은 ADAS-Cog-K 점수와 양성적인 상관관계(도 2의 A)가 있었고, MMSE와 음성적 상관관계(도 2의 B)가 있음이 확인되었다.
한편, BDI-II 및 KVSS 점수와 상대적 miR-206 수준간의 상관관계는 모든 환자에서 평가되었으며, 그 결과를 도 2의 C 및 D에 나타내었다.
도 2의 C 및 D에 나타낸 바와 같이, 상대적 miR-206 수준은 BDI-II 및 KVSS 점수와 상관관계가 확인되지 않았다.
상기 결과로부터 후각 상피 miR-206 수준이 우울증에 의한 인지 장애를 구별하면서 초기 알츠하이머병 및 경도 인지 장애의 진단에 현저한 효과가 있음을 확인하였다.

Claims (13)

  1. 알츠하이머병 또는 경도 인지 장애의 진단 또는 예후 분석에 필요한 정보를 제공하기 위하여 후각(Olfactory) 조직 시료에 있는 miR-206의 발현을 검출하는 방법을 통해 알츠하이머병 또는 경도 인지 장애의 진단 또는 예후 분석 마커를 검출하는 방법.
  2. 제1항에 있어서, 상기 miR-206의 발현 검출은 miR-206에 특이적으로 결합하는 프라이머쌍, 프로브 또는 안티센스 뉴클레오티드를 이용하는 것인 알츠하이머병 또는 경도인지 장애의 진단 또는 예후 분석 마커를 검출하는 방법.
  3. 제1항에 있어서, 상기 miR-206의 발현 검출은 역전사효소 중합효소반응, 경쟁적 역전사효소 중합효소반응, 실시간 역전사효소 중합효소반응, RNase 보호 분석법, 노던 블랏팅 또는 DNA 칩에 의한 것인 알츠하이머병 또는 경도 인지 장애의 진단 또는 예후 분석 마커를 검출하는 방법.
  4. 제1항에 있어서, 상기 후각(Olfactory) 조직 시료는 후각 점막 시료 또는 후각 상피 시료인 알츠하이머병 또는 경도 인지 장애의 진단 또는 예후 분석 마커를 검출하는 방법.
  5. 제1항에 있어서, 상기 알츠하이머병은 초기 알츠하이머병인 알츠하이머병 또는 경도 인지 장애의 진단 또는 예후 분석 마커를 검출하는 방법.
  6. 환자로부터 분리된 후각(Olfactory) 조직 시료 중에서 miR-206의 발현 수준을 측정하는 단계; 및 상기 miR-206의 발현 수준을 기준 수준과 비교하는 단계를 포함하는 알츠하이머병 또는 경도 인지 장애 진단을 위한 정보 제공 방법.
  7. 제6항에 있어서, 상기 miR-206의 발현 수준을 기준 수준과 비교하여, 상기 발현이 증가하면 알츠하이머병 또는 경도 인지 장애 진단으로 판정하는 단계를 더 포함하는 알츠하이머병 또는 경도 인지 장애 진단을 위한 정보 제공 방법.
  8. 제6항에 있어서, 상기 miR-206의 발현 수준 측정은 miR-206에 특이적으로 결합하는 프라이머쌍, 프로브 또는 안티센스 뉴클레오티드를 이용하는 것인 알츠하이머병 또는 경도 인지 장애 진단을 위한 정보 제공 방법.
  9. 제6항에 있어서, 상기 miR-206의 발현 검출은 역전사효소 중합효소반응, 경쟁적 역전사효소 중합효소반응, 실시간 역전사효소 중합효소반응, RNase 보호 분석법, 노던 블랏팅 또는 DNA 칩에 의한 것인 알츠하이머병 또는 경도 인지 장애 진단을 위한 정보 제공 방법.
  10. 제6항에 있어서, 상기 후각(Olfactory) 조직 시료는 후각 점막 시료 또는 후각 상피 시료인 알츠하이머병 또는 경도 인지 장애 진단을 위한 정보 제공 방법.
  11. 제6항에 있어서, 상기 알츠하이머병은 초기 알츠하이머병인 알츠하이머병 또는 경도 인지 장애 진단을 위한 정보 제공 방법.
  12. miR-206의 발현 수준을 측정하는 제제로써, 상기 유전자에 특이적으로 결합하는 프라이머쌍, 프로브 또는 안티센스 뉴클레오티드 포함하는 초기 알츠하이머병 또는 경도 인지 장애 진단용 조성물.
  13. 제12항에 따른 초기 알츠하이머병 또는 경도 인지 장애 진단용 조성물을 포함하는 초기 알츠하이머병 또는 경도 인지 장애 진단용 키트.
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